O uso da tecnologia de DNA recombinante abre portas para um estudo detalhado da estrutura e função de proteínas, e a produção de proteínas recombinantes em sistema procarioto apresenta várias vantagens. A presente tese propõe a expressão heteróloga das proteínas aSFP, proteína ácida do fluido seminal bovino de 14 kDa, e osteopontina (OPN) de 55 kDa, relacionadas à congelabilidade do sêmen. Foram construídas bibliotecas de cDNA de vesícula seminal, próstata e glândula bulbouretral. Oligonucleotideos iniciadores foram sintetizados baseados nas seqüências disponíveis no GenBank (aSFP: número de acesso NM_174616, OPN: número de acesso M66236). Os amplicons resultantes das reações de PCR foram clonados em pET23a(+). Os plasmidios pET-aSFP e pET-OPN foram transformados em linhagens eletrocompetentes de E. coli BL21, BL21 (DE3), BL21 Star, BL21 Codon Plus e BL21 pLysS. Para expressão das proteínas recombinantes foram testadas diferentes concentrações de indutor de expressão IPTG, e diferentes tempos e temperaturas de indução. A expressão recombinante foi avaliada por SDS-PAGE, usando como controle cultivo não induzido. Das cinco linhagens transformadas com pET-aSFP, somente E. coli BL21 pLysS induzida com 0,5 mM de IPTG por 3 horas a 37°C apresentou uma banda de aproximadamente 15 kDa, compatível com o tamanho esperado de aSFPr-6xHis. Por cromatografia de afinidade com metal imobilizado em condições desnaturantes foi possível um rendimento de purificação de 2,5mg/mL de aSFPr-6xHis por 10 mL de cultura bacteriana. Contudo, a expressão de OPNr-6xHis, também obtida com a linhagem de E. coli BL21 pLysS, foi de baixa eficiência, o que não permitiu sua purificação. A produção recombinante de proteínas do plasma seminal é uma das mais novas ferramentas para o estudo de suas funções. O aperfeiçoamento dos processos de expressão e purificação é fundamental no desenvolvimento desta biotecnologia, que possui grande potencial terapêutico e diagnóstico. / The use of recombinant DNA technology makes possible a deeper investigation on protein structure and function. Also the production of recombinant proteins has several advantages. The present thesis presents the recombinant expression of the 14 kDa acidic seminal fluid protein (aSFP) and osteopontin (55 kDa), both associated with bovine semen freezability. cDNA libraries from prostate, seminal vesicle and bulbouretral gland were constructed, and primers were designed based on data available on Genebank (aSFP: access number NM_174616; OPN: access number M66236). Amplicons of the target genes were cloned into pET23a(+), and the constructs pET-aSFP and pET-OPN were transformed into electrocompetent E. coli strains: BL21, BL21 (DE3), BL21 Star, BL21 Codon Plus e BL21 pLysS. For the expression trials, different concentrations of IPTG were tested, as well several different expression induction conditions. The recombinant expression was analyzed by SDS-PAGE and western blotting. The best expression for aSFPr-6xHis (15 kDa) was obtained with the strain BL21 pLysS, induced with 0.5 mM IPTG in 3 hours at 37°C. The target protein was purified by immobilized metal ion chromatography in denaturing conditions with a yield of 2.5 mg/mL per 10 mL of bacterial culture. The recombinant expression of OPNr-6xHis was also possible with the pLysS strain, however in a lower efficiency. The low amount of recombinant OPN did not allow its purification. The production of seminal plasma recombinant proteins is a new tool for the study of its functions. The improvement of expression and purification processes is important for this biotechnology which has a great potential for therapeutic and diagnose applications.

O experimento avaliou os efeitos de tratamentos alimentares (CN: campo nativo; CNS: campo nativo + suplementação; CNM: campo nativo melhorado) e grupos de peso (leves; médias; pesadas) no desempenho reprodutivo de novilhas aos 24/27 meses de idade. Houve diferença significativa (P<0,05) no ganho de peso, durante o período de inverno (0,261, 0,376 e 0,679 kg/dia) e no peso vivo ao início do período reprodutivo (302,8, 317,8 e 330,7 kg) para CN, CNS e CNM, respectivamente. Entre os tratamentos a taxa de prenhez (PR) não diferiu (88,3, 93,3 e 95,0%, respectivamente; P>0,05), entretanto, o CNM apresentou o menor intervalo início da reprodução-concepção (IRC) (30,5 dias; P<0,05), em relação ao CN e CNS (36,4 e 39,4 dias, respectivamente). Os GDM dos grupos de peso foram bastante semelhantes (0,600, 0,612 e 0,634 kg/dia), mantendo-se a diferença (P<0,05) de peso vivo entre os grupos ao início do período reprodutivo (299,6, 316,0 e 335,6 kg, para leves, médias e pesadas, respectivamente). As novilhas “pesadas” tiveram a maior PR (100%) e o menor IRC (29,86 dias; P<0,05). O grupo “leves” obteve PR de 91,6% e o maior IRC (39,83 dias), e o grupo “médias” 85,0% de PR e IRC de 36,8 dias (P>0,05). Durante o período pré e pós-parto foi avaliado a influência do nível nutricional (CNTP: campo nativo no período pré e pós-parto; CN/P: campo nativo no pré-parto e pastagem melhorada no pós-parto; P/CN: pastagem melhorada no pré-parto e campo nativo no pós-parto; PTP: pastagem melhorada no pré e pós-parto) no desempenho das vacas primíparas. Constatou-se menor peso vivo e condição corporal ao parto dos tratamentos CNTP e CN/P (384,3 kg e 3,31; 391,4 kg e 3,26), em relação ao P/CN e PTP (424,4 kg e 3,60; 421,2 kg e 3,59), respectivamente (P<0,05). Vacas primíparas do PTP obtiveram maior peso vivo e condição corporal ao início do acasalamento (442,1 kg e 3,76), taxa de prenhez (82,3%) e velocidade de concepção. O CN/P e o P/CN não diferiram (P>0,05) no peso vivo ao início do acasalamento (417,2 e 409,8 kg) e na taxa de prenhez (65,8% e 62,8%, respectivamente), entretanto, o CN/P apresentou o menor IRC. O menor peso ao início do acasalamento (391,2 kg), a menor taxa de prenhez (52,7%) e o maior IRC foi verificado no CNTP. O peso ao nascimento e o GDM dos terneiros (média 0,623 kg/dia), não foi influenciado pelos tratamentos (P>0,05). / The experiment evaluated the effects of feeding treatments (CN: native pasture; CNS: native pasture + supplementary feeding; CNM: improved pasture) and of liveweight groups (lights; mediums; heavies) on reproduction performance of heifers on service at 24/27 months of age. There was significant difference (P<0.05) on daily liveweight gain (GDM) at winter time (0.261, 0.376 e 0.679 kg/day) and on the liveweight at beginning of reproduction period (302.8, 317.8 e 330.7 kg) for CN, CNS and CNM, respectively. The pregnancy rate (PR) was not significant (88.3, 93.3 and 95.0%, respectively; P>0.05). However, CNM showed a lower interval between the beginning of the reproduction-conception (IRC) (30.5 days; P<0.05), than CN and CNS (36.4 and 39.4 days, respectively). The GDM of the groups were very similar (0.600, 0.612 and 0.634 kg/day), keeping the difference (P<0.05) of liveweight between groups at beginning of reproduction (299.6, 316.0 and 335.6 kg, for lights, mediums and heavies, respectively). “Heavies” heifers had higher pregnancy rate (100%) and a lower IRC (29.86 days; P<0.05). The “light” group had 91.6% of PR and higher IRC (39.83 days), and the “medium” group 85.0% of PR and IRC of 36.8 days (P>0.05). During the pre and post-calving period was evaluated the influence of the nutritional level (CNTP: natural pasture at pre and post-calving; CN/P: natural pasture at pre-calving and improved pasture at postcalving; P/CN: improved pasture at pre-calving and natural pasture at postcalving; PTP: improved pasture at pre and post-calving) on the performance of primiparous cows. It was observed lower liveweight and body condition at calving of the treatments CNTP and CN/P (384.3 kg and 3.31; 391.4 kg and 3.26) in relation to P/CN and PTP (424.4 kg and 3.60; 421.2 kg and 3.59), respectively (P<0.05). Primiparous cows of PTP gained more liveweight and body condition at start of reproduction (442.1 kg and 3.76), PR (82.3%) and velocity conception. The CN/P and P/CN did not shown differences (P>0.05) at liveweight beginning of reproduction period (417.2 and 409.8 kg) and at PR (65.8% and 62.8%, respectively), however, the CN/P showed a lower IRC. The lowest weight at beginning of reproduction (391.2 kg), the lowest pregnancy rate (52.7%) and the higher IRC was obtained at CNTP. The birth weight of the calves and their GDM (mean 0.623 kg/day) was not affected by the treatments (P>0.05).

Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-09-12T14:27:40Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) SHIMELLY SOARES ROCHA.pdf: 1606021 bytes, checksum: 1199690ba81b285d39d490f2c9664a2c (MD5) / Approved for entry into archive by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-09-12T14:28:02Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) SHIMELLY SOARES ROCHA.pdf: 1606021 bytes, checksum: 1199690ba81b285d39d490f2c9664a2c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-12T14:28:02Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) SHIMELLY SOARES ROCHA.pdf: 1606021 bytes, checksum: 1199690ba81b285d39d490f2c9664a2c (MD5) Previous issue date: 2015-04-27 / O Jundiá (Rhamdia quelen) é um peixe que se destaca na região sul do Brasil, podendo ser encontrado desde o centro da Argentina até o sul do México, se destaca por possuir fácil adaptação e bons índices reprodutivos, sua maturidade sexual é atingida no primeiro ano de vida apresentando dois picos reprodutivos por ano, um no verão e outro na primavera. Estudos referente ao comportamento de gametas e sua interação com o meio ambiente ainda são incipientes, os gametas são lançados no ambiente onde ocorre a fertilização e neste momento os mesmos estão expostos a diversos contaminantes presentes na água, tais como metais pesados, como o Cloreto de Mercúrio (HgCl2) que tem capacidade de causar danos em qualquer tecido no qual entre em contato. Diante disto, o estudo teve por objetivo avaliar as patologias causadas por danos morfológicos ocasionados pela ativação de espermatozoides com soluções de diferentes concentrações de HgCl2. Para a realização do estudo, foi feita a coleta do sêmen, onde foram utilizados 7 animais machos de idade reprodutiva (489,42 ± 137g e 36,78 ± 3,13cm). O sêmen foi coletado por compressão abdominal, ativado em solução de NaCl 50mM livre de HgCl2 para o grupo controle, e soluções de NaCl 50mM com 0,0001; 0,0002; 0,002 e 0,02 mg/L de HgCl2. Foram avaliados motilidade, vigor e tempo de motilidade como parâmetros subjetivos, integridade e fluidez de membrana, funcionalidade mitocondrial, espécies reativas de oxigênio e fragmentação do DNA como parâmetros de toxicidade celular e patologia espermática como parâmetro de morfologia celular. Os resultados encontrados indicam que em relação aos parâmetros de motilidade, vigor e tempo de motilidade, houve diferença quando comparado ao grupo controle até mesmo na mais baixa concentração avaliada (0,0001mg/L). Entretanto, danos celulares, foram observados apenas, a partir da dose 0,0002mg/L, sendo eles integridade da membrana e fluidez da mesma. No parâmetro morfológico, houve diferença entre o índice de células anormais entre o grupo controle e todas as concentrações avaliadas nos grupos tratados. Estes resultados indicam que o Cloreto de Mercúrio pode ocasionar danos em espermatozoides de Rhamdia quelen, em todas as concentrações testadas. / The Jundiá (Rhamdia quelen) is a fish that stands out in the south of Brazil, can be found from the center of Argentina to the south of Mexico, stands out due to easy adaptation and good reproductive performance, sexual maturity is reached in the first year of life presenting two reproductive peaks a year, one in summer and one in the spring. Studies related to gamete behavior and its interaction with the environment are still incipient, the gametes are released into the environment where fertilization occurs and this time they are exposed to various contaminants in the water, such as heavy metals, such as chloride mercury (HgCl2) which is capable of causing damage to any tissue in which contact. In view of this, the study aimed to evaluate the pathologies caused by morphological damage caused by the activation of sperm with solutions of different concentrations of HgCl2. For the study, semen collection was made, which were used 7 male animals of reproductive age (489.42 ± 137g and 36.78 ± 3,13cm). Semen was collected by abdominal compression, activated in NaCl HgCl2 free 50 mM solution to the control group, and 50 mM NaCl solutions with 0.0001; 0.0002; 0.002 and 0.02 mg / L of HgCl2. Were evaluated motility, vigor and motility time as subjective parameters, integrity and membrane fluidity, mitochondrial functionality, reactive oxygen species and DNA fragmentation and cell toxicity parameters and sperm morphology and cell morphology parameter. The results indicate that in relation to motility parameters, vigor and motility time, there were differences when compared to the control group even in the lowest concentration evaluated (0,0001mg / L). However, cell damage were observed only from the dose 0,0002mg / L, where they membrane integrity and fluidity thereof. In the morphological parameter, there was difference between the abnormal cell ratio between the control group and all concentrations evaluated in the treated groups. These results indicate that mercuric chloride can cause damage to sperm R. quelen at all concentrations tested.

Orientador: José Maurício Barbanti Duarte / Banca: Eveline dos Santos Zanetti / Banca: Maria Emília Franco Oliveira / Resumo: O cervo-do-pantanal (Blastocerus dichotomus) é uma espécie emblemática dentro dos cervídeos neotropicais. Nas últimas décadas, suas populações têm sofrido declínio notório devido, principalmente, à destruição do seu habitat. Isto causa a perda da diversidade genética, que junto à depressão endogâmica (pelo isolamento de pequenas populações) pode levar à espécie a extinções locais. Nesse contexto, as técnicas de reprodução assistida podem auxiliar no processo de manutenção da diversidade genética nestas populações isoladas. Desta forma, o objetivo deste estudo foi elaborar um protocolo de superovulação para cervo-do-pantanal em cativeiro. Assim, foram testados protocolos sucessivamente (A, B, C) até que fossem obtidos resultados satisfatórios. Para que se pudesse chegar a um protocolo viável, foram testadas três combinações farmacológicas. Tratamento A: CIDR® durante sete dias, seguido de 0,5 mg de BE e 0,11 mg de GnRH no dia 0, 800UI de eCG no dia 5 após inserção do CIDR®, 530 µg de PGF2α no dia 7 e 0,11 mg de GnRH logo após a detecção do estro, para a indução da ovulação. Tratamento B: CIDR® durante oito dias, seguido de 0,5 mg de BE e 0,11 mg de GnRH no dia 0, 1200UI de eCG no dia 5 após inserção do CIDR®, 530 µg de PGF2α no dia 8 e 0,11 mg de GnRH logo após a detecção do estro, para a indução da ovulação. Tratamento C: CIDR® durante oito dias, seguido de 0,5 mg de BE e 0,11 mg de GnRH no dia 0, 1200UI de eCG no dia 5 após inserção do CIDR®, 530 µg de PGF2α no dia 8 e 2,5 m... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The marsh deer (Blastocerus dichotomus) is an emblematic species within the neotropical deer. In the last decades, their populations have suffered a notable decline due, mainly, to the destruction of their habitat. This causes loss of genetic diversity, which together with inbreeding depression (by the isolation of many small populations) can lead this species to local extinctions. In this context, assisted reproduction techniques can help in the process of maintaining genetic diversity in these isolated populations. Thus, the aim of this study was to elaborate a superovulation protocol for captive marsh deer. Therefore, protocols were successively tested (A, B, C) until satisfactory results were obtained. To be able to achieve a viable protocol, three pharmacological combination were tested. Treatment A: CIDR® for 7 days, followed by 0.5 mg of EB and 0.11 mg of GnRH on D0, 800IU of eCG on day 5 after CIDR® insertion, 530 µg PGF2α on day 7, and 0.11 mg of GnRH soon after estrus detection, for ovulation induction. Treatment B: CIDR® for 8 days, followed by 0.5 mg of EB and 0.11 mg of GnRH on D0, 1200IU of eCG on day 5 after CIDR® insertion, 530 µg PGF2α on day 8, and 0.11 mg of GnRH soon after estrus detection, for ovulation induction. Treatment C: CIDR® for 8 days, followed by 0.5 mg of EB and 0.11 mg of GnRH on D0, 1200IU of eCG on day 5 after CIDR® insertion, 530 µg PGF2α on day 8, and 0.25 mg of LH, between 12-18 hours post estrus detection, for ovulation induction. Estrus detection was performed with the aid of a male, and copulation was allowed. Eight days after copulation, CL and anovulatory follicles were counted through median ventral laparotomy, as well as the collection of embryos. Treatment A resulted in 2 CL. Treatment B resul... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientadora: Maria Izabel Camargo-Mathias / Coorientador: Odair Correa Bueno / Banca: Gilberto Orivaldo Chierice / Banca: André Arnosti / Banca: Solange Aparecida Rossini de Oliveira / Banca: Gustavo Seron Sanches / Resumo: Os carrapatos do gênero Amblyomma possuem importância médica e veterinária devido ao seu parasitismo em vertebrados de interesse econômico, silvestres e inclusive em humanos. A sistemática deste grupo foi, por muito tempo, bastante controversa quanto à taxonomia e às relações filogenéticas dentro do gênero e deste com outros grupos de carrapatos. O estudo da morfologia do sistema reprodutor masculino de carrapatos, tem se mostrado valioso, principalmente quando da obtenção de informações sobre a biologia reprodutiva do animal, dos caracteres relevantes para a taxonomia e da filogenia do grupo, além da elucidação de como este sistema pode ser alvo de estudos toxicológicos e de controle de pragas urbanas e rurais. O presente trabalho então buscou: a) comparar a morfologia geral do sistema reprodutor masculino das espécies A. aureolatum, A. cajennense sl (sensu lato), A. sculptum e A. triste intra- e intergênero; b) comparar a histologia e o desenvolvimento deste sistema e das suas células germinativas nestas mesmas espécies; c) demonstrar a eficácia dos ésteres do ácido ricinoléico do óleo de mamona (Ricinus communis) sobre o morfosiologia do sistema reprodutor masculino de A. cajennense sl; e d) realizar análises cladísticas e filogenéticas utilizando dados morfohistológicos e moleculares aqui obtidos. Casais das espécies aqui estudadas foram infestados em coelhos, os machos foram coletados com mais de 12 dias de alimentação e tiveram seus sistemas reprodutores retirados para fixação e aplicação das técnicas histológicas, histoquímica, e de microscopia eletrônica de varredura. Além disso, foram realizadas extrações de DNA para amplificação e comparação dos genes 16S rDNA, ITS2 e COI para as análises filogenéticas. O sistema reprodutor masculino de carrapatos apresentou ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The Amblyomma ticks have medical and veterinary importance due to its parasitism on vertebrate of economic interest, wildlife animals and even humans. The systematics of this group was for a long time quite controversial as a taxonomic level and phylogenetic relationships within the genus and this with other ticks groups. The study of the morphology of ticks' male reproductive system has proven to be valuable, especially when obtaining information about the reproductive biology of the animal, relevant characters to taxonomy and phylogeny relationships of the group, in addition to the elucidation of how this system can be target of toxicological studies and control of urban and rural pests. This work then aimed to: a) compare the overall morphology of the male reproductive system of the species A. aureolatum, A. cajennense sl (sensu lato) and A. sculptum intra- and inter-genus; b) compare the histology and development of this system and their germ cells in these same species; c) demonstrate the effectiveness of esters of ricinoleic acid from castor oil (Ricinus communis) on morphophysiology of the male reproductive system of A cajennense sl; and d) performing cladistics and phylogenetic analyzes using morphohistological and molecular information contained herein. Couples of ticks species studied here were infested in rabbits as hosts, males were collected over 12 days of feeding and had their reproductive systems removed for fixation and the application of histological techniques, histochemistry and scanning electron microscopy. In addition, DNA extractions were carried out for amplification and comparison of genes 16S rDNA, ITS2 and COI for the phylogenetic analyzes. The male reproductive system of ticks showed similar morfohistology when comparing the species of the genus Amblyomma, with a pair of tubular testes ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Sérgio Luiz Felisbino / Coorientador: Wellerson Rodrigo Scarano / Banca: Raquel Fantin Domeniconi / Banca: Luis Antonio Justulin Júnior / Banca: Renata Carolina Piffer / Banca: Glaura Scatamburio Alves Fernandes / Resumo: Estudos têm sugerido que o excesso de glicocorticoides (GCs) durante períodos críticos do desenvolvimento pode alterar a função reprodutiva. Apesar da função essencial da próstata no sucesso reprodutivo e de sua alta susceptibilidade ao desenvolvimento de lesões com o avançar da idade, o impacto tardio de corticoterapias precoces sobre a homeostase da glândula ainda é desconhecido. No presente estudo, investigamos os efeitos da corticoterapia prenatal (PRE), durante a instalação da puberdade (PU), e sua associação (PRE+PU=REE), sobre a morfofisiologia da próstata senescente. Ratas Wistar prenhes receberam betametasona (0.1mg/kg/dia, i.m.), ou salina, nos dias gestacionais 12, 13, 18 e 19. Os descendentes machos receberam doses de betametasona (7mg/kg/dia, gavage), ou salina, do dia pós-natal 35 ao 50 (PND35-50). Na idade senil (PND300), todos os animais foram eutanasiados, amostras de sangue foram coletadas para dosagens hormonais, e a próstata ventral (VP) foi dissecada e processada para a análise morfológica, bem como para quantificação e localização de proteínas (AR, GR, PAR-4 e PCNA). Reduzidos níveis de testosterona e insulina foram observados no grupo PRE, enquanto apenas a insulina mostrou-se reduzida no grupo PU, e nenhuma redução adicional foi observada em REE. Uma tendência de aumento no índice apoptótico e incidência de ácinos com epitélio metaplásico foi detectada dentre os grupos. A quantificação de proteínas revelou menor expressão de AR no grupo PRE, maior expressão do marcador de proliferação celular (PCNA) no grupo REE, porém, diferença significativa alguma foi observada na expressão do marcador de morte celular por apoptose (PAR-4). A análise da reação imunoistoquímica para o GR indicou uma maior expressão do receptor em células epiteliais dos grupos que receberam betametasona. Com base nos resultados, sugerimos que a corticoterapia com betametasona durante o final da ... / Abstract: Studies have suggested that glucocorticoids (GCs) excess during critical developmental time windows can alter reproductive parameters. Despite of the key function of the prostate in the reproductive success, and its high susceptibility to develop lesions in an age-dependent manner, the impact of early GCs excess on the gland homeostasis is still unknown. In the present study, we have investigated the effects of prenatal (PRE), peripubertal (PU) corticotherapy, and its combination (PRE+PU=REE), on aging prostate's morphophysiology. Pregnant Wistar rats received betamethasone (0.1mg/kg/day, i.m.), or saline, on the gestational days 12, 13, 18 and 19. Male descendents received betamethasone (7mg/kg/day, gavage), or saline, from 35th to 50th postnatal day (PND35-50). Late in life (PND300), all animals were euthanized, blood samples were taken for hormones levels estimation, and the ventral prostate (VP) was excised and processed for morphology evaluation, and for proteins (AR, GR, PAR-4 and PCNA) quantification and localization as well. Lower testosterone and insulin levels were detected in group PRE, while only insulin serum levels was reduced in group PU, and no additional decrease was seen in REE. An increasing trend in the apoptosis index and metaplastic epithelium acini incidence was observed along the treated groups. The protein quantifications showed a decreased AR expression in PRE, higher proliferation marker (PCNA) expression in REE, and no significant difference in the expression of the apoptosis marker PAR-4 was detected among the groups. The immunolocalization of GR indicated a higher receptor expression in epithelial cells of treated groups, when compared to NE. Based on these results, we suggest that the corticotherapy with betamethasone during late pregnancy can program fetal prostate, resulting in altered androgen and glucocorticoids signaling permanently. Peripubertal corticotherapy deflagrated cell ... / Doutor

Orientador: Cláudia Maria Bertan Membrive / Banca: Guilherme Pugliesi / Banca: Flávia Lombardi Lopes / Resumo: Mortalidade embrionária em bovinos, entre 15 e 19 dias de prenhez, pode ser promovida pela liberação de PGF2 endometrial. A síntese de PGF2 é inibida pela suplementação com compostos ricos em ácido linoléico, como a semente de girassol. Assim, objetivou-se avaliar o efeito e os mecanismos pelos quais a suplementação com semente de girassol atua na performance reprodutiva de fêmeas bovinas de corte. Hipotetizou-se que tal suplementação promove um incremento na taxa de concepção de receptoras de embriões produzidos in vitro submetidas à TETF e que tal efeito decorra de modificações na composição lipídica plasmática e endometrial, alterações na expressão de transcritos envolvidos na biossíntese de eicosanoides e/ou modificações no número e/ou morfometria das glândulas endometriais. No Experimento 1, novilhas mestiças zebuínas submetidas ao protocolo de TETF suplementadas com semente de girassol, por 22 dias a partir da remoção do dispositivo de progesterona, apresentaram maior taxa de concepção em relação ao grupo controle (55,66% vs. 36,94%; P < 0,01). No Experimento 2, vacas Nelore suplementadas com semente de girassol apresentaram maiores concentrações plasmáticas de colesterol total, LDL e HDL; modificações na composição lipídica endometrial e alterações na expressão de transcritos envolvidos na biossíntese de eicosanoides. Conclui-se que a suplementação com semente de girassol aumenta a taxa de concepção por modificar a composição lipídica plasmática e endometrial, a expressão de transcritos envolvidos na biossíntese de eicosanoides e número... ((Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Embryonic mortality in cattle, between 15 and 19 days of pregnancy, can be promoted by the release of endometrial PGF2. Synthesis of PGF2 is inhibited by supplementation with compounds rich in linoleic acid such as sunflower seed. This study aimed to evaluate the effects and the mechanisms by which supplementation with sunflower seed acts on reproductive performance of beef cows. It was hypothesized that such supplementation promotes an increase on conception rate of in vitro-produced embryos subjected to FTET; and that this effect arises from changes in plasma lipid composition and endometrial changes in the expression of transcripts involved in the biosynthesis of eicosanoids and/or changes in the number and/or endometrial gland morphology. In Experiment 1, zebu crossbred heifers submitted to the FTET protocol supplemented with sunflower seed, for 22 days from the removal of the progesterone device, showed higher conception rate in the control group (55.66% vs. 36.94% ; P < 0.01). In Experiment 2, Nelore cows supplemented with sunflower seed showed higher plasma concentrations of total cholesterol, LDL and HDL, changes in endometrial lipid composition and changes in the expression of transcripts involved in the biosynthesis of eicosanoids. It was concluded that supplementation with sunflower seeds increases the conception rate by modifying the lipid composition of the plasma and the endometrium, the expression of transcripts involved in the biosynthesis of eicosanoids and number and morphometry of the endometrial glands / Mestre

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-05-02Bitstream added on 2014-08-13T18:01:15Z : No. of bitstreams: 1 000732142.pdf: 1071161 bytes, checksum: 2cb970afdbdc6d295fe573aeb86e30a8 (MD5) / Apesar dos benefícios proporcionados pelo plasma seminal durante a cobertura, quando biotecnologias são utilizadas, como a inseminação artificial, sua função é questionável, visto que trabalhos utilizando espermatozoides da cauda do epidídimo acrescido ou não do plasma seminal não apresentaram diferença nas taxas de concepção. Além disso, estudos relataram efeito deletério das secreções das glândulas anexas sobre a viabilidade espermática e taxa de concepção, principalmente em garanhões com baixa qualidade seminal. Neste sentido, o objetivo do presente estudo é: 1) comparar os parâmetros de cinética espermática, viabilidade estrutural e fertilidade dos espermatozoides recuperados do ejaculado e da cauda do epidídimo de garanhões subférteis; 2) avaliar diferenças na composição eletrolítica do plasma seminal de animais com alta e baixa fertilidade. 3) comparar o efeito da adição de plasma seminal de garanhões de alta e baixa fertilidade sobre a congelabilidade e viabilidade dos espermatozoides do ejaculado e da cauda do epidídimo de garanhões subférteis. As avaliações das amostras seminais consistiram na análise computadorizada das características da motilidade (CASA, Thorne Research - HTM IVOS) e nas análises de citometria de fluxo da integridade da membrana plasmática, da integridade acrossomal, da peroxidação das membranas espermáticas, da fragmentação do DNA, da capacitação espermática, da translocação de fosfatidilserina da membrana e da ativação de caspase. Os espermatozoides do epidídimo após descongelação apresentaram superioridade nos parâmetros de cinética e viabilidade espermática, além de melhor fertilidade, demonstrando que estes espermatozoides são mais resistentes ao processo de congelação quando comparado aos espermatozoides do ejaculado. O plasma seminal de garanhões subférteis apresentou maiores concentrações de sódio ... / Despite the benefits provided by seminal plasma during natural cover when biotechnology are used as artificial insemination, its function is questionable, since studies using spermatozoa from cauda epididymis with or without the addition of seminal plasma showed no difference in conception rates. Furthermore, studies have reported deleterious effects of secretions from accessory glands on sperm viability and conception rate, especially in stallions with poor semen quality. Thus the aims of this study were: 1) compare the kinetic parameters, structural viability and fertility of sperm recovered from ejaculate and cauda epididymis of subfertile stallions. 2) evaluate differences in electrolyte composition in the seminal plasma of animals with high and low fertility. 3) compare the effect of seminal plasma addition from stallions with high and low fertility on freezability and viability of sperm from the ejaculate and cauda epididymis of subfertile stallions. The assessment of each samples was determined by computer-assisted sperm analyses of motility (CASA, Thorne Research - HTM IVOS) and flow cytometry analyses of plasma membrane integrity, acrosome integrity, peroxidation of sperm membranes, DNA fragmentation index, degree of protein tyrosine phosphorylation in sperm surface and caspase activity. The epididymal sperm after thawing showed superiority in kinetic parameters and sperm viability, as well as better fertility, demonstrating that these spermatozoa are more resistant to freezing process when compared to sperm from the ejaculate. The seminal plasma of subfertile stallions has higher sodium concentrations in the seminal plasma than fertile stallions, what makes this finding a possible way to explain the deleterious effect of seminal plasma in these animals. Moreover, it was found that this deleterious effect is dose-dependent since the addition of 20% of seminal plasma from fertile and ...

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:42Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-06-07Bitstream added on 2014-08-13T18:00:56Z : No. of bitstreams: 1 000750528.pdf: 388655 bytes, checksum: 5e25e9cb8343db7711c8612a05c569a2 (MD5) / O Pseudoplatystoma fasciatum é uma espécie nobre que apresenta carne sem espinhos, sabor delicado e textura firme. Nesta espécie, as fêmeas atingem maior tamanho e apresentam melhores taxas de crescimento que os machos. Assim, o objetivo desde trabalho foi descrever o processo de desenvolvimento e diferenciação gonadal do P. fasciatum e avaliar a possibilidade da feminilização com uso do hormônio 17β-estradiol. Para a descrição da diferenciação e desenvolvimento gonadal, os juvenis de P. fasciatum foram obtidos por meio de reprodução induzida de reprodutores mantidos em diversas estações de reprodução e pisciculturas de reprodução induzida (Centro de Aquicultura da UNESP “CAUNESP”, piscicultura Andrade e piscicultura Mar & Terra); já para o tratamento hormonal, os juvenis foram obtidos e mantidos na piscicultura Mar & Terra. As coletas para a diferenciação e desenvolvimento gonadal foram realizadas em tempos pré-estabelecidos, iniciando a partir de 39 dias pós-fertilização (dpf) e até completarem 240 dpf. Para o tratamento hormonal os juvenis com 39dpf receberam ração incorporada com 17β-estradiol e alimentados diariamente até a saciedade. Foi utilizado um grupo controle e três grupos tratados (50, 100, 150mg/Kg de ração comercial extrusada com 40% de proteína bruta). As coletas iniciaram com 39 dpf e depois periodicamente nos seguintes tempos 45, 57, 70, 100 dpf. Aos 39 dpf observaram-se pares de gônadas indiferenciadas como estruturas simples, localizadas dorsalmente ao intestino e ventralmente ao rim. Entre 39 e 45 dpf observamos pela primeira vez evidências histológicas no início de diferenciação em gônada feminina e gônada masculina. Com 60 a 70 dpf as diferenças externas e internas das gônadas femininas e masculinas permitiam a identificação morfológica de precursores de ovários e testículos, porém, tanto a gônada feminina quanto a masculina ... / Pseudoplatystoma fasciatum is an important species, with unspined meat, delicate flavor and firm texture. Females of this species reach larger sizes and have better growth rates than males. The objective of this study was to describe the gonad development and differentiation of P. fasciatum and evaluate the potential feminization effect of the 17β - estradiol hormone. For development and gonadal differentiation description, P. fasciatum juveniles were obtained through the hormonal induction of various breeders maintained in different reproductive stations and fish farms of inducted reproduction (Centro de Aquicultura Unesp “CAUNESP”, Andrade and Mar&Terra piscicultures); for the hormonal treatment juveniles were obtained and maintained in Mar&Terra pisciculture. Samples for development and gonadal differentiation were performed on pre-set points starting from 39 days post-fertilization (dpf) until complete 240 dpf. For the hormonal treatment juveniles (39 dpf) were fed daily to satiation with artificial food incorporated with 17β-estradiol. We used a control group and three treated groups (50, 100, 150mg/kg of commercial extruded feed containing 40% crude protein). Sampling started at 39 (dpf) and periodically at the following times 45, 57, 70 and 100 dpf. At 39 dpf gonads were undifferentiated observed as simple structures, located ventrally to intestine and dorsally to kidney. From 39 to 45 dpf we observed the first histological clues of female and male gonad differentiation. At 60-70 dpf the external and internal differences of male and female gonads enabled the morphological identification of ovaries and testes precursors, however, both the male and the female gonad consisted mainly of somatic cells and rare germ cells of the undifferentiated type, referred as oogonia for female gonads and spermatogonia for male gonads. From 100 to 113 dpf, gonads from both sexes increased in size ...

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-22Bitstream added on 2014-08-13T18:00:33Z : No. of bitstreams: 1 000758249.pdf: 2033964 bytes, checksum: ea22bcd9b9ee26798f474c9e2b815cae (MD5) / O capítulo teve como objetivo descrever o comportamento reprodutivo de Pionites leucogaster leucogaster e Pionites melanocephalus melanocephalus em cativeiro. Para isso foram coletados dados a partir de observações dos comportamentos das aves dentro e fora dos ninhos, principalmente durante a estação reprodutiva. Para a obtenção de dados do interior da caixa ninho, foram instaladas câmeras de infravermelho no interior dos mesmos. Dentre os comportamentos associados à reprodução foram constatados, para ambas as espécies: a corte (exceto para Pionites m. melanocephalus), o cortejo alimentar, a cópula e o cuidado dos pais para com a prole, além de outros dados biológicos como a postura dos ovos, o período de incubação e a eclosão. Verificamos que as fêmeas das espécies estudadas realizam a postura de quatro ovos e são exclusivamente responsáveis pela incubação dos mesmos, neste período, são totalmente dependentes do macho com relação à alimentação. As marianinhas apresentam períodos longos de incubação e a eclosão dos ovos ocorre de forma assincrônica. Comportamentos como cortejo alimentar (registrado somente na fase de pré-postura), a transferência de alimento e o alisamento das penas (comportamentos muito observados durante toda a estação reprodutiva) são importantes interações que têm papel fundamental na manutenção da coesão entre o casal. Além de utilizarem o ninho na estação reprodutiva, as marianinhas utilizam as cavidades como dormitório durante todo o ano