Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-11-24. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:13Z : No. of bitstreams: 1 Publico-12862.pdf: 1578570 bytes, checksum: 00bd4765e50bc569a9343e907ae91a61 (MD5) / A leptina, um hormônio protéico secretado pelo tecido adiposo, é responsável pela sinalização do estado nutricional do indivíduo para o sistema nervoso central e, em parte, pela regulação do metabolismo energético, além de estar envolvida em vários processos fisiológicos. A ausência ou resistência a leptina pelo organismo causa obesidade mórbida, diabetes e hipogonadismo. A estrutura terciária da molécula da leptina revela a presença de quatro hélices, cujo padrão é típico das citocinas. A partir da sequência peptídica Ac-[Ser96]-hLEP89-98-NH2 descrita por Martins e colaboradores (2006), foram desenhados uma nova série de dez fragmentos peptídicos derivados da leptina com substituições puntuais de L- para D-aminoácido. Os peptídeos foram sintetizados pelo método da fase sólida manual pela estratégia t-Boc. Os mesmos foram purificados por cromatografia liquida de alta eficiência e caracterizados por cromatografia liquida acoplada a um espectrômetro de massas. Os estudos conformacionais dos peptídeos foram realizados por Dicroísmo Circular em diferentes meios com o objetivo de correlacionar a estrutura com a atividade biológica dos fragmentos. Os efeitos de injeções intracerebroventriculares das soluções dos peptídeos nas variações de consumo alimentar e do peso corporal foram avaliados em ratos Wistar machos. Além disso, o efeito causado pelos fragmentos nas taxas glicêmicas também foram avaliadas, assim como as estabilidades dos compostos contra a ação das proteases presentes no plasma. Dentre os compostos estudados, os melhores resultados foram obtidos com o fragmento Ac-[Ser96, D-Phe92]-hLEP89-98-NH2 que demonstrou ser mais estável em plasma e apresentou atividade biológica (variações de peso e consumo alimentar e efeito hipoglicemiante) eqüipotente àquelas verificadas nos fragmentos [D-Leu4]-OB3 e Ac-[Ser96]-hLEP89-98-NH2, que até então eram os peptídeos mais ativos descritos na literatura. Os estudos conformacionais por Dicroísmo Circular, no entanto não nos permitiu estabelecer correlação direta entre a estrutura e a atividade biológica dos fragmentos. Embora haja a necessidade de refinamentos, esse tipo de abordagem pode oferecer uma interessante base para o desenvolvimento de compostos correlacionados com a leptina com potencial de aplicação em estudos de obesidade humana ou na medicina veterinária. / Leptin, a protein hormone secreted by the adipose tissue, is responsible for signaling the nutritional status of the body to the central nervous system and partly by the regulation of energetic metabolism, as well as being involved in various physiological processes. The absence or resistance of leptin to the organism causes obesity, diabetes and hypogonadism. The tertiary structure of the leptin molecule reveals the presence of four helices, whose pattern is typical of cytokines. Starting from the peptide sequence Ac-[Ser96]-hLEP89-98-NH2 described by Martins and coworkers (2006), we designed a new series of ten peptide fragments derived from the leptin with punctual substitutions of L-to D-amino acid. The peptides were synthesized by the manual solid phase method by employing the t-Boc strategy. They were purified by high performance liquid chromatography and characterized by liquid chromatography coupled to mass spectrometry. In order to correlate structure with biological activity of the fragments conformational studies of the peptides were performed by Circular Dichroism in different solvent media. The effects of intracerebroventricular injections of solutions of the peptides in the variations of food intake and body weight were evaluated in male Wistar rats. Furthermore, the effect caused by the fragments in the blood glucose levels were also assessed, as well as the stabilities of the compounds against the action of proteases present in plasma. Among the compounds studied, the best results were obtained with the fragment Ac-[Ser96, D-Phe92]-hLEP89-98-NH2, which proved to be more stable in plasma and showed biological activity (changes in weight and food intake and hypoglycemic effect) equipotent those observed with the fragments [D-Leu4]-OB3 and Ac-[Ser96]-hLEP89-98-NH2, the most active peptides described in the literature so far. Conformational studies by Circular Dichroism, however did not allow us to establish direct correlation between structure and biological activity of the fragments. Although there is a need for refinements, this approach may offer an interesting basis for the development of compounds correlated with leptin with potential application in studies of human obesity or in veterinary medicine. / TEDE

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-18Bitstream added on 2014-06-13T19:08:54Z : No. of bitstreams: 1 cespedes_gf_me_araiq.pdf: 806873 bytes, checksum: d4f792502dbe67b9a6199790a01daa7e (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Cepas bacterianas resistentes aos antibióticos convencionais representam um problema de saúde global com forte impacto social e econômico. Desta maneira, há uma urgente necessidade de desenvolver antibióticos com novos mecanismos de ação. O grupo da Profª Drª Mariana S. Castro isolou e determinou a seqüência do peptídeo GWLDVAKKIGKAAFNVAKNFI-NH2, secretado na pele da rã Hypsiboas albopunctatus e qual mostrou atividade antimicrobiana. O objetivo do presente trabalho foi avaliar 3 análogos para obter informações a respeito da relação estrutura-atividade biológica. Os peptídeos foram sintetizados por SPFS utilizando a estratégia química Fmoc. As propriedades conformacionais dos peptídeos foram investigadas por CD em água, em TFE (agente indutor de estrutura secundária) e em micelas zwitteriônicas (LPC). As atividades antimicrobianas foram analisadas pela medida da concentração inibitória mínima em bactérias (uma Gram-positiva e duas Gram- negativa) e em fungos. O aminoácido triptofano foi usado como sonda para analisar a profundidade da inserção em miméticos de membrana. Os resultados mostraram que a SPFS foi útil, obtendo um material com alto índice de pureza. Os estudos de CD demonstraram que os peptídeos em água apresentam uma estrutura ao acaso, adquirindo um alto teor de a-hélice na presença de TFE e LPC. As interações peptídeo/miméticos de membranas indicaram que todos interagiram fortemente com as micelas, mas não com vesículas, com exceção do peptídeo “wild type”, que mostrou forte interação com ambos os modelos. Os resultados biológicos demonstraram que todos os peptídeos tem atividade (antibacteriana e antifúngica), porém, o “wild type” mostrou valores mais baixos de CIM. Além disso, nossos resultados sugerem que os peptídeos Hy- D-V 16, Hy-D-V 5,16 e Hy-K9 podem vir a ser potenciais modelos para o desenvolvimento de novas... / Antibiotic resistant bacterial strains represent a global health problem with a strong social and economic impact. Thus, there is an urgent need for the development of antibiotics with novel mechanisms of action. Castro´s group isolated and determined the sequence of the peptide GWLDVAKKIGKAAFNVAKNFI-NH2 of skin secretion from the frog Hypsiboas albopunctatus which showed antimicrobial activity. The aim of the present work was evaluated 3 analogues to supply information about the relationship structurebiological activity. The peptides were synthesized by SPPS using the Fmoc chemical approach. The conformational properties of the peptides were investigated by CD techniques in water, TFE (secondary structure-inducing agent) and in zwitterionic micelles (LPC). The antimicrobial activity was assayed by measuring growth inhibition of bacteria (one Gram-positive and two Gram-negative) and fungus. The tryptophan amino acid was used as probe to analyze the deeply of insertion in membrane mimetic. The result showed that the SPFS proved to be useful, and material with high purity was obtained. The CD studies demonstrated that peptides in water have random coil structure, acquiring high amount of a-helix in the presence of TFE and LPC. The interactions peptide/mimetic of membranes indicated that all strongly interacted with micelles, but not with vesicles, with the exception of “wild type” peptide, that showed strong interaction with the both models. The biological results demonstrated that all peptides have activity (antibacterial and antifungal), nevertheless, the “wild type” showed lower MIC values. In addition, our findings suggest that peptides Hy-D-V 16, Hy-D-V 5,16 and Hy-K9 as potential templates for the development of new drugs, therefore these analogous have the higher relationshipantimicrobial/hemolytic activity. These findings highlight the importance of single a-amino acid... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-26. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:45Z : No. of bitstreams: 1 Publico-10806.pdf: 1743333 bytes, checksum: 379793d92e9d86096d10c579b33c757e (MD5) / A hormônio protéico produzido pelo gene-ob e denominado leptina, é um produto originário do tecido adiposo, circula pelo plasma e afeta o balanço energético interagindo em receptores presentes no hipotálamo. A leptina desempenha um papel importante na regulação de uma variedade de funções fisiológicas, incluindo controle de ingestão alimentar, temperatura corporal e manutenção do peso corporal. A ausência ou resistência a leptina pelo organismo causa obesidade mórbida, diabetes e hipogonadismo. A estrutura terciária da molécula da leptina revela a presença de quatro hélices, cujo padrão é típico das citocinas. Com o objetivo de identificar a região da molécula responsável pela expressão de sua atividade biológica foram sintetizados seis fragmentos peptídicos cujas estruturas foram escolhidas de acordo com a estrutura tridimensional da leptina. Em estudos anteriores do nosso grupo, dois peptídeos, AchLEP92- 115-NH2 (IV) e Ac-[Ser117]-hLEP116-140-NH2 (V), foram reconhecidos pelo receptor da leptina presentes em células HP-75, confirmando outros trabalhos da literatura que também apontavam que é nesta região da molécula que deve estar presente o epitopo funcional da leptina. Neste trabalho, uma nova série de fragmentos, cujas estruturas primárias estão contidas na região dos fragmentos IV e V, foram sintetizados e os efeitos dos mesmos na variação do peso corporal e no consumo de alimento quando administrados no ventrículo cerebral de ratos normais foram avaliados. Os peptídeos foram sintetizados pelo método da fase sólida manual pela estratégia t-Boc. Os mesmos foram purificados por cromatografia liquida de alta eficiência e foram caracterizados por análise de aminoácidos e cromatografia liquida acoplada a um espectrômetro de massas. Estudos conformacionais dos peptídeos também foram realizados por Dicroísmo Circular com o objetivo de correlacionar a estrutura com a atividade biológica dos fragmentos. Dentre os compostos estudados, o melhor resultado foi obtido com o fragmento AchLEP110- 119-NH2 (VI) que se mostrou ser mais ativo que a própia leptina e foi equipotente com o [D-Leu4]-OB3, que até então era o fragmento mais ativo descrito na literatura. Embora haja a necessidade de refinamentos, esse tipo de abordagem pode oferecer uma interessante base para o desenvolvimento de compostos correlacionados com a leptina com potencial de aplicação em estudos de obesidade humana ou na medicina veterinária. / The protein hormone produced by the ob-gene and denominated leptin, a product originating from adipose tissue, circulates in the plasma and affects the energy balance by interacting with the hypothalamus. Leptin plays an important role in the regulation of a variety of physiological functions, including food intake, body temperature and body weight maintenance. Total absence or resistance to leptin causes morbid obesity, diabetes and hypogonadism. The tertiary structure of the leptin molecule reveals the existence of a fourhelix bundle that is characteristic of the short-helix cytokines. To identify regions of the leptin molecule responsible for its bioactivity, we have synthesized six peptides based on the protein three-dimensional structure. Our results indicated that the fragments AchLEP92- 115-NH2 (IV) and Ac-[Ser117]-hLEP116-140-NH2 (V) were recognized by leptin receptor present in hp-75 cells, in agreement with the obtained by other authors, validating that this region of the molecule contain the functional epitope of the leptin molecule. In the present study, a new series of peptides encompassing the region of fragments IV and V of leptin were synthesized, and their effects on body weight and food intake were assessed when administered into the lateral cerebroventricle of normal rats. Peptides were synthesized by the solid phase methodology, purified by RP-HPLC and characterized by LC/ESI-MS. We also performed a conformational study of the peptides by circular dichroism in order to correlate the biological activity and secondary structure of the leptin fragments. Out off the new series of compounds, the best results were obtained with the fragment Ac-hLEP110-119-NH2 (VI) which showed to be more active than leptin and equipotent to [D-Leu4]-OB3 the most active leptin fragment described in the literature so far. Although the peptide fragments design needs refinement, this kind of approach may offer the basis for the development of leptin-related compounds with potential application in human obesity or veterinary medicine. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

O uso de peptídeos na terapêutica apresenta inúmeras limitações, desde características físico-químicas até perfil farmacocinético inadequado para absorção oral. Entretanto, novas estratégias sintéticas para redução de custos e aumento da estabilidade química e metabólica de peptídeos, associada a vias alternativas de administração foram desenvolvidas e permitiram o acesso a essas moléculas no mercado farmacêutico. Diante disso, peptídeos naturais bioativos, subexplorados do ponto de vista químico medicinal, são considerados bons protótipos para o desenvolvimento de biblioteca de análogos não-naturais, gerando informações relevantes para a compreensão da relação entre a estrutura química e a atividade biológica destes compostos. No presente estudo, os peptídeos cíclicos rufomicina B (tuberculostático), chaiyaphumine A (anti-malárico), ciclozantoxilano A e desotamide B (antibiótico) foram estudados do ponto de vista sintético sob diferentes metodologias. Para tal, os aminoácidos Fmoc-N-Metil-L-Leucina e Fmoc-L-crotil-glicina foram sintetizados com rendimentos satisfatórios para síntese do antibiótico rufomicina B. O aminoácido Fenil-acetil-L-treonina foi obtido em bons rendimentos e a síntese de chaiyaphumine A e derivado foi testada em fase sólida, em solução e empregando combinação dos dois métodos. O peptídeo desotamide B e ciclozantoxilano A foram sintetizados, mesmo que em baixo rendimentos, em fase sólida com ciclização solução. Ainda, a síntese de desotamide B também foi possível através da metodologia \"safety-catch\". Por fim, realizamos análise sistemática das propriedades físico-químicas e estruturais dos peptídeos no mercado e em fase clínica e comparamos os resultados obtidos com os alvos desse estudo / The use of peptides in therapy presents several limitations, from physicochemical characteristics to inadequate pharmacokinetic profile for oral absorption. However, new synthetic strategies for cost reduction and increase of the chemical and metabolic stability of peptides associated with alternative routes of administration were developed and allowed access to these molecules in the pharmaceutical market. Therefore, natural bioactive peptides, is an underexploited class from the medicinal chemist\'s point of view, are considered good prototypes for the development of similar series, generating information relevant to understanding the relationship between chemical structure and biological activity of these compounds. In the present study, cyclic peptides rufomycin B (antituberculosis activity), chaiyaphumine A (anti-malarial), cyclozanthoxylane A and desotamide were studied from the synthetic point of view, through different metodologies. In this sense, the amino acids Fmoc-N-Methyl-L-Leu and Fmoc-L-crotyl-Gly were synthetized in good yields for the total synthesis of rufomycin B. The amino acid Phenyl-acetyl-L-threonine was obtained in high yield and the synthetic studies on the chaiyaphumine A and analogue has been performed in solution and solid phase peptide synthesis and also through the combination of the 2 methods. The peptides desotamide B and cyclozanthoxylane A were synthetized, in low yields, in solid phase and in solution cyclization. Desotamide B could also be synthetized through safety-catch solid phase method. At end, we performed a systematic review of the physical chemical properties of all market and on clinical trial peptide drugs and we compared the results with the target molecules in this study.

Orientador: Vani Xavier de Oliveira Junior. / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC. Programa de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia/Química, 2011.

Orientador: Vani Xavier de Oliveira Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC. Programa de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia/Química, 2012

Orientador: Vani Xavier de Oliveira Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC. Programa de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia/Química, 2013

Orientador: Prof. Dr. Álvaro Takeo Omori / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC. Programa de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia/Química, 2016. / Nos últimos anos tem havido intensa pesquisa sobre novos compostos que possam ser empregados como fotossensibilizadores para uso em Terapia Fotodinâmica. Foram sintetizadas e caracterizadas duas ftalocianinas funcionalizadas com o grupo 4- hidroxibenziloxi (A3B e AAAA) para serem avaliadas como suporte na síntese de peptídeos em fase sólida como equivalente à resina Wang. A ideia foi aproveitar a baixa solubilidade das ftalocianinas em determinados solventes a fim de facilitar o processo de precipitação. Assim, um dos métodos desenvolvidos foi incorporar um aminoácido ao macrociclo em fase líquida e, através da adição de um segundo solvente precipitar a ftalocianina substituída facilitando o work-up e a purificação. Somente com a ftalocianina A3B foi possível à reação de acoplamento com os aminoácidos Boc-Glicina-OH e Fmoc- Alanina-OH. Os compostos sintetizados foram caracterizados por RMN, HRMS e IR. As caracterizações fotoquímicas e fotofísicas foram determinadas por análise de espectros de absorção, excitação e emissão na região do UV-Vis e o rendimento quântico de geração de oxigênio singlete. / In recent years there has been intensive research on novel compounds which can be employed as photosensitizers for use in photodynamic therapy. Two functionalised phthalocyanines 4-hydroxybenzyloxy group (A3B and AAAA) were synthesized and characterized to be evaluated as a support in peptide solid phase synthesis (equivalent to Wang resin). The idea is to take advantage of low solubility of phthalocyanines in certain solvents in order to facilitate the precipitation process. Thus, a tentative protocol was developed to incorporate one amino acid to the macrocycle in liquid phase followed by adding a second solvent to precipitate the reacted support facilitating the work-up and purification. The coupling reaction was only succeeded with the phthalocyanine A3B. Thus, two new phthalocyanine derivatives were synthesized from the coupling with Boc-Glycine- OH and Fmoc-Alanine-OH amino acids. The compounds were characterized by NMR, IR and HRMS. The photochemical and photophysical characterization were determined by analysis of absorption spectra, excitation and emission in the UV-Vis region and the quantum yield of singlet oxygen generation.

O objetivo do presente trabalho foi propor e estabelecer um novo método de preparação de peptídeos protegidos &#945;-esterificados. Para tal, investigamos inicialmente o efeito da presença de HAc, Ca(OAc)2 e mistura de ambos na eficiência de metanólise de Ac-Ala-Gly-X-KOR (onde, X= Gly, Ala ou Phe) em DCM. Surpreendemente, as reações assistidas por Ca2+ forneceram os produtos esterificados desejados com os mais altos rendimentos. Com base nestes dados comparamos as eficiências das reações de metanólise de Ac-Ala-Gly-X-KOR [onde, X= Lys(2-Cl-Z), Phe, Ala ou Gly] asssistidas pelo íon cálcio. Estas se mostraram dependentes da natureza do resíduo C-terminal ligado à resina, pois os rendimentos de desligamento peptídeo da KOR obtidos para as reações de 6 horas apresentaram a seguinte ordem: Lys(2-Cl-Z)< Phe <Ala < Gly. Após 48 h, os rendimentos foram superiores a 68%. A possibilidade de preparar Ac-Ala-Gly-X-OEt [onde, X= Lys(2-Cl-Z) ou Ala] usando o mesmo procedimento foi também investigada. Ac-Ala-Gly-Ala-OEt e Ac-Ala-Gly-Lys(2-Cl-Z)-OEt foram produzidos com 69 e 24% de rendimento em 72h a 37ºC, respectivamente. Quando DCM foi substituído por DMSO ou 25%DMSO/tolueno a 55ºC, houve um aumento significativo nos rendimentos de etanólise da Ala-Gly-Lys(2-Cl-Z)-KOR. Benzólise e tiólise de Ac-Ala-Gly-X-OEt (onde, X= Lys(2-Cl-Z)ou Ala] foram testadas. As análises de aminoácidos das peptidil-KOR residuais mostraram que o desligamento do peptídeo da KOR ocorreu em certa extensão, mas infelizmente nas condições de análise por RP-HPLC empregadas não fomos capazes de detectar os produtos formados. Metanólises adicionais foram realizadas em presença de Ca(OAc)2 empregando peptidil-KOR relacionados ao hormônio colecistocinina: Ac-lle-Ser(Bzl)-Asp(OBzl)-KOR(1), Ac-lle-Ser(Bzl)-Asp(OcHex)-KOR (2) e Ac-lle-Ser(Bzl)-Asp(OBzl)-Arg(Mtr)-KOR (3). Os rendimentos de desligamento dos peptídeos 1, 2 e 3 foram 54, 68 e 84%, respectivamente. Não foram detectadas nos meios reacionais quantidades significativas de produtos secundários resultantes de rearranjos ou de transesterificação simultânea do éster presente na cadeia lateral do resíduo de ácido aspártico. Estes resultados evidenciaram que a assistência do Ca2+ é seletiva e o método aplicável a peptídeos contendo arginina e ácido aspártico protegidos ligados à resina de Kaiser. O efeito do solvente foi investigado realizando-se metanólises de Ac-lle-Ser(Bzl)-Asp(OcHex)-KOR em DCM, DMSO e CHCl3 em presença de Ca(OAc)2. Em 72 horas as metanólises realizadas em DMSO foram quantitativas, enquanto que em DCM ou CHCl3 estas apresentaram rendimentos de ~63%. Em seguida, examinamos a capacidade do Eu3+ em assistir a reação de metanólise de peptidil-KOR em DCM. Os rendimentos de desligamento do peptídeo foram semelhantes ou ligeiramente superiores aos obtidos em presença de Ca2+. Estudos adicionais demonstraram que não é necessário excesso molar de Ca2+ ou Eu3+ para o aumento da eficiência das metanólises. Metanólise e etanólise de Ac-lle-Ser(Bzl)-Asp(OcHex)-KOR em DCM e DMSO em presença de Ca(OAc)2, EuCl3 e TbCl3 também foram realizadas. As metanólises em DCM em presença de Ca2+, Eu3+ ou Tb3+ forneceram o produto desejado com 62, 95 ou 95% de rendimento, respectivamente. Em DMSO, a reação assistida por Ca2+ foi quantitativa, mas nenhum produto foi obtido em presença de Eu3+ ou Tb3+. As etanólises em DCM assistidas por estes ións lantanídicos foram também mais eficientes do que as mediadas por Ca2+ (28, 17 e 5%, respectivamente). Em DMSO, observou-se a formação do éster etílico apenas para a reação assistida por Ca2+. O rendimento de desligamento do peptídeo da KOR foi de 80%, mas observou-se a presença de um produto secundário no peptídeo &#945;-esterificado bruto. Novamente, nenhum produto foi obtido nas reações assistidas por Eu3+ ou Tb3+ em DMSO. Estudos adicionais demonstraram que Ca(OAc)2 pode também assistir a aminólise de Ac-lle-Ser(Bzl)-Asp(OcHex)-KOR por Arg(HCl)OMe ou Arg(HCl)OEt em DMF. Os rendimentos de desligamento do peptídeo da KOR foram superiores a 70%, sendo os ésteres desejados os produtos majoritários formados nos meios reacionais (47 e 68% do total, respectivamente). Na ausência do íon metálico, os rendimentos foram de apenas 10-13%. Reações comparativas evidenciaram que a aminólise assistida por Ca2+ é equivalente (ou ligeiramente inferior em termos de seletividade) àquelas descritas na literatura catalisadas pelo ácido acético. Tentativas de aminólise em DMSO, NMP e DMSO/tolueno (1:1, v:v) na presença de Ca2+, Eu3+ e Tb3+ também foram feitas. Os resultados demonstraram que apenas o Ca2+ foi capaz de assistir a maioria delas. Isto ocorreu provavelmente devido a interações entre o DMSO e os lantanídeos. Uma análise preliminar de Ac-Ala-Gly-Lys(2-Cl-Z)-KOR e de Ac-lle-Ser(Bzl)-Asp(OcHex)-KOR através de HR-MAS na presença e ausência de Ca2+ foi feita com o intuito de investigar as interações estabelecidas entre o íon metálico e os peptídeos sob o ponto de vista estrutural. Os resultados obtidos sugeriram que a presença do Ca2+ diminue a mobilidade da cadeia peptídica, o que sugere complexação. Uma complexação tomaria a ligação peptídeo-KOR mais susceptível ao ataque nucleofílico do álcool ou aminoácido esterificado. Medidas de inchamento de peptidil-KOR em diferentes solventes puros e nas misturas utilizadas nos estudos descritos acima demonstraram que a solvatação da peptidil-KOR não é o fator determinante na eficiência destas reações. Por outro lado, estudos qualitativos sugeriram, que a solubilidade dos sais de cálcio, európio e térbio seja crucial. Concluindo, os dados obtidos até o momento indicam que a metanólise, etanólise e aminólise de peptidil-KOR assistidas pelos íons Ca2+ consistem em uma alternativa nova e atraente para preparar ésteres &#945;-metílicos e &#945;-etílicos de N&#945;-acil-peptídeos totalmente protegidos ou desprotegidos. As reações foram realizadas em pH aparente neutro e se mostraram muito seletivas à ligação oxima. / The ultimate goal of the present work was to propose and stablish a new method to prepare a-esterified protected peptides. At first, we examined the effect of HAc, Ca(OAc)2 and mixtures of both on the efficiency of methanolysis of Ac-Ala-Gly-X-KOR (where, X= Gly, Ala or Phe) in DCM. Surprisingly, the reactions carried-out in the presence of Ca(OAc)2 gave the corresponding esterified peptides with the highest yields. Based on these data, we compared the efficiencies of methanolysis of Ac-Ala-Gly-X-KOR [where, X= Lys(2-Cl-Z), Phe, Ala or Gly] assisted by the calcium ion. They showed to be dependent on the nature of the C-terminal residue linked to the solid support since the yields found for 6-hour reactions were: Lys(2-Cl-Z)< Phe <Ala < Gly. After 48 h of reaction, yields were all higher than 68%. The possibility of obtaining Ac-Ala-Gly-X-OEt [where, X= Lys(2-Cl-Z) or Ala] using the same procedure was then investigated. In 72 hours at 37°C Ac-Ala-Gly-Ala-OEt and Ac-Ala-Gly-Lys(2-Cl-Z)-OEt were produced with yields of 69% and 24%, respectively. When DCM was replaced by DMSO or 25%DMSO/toluene at 55°C, the percentages of peptide release from Ala-Gly-Lys(2-Cl-Z)-KOR were 44% in 72h and 66% in 36h, respectively. Benzolysis and thiolysis of Ac-Ala-Gly-X-OEt [where, X= Lys(2-C-Z) or Ala] were tested as well. Despite the fact that amino acid analysis of the remaining peptidyl-KOR showed that the peptide detachment from the resin had occurred to some extent, we were not able to detect by analytical RP-HPLC the products formed in the reaction media. We also studied the methanolyses of some peptidyl-resins related to the peptide hormone cholecystokinin: Ac-lle-Ser(Bzl)-Asp(OBzl)-KOR (1), Ac-lle-Ser(Bzl)-Asp(OcHex)-KOR (2) and Ac-lle-Ser(Bzl)-Asp(OBzl)-Arg(Mtr)-KOR (3). The yields of peptide detachment from 1, 2 or 3 were 54, 68 and 84%, respectively. No significant amounts of byproducts resulting from possible rearrangements or simultaneous transesterification of the ester present at the lateral side chain of aspartic acid were detected in the reaction media. Such results allowed us to conclude that the procedure proposed was quite selective and applicable to peptides containing protected arginine or aspartic acid attached to Kaiser oxime resin. The effect of the solvent on the methanolysis efficiency was then investigated. For that, reactions containing Ac-lle-Ser(Bzl)-Asp(OcHex)-KOR and Ca(OAc)2 suspended in DCM, DMSO and CHCl3 were carried-out. That in DMSO was quantitative while those in DCM or CHCl3 yielded the esterified peptide with 63% in 72 h. The ability of Eu3+ to assist methanolysis of peptidyl-KOR in DCM was demonstrated since peptide detachment yields for some reactions were similar or slightly superior to those assisted by Ca2+. Additional studies showed that molar excess of Ca2+ or Eu3+ is not required for the enhancement of methanolysis efficiency. Comparative methanolyses and ethanolyses of Ac-lle-Ser(Bzl)Asp(OcHex)-KOR assisted by Ca2+, Eu3+ and Tb3+ in different solvents were also studied. Methanolysis in DCM in the presence of Ca2+, Eu3+ or Tb3+ supplied the desired product with yields of 62, 95 or 95%, respectively. In DMSO, the reaction assisted by Ca2+ was quantitative, but no product was formed in presence of Eu3+ or Tb3+. Ethanolysis in DCM assisted by Eu3+ or Tb3+ was also more efficient than that performed in presence of Ca2+ (28, 17 and 5%, respectively). However, in DMSO the desired &#945;-ethyl ester was formed only in the presence of Ca2+. We were able to show that Ca(OAc)2 can also assist the aminolysis of Ac-lle-Ser(Bzl)-Asp(OcHex)-KOR in DMF by Arg(HCl)OMe or Arg(HCl)-OEt. The peptide detachment yields were higher than 70%, being the desired esters the major products formed in the reaction medium. In the absence of the metal ion, yields were only 10-13%. Further studies evidenced that aminolysis assisted by Ca2+ is equivalent (or slightly inferior in terms of selectivity) to those described in the literature that uses HAc as catalyst. Attempts of aminolysis in DMSO, NMP, DMSO/toluene (1:1, v/v) containing Ca2+, Eu3+ and Tb3+ showed that only Ca2+ was able to assist the formation of the esterified peptide in all these solvents. This is probably due to DMSO interaction with the lanthanide ions. Preliminary analyses of two peptidyl-KOR by HR-MAS in the presence and absence of Ca2+ were performed in order to obtain structural information that could help us to determine the interactions established between the metal ion and peptides. The results found indicated that the presence of Ca2+ makes peptide chain less mobile, which suggests complexation. A complexation could make the peptide-resin oxime bond more susceptible to nucleophilic attacks, favoring solvolysis and aminolysis. Swelling measurements of Ac-Ala-Gly-Lys(2-Cl-Z)-KOR and Ac-lle-Ser(Bzl)-Asp(OcHex)-KOR in pure solvents and in the mixtures employed showed that the solvation of peptidyl-KOR is not the factor that determines the efficiency of these reactions. On the other hand, qualitative studies suggested that the solubility of the calcium, europium and terbium salts could be crucial. Hence, the data presented here indicate that methanolysis, ethanolysis and aminolysis of peptidyl-KOR assisted by Ca2+ provide a new alternative and attractive way to prepare fully protected or unprotected N&#945;-acyl-peptides &#945;-methyl and &#945;-ethyl esters. The reactions were performed at neutral pH and showed to be very selective to oxime bond.

Orientador: Vani Xavier de Oliveira Junior / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Ciência e Tecnologia/Química, 2012