Introducció: Els protocols de preservació d'òrgan s'han instaurat com el tractament d'elecció en molts carcinomes escatosos de cap i coll amb el doble objectiu d'eliminar la patologia oncològica i d'evitar l'exèresi quirúrgica de l'òrgan afectat.Actualment existeix una manca d'acord en el maneig de les àrees ganglionars cervicals després de tractament de preservació d'òrgan en els pacients amb metàstasis regionals avançades al diagnòstic inicial.Objectius: Es va realitzar un treball amb dos objectius principals. El primer va ser valorar el millor tractament per a aquests pacients. El segon objectiu va ser l'avaluació de la existència d'una relació entre la resposta ganglionar al tractament i el control local de la malaltia.Material i mètodes: Per al primer objectiu es va dur a terme una revisió en 657 malalts amb carcinoma escatós de cap i coll i adenopaties al diagnòstic inicial sotmesos a tractament conservador d'òrgan entre 1985 i 2005.Per al segon objectiu del treball es van revisar 134 pacients amb càncer de cap i coll amb metàstasis cervicals en el moment del diagnòstic sotmesos a seqüència terapèutica de preservació d'òrgan que va incloure buidament cervical i amb resposta completa a nivell local a la fi del tractament.Resultats: La supervivència lliure de malaltia regional als 5 anys pels pacients tractats únicament amb radioteràpia va ser del 63.1% i pels pacients que van seguir tractament ganglionar amb cirurgia i radioteràpia del 69.1%, tot i que aquest últim grup inicialment presenta un pitjor pronòstic. La presència de metàstasis regionals avançades al diagnòstic, la no resposta completa a la quimioteràpia d'inducció, i la no inclusió de cirurgia en el protocol de tractament van actuar com a factors de risc independents per a la recidiva regional de la malaltia.La presència de restes tumorals en el buidament cervical post tractament conservador es va mostrar com a factor de risc per a la presència de recidiva local, i va donar un empitjorament en la supervivència als 5 anys.Conclusions: En els malalts amb metàstasis regionals avançades el tractament amb millors resultats en el control regional inclou la realització de cirurgia ganglionar. La presència de restes tumorals a nivell regional influeix en el control local de la malaltia. / Introduction: Organ preservation protocols for the treatment of many head and neck cancers have two main objectives: to treat the disease and to avoid surgical excision of the affected organ. However, there is no consensus concerning management of cervical node metastases following conservative treatment in patients with advanced regional metastases at diagnosis.Objectives: The present study had two main objectives. The first was to evaluate the best treatment for these patients, and the second was to determine the relationship between response to treatment and local control of the pathology.Methods: For the first objective we reviewed 657 head and neck cancer patients who had cervical metastases at time of diagnosis and were treated with an organ preservation protocol between 1985 and 2005.For the second objective we reviewed 134 head and neck cancer patients with cervical metastases at time of diagnosis who were treated with an organ preservation protocol and had complete local response and neck disection after the non-surgical treatment.Results: Regional relapse-free survival at 5 years for radiotherapy only patients was 63.1%, and for the radiotherapy plus surgery patients it was 69. 1. The second group was diagnosed with more advanced regional pathology, so their initial prognosis was worse than in the first group. Advanced regional metastases, non-complete chemotherapy response and no neck dissection were independent risk factors for regional relapse. The finding of cancer cells in the neck dissection analysis was a risk factor for local relapse. These patients had a worse 5-year survival than patients without cancer cells in the neck nodes.Conclusions: Patients with advanced regional metastases had better regional control with neck dissection plus radiotherapy than patients with radiotherapy alone. Cancer cells in the neck dissection after preservation protocol influenced local control of head and neck cancers.

El checkpoint de la fase S constitueix una barrera anti-càncer. Quan aquest mecanisme de vigilància detecta situacions que posen en perill la integritat genòmica, tals com dany al DNA o estrès replicatiu, genera una resposta que engloba la protecció de la replicació, l'aturada del cicle cel·lular i l'activació i coordinació dels sistemes de reparació del DNA. En última instància, si la crisi no es superada el checkpoint promou l'entrada en apoptosis via p53. Per aquest motiu, la mutació d'elements d'aquest mecanisme de control ha estat àmpliament implicada en tumors primaris humans, ja que afavoreixen l'aparició d'inestabilitat genòmica, un dels motors de la transformació cel·lular maligna. A pesar de la importància d'aquest mecanisme de vigilància en el seu paper antitumoral, la gran majoria de les seves dianes romanen desconegudes. Per tal d'identificar noves seqüències implicades en la resposta, es van realitzar 2 aproximacions a gran escala, obtenció de proteomes 2D-DIGE checkpoint dependents utilitzant com a model S. cerevisiae i l'obtenció de microxips d'expressió en resposta a estrès replicatiu en cèl·lules HeLa. Finalment, van permetre identificar la ciclina E2 com a nova diana del checkpoint de fase S. La ciclina E2 és imprescindible perquè les cèl·lules pugin superar la transició G1/S, comprometent-se a una ronda de cicle cel·lular. En resposta a estrés genotòxic és acumulada de forma dependent de l'activació del checkpoint de la fase S. Aquesta estabilització implica alts nivells del seu mRNA i requereix síntesi de novo continuada. Els nostres resultats indiquen que l'acumulació de ciclina E2 podria actuar alentint la progressió de la fase S, evitant d'aquesta manera que cromosomes danyats siguin segregats en mitosis aberrants. Per altra banda, la ciclina E2 es troba sobreexpressada en un elevat número de tumors primaris. Donada la seva implicació en la resposta del checkpoint, vam avaluar si presenta modulació a la resposta a agents quimioteràpics que afecten l'estructura del DNA. Els assaigs de viabilitat in vitro enfront a inhibidors de la topoisomerasa I, mostren que la ciclina E2 confereix resistència enfront la teràpia. Per tant, de confirmar-se aquests resultats in situ, podria ser utilitzada com a biomarcador de resposta. / The S-phase checkpoint acts as an anti-cancer barrier. When the surveillance mechanism detects dangerous situations for the genome integrity such as DNA damage or replication stress, the S-phase checkpoint generates its own response, including replication protection, cell cycle arrest and activation and coordination of DNA repair systems. Finally, if stress situation is not by-passed, the S-phase checkpoint induces cell death through apoptosis via p53. For these reasons, mutations in the mechanism elements are widely related with tumorogenesis processes, because they arise the emergence of genome instability, a driving force of malignant cell transformation. Despite the importance of this mechanism in its anti-cancer role, most of its targets are still unknown. To identify new sequences involved in the response, we used two high-throughput approaches: checkpoint-dependent 2D-DIGE proteomes in S. cerevisiae under replication stress conditions and expression microarrays in replication stress conditions using human HeLa cells. Finally we identified cyclin E2 as a novel S-phase checkpoint target. Cyclin E2 is essential to cells to by-pass G1/S boundary, entering in cell cycle. Cyclin E2 levels are stabilized in a S-phase checkpoint dependent manner. This stabilization involves the cyclin E2 mRNA increase and the continuous de novo synthesis of the protein. Our results indicate that cyclin E2 accumulation could delay the S-phase progression, avoiding the segregation of partially replicated chromosomes in aberrant mitosis. On the other hand, as cyclin E2 has been found over-expressed in a high number of human primary tumours, we next tested if the over-expression of cyclin E2 could modulate the response to DNA-based chemotherapy agents. Viability in vitro assays confirmed that cyclin E2 confers resistance to toisomerase I inhibitors. This result postulates cyclin E2 tumour levels as a prediction biomarker for chemotherapy response.

The focus of this thesis has been four-fold. On one hand it has been to decipher, understand and manipulate the role of microtubule-trafficking in the cell. Secondly we have concentrated on the mechanism of action of agents that target the microtubules, and thirdly we have developed a model to explain acquired drug resistance to these microtubule-targeting agents. Lastly, we tested new microtubule-targeting agents that overcome acquired and intrinsic drug resistance to microtubule-targeting agents. Microtubules (microtubules) are major dynamic structural components in cells that are essential for the development and maintenance of cell shape, cell signaling, movement, and division. We sought to understand the role microtubules play within the cellular context. Microtubules act as "active highways" within the cells and are essential for the correct operation of the cell by controlling the delivery, location, and function of a plethora of proteins. We have focused on the p53 and the HIF1-α proteins. Both these proteins are crucial players in tumor progression and angiogenesis. p53 is a tumor suppressor gene commonly referred to as the guardian of the genome and HIF1-α is a transcriptional factor that plays a key role in adaptation to hypoxia. Upon DNA damage or hypoxia, p53 or HIF1-α respectively are induced and quickly localize to the cell nucleus; whereas upon DNA repair or normoxia they must quickly concentrate in the cytoplasm for degradation. Their fast movement rate is not random and is directed by a microtubule-driven motor. Furthermore, we have shown that HIF1-α mRNA also uses the microtubule network to travel from the nucleus to the site of translation.Drugs that bind to either tubulin or microtubules form one of the most effective classes of anticancer agents. The so-called anti-mitotic drugs usually arrest cells in mitosis leading to apoptosis. We analyzed the differential effects of taxol treatment on parental and taxol-resistant cells. Survivin is a protein that senses mitotic arrest and leading to apoptotic cell death. Despite the clinical success of microtubule-targeting agents, the emergence of acquired resistance to the drug is a limiting factor for curing cancer. Acquired drug resistance is the most common reason for the failure of drug treatment in cancer patients with initially sensitive tumors, and as such, is presently responsible for the majority of deaths from cancer. We sought to understand the timeline of events that takes place during the development of drug resistance to microtubule-targeting agents. While it has been widely published that a major mechanism of resistance to anti-mitotic drugs is due to acquired β-tubulin mutations, we have shown loss of heterozygosity of the wild type allele of β-tubulin must occur to confer higher levels of resistance. To overcome drug resistance to microtubule-targeting agents we have focused on alternate drug regimens that are active in anti-mitotic drug-resistant cells. The synergistic interaction of farnesyltransferase inhibitors (FTI) and taxol has recently been introduced in the clinic and surprisingly overcomes taxol resistance. We have shown that FTIs increase the binding of taxol to β-tubulin tubulin, even in taxol-resistant cells. In an effort to dissect the molecular mechanism underlying the synergistic interaction of FTIs with taxanes, we have recently discovered that FTIs affect microtubule acetylation and stability, partly due to inhibition of the tubulin deacetylase HDAC6. The inhibition of HDAC6 by the FTI lonafarnib leads to increased tubulin acetylation and that this is the molecular basis for the synergy of FTIs with Taxol. / La tesis titulada "Anti-microtubule drugs: Mechanisms of Action and Resistance. Agents anti-microtubulars: Mecanismes d'Acció i Resistència" tiene cuatro objetivos principales. El primer objetivo ha sido descifrar, entender y manipular el papel del tráfico microtubular. El segundo objetivo se ha centrado en el mecanismo de acción de los agentes que tienen como diana los microtúbulos. En el tercer objetivo se ha desarrollado un modelo para explicar la quimioresistencia adquirida a estos agentes anti-microtubulares. En el cuarto y ultimo objetivo se han probado nuevos agentes anti-microtubulares que son activos en casos de quimioresistencia adquirida o endógena a agentes anti-microtubulares.Los microtúbulos, componentes dinámicos y estructurales de las células, son esenciales para el desarrollo y mantenimiento de la forma celular, el movimiento y división celulares. Se ha intentado entender el papel que juegan los microtúbulos en el contexto celular. Los microtúbulos actúan como "autopistas activas" dentro de las células y son esenciales para la correcta operación celular ya que controlan la entrega, localización y función de una multitud de proteínas. El primer objetivo de la tesis se ha centrado en las proteínas p53 y HIF1-α. Estas dos proteínas son principales protagonistas en la progresión tumoral y la angiogenesis. La p53 es un gen supresor de tumor comúnmente llamado el guardián del genoma y el HIF1-α es un factor de trascripción que tiene un papel crucial en la adaptación celular a la hipoxia (la baja concentración de oxigeno). En los casos de el daño al ADN o hipoxia, la p53 o el HIF1-α, respectivamente, son inducidos y se translocan rápidamente al núcleo celular, mientras que cuando el ADN ha sido reparado o el regreso al estado de normoxia, las proteínas se deben concentrar en el citoplasma para su degradación por el proteosoma. El rápido movimiento de estas proteínas no es aleatorio y esta dirigido por un motor microtubular. Además, se ha demostrado que el ARN mensajero del HIF1-α también usa la red de microtúbulos para llegar del núcleo al sitio de translación a proteína. Las drogas que se unen a la tubulina forman parte de una de las clases más efectivas de agentes anticáncer. Estas drogas comúnmente referidas como antimitóticas arrestan las células en mitosis conllevando a la apoptosis celular. Se han analizados los diferentes efectos del tratamiento del taxol en líneas celulares sensibles al taxol y en líneas celulares resistentes al taxol derivadas de las líneas sensibles. La survivina es una proteína clave en el pase del arresto mitótico en la célula a la muerte por apoptosis. A pesar del éxito clínico de las drogas antimicrotubulares, un factor que limita su aplicación universal es la apariencia de focos resistentes. La quimioresistencia adquirida es la razón más común del fracaso de la quimioterapia en pacientes con cáncer que inicialmente responden al tratamiento. En el tercer objetivo de la tesis se ha descrito un modelo temporal para explicar el desarrollo de la quimioresistencia en líneas celulares tratadas continuamente con drogas antimicrotubulares. Aunque se ha publicado extensamente que el principal mecanismo de quimioresistencia a los agentes antimicrotubulares es debido a la apariencia de mutaciones en el gen de la beta-tubulina, en este objetivo se ha demostrado que es necesario que también haya perdida de heterocigosidad en el alelo wt para que las células tengan unos altos niveles de resistencia. En el cuarto objetivo se han estudiado nuevos regimenes de quimioterapia que son activos en las células resistentes. La interacción sinergística entre los inhibidores de la farnesiltransferasa (FTI) y los taxanos se introdujo recientemente en la clínica y es muy activa contra la resistencia al taxol. Se ha demostrado que los FTIs intensifican la unión del taxol a la beta-tubulina, incluso en células resistentes al taxol. Los FTIs afectan la acetilación microtubular, a través de la inhibición de la HDAC6, la tubulina deacetilasa. La mayor acetilación de la tubulina, conlleva a una tubulina más estable y más propensa a la unión del taxol.

ESTUDIO: Se sabe que DPYD interviene en procesos catabólicos ó de degradación del 5-fluorouracilo, así como el enzima CDA participa en procesos anabólicos, al proveer de sustrato a la timidilato sintetasa para la síntesis de DNA, y por analogía, en la síntesis de RNA. Por lo tanto, la incorporación de la molécula de 5-FU por semejanza a la molécula de uracilo en procesos anabólicos significa el freno en la síntesis de DNA y de RNA tumoral, al "engañar" el fármaco a los enzimas de estas vías.OBJETIVOS: 1. Analizar polimorfismos en los genes dihidropirimidina dehidrogenasa (DPYD) y citidina deaminasa (CDA); 2. Determinar si estos polimorfismos aumentan o disminuyen la actividad del enzima; y 3. Comprobar si estos polimorfismos están implicados en la supervivencia de pacientes tratados con quimioterapia adyuvante con Tegafur. MÉTODOS: Análisis de polimorfismos por discriminación alélica de muestras parafinadas de 53 pacientes con cáncer gástrico con seguimiento por el Servicio de Oncologia del Hospital Clinic de Barcelona entre mayo de 1995 y noviembre de 2003 que recibieron quimioterapia adyuvante con Tegafur, un profármaco del 5-fluorouracilo y para DPYD Ile543Val (A/G), DPYD Arg29Cys (C/T) y CDA Lys27Gln (A/C). CONCLUSIONES: Polimorfismos en DPYD Ile543Val, DPYD Arg29Cys y CDA Lys27Gln pueden predecir el pronóstico, supervivencia y toxicidad de pacientes con cáncer gástrico tratados con quimioterapia adyuvante con 5-FU. Polimorfismos en DPYD inducen deficiencia en este gen, dando lugar a una actividad aumentada de los derivados de 5-fluorouracil con posible toxicidad, y en concreto se ha observado una mayor supervivencia y significancia estadística para pacientes con DPYD Ile543Val A/G ó G/G. También se observó significancia estadística en pacientes homocigotos para la combinación de DPYD Arg29Cys más CDA Lys27Gln frente a heterocigotos. La asociación de un tercer polimorfismo (DPYD Ile543Val) no tuvo correlación clinica. Las frecuencias alélicas para DPYD Arg29Cys diferían de los valores de las bases de datos obtenidas por Internet para el resto de la población mundial. / "Dihydropyrimidine dehydrogenases (DPYD) and cytidine deaminase (CDA) gene polymorphisms as genomic predictors of clinical outcome in resected gastric cancer patients (GCP) treated with fluoropyrimidine based chemotherapy".BACKGROUND: Single nucleotide polymorphisms (SNPs) of DPYD gene induces deficiency in this gene resulting in a increased activity of 5-fluorouracil derivates in treatment of colorectal cancer patients. In GCP has not been previously analysed.OBJECTIVES: 1. To analyse polymorphisms in the genes dihydropyrimidine dehydrogenase (DPYD) and cytidine deaminase (CDA); 2. To prove if these polymorphisms increase or decrease the activity of the enzyme; and 3. To observe if these polymorphisms are involved in the survival of patients treated with adjuvant chemotherapy with Tegafur.METHODS: Analysis of polymorphisms by allelic discrimination of paraffin-embedded biopsies from 53 consecutive GCP of the Department of Oncology in the Hospital Clinic of Barcelona in the period of time between May 1985 and November 2003, who received adjuvant chemotherapy with Tegafur, one prodrug of 5-fluorouracil, for DPYD Ile543Val (A/G), DPYD Arg29Cys (C/T) and CDA Lys27Gln (A/C).CONCLUSIONS: Polymorphisms of DPYD Ile543Val, DPYD Arg29Cys and CDA Lys27Gln predict outcome, survival and toxicity of GCP treated with 5-FU based adjuvant chemotherapy, with major survival with statistic significance for patients DPYD Ile543Val A/G ó G/G and for homozygous patients for the combination of DPYD Arg29Cys plus CDA Lys27Gln front heterozygous. The association of one third polymorphism (DPYD Ile543Val) hadn't clinic correlation.

Artículo 1. Activación de la apoptosis mitocondrial en el linfoma de células del manto (LCM): elevada sensibilidad a mitoxantrona en casos con genes de respuesta a daño a DNA funcionales.El LCM es un síndrome linfoproliferativo agresivo y altamente resistente a las terapias actuales. Al estudiar el efecto citotóxico de la fludarabina, la mitoxantrona y la ciclofosfamida sobre células primarias de LCM y sobre células de líneas celulares portadoras de la t(11;14)(q13;q32) se demuestra que la mitoxantrona, un inhibidor de la topoisomerasa II, ejerce el mayor efecto citotóxico. Además, la variante blástica es más sensible a la mitoxantrona que la variante típica posiblemente debido a los elevados niveles de expresión de la topoisomerasa-II-alfa en los casos blásticos. La citotoxicidad inducida por estos fármacos genotóxicos está mediada por la activación de la vía apotótica mitocondrial debido a un daño en el DNA, por lo que es necesario que los sensores de daño a DNA, p53 y/o ATM, sean funcionales.Artículo 2. La expresión del transportador equilibrativo de nucleósidos-2 (hENT2) correlaciona con la sensibilidad ex vivo a la fludarabina en células de leucemia linfática crónica-B (LLC-B).El efecto de la fludarabina sobre células de LLC-B viene determinado, en primera instancia, por el transporte vía hENT2, atribuyéndole importancia, por primera vez, en el efecto terapéutico de un análogo de nucleósidos. La expresión de este transportador correlaciona significativamente con el efecto citotóxico inducido por la fludarabina en células de LLC-B.Artículo 3. La expresión del transportador equilibrativo hENT1 correlaciona con el transporte de gemcitabina y la citotoxicidad in vitro del fármaco en células de linfoma de células del manto (LCM).Sin embargo, las células de LCM, que no responden in vitro a la fludarabina, expresan niveles más altos de mRNA y de proteína de hENT1 que de hENT2. Esta expresión diferencial podría explicar la diferente respuesta a la fludarabina entre células de LCM y LLC-B. La gemcitabina, fármaco transportado mayoritariamente por hENT1, induce un efecto citotóxico sobre células de LCM a dosis inferiores a las necesarias de fludarabina para ejercer el mismo efecto, lo que nos sugiere que el análisis de la expresión de transportadores de nucleósidos en las células de LLC-B y LCM resulta útil para la elección del tratamiento a seguir y posiblemente para predecir la respuesta al tratamiento.Artículo 4. La pérdida de expresión de MTAP en el linfoma de células del manto está asociada a una corta supervivencia. Implicación para una posible terapia dirigida.Los casos de LCM que presentan deleción del gen MTAP y pérdida de expresión de la proteína se asocian a una mayor agresividad de la enfermedad y peor pronóstico. Este fenómeno se debe, muy probablemente, a la estrecha relación entre el gen MTAP y el locus INK4a-ARF en este tipo de tumores, lo que sugiere que la detección inmunohistoquímica de MTAP puede ser un buen marcador de la pérdida de todo el locus. Además, el análisis de la expresión de MTAP puede ser una buena herramienta para identificar aquellos pacientes que podrían beneficiarse de una terapia dirigida mediante la inhibición de la vía de síntesis de novo de AMP. Nuestros resultados apoyan la idea del uso de la combinación de L-alanosina y EFA como tratamiento de esos casos con deleción de MTAP. / In this study we have analyzed the mechanisms of drug-induced cell death in four cell lines with the t(11;14) and in primary cells from 10 patients with MCL. Mitoxantrone, a topoisomerase II inhibitor, induced a strong cytotoxic effect in three cell lines (JVM-2, REC-1, and Granta 519), as well as in primary MCL cells. This cytotoxic effect due to apoptosis induction was observed despite the presence of either p53 or ATM abnormalities. However, no cytotoxic effect was detected after incubation with DNA damaging agents in the NCEB-1 cell line carrying p53 and ATM alterations, despite the presence of a functional mitochondrial machinery. These results support that mitoxantrone can be effective in the treatment of MCL but that this activity requires the integrity of functional DNA-damage response genes. Fludarabine is considered the treatment of choice for most patients with chronic lymphocytic leukemia (CLL). We have analyzed the role of plasma membrane transporters in nucleoside-derived drug bioavailability and action in CLL cells. In this study, we have observed a significant correlation between the expression of hENT2 by Western blot and fludarabine uptake via hENT carriers and also with ex vivo sensitivity of CLL cells to fludarabine. These results suggest that the equilibrative nucleoside transporter hENT2 plays a role in fludarabine responsiveness in CLL patients.MCL cells express high levels of hENT1 protein compared to CLL cells, and a good correlation was found between protein and mRNA levels of hENT1, thus indirectly suggesting that hENT1 might be transcriptionally regulated in MCL cells. More importantly, a significant correlation between these two parameters, drug uptake and sensitivity to gemcitabine was also observed. These results further support that NTs are implicated in the therapeutic response to nucleoside analogues, and suggest a particular and novel role for hENT1 in the genotoxic response to selected nucleoside analogues, such as gemcitabine, in MCL cells. In this study we have determined the methylthioadenosine phosphorylase (MTAP) gene alterations in MCL and investigated whether the targeted inactivation of the alternative de novo AMP synthesis pathway may be an useful therapeutic strategy in tumors with inactivation of this enzyme. MTAP gene deletion and protein expression correlated with clinical behavior. L-alanosine induced cytotoxicity in MCL cells. 9-beta-D-Erythrofuranosyl adenine (EFA), an analogue of MTA, selectively rescued MTAP positive cells from Lalanosine toxicity. MTAP gene deletion and lack of protein expression are associated with poor prognosis in MCL and might identify patients who might benefit from treatment with "de novo" AMP synthesis pathway targeted therapies.

El càncer de mama estadi III és una entitat clínica que es caracteritza per un mal pronòstic a curt termini, tant per la progressió local com per la disseminació a distància.Al llarg del temps el tractament ha variat molt, des dels primers cirurgians que amb la tècnica quirúrgica volien curar les pacients fins el als tractaments actuals que combinen el tractament sistèmic i el local.L'estudi estudia la influència de la seqüència dels tractaments i com un tractament interdisciplinar, on es combina tant tractament local i tractament sistèmic permet millorar el pronòstic de les pacients (valorant la supervivència global i la supervivència lliure de malaltia). I a la vegada si la combinació permet en casos seleccionats l'aplicació de tractament quirúrgic conservador.És un estudi en part retrospectiu i no randomitzat de totes les pacients que van consultar per càncer de mama localment avançat estadi III a la Ciutat Sanitària i Universitària de Bellvitge.S'estudien 241 pacients entre els anys 1980 i 1995 amb un seguiment posterior a 25 anys. Les pacients s'estudien segons:1. El moment en el que han estat tractades.2. El tractament aplicat d'entrada (local-Cirurgia-,o sistèmic -Hormonoteràpia/Quimioteràpia)Obtenen un pronòstic més favorable les pacients que:1. Han seguit tractament interdisciplinari, 2. Han respost a la teràpia neoadjuvant3. Tenien menys de 4 ganglis axil·lars metastàsicsEn canvi en aquest estudi l'ordre d'aplicació de tractaments no ha modificat la supervivència ni el període lliure de malaltia.CONCLUSIONS:1. Al càncer de mama localment avançat l'abordatge interdisciplinar millora el pronòstic de la malaltia.2. Al càncer de mama localment avançat l'ordre d'administració dels tractaments no modifica la supervivència.3. L'administració conjunta de tractament sistèmic i tractament local permet el control locoregional a llarg termini.4. L'abordatge pluridisciplinar de la malaltia permet aplicar tractament quirúrgic conservador en pacients seleccionades sense augmentar la recidiva local. / "EVOLUTION OF SURGICAL TREATMENT FOR LOCALLY ADVANCED BREAST CANCER"TEXT:Locally advanced breast cancer (LABC) is a disease with a poor prognosis because of systemic and local progression.Treatment has changed a lot along time. Surgeons in late 18's prosecuted healing through large surgical procedures (for ex. Halsted operation) bur they failed as disease progressed both locally or systemic. Nowadays treatment includes local therapies as Surgery and Radiotherapy and systemic (Chemotherapy and Hormone therapy).The study had three objectives:1. Evaluation of overall survival and disease free survival when treating LABC from a pluridisciplinary team2. Evaluation the influence in the order of administration of the different therapies in overall survival and disease free survival.3. Feasibility of breast conservative surgery in patients with LABC.It was a partly retrospective and no randomized study that included all patients with LABC attended in a single institution (Ciutat Sanitària i Universitària de Bellvitge). 241 patients were eligible. Patients were treated between 1980 and 1995 so follow up is for 25 years.The results show best prognosis for those patients that:1. Were treated on a multidisciplinary scheme2. Presented a complete or partial response to neoadjuvant therapy3. Had less than four axilar metastasesThe order of the treatment didn't affect nor overall survival or disease free survival.CONCLUSIONS:1. A multidisciplinary approach improves prognosis in locally advanced breast cancer.2. The order of administration of local or systemic therapies does not affect survival3. Administration of both, systemic and local therapy allows a proper long term locoregional control 4. Multidisciplinary approach allows breast preservation in selected patients without increasing local recurrences.

HIPÓTESIS Y OBJETIVOS: La presencia de masas residuales postquimioterapia es una circunstancia relativamente frecuente (30-60%) en pacientes afectos de tumores germinales testiculares (TGT) metastásicos tras la finalización de la quimioterapia de inducción y en ausencia de elevación de marcadores tumorales. La resección quirúrgica constituye el tratamiento comúnmente aceptado en estos casos y en especial en los TGT no seminomatosos. La histología de dichas masas revelará hasta en un 40% la presencia de fibronecrosis, teratoma maduro en un 40% y tumor germinal viable en el 20% restante. La detección de tumor germinal viable en las masas resecadas es sumamente útil pues su presencia determinará la aplicación de nuevos ciclos de quimioterapia adyuvante. Así mismo la exéresis del teratoma, dado su carácter quimio-radio resistente y su potencial capacidad de crecimiento (síndrome del "Growing teratoma") determina que la cirugía sea la única alternativa en éstos casos. Por tanto y, a diferencia de las dos situaciones anteriores, la exéresis de masas residuales que contengan únicamente el componente histológico de fibronecrosis no va a tener valor terapéutico alguno y obliga a someter al paciente a una cirugía compleja con potenciales complicaciones y secuelas (disfunción eyaculatoria).Por tanto nuestro estudio se propone identificar predictores objetivos de la histología de fibronecrosis en las masas residuales postquimioterapia que nos permitan omitir, en casos seleccionados,la práctica de la cirugía retroperitoneal. Se analizan la asociación y el valor predictivo global de las variables histológicas del tumor primario, variables clínico-biológicas y variables radiológicas respecto a la presencia de fibrosis-necrosis en las masas residuales postquimioterapia. Así mismo se analiza la morbilidad global de la serie estudiada.MATERIAL Y MÉTODO: Se realiza un estudio descriptivo y retrospectivo de una cohorte de 49 pacientes afectos de tumores germinales (46 testiculares y 3 extragonadales de localización retroperitoneal) con masa residual retroperitoneal postquimioterapia.pacientes afectos de TGT con masa residual de localización retroperitoneal. Se valoran diferentes variables histológicas (composición histológica cuantitativa, volumen tumoral, permeación linfo-vascular e invasión de estructuras testiculares), clínico-biológicas (edad, lateralidad, antecedente de maldescenso testicular, niveles prequimioterapia de alfa-feto proteína, beta-coriogonadotropina y lactato deshidrogenasa) y radiológicas (variaciones dimensionales y densitométricas en las masa residuales durante la aplicación de la quimioterapia). Se realiza un estudio descriptivo completo y un análisis estadístico uni y multivariante de los resultados obtenidos.CONCLUSIONES:La ausencia de elementos teratomatosos en el tumor primario se asoció a una mayor probabilidad de encontrar fibronecrosis en las masas residuales postquimioterapia en nuestra serie. La presencia del componente de teratoma en el tumor primario se correlaciona con una elevada probabilidad de contener dicho componente en las masas residuales. Los niveles de alfa-feto proteína, beta-coriogonadotropina y lactato deshidrogenasa previos a la cirugía retroperitoneal así como el resto de variables clínicas evaluadas no han resultado predictores de la histología de fibronecrosis en las masas residuales postquimioterapia en nuestra serie. Las masas residuales que presentan reducciones de volumen superiores o iguales al 90 % durante la administración de la quimioterapia estándar se asocian a una mayor probabilidad de contener fibronecrosis. Los enfermos que presentan asociación de elementos de teratoma maduro más reducciones volumétricas superiores o iguales al 90 % tras la quimioterapia, tienen más probabilidad de tener fibronecrosis en las masas residuales, si bien la probabilidad no es lo suficientemente elevada como para evitar la cirugía. La tasa global de complicaciones y mortalidad han sido bajas y equiparables a las series publicadas. / OBJECTIVE: Up to 60% of patients with disseminated advanced germ cell tumors will have residual masses after completion of chemotherapy. Surgical resection is a generally accepted treatment for residual retroperitoneal masses after chemotherapy for metastatic germ cell tumors, particularly in testicular nonseminomatous germ cell tumors. After resection may reveal fibrosis/necrosis, diferenciated teratoma or viable cancer cells. The objective of surgery is to document the presence or absence of residual viable malignancy and to remove teratomatous components. Patients with complete necrotic or fibrosis residual tumor do not need surgical removal of the residual masses. Efforts have been made to identify these patients with a very high likelihood of fibrosis/necrosis to avoid retroperitoneal surgery.PATIENTS AND METHODS: The data set consisted of 49 patients with metastatic germ cell tumors (46 metastasic testicular cancer and 3 extragonadal retroperitoneal tumors) with postchemotherapy retroperitoneal residual masses. We evaluated histological primary tumor parameters, radiological characteristic of residual masses (changes in size and density during the course of chemotherapy) and clinical parameters like tumors markers (AFP, B-HCG and LDH) pre-chemotherapy, and all were correlated with the presence/absence of fibrosis/necrosis at retroperitoneal surgery.CONCLUSIONS: Patients with absence of teratomatous components in the primary tumor might be asociated with a very high likelihood of fibrosis/necrosis in postchemotherapy residual masses. Teratoma components in primary tumor was correlated with a high likelihood of teratoma in retroperitoneal surgical specimens. Prechemotherapy tumor marker levels (AFP, B-HCG and LDH) and other clinical parameters evaluated were not predictors of fibrosis/necrosis in postchemotherapy residual masses. A tumor shrinkage ≥ 90% during the course of medical treatment was correlated with a high likelihood of fibrosis/necrosis in postchemotherapy residual masses. Patients with asociation of tumor shrinkage ≥ 90% during the course of medical treatment and absence of teratomatous components in the primary tumor might be asociated with a very high likelihood of fibrosis/necrosis in postchemotherapy residual masses. Finally, morbidity was low and similar to other previous studies.

DE LA TESIS: La multiresistencia a drogas de algunos tumores sigue siendo un grave problema para el manejo del paciente oncológico candidato a tratamiento sistémico con quimioterapia. Actualmente no existen técnicas diagnósticas no invasivas que puedan determinar de forma precisa la respuesta a la quimioterapia en la mayoría de tumores. Este trabajo evalúa si existe asociación entre la captación tumoral de 99mTc-tetrofosmina y los niveles de glicoproteína-P y si la gammagrafía con 99mTc-tetrofosmina puede ser útil para predecir la respuesta a la quimioterapia en el cáncer de pulmón de célula no pequeña. Se administraron 20 mCi de 99mTc-tetrofosmina a todos los pacientes obteniendo imágenes planares del tórax en proyección anterior y posterior de 300 segundos a los 15 minutos (fase precoz) y a las 2 horas (fase tardía) post-inyección del radiotrazador. Se realizaron imágenes del tórax en modo SPECT a las 2 horas tras finalizar la adquisición planar tardía. Se cuantificó el lavado de radiotrazador de la lesión tumoral comparando la captación en la imagen planar en fase precoz y tardía y se obtuvo un índice de captación del tumor en las imágenes en modo SPECT. Los pacientes se clasificaron como "si respuesta" cuando hubo una respuesta parcial o completa a la quimioterapia y como "no respuesta" cuando la enfermedad mostró una estabilidad o progresión tras el tratamiento con quimioterapia. Los resultados mostraron una correlación estadísticamente significativa (P<0.005) entre la respuesta a la quimioterapia y el lavado del radiotrazador, observándose más casos de "sí respuesta" en los pacientes con un lavado más lento. Además, el índice de captación en la SPECT para los pacientes con "sí respuesta" fue de 1.69 o superior, mientras que en el grupo de "no respuesta" el índice de captación fue siempre inferior a 1.80 con índices globalmente más bajos. En el análisis de la glicoproteína-P, se observó que teniendo en cuenta la expresión de esta glicoproteína en el tejido pulmonar sano en cada paciente, existían diferencias estadísticas en ambos grupos, tanto en el lavado de la lesión como en su índice de captación (P<0.05). La conclusión principal del estudio es que la gammagrafía con 99mTc-tetrofosmina puede ser una técnica útil para predecir y monitorizar la respuesta a la quimioterapia en pacientes con cáncer de pulmón de célula no pequeña. Esta técnica permite valorar la expresión de glicoproteína-P en estos pacientes.

Aquesta tesi comença amb la presentació de la família de Lamel·larines, uns productes naturals d'orígen marí amb interessants activitats biològiques. En el Capítol 1 se'n descriuen els últims avanços quant al seu aïllament, nova metodologia sintètica i estudis sobre l'activitat biològica i el seu mode d'acció. La consecució d'aquests mètodes sintètics ha obert la porta a la preparació del producte natural, i de molècules anàlogues. Així, en el Capítol 3 es descriu la síntesi de la Lamel·larina D amb una metodologia d'acoblaments creuats successius de Suzuki amb catàlisi de Pd(0). Amb la preparació descrita al Capítol 2 dels bromopolialcòxibenzens s'ha pogut realitzar la síntesi d'una quimioteca d'anàlegs sense lactona de la Lamel·larina D i amb la introducció de diferents patrons de substitució (es descriu al Capítol 4). S'ha assajat l'activitat biològica i estudiat les relacions estructura-activitat d'aquests compostos, cosa que ha permès posar de manifest aquells grups estructuralment importants quant a activitat. Al Capítol 5 es descriu la síntesi d'uns conjugats amb polietilenglicol de la Lamel·larina D, i més enllà al Capítol 6 es descriu la síntesi de conjugats estructuralment més complexos amb una seqüència peptídica de localització nuclear i un dendrímer. Amb els productes sintetitzats s'ha procedit a fer-ne una avaluació de la seva internalització i distribució cel·lulars, estudis co-localització dels productes amb marcatges selectius de membrana, mitocòndries i topoisomerasa.Per l'estudi del mode d'acció de la Lamel·larina D com a inhibidor de la topoisomerasa, s'ha fet ús de biosensors de pinzes òptiques i microscòpia de forces atòmiques. Aquest treball es descriu al Capítol 7 i cal destacar que aquestes novedoses tecnologies amb sensibilitats de pN i resolució nanomètrica es mostren d'elevada utilitat per a l'estudi de l'activitat de la topoisomerasa, i de la seva inhibició. / Lamellarin D (Lam-D) is a marine alkaloid with antiproliferative activity against various tumor cells in the low nanomolar range. The inhibition of topoisomerase-I, a mitochondrial transmembrane potential disruption as well as promotion of apoptosis are its modes of action. Topoisomerase is an especially interesting chemotherapy target, namely because of the topoisomerase-DNA complex, which undergoes mechanical motions essential to its function (Chapter 1). The present research summary highlights the synthetic methodologies used for the synthesis of Lam-D and its related derivatives. Two synthetic strategies (A, B) had been employed for the total synthesis of Lam-D, which enable high versatility and robust methodologies for the preparation of the natural product, regioselective conjugation on its free phenolic groups and its structurally simplified derivatives.Methyl 8-isopropoxy-9-methoxy-5,6-dihydropyrrolo[2,1-a]isoquinoline-3-carboxylate was used as scaffold of strategy A. Regioselective and sequential introduction of aryl groups followed by Pd(0)-catalyzed cross coupling reactions, aromatization and ether deprotection provided the final compounds in 18-61% yields (Chapter 3). Boronic acids and borolanes were used as building blocks for the synthesis. Its preparation through regioselective bromination under mild conditions of highly activated benzenes and Pd(0)-catalyzed borylation gave the non-commercial polialcoxy synthons (7 compounds, 43-80% yields over 2 steps) for the diverted combinatorial synthesis (Chapter 2).A combinatorial library of 45 analogues of the privileged lead Lam-D was prepared using strategy A in which removal of the lactone ring were implemented in order to improve solubility, and modifications on the OMe/OH substitution pattern were explored for structure activity relationship studies. Lam-D and its analogues were obtained in 18-44% overall yields. A panel of three human tumor cell lines was used to evaluate their cytotoxic potential: A-549 lung carcinoma NSCL, HT-29 colon carcinoma cells, and MDA-MB-231 breast adenocarcinoma. Cytotoxicity was observed for numerous compounds at low micromolar concentrations, and clear SAR patterns were determined. SAR study concluded that more than 75% of the 45 open-chain Lam-D analogs tested showed cytotoxicity in a low micromolar GI50 range (Chapter 4). Strategy B, based on quaternization of the isoquinoline, further cycloaddition on the alquine and aromatization, readily gave the pentacyclic structure in good yields. A good choice of orthogonally removable protectors has been developed for the regioselective attachment of well-defined water-soluble polymeric and peptidic nuclear location signal sequence carriers to Lam-D. These chemical modifications can significantly improve both drug delivery and therapeutic efficacy due to the enhanced permeability and retention effect observed in tumor tissue. Mono-, di-, and tri-Lam-D conjugates were regioselectively synthesized through ester bond linkages in the phenolic sites. Polymeric and peptidic conjugates, respectively, have been obtained in 18-84% (2 steps) and 8-20% (2 or 3 steps) overall yields from the corresponding Lam-D protected phenolic derivatives (Chapter 5, 6).Further studies on the mechanism of action of Lamellarin D by innovative optical tweezers biosensors, served to gain a novel insight in the biological engineering of topoisomerase I enzyme and its inhibition by small drugs. Topoisomerase is an especially interesting chemotherapy target, namely because of the topoisomerase-DNA complex, which undergoes mechanical motions essential to its function during the cleavage and religation of a single strand within a duplex DNA (Chapter 7).Here we show the use of optical tweezers to study topoisomerase activity, evidenced by a large increase in the hysteresis of the force cycles resulting from the generation of ssDNA-like domains inside ds&#955;DNA, and subsequent strand religation indicated by recovery of the characteristic dsDNA force fingerprint. In contrast, the presence of the topoisomerase inhibitor Lamellarin D results in a large increase in force hysteresis due to the initial nicking activity of Topo I and a subsequent absence of religation. These results highlight the potential of optical tweezers biosensors for the mechanistic study of DNA-modifying enzymes and for the screening of their inhibitors, and foresee profound implications in drug discovery and medical nanotechnology.

El cáncer gástrico presenta, en el momento actual, un pronóstico desfavorable debido a su tendencia a la recidiva tras la cirugía realizada con intención curativa si no se diagnóstica en estadíos precoces. La instauración de terapias más agresivas en pacientes seleccionados podría mejorar la supervivencia. El pronóstico de estos pacientes se basa en el análisis de toda una serie de criterios clinicopatológicos clásicos, pero en el momento actual es de sumo interés el estudio de nuevos marcadores moleculares que permitan una mejor evaluación pronóstica y la identificación de aquellos pacientes con un elevado riesgo de desarrollar recidivas. La multiplicación celular es el factor más importante para que se produzca el crecimiento y progresión de los tumores. La proteína p53 es un elemento determinante en la regulación de la multiplicación celular, tanto por su capacidad para inducir la apoptosis como por el bloqueo que ejerce sobre el ciclo celular que impide la replicación. Por otro lado, dicha multiplicación y crecimiento tumoral, también dependen en alto grado de la angiogénesis, que está mediada por distintos factores angiogénicos, entre los que destaca el VEGF por ser uno de los más potentes y específicos. Nuestra hipótesis establece que el grado de angiogénesis valorado directamente mediante la densidad microvascular e indirectamente a través de la sobreexpressión de p53 y VEGF (ambos actuando como factores promotores de dicha angiogénesis), ejerce una influencia significativa sobre la agresividad clínica del cáncer gástrico. Hemos analizado la expresión de la p53, del VEGF y de la angiogénesis tumoral en 206 pacientes intervenidos quirúrgicamente por adenocarcinoma de estómago.