O herpesvírus bovino tipo 4 (BoHV-4) é um herpesvírus membro da subfamília Gammaherpesvirinae, gênero Rhadinovirus que tem sido detectado em bovinos sadios e com diferentes sinais clínicos em todos os continentes. Sugere-se que este vírus está relacionado com diversas doenças do trato reprodutivo de bovinos. Dessa forma, faz-se necessária a pesquisa desse vírus em amostras biológicas com potencial utilização em biotécnicas de reprodução de bovinos, com o objetivo de reduzir sua transmissão e possíveis prejuízos econômicos advindos de sua infecção. Cento e dezenove amostras de líquido folicular de fêmeas abatidas em frigorífico e 164 amostras de sêmen de centros de inseminação artificial foram submetidas a uma reação de nested PCR para detecção do genoma do BoHV-4. Foi detectado o DNA de BoHV-4 em 2 amostras (1,68%) de liquido folicular e em 14 amostras (8,54%) de sêmen. Sete produtos foram submetidos ao sequenciamento, que revelou a semelhança dessas amostras com amostras europeias. É o primeiro relato de detecção do DNA de BoHV-4 em amostras de líquido folicular de bovinos, o que pode sugerir uma nova via de transmissão desse agente. Dessa forma, as alíquotas de sêmen destinadas à inseminação artificial e os ovários destinados a produção de embriões in vitro necessitam de um controle maior para evitar a disseminação do BoHV-4 entre os rebanhos bovinos e possíveis prejuízos econômicos associados ao vírus. / Bovine herpesvirus type 4 (BoHV-4), a member of the Gammaherpesvirinae subfamily, genus Rhadinovirus has been detected in healthy as well as diseased cattle in all continents. It is suggested that this virus is associated to several disorders of the reproductive tract of bovines, and the virus or its genome has been found in clinical and biological samples like fetuses, semen and cells of the granulosa. Given the lack of evidences on the circulation of BoHV-4 in bovines of Brazil, specifically from samples from the reproductive tract, this study aimed the detection of BoHV-4 DNA from semen and follicular fluids of bovines. One hundred and nineteen follicular fluid samples obtained from a slaughterhouse and 164 semen samples obtained in artificial insemination centers were subjected to a nested PCR for the detection of BoHV-4 DNA. BoHV-4 DNA was detected in 2 samples (1.68%) from follicular fluid and 14 (8.54%) of semen samples. Seven products were subjected to sequencing, which confirmed the identity of the PCR products and revealed the similarity of these viruses with European virus isolates. It is the first report on the detection of BoHV-4 DNA in bovine follicular fluid samples and semen in Brazil, which may suggest that the virus may be disseminating in Brazilian cattle through reproductive practices. In addition, the results found here point to the a requirement for the testing of such samples, in search for BoHV-4 DNA, in order to prevent the spread of BoHV-4 between the cattle herds and the potential economic losses associated.

Introdução: Doze a 29 % dos ejaculados tem viscosidade seminal aumentada. Uma das técnicas recomendadas para diminuir a viscosidade do sêmen consiste num processo físico em que se passa o sêmen, 4 vezes, por uma seringa de 10 mL com agulha 18G. Ao fim desse processo, ter-se-ia modificado o comportamento molecular das fibrilas protéicas do esperma, tornando-o mais liquefeito, sem dano aparente a morfologia ou motilidade dos espermatozoides. Atualmente, discute-se sobre a total inocuidade desta técnica, uma vez que ela poderia provocar aumento da fragmentação do DNA dos espermatozoides. A hiperviscosidade seminal, além de reduzir a concentração e a motilidade dos espermatozoides, pode afetar a capacitação e a reação acrossômica, podendo ter implicações na integridade do DNA e no desenvolvimento embrionário normal. Objetivo: Comparar a fragmentação do DNA de espermatozoides humanos em amostras com viscosidade diminuída, fisiológica e aumentada, e avaliar se o processo de expulsão do sêmen através da agulha e seringa altera significativamente as taxas de fragmentação do DNA dos espermatozoides. Método: Após a coleta e avaliação dos parâmetros seminais das amostras de sêmen, aquelas que estiverem com viscosidade aumentada passarão pelo processo de expulsão através da seringa de 10 mL com agulha 18G por 4 vezes, para diminuir a viscosidade seminal. Posteriormente, serão feitas análises da fragmentação do DNA dos espermatozoides através da técnica de TUNEL em todas as amostras. Resultados: A fragmentação do DNA entre amostras com viscosidade fisiológica, diminuída e aumentada não apresentou diferença estatisticamente significativa (P=0,857). A fragmentação do DNA aumentou significativamente (P=0,035) nas amostras com viscosidade aumentada após passar na seringa e agulha quando comparadas com as mesmas amostras antes de passar pela mesma. Conclusão: O processo de expulsão do sêmen através de seringa e agulha visando redução da viscosidade seminal aumenta a fragmentação do DNA no espermatozoide, devendo este processo ser substituído por um processo inócuo. / Background: Twelve to 29 % of the ejaculated have the semen viscosity increased. One of the techniques recommended to decrease the viscosity of semen is a physical process in which the semen passes four times through a 10mL syringe with a 18G needle. At the end of this process would have modified the molecular behavior of the protein fibrils of the sperm making it more liquefied, without apparent damage to the morphology or motility of spermatozoa. Currently, the debate is about the complete safety of this technique since it could result in increased DNA fragmentation of spermatozoa. The seminal viscosity moreover reduces the concentration and motility of sperm, can affect the capacitation and acrosome reaction which may have implications for DNA integrity and normal embryonic development. Objective: To compare the DNA fragmentation in human semen samples with reduced, physiological and increased viscosity and evaluate if the process of expulsion of semen through the needle and syringe significantly alter rates of sperm DNA fragmentation. Methods: After collecting and evaluating semen parameters of semen samples, those that are with increased viscosity will pass through the process of expulsion through the 10 mL syringe with a 18G needle four times to reduce the viscosity of semen. After that, analysis of spermatozoa DNA fragmentation through the TUNEL technique will be made in all samples. Results: The fragmentation of DNA between samples with physiological, reduced and increased viscosity is not statistically significant (P=0.857). The DNA fragmentation increased significantly (P=0.035) in samples with increased viscosity after passing the syringe and needle when compared with the same samples before going through the same. Conclusion: The process of expulsion of semen through a syringe and needle in order to reduce the semen viscosity increases the DNA fragmentation in sperm, and this shall be replaced by a harmless process.

Submitted by ENDRIGO ADONIS BRAGA DE ARAUJO null (adonis.tecvet@yahoo.com.br) on 2016-04-27T02:07:05Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_BHT_Araujo, EAB.pdf: 638286 bytes, checksum: 01feb4c9fddef023795b0f62318b20f2 (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-04-28T16:16:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 araujo_eab_me_bot.pdf: 638286 bytes, checksum: 01feb4c9fddef023795b0f62318b20f2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-28T16:16:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 araujo_eab_me_bot.pdf: 638286 bytes, checksum: 01feb4c9fddef023795b0f62318b20f2 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O processo de criopreservação acarreta estresse oxidativo à célula espermática e a adição de antioxidantes aos meios de refrigeração e congelação de sêmen pode auxiliar na proteção dos espermatozoides contra o dano induzido pelas espécies reativas de oxigênio (ERO), incluindo perda da motilidade de forma irreversível, peroxidação lipídica e fragmentação do DNA, interferindo na capacidade de fertilização do espermatozoide. Dentre os diferentes antioxidantes, o Butil-hidroxitolueno (BHT) é um análogo sintético da vitamina E, cujo efeito protetor é atribuído a dois mecanismos: o aumento da fluidez da membrana plasmática após a incorporação do antioxidante, e o segundo por conter a cascata de peroxidação lipídica pela conversão de peroxil em hidroperóxido lipídico. O BHT foi testado em diversas espécies demonstrando melhora na motilidade, integridade de membrana plasmática e viabilidade espermática; porém, na espécie equina, a inclusão de BHT em diluentes para criopreservação de sêmen necessita ser melhor avaliada. Deste modo, o objetivo deste trabalho foi avaliar a influência do BHT nas células espermáticas de equinos submetidas à criopreservação e sua capacidade de conter a peroxidação lipídica e produção de espécies reativas de oxigênio quando os espermatozoides foram submetidos a estresse. / The process of cryopreservation brings out oxidative stress to spermatic cell and the addition antioxidant of into cooling and freezing semen extenders could assist in protection of spermatozoa against the damage induced by reactive oxygen species (ROS), including irreversible loss in motility, lipid peroxidation and DNA fragmentation, interfering with the fertilizing capacity of sperm. Among different antioxidants, the butylated hydroxytoluene (BHT) is a synthetic analogue of vitamin E, whose protective effect is attributed to two mechanisms: the increase in sperm membrane fluidity after the addition of antioxidant, and the lipid peroxidation cascade for converting peroxy radicals into lipid hydroperoxides. BHT was tested in different species and the results include improvement in motility, spermatic membrane integrity and sperm viability. However, the addition of BHT in horse semen extenders for cryopreservation purposes demands further research. Thereby, the aims of this study were (1) to evaluate the influence of BHT on equine spermatic cells submitted to cryopreservation and (2) the capacity of BHT to contain the lipid peroxidation and the production of reactive species of oxygen when sperm cells were submitted to stress. / FAPESP: 2014/00175-8

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-02Bitstream added on 2014-06-13T18:43:23Z : No. of bitstreams: 1 celestino_fma_dr_jabo.pdf: 1374304 bytes, checksum: 7550c94032b9f784eb1980b8abaaa6c0 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / A suplementação de vitaminas e minerais pode melhorar a fertilidade do sêmen de suínos. No entanto, os resultados têm se mostrado contraditórios, pois as avaliações do sêmen normalmente são subjetivas. A avaliação mais precisa poderia ser obtida pela análise de transcritos relacionados a fertilidade dos espermatozoides. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito de suplementação intramuscular de vitaminas e minerais sobre a qualidade de sêmen e analisar a expressão de alguns transcritos pelo método de qPCR. Para tal, coletas de sêmen de nove machos foram avaliadas segundo a motilidade, concentração e resistência ao resfriamento e submetidas à extração do RNA. Após 60 dias, seis machos sofreram a aplicação de suplementos minerais-vitamínicos comerciais (Selenphós® e Zimag®). Outros três machos não receberam a suplementação e foram utilizados como controle. Os 60 dias foram considerados para respeitar o ciclo espermatogênico. Após este período, outras coletas de sêmen de cada macho foram realizadas e submetidas aos mesmos procedimentos. Os genes alvo escolhidos para acessar a qualidade dos espermatozoides foram: Bcl-2l que é um gene anti apoptótico; gene ativador da proteína de proteção ao choque térmico (HSP 90); gene da enzima peroxiredoxina 5, protetora contra danos oxidativos e gene inibidor da acrosina, relacionado a capacitação espermática. Os resultados mostraram aumento do número de dias em que as amostras de sêmen diluídas com diluente comercial, resfriadas a 15-18ºC, permaneciam com motilidade acima de 70% após a suplementação com vitaminas e minerais. A concentração dos espermatozoides e volume dos ejaculados, após a suplementação, também melhorou, atingindo taxas de 52 e 57%, respectivamente. Porém, os transcritos para os genes estudados não apresentaram diferença de expressão antes e depois do tratamento com as vitaminas e minerais / Vitamin and mineral supplementation could improve the swine semen fertility. However, the results, until now, are controversial because of the subjectivity of the analyses. A precise evaluation could be achieved by the analyses of the spermatozoa transcripts important for the boar fertility. The present work proposes to evaluate the effect of intramuscular vitamin and mineral supplementation on semen quality by analyzing some spermatozoa transcripts, using qPCR methodology. The semen collection of nine boars were evaluated for motility, concentration and resistance to cold, and then, submitted to RNA extraction. After this period, six of these boars received an intramuscular supplement of vitamins and minerals (Zimag® and Selenphos®). Another three animals did not receive the supplementation for control. After 60 days, other semen collections were done and submitted to the same processes of analyses and RNA extraction. The target genes to access spermatozoa quality was

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-27Bitstream added on 2015-04-09T12:48:20Z : No. of bitstreams: 1 000815802.pdf: 379971 bytes, checksum: 5c1eebb69ace1989d5a3aab6dcace168 (MD5) / Este estudo foi conduzido com o objetivo de o uso do meio diluente Botu-crio associado a vitamina E, em diferentes concentrações, que se demonstrem efetivas para a criopreservação de sêmen obtido de recuperado epididimário em felinos domésticos. Cinquenta e quatro gatos domésticos foram utilizados no experimento após serem submetidos à orquiectomia eletiva e os espermatozóides obtidos diretamente da cauda e ducto deferente do epidídimo. Foram constituídos 18 “pools”, com o material de três animais cada e estes, divididos em quatro grupos experimentais. No grupo controle (G0) o sêmen foi congelado com o diluente Botu-Crio®. Nos grupos G 0,3, G 0,6 e G 0,9, ao diluente Botu-Crio® foi acrescido vitamina E em três concentrações, 0,3, 0,6 e 0,9mM, respectivamente. Para cada grupo, as amostras de sêmen fresco foram inicialmente avaliadas quanto à motilidade, vigor, morfologia supravital e teste hiposmótico, para verificar a qualidade mínima exigida para a congelação (motilidade ≥70% e vigor ≥3). Os mesmos parâmetros foram reavaliados após a descongelação também para o TBARS. Na avaliação da motilidade e vigor, não foi observado diferença estatística entre o grupo controle e as concentrações de vitamina E. Nos testes supravital, hiposmótico, morfológico e teste TBARS, também não houve significância entre as três diferentes concentrações de vitamina E e o grupo controle. Pode-se concluir que as três concentrações de vitamina E, não ofereceram proteção antioxidante ao recuperado de epidídimo de felinos domésticos / This study was conducted with the objective of using the medium Botu-crio®, associated vitamin E, at different concentrations, which demonstrate effective for cryopreservation of epididymal semen obtained recovered from domestic cats. Fifty-four domestic cats were used in the experiment after undergoing elective orchiectomy and sperm obtained directly from the tail of the epididymis and vas deferens. 18 pools were made with the material of three animals each and these were divided into four experimental groups. In the control group (G0) semen was frozen with Botu-crio®. In the groups G 0.3, G 0.6 to G 0.9, the diluent was added at three concentrations of vitamina E, 0.3, 0.6 and 0.9 mM, respectively. For each group, the fresh semen samples were initially evaluated for motility, viability, morphology and supravital and hypoosmotic test to verify minimum quality required for freezing (≥ 70 % motility and vigor ≥ 3). The same parameters were reassessed after thawing also for TBARS. In the evaluation of motility and vigor, no statistical difference was observed between the control group and the concentrations of vitamin E. In supravital tests, hyposmotic, morphological and TBARS assay, there was no significance between the different concentrations of vitamin E and the control group. It can be concluded that the three concentrations of vitamin E, antioxidant protection not offered recovered from epididymis of domestic cats

Made available in DSpace on 2014-08-27T14:36:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-26Bitstream added on 2014-08-27T15:57:15Z : No. of bitstreams: 1 000777559.pdf: 3234476 bytes, checksum: cc41e2672688abab324484d35dd5bb14 (MD5) / A Tese de Doutorado foi estruturada em três capítulos, além da “Introdução Geral”, que abrange uma revisão bibliográfica das espécies em estudo e dos temas abordados, e das “Considerações Finais”. Os três capítulos darão origem a artigos científicos em revistas indexadas. O primeiro artigo (Capítulo I) descreve os parâmetros seminais e a ultraestrutura dos espermatozoides de Brycon vermelha, “vermelha” (Characiformes, Characidae). O sêmen da B. vermelha possuiu consistência viscosa, e concentração espermática média de 4,34 ± 0,75x1010 espermatozoides.mL-1. O tempo de motilidade espermática, quando ativado com água destilada, foi curto, sendo necessários 46,48 ± 0,07 segundos para perda da motilidade de 100% dos espermatozoides. A análise dos espermatozoides por MEV revelou três regiões distintas: cabeça, peça intermediária e flagelo, sendo cada região caracterizada detalhadamente em MET. Tais características sugerem que os espermatozoides de B. vermelha apresentam características ancestrais próprias de peixes com fecundação externa classificando-os como “espermatozoides aquáticos uniflagelados anacrossomais”, ou seja, aquasperm do Tipo I. Estas informações são as primeiras em relação ao sêmen e espermatozoides de B. vermelha, podendo ser uma referência para futuros estudos, embasando especialmente pesquisas que adotem biotécnicas, como a criopreservação e androgênese. O segundo artigo (Capítulo II) descreve, ultraestruturalmente, as alterações dos espermatozoides da Brycon orbignyanus, “piracanjuba” (Characiformes, Characidae) durante o processo de criopreservação. O exame ultraestrutural dos espermatozoides descongelados criopreservados em soluções contendo DMSO, metilglicol e metanol, em três tempos de armazenamento (1 dia, 1 mês e 1 ano), revelou a presença de alterações no espermatozoide, variando desde ... / The doctoral thesis consisted of three main chapters besides the “General Introduction”, which includes a bibliographic review of the species studied and the topics discussed, and the “Final Remarks”. Scientific research articles will be published from the data of the three chapters in the scientific journals listed in the index. The first scientific article (Chapter I) describes the seminal parameters and the spermatozoa structure of Brycon vermelha, “vermelha” (Characiformes, Characidae). The semen of the Brycon vermelha is viscous and contains, in average, 4.34 ± 0.75x1010 spermatozoa.mL-1. Spermatozoa motility was of short duration when activated with distilled water, 46.48 ± 0.07 seconds until 100% of spermatozoa lost their motility. Scanning transmission electron microscopy (STEM) of spermatozoa revealed three distinctive parts: head, middle piece and tail (flagellum). Each part was analysed in detail by transmission electron microscopy (TEM). The characteristics observed suggest that the spermatozoa of B. vermelha posses ancestral characteristics of fish that reproduce by external fertilization, and can thus be classified as “uniflagellate anacrosomal aquasperms”, or aquasperms Type I. These are the first reports on B. vermelha semen and spermatozoa and, therefore, could be used as a reference and benchmark for research studies using biotechniques such as cryopreservation and androgenesis. The second scientific article (Chapter II) describes the ultrastructural alterations of Brycon orbignyanus, “piracanjuba” (Characiformes, Characidae) spermatozoa after cryopreservation. Spermatozoa were cryopreserved for 1 day, 1 month or 1 year in solutions containing DMSO, methyl glycol and methanol. The ultrastructural analysis of the frozen-thawed spermatozoa revealed alterations varying from small damages to the different parts of the cell to total destruction of spermatozoa ...

Made available in DSpace on 2018-07-27T18:26:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-10-02. Added 1 bitstream(s) on 2018-07-27T18:30:22Z : No. of bitstreams: 1 000866940.pdf: 700747 bytes, checksum: 6db0bad383acb05686e302f4f09fb4d7 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi avaliar se a adição do plasma seminal autólogo ao sêmen criopreservado de jumentos, aliado a lavagem uterina pós-inseminação artificial influencia nos índices de fertilidade em jumentas. Para isso, dois experimentos foram realizados: No experimento I foram analisados os parâmetros de cinética espermática pelo método computer assisted sperm analysis (CASA), análise da integridade de membrana plasmática e acrossomal (MPAI), peroxidação lipídica (PERO) e teor de espécie reativa de oxigênio intracelular (EROS) pela técnica de citometria de fluxo, de 15 ejaculados de 3 jumentos, diluídos em INRA-96®(IC - INRA, IMV Technologies, France) - Rota et al., (2012) ou em BotuCrio® (BC - Botupharma, Botucatu, Brasil), com e sem adição de plasma seminal (PS) após a descongelação. Os resultados do CASA foram semelhantes para os 2 diluentes (P>0,05), no entanto o BC proporcionou uma maior integridade de MPAI além da PERO menor que o IC, resultando em menor EROS (P<0,05). A adição do PS reduziu os parâmetros do CASA (p<0,05), porém sem ação na MPAI e PERO (p>0,05). No experimento II, avaliou-se a influência da adição do PS autólogo na pós-descongelação e sua associação à lavagem uterina (L) pós-inseminação artificial (IA), na fertilidade de jumentas. Foram utilizados 86 ciclos de 33 jumentas, divididas em 8 grupos: G1) BC + PS + L e G2) IC + PS + L foram testados mediante inseminações em 14 ciclos cada; G3) BC + L e G4) IC + L foram testadas em 11 ciclos cada, todas as L foram feitas 10 horas após a IA; G5) BC + PS e G6) IC + PS foram empregados em 8 ciclos cada, e o G7) BC e G8) IC foram avaliados em 10 ciclos cada. Verificou-se que o PS não influiu na fertilidade de jumentas (p = 0,6582) contudo a L,10 h pós-IA, interferiu positivamente na taxa de prenhez (p = 0,0097) elevando de 0% (G7 e G8) para 42,9% (G1 e G2) / The aim of this study was to evaluate whether the addition of autologous seminal plasma to frozen donkey semen, coupled uterine flushing after artificial insemination influence on fertility rates in jennies. Two experiments were conducted: experiment I, the parameters of sperm kinetics were analyzed by using computer assisted sperm analysis (CASA), analysis of plasma membrane integrity and acrosome (MPAI), lipid peroxidation (PERO) and reactive species content intracellular oxygen (ROS) by the technique of flow cytometry, 15 ejaculated 3 donkeys, diluted in INRA-96® (IC - INRA, IMV Technologies, France) -. Rota et al, (2012) or BotuCrio® (BC - Botupharma, Botucatu, Brazil), with and without addition of seminal plasma (SP) after thawing. The results were similar for CASA to 2 extenders (P> 0.05), however BC provided greater MPAI integrity beyond smaller PERO than the IC, resulting in lower EROS (P <0.05). The addition of PS reduced the parameters of CASA (P <0.05), but no action on the MPAI and Pero (P> 0.05). Experiment II, evaluated the influence of the addition of autologous SP in post-thaw and its association with uterine lavage (L) pos-IA, in the fertility jennies. 86 cycles of 33 jennies were used, divided into 8 groups: G1) BC + SP + Land G2) IC + SP + L, were tested by 14 cycles each; G3) BC+L and G4) IC+ L, were tested on each 11 cycles, all L were made 10 hours after AI; G5) BC + SP and G6) IC + SP were used in 8 cycles each, and the G7) BC and G8) IC were evaluated in 10 cycles each. It was found that the SP, had no effect on fertility jennies (p = 0.6582) however L 10 h post-IA, increased pregnancy rate (p = 0.0097) increasing from 0% (G7 and G8) to 42.9% (G1 and G2)

Orientador: Marion Burkhardt de Koivisto / Banca: Janaina Torres Carreira / Banca: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Maricy Apparicio Ferreira / Resumo: O estudo teve por objetivo avaliar o sêmen criopreservado de touros da raça Nelore de diferentes idades e verificar se a qualidade espermática declina com o avanço da idade e se geração espontânea intracelular de superóxido, peroxidação lipídica e danos no DNA estão envolvidos neste processo em decorrência da susceptibilidade ao estresse oxidativo durante o envelhecimento. Para isso, foram utilizados três ejaculados de 40 touros, subdivididos em três faixas etárias: Jovens de 1,8 a 2 anos (n= 27 partidas), Adultos de 3,5 a 7,0 anos (n= 52 partidas) e Senis de 8,0 a 14,3 anos (n= 34). Os touros jovens apresentaram altos valores de motilidade, integridade da membrana e acrossoma e de alto potencial mitocondrial comparado com touros adultos e senis (p<0,05). Houve correlação positiva entre a idade e os parâmetros considerados indesejáveis tais como baixo potencial mitocondrial, membrana lesada, acrossoma lesado e danos oxidativos no DNA (p<0,05) e negativa com alto potencial mitocondrial, membrana íntegra e acrossoma íntegro (p<0,05), indicando redução da qualidade espermática com o envelhecimento. A geração de superóxido, peroxidação lipídica (BodipyC11581/591) não apresentou diferença significativa entre a idade e os parâmetros referentes à qualidade espermática (p>0,05). A concentração de TBARS foi menor em touros jovens quando comparado aos adultos, mas diferenças não foram observadas em touros senis (p>0,05). Danos oxidativos no DNA correlacionaram negativamente com a variável membrana e acrossoma íntegro (r= 0,33, p<0,03) e positivamente com os valores de baixo potencial mitocondrial (r= 0,38, p<0,01). A qualidade espermática declina com o avanço da idade e não está relacionada com a geração de superóxido e peroxidação lipídica (TBARS e BodipyC11581/591) no sêmen criopreservado. No entanto, alta porcentagem de danos oxidativos no DNA no sêmen ... / Abstract: The aim of this study was to evaluate sperm quality of frozen-thawed semen samples of Nelore Bulls of different ages and verify if the quality declines with age and if it is associated with the spontaneous generation of intracellular superoxide, lipid peroxidation and DNA damage. 40 bulls were divided into three age groups: Young 1,8 to 2 years (n = 27 samples), Adults 3.5 to 7.0 years (n = 52 samples) and Senile , from 8 to 14.3 years (n = 34 samples). Young bulls showed higher values of motility, membrane integrity and acrosome and high mitochondrial potential compared to adults and senile bulls (P <0.05). There was a positive correlation between age and undesirable parameters such as low mitochondrial potential , damaged membrane, damaged acrosome and oxidative DNA damage (P<0.05). There was also a negative correlation with high potential mitochondrial, membrane integrity and acrosome integrity (P<0.05). These results indicate a reduction in sperm quality with aging. The generation of superoxide and lipid peroxidation (BodipyC11581/591) showed no significant differences between age and parameters related to sperm quality (P>0.05). The TBARS concentration was lower in young bulls compared to adults, but no differences were observed in senile bulls (P>0.05). Oxidative DNA damage correlated negatively with membrane and acrosome integrity (r = 0.33, P<0.03) and positively with low mitochondrial potential (r = 0.38, P<.01). The sperm quality declines with aging and is not related to superoxide generation and lipid peroxidation (TBARS and BodipyC11581/591) in frozen semen. However, high percentage of oxidative DNA damage indicates the involvement of other ROS (reactive oxygen species) which reduces sperm quality and increases susceptibility to oxidative stress during aging / Mestre

Orientador: Alvimar José da Costa / Banca: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Anderson Barbosa Moura / Resumo: Oito reprodutores ovinos, isentos de Toxoplasma gondii e quaisquer outras doenças reprodutivas, foram distribuídos em três grupos para infecção com o respectivo protozoário: GI - três ovinos (2,0 x 105 oocistos da cepa P), GII - três ovinos (1,0 x 106 taquizoítos da cepa RH) e GIII - dois ovinos (controle). Parâmetros clínicos foram mensurados. Avaliações parasitêmicas e sorológicas (IFI) foram efetuadas. Qualidade espermática foi avaliada e a presença do parasito no sêmen foi investigada por meio das técnicas da bioprova e da PCR. Parasitismo tissular foi pesquisado pela bioprova, PCR e imunohistoquímica. Foi possível registrar alterações hipertermia e apatia nos ovinos infectados com oocistos de Toxoplasma gondii Parasitemia foi detectada em cinco ovinos. Todos os ovinos inoculados responderam ao estímulo antigênico, produzindo anticorpos contra T. gondii a partir do 5º dia pós-inoculação. Nos animais dos grupos I e II, os títulos observados foram de 1:4096 e 1:8192, respectivamente. Nos mesmos grupos, foram ainda, pela bioprova e PCR, constatada a presença do parasito no sêmen. Pela PCR detectou-se o DNA de T. gondii no sêmen dos animais 02 e 09 (do GI oocistos) e 07, 48 e 52 (do GII taquizoítos). Parasitismo tissular por T. gondii (bioprova e PCR) foi diagnosticada nos ovinos 09, 16 (oocistos) e 07 (taquizoítos). Vesícula seminal e próstata foram os tecidos de eleição da infecção por T. gondii (imunohistoquímica) no sistema reprodutor dos ovinos experimentalmente infectados. Em síntese, estes resultados sugerem a viabilidade da transmissão venérea deste coccídio. / Abstract: Eight sheep reproducers exempt of Toxoplasma gondii and any other reproductive illnesses, were distributed in three groups for infection with the respective protozoan: GI - three sheep (2.0 x 105 oocysts from P lineage), GII - three sheep (1.0 x 106 taquizoites from RH lineage) and GIII - two sheep (control). Clinical parameters were measured. Parasitemics and sorologicals evaluations (IFA) were effected. Spermetic quality was evaluated and the presence of the parasite in the semen was searched through techniques of bioassay and PCR. Tissue parasitism was researched through bioassay, PCR and immuneistochemistry. It was possible to registered hyperthermia and apathy alterations in sheep infected with oocysts from Toxoplasma gondii. Parasitemia was detected in five sheep. All inoculated sheep responded to antigenic stimulation, producing antibodies against T. gondii upon the 5th day post-inoculation. In animals from groups I and II, the titles observed were 1:4096 and 1:8192, respectively. The animals of group III (control), did not present antibodies against T. gondii during all experimental period. In the same groups, it still has been evidenced, through bioassay and PCR, the presence of the parasite in the semen. Through PCR, T. gondii DNA was detected in the semen of animals 02, 09 of GI (oocysts) and 07, 48 and 52 of GII (taquizoites). Tissue parasitism by T. gondii (biotest and PCR) was diagnosed in sheep 09, 16 (oocysts) and 07 (taquizoites). Seminal vesicle and prostate were the tissues elected for infection with T. gondii (immuneistochemistry) in the experimentally infected sheep reproductive system. In summery, these results suggests the viability of the venereal transmission for this coccidium. / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-01-31Bitstream added on 2014-06-13T18:55:50Z : No. of bitstreams: 1 lopes_wdz_me_jabo.pdf: 1609666 bytes, checksum: ef67fda0becfef41fe6aebcf7cfdad39 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Oito reprodutores ovinos, isentos de Toxoplasma gondii e quaisquer outras doenças reprodutivas, foram distribuídos em três grupos para infecção com o respectivo protozoário: GI - três ovinos (2,0 x 105 oocistos da cepa P), GII - três ovinos (1,0 x 106 taquizoítos da cepa RH) e GIII - dois ovinos (controle). Parâmetros clínicos foram mensurados. Avaliações parasitêmicas e sorológicas (IFI) foram efetuadas. Qualidade espermática foi avaliada e a presença do parasito no sêmen foi investigada por meio das técnicas da bioprova e da PCR. Parasitismo tissular foi pesquisado pela bioprova, PCR e imunohistoquímica. Foi possível registrar alterações hipertermia e apatia nos ovinos infectados com oocistos de Toxoplasma gondii Parasitemia foi detectada em cinco ovinos. Todos os ovinos inoculados responderam ao estímulo antigênico, produzindo anticorpos contra T. gondii a partir do 5º dia pós-inoculação. Nos animais dos grupos I e II, os títulos observados foram de 1:4096 e 1:8192, respectivamente. Nos mesmos grupos, foram ainda, pela bioprova e PCR, constatada a presença do parasito no sêmen. Pela PCR detectou-se o DNA de T. gondii no sêmen dos animais 02 e 09 (do GI oocistos) e 07, 48 e 52 (do GII taquizoítos). Parasitismo tissular por T. gondii (bioprova e PCR) foi diagnosticada nos ovinos 09, 16 (oocistos) e 07 (taquizoítos). Vesícula seminal e próstata foram os tecidos de eleição da infecção por T. gondii (imunohistoquímica) no sistema reprodutor dos ovinos experimentalmente infectados. Em síntese, estes resultados sugerem a viabilidade da transmissão venérea deste coccídio. / Eight sheep reproducers exempt of Toxoplasma gondii and any other reproductive illnesses, were distributed in three groups for infection with the respective protozoan: GI - three sheep (2.0 x 105 oocysts from P lineage), GII - three sheep (1.0 x 106 taquizoites from RH lineage) and GIII - two sheep (control). Clinical parameters were measured. Parasitemics and sorologicals evaluations (IFA) were effected. Spermetic quality was evaluated and the presence of the parasite in the semen was searched through techniques of bioassay and PCR. Tissue parasitism was researched through bioassay, PCR and immuneistochemistry. It was possible to registered hyperthermia and apathy alterations in sheep infected with oocysts from Toxoplasma gondii. Parasitemia was detected in five sheep. All inoculated sheep responded to antigenic stimulation, producing antibodies against T. gondii upon the 5th day post-inoculation. In animals from groups I and II, the titles observed were 1:4096 and 1:8192, respectively. The animals of group III (control), did not present antibodies against T. gondii during all experimental period. In the same groups, it still has been evidenced, through bioassay and PCR, the presence of the parasite in the semen. Through PCR, T. gondii DNA was detected in the semen of animals 02, 09 of GI (oocysts) and 07, 48 and 52 of GII (taquizoites). Tissue parasitism by T. gondii (biotest and PCR) was diagnosed in sheep 09, 16 (oocysts) and 07 (taquizoites). Seminal vesicle and prostate were the tissues elected for infection with T. gondii (immuneistochemistry) in the experimentally infected sheep reproductive system. In summery, these results suggests the viability of the venereal transmission for this coccidium.