A avaliação dos níveis de estresse nos animais tem importância tanto na área médica, econômica e de bem-estar, assim estudos vem sendo cada vez mais difundidos neste quesito. Os gatos são animais de companhia que tem progressivamente conquistado espaço no mundo moderno, dessa forma vem sendo mais observados e estudados, demonstrando-se bem mais sociais do que anteriormente se acreditava. Zelar pela qualidade de vida dos mesmos é dever do veterinário, e não somente pela questão médica em si mas também pelo bem-estar, já que se sabe, por exemplo, que condições estressantes podem levar a alterações orgânicas deletérias. A mensuração do cortisol, ou de seus metabólitos, tem sido utilizada para avaliar de forma fisiológica o bem-estar dos animais, tanto domésticos quanto selvagens. As técnicas para tal mensuração também vem sendo aperfeiçoadas, buscando-se assim ensaios mais precisos, seguros e baratos. No presente trabalho pretendemos comparar quantitativamente e qualitativamente dois imunoensaios radioimétrico (radioimunoensaio) e enzimático (enzimaimunoensaio) - utilizando amostras fecais de gatos domiciliados que vivem sozinhos ou em pequenas colônias. Sua importância deve-se ao uso de uma nova técnica, mais barata e segura, porém ainda pouco difundida no nosso país. / Evaluation of stress levels among animals has both medical and welfare importance and studies regarding this matter have been increasingly published. Cats are companion animals achieving a special position within modern societies they have been carefully observed and studied thus demonstrating that they are much more social than previously thought. Taking care of cats´ life quality is a veterinarian duty not only because it constitutes a medical issue per se but also due to its welfare implications: it is well known, for instance, that stressful conditions can lead to deleterious organic diseases. Measurement of cortisol levels (or its metabolites) has been used as a physiological parameter for investigating the welfare of both domestic and wild animals. Laboratory techniques used for such measurements have been under improvement in order to achieve more precise, safe and cheap assays. In the present study we aim at comparing quantitatively two assays radioimmunoassay and enzyme immunoassay by using domestic cats faecal samples (single and in-group housed cats). The relevance of this study lays on the use of a pioneering technique, cheap and safe, besides the establishment of a scientific cooperation with a leading university´s laboratory one of the few existing which deals with faecal hormonal dosages.

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:37:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:03:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 05175.pdf: 2805276 bytes, checksum: 2afc72fc3d3ca38375a373de3e5aa8cb (MD5) / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:23:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T13:57:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 01276.pdf: 2214172 bytes, checksum: e105537b579f510e386e4b8e27eb1ef6 (MD5) / Dissertacao (Mestrado) / IEA/D / Instituto de Biociencias, Universidade de Sao Paulo - IB/USP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:37:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:03:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 05175.pdf: 2805276 bytes, checksum: 2afc72fc3d3ca38375a373de3e5aa8cb (MD5) / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Reduced availability of high energy-content prey (nutritional stress) is a predominant hypothesis to explain the decline of Steller sea lion (Eumetopias jubatus) populations in western Alaska from the late 1970' s to the late 1990' s. Animals may physiologically respond to consuming insufficient prey by increasing stress levels and decreasing metabolic rates. It may thus be possible to identify nutritional stress by measuring concentrations of glucocorticoids (stress) and thyroid hormones (metabolism) shed in feces. However, techniques to measure thyroid hormone concentrations from Steller sea lion feces have not been developed. We quantified variation of triiodothyronine (T3) and thyroxine (T4) concentrations in Steller sea lion feces following injections of thyrotropin (TSH) into four captive animals. Glucocorticoids (GC) were also assayed to examine any relationship to stimulated thyroid hormone secretion. We found that fecal T3 peaked 48 h post-injection and increased 25-57% in three sea lions (all animals, p=0.03). Pre-injection GC increases indicated stress from isolation for baseline fecal collections, but post-injection increases could not be confirmed as a response to TSH injections or as a product of the study design. The results demonstrated that pre- and post-injection changes in fecal GC and T3 concentrations were consistent with predictions of an increased stress response and metabolic rate within the animals. We then measured T3 and GC concentrations in 834 Steller sea lion fecal samples collected in 2005 and 2006 from 15 sites (haulouts and rookeries) between British Columbia and the Central Aleutian Islands. Overall, GC concentrations did not differ between haulout populations (western 2006 pre-pupping and eastern 2005 post-pupping). Fecal hard-part analyses revealed a lower energy-content diet in the western population, suggesting that diet quality is a relevant hypothesis to explain slightly higher GC concentrations found in the western population, specifically the Aleutian Islands region. However, nutritional stress could not be substantiated through T3 concentrations. The rookeries possessed the highest energy-content diets, but also exhibited a nutritional stress response with a significantly higher GC and lower T3 concentration than either haulout population (possibly related to lactation or decreased foraging opportunities), but T3 comparisons performed at scales of site and region were inconclusive. / Science, Faculty of / Zoology, Department of / Graduate

Neste estudo avaliou-se a função reprodutiva de fêmeas de peixe-boi da Amazônia (Trichechus inunguis) mantidas em cativeiro no Laboratório de Mamíferos Aquáticos do Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia (n=4) e no Centro de Preservação e Pesquisas de Mamíferos Aquáticos - Manaus Energia S.A. (n=2), por meio da extração e quantificação de progestinas e estrógenos fecais. As amostras fecais foram colhidas duas vezes por semana durante doze meses, foram liofilizadas e processadas de acordo com o protocolo adaptado de Schwarzenberger et al (1991). Realizou-se a validação dos radioimunoensaios em fase sólida, progesterona e 17β-estradiol para o uso em extratos fecais de peixe-boi da Amazônia. A duração média do ciclo ovariano (± EPM) definido por dois picos consecutivos de estrógenos fecais foi de 22,49 ± 1,26. A fase de estro teve duração média de 6,4 ± 0,45. Para verificar se as fêmeas mantidas em cativeiro apresentavam o padrão reprodutivo sazonal dos peixes-bois de vida livre sugerido por Best (1982), avaliou-se a influência das fases do ciclo hidrológico dos rios da bacia Amazônica. Não foi observada diferença estatística nas concentrações de progestinas fecais ao longo das fases do ciclo hidrológico, porém verificou-se que durante a fase de cheia apresentaram concentrações de estrógenos fecais superiores às outras fases, corroborando com os dados sugeridos por Best (1982). Com os resultados obtidos nesse estudo, pretende-se ampliar os conhecimentos sobre a fisiologia reprodutiva do peixe-boi da Amazônia, fornecendo mais uma ferramenta de estudo para auxiliar pesquisas e manejo reprodutivo, tendo como objetivo final a conservação da espécie. / This study has evaluated the reproductive function of six females of the Amazon manatee (Trichechus inunguis) kept in captivity at the Aquatic Mammals Laboratory - Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia (n=4) and Centro de Preservação e Pesquisa de Mamíferos Aquáticos-Manaus Energia S/A (n=2) through extraction and quantification of fecal estrogens and progestins. Fecal samples were obtained twice a week for 12 months. Validation of the solid phase radioimmunoassay for progesterone and 17β-estradiol was performed for using on Amazon manatees fecal extracts. Ovarian cycle mean duration (± SEM), defined by two consecutive peaks of fecal estrogens, was 22,49 ± 1,26 days. Mean estrous phase duration was 6,4 ± 0,45 days. To verify if the captive females showed the same seasonal reproductive pattern of wild manatees suggested by Best (1982), the influence of the hydrological cycle of the Amazon River Basin was analyzed. There was no statistical difference on the fecal progestins between phases, but during the flood phase it was verified that the estrogen fecal concentrations were increased, corroborating with Best (1982).These results show that the improvement of the non-invasive techniques for reproductive assessments increase the knowledge of reproductive physiology and is an important tool for scientific research, reproductive management, and species conservation.

Para o presente estudo, utilizaram-se amostras de excretas cloacais de 65 aves da família Psittacidae, previamente sexadas. Os andrógenos e estrógenos fecais foram extraídos com Tampão Fosfato Salino (PBS) e com uma solução PBS:Álcool Etílico (4:1) e a mensuração hormonal foi realizada em ?kits? comerciais para radioimunoensaio no Laboratório de Dosagens Hormonais (LDH) do Departamento de Reprodução Animal (VRA) da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ) da Universidade de São Paulo (USP). O sexo de cada ave foi confirmado utilizando como parâmetro o intervalo de confiança (95%) da média dos valores transformados do fator Razão dos índices de Estrógenos e Andrógenos ou com o intervalo de confiança (95%) da média dos valores transformados dos índices do fator Andrógeno. As extrações de DNA de algumas amostras foram realizadas por meio de ?kits? comerciais e por meio de resinas no Laboratório de Biologia Molecular do Departamento de Patologia (VPT) - FMVZ/USP. O DNA foi amplificado pela técnica da PCR utilizando-se oligonucleotídeos iniciadores específicos para a região que determina o sexo das aves. Também se avaliou o efeito da adição de células sanguíneas nas amostras. Setenta por cento das aves tiveram o sexo confirmado pela técnica do radioimunoensaio. A amplificação do produto na PCR somente ocorreu em amostras onde células sanguíneas foram adicionadas e o DNA extraído com um determinado ?kit? comercial. Os resultados encontrados demonstram a necessidade da realização de mais estudos para a determinação do sexo de aves monomórficas por meio de técnicas não invasivas. Validaram-se dois kits comerciais para a mensuração de metabólitos de hormônios esteróides em excretas cloacais de aves por radioimunoensaio. / For the current study, it were used fecal samples from 65 birds of Psittacine Family, previously sexed by PCR from blood cells. The fecal androgens and estrogens metabolites were extracted with PBS (Phosfate Buffer Saline) or PBS :Ethil Alchool (4:1) and measured by comercial radioimunoassay kits at the Hormonal Measurement Laboratory of the Department of Animal Reproduction of the Faculty of Veterinary Medicine and Zootechny of the University of São Paulo. The sex determination of the birds were performed using the confidence interval (95%) for the mean of transformed values of estrogens/androgen rate or transformed androgens values. The fecal DNA extraction of some samples were performed using comercial kits or by resines at the Molecular Biology Laboratory of the Pathology Department of the Faculty of Veterinary Medicine and Zootechny of the University of São Paulo. The DNA were amplified by PCR using specific primers for the target region of bird gene that express sex. Evaluation of the effect of blood cells adding on samples also had been done. 70% of birds had the sex confirmed by radioimunoassay. The amplification of PCR products occured only in samples added with blood cells and extracted by a specific comercial kit. The results showed that further studies for sex determination on monomorphic birds by non-invasive techniques are necessary. Two comercial kits were validated for the measurement of fecal steroid metabolites by radioimunoassay.

O objetivo deste estudo foi verificar a viabilidade da dosagem de andrógenos em amostras de saliva, secreção lacrimal, urina e fezes de peixe-boi da Amazônia realizando um desafio hormonal. Dois peixes-bois amazônicos adultos machos (A-1 e A-2) foram submetidos a um protocolo de experimentação de doze dias (D-1 a D10). No D0 os animais receberam uma injeção intramuscular de GnRH exógeno. Amostras de saliva, secreção lacrimal, urina e fezes foram coletadas diariamente (entre 08h00 e 09h00) e mantidas a -20°C até o ensaio. As amostras de fezes foram liofilizadas, extraídas com metanol 80% e diluídas em tampão antes do radioimunoensaio (RIE). As amostras de urina sofreram hidrólise ácida e foram diluídas em soro bovino depletado. As amostras de saliva e secreção lacrimal foram dosadas sem etapa de extração, porém, o ensaio foi adaptado para aumentar a sensibilidade do teste. Os ensaios hormonais foram realizados utilizando um conjunto comercial de RIE para testosterona total. Um pico de andrógenos (mediana+2DI) somente foi observado nas amostras de saliva, urina e fezes de ambos os animais. Porém, os picos de andrógenos fecais ocorreram depois (cinco dias) dos picos de andrógenos urinários e salivares. Este intervalo está correlacionado com o longo tempo de passagem da digesta pelo trato gastrointestinal na espécie. Os picos salivares e urinários ocorreram muito próximos, provavelmente com poucas horas de intervalo. Esses resultados demonstram que as concentrações de andrógenos em amostras de saliva, urina ou fezes refletem consistentemente os eventos fisiológicos e são ferramentas de grande utilidade no monitoramento reprodutivo de peixes-bois da Amazônia. / The aim of this study was to verify the viability of androgens measurement in saliva, lacrimal secretion, urine and fecal samples of Amazonian manatee by carrying out hormonal challenge. Two adult male manatees (A-1 and A-2) were submitted to an experimentation protocol of twelve days (D-1 to D10). On D0 the animals received an intramuscular injection of GnRH-analogue. Salivary, lacrimal, urinary and fecal samples were collected daily (between 08h00 and 09h00) and frozen at -20°C until assayed. Fecal samples were lyophilized, extracted with 80% methanol and diluted in buffer before the radioimmunoassay (RIA). Urine samples underwent acid hydrolysis and diluted in depleted bovine serum. Salivary and lacrimal samples were assayed without extraction step, but, the assay was adapted to improve the sensibility. Hormonal assays were carried out with a commercial testosterone RIA kit. An androgen peak (>median+2IQR) was observed only in salivary, urinary and fecal samples of both animals. However, the fecal androgens peaks occurred later than urinary and salivary androgens peaks. These intervals are correlated with the long digesta passage time in this species. The salivary and urinary peaks were very close, probably with few hours of interval. These results show that androgens concentrations in saliva, urine or feces samples reflect reliably physiological events and are powerful tool for reproductive monitoring of Amazonian manatees.

Cabras leiteiras das raças Saanen e Toggenburg (n=10) mantidas num rebanho particular no Estado de São Paulo tiveram seus níveis séricos de progesterona e estradiol comparados às concentrações fecais, durante o período correspondente a três ciclos estrais. O perfil hormonal foi confrontado com as manifestações comportamentais de estro visando uma contribuição ao conhecimento do ciclo das cabras destas raças em condições brasileiras, que leve a um manejo reprodutivo mais eficiente. As correlações entre níveis séricos e fecais foram calculadas, sugerindo a validade do modelo de dosagem hormonal nas fezes em cervídeos. Foi verificada correlação extremamente significante entre as concentrações séricas de progesterona e as de progestinas fecais, com r=0,83 e p<0,0001. Entre as concentrações séricas de estradiol e as de seus metabólitos nas fezes não foi verificada correlação significante, com r=-0,16 e p<0,3916. A partir da observação dos resultados e sua análise estatística, pode-se concluir que, dentro das condições deste trabalho, as concentrações de progestinas fecais apresentam variação correspondente à da progesterona sérica ao longo do ciclo estral das cabras; por outro lado, diferentemente das observações de outros autores, o mesmo não ocorre com os metabólitos fecais do estradiol em relação ao estradiol sérico. / Saanen e Toggenburg dairy goats (n=10) kept in a private flock in São Paulo State had their serum levels of progesterone and estradiol compared to faecal concentrations of the respective metabolites, through an interval corresponding to 3 estrous cycles. Hormonal profile was checked with behavioural manifestations of estrous searching for a better knowledge of the cycle of these breeds in brazilian environment, leading to a more efficient reproductive management. Correlations between serum and faecal levels were calculated, suggesting that the model of faecal hormone measurements could be valuable in cervidae. It was found an extremely significant correlation between progesterone serum concentration and progestin faecal concentration, with r=0,83 and p<0,0001. Between estradiol serum concentrations and its faecal metabolites? concentrations no significant correlation was found, with r=-0,16 and p<0,3916. Based on results observation and statistical analysis, we can assume that, in the circumstances of this trial, progestin faecal concentrations show a variation profile similar to that one of serum progesterone, through estrous cycle of goats; however, this fact could not be observed for estradiol metabolites, compared to serum estradiol concentrations.

O objetivo do presente estudo foi avaliar os perfis de metabólitos de glicocorticóides fecais através de radioimunoensaio em cachorros-vinagre (Speothos venaticus) mantidos em cativeiro e suas possíveis implicações na função reprodutiva. Duas fêmeas e quatro machos adultos, após período de condicionamento, foram marcados e tiveram suas fezes recolhidas durante 45 dias. Estes animais recebiam diariamente marcadores (corantes e miçangas) para a devida identificação das amostras fecais. O desafio com ACTH foi realizado em uma das fêmeas e mostrou o perfil reativo esperado, validando a técnica do ponto de vista fisiológico. As concentrações de metabólitos de glicocorticóides fecais para o grupo em geral variaram de 2,32 a 65,09 &mu;/g de fezes secas, com média e desvio-padrão de 18,11&plusmn;11,33 &mu;/g de fezes secas, respectivamente. Quatro animais apresentaram um pico cada um, porém aparentemente, sem relação com qualquer evento estressante em particular. Não se verificou diferença significativa nos perfis de glicocorticóides fecais entre machos e fêmeas, nem entre a fêmea dominante e os outros indivíduos. Tais resultados sugerem que os animais estão bem adaptados à condição do cativeiro e provavelmente isentos ou minimamente afetados pelo estresse. A dosagem dos glicocorticóides fecais é uma ferramenta útil no monitoramento não-invasivo para avaliar a condição de estresse do cachorrovinagre, demonstrando se aspectos de manejo e fatores ambientais interferem de modo importante ou não no bem-estar animal e no potencial reprodutivo, sendo de interesse para a manutenção e conservação da espécie. / The aim of this study was to evaluate the fecal glucocorticoid metabolite profiles by radioimmunoassay in captive bush dog (Speothos venaticus) and its possible role in the reproductive function. Six adult animals (two females and four males), after training, were marked and their fecal samples were collected during 45 days. Every day the animals received markers (dye and colored plastic beads) for the appropriate identification of each sample. One female was used to the ACTH challenge and showed the expected classical response, with a significant peak one day after stimulation, therefore confirming the physiological validation. The overall fecal glucocorticoid metabolite concentrations for the whole group, ranged from 2,32 to 65,09 &mu;/g of dried feces, with an average and standard deviation of 18,11&plusmn;11,33 &mu;/g of dried feces, respectively. Four animals revealed one individual peak during the observation period, however they could not be correlated with any stressful event. The fecal glucocorticoid metabolite concentrations did not show significant differences between males and females neither between the dominant female and the other animals in the study. The results suggest that the animals are well adapted to the captive conditions and likely without or minimally affected by stress. The fecal glucocorticoid metabolite dosage is a useful non-invasive tool to evaluate the bush dog stress situation and to monitor local management and environmental factors that could possibly influence the well being and reproductive success, considered both key factors for the specie maintenance and conservation.