O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de soluções químicas de higienização hipoclorito alcalino e solução experimental à base de mamona (Ricinus communis) frente ao controle do biofilme de próteses totais (Análise Clínica) e aos efeitos adversos sobre a resina acrílica termicamente ativada (Análise Laboratorial). Foram testadas as soluções: Grupo I- Solução salina (controle); Grupo II- Hipoclorito de sódio 0,10%; Grupo III- Hipoclorito de sódio 0,20%; Grupo IV- Solução de mamona 8%. Para a Análise Clínica (propriedade de remoção de biofilme e ação antimicrobiana) foram recrutados 50 pacientes com Estomatite Protética e 47 com mucosa palatina saudável, os quais foram orientados a escovar suas próteses (escova específica para prótese e sabonete neutro) três vezes ao dia e imergí-las (20 minutos), uma vez ao dia, nas soluções citadas. De acordo com uma sequência aleatorizada, cada solução foi utilizada por 14 dias, com um período de 7 dias de wash out entre elas, durante o qual os pacientes realizaram sua higienização habitual. As avaliações foram realizadas antes (Baseline) e após os 14 dias de uso de cada solução. Para a propriedade de remoção de biofilme, a superfície das próteses superiores foram evidenciadas (vermelho neutro 1%) e fotografadas (Canon EOS Digital Rebel). As fotografias foram processadas (Adobe Photoshop 5.5) e a área recoberta por biofilme foi mensurada por meio de software (Image Tool 3.00). A ação antimicrobiana foi avaliada por meio da contagem de unidades formadoras de colônia (UFC) de cepas do gênero Candida spp.. Para coleta do biofilme, as próteses superiores foram escovadas (escova Tek e solução salina) por 2 minutos, sendo a suspensão transferida para tubos de ensaio. Após diluições decimais (100 até 10-3), alíquotas (50 &mu;L) de cada diluição foram cultivadas em placas de Petri contendo ágar Chromagar (Difco Laboratories Inc., Detroit, Michigan, EUA), para posterior incubação (aerobiose) por 48hs e contagem do número de colônias e cálculo dos valores de UFC/mL. Para a Análise Laboratorial, corpos de prova circulares (n=80) (16 x 4 mm) e retangulares (n=80) (65 x 10 x 3,3 mm) de resina acrílica termopolimerizável (Lucitone 550) foram imersos (20 minutos) nas soluções citadas. Antes e após as imersões, foram avaliados quanto à alteração de cor (Espectrocolorímetro Color Guide 45/0) e correlação dos dados de acordo com unidades NBS (NBS=&Delta;E* x 0,92), quanto à rugosidade de superfície - \"&mu;m\" (rugosímetro Surftest SJ-201P) e à resistência à flexão \"MPa\" (Máquina Universal de Ensaios DL 2000, EMIC). Os testes estatísticos empregados para remoção de biofilme e ação antimicrobiana foram o de Friedman, seguido pelo teste de Wilcoxon, corrigido de acordo com o método de Bonferroni (&alpha;=0,05) e Mann-Whitney (&alpha;=0,05) para comparar os grupos (com e sem Estomatite). Para a análise laboratorial foi feito o teste de Kruskal-Wallis, seguido pelo teste de Dunn (&alpha;=0,05). Os resultados mostraram que, para a propriedade de remoção de biofilme, em ambos os grupos (com e sem Estomatite Protética), o grupo IV apresentou resultados intermediários e os grupos II e III foram os mais eficazes. A comparação dos grupos (pacientes com e sem Estomatite Protética) mostrou haver diferença significante apenas no baseline (p=0,025) com menores valores para os pacientes com mucosa palatina saudável. Foi verificada ação antimicrobiana frente Candida spp. dos grupos II e III em ambos os grupos de pacientes e o grupo IV no grupo de pacientes com mucosa palatina saudável, sendo que a comparação dos grupos (com e sem Estomatite Protética) mostrou diferença significante no baseline (p=0,002), grupo I (p<0,001) e grupo IV (p<0,001), com menores valores de posto médio para o grupo com mucosa palatina saudável. Para o estudo laboratorial, os resultados mostraram diferença significante entre as soluções para a alteração de cor (<0,001), com maiores valores para o grupo IV. Todas as alterações foram classificadas como leves segundo a NBS. Não houve diferença estatística entre as soluções para as propriedades de rugosidade de superfície (p=0,760) e resistência à flexão (p=0,547). Concluiu-se que as soluções de hipoclorito de sódio a 0,20% e 0,10% foram eftivas quanto à propriedade de remoção de biofilme e ação antimicrobiana, bem como não causaram efeitos adversos à resina acrílica, podendo ser empregados no controle do biofilme de próteses totais / This study evaluated denture cleansers efficacy in biofilm removal and antimicrobial action by a randomized crossover trial (\"in vivo\") and the adverse effects of heat-polymerized acrylic resin (\"in vitro\"). The employed solutions were: Group I- Saline (control); Group II- 0.10% Sodium Hypochlorite; Group III- 0.20% Sodium Hypochlorite; Group IV- 8% Castor oil solution (Ricinus comunnis). Ninety-seven complete denture wearers - fifty with Denture Stomatitis and forty-seven with oral healthy - were instructed to brush their dentures (specific brush and liquid soap) three times a day and to soak them (twenty minutes), once a day, for fourteen days. The dentures were soaked in solutions according a randomized sequence with a washout period (7 days), which patients were instructed to use their habitual hygiene. The data were collected at Baseline and after each solution usage. To evaluate the biofilm removal property, the internal surfaces of maxillary dentures were disclosed (1% neutral red) and photographed (Canon EOS Digital Rebel), the biofilm areas (total and stained) were quantified (Image Tool 3.0) and its percentage was calculated using the relation between biofilm area multiplied by 100, and total surface area of the denture\'s internal base. Antimicrobial action was evaluated by counting CFU/mL of characteristic Candida spp. colonies by a stereoscopic magnifier. To collected biofilm, the maxillary dentures internal surfaces were brushed (Tek brush and saline solution) for two minutes. The diluted resultant solutions (100 to 10-3) were cultured (50 &mu;L aliquots) inside Petri plaques containing Chromagar agar (Difco Laboratories Inc., Detroit, Michigan, EUA) for Candida spp.. For \"in vitro\" analyses, eighty disc-shaped (16 mm x 4 mm) and eighty rectangular specimens (65 mm x 10 mm x 3.3 mm) were prepared from heat-polymerized acrylic resin (Lucitone 550) and immersed into solutions for 20 minutes. Color data (&Delta;E) were determined by a colorimeter and also quantified according the National Bureau of Standards. A rugosimeter was used to measure roughness (&mu;m) and the flexural strength (MPa) was measured using a universal testing machine. For biofilm removal and antimicrobial action, data were analyzed by Wilcoxon test, corrected by Bonferroni method (&alpha;=0.05) and Mann-Whitney (&alpha;=0.05) was used to compare patients groups. For \"in vitro\" data were used Kruskal-Wallis, followed by Dunn test (&alpha;=0.05). The results for biofilm removal showed for both patients groups, intermediated values for group IV and groups II and III were the most effectives. Comparing patients groups, just baseline showed significant difference (p=0.025) and the lower values were for patients with oral healthy. Groups II and III showed antimicrobial action for Candida spp. and group IV was effective for oral healthy group. Comparing groups, baseline (p=0.002), group I (p<0.001) and group IV (p<0.001), showed significant difference and patients with oral healthy showed the lower values. The \"in vitro\" data showed significant differences to color alteration (<0.001). Group IV showed higher values, however, color changes caused by solutions were classified as \"slight\" by NBS. The statistical analysis showed no significant difference to surface roughness (p=0.760) and flexural strength (p=0.547) after the simulated period of immersion. It was concluded that 0.10% and 0.20% sodium hypochlorite solutions were effective not only to biofilm removal and antimicrobial action, but also did not cause adverse effects of acrylic resin, and could be used to control denture biofilm

O objetivo deste trabalho foi avaliar a variação de massa e a alteração da rugosidade de superfície, causadas pela associação dos métodos mecânico (escovação) e químico (imersão) de higiene de próteses totais. Foram utilizados 240 corpos de prova de acrílico Plexiglass (90 x 30 x 3 mm). O ensaio de escovação (método mecânico) foi realizado em máquina de escovação (Mavtec), em frequência de 356 rpm, curso da escova (Tek Macia) de 3,8 centímetros, peso da sapata de 200 gramas e tempo de 50 minutos (simulação de 01 ano de escovação). Como suspensões, foram utilizadas água destilada e 04 dentifrícios (02 convencionais: Sorriso e Colgate; e 02 específicos para próteses totais: Polident e Corega). Após a escovação, os corpos de prova foram imersos em água destilada, hipoclorito de sódio a 0,5%, solução de mamona a 10% e Corega Tabs por 121,6 horas (simulação de 01 ano de imersão, por 20 minutos diários - ciclo curto) e 2920 horas (simulação de 01 ano de imersão, por 8 horas ao dia - ciclo longo). Foram obtidos 20 grupos (n=12), combinando as 05 substâncias utilizadas na escovação às 4 soluções utilizadas nos ensaios de imersão. A variação de massa foi avaliada pelo método Gravimétrico indireto, sendo as pesagens realizadas em balança (Metler Toledo GMbH) antes dos procedimentos de higiene (M0), após a escovação (M1), após a imersão pelo ciclo curto (M2) e após a imersão pelo ciclo longo (M3). A alteração da rugosidade de superfície (&mu;m) foi avaliada por rugosímetro (Surtronic 25), por meio da obtenção de média de três leituras (4,0 mm de comprimento e valor de \"cut-off\" de 0,8 mm, a 0,5 mm/s) antes dos procedimentos de higiene (RS0), após a escovação (RS1), após a imersão pelo ciclo curto (RS2) e após a imersão pelo ciclo longo (RS3). Os dados provenientes do método mecânico foram submetidos ao teste não paramétrico Kruskal-Wallis, seguido pelo pós-teste de Dunn (p<0,01); os dados relativos à comparação dos diferentes métodos de higiene foram submetidos ao teste de regressão linear (p<0,01). Para o método mecânico, quanto à variação de massa, entre os dentifrícios, os maiores valores foram registrados para a escovação com Sorriso (-0,0111±0,0032), enquanto os menores, para a escovação com o Polident (-0,0069±0,0023). Para a alteração da rugosidade de superfície, os maiores valores foram obtidos para a escovação com Sorriso (2,2003±1,8932), enquanto os menores, para o Corega (0,9263±0,8621). Quanto à comparação dos métodos, para a variação de massa, quando o método combinado foi realizado com imersão em hipoclorito de sódio, houve perda de massa após ambos os ciclos, enquanto que, as imersões em água destilada, mamona e Corega Tabs, acarretaram um aumento de massa. Quanto à alteração de rugosidade de superfície, não houve diferença significativa entre métodos ou entre soluções utilizadas para imersão. Conclui-se que é importante a indicação de dentifrícios específicos para próteses totais, em virtude da menor magnitude dos efeitos adversos causados, e que, a incorporação de um método químico à escovação, não causa efeitos adversos clinicamente significantes ao substrato empregado / The aim of this study was to evaluate the mass variation and changes in surface roughness when mechanical and chemical methods of denture cleanser were associated. Two hundred and forty Plexiglass specimens (90x30x3 mm) were used. The brushing test was carried out using a toothbrushing machine (Mavtec), with a frequency of 356 rpm, course covered by brush corresponds to 3.8 cm, the load was standardized at 200 g, and length of 50 minutes (01 year of brushing). As suspensions, were utilized distilled water and 04 dentifrices (02 conventional: Sorriso and Colgate; and 02 indicated for denture cleanser: Polident and Corega). After brushing, the specimens were immersed in sodium hypochlorite (NaClO) 0,5%, Ricinus communis 10% solution and Corega Tabs for 121,6 hours (01 year of immersion, 20 minutes daily - short cycle) and 2920 hours (01 year of immersion, 8 hours daily - long cycle). Twenty groups were obtained, associating the 05 brushing solutions with the four immersion products. The specimens were weighed before the tests (M0), after the brushing test (M1), after short cycle immersion test (M2) and after the long cycle immersion test (M3) in a precision balance (Metler Toledo GMbH). The surface roughness (&mu;m) was evaluated by a rughosimeter (Surftest SJ-201P) before the tests (R0), after the brushing test (R1), after short cycle immersion test (R2) and after the long cycle immersion test (R3). The mechanical method results was submitted to Kruskal-Wallis non-parametric test, and Dunn\'s test (p<0,01); For the hygiene methods, the linear regression analysis (p<0,01) was used. For the mechanical method, the dentifrice that caused the greatest mass variation was Sorriso (-0,0111±0,0032), while the lowest variation was caused by Polident (-0,0069±0,0023). For the surface roughness, the greatest values were obtained for Sorriso (2,2003±1,8932), and the lowest, for Corega (0,9263±0,8621). For the comparison of the methods, for the mass variation, when the combined method was performed with immersion in sodium hypochlorite, there was mass loss after both combined cycles. Immersions in water, Ricinus communis and Corega Tabs, resulted in mass increase. For the surface roughness changes, there was no significant difference between methods or solutions used for immersion tests. It was concluded that it is important to indicate specific dentifrices for complete dentures, due to the small magnitude of the adverse effects, and that the incorporation of a chemical method to the brushing does not cause clinically significant adverse effects

A ação antimicrobiana de soluções higienizadoras e um aspecto importante a ser avaliado para sua indicação como método associado a escovação, para higienização de Próteses Parciais Removíveis (PPRs). Este estudo avaliou, por meio de metodologia in vitro, a capacidade de soluções higienizadoras em reduzir as unidades formadoras de colônia (UFC) de biofilmes formados sobre a superfície da liga de cobalto cromo (Co-Cr). 240 espécimes metálicos de Co- Cr circulares (12 mm x 3 mm) foram obtidos de padrões de cera confeccionados a partir de uma matriz metálica. Após fundição, os espécimes foram polidos de forma padronizada e esterilizados por oxido de etileno. Divididos aleatoriamente, os espécimes (n=9) foram contaminados com: Candida albicans (Ca), Candida glabrata (Cg), Streptococcus mutans (Sm) ou Staphylococcus aureus (Sa) e biofilme multiespecies (BM), o qual continha todos os microrganismos estudados. A adesão dos microrganismos ocorreu em 1 hora e 30 minutos em estufa incubadora a 37&deg;C. A maturação do biofilme foi obtida em 48 horas, com troca de meio após 24 horas, também a 37&deg;C, sendo que para Sm e BM o processo ocorreu em microaerofilia. Os espécimes contaminados foram imersos em Ricinus communis a 2% (Rc 2%- 20 min), Ricinus communis a 10% (Rc 10%- 20 min), cloreto de cetilpiridinio a 0,05% (Cepacol) (CPC- 10 min), pastilhas efervescentes (NitrAdine) (NA-15 min) e água destilada (AD- 20 min). Após as imersões, os espécimes foram colocados em meio Leethen Broth e agitados para desprendimento das células viáveis. As suspensões obtidas foram diluídas seriadamente (100, 10-1, 10-2, 10-3) e semeadas em meios específicos para contagem das UFC/mL. A partir dos valores de UFC foram calculados os valores de Log10(UFC+1) para análise estatística (&alpha;=0,05). A distribuição dos dados para Sa, Sm em culturas isoladas e para os microrganismos do biofilme multiespécies apresentou-se não normal, tendo sido utilizado o teste de Kruskal-Wallis, seguido pelo teste de Dunn. Para Ca e Cg, a distribuição dos dados apresentou-se normal, tendo sido utilizados ANOVA e teste de Tukey. Em biofilmes isolados, os resultados mostraram eficiência do NA na redução de Cg (p=0,001), Sa (p=0,012) e Sm (p=0,002). Nenhuma das soluções apresentou redução significante de Ca. Dentro do grupo BM, CPC (p=0,035) e NA (p=0,006) reduziram UFC/mL de Cg. NA (p=0,01) foi eficaz contra Sm e nenhuma das soluções apresentou redução de Ca e Sa. Conclui-se que o peróxido alcalino foi o higienizador mais efetivo em relação a maioria dos microrganismos avaliados, mas nenhuma solução apresentou ação contra Ca em superfícies metálicas de Co-Cr. / The evaluation of antimicrobial action of denture cleansers is an important aspect to be investigated to able a denture cleanser to be associated with mechanical method and used to clean removable partial dentures (RPD). This study analyzed in vitro antimicrobial action of cleanser solutions on cobalt chromium (Co-Cr) alloy, reducing the Colony Forming Units (CFU) on biofilms. The specimens (n=240) were obtained from wax patterns (12 mm x 3 mm), made in a metal matrix. Specimens were polished in a standard way and sterilized with ethylene oxide. Randomly divided, the specimens were contaminated with suspension of Candida albicans (Ca), Candida glabrata (Cg), Staphylococcus aureus (Sa), Streptococcus mutans (Sm) and multispecies biofilm (MB), with contained all the microorganisms. The adhesion of microorganisms occurred in 1 hour and 30 minutes in an incubator oven at 37&deg;C. The biofilm growth occurred on 48 hours, with medium change every 24 hours, also at 37&deg;C, while Sm and MB process occurred in microaerophilic. Contaminated specimens were immersed in solutions as the following groups (n=9): A- experimental solution of Ricinus communis 2% (Rc 2%- 20 min.); B- experimental solution of Ricinus communis 10% (Rc 10%- 20 min.); Ccetylpyridiniun chloride 0.500 mg - Cepacol (CPC- 10 min.); D- effervescent tablet - Nitradine (NA- 15 min.); E- distilled water (DW- 20 min.). The specimens were immersed in medium Letheen from which were obtained aliquots. The aliquots were diluted, in 100, 10-1, 10-2 and 10-3, then seeded to determine the number of CFU/ mL. From the CFU values, were calculated values of Log10(CFU+1) for statistical analysis (&alpha;=0,05). The distribution of data was observed in isolated Sa, Sm and all the groups of microorganisms in MB was not-normal. In this case, data were processed and Kruskal-Wallis test (&alpha; = 0.05) followed by Dunn\'s post test were used. In isolated biofilm of Ca e Sa, data presented normal distribution, so ANOVA followed by Tukey post test were used. In isolated biofilms, AP promoted significant reduction of CFU/mL of Cg (p=0.001), Sa (p=0.012), and Sm (p=0.002). None of the solutions presented difference statistic significant of Ca. In MB group, CPC (p=0.035) and AP (p=0.006) significantly reduced CFU/ml of Cg, and AP (p=0.01) of Sm, none of the solutions presented difference of Ca and Sa. It was concluded that alkaline peroxide was the most effective cleanser in reducing the number of CFU in the most of microorganisms, but no one was effective against Ca in Co-Cr metallic surfaces.

Le degré de spécialisation d'hôte des parasites peut considérablement modifier la nature des interactions interspécifiques. Lorsque les parasites sont également vecteurs, leur capacité d'adaptation et leur réponse aux changements dans la communauté d'hôtes aura des conséquences importantes sur la dynamique de leurs populations, mais aussi sur les microparasites qu'ils transmettent. Une première étape pour mieux appréhender l'importance de ce phénomène sur l'écologie et l'évolution des systèmes vectoriels est d'étudier la divergence génétique associée à l'hôte. Nous avons utilisé cette approche dans le système hôte-vecteur-pathogène impliquant la tique européenne Ixodes ricinus, ses différents hôtes vertébrés et les bactéries responsables de la maladie de Lyme (Borrelia burgdorferi sl). Ce travail a notamment consisté à tester si les communautés les plus anciennes montraient des divergences associées à l'hôte plus importantes que celles récemment colonisées. Nous avons combiné des échantillonnages de terrain sur un transect européen (comprenant la distribution historique d'I. ricinus et des zones nouvellement colonisées) et, des analyses moléculaires basés sur 14 marqueurs microsatellites (dont 9 nouvellement développés). Comme un obstacle majeur pour aborder la question de la spécificité d'hôte dans le système I. ricinus, ainsi que chez d'autres vecteurs, est de déterminer l'utilisation des hôtes, nous avons également testé expérimentalement les biais rencontrés lors de la détection moléculaire de l'hôte. Nos résultats révèlent un schéma complexe de l'adaptation des tiques à travers l'Europe ; la spécialisation d'hôte peut évoluer, mais l'âge de la communauté ne semble pas être un facteur décisif. Plus généralement, les résultats de cette thèse soulignent que l'écologie des vecteurs en eux-mêmes (et pas seulement les interactions hôtes-pathogènes) doit être considérée avec attention si on veut améliorer notre compréhension de ces systèmes. / The degree of host specialization in parasites can greatly modify the nature of interspecific interactions. When parasites are also vectors, their ability to adapt to new hosts and their response to changes in the host community will have important consequences for both their population dynamics and evolution, but may also cascade down to the microparasites they transmit. A first step to better apprehend the importance of this phenomenon for the evolution and ecology of vector-borne disease systems is to study patterns of host-associated genetic divergence across diverse vector populations. We used this approach in the host-vector-pathogen system involving the European tick Ixodes ricinus, its various vertebrate hosts and the bacteria responsible for Lyme disease Borrelia burgdorferi sl. We predicted that longer established interactions would show stronger patterns of host-associated divergence than more recently established ones. We tested this prediction by combining field samples from a European-wide transect (including both historical and newly colonized zones) and molecular analyses based on 14 microsatellite markers (9 newly developed). As a major obstacle for tackling the question of host associations in the I. ricinus system is determining local host use, we also experimentally tested for biases in molecular host detection. Our results reveal a complex pattern of tick adaptation across the European landscape; host specialization does evolve, but not in a predictable way in relation to the evolutionary age of the interaction. More generally, the results of this thesis highlight that vector ecology (and not just host-pathogen interactions) require careful consideration, if we are to improve our understanding of these systems.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de soluções químicas de higienização hipoclorito alcalino e solução experimental à base de mamona (Ricinus communis) frente ao controle do biofilme de próteses totais (Análise Clínica) e aos efeitos adversos sobre a resina acrílica termicamente ativada (Análise Laboratorial). Foram testadas as soluções: Grupo I- Solução salina (controle); Grupo II- Hipoclorito de sódio 0,10%; Grupo III- Hipoclorito de sódio 0,20%; Grupo IV- Solução de mamona 8%. Para a Análise Clínica (propriedade de remoção de biofilme e ação antimicrobiana) foram recrutados 50 pacientes com Estomatite Protética e 47 com mucosa palatina saudável, os quais foram orientados a escovar suas próteses (escova específica para prótese e sabonete neutro) três vezes ao dia e imergí-las (20 minutos), uma vez ao dia, nas soluções citadas. De acordo com uma sequência aleatorizada, cada solução foi utilizada por 14 dias, com um período de 7 dias de wash out entre elas, durante o qual os pacientes realizaram sua higienização habitual. As avaliações foram realizadas antes (Baseline) e após os 14 dias de uso de cada solução. Para a propriedade de remoção de biofilme, a superfície das próteses superiores foram evidenciadas (vermelho neutro 1%) e fotografadas (Canon EOS Digital Rebel). As fotografias foram processadas (Adobe Photoshop 5.5) e a área recoberta por biofilme foi mensurada por meio de software (Image Tool 3.00). A ação antimicrobiana foi avaliada por meio da contagem de unidades formadoras de colônia (UFC) de cepas do gênero Candida spp.. Para coleta do biofilme, as próteses superiores foram escovadas (escova Tek e solução salina) por 2 minutos, sendo a suspensão transferida para tubos de ensaio. Após diluições decimais (100 até 10-3), alíquotas (50 &mu;L) de cada diluição foram cultivadas em placas de Petri contendo ágar Chromagar (Difco Laboratories Inc., Detroit, Michigan, EUA), para posterior incubação (aerobiose) por 48hs e contagem do número de colônias e cálculo dos valores de UFC/mL. Para a Análise Laboratorial, corpos de prova circulares (n=80) (16 x 4 mm) e retangulares (n=80) (65 x 10 x 3,3 mm) de resina acrílica termopolimerizável (Lucitone 550) foram imersos (20 minutos) nas soluções citadas. Antes e após as imersões, foram avaliados quanto à alteração de cor (Espectrocolorímetro Color Guide 45/0) e correlação dos dados de acordo com unidades NBS (NBS=&Delta;E* x 0,92), quanto à rugosidade de superfície - \"&mu;m\" (rugosímetro Surftest SJ-201P) e à resistência à flexão \"MPa\" (Máquina Universal de Ensaios DL 2000, EMIC). Os testes estatísticos empregados para remoção de biofilme e ação antimicrobiana foram o de Friedman, seguido pelo teste de Wilcoxon, corrigido de acordo com o método de Bonferroni (&alpha;=0,05) e Mann-Whitney (&alpha;=0,05) para comparar os grupos (com e sem Estomatite). Para a análise laboratorial foi feito o teste de Kruskal-Wallis, seguido pelo teste de Dunn (&alpha;=0,05). Os resultados mostraram que, para a propriedade de remoção de biofilme, em ambos os grupos (com e sem Estomatite Protética), o grupo IV apresentou resultados intermediários e os grupos II e III foram os mais eficazes. A comparação dos grupos (pacientes com e sem Estomatite Protética) mostrou haver diferença significante apenas no baseline (p=0,025) com menores valores para os pacientes com mucosa palatina saudável. Foi verificada ação antimicrobiana frente Candida spp. dos grupos II e III em ambos os grupos de pacientes e o grupo IV no grupo de pacientes com mucosa palatina saudável, sendo que a comparação dos grupos (com e sem Estomatite Protética) mostrou diferença significante no baseline (p=0,002), grupo I (p<0,001) e grupo IV (p<0,001), com menores valores de posto médio para o grupo com mucosa palatina saudável. Para o estudo laboratorial, os resultados mostraram diferença significante entre as soluções para a alteração de cor (<0,001), com maiores valores para o grupo IV. Todas as alterações foram classificadas como leves segundo a NBS. Não houve diferença estatística entre as soluções para as propriedades de rugosidade de superfície (p=0,760) e resistência à flexão (p=0,547). Concluiu-se que as soluções de hipoclorito de sódio a 0,20% e 0,10% foram eftivas quanto à propriedade de remoção de biofilme e ação antimicrobiana, bem como não causaram efeitos adversos à resina acrílica, podendo ser empregados no controle do biofilme de próteses totais / This study evaluated denture cleansers efficacy in biofilm removal and antimicrobial action by a randomized crossover trial (\"in vivo\") and the adverse effects of heat-polymerized acrylic resin (\"in vitro\"). The employed solutions were: Group I- Saline (control); Group II- 0.10% Sodium Hypochlorite; Group III- 0.20% Sodium Hypochlorite; Group IV- 8% Castor oil solution (Ricinus comunnis). Ninety-seven complete denture wearers - fifty with Denture Stomatitis and forty-seven with oral healthy - were instructed to brush their dentures (specific brush and liquid soap) three times a day and to soak them (twenty minutes), once a day, for fourteen days. The dentures were soaked in solutions according a randomized sequence with a washout period (7 days), which patients were instructed to use their habitual hygiene. The data were collected at Baseline and after each solution usage. To evaluate the biofilm removal property, the internal surfaces of maxillary dentures were disclosed (1% neutral red) and photographed (Canon EOS Digital Rebel), the biofilm areas (total and stained) were quantified (Image Tool 3.0) and its percentage was calculated using the relation between biofilm area multiplied by 100, and total surface area of the denture\'s internal base. Antimicrobial action was evaluated by counting CFU/mL of characteristic Candida spp. colonies by a stereoscopic magnifier. To collected biofilm, the maxillary dentures internal surfaces were brushed (Tek brush and saline solution) for two minutes. The diluted resultant solutions (100 to 10-3) were cultured (50 &mu;L aliquots) inside Petri plaques containing Chromagar agar (Difco Laboratories Inc., Detroit, Michigan, EUA) for Candida spp.. For \"in vitro\" analyses, eighty disc-shaped (16 mm x 4 mm) and eighty rectangular specimens (65 mm x 10 mm x 3.3 mm) were prepared from heat-polymerized acrylic resin (Lucitone 550) and immersed into solutions for 20 minutes. Color data (&Delta;E) were determined by a colorimeter and also quantified according the National Bureau of Standards. A rugosimeter was used to measure roughness (&mu;m) and the flexural strength (MPa) was measured using a universal testing machine. For biofilm removal and antimicrobial action, data were analyzed by Wilcoxon test, corrected by Bonferroni method (&alpha;=0.05) and Mann-Whitney (&alpha;=0.05) was used to compare patients groups. For \"in vitro\" data were used Kruskal-Wallis, followed by Dunn test (&alpha;=0.05). The results for biofilm removal showed for both patients groups, intermediated values for group IV and groups II and III were the most effectives. Comparing patients groups, just baseline showed significant difference (p=0.025) and the lower values were for patients with oral healthy. Groups II and III showed antimicrobial action for Candida spp. and group IV was effective for oral healthy group. Comparing groups, baseline (p=0.002), group I (p<0.001) and group IV (p<0.001), showed significant difference and patients with oral healthy showed the lower values. The \"in vitro\" data showed significant differences to color alteration (<0.001). Group IV showed higher values, however, color changes caused by solutions were classified as \"slight\" by NBS. The statistical analysis showed no significant difference to surface roughness (p=0.760) and flexural strength (p=0.547) after the simulated period of immersion. It was concluded that 0.10% and 0.20% sodium hypochlorite solutions were effective not only to biofilm removal and antimicrobial action, but also did not cause adverse effects of acrylic resin, and could be used to control denture biofilm

Ixodes ricinus est l’espèce de tique la plus abondante et ayant la plus vaste répartition géographique en Europe. Elle est le vecteur de nombreux agents pathogènes d’importance en santé publique et vétérinaire. Le remplacement des acaricides générant pollution environnementale et apparition croissante de résistances requiert le développement urgent de nouvelles stratégies de lutte efficaces contre les tiques et les agents pathogènes qu’elles transmettent. La découverte de telles stratégies passe nécessairement par une meilleure connaissance des interactions entre les tiques, leurs hôtes et les agents pathogènes transmis. La salive de tique, à l’interface de ces interactions, est un fluide essentiel pour ces arthropodes et possède notamment des propriétés protéolytiques, anticoagulantes, immunomodulatrices, analgésique, et anti-inflammatoires qui permettent à la tique de réaliser ses repas sanguins extrêmement longs. Afin de comprendre les mécanismes moléculaires impliqués dans la transmission des agents pathogènes et pour identifier de possibles candidats vaccinaux contre I. ricinus, une étude transcriptomique comparative entre des glandes salivaires infectées et non infectées par la bactérie Bartonella henselae a été antérieurement réalisée. Le transcrit le plus surexprimé suite à cette infection était IrSPI, un inhibiteur de sérine protéase de la famille des Kunitz. Les analyses fonctionnelles par ARN interférence ont montré l’implication de ce gène dans le gorgement et de l’infection des glandes salivaires par B. henselae. Ainsi, les travaux de thèse présentés ici ont concerné l’analyse structurelle, biochimique et fonctionnelle de IrSPI en tant que molécule impliquée dans les interactions tick-hôte-pathogène. Le premier objectif était de définir la structure et la séquence du gène IrSPI mais, malheureusement, bien que nos résultats aient permit des avancés sur cette question, nous n'avons pu obtenir la totalité de sa séquence. Dans un second temps, la dynamique d’expression d’IrSPI a été évaluée au cours du gorgement et de l’infection des tiques par différents agents pathogènes, montrant que son expression est induite par le repas sanguin, par des agents transmis par la tique mais pas par Escherichia coli, bactérie non transmise. De plus, nos résultats ont montré l’expression de IrSPI dans plusieurs organes de la tique, suggérant son implication dans diverses fonctions au sein de ce vecteur. Parmi elles, la mise en évidence d'une injection, par la salive, de la protéine à l'hôte vertébré nous a permis d'envisager un rôle sur les réponses de l'hôte à la piqûre de tique. Nos résultats n’ont montré aucune implication dans la voie extrinsèque de la coagulation ni dans la fibrinolyse, ni dans l’angiogenèse. En revanche, ils ont démontré que IrSPI inhibe la prolifération des lymphocytes TCD4+ sous stimulation monogénique quand chez des lymphocytes B non stimulés IRSPI, il induit une hausse de la prolifération. De plus IrSPI a montré une action négative significative sur la production de la majorité des cytokines et chimiokines pro-inflammatoires produites par les macrophages et les splénocytes. Ainsi, IrSPI, correspond à un des composants salivaires d’I. ricinus lui permettant de moduler la réponse immune de l’hôte pour lui permettre de prélever son repas sanguin tout en favorisant la transmission des agents pathogènes. Enfin, des résultats préliminaires dans l'identification des interactants de IrSPI à la fois chez la tique et l’hôte vertébré ouvre de nombreuses voies de recherche quant à la compréhension de ses fonctions. / Ixodes ricinus tick species, the most abundant and widespread tick in Europe, is an important vector of pathogens affecting both animal and human health. To replace the use of acaricides that generate environmental contamination and resistances, new environmentally sustainable approaches providing broad protection against ticks and tick-borne pathogens (TBP) are urgently needed. Such development requires improved understanding of the biology of ticks and more particularly of their interactions with vertebrate hosts and TBP. Tick saliva is an essential biofluid for ticks, as its proteolytic, anticoagulant, immunomodulatory, analgesic and anti-inflammatory activities allow ticks to acquire their blood meal under optimal conditions. Moreover, injection of saliva during blood feeding represents the principal route by which TBP are transmitted to the host. To understand the molecular mechanisms involved in TBP transmission, as well as to identify putative vaccine candidates against I. ricinus, salivary glands from bacteria infected and uninfected ticks were previously compared by high throughput transcriptomics. The most up-regulated transcript following infection was IrSPI, which belongs to the Kunitz/BPTI inhibitor family. Functional analyses via RNAi knockdown experiments revealed that IrSPI enhances both blood feeding and bacterial burden in the salivary glands. This present PhD work concerns then the structural, biochemical and functional characterization of IrSPI as a molecule involved in tick-host-pathogen interactions. Our aim was first to define the structure of IrSPI gene but, unfortunately, while our results have led to progress on this issue, we have not been able to get the full sequence. Then, the dynamic of IrSPI expression was evaluated during both tick feeding and colonization of ticks by pathogens, showing that its expression is induced by blood feeding and TBP but not by Escherichia coli that is not transmitted by I. ricinus. In addition, our results shown the expression of IrSPI in several tick organs, suggesting its implication in several functions in tick physiology. Among them, the discovery of the injection of IrSPI, through the saliva, to the vertebrate host allowed us to consider a role in host responses to tick bite. Evaluation of IrSPI effect on host showed no impact on coagulation through extrinsic pathway, as determined by analysis of thrombin generation time and by fibrinolysis, or in angiogenesis. However, it inhibited the proliferation of mitogen-stimulated CD4+ lymphocytes and increased unstimulated-B cell proliferation. In addition, IrSPI also modulated cytokine production from macrophages and splenocytes, repressing significantly most of proinflammatory cytokines and chemokines. Thus, we demonstrated that IrSPI plays a role in modulating the host immune response during blood feeding. Finally, preliminary results in the identification of the protein’s interactants open many research perspectives for understanding how IrSPI acts in tick physiology and counteracts host responses to tick injury and pathogen transmission.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Castor bean is an oil and biodiesel source. Besides, it has a high seed yield potential in the State of Rio Grande do Sul. The objective of this work was to establish the relationship among the variables: seeds, seedlings, adult plants, grain yield and oil quality in two castor bean hybrids. The experiment was conducted at the Federal University of Santa Maria during the 2007/2008 growing season using the hybrids Sara and Lyra. Three plots of each hybrid were sown; each plot was formed by 13 rows with different distances between plants: 0.4, 0.6 and 0.8 m. Before, an evaluation was conducted in regard to individual characteristics of the seeds on a total of 90 seeds for each hybrids. In each plot, the two central rows consisted of 30 plants and these were evaluated from emergence until harvest comprising seedling, adult plant, grain yield and oil quality. In each group of variables the following propositions were tested: multivariate normality, deviation homocedasticity, and linearity in order to analyze the canonical correlations among groups. For the Sara hybrid, the relationships among groups were established mainly by: seeds of higher weight, width and length positively affected seedling vigor; seedlings correlated with longer epicotyls 14 days after emergence (DAE) and longer hipocotyl 7 DAE that were associated with adult plants height at beginning of flowering, average leaf area, average raceme length, average number of capsules per raceme and negatively the raceme average length; higher adult plants at flowering had more capsules per raceme, higher grain yield and lower average raceme length. In regard to the hybrid Lyra, weight and size of seeds did not affect seedling vigor. The relationship among groups was established by: seedlings with longest epicotyls 7 DAE, smallest epicotyls 14 DAE, less degree-days to emergence and greater number of days to emit the first true leaves determined higher number of inflorescences and average leaf area and lower plant height at flowering and degree-days to flowering; adult plants with the higher number of inflorescences positively affected raceme number. Plants of the hybrid Sara presented significant canonical correlations with most of the variables except for oil quality. For the hybrid Lyra, significant canonical correlations were observed only between the variables of seedlings and adult plants; and, between variables of adult plants and grain yield. For the hybrids studied, the oil quality is not determined by the productive variables. / A mamona é uma matéria-prima que possui excelente qualidade de óleo para a indústria ricinoquímica e para a produção de biodiesel. Além disso, apresenta elevado potencial produtivo no estado do Rio Grande do Sul. O objetivo desse trabalho foi identificar as relações entre as variáveis de: sementes, plântulas, plantas adultas, produção de grãos e qualidade de óleo, em dois híbridos de mamona. O experimento com a cultura de mamoneira, híbridos Sara e Lyra foi conduzido no ano agrícola 2007/2008, no Departamento de Fitotecnia da Universidade Federal de Santa Maria. Foram semeadas três parcelas do híbrido Sara e três do híbrido Lyra. Cada parcela foi constituída por 13 fileiras, com espaçamento entre plantas de 0,4; 0,6 e 0,8 m. Anterior a instalação do experimento em campo, foram realizadas avaliações individuais das características físicas das sementes (180 sementes), sendo 90 do híbrido Lyra e 90 do híbrido Sara. Em cada parcela, as duas linhas centrais foram ocupadas com 30 sementes e as plantas originadas foram avaliadas desde a emergência até a colheita. Além das variáveis de sementes, foram avaliadas as variáveis de: plântulas, plantas adultas, produção de grãos e óleo. Em cada grupo de variáveis foram testadas as pressuposições: normalidade multivariada, homocedasticidade dos desvios, multicolinearidade e linearidade, para a análise de correlação canônica entre os grupos. No híbrido Sara, as relações entre os grupos são estabelecidas principalmente por: sementes de maior massa, largura e comprimento, influenciam positivamente o vigor de plântulas; plântulas com maior comprimento do epicótilo aos 14 DAE (Dias após a emergência) e com maior comprimento do hipocótilo aos sete DAE, influenciam positivamente a altura da planta no início do florescimento, a área foliar média - método do comprimento da nervura principal, o número de inflorescências, o número médio de cápsulas por rácemo e, negativamente, o comprimento médio dos rácemos; plantas adultas com maior número de inflorescências influenciam positivamente o número de rácemos por planta e, plantas adultas mais altas no florescimento determinam maior número médio de cápsulas por rácemo, maior rendimento e menor comprimento médio dos rácemos. No híbrido Lyra, sementes de maior massa e tamanho não influenciam o vigor de plântulas. As relações entre os grupos são estabelecidas principalmente por: plântulas com maior comprimento do hipocótilo aos sete DAE, menor comprimento do epicótilo aos 14 DAE, menos grausdia para emergência e maior quantidade de dias para emitir as primeiras folhas verdadeiras determinam maior número de inflorescências e área foliar média - método do comprimento da nervura principal e, com menor altura da planta no florescimento e graus-dia para o início do florescimento; plantas adultas com maior número de inflorescências influenciam positivamente o número de rácemos. Plantas do híbrido Sara apresentam correlações canônicas significativas entre a maioria dos grupos de variáveis, exceto para a qualidade de óleo. No híbrido Lyra, as correlações canônicas significativas ocorrem somente entre os grupos de plântulas e plantas adultas; e, entre plantas adultas e produção. A qualidade do óleo de mamona, para os híbridos Sara e Lyra, não é determinada pelas variáveis de produção.

Made available in DSpace on 2016-08-31T13:15:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MariaEC_DISSERT.pdf: 1065509 bytes, checksum: 721b2f031ca5cb1d6b91ff7c4badf1ed (MD5) Previous issue date: 2012-02-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The castor bean (Ricinus communis L.), due to its ability to produce satisfactorily under conditions of low rainfall is an alternative of great importance for the Brazilian semiarid region. Currently, however, has been stimulated their irrigated, since, in many cases, irrigation is the only way to ensure the production, mainly in tropical regions of hot, dry climate, which predominates in northeast Brazil. This experiment was conducted to evaluate the influence of irrigation with saline water on growth and yield of castor (BRS Energy), and monitor the evolution of some soil chemical properties along the crop cycle. The experimental design was randomized blocks with six treatments and five repetitions. The treatments consisted of combinations of phases of development of castor bean (vegetative and reproductive), and water salinities (0.55, 2.16, 3.53 dS m-1). Evaluations of growth (plant height, stem diameter and leaf number) were evaluated at 20, 40, 60, 80, 100 days after sowing. The soil samples were carried out concomitantly with the assessments of growth, the layers 0-0.10; 0.10 to 0.30, 0.30-0.50 m. The soil chemical properties were evaluated exchangeable sodium, exchangeable sodium percentage, electrical conductivity and pH. We also evaluated yield components, number and length of the racemes, number and weight of fruit, productivity and total productivity of the racemes. The results indicated that irrigation with saline water throughout the cycle of the castor bean productivity decreased approximately 26% compared with the water of low salinity. The adoption of management of water salinities increased sharply attributes Na +, PST and CE, but the conditions studied there was no negative impacts on the salinity / sodicity / A mamoneira (Ricinus communis L), por apresentar capacidade de produzir satisfatoriamente sob condições de baixa precipitação é uma alternativa de grande importância para o semiárido brasileiro. Porém, atualmente tem sido estimulado o seu cultivo irrigado, uma vez que, em muitas situações, a irrigação é a única maneira de garantir a produção, principalmente em regiões tropicais de clima quente e seco, predominante no nordeste brasileiro. Esse experimento foi realizado com o objetivo de avaliar a influência da irrigação com água salina no crescimento e na produção da mamona (cultivar BRS Energia), além de monitorar a evolução de alguns atributos químicos do solo ao longo do ciclo da cultura. O delineamento experimental foi em blocos casualizados com seis tratamentos e cinco repetições. Os tratamentos resultaram da combinação entre fases de desenvolvimento da mamona (vegetativa e reprodutiva) e águas de diferentes salinidades (0,55; 2,16; 3,53 dS m-1). As avaliações de crescimento (altura de planta, diâmetro de caule e número de folhas) foram realizadas aos 20; 40; 60; 80; 100 dias após a semeadura. As coletas de solo foram realizadas concomitantemente às avaliações de crescimento, nas camadas 0-0,10; 0,10-0,30; 0,30-0,50m. Os atributos químicos do solo avaliados foram sódio trocável, percentagem de sódio trocável, condutividade elétrica e pH. Também foram avaliados alguns componentes de produção, como número e comprimento dos racemos, número e peso dos frutos, produtividade dos racemos e produtividade total. Os resultados indicaram que a irrigação com água salina durante todo o ciclo da mamoneira diminuiu a produtividade em aproximadamente 26%, quando comparado com a agua de baixa salinidade. A adoção do manejo das águas de diferentes salinidades aumentou acentuadamente os atributos Na+, PST e CE, porém nas condições estudadas não houve impactos negativos quanto a salinidade/sodicidade do solo

SOUZA, Pedro Filho Noronha de.Purificação, caracterização bioquímica e atividade antimicrobiana de uma nova albumina 2s da torta da mamoneira (Ricinus communis L.), com atividade inibitória contra tripsina. 2012. 114 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2012. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-06-27T14:14:02Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_pfnsouza.pdf: 1847174 bytes, checksum: 6675a05ab248cfb741080071e366161c (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-02T20:11:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_pfnsouza.pdf: 1847174 bytes, checksum: 6675a05ab248cfb741080071e366161c (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T20:11:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_pfnsouza.pdf: 1847174 bytes, checksum: 6675a05ab248cfb741080071e366161c (MD5) Previous issue date: 2012 / Castor bean (Ricinus communis L.) is an important crop for the Northeast of Brazil, which recently has been used to produce biodiesel. Around 90% of the castor bean production in Brazil is concentrated at Northeast region and the state of Ceará is the second largest producer. During the oil extraction process from the castor bean seeds, a resulting residue, called castor cake, is underutilized. However, this byproduct is rich in protein and micronutrients such as nitrogen, phosphorus and potassium, an attribute that qualifies it as a stuff that could be used as organic fertilizer or as animal feed, for example, bringing added value to it. Unfortunately, its use as food has not been possible because of the presence of toxic elements and allergens (ricin, ricinine, complex allergens) in its composition, unless it were previously submitted to a detoxification process. To date, the existing technologies to this end are not economically viable on an industrial scale. Therefore, studies to add value to this abundant byproduct generated in the castor bean biodiesel productive chain is of paramount importance. Thus, in this context, this study was performed to identify, isolate, purify and characterize new bioactive molecules of de-oiled castor cake with biotechnological potential. Through extraction of soluble proteins with 50 mM Tris-HCl pH 7.5, fractionation with ammonium sulfate (50-75%), following by hydrophobic interaction chromatography in Phenyl-Sepharose column and ion exchange chromatography (DEAE-Sepharose), a protein, named Rc-2S-Alb, able to inhibit trypsin was purified. Rc-2S-Alb has a molecular mass of approximately 75.8 kDa, as determined by SDS-PAGE, and under reducing conditions showed a large and a small protein band of 15.8 kDa and 10.5 kDa, respectively. Its NH2-terminal sequence showed similarity with the following proteins: putative 2S albumin precursor (89%), chain A of RicC3 (89%), and chain A of mabilin-1 (89%), all from R. communis seeds; and with the short chain of a "napin-like" protein from Brassica napus (89%). In addition, these similar proteins have two highly conserved domains: QEVQRKDLS and YLRQS. Comparison of the partial primary structure of Rc-2S-Alb generated by the ESI-Q-TOF MS/MS analysis of 17 tryptic peptides, showed 43% similarity to Mabinlin-1 (pI/Mr 6.7 and 29.3 kDa) from R. communis. There were also high similarities among the three-dimensional structures of Rc-2S-Alb, RicC3 and Mabinlin-1. Rc-2S-Alb did not inhibit the spore germination of the phytopathogenic fungi Fusarium oxysporum and Rizoctonia solani, but promoted aggregation of their respective spores. Moreover, Rc-2S-Alb did not inhibit the mycelial growth of Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Rizoctonia solani and Collethotricum gloeosporioides. Contrary, Rc-2S-Alb was effective in inhibiting the growth of the human pathogenic bacteria Pseudomonas aeruginosae, Klebsiella pneumoniae and Bacillus subtilis, at low concentrations. In conclusion, it was established a protocol to purify a new 2S albumin from castor bean cake, which inhibits trypsin and has important antibacterial activity. Thus, the Rc-2S-Alb should be further studied in order to verify its effectiveness as new alternative therapeutic agent against resistant bacteria to commercial antibiotics, which will contribute to improve the human health. / A mamoneira (Ricinus communis L.) é uma cultura importante para a região Nordeste do Brasil, onde, recentemente, tem sido utilizada para produção de biodiesel. O Nordeste detém 90% da produção brasileira de mamona, sendo o Ceará, o segundo maior produtor. No processo de extração de óleo das sementes de mamoneira para produção de biodiesel, o resíduo resultante, denominado de torta da mamona, representa um subproduto pouco utilizado. Apesar disso, essa torta é rica em proteínas e micronutrientes, como nitrogênio, fósforo e potássio, atributo que a qualifica como um insumo que poderia ser utilizado como adubo orgânico, ou mesmo como ração animal, o que lhe agregaria valor comercial. Todavia, seu uso como alimento não tem sido possível por causa da presença de elementos tóxicos e alergênicos (Ricina, Ricinina, Complexos Alergênicos) na sua composição, a não ser que passasse por processamento para sua destoxificação. Infelizmente, tecnologia economicamente viável para esse fim, em escala industrial, ainda é inexistente. Portanto, há necessidade de pesquisas que venham a agregar valor a esse subproduto abundante da cadeia produtiva do biodiesel. Assim, nesse contexto, o presente trabalho está inserido num projeto cujo objetivo maior é identificar, isolar, purificar e caracterizar novas moléculas bioativas da torta delipidada de sementes de mamoeira com potencial biotecnológico. Através de extração de proteínas solúveis com tampão Tris-HCl, 50 mM, pH 7,5, e fracionamento do extrato obtido com sulfato de amônio (50-75%), cromatografia de interação hidrofóbica em coluna Phenyl-Sepharose e cromatografia de troca iônica (DEAE-Sepharose) foi possível purificar uma albumina 2S, denominada Rc-2S-Alb, capaz de inibir tripsina. A Rc-2S-Alb apresentou massa molecular de, aproximadamente, 75,8 kDa, determinada por SDS-PAGE, mas, em condições redutoras, apareceu como uma banda maior de 15,8 kDa e outra menor com 10,5 kDa. Sua sequência NH2-terminal revelou haver similaridade (89%) com o precursor putativo da albumina 2S de R. communis já descrita, com a cadeia A da estrutura da RicC3 (89%), com a cadeia A da mabilin-1, ambas, também, de R. communis (89%), com a cadeia pequena de uma proteina “napin-like”de Brassica napus (89%). Em todas essas proteínas similares, dois domínios, QEVQRKDLS e YLRQS, são altamente conservados. Comparação da estrutura primária gerada por ESI-Q-TOF MS/MS, a apartir de 17 peptídeos trípticos da Rc-2S-Alb, mostrou similaridade de 43% com a Mabinlin-1 (pI/Mr de 6,7 e 29.3 kDa) de R. communis. Em relação à estrutura tridimensional da Rc-2S-Alb, ela apresentou similaridade com a de Ric C3 e Mabinlin-1. A Rc-2S-Alb foi incapaz de inibir a germinação de esporos dos fungos fitopatogênicos Fusarium oxysporum e Rizoctonia solani, mas foi capaz de promover a aglomeração dos mesmos. A Rc-2S-Alb também não foi capaz de inibir o crescimento micelial dos fungos Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Rizoctonia solani e Collethotricum gloeosporioides. Por outro lado, a Rc-2S-Alb foi eficiente em inibir o crescimento de Pseudomonas aeruginosae, Klebsiella pneumoniae e Bacillus subtilis, todas as bactérias patogênicas a seres humanos, quando em baixas concentrações. Como conclusão, foi possível a purificação de uma nova albumina 2S da torta da mamona, capaz de inibir tripsina e com atividade antibacteriana importante. Assim, a Rc-2S-Alb deve ser explorada no sentido de verificar sua eficácia como um novo agente terapêutico alternativo no combate a bactérias resistentes aos produtos disponíveis, hoje, no mercado, o que, se confirmado, poderá contribuir para a melhoria da saúde humana.

SILVA, Rodolpho Glauber Guedes. Purificação, caracterização bioquímica e atividade biológica de um inibidor de tripsina da torta da mamona (Ricinus communis L.). 2012. 94 f. : Dissertação (Mestrado em Bioquímica)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2012. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-07-08T14:25:06Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_rggsilva.pdf: 2026014 bytes, checksum: e5a8d39fc94fdd25a3238ea3dc3908a1 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-02T20:19:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_rggsilva.pdf: 2026014 bytes, checksum: e5a8d39fc94fdd25a3238ea3dc3908a1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T20:19:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_rggsilva.pdf: 2026014 bytes, checksum: e5a8d39fc94fdd25a3238ea3dc3908a1 (MD5) Previous issue date: 2012 / The castor bean (Ricinus communis L.) culture is of great socioeconomic importance because of its seeds, which are used mainly for production of oil that can be used for various industrial purposes. The oil extraction generates a by-product of high nutritional value known as the castor cake. However, the presence of toxic and allergenic compounds hinders the use of this residue to feeding source. Another way to add value to the castor cake would be to seek bioactive molecules that could have applications in agriculture and human health. This study aimed to purify and characterize a trypsin inhibitor of castor cake and, to test this in vitro activity against phytopathogenic fungi of agricultural importance and proteases from the midgut of Aedes aegypti. The trypsin inhibitor of castor cake, named RcTI, was purified by heat treatment, affinity column in anhydrotrypsin-Sepharose® 4B and ion-exchange chromatography ResourceTM Q. RcTI has a apparent molecular mass of 14 kDa in the absence or presence of a reducing agent, pI 5.2 and isn’t a glycoprotein. The NH2-terminal sequence of purified RcTI showed 83% similarity with sulfur-rich storage protein (2S albumin) R. communis and 48% with napin-like (2S albumin) R. communis. The RcTI was stable after heat treatment at 98 °C for two hours. The inhibition on trypsin was stable in the acid pH range. However, there was a loss of approximately 20% inhibitory effect on alkaline pH (pH 8-11). The RcTI (13 µg) was unable to inhibit the germination of spores of the fungus Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani and Fusarium solani. However, it was able to inhibit the germination of spores of Colletotrichum gloeosporioides. RcTI 100 µg was not effective in the inhibition of vegetative growth of the fungi mentioned above. This inhibitor was effective against proteases from the midgut of Aedes aegypti with 91% inhibition. The results of the present study indicate that RcTI has biotechnological potential, can be used as an alternative to combat the important plant pathogenic fungus C. gloeosporioides and larvae of A. aegypti. / A cultura da mamoneira (Ricinus communis L.) é de grande importância socioeconômica devido às suas sementes, que são utilizadas, principalmente, na produção do óleo que pode ser empregado para diversos fins industriais. A extração do óleo gera um subproduto de alto valor nutricional, conhecido como torta da mamona. Porém, a presença de compostos tóxicos e alergênicos dificulta utilização desse resíduo como fonte de alimentação animal. Outra forma de agregar valor à torta da mamona seria buscar moléculas bioativas que pudessem ter aplicações na agricultura e saúde humana. O presente trabalho teve como objetivos purificar e caracterizar um inibidor de tripsina da torta da mamona, bem como, testar a atividade deste in vitro contra fungos fitopatogênicos de importância agrícola e proteases do intestino médio de Aedes aegypti. O inibidor de tripsina da torta da mamona, nomeado RcTI, foi purificado através de tratamento térmico, coluna de afinidade em matriz de anidrotripsina-Sepharose® 4B e cromatografia de troca iônica em ResourceTM Q. Essa proteína apresentou massa molecular aparente de 14,0 kDa na ausência ou presença de agente redutor, pI 5,2 e não é uma glicoproteína. A sequência NH2-terminal do RcTI purificado mostrou similaridade de 83% com uma proteína de armazenamento rica em enxofre (albumina 2S) de R. communis e de 48% com uma napin-like (albumina 2S) de R. communis. O RcTI mostrou-se estável após tratamento térmico a 98 ºC durante duas horas. Da mesma forma, permaneceu com atividade inibitória estável na faixa de pHs ácidos. No entanto, houve uma perda de, aproximadamente, 20% na capacidade inibitória em pHs alcalinos (pH 8-11). O RcTI (13 µg) não foi capaz de inibir a germinação de esporos dos fungos Fusarium oxysporum, Fusarium solani e Rhizoctonia solani. No entanto, foi capaz de inibir a germinação de esporos de Colletotrichum gloeosporioides. O RcTI não foi efetivo na inibição de crescimento vegetativo dos fungos mencionados acima. Esse inibidor foi efetivo contra as proteases intestinais de Aedes aegypti com 91% de inibição. A partir dos resultados obtidos neste trabalho, conclui-se que o RcTI tem potencial biotecnológico, podendo ser utilizado como uma alternativa para o combate do importante fungo fitopatogênico C. gloeosporioides e larvas de A. aegypti.