O gênero Phytomonas está associado a enfermidades devastadoras em plantações de interesse econômico, enquanto que outros vegetais parasitados não apresentam nenhum dano aparente. A seqüência-consenso de um agrupamento de ESTs de P. serpens determinado anteriormente apresentou alta similaridade com indolpiruvato descarboxilases (IPDCs) de fitobactérias e putativas piruvato/indolpiruvato descarboxilases de Leishmania spp. A enzima IPDC está na via de biossíntese do ácido 3-indolil acético, um dos hormônios vegetais mais importantes. Verificamos que o gene IPDC está presente em diversos isolados de Phytomonas, em múltiplas cópias (cerca de 104 cópias em P. serpens e 200 cópias em P. françai), contíguas e concentradas em uma banda cromossômica. Análises filogenéticas e amplificações por PCR com oligonucleotídeos degenerados apontam o clado Phytomonas-Leishmania como grupo-irmão de IPDCs de fitobactérias, sugerindo um processo de transferência horizontal anterior à separação dos tripanossomatídeos do clado que também inclui Leptomonas, Herpetomonas e Crithidia. / The genus Phytomonas is associated to devastating diseases in commercially important crops, whereas in other plant species no apparent damage is observed. The consensus sequence of one group of ESTs of P. serpens previously determined showed high similarity with indolepyruvate decarboxylases (IPDCs) from phytobacteria and putative pyruvate/indolepyruvate decarboxylases of Leishmania spp. The enzyme ipdC participates in the biosynthetic pathway of the indole-3-acetic acid, one of the most important plant hormones. We found that the IPDC gene is present in several Phytomonas isolates, in multiple copies (about 104 copies in P. serpens and 200 copies in P. françai, in tandem and concentrated in one chromosomal band. The phylogenetic analyses and data of PCR amplifications with degenerated primers point the clade Phytomonas-Leishmania as a sister group of IPDCs of phytobacteria, suggesting a process of horizontal gene transfer prior to the separation of the trypanosomatid clade that also includes Leptomonas, Phytomonas, Herpetomonas, Leishmania and Crithidia.

Os principais marcadores sorológicos para o diagnóstico da toxoplasmose aguda ou recente são os anticorpos IgM específicos e anticorpos IgG de baixa avidez. Entretanto em alguns pacientes, anticorpos IgM e baixa avidez de anticorpos IgG podem persistir, ultrapassando o período da fase recente aguda contribuindo para erros de interpretação diagnóstica. No presente estudo, a eficiência diagnóstica do ensaio imunoenzimático foi avaliada, com o uso de frações antigênicas ou peptídeos sintéticos originados do antígeno ESA de T.gondii, denominados de SAG-1, GRA-1 e GRA-7. Foram estudadas frações isoladas e combinadas em múltiplos peptídeos antigênicos (MAP), visando estabelecer um perfil confiável para definição sorológica de toxoplasmose recente aguda em amostra única de soro. A melhor eficiência diagnóstica do ensaio foi encontrada com o uso da combinação de peptídeos SAG- 1,GRA-1 e GRA-7, denominada MAP1. A detecção de anticorpos IgG e IgM anti- MAP1 apresentou a melhor definição entre a fase recente aguda da fase recente não aguda na toxoplasmose. Nossos resultados mostraram que IgM anti-MAP1 poderá se constituir um marcador sorológico importante no aumento da eficiência diagnóstica da toxoplasmose recente aguda / The main serological marker for the diagnosis of recent toxoplasmosis is the specific IgM antibody, along with IgG antibodies of low avidity. However, in some patients these antibodies may persist long after the acute/recent phase, contributing to misdiagnosis in suspected cases of toxoplasmosis. In the present study, the diagnostic efficiency of ELISA was evaluated, with the use of peptides derived from T. gondii ESA antigens, named SAG-1, GRA-1 and GRA-7. In the assay referred to, we studied each of these peptides individually, as well as in four different combinations, as Multiple Antigen Peptides (MAP), aiming to establish a reliable profile for the acute/recent toxoplasmosis with only one patient serum sample. The diagnostic performance of the assay using MAP1, with the combination of SAG-1, GRA-1 and GRA-7 peptides, demonstrated better discrimination of the acute/recent phase from non acute/recent phase of toxoplasmosis. Our results show that IgM antibodies to MAP1 may be useful as a serological marker, enhancing the diagnostic efficiency of the assay for acute/recent phase of toxoplasmosis

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:47:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 3607737 bytes, checksum: dbd15c8d04b7d9820c8e41dbf7068c3b (MD5) Previous issue date: 2007-08-13 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / This project aims at studying the dynamics of Giardia cysts Cryptosporidium oocysts. in São Bartolomeu stream (SB) watershed, Viçosa, Minas Gerais. In this sense, three studies were carried out: Study 1 - the impact caused by animal populations on the parasitological quality of SB water. Study 2 - enteroparasites prevalence among children residing in the SB watershed area. Study 3 - evaluation of SB microbiological and parasitological water quality parameters. In Study 1, from January 2003 to January 2004, water samples were collected every three months from the eight sampling points allocated within SB watershed, along with samples of animal feces from 40 farms, from two swinebreeding farms wastewaters, and from the final effluent of Romão dos Reis neighborhood sewage treatment plant (STP). The occurrence of enteroparasites in humans was surveyed in two communities living within SB watershed, focusing at the infant population, from zero to ten years old, from July 2004 to June 2005. In the same period Romão dos Reis STP effluent and SB water sample was monitored for protozoa. From January to June 2007, as part of the Study 3, water samples form the eight above mentioned sampling points, Romão dos Reis STP effluent, and a swine-breeding wastewater were also monitored for protozoa. The water quality was monthly evaluated for anaerobic and aerobic bacteria spores, and biweekly for streptococcus, enterococcus, E. coli, total coliforms and Giardia and Cryptosporidium (oo)cysts. In addition, the water flow and turbidity was also measured. High concentrations of protozoa were found in water samples all over the study period In Study 1, the arithmetic means of Giardia and Cryptosporidium were respectively, 20.2 and 15.3 (oo)cysts/L. The average prevalence of Giardia and Cryptosporidium in cattle farms was, respectively, 36.4 18.0%., being the difference statistically significant (p = 0.0002). The results of children feces exams, showed an absence of Cryptosporidium, but Giardia as the enteroparasite of highest prevalence (6.1%). High concentrations of both protozoa were found in Romão dos Reis STP final effluent (cysts of. in the order of around 104 Giardia cysts per liter and 102 Cryptosporidium oocysts per liter), in swine-breeding wastewaters (up to 103 Giardia cysts per liter and 102 Cryptosporidium oocysts per liter). In Study 3 the occurrence of protozoa in water samples was found to be correlated with rain and water turbidity (p < 0.01). The occurrence of Giardia and Cryptosporidium was also associated to the presence of anaerobic spores and Clostridium perfringens (p < 0.05). Also, a negative correlation was found between the occurrence of Giardia spp. and Cryptosporidium spp. and wooded areas, though not statistically significant (p < 0.05). The results indicate that animal breeding and human settlements in São Bartolomeu stream watershed contribute to its water contamination, regarding the presence of protozoa oocysts. The lack of protection measures of this drinking-water source may pose risks of disease transmission. / Esse projeto objetivou estudar a dinâmica de (oo)cistos de Giardia spp. e de Cryptosporidium sp. na bacia hidrográfica do Ribeirão São Bartolomeu (RSB). Foram desenvolvidos três estudos: o Estudo 1 avaliou a influência de populações animais na alteração da qualidade parasitológica do RSB; o Estudo 2 avaliou a prevalência de enteroparasitas em crianças residentes na área da bacia e o Estudo 3 objetivou avaliar parâmetros da qualidade microbiológica da água e correlação com variáveis de uso do solo e cobertura vegetal. No primeiro estudo, foram coletadas, trimestralmente, entre janeiro de 2003 a janeiro de 2004, amostras de água bruta de oito pontos, amostras de fezes de animais de 40 propriedades e amostras do esgoto de duas suinoculturas e do efluente de uma Estação de Tratamento de esgotos do Bairro Romão dos Reis (ETE-Romão dos Reis), todos localizados na bacia hidrográfica do RSB. No segundo estudo, desenvolvido entre julho de 2004 e junho de 2005, pesquisou-se enteroparasitas na população humana de zero a dez anos de idade residente em duas comunidades localizadas na bacia. No mesmo período, o efluente da ETE-Romão dos Reis e a água do RSB foram monitorados para a presença de protozoários. No Estudo 3, entre janeiro e junho de 2007, realizou-se pesquisa de esporos anaeróbios e aeróbios (mensalmente), estreptococos, enterococos, E. coli, coliforme totais e (oo)cistos de Giardia e Cryptosporidium (quinzenalmente) em amostras de água bruta dos oitos pontos de coleta de água do Estudo 1. Também o efluente da ETERomão dos Reis e de uma suinocultura foram monitorados, quinzenalmente, para pesquisa de estreptococos, enterococos e (oo)cistos de Giardia e Cryptosporidium. Adicionalmente, realizaram-se medições de turbidez da água bruta e vazão dos córregos pesquisados. No Estudo 1, encontramos elevadas concentrações de protozoários na água bruta em todos os períodos estudados (médias aritméticas: 20,2 e 15,3 (oo)cistos/L para Giardia e Cryptosporidium, respectivamente). A prevalência média de propriedades positivas (bovino) foi de 36,4% para Giardia spp. e 18,0% para Cryptosporidium spp. sendo a diferença estatisticamente significativa (p = 0,0002). Dentre os enteroparasitas identificados nas amostras de fezes humanas, observou-se maior prevalência para Giardia (6,1%) e ausência de Cryptosporidium. Elevadas concentrações de ambos os protozoários foram identificadas no efluente da ETE-Romão dos Reis (104 cistos de Giardia spp./L e 102 oocistos de Cryptosporidium spp./L para) e das suinoculturas (103 cistos de Giardia spp./L e 102 oocistos de Cryptosporidium/L). No Estudo 3, observamos existência de correlação entre protozoários na água, pluviosidade e turbidez (p < 0,01). A ocorrência de Giardia e Cryptosporidium também esteve correlacionada à presença de esporos anaeróbios e Clostridium perfringens (p < 0,05). Observamos correlação negativa entre a ocorrência de Giardia spp. e Cryptosporidium spp. e a presença de mata/capoeira, embora não estatisticamente significativa (p > 0,05 ). Os resultados indicam que explorações animais e populações humanas existentes nas sub-bacias que integram a bacia hidrográfica do RSB contribuem para a contaminação da água superficial, quanto à presença de (oo)cistos de protozoários, deteriorando, por sua vez, o manancial de abastecimento de água para consumo humano. Nesse sentido, a ausência de cuidados específicos que visem a proteção da bacia do manancial de abastecimento de água para consumo humano pode implicar em risco de transmissão de doenças às populações consumidoras.

Submitted by Anderson Silva (avargas@icict.fiocruz.br) on 2012-10-15T17:46:51Z No. of bitstreams: 1 amanda_b_r_b_macedo_ioc_bcm_0038_2011.pdf: 6569786 bytes, checksum: 14dd4b1254c99bb75e49af1ca06a9072 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-10-15T17:46:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 amanda_b_r_b_macedo_ioc_bcm_0038_2011.pdf: 6569786 bytes, checksum: 14dd4b1254c99bb75e49af1ca06a9072 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil. / As Leishmanioses são doenças causadas por diferentes espécies de protozoários do gênero Leishmania, que afetam indivíduos em aproximadamente 88 países. Atualmente, a medida de controle da doença mais aceita é o desenvolvimento de uma vacina profilática; porém, para que uma vacina efetiva seja alcançada, torna-se necessário a compreensão dos fatores que regulam e participam na proteção durante e após a infecção natural. São comuns trabalhos em que a resposta imune do tipo Th1 é medida exclusivamente pela produção in vitro de IFN-γ, porém a avaliação de um só parâmetro nem sempre é suficiente para predizer proteção. O presente trabalho visou estudar a qualidade de resposta Th1 induzida por diferentes antígenos de Leishmania em pacientes com a forma cutânea de leishmaniose tegumentar americana (LTA) provenientes do RJ. Utilizando-se ensaios de citometria de fluxo multiparamétrica para marcadores de superfície, e para as citocinas IL-2, TNF-α e IFN-γ, bem como ELISA para IFN-γ, foram feitas comparações da resposta induzida pelos extratos totais de promastigotas de fase estacionária de L. (V.) braziliensis (LbT) e L. (L.) amazonensis (PH8T), assim como frações enriquecidas em componentes subcelulares de L. (L.) amazonensis, em células mononucleares de sangue periférico de pacientes com LTA, antes e 140 dias após o tratamento, e indivíduos controles sadios. A análise das subpopulações de linfócitos T por citometria de fluxo não identificou alterações significativas nos percentuais de células CD8 +, CD4+ e CD25+ induzidas pelos diferentes estímulos, dentro de um mesmo grupo, nem entre os grupos de pacientes e controles. A avaliação individual da MFI integrada (frequência de células produtoras de uma citocina multiplicada pela intensidade média de fluorescência) para cada citocina estudada, não evidenciou nenhuma diferença marcante na resposta imune do tipo Th1 induzida pelos diferentes estímulos; porém, através da avaliação da contribuição dos fenótipos CD4+ produtores de 3, 2 ou 1 única citocina na resposta imune do tipo Th1 total, observamos diferenças qualitativas bem distintas entre as respostas obtidas antes e após o tratamento, e entre os antígenos estudados. Todos os estímulos apresentaram aumento da porporção de células multifuncionais nos pacientes PT, em relação aos AT. Após o tratamento, LbT foi o estímulo que induziu maior proporção de células multifuncionais (produtoras de IL-2, TNF-α e IFN-γ, simultaneamente; 28%), seguido da fração de membrana de L. (L.) amazonensis (PH8M; 23%), enquanto que, PH8T induziu a menor proporção de células multifuncionais (10%), e a maior proporção de células simples produtoras de IFN-γ (38%). Corroborando alguns outros relatos da literatura, observamos que as células multifuncionais são as que possuem a maior intensidade média de fluorescência para as 3 citocinas estudadas. A avaliação quantitativa da produção de IFN-γ por ELISA, demonstrou que LbT foi o estímulo que induziu significativamente a maior produção desta citocina, em comparação aos demais estímulos, tanto antes como após o tratamento. Este último resultado parece se correlacionar com os dados de citometria já mencionados, em que este mesmo estímulo foi capaz de induzir o maior percentual de células T multifuncionais, células essas com a capacidade de produzir uma quantidade maior de citocinas, do que os outros fenótipos estudados, como evidenciado nos resultados de MFI. Nossos resultados levam a discussão sobre a importância da avaliação da qualidade de uma resposta imune do tipo Th1 medida por mais de um parâmetro, a nível de uma única célula, e sugerem que a avaliação das células multifuncionais é importante para correlacionar com a cura da doença. / Leishmaniasis is a group of disease caused by different species of protozoan parasites from the genus Leishmania, that affects 88 countries around the world. Currently, the most accepted approach to control the disease is a prophylactic vaccine. However, to develop such a vaccine, it becomes necessary to understand the factors that regulate and participate in the healing process as well as protection during and after natural infection. It is well established that Th1-immune response is important for the protection against intracellular parasites. Many studies evaluate this response only by the in vitro IFN-γ production, but the evaluation of this single parameter not always is sufficient to predict protection. The present work assessed the quality of the Th1-immune response induced by different Leishmania antigens in patients affected with the cutaneous form of American Tegumentary Leishmaniasis (ATL) from Rio de Janeiro, Brazil. Using multiparametric flow cytometry to access surface markers and cytokines, such as IL-2, TNF-α and IFN-γ, as well as ELISA to measure IFN-γ in culture supernatants, we evaluated the immune responses induced by total antigens of stationary phase promastigotes of L. (V.) braziliensis (LbT) and L. (L.) amazonensis (PH8T), as well as subcellular components, composed of enriched fractions of L. (L.) amazonensis promastigotes, in peripheral blood mononuclear cells of ATL patients, before and 140 days after antimonial therapy, and healthy controls. Analysis of the T lymphocytes subpopulations by flow cytometry did not show significant variations in the percentage of CD4+, CD8+ and CD25+ cells induced by all different stimuli within the same group, or among the three studied groups. The individual evaluation of integrated MFI (frequency x MFI) for each cytokine assessed did not show any marked difference in the Th1-immune response induced by the different stimuli; however, by assessing the contribution of the CD4+ phenotypes producing 3, 2, or a single cytokine in the total Th1-immune response, we were able to identify very interesting differences. In the group of patients analyzed after treatment, LbT induced the highest proportion of multifunctional CD4+ T cells (producing IL-2, TNF-α and IFN-γ, simultaneously; 28%), followed by the membrane fraction of L. (L.) amazonensis (PH8M; 23%), whereas PH8T induced the lowest proportion of multifunctional CD4+ T cells (10%) and the highest proportion of single positive-cells for IFN-γ (38%). Corroborating previously published data, our results also showed that multifunctional CD4+T cells are those with the highest mean fluorescence intensity for the three cytokines studied. The quantitative evaluation of IFN-γ by ELISA showed that LbT significantly induced the higher production of this cytokine, in comparison to the other stimuli, both before and after treatment. This last result appears to show a relationship with our flow cytometry data, in which the same antigen was able to induce the highest percentage of multifunctional T cells, coincidently the cells that produced the larger amounts of cytokines, in comparison to the other CD4+ T cells phenotypes, as observed by the MFI values. Our results support the actual discussion about the importance of evaluating not only the quantity, but also the quality of a Th1-immune response by more than one parameter at a single-cell level, and indicate the importance of studying multifunctional CD4+ T cells in the cure of of ATL lesions.

Made available in DSpace on 2014-08-26T17:15:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 117.pdf: 2530040 bytes, checksum: 349e9b913a8742a2b359934a532ec37d (MD5) Previous issue date: 2007 / A pesquisa consistiu da avaliação da Reação Intradérmica de Montenegro – IDRM – como instrumento para inquéritos epidemiológicos e diagnóstico da Leishmaniose Tegumentar Americana - LTA, em duas populações, respectivamente, 400 adultos sadios (Estudo I) e 302 pacientes suspeitos de LTA (Estudo II). O Estudo I foi realizado em região considerada indene de LTA, em Santa Maria, Rio Grande do Sul, e visou a comparação entre a resposta ao antígeno de Montenegro e aos preservativos timerosal e fenol, analisando, entre outros, parâmetros como inocuidade, especificidade e padronização clínica do preservativo, as respostas após 48 horas e em torno de 2 semanas após a aplicação e a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) em casos positivos ao antígeno. O Estudo II, realizado no Instituto de Pesquisa Clínica Evandro Chagas- IPEC/FIOCRUZ envolveu, entre outros aspectos, a comparação entre o comportamento da IDRM e os testes de diagnóstico para detecção de Leishmania, bem como o estabelecimento de protocolo de padronização clínica da técnica de aplicação do teste e leitura da reação. Os resultados mostraram que a utilização do timerosal como veículo do Teste de Montenegro em voluntários sadios foi responsável por 12% de falso positivos ao teste. No entanto, cerca de 29,5% dos 203 voluntários sadios testados foram IDRM- positivos e 1 dos 151 voluntários testados foi positivo `a PCR, evidenciando infecção subclínica por Leishmania na área do Estudo I. Foram evidenciadas reações tardias em 4,5% dos indivíduos sadios avaliados, mas nenhum dos pacientes apresentou tais reações. O Teste de Montenegro pode ser considerado confortável e seguro para indivíduos sadios e pacientes com LTA e suspeitos, não tendo sido verificadas reações adversas sistêmicas e tendo sido as reações locais discretas e presentes em 21,5% e 11,2% dos pacientes, respectivamente. Verificou-se que o método de leitura da IDRM por meio do decalque em papel deve ser usado como alternativa à leitura direta, desde que realizado por profissional obedecendo protocolo padronizado. Entre os métodos de diagnóstico da LTA avaliados no Estudo II, A PCR foi o mais sensível (92,3%), superando a cultura (78%), a histopatologia (40%) e o imprint (24%). A co-positividade IDRM - PCR foi de 71,4% e a acurácia de 81,3%. O conjunto dos resultados encontrados reforça a constatação de que a IDRM é o melhor instrumento para inquéritos de LTA, e, como método diagnóstico, apresenta sensibilidade de 89%, especificidade de 71,4%, valor preditivo positivo de 68,7% e valor preditivo negativo de 90,3%. / The research consisted of the evaluation of Montenegro skin test- MST- as an instrument for epidemiological surveys and diagnosis of American Tegumentary Leishmaniasis- ATL in two populations, respectively, 400 healthy adults (Study I) and 302 ATL suspicious patients (Study II). The Study I was performed in an ATL non endemic area, in Santa Maria, Rio Grande do Sul, and it evaluates MST positivity and the preservatives timerosal and phenol, analyzing, among other, parameters as innocuousness, specificity and clinical standardization of the preservative, the reactions after 48 hours and around 2 weeks after the application and the PCR reaction in positive cases to the antigen. The Study II, developed at the Institute of Clinical Research Evandro Chagas - IPEC / FIOCRUZ involved, among other aspects, the comparison between the MST response and the leishmaniasis diagnostic tests, as well as the establishment of protocol of clinical standardization of the MST. The results showed that the use of the timerosal as vehicle of MST in healthy volunteers was responsible for 12% - of false positive results to the test. However, about 29,5% of the 203 healthy volunteers tested were MST - positive and 1 of the 151 tested volunteers were PCR- positive, evidencing subclinical infection for Leishmania in the area of Study I. Late reactions were evidenced in 4,5% of the healthy individuals, but none of the patients presented such reactions. MST can be considered comfortable and safe for healthy volunteers and ATL patients, not having been verified systemic adverse reactions and having been the local reactions presents in 21,5% and 11,2% of the two groups, respectively. It was verified that the method of MST reading of through the paper should be used as alternative to the direct reading, since accomplished by professional obeying standardized protocol. Among the methods of ATL diagnosis in the Study II, PCR was the most sensitive (92,3%), overcoming culture (78%), histopathology (40%) and imprint (24%). The co-positivity MST-PCR was of 71,4% and the agreement of 81,3%. These results reinforces that MST is the best instrument for surveys in ATL endemic areas and, as method of diagnosis, it presents sensitivity of 89%, specificity of 71,4%, preditive positive value of 68,7% and preditive positive value of 90,3 %.

Submitted by JOÃO PAULO RAMOS COSTA null (jpramoscosta@hotmail.com) on 2016-02-25T13:30:07Z No. of bitstreams: 1 Tese_João_Paulo_Ramos_Costa.pdf: 3560400 bytes, checksum: 7b30b4c8363f3e9135f4b6977b1e5ac2 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-02-26T16:28:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 costa_jpr_dr_jabo.pdf: 3560400 bytes, checksum: 7b30b4c8363f3e9135f4b6977b1e5ac2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-26T16:28:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 costa_jpr_dr_jabo.pdf: 3560400 bytes, checksum: 7b30b4c8363f3e9135f4b6977b1e5ac2 (MD5) Previous issue date: 2016-02-02 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo foi avaliar o efeito da virginiamicina (VM) via suplemento mineral e altura pastos (AP) sobre o desempenho, parâmetros sanguíneos, fermentação ruminal, microorganismos ruminais e produção de N microbiano. O estudo foi dividido em dois experimentos. Capítulo 1: Oitenta tourinhos Nelore (inicial BW = 258 ± 15 kg) foram blocados por peso e distribuídos aleatoriamente em 16 piquetes (5 animais / piquete) arranjados em um fatorial 2 × 2: suplemento mineral sem VM (SVM) ou com VM e AP [15 e 35 cm (15AP e 35AP, respectivamente)]. Os animais que receberam VM tiveram maior GMD (P <0,01). Como esperado, o 35AP apresentou maior GMD (P <0,01). A VM não afetou a ingestão de suplemento mineral por PV (ISPV) nem por animal (ISA) (P = 0,49 e P = 0,55, respectivamente) e 15AP mostrou um maior ISPV e ISA (P <0,01 e P <0,01 , respectivamente). Albumina sanguínea foi maior em VM (P <0,01) e tendeu ser maior (P = 0,07) em 35AP. A concentração de ureia no sangue tendeu a diminuir em VM (P = 0,06) e foi maior (P <0,01) em 15AP. A concentrações de NEFA e de cálcio foram maiores (P = 0,007 e P = 0,038, respectivamente) em VM. Capítulo 2: Doze Touros Nelore (PV inicial = 334 ± 47 kg) canulados no rúmem foram designados no mesmo tratamento citados acima em três quadrados latino balanceado 4 × 4. O CMS foi maior no 15AP (P <0,01) do que em 35AP. A amônia-N tendeu a ser maior em VM (P = 0,07). A proporção de nenhuma das bactérias ruminais foram afetados (P > 0,10), excepto R. flavefaciens que tendeu a aumentar em 35AP (P = 0,08), enquanto que a contagem de protozoários totais aumentou (P = 0,03) e o género Entodinium tendeu a aumentar (P = 0,05) em VM. A VM aumento do ácido úrico (P <0,01) e tendeu a aumentar a excreção derivados de purinas (PD; P = 0,074), as purinas absorvidas (AP; P = 0,07), fluxo de N microbiano (NMIC; P = 0,07) e o índice de PDC (P = 0,07)]. Portanto, o efeito da VM parece estar mais relacionada ao aumento do fluxo de N microbiano para o intestino provocado pelo aumento dos protozoários ruminais do que a fermentação ruminal. / The objective was evaluate the effect of virginiamycin (VM) via mineral supplement and two swards height (SH) on performance, blood metabolites, ruminal fermentation, ruminal microorganisms and microbial N production. The trial was divided in two experiments. Chapter 1: Eighty Nellore young Bulls (initial BW = 258 ± 15 kg) were blocked by weight and randomly assigned into 16 paddocks (5 animals/paddock) arranged in a 2 × 2 factorial design: mineral supplement without VM (WVM) or with VM and two SH [15 and 35 cm (15SH and 35SH, respectively)]. The animals receiving VM had higher ADG (P < 0.01). As expected, the 35SH had higher ADG (P < 0.01). VM had no effect on mineral supplement intake by BW (MSIBW) or mineral supplement intake by animal (MSIA) (P = 0.49 and P = 0.55, respectively) and 15SH showed a greater MSIBW and MSIA (P < 0.01 and P < 0.01, respectively). Blood albumin was greater in VM (P < 0.01) and tended to be greater (P = 0.07) in 35SH. The blood urea concentration tended to decrease in VM (P = 0.06) and was higher (P < 0.01) in 15SH. Plasma NEFA and calcium concentrations were greater (P = 0.007 and P = 0.038, respectively) in VM. Chapter 2: Twelve Nellore steer (initial BW = 334 ± 47) ruminally cannulated were used in three 4 × 4 balanced Latin square were assigned in the same treatment arrangement cited above. The DMI was greater (P < 0.01) in 15SH than in 35SH. Ammonia-N tended to be higher in VM (P = 0.07). None ruminal bacteria proportion were affected (P > 0.10), except R. flavefaciens that tended to increase in IV 35SH (P = 0.08), while total protozoa counts increased (P = 0.03) and the Entodinium genus tended to increase (P = 0.05) in VM. The VM increased uric acid (P < 0.01) and tended to increase the purines derivatives excretion (PD; P = 0.074), absorbed purines (AP; P = 0.07), microbial N flow (NMIC; P = 0.07) and the PD: creatinine ratio index [PDC index (P = 0.07)]. Therefore, the VM effect seems to be more related to increasing the N microbial flow to the intestine caused by incresing of ruminal protozoa than the ruminal fermentation. / FAPESP: 2012/02166-1

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-12-13T12:21:07Z No. of bitstreams: 1 isabelmartinelecorrea.pdf: 473111 bytes, checksum: fef90be37cc2eb87e8dcbc88e8d3a4a5 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-12-15T14:08:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 isabelmartinelecorrea.pdf: 473111 bytes, checksum: fef90be37cc2eb87e8dcbc88e8d3a4a5 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-12-15T14:08:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 isabelmartinelecorrea.pdf: 473111 bytes, checksum: fef90be37cc2eb87e8dcbc88e8d3a4a5 (MD5) Previous issue date: 2007-02-23 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os protozoários ciliados do rúmen integram a microbiota ruminal e junto das bactérias, fungos e protozoários flagelados participam da digestão fermentativa nos ruminantes. Entretanto, o papel desempenhado por estes microorganismos no metabolismo do hospedeiro apresenta pontos controversos os quais se devem em parte, à complexidade da dinâmica populacional e às relações estabelecidas com o hospedeiro e demais microorganismos ruminais. Objetivou-se caracterizar as populações de protozoários ciliados no rúmen de ovinos mestiços Santa Inês, verificando os efeitos da estacionalidade e aspectos relacionados às variações diurnas destas populações. Foram utilizados cinco ovinos mestiços Santa Inês, fistulados no rúmen, mantidos em pastagem natural de caatinga, no estado de Pernambuco, Brasil. As coletas foram realizadas em julho de 2005, período correspondente à estação chuvosa, e em janeiro de 2006, durante a estação seca. A composição botânica da dieta dos animais foi determinada através da análise da extrusa. Os horários de coleta das amostras de conteúdo ruminal seguiram o tempo de soltura dos animais, sendo a primeira coleta antes de se soltar os animais (zero hora) e às duas, quatro, seis, oito e dez horas após o animal estar em campo, sendo as amostras fixadas em formalina 18,5% (v/v). A dieta alimentar dos ovinos durante a estação chuvosa foi predominantemente composta por espécies vegetais herbáceas e na estação seca por espécies arbustivas o que retrata o efeito da xvi estacionalidade no hábito alimentar dos ovinos. Foram identificados e quantificados organismos dos gêneros Dasytricha, Diplodinium, Diploplastron, Entodinium, Eodinium, Elytroplastron, Enoploplastron, Epidinium, Eremoplastron, Eudiplodinium, Isotricha, Metadinium e Ophryoscolex, sendo os gêneros Enoploplastron e Eodinium observados apenas na estação chuvosa. Diplodinium, Elytroplastron, Metadinium e Ophryoscolex não apresentaram variações na concentração de suas populações em função da estação do ano. Observou-se a predominância de organismos do gênero Entodinium nas estações chuvosa e seca; entretanto, na estação seca houve significativo decréscimo na concentração deste gênero, e aumento de outros entodiniomorfos e de isotriquídeos. O número total de protozoários foi significativamente reduzido durante a estação seca. Diploplastron e Entodinium apresentaram variações na concentração de suas populações em função do horário de amostragem. O número de ciliados em divisão não apresentou correlação com o horário de amostragem, sendo que a estabilidade das taxas de divisão parece contribuir para a manutenção das concentrações dos ciliados no rúmen. O pH ruminal apresentou correlação negativa com o tempo de amostragem, não estando correlacionado com o número de protozoários, provavelmente porque as variações observadas compreenderam valores considerados ideais para o estabelecimento e manutenção das populações de protozoários no rúmen. Foi constatado o comportamento predatório de Elytroplastron sobre Enoploplastron, Epidinium e Entodinium; além de canibalismo entre organismos do gênero Elytroplastron. Evidências do comportamento alimentar foram obtidas através do registro da ingestão de fibras e formação de grânulos de amido no citoplasma, o que evidencia a atividade celulolítica e amilolítica atribuída a estes microorganismos no ambiente ruminal. / The ciliate protozoan of the rumen are part of the ruminal microbiota, and together with bacteria, fungus and flagellate protozoa, they participate of the fermentative digestion of the ruminants. However, there are controversial aspects about the hole of these microorganisms it the metabolism of the host, in part due to the complexity of the population dynamics, and also to the interrelations between protozoan, the host, and other ruminal microorganisms. The objective of this work was to characterize the ciliate protozoa populations in the rumen of Santa Inez crossbred sheep, verifying the effects of the seasonality and also aspects related to the diurnal changes of these populations. It was used five sheep fistulated in the rumen, maintained in natural pasturage of caatinga (scrubland) vegetation at the state of Pernambuco, Brazil. The samples were collected in july 2005 (rainy season) and january 2006 (dry season). The composition of animals diet was determined through the extrusa analysis. The samples were obtained at intervals of two hours, being the first sample took before the releasing of the animals, in a total of six samples. The samples were fixed in formalin at 18, 5% (v/v). The feed composition of the sheep during the rainy season was predominantly composed of herbaceous species, and at the dry season by species shrub, denoting the effect of the seasonality on the sheep feed habits. It was identified and quantified Dasytricha, Diplodinium, Diploplastron, Entodinium, Eodinium, xviii Elytroplastron, Enoploplastron, Epidinium, Eremoplastron, Eudiplodinium, Isotricha, Metadinium e Ophryoscolex. Eodinium and Enoploplastron genders were observed just at the rainy season. Diplodinium, Elytroplastron, Metadinium and Ophryoscolex didn’t show variations in the population concentration as a function of the season. It was observed the predominance of the gender Entodinium at both seasons; however, at the dry season it was noted significant decrease in the concentration of this gender, and increase in greater ophryoscolecidae and Isotrichidae. The total number of protozoa was significantly reduced during the dry season. Diploplastron and Entodinium showed variations in their populations concentrations, due to the time of sampling. The number ciliates undergoing division was not correlated with the sampling times. Stable division rate appears to contribute to maintenance of ciliates concentrations in the rumen. The ruminal pH was negatively correlated with sampling times, and was not correlated with the number of protozoa, probably because the variations observed included parameters considered ideal for establishment and maintenance protozoa populations of rumen. It was observed predatory behavior of Elytroplastron on Enoploplastron, Epidinium and Entodinium; besides cannibalism between organisms of the Elytroplastron gender. The registration of fiber ingestion and starch granules formation at the cytoplasm indicates cellulolytic and amilollytic activities, attributed to these microorganisms in the ruminal environment.

Os oocistos de Cryptosporidium spp. e os cistos de Giardia spp. podem gerar doenças de veiculação hídrica associadas a problemas de saúde pública. Os (oo)cistos são de difícil remoção e inativação durante o tratamento de água, principalmente devido ao tamanho reduzido e à resistência ao processo de cloração. Além disso, os métodos de detecção de protozoários na água apresentam elevado custo e estão sujeitos à grande variabilidade e à baixa reprodutibilidade, especialmente em águas de elevada turbidez. Com água de estudo com turbidez de aproximadamente 110 uT, ensaios de tratabilidade com cloreto de polialumínio foram feitos em jarteste para a obtenção da água de lavagem dos filtros (ALF) e do resíduo sedimentado. O método escolhido para detecção de (oo)cistos foi a centrifugação direta com adição de solução de dispersão ICN 7X seguido de IMS com duas dissociações ácidas (CD + ICN 7X). O tratamento dos resíduos objetivou a inativação dos (oo)cistos, por meio de danos à estrutura celular dos parasitos, identificada pela incorporação do corante iodeto de propídio no microrganismo. Para o método CD + ICN 7X, menor interferência na viabilidade dos (oo)cistos foi observada em relação à floculação em carbonato de cálcio e melhor recuperação do que a centrifugação direta. O controle de qualidade analítica desse método, feito com suspensão do kit EasySeed&#174;, apresentou recuperação de 2,8&#177;0,8% de oocistos e 7,8&#177;2,9% de cistos para a ALF e de 3,3&#177;2,0% e 24,8&#177;8,0%, para oocistos e cistos no resíduo sedimentado. Apenas a recuperação de cistos de Giardia spp. no resíduo sedimentado atendeu aos padrões recomendados pelo Método 1623.1 da USEPA. A presença de microesferas magnéticas aderidas aos (oo)cistos foi observada nos poços de leitura após a IMS, indicando limitações desse método de purificação. Para o tratamento alcalino do resíduo sedimentado, a dosagem de 27mg/100mL foi testada para os tempos de 3 e 5 dias e, respectivamente, foram obtidos 1,85 e 3,0 log de inativação de oocistos e 2,05 e 2,14 log de inativação para cistos. Para o processo de ozonização da ALF, avaliado apenas para oocistos, as inativações de 2,83 log e 3,44 log foram obtidas para as dosagens de 7,5 mg O3 L-1 por 10 min e 10 mg O3 L-1 por 5 min, respectivamente. / Cryptosporidium spp. oocysts and Giardia spp. cysts are infectious forms and can cause public health problems due to associated waterborne diseases. (Oo)cysts are difficult to remove and inactivate during water treatment, mainly because of reduced size and resistance to chlorination. In addition, protozoan detection methods in water are expensive and subject to high variability and low reproducibility, especially in high turbidity water. In jartest treatability tests, 110 uT study water was treated with polyaluminium chloride to obtain backwashing water (BW) and sedimented residue. The method chosen for detection of (oo)cysts was direct centrifugation with addition of 7X ICN dispersion solution followed by IMS with two acid dissociations. Treatment of residuals objectified inactivation of (oo)cysts by damages on parasites cellular structure, identified by inclusion of propidium iodide as an indicator. The method of detection chosen showed less interference in the viability of (oo)cysts in comparison to flocculation in calcium carbonate and better recovery than direct centrifugation. The analytical quality control of this method, performed with EasySeed® suspension, obtained recovery of 2.8&#177;0.8% oocysts and 7.8&#177;2.9% cysts for BW and of 3.3&#177;2.0% and 24.8&#177;8.0%, for oocysts and cysts in sedimented residue. Only Giardia spp. recovery in sedimented residue complied with the standards recommended by USEPA Method 1623.1. Magnetic microspheres were found attached to (oo)cysts in microscope slides after IMS, indicating limitations of this purification method. For the alkaline treatment of sedimented residue, dosage of 27mg / 100mL was tested for 3 and 5 days and respectively 1.85 and 3.0 log inactivation were obtained for oocysts while 2.05 and 2.14 log of. For ozonation of BW, evaluated only for oocysts, 2.83 log and 3.44 log inactivation were obtained for dosages of 7.5 mg O3 L-1 for 10 min and 10 mg O3 L-1 for 5 min, respectively.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Infection by Trypanosoma evansi causes various pathological changes in animals, as well as reproductive problems whose pathogenesis is not fully known. Therefore, the objective of this study was to evaluate the serum concentrations of reproductive hormones, histopathology and biomarkers of oxidative stress in testicles of rats experimentally infected with T. evansi. Twenty four animals were divided in two groups with 12 animals each. Group A was formed by healthy Wistar rats (uninfected) and group B composed by animals infected with T. evansi. Both groups were divided into two subgroups (n=6) from which were collected serum and testicular fragments on day five and 15 post-infection. A significant reduction (P<0.01) in the levels of LH, FSH, testosterone and estradiol associated to the increase in cortisol levels was observed in serum of infected animals when compared to negative control. Also an increase in the concentrations of nitrite/nitrate (NOx), lipid peroxidation and protein oxidation was observed in the testicles. The histopathology showed testicular degeneration in the infected animals. Based on these results, we can conclude that infection with T. evansi may reduce the reproductive capacity of male and/or inducing infertility in rats, either directly or indirectly. / A infecção por Trypanosoma evansi causa diversas patologias em animais, assim como problemas reprodutivos cuja patogenia não está totalmente elucidada. Em virtude disso, o objetivo deste estudo foi avaliar a concentração sérica de hormônios reprodutivos, marcadores de estresse oxidativo e histopatologia de testículos de ratos infectados experimentalmente por T. evansi. Foram usados 24 ratos Wistar, divididos em dois grupos com 12 animais cada. O grupo A foi formado por roedores sadios e o grupo B por animais infectados com T. evansi. Estes grupos foram divididos em subgrupos (n=6) para coleta de amostras nos dias 5 (A1 e B1) e 15 pós-infecção. No soro, foi observado uma redução significativa (P<0.01) nos níveis de LH, FSH, testosterona e estradiol associado ao aumento nos níveis de cortisol nos animais infectados quando comparado ao controle negativo. Também foi verificado um aumento nas concentrações de nitrito/nitrato, peroxidação lipídica e oxidação proteica nos testículos, sugestivo de lesão celular, e que foi confirmada na histopatologia com observação de degeneração testicular nos roedores infectados. Com base nestes resultados, podemos concluir que a infecção por T. evansi pode reduzir a capacidade reprodutiva do macho e/ou causar infertilidade em ratos, de forma direta ou indireta.

O gênero Phytomonas está associado a enfermidades devastadoras em plantações de interesse econômico, enquanto que outros vegetais parasitados não apresentam nenhum dano aparente. A seqüência-consenso de um agrupamento de ESTs de P. serpens determinado anteriormente apresentou alta similaridade com indolpiruvato descarboxilases (IPDCs) de fitobactérias e putativas piruvato/indolpiruvato descarboxilases de Leishmania spp. A enzima IPDC está na via de biossíntese do ácido 3-indolil acético, um dos hormônios vegetais mais importantes. Verificamos que o gene IPDC está presente em diversos isolados de Phytomonas, em múltiplas cópias (cerca de 104 cópias em P. serpens e 200 cópias em P. françai), contíguas e concentradas em uma banda cromossômica. Análises filogenéticas e amplificações por PCR com oligonucleotídeos degenerados apontam o clado Phytomonas-Leishmania como grupo-irmão de IPDCs de fitobactérias, sugerindo um processo de transferência horizontal anterior à separação dos tripanossomatídeos do clado que também inclui Leptomonas, Herpetomonas e Crithidia. / The genus Phytomonas is associated to devastating diseases in commercially important crops, whereas in other plant species no apparent damage is observed. The consensus sequence of one group of ESTs of P. serpens previously determined showed high similarity with indolepyruvate decarboxylases (IPDCs) from phytobacteria and putative pyruvate/indolepyruvate decarboxylases of Leishmania spp. The enzyme ipdC participates in the biosynthetic pathway of the indole-3-acetic acid, one of the most important plant hormones. We found that the IPDC gene is present in several Phytomonas isolates, in multiple copies (about 104 copies in P. serpens and 200 copies in P. françai, in tandem and concentrated in one chromosomal band. The phylogenetic analyses and data of PCR amplifications with degenerated primers point the clade Phytomonas-Leishmania as a sister group of IPDCs of phytobacteria, suggesting a process of horizontal gene transfer prior to the separation of the trypanosomatid clade that also includes Leptomonas, Phytomonas, Herpetomonas, Leishmania and Crithidia.