Introdução: A atrite reumatoide (AR) é uma doença Inflamatória crônica de etiologia desconhecida que afeta principalmente as articulações. A evolução da doença está associada com a incapacidade funcional, aumentando o risco de doenças cardiovasculares (DCV) e disfunção endotelial e rigidez arterial. Objetivo: Avaliar os efeitos de uma única sessão de exercício aeróbico de alta intensidade na função endotelial mediada pelo fluxo (DMF), avaliar a dor no pré exercício e após uma semana de intervenção através da escala visual analógica (EVA) e rigidez arterial em pacientes 26 com AR. Métodos: Estudo quase experimento, com 22 pacientes portadores de AR leve a moderada. Foram realizados teste ergoespirométrico, ecografia braquial para determinar a dilatação mediada pelo fluxo (DMF) e a avaliação da rigidez arterial por determinação da velocidade de onda de pulso (VOP), pré, pós e uma hora após a aplicação de um protocolo de treinamento intervalado de alta intensidade (TIAI). Resultados: A média de idade dos participantes é de 59,2 + 7,6 anos e há predominância do sexo feminino (91%). Apresentaram DAS28 de 4,1+ 1,0 (atividade moderada), e HAQ de 1+ 0,6 pontos (deficiência moderada). O VO2 Máximo encontrado foi de 21,19 + 3,89 ml/Kg/min. Os valores de DMF nos três momentos foram: basal com hiperemia reativa (10,59+0,47) e com nitroglicerina spray sublingual (12,66+0,89), no pós imediato (10,69+ 0,39) e com nitroglicerina (12,93+0,58), e 1 hora após (10,93+0,29) e com o medicamento (13,20+0,46), em relação a escala analógica visual de dor (EVA) observamos no basal uma dor de (3,45+0,80) e pós uma semana de intervenção (2,50+0,51). Conclusão: Concluímos que o TIAI com portadores de AR não foi significativo em relação às porcentagens de DMF, mas quando observamos outras medidas como a VOP, Pressão Arterial, Pressão de Pulso e o Índice de Aumentação, e os pacientes não apresentaram dor após uma semana de intervenção, sendo assim o exercício parece ser eficiente, sugerindo que pode ser uma estratégia útil para a prevenção de DCV em pacientes com AR. / Introduction: Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic inflammatory disease of unknown etiology that mainly affects the joints. The evolution of the disease is associated with functional disability, increasing the risk of cardiovascular diseases (CVD) and endothelial dysfunction and arterial stiffness. Objective: To evaluate the effects of a single high-intensity aerobic exercise session on flow-mediated endothelial function (DMF), evaluate pain in pre-exercise and after one week of intervention using visual analogue scale (VAS) and arterial stiffness in patients with AR. Methods: Almost experimental study with 22 patients with mild to moderate RA. An ergospirometric test, brachial ultrasound was performed to determine the flow-mediated dilatation (FMD) and the evaluation of arterial 53 stiffness by determination of the pulse wave velocity (VOP), pre, post and one hour after the application of an interval training protocol high intensity (TIAI). Resultados: A média de idade dos participantes é de 59.2 + 7.6 anos e há predominância do sexo feminino (91%). Apresentaram DAS28 de 4.1+ 1.0 (atividade moderada), e HAQ de 1+ 0.6 pontos (deficiência moderada). O VO2 Máximo encontrado foi de 21.19 + 3.89 ml/Kg/min. Os valores de DMF nos três momentos foram: basal com hiperemia reativa (10.59+0.47) e com nitroglicerina spray sublingual (12.66+0.89), no pós imediato (10.69+ 0.39) e com nitroglicerina (12.93+0.58), e 1 hora após (10.93+0.29) e com o medicamento (13.20+0.46), em relação a escala analógica visual de dor (EVA) observamos no basal uma dor de (3.45+0.80) e pós uma semana de intervenção (2.50+0.51). Conclusion: We conclude that the TIAI with RA patients was not significant in relation to DMF percentages, but when we observed other measures such as OPV, Blood Pressure, Pulse Pressure and Increasing Index, and patients did not present pain after one week the exercise appears to be efficient, suggesting that it may be a useful strategy for the prevention of CVD in patients with RA.

Introduction: Recent findings and better understanding to the pathogenesis of rheumatic diseases contributed to the development of biological therapies targeting cytokines and immune cells. Several S100 proteins exert cytokine-like effects and participate in the regulation of the inflammatory process. The aim of this work was to study the role of selected S100 proteins in the activity and in the pathogenesis of the rheumatic diseases. Results: Our data show for the first time an association of S100A4 proteinwith RA disease activity and decrease of the bioactive form, but not the total amount of S100A4, after aplication of tumour necrosis factor (TNF) blocking biologic therapy in patients with RA. We demonstrated that in vitro S100A4 acts as a potent pro-inflammatory mediator inducing production of TNFα, interleukin (IL)-1β and IL-6 in PBMCs via Toll-like receptor 4 (TLR-4), transcription factor NFκB and tyrosine kinases erk1/2 and p38. Moreover, S100A4 can play an important role in the pathogenesis of inflammatory myopathies. S100A4 is present in the inflammatory infiltrate of the affected muscles and in the regenerating muscles and may act as a cytokine-like factor indirectly promoting muscle fiber damage by stimulating mononuclear cells to increase the synthesis of pro-inflammatory cytokines. We...

OBJETIVOS: Avaliar o perfil e o número absoluto e percentual de células NK verdadeiras (CD56+CD16+CD3-) e de células NK e NKT (CD56+) no sangue periférico de uma coorte de pacientes com artrite reumatóide (AR) antes e durante o tratamento com rituximabe (RTX). MÉTODOS: Foram analisados dez pacientes do grupo controle (doadores de sangue) e dez pacientes com AR que receberam duas infusões de RTX 1g separadas por intervalo de 14 dias. As análises imunofenotípicas para avaliação do perfil e quantificação de células NK foram realizadas pré e após a infusão ou até a recaída clínica. Pacientes respondedores e não respondedores foram classificados de acordo com os critérios do Colégio Americano de Reumatologia (ACR) em 6 meses. RESULTADOS: A quantidade de células NK verdadeiras não demonstrou variação significativa pré e após o tratamento com RTX. Contudo, houve aumento percentual de células CD56+ entre o primeiro e o segundo mês após a infusão com RTX. Além disso, os pacientes respondedores apresentaram uma tendência de aumento do número absoluto de células NK verdadeiras após dois meses de tratamento. Já em relação ao grupo controle, observou-se um aumento significativo do número de células NK basais nos pacientes com AR (p<0,05). CONCLUSÕES: Foi identificada uma tendência de aumento nos valores absolutos de células NK verdadeiras entre os pacientes respondedores no segundo mês após a infusão com RTX. Não foi identificada uma variação significativa no perfil e quantidade de células NK nos pacientes com AR pré e após o tratamento com RTX. Contudo, foi observado que os pacientes com AR possuem uma quantidade maior de células NK do que os controles, sugerindo um possível envolvimento destas células na AR. / OBJECTIVES: To assess the profile as well as the absolute number and percentage of true NK cells (CD56+CD16+CD3-), and NK and NKT cells (CD56+) in the peripheral blood of a cohort of patients with rheumatoid arthritis (RA) before and during rituximab (RTX) therapy. METHODS: Ten control patients (blood donors) and ten patients with RA were assessed. The latter group received two intravenous infusions of 1g RTX, separated by a 14 day interval. Immunophenotypic analyses of NK cells were conducted before and after infusion, or until clinical relapse. After six months, respondents and nonrespondents were reassessed according to American Rheumatology Criteria (ARC). RESULTS: The number of true NK cells did not significantly change after treatment with RTX. However, an increase in the percentage of CD56+ cells was observed between the first and second month after RTX infusion. Respondents also displayed a tendency toward an increased number of true NK cells after two months of treatment. At baseline, the number of NK cells was also found to be significantly higher in patients with RA than in control individuals (p<0.05). CONCLUSIONS: Respondents displayed a tendency toward an increase in the absolute number of true NK cells in the second month after RTX infusion. No significant changes in the profile and frequency of NK cells were found between preand post-RTX treatment assessments of patients with RA. However, it was found that patients with RA have a higher number of NK cells than control partcipants, suggesting a possible role of these cells in RA.

BAKGRUND: Evidens påvisar att reumatologisk rehabilitering i multidiciplinära team, innehållande sjukdomsinformation, läkemedelsbehandling och fysisk träning individuellt eller i grupp, har gynnsam effekt på sjukdomsförloppet. Tidigare studier har visat att self-efficacy har positiv betydelse för att uppnå aktivitetsmål. För att i högre grad uppnå aktivitetsmål är det viktigt att formulera realistiska och patientspecifika mål samt utvärdera dessa för att uppnå god behandlingseffekt. Ett formulär som undersöker måluppfyllelse och används kliniskt är Patientens Prioriteringslista (PGPL).   SYFTE: Undersöka måluppfyllelse av prioriterade aktiviteter avseende förmåga, nöjdhet, self-efficacy och rädsla för att utföra en aktivitet i samband med en träningsperiod. Även specifikt analysera hur self-efficacy påverkas, hos patienter med inflammatorisk ledsjukdom mätt med PGPL.   METOD: En kvantitativ studie med 20 deltagare, tio i intensivgrupp och tio i rehabiliteringsgrupp. Skattning av prioriterade aktiviteter, mätt med PGPL, jämfördes före och efter träningsperioden. Grad av måluppfyllelse jämfördes också mellan grupperna.    RESULTAT: Majoriteten av deltagarnas prioriterade aktiviteter tillhörde kategorin rekreation. För båda grupperna sågs signifikant skillnad (p= &lt;0,05) avseende förmåga samt nöjdhet över att utföra en aktivitet före respektive efter träningsperioden. En signifikant skillnad sågs också vad gäller self-efficacy i intensivgruppen. Self-efficacy var signifikant högre i intensivgruppen jämfört med rehabgruppen efter genomförd träningsperiod.   KONKLUSION: Resultatet tyder på att en träningsperiod påverkar måluppfyllelsen och hade inverkan på deltagarnas förmåga samt nöjdhet över att klara en aktivitet. Self-efficacy ökade hos deltagarna i intensivgruppen. / BAKGROUND: Evidence shows that rheumatological rehabilitation in multidisciplinary teams, including disease information, drug treatment and physical exercise, have effect on the course of illness. Studies shows that self-efficacy is important in goal achievement. It is considerable to formulate realistic, patient-specific goals and evaluate them to achieve good treatment effect. A form that examines goal achievement and used clinically is Patient Goal Priority List (PGPL). AIM: Analyze goal achievement regarding ability, satisfaction, self-efficacy and fear to perform an activity in relation to a training period. Also specifically analyze how self-efficacy affects in patients with inflammatory joint disease, measured with PGPL. METHOD: A quantitative study, with 20 participants, ten in intensive group and ten in rehab group. Estimation of priority activities measured with PGPL, compared before and after the rehab period. Level of goal achievement was compared between the groups. RESULTS: Prioritized activities were mainly in the category of recreation. For both groups, significant difference (p= &lt;0,05) were seen for ability and satisfaction in performing an activity before and after the training period. A significant difference was also seen regarding self-efficacy in the intensive group. Self-efficacy was significantly higher in the intensive group compared with the rehab group after completed training period. CONCLUSION: The result indicates that a period of training affects goal achievement and had effect on the participants’ ability and satisfaction to perform an activity. Self-efficacy increased in the intensive group.

INTRODUÇÃO: Artrite reumatoide é uma doença autoimune que causa inflamação nas membranas sinoviais de articulações chamadas diartroses. As articulações da orelha média podem estar sujeitas às mesmas lesões reumáticas que as outras articulações do corpo. Perdas auditivas neurossensoriais e condutivas foram observadas na literatura, assim como o envolvimento da artrite reumatoide na orelha média, mas os resultados não estão em concordância. A imitância acústica de banda larga pode fornecer maior sensibilidade a mudanças sutis nas articulações dos ossículos. OBJETIVO: avaliar o efeito da artrite reumatoide no sistema auditivo com enfoque na avaliação da orelha média. MÉTODOS: O delineamento desta pesquisa é estudo de casos comparando três diferentes grupos: dois grupos de indivíduos com artrite reumatoide e um grupo controle pareado por gênero e idade. Foram incluídos 39 participantes com idades entre 26 e 51 anos, de ambos os gêneros. O grupo estudo foi separado em dois: AR1, com 15 participantes (artrite reumatoide há dez anos ou mais); e AR2, com 9 participantes (artrite reumatoide há cinco anos ou menos). Estes grupos foram recrutados do ambulatório de reumatologia do Hospital das Clínicas da FMUSP e o grupo controle com 15 participantes, foi composto por voluntários, usuários do Centro de Docência e Pesquisa da FMUSP. Os procedimentos utilizados foram: Imitanciometria com sonda de 226 Hz, audiometria tonal liminar, audiometria de altas frequências e imitância acústica de banda larga, cujos dados foram extraídos como bandas de 1/3 de oitava para reflectância de energia em um documento de extensão Excel. Para análise dos dados, utilizaram-se estatística descritiva, análise de variância, teste quiquadrado e Kruskal-Wallis. RESULTADOS: As médias de idade para AR1, AR2 e controle foram de 41,1, 38,6 e 39,9 anos, respectivamente, e não houve diferença significante entre grupos. As medidas de imitanciometria 226 Hz (timpanometria e reflexos acústicos ipsilaterais) e reflectância de energia não demonstraram diferença significante entre os grupos. Foram encontradas diferenças na comparação entre os grupos AR1 e AR2 e grupo controle para os testes audiometria tonal liminar, e AR1 com o grupo controle para audiometria de altas frequências e reflexos acústicos contralaterais. Não foi observada diferença entre os resultados da orelha direita e da esquerda. CONCLUSÕES: Os grupos de artrite reumatoide apresentaram o mesmo padrão de resposta para as avaliações de orelha média do grupo controle, levantando a possibilidade de apresentarem um mesmo comportamento de sistema ou de que as ferramentas utilizadas para avaliação não são sensíveis para detectar as mudanças sutis. Foi possível observar mudança nos limiares audiométricos e de altas frequências dos grupos com artrite reumatoide em comparação com o grupo controle, mostrando a importância de monitorização auditiva nessa população / BACKGROUND: Rheumatoid arthritis (RA) is an autoimmune disease that causes inflammation of synovial membranes of the diarthrodial joints. Middle ear joints may be subject to the same rheumatic lesions as other joints in the body. Sensorineural and conductive hearing loss have been reported, as well as middle ear involvement, but the results are not in agreement. Wideband acoustic immittance (WAI) may provide better sensitivity to subtle changes in the ossicular joint. PURPOSE: To evaluate the effect of RA in the auditory system focusing on the middle ear assessment with WAI. METHODS: This was a cross-sectional study comparing audiological behavior of 3 different groups: two groups of individuals with rheumatoid arthritis and a normal control (NC) group matched 1:1 based on age and gender. Thirty-nine participants, raging age from 26-51 years old, male and female. The study groups were pooled into two groups: RA1 with 15 participants (patients who had had RA for more than ten years) and RA2 with nine participants (those who had had RA for less than five years). The study groups were recruited from rheumatology clinic of Hospital das Clinicas (FMUSP) and were compared with 15 normal control, which consisted in volunteer students or employees from Centro de Docencia e Pesquisa (FMUSP). Standard 226 Hz probe tone tympanometry, pure-tone audiometry, extended high-frequency audiometry and WAI were performed in all subjects. The results from WAI were extracted as 1/3 octave bands for energy reflectance as an Excel file. Descriptive statistics, chi-square test, mixed model ANOVA and Kruskal-Wallis test were used to investigate the differences in all performed tests across the three groups. RESULTS: Mean ages for RA1, RA2 and NC were 41.1, 38.6 and 39.9 years old respectively and the difference between groups was not statistically significant. Comparison of standard immittance measures (such as 226 Hz probe tone tympanometry and ipsilateral acoustic reflex) and 1/3 octave band energy reflectance did not reveal significant difference between groups. This study found difference in standard audiometry thresholds comparing RA1 and RA2 to NC group, extended high-frequency audiometry and contralateral acoustic reflex comparing RA1 group to NC group. There was no significant difference between right and left ears. CONCLUSIONS: RA groups showed the same middle ear response pattern than the NC group, there was either no significant difference between the middle ears of RA patients and healthy individuals, or WAI is not appropriate for differentiating these two groups. Pure-tone audiometry and extended high-frequency audiometry showed different behaviors between the three groups. The actual incidence of hearing loss in RA remains to be defined. The results showed the importance of monitoring potential audiological manifestations in patients with RA

Artrite reumatóide (AR) é uma doença crônica e multisistêmica, que afeta o indivíduo como um todo. De etiologia desconhecida, possui como característica uma inflamação sinovial, efeitos periarticulares, simétricas e cumulativas. Os principais sinais e sintomas apresentados na fase aguda são as dores nas articulações, edemas e rigidez matinal. E em 75% dos casos acometem membro superiores, com um grande impacto nas habilidades funcionais. Nas mãos, as deformidades podem atingir todas as articulações causando subluxações e deformidades em metacarpofalangenas (MF), interfalangeanas (IF) e punhos. Quando há a destruição dos ligamentos e cartilagens do punho as forças musculares e fatores anatômicos causam o colapso do punho em desvio radial e as articulações MF, como consequência a essas forças anatômicas, também entram em colapso e favorecem o desvio ulnar dessas articulações. Há diferentes recursos utilizados no tratamento desta patologia, sendo um deles o uso de órtese. Assim, este estudo tem por objetivo projetar e desenvolver uma órtese, articulada e original, com função de corrigir a deformidade em desvio ulnar dos dedos e favorecer a funcionalidade. Para tanto os procedimentos metodológicos foram divididos em: Reconhecimento de Necessidades; Especificação e Conceito. Após levantamento Bibliográfico, estudo antropométrico chegou-se ao esboço e ao conceito do projeto. Como resultado obteve-se o primeiro protótipo em material disponível e utilizando o programa CAD solid edge Insight foi proposto um protótipo digitalizado da órtese, definindo as propostas e requisitos necessários para o desenvolvimento da órtese. Como resultados obteve-se dois desenhos digitalizados do protótipo e quatro protótipos em materiais diferentes entre si, compostos por 9 peças (2 hastes laterais, 1 bloqueio ulnar, 3 pulseiras e 3 anéis), que montadas mostram uma órtese articulada. Observou-se que houve bloqueio do desvio ulnar mesmo em pacientes com deformidades mais graves dos dedos. A mesma permitia a flexão e extensão de MFs e punho. Houveram ajustes nos desenhos com o decorrer do estudo, após realização dos testes de bancada. Verificou-se que a órtese poderá ser utilizada bilateralmente, com uso dorsal da haste redonda em mão direita e uso ventral em mão esquerda. A órtese permite a função da mão e possui fácil colocação e manuseio. / Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic, multisystem, which affects the individual as a whole. Of unknown etiology, is characterized as a synovial inflammation, periarticular effects, and cumulative symmetrical. The main signs and symptoms in the acute phase are joint pain, swelling and stiffness. And 75% of cases involve upper limb, with a great impact on functional abilities. Deformities in the hands can reach all the joints causing deformities and subluxations metacarpophalangeal (MF), interphalangeal (IF) and wrists. When there is destruction of cartilage and ligaments of the wrist muscle forces and anatomical factors cause the collapse of the wrist in radial deviation and MP joints, the effect of these anatomical forces also favor collapse and ulnar deviation of these joints. There are different resources used in the treatment of this pathology, one being the use of bracing. Thus, this study aims to design and develop a bracing, articulate and original, with the function to correct the deformity in ulnar deviation of fingers and promote functionality. For both methodological procedures were divided into: Recognition of Needs; Specification and Concept. After Bibliographic survey, anthropometric study came to the sketch and the concept of the project. As a result we obtained the first prototype in material available and using the CAD program Solid Edge Insight has been proposed a prototype scanned of the orthosis, setting out proposals and requirements for the development of bracing. The results we obtained two scanned drawings of the prototype and four prototypes in different materials, composed of nine parts (two lateral branches, an ulnar block, three bracelets and three rings), which show a stent mounted articulated. It was observed that the blockade of Ulnar deviation of fingers and allow flexion and extension and the MF\'s wrist. There were adjustments to the drawings in the course of the study, after completion of bench testing. We also found that the orthosis can be used bilaterally, using dorsal round rod in his right hand and left hand use ventral. The stent allows the function of the hand and has easy handling and placement.

Os microRNAs são pequenos RNAs, não-codificantes que funcionam como reguladores a nível pós-transcricional da expressão gênica. Nos últimos anos, novas evidências demonstram o papel importante dos microRNAs na regulação e desenvolvimento do sistema imune. Apesar da função de poucos microRNAs ser conhecida, a sua expressão alterada vêm sendo associada a patogênese de diversas doenças autoimunes, incluindo a artrite reumatóide (AR). Recentemente a expressão desregulada de uma série de microRNAs está sendo descrita em pacientes com AR, e o papel patogênico de apenas uma parte deles foi investigada em modelos animais. A artrite reumatóide é uma doença autoimune sistêmica caracterizada por um intenso processo inflamatório na sinóvia, podendo causar destruição óssea e articular. Os linfócitos T apresentam papel importante na indução, manutenção e progressão da doença. A artrite induzida por colágeno é um modelo animal amplamente utilizado por suas características fisiopatológicas muito similares à doença em humanos. A linhagem de camundongos DBA-1/J desenvolve a doença após imunização e booster com colágeno do tipo II, enquanto que a linhagem DBA-2/J se mostra refratária. Isso confere um sistema modelo de susceptibilidade/resistência à artrite, que pode ser estudado em diferentes abordagens. O objetivo do nosso estudo foi identificar o perfil transcricional e as redes de interação entre um grupo de microRNAs e seus respectivos alvos nos timócitos e linfócitos T CD3+ periféricos nos camundongos da linhagem DBA-1/J e DBA-2/J. Para a avaliação da expressão gênica, utilizou-se a tecnologia de microarrays. O uso de programas de análise e para a construção das redes foi imprescindível. Os resultados encontrados evidenciam uma expressão diferenciada de mRNAs e microRNAs em timócitos e linfócitos T CD3+ periféricos entre as duas linhagens utilizadas. Novos microRNAs foram encontrados nos diferentes estágios de desenvolvimento do linfócito T. Nas redes de interação microRNA-RNAm obtidas, genes importantes associados aos processos de sistema imune, adesão e diferenciação celular, apoptose, recombinação, ativação de linfócitos T e resposta inflamatória, foram encontrados como potenciais alvos. Além disso, em uma perspectiva clínica, baseados nos resultados obtidos em camundongo, nos encontramos a expressão do miR-505 nos linfócitos T de pacientes com AR. Nossos resultados contribuem para a melhor compreensão dos mecanismos molecular envolvidos na resistência/susceptibilidade a CIA. / MicroRNAs (miRNAs) are small non-coding RNA molecules that modulate the expression of multiple protein-encoding genes at the post-transcriptional level. During the last several years, evidence has emerged to show their critical role for the regulation and development of immune system. Although the function of most mammalian miRNAs has yet to be determined, their aberrant expression has been associated with several autoimmune conditions, including rheumatoid arthritis (RA). Recently, the deregulated expression of a dozen miRNAs has been reported in patients with RA, and the pathogenic role of only a few of these has been investigated in experimental mouse models. RA is a systemic autoimmune disorder mainly characterized by the inflammation of synovial tissue that can lead to destruction of bone and cartilage. The role of effectors T cells in induction, maintenance and progression of the disease is now becoming better understood. Collagen-induced arthritis is an animal model widely studied due to its similarities to human disease. The DBA-1/J mouse strain develops arthritis after immunization process and booster with Type II collagen, and the DBA-2/J strain is refractory to the disease induction. This offers an useful susceptibility/resistance model-system to study RA. The aim of this study was to identify the expression profiles and interaction networks between a set of microRNAs and their mRNA targets in thymocytes and peripheral CD3+ T lymphocytes in DBA-1/J and DBA-2/J mice strain. For this purpose we used the microarray technology to evaluate the expression of the miRNAs and mRNAs as possible targets involved in this process. The use of bioinformatics software to reconstruct the networks was essential. The results show differential expression of mRNAs and miRNAs in thymocytes and peripheral CD3+ T lymphocytes between both strains. New miRNAs were found during all the stages of T cells development. The microRNA-mRNA interaction networks obtained in this study showed that important genes related to apoptose, immune system, recombination, cell adhesion and differentiation, inflammatory process and T cell activation were found as potential targets. In addition, in a clinical prospects, based on the results obtained in mice, we found the expression of the miRNA miR-505 in T cells of RA patients. Our results contribute to a better understand of the molecular mechanisms evolved in the resistance/susceptibility to CIA.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-09-01T12:21:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSETAÇAO_DEPOSITO.pdf: 1662534 bytes, checksum: 6bdb1ae293f1a65771c195438f64d3f0 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-01T12:21:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSETAÇAO_DEPOSITO.pdf: 1662534 bytes, checksum: 6bdb1ae293f1a65771c195438f64d3f0 (MD5) Previous issue date: 2016-03-09 / CAPEs / A artrite reumatóide (AR) é uma doença crônico-degenerativa, sistêmica, auto-imune. Atualmente, o anticorpo antipeptídeo citrulinado cíclico (Anti-PCC) é considerado o marcador mais importante para o diagnóstico preditivo e prognóstico da AR. Neste trabalho, desenvolveu-se um imunossensor eletroquímico para detecção do Anti-PCC, a partir da modificação da superfície de um eletrodo de carbono vítreo com nanocompósito de óxido de grafeno reduzido-polissulfona (Gor-PSF) o qual apresenta boas características de aumento da área eletrocatalítica e imobilização de moléculas biológicas. Foram realizados capturas de imagens micrográficas por microscopia eletrônica de varredura da superfície do eletrodo de trabalho antes e após sua modificação, pelas quais foi possível comprovar uma superfície lisa não modificada sem estruturas adsorvidas após limpeza física, e que a superfície modificada com Gor-PSF apresentou um recobrimento ideal de toda a superfície com a presença de uma estrutura esponjosa comprovando a modificação da área de trabalho. Para captura do Anti-PCC, antígenos citrulina (CCP-Ag) foram imobilizados sobre a superfície eletródica do nanocompósito por provável ligação covalente entre os grupos amino e carboxilícos presentes no CCP-Ag e no óxido de grafeno reduzido, respectivamente. A técnica de voltametria de onda quadrada (VOQ) foi empregada para detecção do Anti-PCC, produzindo um imunossensor livre de marcação. Observou-se que o GOR-PSF foi capaz de aumentar a corrente de pico anódico (Ipa) 2,2 vezes mais, comparado com o controle (sem GOR-PSF) demonstrando que o filme proporcionou melhor capacidade eletrocatalítica, sendo também estável (coeficiente de variação da corrente < 1 %) avaliado por submeter o eletrodo a 20 ciclos consecutivos de voltametria cíclica. O imunossensor proposto apresentou uma boa linearidade com r=0,983 (p<0.003; n = 5) e limite de detecção de 0,004 ng/mL de Anti-PCC. A plataforma sensora demonstrou propriedades desejáveis de estabilidade, sensibilidade e reprodutibilidade na detecção de Anti-PCC com perspectivas de desenvolvimento de dispositivos “point-of-care”. / Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic degenerative disease, systemic, autoimmune. Currently, the cyclic citrullinated peptide (anti-CCP) is considered the most important predictive marker for the diagnosis and prognosis of RA. In this work, we developed an electrochemical immunosensor for the detection of anti-CCP, from the surface modification of a glassy carbon electrode with nanocomposite reduced-polysulfone graphene oxide (GOr-PSU) which has good rise characteristics of electrocatalytic area and immobilization of biological molecules. of micrographic images catches were performed by scanning electron microscopy of the surface of the working electrode before and after modification, by which it was possible to establish a smooth unmodified without adsorbed structures after physical cleaning, and that the modified surface with GOr-PSU presented an ideal coating the entire surface with the presence of a spongy structure confirming the modification of the work area. For capture of anti-CCP, citrulline antigens (Ag-CCP) were immobilized on the electrode surface of the nanocomposite probably due to covalent bond between the amino and carboxylic groups present in the CCP-Ag and the reduced graphene oxide, respectively. Square wave voltammetry technique (VOQ) was used for detection of anti-CCP producing a marking-free immunosensor. It was observed that the GOR-PSU was capable of increasing the anodic peak current (IPA) 2.2 times as compared with the control (without GOr-PSU) demonstrating that the electrocatalytic film provided better capacity also being stable (coefficient the variation of the current <1%) evaluated by subjecting the electrode 20 consecutive cycles of cyclic voltammetry. The proposed immunosensor exhibited good linearity with r = 0.983 (p <0.003; n = 5) and a detection limit of 0.004 ng / ml anti-CCP. The sensing platform demonstrated desirable properties of stability, sensitivity and reproducibility in the Anti-CCP detection with prospects of development of devices "point-of-care."

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-02-13T14:07:28Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) tese completa corrigida_junho (2016).pdf: 2219391 bytes, checksum: 7ac2338dbd07d9a53a3344311f51b5ce (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-13T14:07:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) tese completa corrigida_junho (2016).pdf: 2219391 bytes, checksum: 7ac2338dbd07d9a53a3344311f51b5ce (MD5) Previous issue date: 2014-05-26 / A artrite reumatóide (AR), é uma doença crônica inflamatória, em cuja etiologia estão envolvidos fatores genéticos, ambientais e infecções. Dentre as infecções se destacam as virais cujas proteínas modificam a função dos sinoviócitos como ocorre com o Parvovírus B19 (PVB19). Estudos tem mostrado a participação das citocinas IL-6 e L-10 na fisiopatogenia da AR. O diagnóstico da AR se baseia em critérios clínicos, radiológicos e laboratoriais.Dentre os auto- anticorpos, o fator reumatóide (FR) apresenta alta sensibilidade e baixa especificidade. Por lado, o anticorpo antipeptídeo citrulinado cíclico (ACCP) é um importante marcador para o diagnóstico e tem valor preditivo de um pior prognóstico. Sua detecção pelo ELISA, têm mostrado excelente desempenho diagnóstico, embora seja oneroso e mais demorado. Visando diagnósticos mais rápidos e práticos, os biossensores são ideais para testes tipo “point-of-care” devido à sua portabilidade. Os objetivos desta tese foram: avaliar a correlação dos niveis séricos de IL-10, IL-6 e a frequência do anti-IgG PVB19 com atividade clínica da AR mediante os índices compostos de atividade de doença (ICADs).em diferentes tratamentos e desenvolver um imunossensor eletroquímico label free para ACCP.Foi desenvolvido um estudo transversal para estimar a frequencia de anti-IgG PVB19 e determinar os níveis séricos da IL6 e IL10 pelo método ELISA.O imunossensor constituído por eletrodos screen printed de ouro,foi baseado no uso da SAM formada pela deposição do àcido tioglicólico.Oa antígenos foram imobilizadosde modo orientado via grupos carboxílicos do TGA. Os resultados mostraram uma frequencia de 73% (60/83) de IgG anti-PVB19 e uma correlação significativa entre os níveis de IL-6 e as medidas de atividade de AR nos pacientes com maior atividade inflamatória pelo EULAR. O maior contigente de pacientes IgG anti-PVB19 positivos estava com moderada e alta atividade pelo EULAR.O imunossensor eletroquímico apresentou uma resposta linear na curva de calibração, bom coeficiente de correlação e limite de detecção menor do que o método ELISA. / Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic inflammatory disease, whose etiology is influenced by genetics, the environment, and infections. Among the various types of infections, the ones that stand out are the viral infections whose proteins alter the function of synoviocytes as occurs with Parvovirus B19 (PVB19). Studies have shown the involvement of the IL-6 and IL-10 cytokines in the physiopathogenesis of RA. Diagnosis of RA is based on clinical, radiological, and laboratory criteria. In the autoantibodies, the rheumatoid factor (RF) has high sensitivity and low specificity. The Anti-cyclic Citrullinated Peptide (anti-CCP) is an important marker for the diagnosis and as a predictive value of a worst-case prognosis.Its detection by ELISA has shown excellent diagnostic performance, but it is expensive and takes longer.Aiming for faster and more practical diagnostics, biosensors are ideal for point-of-care testing, due to their portability. The objectives of this thesis were to evaluate the correlation of the serum levels of IL-10 and IL-6and the frequency of anti-IgG PVB19,with the clinical activity of RA, via composite indices of disease activity, under different treatments, in order to develop a labelfree electrochemical immunosensor for anti-CCP. A cross-sectional study was developed to estimate the frequency of anti-IgGPVB19and to determine the serum levels of IL-6 and IL-10 by the ELISA method. The immunosensor consisting of screen-printed gold electrodes was based on the use of the self-assembled monolayer (sam) formed by deposition of thioglycolic acid. The antigens were immobilized, driven via carboxylic groups of the TGA. The results showed a frequency of 73% (60/83) of IgG anti-PVB19 and a significant correlation between the levels of IL-6 and the activity measures of AR in the patients with higher inflammatory activity according to the EULAR. Most of the IgG anti-PVB19 positive patients had moderate and high activity according to the EULAR. The electrochemical immunosensor showed a linear response in the calibration curve, a good correlation coefficient, and a detection limit lower than the ELISA method.

Orientadores: Nicola Amanda Conran Zorzetto, Fernando Ferreira Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T20:35:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dominical_VeninaMarcela_M.pdf: 1517777 bytes, checksum: 002cdb44469c81ccafe110267d001ff0 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A artrite reumatoide (AR) é uma doença inflamatória crônica, autoimune e sistêmica, caracterizada por ser uma poliartrite simétrica, acometendo preferencialmente os punhos, mãos e pés. O processo patológico que explique a AR ainda permanece desconhecido. A indução da resposta imune, característica da doença, resulta de uma inflamação nas articulações através da infiltração de células inflamatórias que são recrutadas para o tecido sinovial, onde elas aderem às células endoteliais e transmigram através da subcamada sinovial, formando complexos que produzirão citocinas inflamatórias, contribuindo para a hiperplasia da camada sinovial e estimulando a produção de mais citocinas e enzimas capazes de degradar a matriz óssea, provocando a destruição das articulações afetadas. No líquido sinovial, os neutrófilos são o principal tipo celular, atraídos para as articulações inflamadas por quimioatraentes como LTB4, C5a, IL-8 e TGF-?, e expostos a uma variedade de citocinas locais pró-inflamatórias como IL-1?, TNF-?, GM-CSF, IL-6 e IL-18. Estudos demonstraram que os neutrófilos têm papel indutor na geração de inflamação e esforços visando compreender os mecanismos exercidos pelos neutrófilos nesta doença podem ser um ponto chave para intervenções farmacológicas, promovendo a melhora dos sintomas e gravidade da doença. Diante disso, este estudo objetivou avaliar as propriedades adesivas e quimiotáticas de neutrófilos de pacientes com AR (com atividade e em remissão da doença) e verificar a influência das diferentes medicações utilizadas atualmente no tratamento da AR quanto a estas propriedades. Cento e vinte e três pacientes com artrite reumatoide em estado ativo ou de remissão da doença foram inclusos no estudo e divididos em três grupos: pacientes não tratados com drogas direcionadas para a AR (AR nt), pacientes tratados com drogas modificadoras da doença (AR dm) e pacientes tratados com agentes biológicos (AR ab); os indivíduos sem a doença foram nossos controles (Con). Os neutrófilos foram separados do sangue periférico e realizados ensaios de adesão estática e de quimiotaxia celular, ambos in vitro. Foi verificada a expressão gênica e de superfície de algumas proteínas envolvidas no processo adesivo. Além disso, foram quantificadas no soro e líquido sinovial destes pacientes, quimiocinas envolvidas no recrutamento de neutrófilos e a L-selectina - molécula de adesão expressa em leucócitos. Os neutrófilos da circulação periférica de pacientes com AR em atividade da doença não apresentaram alterações quanto às propriedades adesivas em relação a indivíduos saudáveis. Ainda, neutrófilos de pacientes em terapia com agentes biológicos apresentaram aumento das propriedades migratórias comparados a pacientes AR sem tratamento. Interessantemente, os neutrófilos de pacientes com AR em remissão da doença apresentaram redução da capacidade adesiva e migratória dos neutrófilos quando na ausência de estímulo por IL-8. Apesar disso, não observamos diferenças quanto à adesão e à migração destes neutrófilos quando estimulados por esta citocina. O líquido sinovial de pacientes com AR em atividade da doença possui alto potencial quimiotático frente a neutrófilos e foram encontrados níveis elevados de IL-8 e ENA-78 tanto neste fluído, como também no sangue periférico. Há aumento da expressão gênica de L-selectina em neutrófilos de pacientes com AR em atividade da doença, mas curiosamente, não encontramos diferenças quanto à expressão desta molécula na superfície dos neutrófilos ou a sua presença no soro. Em destaque, observamos redução significativa de expressão na superfície neutrofílica de L-selectina e LFA-1 em pacientes em remissão da doença. Esses resultados sugerem que a remissão do quadro inflamatório da AR parece estar associada a alterações significantes nas principais quimiocinas atraentes de neutrófilos na circulação destes indivíduos e que são acompanhadas por modificações funcionais dos neutrófilos. Especulamos se estas características podem participar na melhora do quadro clínico em pacientes com artrite reumatoide / Abstract: Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic inflammatory disease that is autoimmune and systemic, and characterized by a symmetric polyarthritis, affecting mainly the wrists, hands and feet. The pathological process that explains RA remains unknown. The induction of an immune response, characteristic of the disease, results from an inflammation of the joints through the infiltration of inflammatory cells that are recruited to the synovial tissue, where they adhere to endothelial cells and transmigrate through the synovial sublayer, forming complexes that produce inflammatory cytokines. These complexes induce hyperplasia of the synovial layer and stimulate the further production of cytokines and enzymes, leading to the degradation of the bone matrix, and resulting in the destruction of affected joints. In the synovial fluid, neutrophils are the main cell type and are attracted to the inflamed joints by chemoattractants, such as LTB4, C5a, IL-8 and TGF-?, and exposed to a variety of local pro-inflammatory cytokines such as IL-1?, TNF -?, GM-CSF, IL-6 and IL-18. Studies have shown that neutrophils play a role in inducing the generation of inflammation, and efforts to understand the mechanisms deployed by neutrophils in this disease may be a key point for the development of pharmacological interventions to ameliorate symptoms and disease severity. Thus, this study evaluated the chemotactic and adhesive properties of neutrophils in patients with RA and the influence of different drugs, currently used in the treatment of this pathology, on these properties. One hundred and twenty-three patients with active RA or in disease remission were enrolled and divided into three groups; patients not treated with drugs specifically for RA (AR nt), patients treated with disease-modifying antirheumatic drugs (AR dm) and patients treated with biological agents (AR ab); healthy individuals were used as controls (Con). Neutrophils were separated from peripheral blood and static adhesion assays and cell chemotaxis assays were performed in vitro. We verified the gene and surface expression of some proteins involved in the adhesive process. Moreover, chemokines involved in the recruitment of neutrophils and L-selectin, a cellular adhesion molecule expressed in leukocytes, were quantified in the serum and synovial fluid of these patients. Neutrophils from the peripheral blood of RA patients with active disease demonstrated no difference in adhesive properties, compared to healthy subjects. Furthermore, patients on therapy with biological agents had increased migratory properties, compared to patients without specific RA treatment. Interestingly, neutrophils from RA patients in remission of disease presented reduced adhesive and migratory capacity in the absence of stimulus. Nevertheless, no differences were observed in these properties with IL-8 stimulus. The synovial fluid of RA patients with active disease has a high chemotactic potential for neutrophils and presented significantly higher levels of IL-8 and ENA-78 in this fluid, as well as in the peripheral blood. An increased gene expression of L-selectin in RA patients with active disease was observed, but interestingly, we found no differences in surface expression or presence in the serum of this molecule. Of note, a significant decrease in the surface expression of neutrophil L-selectin and LFA-1 was observed in patients in remission of disease. Results suggest that the remission of the RA inflammatory state appears to be associated with significant alterations in major neutrophil-attracting chemokines in the circulation of individuals, contributing possibly, to neutrophils function alteration in these individuals and the consequent amelioration of the disease / Mestrado / Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento / Mestre em Fisiopatologia Médica