Thesis (MTech (Horticulture)--Cape Peninsula University of Technology, 2017. / A study was conducted to investigate the effects of various media composition and wounding treating on the in vitro propagation of Argyroderma subalbum and A. testiculare explants derived from mature plants, antioxidants and plant growth regulators (PGR) concentrations. One experiment consisted of 3 medium types including Murashige and Skoog (MS) medium strength, vitamin supplement. Fifteen replicates were used for each treatment. The shoots were then sub-cultured to ten replicate regenerated medium consisting of varying levels and combination of indole-3-acetic acid (IAA) and 10 μM 6-Benzyladenine (BA) supplements. In another experiment consisted of varying levels of auxins with MS medium strength, activated charcoal (AC) and vitamin supplements ten replicates were used for each treatment. Results indicated the positive role of cytokinins types’ 6-Benzyladenine (BA), 2-isopentyladenine (2iP) and Kinetin in inducing callus formation from wounded explants. The highest rate of friable callus formation of wounded explants was observed in media containing vitamin supplementation with BA at 10 μM. Callus formation significantly increased with the addition of vitamins at 10 μM on BA, 2iP and kinetin. With regards to the effects of various media composition and wounding explants on in vitro growth and regeneration of A. subalbum and A. testiculare, significant results were achieved with BA, 2iP and kinetin concentrations on explants discoloration and callus formation. The antioxidant treatment, AC did not reduce explants discoloration, but the induction of the callus was developed furthermore, results showed that IAA with BA concentrations without addition of AC there was significantly difference on both species but A. subalbum dominated with browning intensity (Chapter 3). Only sub-culturing of the explants succeeded in preventing explants discoloration and subsequently increased the number of shoots. The interaction between Indole-3-acetic acid (IAA) concentrations combined with BA resulted in the most effective technique in reducing explants discoloration at the media contact point. This study provides an insight into the contributing factor and methods of overcoming the major problem of phenolic oxidation and promoting the in vitro growth and regeneration of A. subalbum and A. testiculare.

Axonal regeneration within the mammalian central nervous system following traumatic damage is limited and interventions to enable regrowth is a crucial goal in regenerative medicine. The nematode Caenorhabditis elegans is an excellent model to identify the intrinsic genetic programs that govern axonal regrowth. Here we demonstrate that alterations in O-linked N- beta-acetylglucosamine (O-GlcNAc) post-translational modifications of proteins can increase the regenerative potential of individual neurons. O-GlcNAc are single monosaccharide protein modifications that occur on serines/threonines in nucleocytoplasmic compartments. Changes in O-GlcNAc levels serve as a sensor of cellular nutrients and acts in part through the insulin-signaling pathway. Loss of O-GlcNAc via mutation of the O-GlcNAc Transferase (OGT), the enzyme that adds O-GlcNAc onto target proteins, enhances regeneration by 70%. Remarkably, hyper-O-GlcNAcyation via mutation of the O-GlcNAcase (OGA), the enzyme that removes O-GlcNAc from target proteins, also enhances regeneration by 40%. Our results shed light on this apparent contradiction by demonstrating that O-GlcNAc enzyme mutants differentially modulate the insulin-signaling pathway. OGT mutants act through AKT1 to modulate glycolysis. In contrast, OGA mutants act through the FOXO/DAF-16 transcription factor to improve the mitochondrial stress response. These findings reveal for the first time the importance of O-GlcNAc post-translational modifications in axon regeneration and provide evidence that regulation of metabolic programs can dictate the regenerative capacity of a neuron. / 2021-02-20T00:00:00Z

Dentre os fatores relacionados à capacidade superior de regeneração in vitro de Solanum peruvianum, está a presença do alelo dominante Rg1. O gene RG1, envolvido na formação de gemas caulinares a partir de raízes e outros explantes, foi mapeado no cromossomo 3 entre os genes BETA-CAROTENE HYDROXYLASE (CrtR-b) e PHYTOENE SYNTHASE (PSY1). Variações alélicas também são conhecidas para genes CrtR-b e PSY1. white flower (wf) é o alelo de CrtR-b que produz pétalas brancas e yellow flesh (r) é o alelo de PSY1 que produz frutos amarelos. Os alelos wf e Rg1 com r foram introgredidos na cultivar Micro-Tom (Solanum lycopersicum L). Através da transferência sequencial de explantes de SIM para MB e de RIM para SIM, verificou-se que MT-Rg1 reduz o tempo necessário para a indução de gemas em um dia (6 dias em SIM para MT), devido a redução no tempo necessário para a aquisição de competência em um dia (2 dias para MT). Foram obtidos 30 possiveis recombinantes advindos do cruzamento Rg1/rg1 Wf/wf x rg1/rg1 wf/wf, baseados nas características de pétala branca (efeito do alelo wf) e maior ramificação (efeito do alelo Rg1). Todos os possíveis recombinantes foram testados in vitro quanto à capacidade de formar gemas caulinares em SIM e raízes em RIM. Com isso, 7 linhagens recombinantes foram confirmadas e utilizadas para o mapeamento fino da região na qual o gene RG1 está localizado no cromossomo 3. Para o mapeamento foram testados marcadores do tipo CAPS e SCAR, sendo utilizado o DNA genômico extraído de S. pennellii, S. peruvianum, Micro- MsK, MT, MT-Rg1, MT-wf e das 7 linhagens recombinantes, constatando-se que alguns marcadores moleculares desenhados para S. pennellii podem ser utilizados para S. peruvianum. Estas análises também evidenciaram que o segmento de introgressão de MT-Rg1 está entre o marcador P5 e o gene CrtR-b, totalizando 136 genes, entre os quais GRAS 10 destacou-se como principal candidato para a função gênica de Rg1. Complementarmente, foi realizada a análise de RNA-Seq (plataforma SOLiD) para a identificação de genes diferencialmente expressos entre MT e MT-Rg1. Com isso, observou-se que existem mais genes regulados negativamente do que positivamente durante a aquisição de competência. Devido ao grande número de genes diferencialmente expressos, alguns parâmetros foram utilizados para classificar os genes que poderiam ser quantificados por qRT-PCR em um experimento de regeneração in vitro. Entre os 361 genes classificados, 5 foram selecionados para a quantificação de sua expressão. Destes 5 genes, GRAS 10 e Serine/threonine protein phosphatase 7 foram os que apresentaram-se mais positivamente expressos e aparentemente são os que estão mais intimamente ligados a fase de aquisição de competência. Como existem muitos genes GRAS, foi feita uma árvore filogenética para posicioná-lo e identificar genes homólogos a ele. Com base na análise filogenética foi possível identificar o gene GRAS 10 como homológo ao gene SCL8 já identificado em Arabidopsis. Porém, pouco se sabe a respeito de SCL8. Desse modo, ainda é necessário confirmar a identidade do gene RG1, o que possibilitará a compreensão do processo de aquisição de competência. / The dominat allele Rg1 is related to the greater in vitro regeneration capacity of Solanum peruvianum L. The Rg1 gene is required for shoot formation from roots and others explants and was mapped on chromosome 3 between BETA-CAROTENE HYDROXYLASE (CrtR-b) and PHYTOENE SYNTHASE (PSY1) genes. Allelic variants are also known for the genes CrtR-b and PSY1. white flower (wf) is the allele of CrtR-b that produces white petals and yellow flesh (r) is the allele of PSY1 that produces yellow fruits. The alleles wf and Rg1 with r were introgressed into the Micro-Tom cultivar (Solanum lycopersicum L). Through the sequential transfer of explants from SIM to BM and RIM to SIM, we found that MT-Rg1 reduces the time required for the induction of shoots in one day (6 days on SIM for MT), due the reduction of the time required for competence acquisition in one day (2 days to MT). It was obtained 30 putative recombinants from crossing Rg1/rg1 Wf/wf x rg1/rg1 wf/wf. The recombinant lines were scored based on the presence of white petals (wf allele\'s effect) and increased shoot branching (Rg1 allele\'s effect). All putative recombinant lines were tested in vitro for their capability to form shoots in SIM and roots in RIM. Thus, 7 recombinant lines were selected and used to fine mapping the region where RG1 gene is located. CAPS and SCAR markers designed to S. pennellii were tested to fine-mapping, using as template genomic DNA samples from S. pennellii, S. peruvianum, Micro-MsK, MT, MT-Rg1, MT-wf and the 7 recombinant lines. These results confirmed that the molecular markers designed for S. pennellii can be successfully used for S. peruvianum. These analyzes also suggest that the introgressed segment of MT-Rg1 is located between the P5 marker and the CrtR-b gene. Within this region, there are 136 genes, including the GRAS 10 gene whichis the main candidate to RG1 gene function. In addition, we performed RNA-Seq analysis (SOLiD platform) to identify genes differentially expressed in MT and MT-Rg1. It was observed more down-regulated than up-regulated genes in the competence acquisition stage. Due to the large number of differentially expressed genes, some parameters were used for selection of genes that would have their expression validated by qRT-PCR in an in vitro regeneration test. Five genes among 361 genes differentialy expressed were selected to test their expression. Of these 5 genes, GRAS 10 and Serine / threonine protein phosphatase 7 were the most up-regulate genes and showed to be closely related to the stage of competence acquisition. Since there are many GRAS genes, we performed a phylogenetic analysis to identify homologous genes. Based on the phylogenetic analysis, GRAS 10 was identified as homologous to SCL8, a gene already identified in Arabidopsis. However, little is known about SCL8. Thus, it is still necessary to confirm the RG1 gene identity. This approach will provide a better understanding of competence acquisition process.

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do laser de baixa intensidade (LBI), na regeneração de defeitos de tamanho críticos preenchidos com osso autógeno ou Bio-Oss® associados à membrana colágena. O estudo foi conduzido em 120 defeitos críticos (5 mm) em calvárias de ratos machos (Rattus norvegicus, albinus, Wistar), pesando entre 250 a 300g, divididos em 12 grupos experimentais (n=10): 1) Grupo C (Controle coágulo sanguíneo); 2) Grupo M (membrana colágena- BioGide®); 3) L (laser de baixa intensidade, GaAlAs, 808 nm, 100 mW, 6J, 210 J/cm2); 4) Grupo OA (osso autógeno); 5) Grupo OA/L (osso autógeno + LBI) 6) Grupo OA/M (osso autógeno + membrana colágena); 7) Grupo L/M (LBI + membrana colágena); 8) Grupo OA/L/M (osso autógeno + LBI + membrana colágena); 9) Grupo BO (Bio-Oss®); 10) Grupo BO/M ( Bio-Oss® + membrana colágena) 11) Grupo BO/L (Bio-Oss®+ LBI); 12) Grupo BO/L/M (Bio-Oss® + LBI + membrana colágena). Aos 30 dias pós-operatórios os animais foram sacrificados e após o processamento tecidual, foram realizadas análises histológica, histométrica e estatística. Os dados foram submetidos ao teste paramétrico ANOVA, seguido pelo teste de Tukey (p<0,05). As variáveis analisadas foram: área de osso neoformado (AON) e área de partículas residuais (APR). Todos os grupos apresentaram maiores quantidades de AON quando comparados ao grupo C (9,96% ± 4,49%). Quando o LBI foi associado aos biomateriais apresentou diferença estatística signicativa somente no grupo BO/L (48,57% ± 28,22%, p < 0,05). Menor APR foi encontrada nos grupos irradiados pelo LBI, com diferença estatística significativa para o grupo BO/L (16,74% ± 15,25%, p < 0,05). O LBI possui efeito positivo na regeneração óssea de DTC, e embora na análise estatística tenha apresentado diferença significante somente quando aplicado sobre o Bio-Oss®, na análise histomorfométrica foi possível observar formação óssea em extensões variadas nos demais grupos. / The purpose of the study was to evaluate the effect of low-level laser therapy (LLLT) on guided bone regeneration of critical size defects filled with autogenous bone or Bio- Oss® associated with the collagen membrane. The study was conducted in 120 critical size defects (5mm) in male rats (Rattus norvegicus, albinus, Wistar),weighing between 250 and 300g, divided into 12 experimental groups (n = 10): 1) Group C (control only blood clot); 2) Group M (collagen membrane- BioGide®); 3) Group LLLT (low-level laser therapy, GaAlAs, 808 nm, 100 mW, 6J, 210 J/cm2); 4) Group AB (autogenous bone); 5) Group AB/LLLT (autogenous bone + LLLT); 6) Group AB/M (autogenous bone + collagen membrane); 7); Group LLLT/M (LLLT + collagen membrane) 8) Group AB/LLLT/M (autogenous bone + LLLT + collagen membrane); 9) Group BO (Bio-Oss®); 10) Group BO/M (Bio-Oss® + collagen membrane) 11) Group BO/LLLT (Bio-Oss® + LLLT), 12) Group BO/LLLT/M Bio- Oss® + LLLT + collagen membrane). The animals were killed 30 days postoperatively. After tissue processing, bone regeneration was evaluated by histomorphometric and statistical analysis was performed (Tukey test, p<0,05). The variables analyzed were the area of newly formed bone (NFB) and residual particle area (RPA). All groups presented greater amounts of AON when compared to group C (9,96% ± 4,49%). When LBI was associated with biomaterials, it showed a significant statistical difference only in the BO/L group (48,57% ± 28,22%, p<0,05). Smaller APR was found in the groups irradiated by LBI, with a significant statistical difference for BO/L group (16,74% ± 15,25%, p<0,05). LBI has a positive effect on bone regeneration of DTC, and although in the statistical analysis it presented significant difference only when applied on Bio-Oss®, in the histomorphometric analysis it was possible to observe bone formation in varied extensions in the other groups.

Tem sido proposto que a Fibrina Rica em Plaquetas e Leucócitos (L-PRF) pode estimular a neoformação óssea e melhorar a incorporação de enxertos ósseos. Este estudo avaliou a cicatrização de defeitos de tamanho crítico (DTCs) criados em calvária de ratas com osteoporose induzida por ovariectomia e tratados com L-PRF associada ou não a enxerto ósseo bovino (XENO). 32 ratas foram divididas em 4 grupos (n=8): C, PRF, XENO e PRF-XENO. Todos os animais foram submetidos a um procedimento de ovariectomia bilateral no início do estudo. Após 3 meses, DTCs de 5 mm de diâmetro foram criados na calvária dos animais. No grupo C, o defeito foi preenchido apenas com coágulo sanguíneo. Nos grupos PRF e XENO, os defeitos foram preenchido com 0,02 mL de L-PRF e 0,02 mL de XENO, respectivamente. No grupo PRF-XENO o defeito foi preenchido com uma mistura de 0,02 mL de PRF e 0,02 mL de XENO. Todos os animais foram submetidos à eutanásia aos 30 dias pós-operatórios. Foram realizadas análises histomorfométrica, microtomográfica e imunohistoquímica. Os dados obtidos foram estatisticamente analisados (ANOVA, Tukey, p < 0,05). O Grupo PRF-XENO apresentou maior quantidade de osso neoformado (ON) quando comparado ao Grupo XENO, bem como maiores expressões de Fator de Crescimento Endotelial Vascular (VEGF), Osteocalcina (OCN) e Proteína Morfogenética Óssea (BMP)-2/4 (p < 0,05). O Grupo PRF apresentou maior quantidade de ON e maiores expressões de VEGF, OCN, BMP-2/4 e Fator de transcrição relacionado a Runt 2 (RUNX-2) quando comparado ao Grupo C (p < 0,05). Conclui-se que a L-PRF pode favorecer a neoformação óssea de DTCs e potencializar a cicatrização de XENO em ratas com osteoporose induzida por ovariectomia. / It has been proposed that Platelet Rich Fibrin and Leukocyte (L-PRF) can stimulate bone neoformation and improve bone graft incorporation. This study evaluated the healing of critical caliber defects (CSDs) created in the calvaria of rats with osteoporosis induced by ovariectomy and treated with L-PRF associated or not with bovine bone graft (XENO). 32 rats were divided into 4 groups (n = 8): C, PRF, XENO and PRF-XENO. All animals underwent a bilateral ovariectomy procedure at the start of the study. After 3 months, CDSs of 5 mm diameter were created in calvaria of the animals. In group C, the defect was filled only with blood clot. In the PRF and XENO groups, the defects were filled with 0.02 mL of L-PRF and 0.02 mL of XENO, respectively. In the PRF-XENO group the defect was filled with a mixture of 0.02 mL of PRF and 0.02 mL of XENO. All animals were submitted to euthanasia at 30 postoperative days. Histomorphometric, microtomographic and immunohistochemical analyzes were performed. The data were statistically analyzed (ANOVA, Tukey, p < 0.05). The PRF-XENO group presented higher amount of neoformed bone (NB) when compared to the XENO group, as well as higher expression of Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF), Osteocalcin (OCN) and Bone Morphogenetic Protein (BMP -2/4 (p < 0.05). The PRF group presented higher amounts of NB and higher expression of VEGF, OCN, BMP-2/4 and Runt-related transcription factor 2 (RUNX-2) when compared to the group C (p <0.05). It can be concluded that L-PRF can improve bone neoformation in CSDs and potentiates the healing of XENO in rats with osteoporosis induced by ovariectomy.

O objetivo deste estudo foi estabelecer cultura primária de células derivadas da granulação óssea (GO) de seres humanos para determinar seu padrão de crescimento in vitro e determinar os efeitos biológicos de três membranas reabsorvíveis feitas de colágeno (BioGide®, GenDerm®, CollaTape®) em culturas de fibroblastos gengivais humanos (FGH) e células da granulação óssea (GO). Foram coletadas amostras de tecido ósseo presente no alvéolo de cicatrização de dois pacientes adultos saudáveis sistemicamente com indicação de cirurgia periodontal regenerativa pela técnica do enxerto ósseo em neoformação. Imediatamente após a coleta, as amostras foram transportadas ao laboratório de cultura de células para estabelecimento da cultura primária. As células foram cultivadas em atmosfera úmida, contendo 5% CO2 a 37oC. A curva de crescimento das células foi determinada por meio de contagem de células viáveis. Após a caracterização da curva de crescimento, foram realizadas a caracterização da amostra por meio de determinação da atividade de fosfatase alcalina e de mineralização. Posteriormente, os efeitos de três diferentes tipos de membranas colágenas sobre a proliferação de células GO e FGH foram investigados por meio do teste MTT. As amostras foram divididas em oito grupos: (1) células FGH em meio DMEM (C-FGH); (2) células FGH em meio DMEM condicionado com membrana GenDerm (GD-FGH); (3) células FGH em meio DMEM condicionado com membrana BioGide (BG-FGH); (4) células FGH em meio DMEM condicionado com membrana ColaTape (CT-FGH); (5) células GO em meio DMEM (C-GO); (6) células GO em meio DMEM condicionado com membrana GenDerm (GD-GO); (7) células GO em meio DMEM condicionado com membrana BioGide (BG-GO); (8) células GO em meio DMEM condicionado com membrana CollaTape (CT-GO). O teste de proliferação celular mostrou que houve aumento significativo (p< 0.05; ANOVA para medidas repetidas) do número de células vitais presentes na cultura nos dias 3 (90,8%), 5 (132,50%), 7 (137,50%) e 10 (227,50%) em relação ao controle (dia 0). Foram observadas atividade de fosfatase alcalina e de mineralização in vitro. Houve aumento do número de células FGH e GO viáveis em todos os grupos (p< 0.05; ANOVA para medidas repetidas). Houve maior efeito proliferativo nas células FGH e GO nos grupos GD e CT, com diferenças estatisticamente significantes entre os grupos (p< 0.05; Mann Whitney) apenas no período de 96 horas. Esses achados sugerem que as células GO apresentam alta atividade de proliferação e síntese, sendo compatíveis com células de linhagem osteoblástica. Duas membranas colágenas testadas exerceram maior ação proliferativa tardia sobre osteoblastos, indicando sua eficácia na regeneração dos tecidos periodontais. / The aim of this study was to establish primary culture of cells derived from human bone granulation tissue (GO) in order to determine its growth pattern in vitro and the biological effects of three absorbable collagen membranes (BioGide®, GenDerm®, CollaTape®) in human gingival fibroblasts (FGH) and human bone granulation (GO) cell cultures. Samples of bone tissue present at healing sockets of two systemically healthy adults with indication of periodontal regenerative therapy by the newly forming bone were collected. Immediately after, samples were transported to the laboratory of cell culture to the establishment of primary cultures. Cells were cultivated in humid atmosphere with 95% CO2 at 37oC. Cells growth pattern were determined by counting of viable cells. After characterization of growth pattern, samples were characterized according to alkaline phosphatase activity and mineralization detected by alizarin red. Afterwards, the effects of three different types of collagen membranes on GO and FGH cells were investigated by MTT test. Samples were divided into eight groups: (1) FGH cells in DMEM (C-FGH); (2) FGH in DMEM conditioned by GenDerm® membrane (GD-FGH); (3) FGH in DMEM conditioned with BioGide® (BG-FGH); (4) FGH in DMEM conditioned by CollaTape® (CT-FGH); (5) GO cells in DMEM (C-GO); (6) GO cells in DMEM conditioned by GenDerm® (GD-GO); (7) GO cells in DMEM conditioned by BioGide® (BG-GO); (8) GO cells in DMEM conditioned by CollaTape® (CT-GO). Cell proliferation test showed a significant (p< 0.05; ANOVA for repeated measures) increase in the number of vital cells present in the culture at days 3 (90.8%), 5 (132.50%), 7 (137.50%) and 10 (227.50%) compared to control (dia 0). It was observed alkaline phosphatase activity and mineralization in vitro. There was an increase in the number of FGH and GO viable cells at all groups (p< 0.05; ANOVA for repeated measures). Greater proliferative effect at FGH and GO cells at GD and CT groups, with significant differences between groups (p< 0.05; Mann Whitney) only at 96 hs. Two of the collagen membranes tested exerted greater late proliferative effects on osteoblasts, suggesting its efficacy in the regeneration of periodontal tissues.

A capacidade extraordinária de crescimento do tecido hepático pode ser estimulada por dois processos, a hepatectomia parcial ou pelo fornecimento de substâncias hepatotróficas. Neste trabalho, foi adotada a segunda opção para tratar fígados de rata com fibrose, verificando-se o efeito dos fatores hepatotróficos sobre o quadro histopatológico, a proporção volumétrica do colágeno e a condição funcional do fígado de ratas Wistar com fibrose induzida por dimetilnitrosamina. Após 5 semanas de tratamento. Os animais foram submetidos à biópsia hepática e divididos em 2 grupos: o Grupo C recebeu 40 ml/kg de solução fisiológica por via intraperitoneal a cada 12h, durante 10 dias consecutivos e o Grupo F recebeu fatores hepatotróficos na mesma dosagem e freqüência que as do Grupo C. O sangue foi colhido momentos antes do sacrifício e em seguida amostras dos fígados foram levadas à rotina de fixação e inclusão para microscopia de luz. O exame histopatológico mostrou a presença de lesões características de fibrose hepática, tais como: nódulos regenerativos, proliferação de ductos biliares, infiltrado inflamatório com presença de células ovais e megalocitose de hepatócitos, sendo que os animais do Grupo F apresentaram redução do quadro acima descrito. O peso dos animais do grupo F aumentou 13%, o peso do fígado aumentou 12,2% e o peso do fígado em relação ao peso da carcaça aumentou 16%. A densidade volumétrica do colágeno no lóbulo hepático reduziu-se em 43% no grupo F, enquanto que no Grupo C houve aumento de 6%. O colágeno perivascular na veia centrolobular aumentou 42,7% no grupo C e reduziu-se 43,4% no grupo F. No espaço porta o colágeno perivascular aumentou 6,7% no grupo C e reduziu 67,3% no grupo F. A concentração sérica de albumina no Grupo C foi de 3,8g/l e no Grupo F de 4,7g/l. A proteína total foi 6,1g/l no Grupo C e no Grupo F de 7g/l. A aspartato aminotransferase AST foi 148,3 U/l no Grupo C e 94,9 U/lno Grupo F, a alanina aminotransferase ALT foi 86,9 U/l no Grupo C e 44,1 U/l no Grupo F. Concluiu-se assim, que os fatores hepatotróficos injetados intraperitonealmente, reduziram o quadro histopatológico e a densidade volumétrica do colágeno, promovendo melhor resposta da função hepática no Grupo F quando comparado com o Grupo C. / The extraordinary capacity of growth of hepatic tissue can be stimulated by two processes, by the partial hepatectomy or by hepatotrophic substance supply. In this work, it was adopted the second option to treat rats with induced-fibrosis, verifying the effect of the hepatotrophic factors on the histopathological evaluation, the ratio volumetric of the collagen and the functional condition of the liver of Wistar rats with induced-fibrosis by dimetilnitrosamine. After 5 weeks of treatment, the animals had been submitted to hepatic biopsies and divided in 2 groups: Group C received 40 ml/kg of physiological solution by intraperitoneal application each 12h, during 10 consecutive days and Group F received hepatotrophic factors in same dosage and frequency of Group C. Blood collection was proceeded moments before the sacrifice and samples of the liver had been submitted to the light microscopy routine of fixation and inclusion. The histopathologic evaluation showed the presence of characteristic injuries of hepatic fibrosis, such as: regenerative nodules, biliar ducts proliferation, inflammatory infiltrated with presence of oval cells and hepatocyte megalocytes, and the animals of Group F presented reduction of the above description. The weight of the animals of group F increased 13%, the weight of the liver increased 12.2% and the weight of the liver in relation to the weight of the carcass increased 16%. The volumetric collagen density in hepatic lobe decreased 43% in group F, while in Group C it icreased 6%. The central lobular vein perivascular collagen increased in 42.7% in group C and decreased 43.4% in group F. In the portal space, the perivascular collagen increased 6.7% in group C and reduced 67.3% in group F. The serum concentration of albumen in Group C was 3,8g/l and in Group F 4,7g/l. The total protein was 6,1g/l in Group C and in Group F 7g/l. The aspartate aminotransferase AST was 148,3 U/l in 94,9 Group C and U/l in Group F, alanine aminotransferase ALT was 86,9 U/l in 44.1 Group C and U/l in Group F. We concluded the intraperitoneal hepatotrophic factors injection had reduced the histopathological signs and the collagen volumetric density, promoted better recovery of the hepatic function in Group F when compared to Group C.

O estudo de biomateriais aplicados à cicatrização levou à modalidade do tratamento chamada de regeneração tecidual guiada (RTG). A RTG reconstitui novos tecidos usando membranas como barreira de proteção da área defeituosa, impedindo a invasão de outros tecidos, especialmente dos tecidos conjuntivos fibrosos. Em outras palavras, a RTG é uma forma de isolar o tecido ósseo do tecido mole, resultando dessa forma em uma ótima condição para a formação óssea. Atualmente, mais de 20 tipos diferentes de polímeros são usados em aplicações biomédicas, e entre eles está o colágeno, polímero ao qual, pela sua hidrólise parcial pode-se obter a gelatina. A gelatina é um polipeptídeo biodegradável, biocompatível, que apresenta anti-genicidade, plasticidade e elasticidade. A prata tem seu efeito antimicrobiano bem conhecido, com utilidade em diferentes campos da medicina, odontologia e biomateriais. Nesse contexto, este trabalho desenvolve e estuda o comportamento das membranas de gelatina e membranas de gelatina com prata para aplicações em RTG. As Membranas de gelatina foram obtidas com concentração de 4% em massa e as membranas de gelatina com prata foram obtidas nas concentrações de 0,01%, 0,05% e 0,1% da solução. Na etapa de reticulação, as membranas secas foram imersas em solução tampão de fosfato de sódio com concentrações de glutaraldeído (GTA) a 0,5%, 1% e 2%, 24 horas. O ensaio de intumescimento foi realizado em membranas reticuladas e não reticuladas, pesadas e imersas em solução tampão de fosfato pH 7,4 por períodos de 5 minutos, 15 minutos, 30 minutos, 1 hora, 3 horas, 22 horas e 24 horas e durante 8 semanas. Obteve-se membranas de gelatina com prata mediante a metodologia de adição da solução de Ag compravada pelas técnicas de DRX, FTIR, MEV e pelo teste de halo de inibição. As membranas reticuladas apresentaram menor valor de porcentagem de intumescimento quanto maior foi a concentração do agente reticulante, com exceção das amostras com concentração de 0,1M de prata. Além da atuação do GTA a prata também interfere no processo de intumescimento, aspecto e comportamento das membranas de gelatina. O efeito bactericida foi avaliado utilizando ensaio de cultura de bactérias - Teste de halo de inibição, onde as membranas de gelatina com Ag apresentaram efeito bacteriostático contra bactéria Gram positiva e Gram negativa. / The study of biomaterials applied to healing led to the treatment modality called guided tissue regeneration (GTR). The RTG reconstruct new tissue using the membranes as a barrier to protect the defective area, preventing the invasion of other tissues, especially connective tissue fibers. In other words, the RTG is a way of isolating the bone tissue of the soft tissue, thereby resulting in an excellent condition for bone formation. Currently, more than 20 different types of polymers are used in biomedical applications, and among them is the collagen polymer to which, by its partial hydrolysis can get the gelatin. Gelatin is a polypeptide biodegradable, which has antigenicity, plasticity and elasticity. Silver has antimicrobial effect well known, are useful in different fields of medicine, dentistry and biomaterials. In this context, this paper develops and studies the behavior of membranes of gelatin and gelatin silver membranes for applications in RTG. Membranes were obtained with gelatin concentration of 4% by weight and gelatin silver membranes were obtained at concentrations of 0.01%, 0.05% and 0.1% of the solution. In the crosslinking step, the dried membranes were immersed in sodium phosphate buffer to concentrations of glutaraldehyde (GTA) at 0.5%, 1% and 2% 24 hours. The swelling test was performed on crosslinked and uncrosslinked membranes, weighed and immersed in phosphate buffer pH 7.4 for a period of 5 minutes, 15 minutes, 30 minutes, 1 hour, 3 hours 22 hours and 24 hours, and for 8 weeks. Obtained gelatin membranes with silver by the method of adding the solution of Ag proven by XRD techniques, FTIR, SEM and the zone of inhibition test. The crosslinked membranes had lower percentage of swelling the higher the concentration of crosslinking agent, except for the samples with a concentration of 0.1 M silver. In addition to operating the GTA silver also interferes with the process of swelling, appearance and behavior of gelatin membranes. The bactericidal effect was evaluated by bacterial culture test - Test of inhibition zone, where the gelatin membrane with Ag Ag exhibited bacteriostatic effect exhibited against Gram positive and Gram negative.

Huang, Li. / Thesis (Ph.D.)--Chinese University of Hong Kong, 2013. / Includes bibliographical references (leaves 162-194). / Electronic reproduction. Hong Kong : Chinese University of Hong Kong, [2012] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Abstract also in Chinese.

Resumo: Objetivos: O objetivo deste estudo foi avaliar a influência da ovariectomia (depleção de estrógeno), no processo de reparo de enxertos ósseos autógenos em bloco por meio da imunomarcação da PECAM-1 e osteocalcina (OCN), em ratas jovens e senis. Material e Métodos: Foram utilizadas 96 ratas (Wistar) fêmeas, sendo 48 ratas com idade de 3 meses, divididas em subgrupo Ovx, submetidas a cirurgia de ovariectomia e subgrupo Sham submetidas ao mesmo procedimento cirúrgico sem a remoção dos ovários; e 48 ratas com idade de 12 meses, também divididas em subgrupos Ovx e Sham. Transcorridos 30 dias da Ovx ou "sham", todos os animais receberam enxerto ósseo autógeno em bloco na mandíbula, tendo como área doadora o osso parietal da calvária. Os animais foram submetidos a eutanásia em 7, 14 e 28 dias. As peças foram submetidas à análises histométrica e imunoistoquímica. Esta foi realizada de forma semi-quantitativa, visando analisar as imunomarcações contra PECAM-1 e osteocalcina, avaliando-se a interferência do estrógeno neste processo. Resultados: Durante os períodos analisados, os subgrupos Sham apresentaram marcações da osteocalcina mais intensas quando comparadas com os subgrupos Ovx, independente da idade do animal. As marcações de PECAM-1 foram mais intensas nos subgrupos Sham aos 7 e 14 dias. Conclusão: Dentro dos limites deste estudo, concluímos que a depleção de estrógeno afeta negativamente o processo inicial da angiogênese e diminui a mineralização óssea. / Abstract: Objectives: The aim of this study was to evaluate the influence of the ovariectomy (estrogen depletion), on healing process of autogenous bone block grafts in young and aged rats, through the immunocolocalization of the PECAM-1 and osteocalcin (OC). Material and Methods: 96 female rats (Wistar) were used, being 48 rats with 3 months-old, divided in subgroups: Ovx, submitted the ovariectomy surgery and Sham, submitted to the same surgical procedure without the removal of the ovaries; and 48 female rats with 12 months-old, also divided in Ovx and Sham subgroups. After 30 days of Ovx or "sham" operation, all the animals received autogenous bone block graft in the jaw, harvested from the calvaria. The animals were euthanized in 7, 14 and 28 days postoperatively. The specimens were submitted to histometric and immunohistochemistry analysis. This was accomplished in a semi-quantitative way, to analyze the immunolocalizations against PECAM-1 and osteocalcin, evaluating the interference of the estrogen in this process. Results: During the analyzed periods, the Sham subgroups presented more intenses demarcations of osteocalcin when compared with the subgroups Ovx, regardless of age. The demarcations of PECAM-1 were more intenses in the "sham" subgroups to the 7 and 14 days. Conclusion: Within the limits of this study, the estrogen depletion affects the initial process of angiogenesis negatively and it reduces bone mineralization. / Orientador: Álvaro Francisco Bosco / Coorientador: Roberta Okamoto / Banca: Valdir Gouveia Garcia / Banca: Teresa Lúcia Colussi Lamano / Mestre