In order to determine the effects that Maillard Reaction Products (MRP) have on Salmonella Typhimurium, growth rates and virulence expression, in the presence of Maillard reaction products, were observed, using the β−galactosidase Miller Assay and Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction (RT-PCR). The presence of MRP compounds in liquid media caused no negative effect on the growth rate of Salmonella cells. However, the addition of MRP compounds at a 1% level in the media caused a significant increase in hilA expression in Salmonella Typhimurium, and the highest induction levels were observed in media supplemented with arginine and histidine-MRP compounds. There was no effect on the induction of hilA with the 0.5% addition of the MRP compounds in the amended media as shown by the Miller Assay. However, there was an effect seen when using the Real Time RT-PCR assay that resulted in the same levels of significance seen at 1.0% additions of MRPs being seen at the 0.5% level as well. Since rsmC was shown to be a constitutive gene that had continuous levels of expression in Salmonella based on cell number, Real-Time PCR was then used to assess the hilA expression of Salmonella Typhimurium under different oxygen, pH levels, and osmolarity conditions. The results under low oxygen indicate that the combination of low osmolarity and high pH have the highest inducing effect on hilA expression. The hilA response under the same media conditions and a high oxygen environment showed the same pattern of expression as those bacteria grown under a non-aerobic environment. The media with a pH of 8 and low osmolarity conditions had the greatest effect on the induction of hilA with none of the other media showing any significant effect. The relative expression of hilA did decrease for those bacteria grown under aerobic conditions versus those grown under low oxygen conditions.

No description available.

No description available.

Este estudo teve como objetivo detectar a presença do vírus da raiva em diferentes órgãos de morcegos do gênero Artibeus empregando as técnicas moleculares como RT-PCR, hnRT-PCR e Real Time RT-PCR. De aproximadamente 4000 espécimes de morcegos recebidas no Instituto Pasteur para o diagnóstico da raiva, foram selecionados 30 morcegos do gênero Artibeus, com resultados positivos para raiva pelas técnicas tradicionais de IFD e inoculação em células N2A utilizando suspensões feitas a partir do SNC. Para as técnicas moleculares, foram retirados glândulas salivares, bexigas urinárias, rins, pulmões e conteúdos fecais e ainda foram lavadas as calotas cranianas dos espécimes. Os órgãos e conteúdos fecais foram diluídos a 1:10 (P/V) e as bexigas urinárias a 1:20 (P/V). As suspensões foram inoculadas em células N2A para o isolamento viral. Foi realizada a extração do RNA total usando o TRIzol®, foram realizadas a transcrição reversa seguida da PCR e hnRT-PCR com utilização de primers específicos para o gene codificante da proteína N. A partir do produto da transcrição reversa foi realizada a técnica de Real Time RT-PCR, utilizando primers e sonda específicos para variante antigênica 3. Das 30 suspensões de lavado cerebral, 28 (93,33%) resultaram positivos, na inoculação em cultura de células, seguido de glândulas salivares (36,67%), bexigas (16,67%) e conteúdos fecais (3,33%). Os resultados encontrados da sensibilidade nas técnicas de RT-PCR, hnRT-PCR e Real Time RT-PCR foram 56,25%, 82,57% e 82,19% quando avaliadas as 180 amostras analisadas. A comparação das técnicas de hnRT-PCR e Real Time RT-PCR feita pelo teste exato de Fisher quanto a proporção de positivos detectados mostrou que para o lavado cerebral, órgãos e conteúdos fecais a proporção foi igual (P>0,05). Em relação à positividade os resultados encontrados nas técnicas de hnRT-PCR e Real Time RT-PCR foram 100% em lavado cerebral; 90% e 93,33% em glândulas salivares; 83,33% e 90% em bexigas; 80% e 93,33% em rins; 76,67% e 50% em pulmões e 43,33% em ambas as técnicas em conteúdos fecais. Esses resultados sugerem que tanto as técnicas de hnRT-PCR como Real Time RT-PCR podem ser utilizadas como métodos complementares para o diagnóstico da raiva e são sensíveis o bastante para o uso em estudos de patogênese. A técnica de Real Time RT-PCR realizada neste estudo se mostrou eficiente em detectar o RABV em diferentes órgãos e tecidos extraneurais com a vantagem de ser uma técnica mais rápida e sensível. / This study was aimed to detect the presence of rabies virus in different organs of the genus Artibeus bats using molecular techniques such as RT-PCR, hnRT-PCR, and the Real Time RT-PCR. From about 4,000 specimens of bats received for rabies diagnosis at the Pasteur Institute, 30 bats of the genus Artibeus were then selected. The selected bats presented positive results by the traditional DFA and N2A-cells inoculation test using brain tissue suspensions. Samples of salivary glands, urinary bladders, kidneys, lungs, and fecal contents and washings of the skulls were collected for the molecular techniques testing. The organs and the fecal contents were diluted at 1:10 (w/v) and the urinary bladder, at 1:20 (w/v) and these suspensions were inoculated into N2A cells for viral isolation. The extraction of the total RNA was performed by using TRIzol® and followed by the reverse transcription and the PCR and the hnRT-PCR were performed by using specific primers for the gene encoding the protein N. The product obtained by the reverse transcription technique was submitted to the Real Time RT-PCR technique, using primers and probe specific for antigenic variant 3 of the rabies virus. Of the 30 suspensions of the brain washings, 28 (93.33%) were positive in N2A cell culture inoculation, followed by the suspensions of the salivary glands (36.67%), bladders (16.67%) and fecal contents (3.33%). For the 180 samples evaluated, the results of sensitivity found for the RT-PCR, hnRT-PCR and Real Time RT-PCR techniques were 56.25%, 82.57%, and 82.19%, respectively. A comparison of hnRT-PCR and Real Time RT-PCR techniques performed by Fisher\'s exact test showed that the proportion of positives detected by the brain washings, organs and of the fecal content was non-significant (P> 0.05). Regarding the results found in hnRT-PCR and Real Time RT-PCR techniques, 100% positives were in brain washing, 90% and 93.33% in salivary glands, 83.33% and 90% in bladders, 80% and 93.33% in kidneys, 76.67% and 50% in lungs and 43.33% for both techniques on fecal contents. These results suggest that both hnRT-PCR and Real-Time PCR techniques can be used as complementary methods for the diagnosis of rabies and are sensitive enough for use in pathogenesis studies. The Real Time RT-PCR technique performed in this study proved to be faster and more sensitive and effective in detecting RABV in different organs and extra neural tissues of bats.

Este estudo teve como objetivo detectar a presença do vírus da raiva em diferentes órgãos de morcegos do gênero Artibeus empregando as técnicas moleculares como RT-PCR, hnRT-PCR e Real Time RT-PCR. De aproximadamente 4000 espécimes de morcegos recebidas no Instituto Pasteur para o diagnóstico da raiva, foram selecionados 30 morcegos do gênero Artibeus, com resultados positivos para raiva pelas técnicas tradicionais de IFD e inoculação em células N2A utilizando suspensões feitas a partir do SNC. Para as técnicas moleculares, foram retirados glândulas salivares, bexigas urinárias, rins, pulmões e conteúdos fecais e ainda foram lavadas as calotas cranianas dos espécimes. Os órgãos e conteúdos fecais foram diluídos a 1:10 (P/V) e as bexigas urinárias a 1:20 (P/V). As suspensões foram inoculadas em células N2A para o isolamento viral. Foi realizada a extração do RNA total usando o TRIzol®, foram realizadas a transcrição reversa seguida da PCR e hnRT-PCR com utilização de primers específicos para o gene codificante da proteína N. A partir do produto da transcrição reversa foi realizada a técnica de Real Time RT-PCR, utilizando primers e sonda específicos para variante antigênica 3. Das 30 suspensões de lavado cerebral, 28 (93,33%) resultaram positivos, na inoculação em cultura de células, seguido de glândulas salivares (36,67%), bexigas (16,67%) e conteúdos fecais (3,33%). Os resultados encontrados da sensibilidade nas técnicas de RT-PCR, hnRT-PCR e Real Time RT-PCR foram 56,25%, 82,57% e 82,19% quando avaliadas as 180 amostras analisadas. A comparação das técnicas de hnRT-PCR e Real Time RT-PCR feita pelo teste exato de Fisher quanto a proporção de positivos detectados mostrou que para o lavado cerebral, órgãos e conteúdos fecais a proporção foi igual (P>0,05). Em relação à positividade os resultados encontrados nas técnicas de hnRT-PCR e Real Time RT-PCR foram 100% em lavado cerebral; 90% e 93,33% em glândulas salivares; 83,33% e 90% em bexigas; 80% e 93,33% em rins; 76,67% e 50% em pulmões e 43,33% em ambas as técnicas em conteúdos fecais. Esses resultados sugerem que tanto as técnicas de hnRT-PCR como Real Time RT-PCR podem ser utilizadas como métodos complementares para o diagnóstico da raiva e são sensíveis o bastante para o uso em estudos de patogênese. A técnica de Real Time RT-PCR realizada neste estudo se mostrou eficiente em detectar o RABV em diferentes órgãos e tecidos extraneurais com a vantagem de ser uma técnica mais rápida e sensível. / This study was aimed to detect the presence of rabies virus in different organs of the genus Artibeus bats using molecular techniques such as RT-PCR, hnRT-PCR, and the Real Time RT-PCR. From about 4,000 specimens of bats received for rabies diagnosis at the Pasteur Institute, 30 bats of the genus Artibeus were then selected. The selected bats presented positive results by the traditional DFA and N2A-cells inoculation test using brain tissue suspensions. Samples of salivary glands, urinary bladders, kidneys, lungs, and fecal contents and washings of the skulls were collected for the molecular techniques testing. The organs and the fecal contents were diluted at 1:10 (w/v) and the urinary bladder, at 1:20 (w/v) and these suspensions were inoculated into N2A cells for viral isolation. The extraction of the total RNA was performed by using TRIzol® and followed by the reverse transcription and the PCR and the hnRT-PCR were performed by using specific primers for the gene encoding the protein N. The product obtained by the reverse transcription technique was submitted to the Real Time RT-PCR technique, using primers and probe specific for antigenic variant 3 of the rabies virus. Of the 30 suspensions of the brain washings, 28 (93.33%) were positive in N2A cell culture inoculation, followed by the suspensions of the salivary glands (36.67%), bladders (16.67%) and fecal contents (3.33%). For the 180 samples evaluated, the results of sensitivity found for the RT-PCR, hnRT-PCR and Real Time RT-PCR techniques were 56.25%, 82.57%, and 82.19%, respectively. A comparison of hnRT-PCR and Real Time RT-PCR techniques performed by Fisher\'s exact test showed that the proportion of positives detected by the brain washings, organs and of the fecal content was non-significant (P> 0.05). Regarding the results found in hnRT-PCR and Real Time RT-PCR techniques, 100% positives were in brain washing, 90% and 93.33% in salivary glands, 83.33% and 90% in bladders, 80% and 93.33% in kidneys, 76.67% and 50% in lungs and 43.33% for both techniques on fecal contents. These results suggest that both hnRT-PCR and Real-Time PCR techniques can be used as complementary methods for the diagnosis of rabies and are sensitive enough for use in pathogenesis studies. The Real Time RT-PCR technique performed in this study proved to be faster and more sensitive and effective in detecting RABV in different organs and extra neural tissues of bats.

Os Vesiculovirus são um gênero de vírus de RNA da família Rhabdoviridae que inclui os sorotipos Carajás, Cocal, Marabá, Piry, Alagoas e Indiana. Estes são causadores de estomatite vesicular em ruminantes e doença febril humana no Brasil. As vesiculoviroses e suas epidemiologias são pouco conhecidas em seres humanos. Ainda, os Vesiculovirus (VSV) são pouco diagnosticados no homem e em animais pela escassez de métodos laboratoriais diagnósticos. Por isso, objetivamos neste trabalho desenvolver e testar uma RT-PCR em tempo real, pelo método SYBR Green, visando à detecção de VSV brasileiros. Primers que amplificam parte do gene da proteína G dos VSV foram utilizados no teste o qual mostrou-se capaz de detectar genomas dos VSV Piry, Indiana, Alagoas e Carajás. O método foi usado para testar amostras séricas de pacientes com doença febril aguda, de bovinos, de equinos e de macerados de artrópodos. A RT-PCR em tempo real mostrou-se 100 vezes mais sensível que a RT-PCR convencional para Vesiculovirus e também, permitiu detectar até 10 cópias de RNA do vírus Piry. Ainda, a RT-PCR em tempo real para Vesiculovirus mostrou-se capaz de diagnosticar e quantificar o VSV Alagoas nas amostras séricas de bovinos e de equinos. Portanto, a RT-PCR em tempo real desenvolvida neste trabalho, provavelmente, será muito útil no diagnóstico e também, em futuras pesquisas, que permitirão ampliar o conhecimento epidemiológico, ainda pouco conhecido, sobre os Vesiculovirus. / The Vesiculovirus is a Rhabdoviridae family genre of RNA virus that includes serotypes Carajás, Cocal, Maraba, Piry, Alagoas and Indiana. These are causes of vesicular stomatitis in ruminants and human febrile illness in Brazil. The vesiculoviroses and its epidemiology are little known in humans. Still, Vesiculovirus (VSV) are poorly diagnosed in humans and laboratory animals by the lack of diagnostic methods. Therefore, we proposed in this work to develop and test a real-time RT-PCR by SYBR Green method, focusing on the detection of Brazilian VSV. Primers that amplify part of the VSV G protein gene were used in the test which proved capable of detecting genomes of VSV Piry, Indiana, Alagoas and Carajás. The method was used to test serum samples from patients with acute febrile disease, cattle, horses and macerated arthropods. Real time RT-PCR showed to be 100 times more sensitive than conventional RT-PCR for Vesiculovirus and also was possible to detect up to 10 RNA copies of the Piry virus. Also, the real-time RT-PCR for Vesiculovirus proved able to diagnose and quantify Alagoas VSV in serum samples from cattle and horses. Therefore, the real-time RT-PCR developed in this work will probably be very useful in the diagnosis and in future research, which will increase the epidemiological knowledge, as it is still little known about the Vesiculovirus.

Alicyclobacillus acidoterrestris são bactérias termoacidófilas esporofórmicas não patogênicas e estão comumente presentes em sucos de frutas ácidas, podendo deteriorá-los. Tendo em vista a importância da atividade agrícola e seus derivados no país, como suco de laranja industrializado, o interesse no desenvolvimento de técnicas bioanalíticas que propiciem uma detecção rápida, sensível e confiável, bem como alternativas para inativação desse microrganismo, é elevado. Neste trabalho foi testado o uso de saponina como agente inibidor de esporos e células vegetativas de A. acidoterrestris, em sucos de laranja concentrado e reconstituído. Entretanto, à temperatura ambiente a inibição é lenta, especialmente para esporos (cerca de 10 dias para inibição total), inviabilizando o seu uso na indústria de cítricos. A combinação de tratamento térmico e saponinas potencializaram a inibição da bactéria, o que torna possível sua aplicação industrial. A potencialização com temperatura alcançou 20% para esporos em suco concentrado, 28,5% para esporos em suco reconstituído e 45,1% para células vegetativas em sucos reconstituídos. A detecção da viabilidade celular foi realizada pela reação em cadeia da polimerase por transcrição reversa (RT-PCR), que se mostrou uma técnica rápida, sensível, e quantitativamente equivalente ao método padrão de detecção, o plaqueamento de culturas, sendo o coeficiente de correlação (r) entre as técnicas de 0,9977 para esporos e 0,9987 para células vegetativas. A quantificação dos produtos da RT-PCR foi realizada por eletroforese capilar em microchip com o equipamento Bioanalyzer 2100. O equipamento forneceu resultados confiáveis e reprodutíveis para diagnóstico de DNA transcrito de A. acidoterrestris. Além da alta sensibilidade, o equipamento permitiu um mínimo consumo de amostra (1 μL), praticidade e rapidez. / Alicyclobacillus acidoterrestris are termoacidophilic sporeforming nonpathogenic bacteria who are commonly present in acidic fruit juices and can deteriorate them. In view of the importance of agricultural activities in the country and its derivatives, such as industrialized orange juice the interest in the development of bioanalitycal techniques that provide early, sensitive, and reliable detection, as well as alternatives to inactivate the microorganism is elevated. This study tested the use of saponins as an inhibitor of spores and vegetative cells of A. acidoterrestris in both concentrate and reconstituted orange juices. At room temperature, however, the inhibition is slow, especially for spores (about 10 days for a total inhibition), preventing its use in the citrus industry. The combination of heat treatment and saponins potentiated the inhibition of bacteria, which makes possible their industrial application. Optimizing the temperature reached 20% for spores in juice concentrate, 28.5% for spores in reconstituted juice and 45.1% for vegetative cells in reconstituted juices. Detection of cell viability was performed by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR), which showed to be a fast, sensitive, and quantitative equivalent to the traditional plating technique, and the correlation coefficient (r) between the techniques were 0.9977 and 0.9987 for spores and vegetative cells, respectively. The quantification of the products of RT-PCR was performed by capillary electrophoresis on microchip with Bioanalyzer 2100 equipment. The equipment provided reliable and reproducible results for the diagnosis of DNA transcript of A. acidoterrestris. Besides of high sensitivity, the equipment allowed minimal consumption of sample (1 μL) and provided convenience and speed of analysis.

Os Vesiculovirus são um gênero de vírus de RNA da família Rhabdoviridae que inclui os sorotipos Carajás, Cocal, Marabá, Piry, Alagoas e Indiana. Estes são causadores de estomatite vesicular em ruminantes e doença febril humana no Brasil. As vesiculoviroses e suas epidemiologias são pouco conhecidas em seres humanos. Ainda, os Vesiculovirus (VSV) são pouco diagnosticados no homem e em animais pela escassez de métodos laboratoriais diagnósticos. Por isso, objetivamos neste trabalho desenvolver e testar uma RT-PCR em tempo real, pelo método SYBR Green, visando à detecção de VSV brasileiros. Primers que amplificam parte do gene da proteína G dos VSV foram utilizados no teste o qual mostrou-se capaz de detectar genomas dos VSV Piry, Indiana, Alagoas e Carajás. O método foi usado para testar amostras séricas de pacientes com doença febril aguda, de bovinos, de equinos e de macerados de artrópodos. A RT-PCR em tempo real mostrou-se 100 vezes mais sensível que a RT-PCR convencional para Vesiculovirus e também, permitiu detectar até 10 cópias de RNA do vírus Piry. Ainda, a RT-PCR em tempo real para Vesiculovirus mostrou-se capaz de diagnosticar e quantificar o VSV Alagoas nas amostras séricas de bovinos e de equinos. Portanto, a RT-PCR em tempo real desenvolvida neste trabalho, provavelmente, será muito útil no diagnóstico e também, em futuras pesquisas, que permitirão ampliar o conhecimento epidemiológico, ainda pouco conhecido, sobre os Vesiculovirus. / The Vesiculovirus is a Rhabdoviridae family genre of RNA virus that includes serotypes Carajás, Cocal, Maraba, Piry, Alagoas and Indiana. These are causes of vesicular stomatitis in ruminants and human febrile illness in Brazil. The vesiculoviroses and its epidemiology are little known in humans. Still, Vesiculovirus (VSV) are poorly diagnosed in humans and laboratory animals by the lack of diagnostic methods. Therefore, we proposed in this work to develop and test a real-time RT-PCR by SYBR Green method, focusing on the detection of Brazilian VSV. Primers that amplify part of the VSV G protein gene were used in the test which proved capable of detecting genomes of VSV Piry, Indiana, Alagoas and Carajás. The method was used to test serum samples from patients with acute febrile disease, cattle, horses and macerated arthropods. Real time RT-PCR showed to be 100 times more sensitive than conventional RT-PCR for Vesiculovirus and also was possible to detect up to 10 RNA copies of the Piry virus. Also, the real-time RT-PCR for Vesiculovirus proved able to diagnose and quantify Alagoas VSV in serum samples from cattle and horses. Therefore, the real-time RT-PCR developed in this work will probably be very useful in the diagnosis and in future research, which will increase the epidemiological knowledge, as it is still little known about the Vesiculovirus.

Made available in DSpace on 2015-04-20T12:31:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Regina Maria Pinto de Figueiredo.pdf: 895178 bytes, checksum: 18bad8fbb4a4c9f02c1af51dee70295b (MD5) Previous issue date: 2008-01-29 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Dengue virus infection increased significantly in Brazil during the last decade, particularly after 1994, as a consequence of Aedes aegypti dissemination. Vector dispersion was followed by the introduction of DEN-1, DEN-2 and DEN-3 serotypes in major Brazilian cities and the co-circulation of different serotypes has led to the first cases of dengue hemorrhagic fever (DHF). This study had as objectives: Isolate in cell culture samples of dengue virus circulating in the state of Amazonas; identify the serotypes of the dengue virus through sorologicas and molecular techniques; to correlate the clinical and laboratory most important cases of dengue, of dengue hemorrhagic fever (DHF) and dengue by shock syndrome (DSS), with each serotype; comparing the results obtained through the sequencing parcial of genes C and prM of samples of dengue found in this study compared with the sequences deposited in GenBank. Between January 2005 and June 2007, 534 blood samples were collected from patients with clinical symptoms of dengue fever who were negative for malaria. Anti-dengue immunoglobulin M (IgM) specific antibodies were detected in 90 (16.8%) samples, from those 40 (44.4%) were PCR-amplified, 13 (32.5%) were typed as DEN-2, 23 (57.5%) as DEN-3 and 4 (10%) as DEN-4. Among the 40 PCR-positive samples, 52 (57,7%) were also positive for viral culture. DEN-3 was isolated from two patients diagnosed with hemorrhagic fever by the WHO criteria. As this work reports the first detection of dengue type 4 viruses in Amazonas, DEN-4 was identified from the sera of three patients with co- infection two of them were DEN-3/DEN-4 co-infection and one DEN-2 / DEN-4. A greater incidence of DEN-3 in relation to DEN-2 and DEN-4, and the absence of DEN-1 circulation. / A infecção pelo vírus dengue aumentou significantemente no Brasil durante a última década, particularmente depois de 1994, como conseqüência da disseminação do Aedes aegypti. A dispersão do vetor foi seguida pela introdução dos sorotipos DEN-1, DEN-2 e DEN-3 nas principais cidades brasileiras e a co-circulação de diferentes sorotipos permitiu o surgimento dos primeiros casos de dengue hemorrágico (DHF). Este estudo teve como objetivos: Isolar em cultura de células amostras dos vírus dengue circulantes no Estado do Amazonas; identificar os sorotipos do vírus dengue por meio de técnicas sorológicas e moleculares; correlacionar os aspectos clínicos e laboratoriais mais importantes dos casos de dengue, febre hemorrágica do dengue (DHF) e da síndrome de choque por dengue (DSS), com cada sorotipo e comparar os resultados obtidos por seqüenciamento parcial dos genes C e prM das amostras de dengue encontradas neste estudo em comparação com seqüências depositadas no GenBank. Entre janeiro de 2005 e junho de 2007, 534 amostras de sangue foram coletadas de pacientes com sintomas clínicos de dengue e negativos para malária. Anticorpos específicos anti-dengue (IgM) foram detectados em 90 (16,8%) amostras, dessas 40 (44,4%) foram amplificadas, 13 (32,5%) foram tipadas como DEN-2, 23 (57,5%) como DEN-3 e 4 (10%) como DEN-4. Entre as 40 amostras positivas por PCR, 52 (57,7%) foram também positivas no isolamento viral. DEN-3 foi isolado de dois pacientes diagnosticados com DHF pelos critérios da Organização Mundial de Saúde (OMS). No presente trabalho foi também registrada a primeira detecção de DEN-4 no Amazonas. O sorotipo DEN-4 foi identificado em três casos de co- infecção, dois deles foram co- infecções de DEN-3/DEN-4 e um DEN-2 / DEN-4. Foi observada uma incidência de DEN-3 em relação ao DEN-2 e DEN-4, e a ausência da circulação de DEN-1.

Alicyclobacillus acidoterrestris são bactérias termoacidófilas esporofórmicas não patogênicas e estão comumente presentes em sucos de frutas ácidas, podendo deteriorá-los. Tendo em vista a importância da atividade agrícola e seus derivados no país, como suco de laranja industrializado, o interesse no desenvolvimento de técnicas bioanalíticas que propiciem uma detecção rápida, sensível e confiável, bem como alternativas para inativação desse microrganismo, é elevado. Neste trabalho foi testado o uso de saponina como agente inibidor de esporos e células vegetativas de A. acidoterrestris, em sucos de laranja concentrado e reconstituído. Entretanto, à temperatura ambiente a inibição é lenta, especialmente para esporos (cerca de 10 dias para inibição total), inviabilizando o seu uso na indústria de cítricos. A combinação de tratamento térmico e saponinas potencializaram a inibição da bactéria, o que torna possível sua aplicação industrial. A potencialização com temperatura alcançou 20% para esporos em suco concentrado, 28,5% para esporos em suco reconstituído e 45,1% para células vegetativas em sucos reconstituídos. A detecção da viabilidade celular foi realizada pela reação em cadeia da polimerase por transcrição reversa (RT-PCR), que se mostrou uma técnica rápida, sensível, e quantitativamente equivalente ao método padrão de detecção, o plaqueamento de culturas, sendo o coeficiente de correlação (r) entre as técnicas de 0,9977 para esporos e 0,9987 para células vegetativas. A quantificação dos produtos da RT-PCR foi realizada por eletroforese capilar em microchip com o equipamento Bioanalyzer 2100. O equipamento forneceu resultados confiáveis e reprodutíveis para diagnóstico de DNA transcrito de A. acidoterrestris. Além da alta sensibilidade, o equipamento permitiu um mínimo consumo de amostra (1 μL), praticidade e rapidez. / Alicyclobacillus acidoterrestris are termoacidophilic sporeforming nonpathogenic bacteria who are commonly present in acidic fruit juices and can deteriorate them. In view of the importance of agricultural activities in the country and its derivatives, such as industrialized orange juice the interest in the development of bioanalitycal techniques that provide early, sensitive, and reliable detection, as well as alternatives to inactivate the microorganism is elevated. This study tested the use of saponins as an inhibitor of spores and vegetative cells of A. acidoterrestris in both concentrate and reconstituted orange juices. At room temperature, however, the inhibition is slow, especially for spores (about 10 days for a total inhibition), preventing its use in the citrus industry. The combination of heat treatment and saponins potentiated the inhibition of bacteria, which makes possible their industrial application. Optimizing the temperature reached 20% for spores in juice concentrate, 28.5% for spores in reconstituted juice and 45.1% for vegetative cells in reconstituted juices. Detection of cell viability was performed by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR), which showed to be a fast, sensitive, and quantitative equivalent to the traditional plating technique, and the correlation coefficient (r) between the techniques were 0.9977 and 0.9987 for spores and vegetative cells, respectively. The quantification of the products of RT-PCR was performed by capillary electrophoresis on microchip with Bioanalyzer 2100 equipment. The equipment provided reliable and reproducible results for the diagnosis of DNA transcript of A. acidoterrestris. Besides of high sensitivity, the equipment allowed minimal consumption of sample (1 μL) and provided convenience and speed of analysis.