Orientador: Eunice Oba / Coorientador: Ian Martin / Banca: Luciana da Silva Leal / Banca: Frederico Ozanan Papa / Resumo: Os programas que visam aumentar a incorporação de biotecnologias reprodutivas a fim de se obter um incremento genético dos rebanhos bubalinos, visando aumentar a produtividade dos mesmos. No entanto, a melhoria do sistema produtivo e reprodutivo será possível mediante a utilização de tecnologias que viabilizem o melhor aproveitamento dos animais, como a congelação de sêmen. Portanto, o presente estudo teve como objetivo avaliar a qualidade das amostras seminais de búfalos diluídas em três meios diferentes: Botu-bov® (BB), água de coco em pó (ACP-111) e Tris-gema antes e após a criopreservação utilizando o mesmo protocolo. No presente estudo foram utilizados 4 touros bubalinos para colheitas seminais utilizando vagina artificial, os ejaculados foram diluídos com BB, Tris-gema e ACP-111. O sêmen fresco foi analisado quanto ao seu volume, aspecto, cor, concentração (câmara de Neubauer), morfologia realizada por microscopia de interferência diferencial (DIC), cinética pelo sistema CASA e pela microscopia de epifluorescência. Na pós-congelação as amostras foram avaliadas pelo CASA, citometria de fluxo (membrana plasmática, acrossoma, lesões semelhantes à capacitação e fragmentação do DNA) e pela microscopia de epifluorescência. Os diluentes BB e Tris-gema apresentaram melhores resultados para congelação do sêmen de búfalos, em relação ao meio ACP-111 (BB 58,59%; Tris-gema 52,64% e ACP-111 36,94% para MT). Porém o diluente BB demonstrou superioridade em relação à motilidade progressiva espermática (MP para BB, Tris-gema e ACP-111, 47,56%; 40,39% e 29,59% respectivamente), menor porcentagem de índice de fragmentação de DNA (0,85%) e de espermatozoides lesados (24,97%). Assim sendo, mediante o protocolo do presente estudo deduz-se que o BB apresenta superioridade na congelação de sêmen de búfalos, sendo este a melhor opção de diluente para essa biotecnologia / Abstract: These programs aim to increase the incorporation of reproductive biotechnologies in order to obtain a genetic increment of buffalo herds to increase their productivity. However, improving the productive and reproductive system will be possible through the use of technologies that enable the best use of animals, such as semen freezing. Therefore, this study aimed to evaluate the quality of semen samples of buffalo diluted in three different extenders: Botu-bov ® (BB), powdered coconut water (ACP-111) and Tris-yolk before and after cryopreservation using the same protocol. In the present study was used four buffalo bulls for seminal collection using artificial vagina. The ejaculates were diluted with BB, Tris-yolk and ACP-111. The fresh semen was analyzed for volume, appearance, color, concentration (Neubauer chamber), morphology performed by differential interference microscopy (DIC), the kinetic by CASA system and membrane integrity by epifluorescence microscopy. In the post-freeze moment the samples were evaluated by CASA, flow cytometry (plasma membrane, acrosome, lesions similar to capacitation and DNA fragmentation) and by epifluorescence microscopy. The extenders BB and Tris-yolk showed superior results for semen freezing of buffalo in relation to the ACP-111 (BB 58,59%; Tris-yolk 52,64% e ACP-111 36,94% for MT). However the diluent BB demonstrated superiority for progressive sperm motility (MP for BB, Tris-yolk and ACP-111, 47,56%; 40,39% e 29,59% respectiblely), lower percentage of DNA fragmentation (0,85%) and lower percentage of damaged sperm (24,97%). Thus, through the protocol of this study it shows that the BB has superiority in semen freezing of buffalo, appearing to be the best option of extender for this biotechnology / Mestre

Orientador: Elizabeth Romagosa / Coorientador: Giovani Sampaio Gonçalves / Banca: Leonardo Tachibana / Banca: Neuza Sumico Takahashi / Banca: Renata Guimarães Moreira / Banca: Vander Bruno dos Santos / Resumo: Um dos desafios da cadeia produtiva da tilápia é determinar qual a dieta mais adequada de modo a garantir a melhor eficiência reprodutiva. Os experimentos avaliaram o desempenho reprodutivo de tilápias-do-nilo, alimentadas com diferentes níveis de proteína bruta (PB) em duas etapas (I e II): I-Unidade experimental, utilizando quatro dietas (32, 38, 44 e 50% de PB). Observou-se resultados de motilidade (MOT), velocidade curvilinear (VCL), velocidade média do deslocamento (VAP) e velocidade em linha reta (VSL) significativos no sêmen dos machos até uma inclusão de 44% de PB, porém, não foram verificados benefícios relevantes nas fêmeas, sendo que, para todos os tratamentos apresentaram os parâmetros reprodutivos: volume de ovos, número de ovos e fecundidade absoluta sem diferença significativa (p>0,05). II-Piscicultura comercial, utilizando quatro dietas experimentais (32B, 38, 44 e 50% PB) e duas comerciais (32A e 36% PB). Não foram encontrados resultados significativos no desempenho reprodutivo das fêmeas (volume de ovos, fecundidade absoluta e número de ovos produzidos), no entanto, observando os parâmetros avaliados nos machos (MOT, VCL, VAP e VSL) o crescimento e a sobrevivência significativa (p<0,05) das larvas, propõe-se a utilização de dietas contendo 44% de PB em rações para matrizes de tilápia-do-nilo, a fim de se obter resultados satisfatórios na produção em escala comercial (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: One of the challenges of the tilapia reproductive chain is to determine the most appropriate diet in order to ensure better reproductive efficiency. The experiments evaluated the reproductive performance of Nile tilapia fed with different levels of crude protein (CP) in two stages (I and II): I-experimental unit, using four diets (32, 38, 44 and 50% CP). There was a positive response for males up to 44% CP, however, there have not been verified significant benefits in females. II-commercial fish farming, using four experimental diets (32B, 38, 44 and 50% CP) and two commercial diets (32A and 36% CP). There were no significant results on females reproductive performance, however, observing the parameters evaluated in males and the significant growth of the larvae, it is proposes the use of diets containing 44% crude protein in diets for broodstock Nile tilapia, in order to obtain satisfactory results in the production on a commercial scale (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Banca: André Maciel Crespilho / Banca: Rubens Paes de Arruda / Banca: José Antonio Dell'aqua Junior / Banca: Fabíola Soares Zahn / Resumo: Apesar dos benefícios proporcionados pelo plasma seminal durante a cobertura, quando biotecnologias são utilizadas, como a inseminação artificial, sua função é questionável, visto que trabalhos utilizando espermatozoides da cauda do epidídimo acrescido ou não do plasma seminal não apresentaram diferença nas taxas de concepção. Além disso, estudos relataram efeito deletério das secreções das glândulas anexas sobre a viabilidade espermática e taxa de concepção, principalmente em garanhões com baixa qualidade seminal. Neste sentido, o objetivo do presente estudo é: 1) comparar os parâmetros de cinética espermática, viabilidade estrutural e fertilidade dos espermatozoides recuperados do ejaculado e da cauda do epidídimo de garanhões subférteis; 2) avaliar diferenças na composição eletrolítica do plasma seminal de animais com alta e baixa fertilidade. 3) comparar o efeito da adição de plasma seminal de garanhões de alta e baixa fertilidade sobre a congelabilidade e viabilidade dos espermatozoides do ejaculado e da cauda do epidídimo de garanhões subférteis. As avaliações das amostras seminais consistiram na análise computadorizada das características da motilidade (CASA, Thorne Research - HTM IVOS) e nas análises de citometria de fluxo da integridade da membrana plasmática, da integridade acrossomal, da peroxidação das membranas espermáticas, da fragmentação do DNA, da capacitação espermática, da translocação de fosfatidilserina da membrana e da ativação de caspase. Os espermatozoides do epidídimo após descongelação apresentaram superioridade nos parâmetros de cinética e viabilidade espermática, além de melhor fertilidade, demonstrando que estes espermatozoides são mais resistentes ao processo de congelação quando comparado aos espermatozoides do ejaculado. O plasma seminal de garanhões subférteis apresentou maiores concentrações de sódio ... / Abstract: Despite the benefits provided by seminal plasma during natural cover when biotechnology are used as artificial insemination, its function is questionable, since studies using spermatozoa from cauda epididymis with or without the addition of seminal plasma showed no difference in conception rates. Furthermore, studies have reported deleterious effects of secretions from accessory glands on sperm viability and conception rate, especially in stallions with poor semen quality. Thus the aims of this study were: 1) compare the kinetic parameters, structural viability and fertility of sperm recovered from ejaculate and cauda epididymis of subfertile stallions. 2) evaluate differences in electrolyte composition in the seminal plasma of animals with high and low fertility. 3) compare the effect of seminal plasma addition from stallions with high and low fertility on freezability and viability of sperm from the ejaculate and cauda epididymis of subfertile stallions. The assessment of each samples was determined by computer-assisted sperm analyses of motility (CASA, Thorne Research - HTM IVOS) and flow cytometry analyses of plasma membrane integrity, acrosome integrity, peroxidation of sperm membranes, DNA fragmentation index, degree of protein tyrosine phosphorylation in sperm surface and caspase activity. The epididymal sperm after thawing showed superiority in kinetic parameters and sperm viability, as well as better fertility, demonstrating that these spermatozoa are more resistant to freezing process when compared to sperm from the ejaculate. The seminal plasma of subfertile stallions has higher sodium concentrations in the seminal plasma than fertile stallions, what makes this finding a possible way to explain the deleterious effect of seminal plasma in these animals. Moreover, it was found that this deleterious effect is dose-dependent since the addition of 20% of seminal plasma from fertile and ... / Doutor

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Banca: José Antonio Dell'Aqua Júnior / Banca: Rubens Paes de Arruda / Resumo: A utilização de sêmen criopreservado na reprodução de eqüinos depara-se com obstáculos como: variabilidade entre garanhões e ejaculados ao processo de criopreservação, taxas de prenhez inferiores ao sêmen fresco e refrigerado, manejo mais trabalhoso e oneroso das éguas e ausência de padrões de qualidade na distribuição e comercialização do sêmen. Neste trabalho foram realizados dois experimentos, no qual primeiramente, avaliou-se o efeito de diferentes concentrações espermáticas em palhetas de 0,5 mL (100, 200 e 400 x 106 de espermatozóides totais/mL) sobre algumas variáveis de qualidade seminal pós-descongelação como: parâmetros de cinética espermática através de análise computadorizada, integridade de membrana plasmática e resistência à peroxidação lipídica. Posteriormente, realizou-se um estudo comparativo entre a inseminação pós-ovulação e a inseminação em tempo pré-determinado, avaliando-se os resultados de concepção e acúmulo de fluido intra-uterino pós-inseminação. Ao empregar a metodologia de inseminação pós-ovulação, realizou-se uma única inseminação dentro do intervalo de até 6 horas pós-ovulação com 800x106 de espermatozóides totais e para o método programado, realizaram-se duas inseminações após 24 e 40 horas pós-indução da ovulação, com 400x106 de espermatozóides totais cada. Foi observado efeito significativo da concentração espermática (p<0,05) sobre algumas variáveis de cinética espermática como: motilidade total, motilidade progressiva, velocidade ao longo de uma trajetória média, velocidade progressiva, velocidade curvilinear, freqüência de batimento flagelar e espermatozóides rápidos, com superioridade para a criopreservação em concentrações mais baixas. No entanto, para as variáveis de integridade de membrana plasmática e resistência à peroxidação lipídica não foram... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The cryopreserved semen application in equine reproduction appears with obstacles as variability between stallions and ejaculates at the cryopreservation process, lower pregnancy rates compared to the fresh and cooled semen, harder and onerous mares' management and absence of quality pattern in distribution and semen commercialization. In this study were realized two experiments which one, firstly, was evaluated the effect of different sperm concentrations in straws of 0.5 mL (100, 200 and 400x106 total sperm/mL) over some variables of seminal quality after thaw as: parameters from sperm kinetics by computer analysis, plasmatic membrane integrity and resistance to lipid peroxidation. Subsequently, it was realized a comparative study between the insemination after ovulation and the insemination in fixed-time, evaluating the results of conception and intrauterine fluid collection after insemination. When the methodology of insemination after ovulation was employed, it was realized a single insemination during the interval of 6 hours after ovulation with 800x106 total spermatozoa and for the programmed method, two inseminations with 400x106 doses of total spermatozoa each one, were done after 24 and 40 hours after induction of ovulation. It was observed significant effect from sperm concentration (p<0,05) over some variables of sperm kinetics like: total motility, progressive motility, velocity in the average path velocity, straight line velocity, curvilinear velocity, beat cross frequency and rapid spermatozoa, with superiority for cryopreservation in lower concentrations. However, for the variables of plasmatic membrane integrity and resistance to lipid peroxidation were not observed significant effects. In respect to the insemination methods, it was not observed significative effect (p<0.05) over the pregnancy rates between one insemination after ovulation and two inseminations... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Elizabeth Romagosa / Banca: Laura Helena Orfão / Banca: Luis David Solis Murgas / Banca: Marcos Weingartner / Banca: Adilson Reidel / Resumo: O objetivo do trabalho foi de adaptar metodologias de análises espermáticas e aprimorar o processo de fertilização artificial e condições de estocagem de gametas de surubim-do-paraiba, Steindachneridion parahybae: espécie de peixe criticamente ameaçada de extinção. Para tanto, foram realizados quatro ensaios experimentais: (1) validação de método e avaliação dos parâmetros espermáticos por meio de software livre. (2) determinação da dose inseminante e volume de água empregados na fertilização artificial; (3) estocagem de ovócitos in natura em quatro temperaturas ao longo de 355 minutos; (4) estocagem do sêmen in natura em quatro temperaturas ao longo 112h. Observou-se que o método de análise espermática utilizando o software de código aberto ImageJ/plugin CASA é uma ferramenta eficiente, exata, objetiva e barata, além de possibilitar uma nova perspectiva de análises em peixes nativos. As configurações estabelecidas no presente trabalho poderão servir de base para novos trabalhos relacionados às análises espermáticas do surubim-do-paraíba, bem como de outras espécies. Verificou-se que a quantidade de espermatozóides e o volume de água interferem diretamente no procedimento de fertilização artificial, com melhores resultados na utilização de 5,5×106 espermatozóides ovócito-1 e 1,0mL de água g-1 de ovócitos. Foi observado que a estocagem de ovócitos e sêmen de forma in natura não é recomendada em ambientes com temperaturas superiores a 25ºC e inferiores a 15ºC. Temperaturas intermediárias (15-25ºC) possibilitam melhores condições e prolongam a qualidade dos gametas, entretanto, recomenda-se em procedimentos de fertilização artificial da espécie, a coleta do sêmen antes que os ovócitos. Os resultados obtidos no presente trabalho além de proporcionarem aumento das... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim was to adapt methodologies of sperm analysis and to improve the artificial fertilization process and gamete storage conditions of surubim-of-paraiba, Steindachneridion parahybae: critically endangered fish species. So that, four experimental tests were performed: (1) validation of method and evaluation of sperm parameters using free software. (2) determination of the inseminating dose and water volume used in artificial fertilization, (3) storage of fresh oocytes into four temperatures over 355 minutes, (4) storage of fresh semen into four temperatures over 112h. It was observed that the sperm analysis method using open source software ImageJ/plugin CASA is an effective tool, accurate, objective and inexpensive, besides enables a new perspective of the analysis on the native fish. The settings established in this study could serve as a basis for further work related at sperm analysis of surubim-do-paraiba and other species. It was found that sperm quantity and water volume interfere directly in the procedure of artificial fertilization, with improved results on usage of 5.5×106 spermatozoa oocyte-1 and 1.0 ml of water g-1 of oocyte. It was observed that the fresh oocytes and sperm storage is not recommended in environments with temperatures above 25ºC and below 15ºC. Intermediate temperatures (15-25ºC) enable better results and prolong the gametes quality, however, it is recommended in the artificial fertilization procedures the semen collection before the oocytes. The results obtained in this study providing increased rates of fertilization and hatching, besides to allow gametes optimization through of the utilization of controlled manner, and with satisfactory quality for more time after collection. Besides, these results provide a basis for future research, contributing to the... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Gilson Hélio Toniollo / Coorientador: Márcia Rita Fernandes Machado / Banca: Marion Burkhardt de Koivisto / Banca: Benedito Dias de Oliveira Filho / Banca: Lindsay Unno Gimenes / Banca: Tais Harumi de Castro Sasahara / Resumo: O objetivo geral deste estudo foi descrever as respostas inflamatórias de jumentas Pêga ao sêmen fresco (MN), sêmen extendido (SE) e sêmen congelado (SC) de jumento, tendo como objetivo específico correlacionar esses achados com os baixos índices de gestações de jumentas Pêga por inseminação artificial (IA) com SC. Foram avaliadas diariamente 25 jumentas, através de rufiações, palpações transretais e exames ultrassonográficos durante maio de 2012 a março de 2013. Foram observados 234 estros, sendo 33 (14,22%) estros anovulatórios e 11 (4,74%) duplas ovulações; o comprimento do ciclo estral foi de 28,88±0,95 dias, com sinais externos de estro de 4,50±0,35 dias e o tempo de ovulação em relação ao término do estro de 8,0±2,45 horas entre as 25 jumentas. Diante dos resultados obtidos, as jumentas não apresentaram sazonalidade reprodutiva. Selecionaram-se 12 jumentas ao acaso, as quais foram biopsiadas em diestro para avaliação reprodutiva e nos ciclos estrais subsequentes, as mesmas foram submetidas à uma das técnicas: monta natural (MN), IA-SE e IA-SC próximo à ovulação, realizando-se biópsia endometrial 10 horas após cada evento. Os fragmentos foram conservados em formalina a 10%, solução de Bouin e solução de glutaraldeído tamponado a 10% para análise em microscopia de luz (ML), microscopia eletrônica de varredura (MEV) e microscopia eletrônica de transmissão (MET). As amostras endometriais das jumentas em diestro apresentaram pregas e sulcos do endométrio, células microvilosas e ciliadas, livre de processos patológicos incompatíveis com a reprodução; em estro apresentaram epitélio colunar simples, evidenciando células microvilosas e células ciliadas, com núcleos ovalados, cromatina condensada e, no citoplasma, presença de mitocôndrias, vacúolos e corpúsculos elétron-densos. Formações semelhantes a bolhas estavam presentes nas superfícies das células microvilosas. As glândulas ... / Abstract: The general objective of this study was to describe the inflammatory responses in Pêga Jennies from fresh (NM), extended (ES) and frozen (CS) semen from Jackass. The specific objective was to correlate these responses with low pregnancy rates in Jennies after artificial inseminations (AI) with frozen semen. Twenty five Jennies were daily evaluated by teasing, rectal examination and ultrasound from May 2002 to March 2013. Estrous cycles (n=234) were followed, with 33 (14.22%) non- ovulatory estrous and 11 (4.74%) double ovulations. The estrous cycle length was 32.68±0.76 days, with external heat signs of 4.49±0.23 days and time of ovulation in relationship to end of estrous of 5.68±7.18 hours for Jennies during the observed period. The estrous cycle was 28.88±0.95 days; with external heat signs of 4.50±0.35 days and time to ovulation in relation to end of estrous of 8.0±2.45 hours among 25 Jennies. Thus, considering the obtained results there was no reproductive seasonality. Twelve Jennies were casually selected for biopsy during diestrous being reproductively evaluated and subsequently submitted to one of those: natural mount (NM), AI- ES and AI-CS near the time of ovulations; and then submitted to endometrial biopsy 10 hours latter. Each fragment was maintained in formalin 10%, Bouin solution and Buffer glutaraldehyde 10% for Ligh Microscopy (LM), Scanning Electron Microscopy (SEM) and Transmission Electron Microscopy (TEM). The endometrial samples from Jennies in diestrous presented folds and endometrial grooves, microvillus cells and ciliated cells, free of process that could compromise reproduction. The estrous samples presented simple columnar epithelium, circled nuclei, condensed chromatin and at the cytoplasm, mitochondrial vacuoles and electro- dense corpuscles. Similar structures to blebs were present at the microvilli cell surface. The endometrial glands were completed by secretions that were shown with major evidence ... / Doutor

Orientador: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Coorientador: Maricy Apparício Ferreira / Banca: Eliandra Antonia Pires Buttler / Banca: Juliana Corrêa Borges Silva / Resumo: Este estudo foi conduzido com o objetivo de o uso do meio diluente Botu-crio associado a vitamina E, em diferentes concentrações, que se demonstrem efetivas para a criopreservação de sêmen obtido de recuperado epididimário em felinos domésticos. Cinquenta e quatro gatos domésticos foram utilizados no experimento após serem submetidos à orquiectomia eletiva e os espermatozóides obtidos diretamente da cauda e ducto deferente do epidídimo. Foram constituídos 18 "pools", com o material de três animais cada e estes, divididos em quatro grupos experimentais. No grupo controle (G0) o sêmen foi congelado com o diluente Botu-Crio®. Nos grupos G 0,3, G 0,6 e G 0,9, ao diluente Botu-Crio® foi acrescido vitamina E em três concentrações, 0,3, 0,6 e 0,9mM, respectivamente. Para cada grupo, as amostras de sêmen fresco foram inicialmente avaliadas quanto à motilidade, vigor, morfologia supravital e teste hiposmótico, para verificar a qualidade mínima exigida para a congelação (motilidade ≥70% e vigor ≥3). Os mesmos parâmetros foram reavaliados após a descongelação também para o TBARS. Na avaliação da motilidade e vigor, não foi observado diferença estatística entre o grupo controle e as concentrações de vitamina E. Nos testes supravital, hiposmótico, morfológico e teste TBARS, também não houve significância entre as três diferentes concentrações de vitamina E e o grupo controle. Pode-se concluir que as três concentrações de vitamina E, não ofereceram proteção antioxidante ao recuperado de epidídimo de felinos domésticos / Abstract: This study was conducted with the objective of using the medium Botu-crio®, associated vitamin E, at different concentrations, which demonstrate effective for cryopreservation of epididymal semen obtained recovered from domestic cats. Fifty-four domestic cats were used in the experiment after undergoing elective orchiectomy and sperm obtained directly from the tail of the epididymis and vas deferens. 18 " pools " were made with the material of three animals each and these were divided into four experimental groups. In the control group (G0) semen was frozen with Botu-crio®. In the groups G 0.3, G 0.6 to G 0.9, the diluent was added at three concentrations of vitamina E, 0.3, 0.6 and 0.9 mM, respectively. For each group, the fresh semen samples were initially evaluated for motility, viability, morphology and supravital and hypoosmotic test to verify minimum quality required for freezing (≥ 70 % motility and vigor ≥ 3). The same parameters were reassessed after thawing also for TBARS. In the evaluation of motility and vigor, no statistical difference was observed between the control group and the concentrations of vitamin E. In supravital tests, hyposmotic, morphological and TBARS assay, there was no significance between the different concentrations of vitamin E and the control group. It can be concluded that the three concentrations of vitamin E, antioxidant protection not offered recovered from epididymis of domestic cats / Mestre

Orientador: Laura Satiko Okada Nakaghi / Coorientador: Alexandre Ninhaus Silveira / Banca: Elizabeth Romagosa / Banca: Sergio Fonseca Zaiden / Banca: George Shigueki Yasui / Banca: Paulo Sérgio Ceccarelli / Resumo: A Tese de Doutorado foi estruturada em três capítulos, além da "Introdução Geral", que abrange uma revisão bibliográfica das espécies em estudo e dos temas abordados, e das "Considerações Finais". Os três capítulos darão origem a artigos científicos em revistas indexadas. O primeiro artigo (Capítulo I) descreve os parâmetros seminais e a ultraestrutura dos espermatozoides de Brycon vermelha, "vermelha" (Characiformes, Characidae). O sêmen da B. vermelha possuiu consistência viscosa, e concentração espermática média de 4,34 ± 0,75x1010 espermatozoides.mL-1. O tempo de motilidade espermática, quando ativado com água destilada, foi curto, sendo necessários 46,48 ± 0,07 segundos para perda da motilidade de 100% dos espermatozoides. A análise dos espermatozoides por MEV revelou três regiões distintas: cabeça, peça intermediária e flagelo, sendo cada região caracterizada detalhadamente em MET. Tais características sugerem que os espermatozoides de B. vermelha apresentam características ancestrais próprias de peixes com fecundação externa classificando-os como "espermatozoides aquáticos uniflagelados anacrossomais", ou seja, aquasperm do Tipo I. Estas informações são as primeiras em relação ao sêmen e espermatozoides de B. vermelha, podendo ser uma referência para futuros estudos, embasando especialmente pesquisas que adotem biotécnicas, como a criopreservação e androgênese. O segundo artigo (Capítulo II) descreve, ultraestruturalmente, as alterações dos espermatozoides da Brycon orbignyanus, "piracanjuba" (Characiformes, Characidae) durante o processo de criopreservação. O exame ultraestrutural dos espermatozoides descongelados criopreservados em soluções contendo DMSO, metilglicol e metanol, em três tempos de armazenamento (1 dia, 1 mês e 1 ano), revelou a presença de alterações no espermatozoide, variando desde ... / Abstract: The doctoral thesis consisted of three main chapters besides the "General Introduction", which includes a bibliographic review of the species studied and the topics discussed, and the "Final Remarks". Scientific research articles will be published from the data of the three chapters in the scientific journals listed in the index. The first scientific article (Chapter I) describes the seminal parameters and the spermatozoa structure of Brycon vermelha, "vermelha" (Characiformes, Characidae). The semen of the Brycon vermelha is viscous and contains, in average, 4.34 ± 0.75x1010 spermatozoa.mL-1. Spermatozoa motility was of short duration when activated with distilled water, 46.48 ± 0.07 seconds until 100% of spermatozoa lost their motility. Scanning transmission electron microscopy (STEM) of spermatozoa revealed three distinctive parts: head, middle piece and tail (flagellum). Each part was analysed in detail by transmission electron microscopy (TEM). The characteristics observed suggest that the spermatozoa of B. vermelha posses ancestral characteristics of fish that reproduce by external fertilization, and can thus be classified as "uniflagellate anacrosomal aquasperms", or aquasperms Type I. These are the first reports on B. vermelha semen and spermatozoa and, therefore, could be used as a reference and benchmark for research studies using biotechniques such as cryopreservation and androgenesis. The second scientific article (Chapter II) describes the ultrastructural alterations of Brycon orbignyanus, "piracanjuba" (Characiformes, Characidae) spermatozoa after cryopreservation. Spermatozoa were cryopreserved for 1 day, 1 month or 1 year in solutions containing DMSO, methyl glycol and methanol. The ultrastructural analysis of the frozen-thawed spermatozoa revealed alterations varying from small damages to the different parts of the cell to total destruction of spermatozoa ... / Doutor

Orientadora: Elizabeth Romagosa / Banca: Sérgio Ricardo Batlouni / Banca: Rodolfo Nardez Sirol / Resumo: O trabalho foi conduzido com o objetivo de avaliar o efeito da temperatura de estocagem a curto prazo e da temperatura da água sobre os ovócitos e sêmen de jundiá, Rhamdia quelen. O experimento foi realizado em três etapas: (1) avaliar a qualidade dos ovócitos após estocagem e ativação em diferentes temperaturas; (2) padronizar a utilização de análise espermática computadorizada por meio de softwares livres; (3) avaliar os parâmetros espermáticos computadorizados após estocagem e ativação em diferentes temperaturas. Para a primeira, utilizou-se um delineamento experimental fatorial no tempo (5×3×3×3), com os tratamentos realizados em triplicata a cada 48h, na exposição de ovócitos nas temperaturas de 15; 25 e 35ºC e, ativados com água à 15; 25 e 35ºC cada, nos períodos de: 0; 45; 90; 135 e 180 minutos pós-coleta. A segunda etapa foi realizada através da captura de vídeos da movimentação espermática pelo software AMCAP, a uma taxa de 60 frames por segundo, processados no software VIRTUALDUB e analisados no software IMAGEJ por meio do aplicativo CASA. Os seguintes parâmetros foram analisados: taxa de motilidade espermática (MOT), velocidade curvilinear (VCL), velocidade média do deslocamento (VMD), velocidade em linha reta (VLR), linearidade (LIN), balanço (BAL) e freqüência de batimentos (FBAT). Os parâmetros espermáticos foram avaliados em um segundo de imagem nos tempos de 15, 25 e 35 segundos após a ativação espermática. Para a terceira etapa foi utilizado um delineamento experimental fatorial no tempo semelhante à primeira ,com 13 tempos de avaliação pós-coleta: 0; 2; 4; 6; 8; 10; 12; 16; 20; 24; 32; 40 e 48 horas. Os tratamentos foram realizados em triplicata e em protocolos sequenciais a cada 50 horas avaliando-se os parâmetros obtidos na segunda etapa. Estes foram submetidos às análises de correlação (Pearson) ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The study was conducted to evaluate the effect of temperature of storage in the short-term and the temperature of the water on the oocytes and sperm of jundiá, Rhamdia quelen. The experiment was conducted in three stages: (1) assess the quality of oocytes after storage and activation at different temperatures; (2) standardize the use of computerized sperm analysis by software free, (3) evaluate the computerized sperm parameters after storage and activation at different temperatures. For the first, was used a factorial experimental design in time (5×3×3×3), with treatments performed in triplicate every 48 hours, the exposure of oocytes at temperatures of 15, 25 and 35 C, and activated with water to 15, 25 and 35 C each, in the periods of: 0; 45; 90; 135 and 180 minutes post-collection. The second stage was performed by video capture of the movement of sperm through AMCAP software at a rate of 60 frames per second, processed and analyzed in VirtualDub software and ImageJ software using the CASA application. The following parameters were analyzed: rate of sperm motility (MOT), velocity curvilinear (VCL), velocity average path (VAP), velocity straight line (VSL), linearity (LIN), wobble (WOB), beating cross frequency (BCF). The sperm parameters were evaluated in a second image in the times of 15, 25 and 35 seconds after sperm activation. For the third step we used a factorial experimental design similar to the first in time, with 13 times of evaluation post-collection: 0; 2; 4; 6; 8; 10; 12; 16; 20; 24; 32; 40 and 48 hours. The treatments were performed in triplicate and sequencing protocols to be evaluated every 50 hours if the parameters obtained in the second stage. These were submitted to analysis of correlation (Pearson). The significant parameters (P<0.05) were summarized by the principals components analysis. For the first stage interaction (P<0.05) between time and temperature... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Frederico Ozanam Papa / Resumo: O pênis é o órgão copulador e no garanhão é classificado como sendo músculo cavernoso, em que os espaços cavernosos são preenchidos de sangue durante a ereção. Nos testículos que ocorre a produção espermática, que são transportados pela rete testis até o epidídimo, onde sofrerão maturação, capacidade fertilizante e armazenados até a ejaculação. As glândulas sexuais acessórias são responsáveis pelos fluidos expelidos durante a ejaculação, denominado de plasma seminal, que se misturam às células espermáticas e formam o ejaculado. Cada uma dessas glândulas são responsáveis por uma determinada secreção que vai direcionar o ejaculado equino a ser dividido em três distintas frações: fração pré-espermática, produzida pelas glândulas bulbouretrais e próstata; fração rica em espermatozoides, produzida pelas secreções do epidídimo e por líquidos das ampolas dos ductos deferentes; fração pós-espermática ou fração pobre, formada por espermatozoides remanescentes no canal uretral e líquidos produzidos pelas vesículas seminais, o gel. Durante o processo fisiológico de cópula, ocorrem vários eventos denominados de ereção, em que o garanhão se excita por estímulos, emissão que caracteriza-se pela liberação de espermatozoides dentro da uretra pélvica, seguido da ejaculação com a expulsão do sêmen, o relaxamento e recolhimento do pênis. Normalmente, as colheitas de sêmen equino são realizadas de forma convencional, com vagina artificial fechada, em que todas as frações se misturam. Cada garanh... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The penis is the copulatory organ and in the stallion it is classified as cavernous muscle and the cavernous spaces are filled with blood during erection. In the testicles occurs sperm production, that are transported through the rete testis to the epididymis, where they will suffer maturation, fertilizer capacity and will be stored until ejaculation. The accessory sex glands are responsible for the expelled fluids during ejaculation, named seminal plasma that are mixed with sperm cells and form the ejaculate. Each of these glands are responsible for a certain secretion that will divide equine semen into three distinct fractions: pre-sperm fraction, produced by the prostate and bulbourethral glands; rich fraction in sperm, produced by epididymal secretions and liquids from ampoules of the vas deferens; post-sperm fraction or poor fraction, consisting of sperm remaining in the urethral canal and liquids produced by the seminal vesicles, the gel. During the physiological process of mating, several events occur named erection, in which the stud is excited by stimuli emission which is characterized by the release of sperm into the pelvic urethra followed by ejaculation with the expulsion of semen, relaxation and gathering the penis. Typically, horse semen collections are performed in the conventional way, with a closed artificial vagina, where all the fractions are mixed. Each stud has individual characteristics related to the maintenance of sperm cells during the cryopreservatio... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre