Dissertação(mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal / Submitted by Sabrina Silva de Macedo (sabrinamacedo@bce.unb.br) on 2012-07-11T15:06:44Z No. of bitstreams: 1 2012_CesarAugustoPriasMarquez.pdf: 1029411 bytes, checksum: d57e4c8da8e6cbfd2e1beb6554f2c535 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2012-07-30T12:03:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_CesarAugustoPriasMarquez.pdf: 1029411 bytes, checksum: d57e4c8da8e6cbfd2e1beb6554f2c535 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-30T12:03:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_CesarAugustoPriasMarquez.pdf: 1029411 bytes, checksum: d57e4c8da8e6cbfd2e1beb6554f2c535 (MD5) / No presente trabalho foi caracterizado biológica e estruturalmente umpeptídeo análogo da ocelatina-P1 isolado a partir da secreção da pele da rã-pimentaLeptodacfylus labyrinthicus. A secreção cutânea, obtida por estimulação elétrica, foifracionada por RP-HPLC em coluna C3 e as frações obtidas testadas contra cepasreferenciais das bactérias Escherichia coii e Staphylococcus aureus. Um novopeptídeo antimicrobianoi nomeado G160CP1, foi purificado por RP-HPLC em colunaC18, analisado por MALDI-TOF MS e submetido à degradação de Edman paradeterminação de sua estrutura primária. Posteriormente, o peptídeo G160CP1 foisintetizado quimicamente (com o emprego da química Fmoc) e analisado pordicroísmo circular para avaliação dos seus componentes de estrutura secundária,bem como empregado em ensaios biológicos para avaliação de suas propriedadescitolíticas. A atividade antibacteriana deste peptídeo foi avaliada com a determinaçãoda CIM contra bactérias Gram-positivas {Staphylococcus aureus, Staphylococcusepidermidis e Enterococcus faecalis) e Gram-negativas (Escherichia coli, Klebsiellapneumoniae, Enterobacter cloacae e Pseudomonas aeruginosa). Também foramavaliados seus efeitos citotóxicos sobre eritrócitos, leucócitos e plaquetas humanos.O peptídeo G160CP1 apresenta uma massa molecular de 2,51 kDa, amidação naporção C-terminal e propensão para formar estruturas em a-hélice em ambienteshidrofóbicos. Tal peptídeo mostrou-se ativo contra os bacilos Gram-negativos E. colie K. pneumoniae e contra a bactéria Gram-positiva S. epidermidis, não tendodemonstrado toxicidade relevante contra células sangüíneas. Essas característicastornam o peptídeo G160CP1 um bom candidato para o tratamento de doençascausadas por bactérias Gram-negativas. ______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / This study allowed the biological and structural characterization of a peptideanalog of ocellatin-P1 isolated from the skin secretion of the pepper-frogLeptodactyius labyhnthicus. The skin secretion, obtained by electrical stimulation,was fractioned by RP-HPLC using a Cs column and the eluted fractions were testedagainst Escherichia coli and Staphylococcus aureus bacterial strains. One newantimicrobial peptide, named G160CP1, was purified by RP-HPLC using a C18column, analyzed by MALDI-TOF MS and sequenced by Edman degradation.Subsequently, the peptide was chemically synthesized (using Fmoc chemistry) andanalyzed by circular dichroism for assessment of its secondary structurecomponents, as well as employed in biological assays to evaluate its cytolyticproperties. Antibacterial activity of this peptide was assessed by determination of itsMICs against Gram-positive (Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidisand Enterococcus faecalis) and Gram-negative {Escherichia coli, Klebsiellapneumoniae., Enterobacter and Pseudomonas aeruginosa) bacteria. Cytotoxic effectson human erythrocytes, leucocytes and platelets were also assessed. The G160CP1peptide has a molecular mass of 2.51 kDa, amidated C-terminus and a propensity toform a-helix structures at hydrophobic environments. This peptide was active againstGram-negative bacilli E. coli and K. pneumoniae and against the Gram-positivebacteria S. epidermidis, while not relevant toxicity was found in blood cells. Suchfeatures make G160CP1 a good candidate for treatment of diseases caused byGram-negative bacteria.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, 2011. / Submitted by Shayane Marques Zica (marquacizh@uol.com.br) on 2011-06-30T17:10:00Z No. of bitstreams: 1 Andrea_Cruz_CarvalhoParcial_noPW.pdf: 1857896 bytes, checksum: cf340b7a56f876a3c4e447cb70f8df1f (MD5) / Approved for entry into archive by Guilherme Lourenço Machado(gui.admin@gmail.com) on 2011-07-06T12:59:23Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Andrea_Cruz_CarvalhoParcial_noPW.pdf: 1857896 bytes, checksum: cf340b7a56f876a3c4e447cb70f8df1f (MD5) / Made available in DSpace on 2011-07-06T12:59:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Andrea_Cruz_CarvalhoParcial_noPW.pdf: 1857896 bytes, checksum: cf340b7a56f876a3c4e447cb70f8df1f (MD5) / As secreções cutâneas dos anfíbios anuros são reconhecidamente uma rica fonte de substâncias bioativas. Um importante grupo dentre esses compostos são os peptídeos antimicrobianos (PAMs). Os PAMs são componentes do sistema imune inato, presentes na maioria dos seres vivos, que vêm despertando um interesse crescente, uma vez que apresentam atividade antimicrobiana contra um amplo espectro de microrganismos, sendo usualmente atóxicos para células de mamíferos. O presente trabalho teve como objetivo o isolamento, a identificação e a caracterização empregando espectrometria de massa tipo MALDI-TOF de PAMs presentes nas secreções cutâneas dos anuros Proceratophrys goyana, Physalaemus fuscumaculatus e Physalaemus centralis, comumente encontrados na fauna do Cerrado. Também foi objeto do presente a caracterização biológica de duas versões sintéticas do peptídeo ceratoxin-like previamente isolado e quimicamente caracterizado da rã Hypsiboas albopunctatus. As secreções cutâneas das espécies P. goyana, P. fuscumaculatus e P. centralis foram obtidas por estimulação elétrica, liofilizadas e armazenadas a - 20°C. Cada secreção bruta foi submetida a fracionamento por RP-HPLC usando coluna C18 (Shim-pack CLC-ODS, 6.0 x 150 mm) em sistema HPLC com emprego de gradiente linear de TFA 0,1% (v/v) em acetonitrila. A detecção foi monitorada a 216 nm e a eluição realizada com fluxo de 1 mL/min. As frações cromatográficas eluídas foram coletadas manualmente e secadas a vácuo. Diferenças significativas nos perfis cromatográficos de cada espécie foram observadas. Todas as frações cromatográficas obtidas foram avaliadas quanto à capacidade em inibir a proliferação de bactérias patogênicas S. aureus (ATCC 25923) e P. aeruginosa (ATCC 27853), bem como quanto à capacidade de lisar eritrócitos humanos. As frações ativas foram analisadas por espectrometria de massa tipo MALDI-TOF a fim de se avaliar seu grau de pureza e determinar as massas moleculares dos componentes presentes. Peptídeos antimicrobianos foram identificados nas três secreções cutâneas em estudo. As duas versões sintéticas do peptídeo ceratoxin-like contendo Leu ou Ile na porção C-terminal foram avaliados quanto ao seu potencial inibitório sobre o crescimento de sete linhagens de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. As duas versões do peptídeo ceratoxin-like de H. albopunctatus apresentaram atividade antibacteriana significativa com MICs que variaram de 2 a 8 μM. Como vários PAMs de amplo espectro de ação também apresentam citotoxicidade para células cancerígenas, tais peptídeos foram testados contra a linhagem celular de câncer cervical (HeLa) e fibroblastos normais (NIH3T3). Os resultados obtidos indicaram que as duas versões testadas exibem atividade citotóxica contras as linhagens celulares avaliadas. Estudos de bioprospecção relacionados com a caracterização química e biológica dos compostos presentes na secreção cutânea de anuros são de extrema relevância, podendo auxiliar no esclarecimento de questões taxonômicas, no desenvolvimento de novas drogas terapêuticas, além do entendimento da biologia dos anuros. O presente trabalho é parte de um esforço para aumentar o nosso conhecimento acerca da diversidade de peptídeos antimicrobianos presentes nas secreções cutâneas de anuros da fauna do Cerrado brasileiro. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Skin secretion of anurans are recognized as a rich source of several bioactive substances. An important group of such compounds are the antimicrobial peptides (AMPs). AMPs are components of the innate immune system present in the most living beings that have been awaken to an increasing interest, because they exhibit antimicrobial activity against a large array of microorganisms, being usually non-toxic for mammal cells. The aim of this study was the isolation, identification and characterization using MALDI-TOF mass spectrometry of AMPs from the cutaneous secretions of the anurans Proceratophrys goyana, Physalaemus fuscumaculatus and Physalaemus centralis, commonly found in the Brazilian Cerrado. It was also described the biological characterization of two synthetic versions of the ceratoxinlike peptide previously isolated and chemically characterized from the frog Hypsiboas albopunctatus. The skin secretions were obtained by electrical stimulation, freeze-dried and stored at -20ºC. Each crude secretion was fractioned by RP-HPLC on a C18 column (Shim-pack CLC-ODS, 6.0 x 150 mm) using a HPLC system and employing a linear gradient of TFA 0,1% (v/v) in acetonitrile. The detection was monitored at 216 nm and the elution was performed at 1 mL/min. The eluted chromatographic fractions were manually collected and dried in vacuum. Meaningful differences in the chromatographic profiles of each species were observed. All eluted chromatographic fractions were tested for their cellular proliferation inhibition of pathogenic bacteria S. aureus (ATCC 25923) and P. aeruginosa (ATCC 27853), as also for their ability to promote lysis of human erythrocytes. The bioactive fractions were analyzed by MALDI-TOF mass spectrometry in order to evaluate their homogeneity and to determine the molecular masses of the major components present in each fraction. Antimicrobial peptides were identified in the three secretions under analysis. The two synthetic versions of the ceratoxin-like peptide with Leu or Ile in the C-terminal region were evaluated for their inhibitory activity on the cellular proliferation of seven different Gram-positive and Gram-negative bacteria. The two versions of the ceratoxin-like peptide of H. albopunctatus exhibited strong antibacterial effects with MICs ranging from 2 to 8 M. As several AMPs of large spectrum of action are also toxic to cancer cells, these two peptides were also tested against cervix cancer cell lineage (HeLa) and fibroblasts (NIH3T3). The results indicated that the two peptides were cytotoxic for both tested cells (cancer and normal cells). Bioprospective studies related to the chemical and biological characterization of the compounds present in the skin secretions of anurans are extremely relevant, as they can help clarifying taxonomy issues, on the development of therapeutic drugs, and also on the understanding of amphibian biology. This work is part of an effort to increase our knowledge about the diversity of antimicrobial peptides present in the skin secretions of the anurans from the Brazilian Cerrado fauna.

Orientadores: Marta H. Krieger-Azollini, Antonio Carlos Boschero / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-20T01:40:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Crepaldi_SilviaCristina_M.pdf: 5590505 bytes, checksum: b013d47cf01e064c820efc4b70d7cbef (MD5) Previous issue date: 1991 / Resumo: o presente trabalho teve como objetivo analisar o efeito da PRL no processo de maturacão da resposta secretória à glicose em células B pancreáticas. Enfase foi dada, ao estudo de possíveis alteracões nas permeabilidades dos íons potássio e cálcio e sobre a secrecão de insulina.Para isto, ilhotas de ratos Wistar recém-nascidos, foram cultivadas por 7 a 9 dias, em Meio Essencial Mínimo, acrescido de 11% de soro fetal bovino (v/v), 2% da mistura penicilina (100 U/ml)-estreptomicina (0,1 mg/ml), com concentracão final de glicose de 10 mM. As ilhotas foram mantidas a 37°C; pH 7,4; em uma atmosfera com 5% de C02. O meio de cultura foi renovado a cada 48 horas. Parte do material em cultura serviu como controle e parte recebeu tratamento diário com PRL (2 ~g/ml).Após o período de cultura, foram executados os seguintes protocolos:a) Perfusão de ilhotas para a análise da dinâmica do efluxo do aSRb+, do 45Ca2+ e da secrecão de insulina. b) Medidas do influxo de 45Ca2+. c) Extracão e dosagem do (conteúdo total de insulina por ilhota.Os resultados mostraram que: 1. A capacidade da glicose em alterar o efluxo do 8sRb+, foi maior em ilhotas tratadas com PRL do que em relacão às controle. 2. O efeito da tolbutamida, diminuindo e da diazoxida,aumentando o efluxo do 8SRb+, foi mais acentuado em ilhotas tratadas com PRL do que nas controle. 3. O aumento na incorporação de 45Ca que ocorreu frente ao aumento da concentração de glicose ou de K+, foi semelhante em ambos os grupos experimentais.4. Na ausência do Ca2+ extracelular, glicose não provocou redução no. efluxo do 45Ca2+, em ambos os grupos de ilhotas.5. O tratamento hormonal melhorou a resposta secretória das ilhotas, quando estimuladas por 16,7 mM de glicose. 6. O conteúdo total de insulina foi maior em ilhotas tratadas com PRL do que em ilhotas controle. Concluindo, os resultados indicam que em ilhotas neonatais de rato, o tratamento crônico com PRL, aumentou o conteúdo de insulina, potencializou a capacidade da glicose em reduzir o efluxo do K+ e em aumentar a secreção de insulina. Contudo, o tratamento com PRL não influiu de maneira significativa sobre o efeito da glicose a nível dos fluxos de Ca2+ / Abstract: The present study aimed to compare the effect of PRL on the maturation of the mechanisms of insulin secretion induced by glucose in neonatal pancreatic islets. Our attention were centralized mainly on possible alterations in Ca2+ and K+ fluxes and insulin release.For this purpose islets from neonatal Wistar rats were cultured for 7 to 9 days in Minimal Essential Medium,supplemented with 11% fetal calf serum (v/v), 2% penicilin (100 Ujml)-streptomicin (0,1 mg/ml) and glucose (final concentration 10 mM). The islets were maintened at 37°C; pH 7,4; in a 5% CO2 atmosphere. Culture medium was renewed every 48 hours. Part of the islets was used as control and part was treated daily with PRL (2 j.lg/ml). After culture, the following protocols were executed: a) Measurement of 86Rb+ and 45Ca2+ efflux rate and insulin release by perifused islets.b) Measurement of 45Ca influx in incubated islets. c) Measurement of total insulin content in the islets. The results showed that: 1. The capacity of glucose in changing the 8BRb+ effl~, was higher in PRL-treated islets than in control islets. 2. The effects of tolbutamide (lowering) and diazoxide (increasing) the B6Rb+ efflux, were higher in PRL-treated than in control islets. 3. PRL-treatment did not affect the ability of glucose and high K+ to increase the 45Ca uptake by incubated islets. 4. Glucose failed to affect the 45Ca2+ efflux from islets perifused in the apsence of Ca2+, either in PRL-treated or control islets. 5. Total insulin content was higher in PRL-treated than in contraI islets. 6. Finally, glucose induced higher increase in insulin secretion in PRL-treated islets than in contraI islets. The results indicate that in neonatal rat islets, the cronic treatment wi th PRL increased the insulin content of islets and significantly changed the ability of glucose in reducing the K+ efflux and to increasing the insulin secretion. However, PRL treatment did not influence the effect of glucose on Ca2+ fluxes / Mestrado / Fisiologia e Biofisica / Mestre em Ciências Biológicas

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2016. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2016-06-23T13:12:54Z No. of bitstreams: 1 2016_CarlosJoseCorreiaSantana.pdf: 4211658 bytes, checksum: 205d3007401d3ab41de38c51de3078b1 (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2016-07-30T12:10:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_CarlosJoseCorreiaSantana.pdf: 4211658 bytes, checksum: 205d3007401d3ab41de38c51de3078b1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-30T12:10:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_CarlosJoseCorreiaSantana.pdf: 4211658 bytes, checksum: 205d3007401d3ab41de38c51de3078b1 (MD5) / Atualmente, é crescente o número de micro-organismos resistentes aos antibióticos convencionais sendo imprescindível o desenvolvimento de novas alternativas que possam conter o aumento da resistência microbiana. Os peptídeos antimicrobianos surgem como uma alternativa interessante, pois atuam sobre a membrana plasmática, reduzindo a possibilidade de resistência. A secreção cutânea de anfíbios é uma fonte rica de peptídeos antimicrobianos e muitos destes também apresentam atividade antiproliferativa e citotóxica sobre células tumorais. O presente estudo teve como objetivo avaliar a secreção cutânea de Hypsiboas raniceps quanto à presença de peptídeos com atividade antiproliferativa e citotóxica sobre bactérias e fungos patogênicos, bem como células de melanoma murino (B16F10). Foram identificados e purificados dois peptídeos inéditos, denominados Hr22 e Hr24, com potente atividade sobre bactérias, principalmente sobre patógenos Gram-positivos e também mostraram-se ativos sobre eritrócitos humanos, células de melanona (B16F10) e fibroblastos normais (NIH3T3). No caso dos efeitos sobre células de melanoma, observou-se que os peptídeos também foram tóxicos para as células normais testadas, entretanto o peptídeo Hr24 indicou uma provável seletividade em relação às células de câncer, com uma dose efetiva com cerca da metade do valor obtido para as células normais. O tratamento empregando-se a dose correspondente ao IC75 do peptídeo Hr22 reduziu o número de células viáveis e a maioria das células apresentaram membrana plasmática danificada. Ambos os peptídeos induziram uma maior exposição de fosfatidilserina (marcada com anexina V-FITC) e não apresentaram marcação somente com iodeto de propídio (PI) quando testados na dose correspondente ao IC50. Empregando-se a dose do IC75 do peptídeo Hr22, observou-se alterações no potencial de membrana mitocondrial, além da fragmentação de DNA e alterações no ciclo celular, sugerindo morte celular por apoptose. Mais estudos são necessários para a melhor compreensão de como agem estes peptídeos. A produção de análogos com modificações estruturais podem melhorar suas atividades e especificidades tanto para micro-organismos quanto para células de câncer. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Currently, the number of microorganisms resistant to conventional antibiotics is rising, thus the development of new alternatives that may hold back this increase in resistance is essential. The antimicrobial peptides emerged as an attractive alternative because they act on the plasma membrane, reducing the possibility of resistance. Amphibian skin secretion is a rich source of these peptides and many of them also have activity on tumor cells. The present study aimed to evaluate Hypsiboas raniceps skin secretion for the presence of peptides with antiproliferative and cytotoxic activity against pathogenic bacteria and fungi, as well as murine melanoma cells (B16F10). Two novel peptides were identified, named Hr22 and Hr24, with potent activity against bacteria, especially on Gram-positive pathogens, also showing activity on human red blood cells, melanoma cells (B1F10) and normal fibroblasts (NIH3T3). In respect to the effects on melanoma cells, the peptides were also toxic to normal cell lines tested, however the Hr24 peptide indicated a probable selectivity in relation to cancer cells, with an effective dose of about half of the value obtained for normal cells. Treatment employing the corresponding IC75 dose of the Hr22 peptide reduced the number of viable cells and most cells showed plasma membrane damaged. Both peptides induced a higher exposure of phosphatidylserine (anexin V-FITC labeled) and were not labeled only with propidium iodide (PI) when tested with the corresponding IC50. Employing the IC75 dose of the Hr22 peptide, alterations were observed in the mitochondrial membrane potential, as well as DNA fragmentation and alterations in the cell cycle, suggesting cell death by apoptosis. More studies are needed to better understand how these peptides act. The production of analogs with structural modifications can improve their activities and specificities for both micro-organisms and cancer cells.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Biologia, Programa de Pós-graduação, Departamento de Biologia Animal, 2014. / Submitted by Cristiane Mendes (mcristianem@gmail.com) on 2014-11-20T19:38:59Z No. of bitstreams: 1 2014_DiegoAlejandroFalico.pdf: 11887714 bytes, checksum: 2ee479f958a7bbf12e17ec4ccbb0f4e8 (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2014-11-25T10:42:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_DiegoAlejandroFalico.pdf: 11887714 bytes, checksum: 2ee479f958a7bbf12e17ec4ccbb0f4e8 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-25T10:42:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_DiegoAlejandroFalico.pdf: 11887714 bytes, checksum: 2ee479f958a7bbf12e17ec4ccbb0f4e8 (MD5) / O estudo de novas fontes de compostos bioativos permitiu o desenvolvimento de muitos produtos biotecnológicos, incluindo drogas com importantes atividades biológicas, muitas das quais são usadas atualmente no tratamento de doenças relevantes, especialmente de natureza infecciosa. No presente trabalho, foi realizada uma varredura por peptídeos com atividade antifúngica a partir da secreção cutânea da rã brasileira Hypsiboas raniceps. Indivíduos adultos de H. raniceps foram coletados no estado de Goiás, Brasil. As secreções cutâneas foram obtidas por meio de estimulação elétrica moderada, congeladas, secas e fracionadas por HPLC empregando-se coluna de fase reversa C18. Todas as frações cromatográficas foram testadas quanto à capacidade de inibir a proliferação do fungo Candida albicans e as frações ativas foram analisadas por espectrometria de massas (MALDI-TOF MS). O perfil cromatográfico resultou em cerca de 30 frações, oito das quais promoveram redução na proliferação do fungo C. albicans acima de 25%. As frações com atividade antifúngica apresentaram componentes de massa molecular variando entre 1000 e 3000 Da. As frações 27 e 28 foram as mais ativas, mas a análise por MS revelou a presença de vários componentes nessas frações. A fração 28 foi selecionada e submetida a uma passo cromatográfico adicional, levando à obtenção do peptídeo bioativo presente nessa fração. O peptídeo HR 36 puro foi acumulado e testado contra o fungo C. albicans. Este novo peptídeo apresenta massa molecular igual a 3 kDa e é capaz de inibir a proliferação de C. albicans na concentração de 128 M em 50%. No presente estudo, foi constatada que a secreção cutânea de H. raniceps é uma fonte de peptídeos antifúngicos e um novo peptídeo antifúngico de 3 kDa foi obtido em alto grau de pureza de modo a permitir a sua caracterização biológica e química. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The study of new sources of bioactive compounds allowed the development of many biotechnological products, including drugs with important biological activities, many of which are used today for the treatment of relevant diseases, especially those of infectious nature. In the present study we performed a screening for peptides with antifungal activity from the skin secretion of the Brazilian frog Hypsiboas raniceps. Adult specimens of H. raniceps were collected in Goiás, Brazil. Skin secretions were obtained by mild electric stimulation, freeze-dried and fractionated by HPLC using a C18 reversed-phase column. All fractions were tested for inhibitory activity against the fungus Candida albicans, and the bioactive fractions were submitted to mass spectrometric analysis (MALDI-TOF MS). The typical chromatographic profile showed approximately 30 fractions, eight of which promoted reduction in yeast cell proliferation above 25%. The antifungal fractions showed molecular mass components ranging from 1000 to 3000 Da. Fractions 27 and 28 were the most active but the MS analysis revealed multiple components present in these fractions. Fraction 28 was selected and submitted to an additional chromatographic step in order to obtain the major bioactive peptide present in this sample. Peptide HR 36 was acumulated and tested against C. albicans. This new peptide has a molecular mass of 3 kDa and is able to inhibit the proliferation of C. albicans at 128 M in 50%. It was observed that H. raniceps skin secretion is a source of antifungal peptides and one new 3 kDa antifungal peptide was obtained in high-purity which will allow in its biological and chemical characterization.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2008. / Submitted by Luana Patrícia de Oliveira Porto (luana_porto_23@hotmail.com) on 2010-03-12T20:33:00Z No. of bitstreams: 1 2008_MichelledaSilvaLiberio.pdf: 6096417 bytes, checksum: 5931809225d410af1726c5387c700412 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-05-12T18:28:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_MichelledaSilvaLiberio.pdf: 6096417 bytes, checksum: 5931809225d410af1726c5387c700412 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-12T18:28:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_MichelledaSilvaLiberio.pdf: 6096417 bytes, checksum: 5931809225d410af1726c5387c700412 (MD5) Previous issue date: 2008 / Atualmente, o surgimento de resistência às drogas disponíveis no mercado pelos microorganismos e pelas células de câncer tornou o desenvolvimento de novas formas terapêuticas imprescindível. A secreção cutânea dos anfíbios é uma rica fonte natural de peptídeos com atividades anticarcinogênica (PAC) e antimicrobiana (PAM). Entretanto, o veneno desses animais também é constituído de outras macromoléculas, por exemplo, enzimas, as quais têm sido pouco investigadas. O presente estudo teve como objetivo caracterizar, de forma geral, a secreção glandular da rã-pimenta Leptodactylus labyrinthicus. Especificamente, buscou-se identificar e caracterizar química e biologicamente alguns dos peptídeos presentes, além de investigar a presença de atividades enzimáticas. O estudo revelou a ocorrência de inúmeros peptídeos e proteínas, demonstrando a riqueza e o potencial biológico desse veneno. Os dois peptídeos antimicrobianos purificados foram fallaxin e pentadactylin, os quais já haviam sido isolados de outras espécies do gênero Leptodactylus. Ambos apresentaram atividade contra bactérias Gram-positivas e Gram-negativas; e fallaxin foi identificado como fracamente hemolítico. Como vários PAMs de amplo espectro de ação também são citotóxicos para células de câncer, os dois peptídeos isolados foram testados contra as linhagens celulares de câncer HeLa, MCF-7 e B16F10, demonstrando-se efetivos contra todas as linhagens. Observou-se também que os dois PACs são pouco seletivos, pois foram mais tóxicos para células normais de fibroblasto (FHN) do que para as células tumorais. Portanto, o uso terapêutico desses PACs deverá ser via estratégias que aumentem a especificidade dos mesmos. Os estudos de mecanismo de ação com pentadactylin não foram conclusivos, sugerindo a morte de células de MCF-7 via apoptose, podendo ser seguida pelo processo necrótico. Além desses, o fragmento Flx-16 de fallaxin e o peptídeo PGL-Ll, rico em glicina e leucina, foram testados, contudo nenhuma atividade biológica foi detectada. A investigação da atividade enzimática da secreção revelou a presença de enzimas proteolíticas pertencentes aos clãs das metalo- e serino-peptidases e que atuam de maneira ótima em pH neutro a ligeiramente básico; e de fosfolipases do tipo A2. O estudo e caracterização da composição da secreção cutânea de anfíbios são de extrema relevância, podendo ajudar a esclarecer questões taxonômicas, identificar drogas terapêuticas em potencial, além de auxiliar no entendimento da biologia dos anfíbios. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Nowadays, the emergence of resistance to the current available chemotherapeutic drugs by microorganisms and cancer cells make the development of new agents imperative. The skin secretion of amphibians is a natural rich source of antimicrobial (PAM) and anticancer peptides (PAC). Nevertheless, the venom of these animals is also composed by other macromolecules, such as enzymes, which have not been studied extensively yet. The aim of this study was to characterize the glandular secretion of the pepper-frog Leptodactylus labyrinthicus, targeting to identify and characterize chemically and biologically some of the peptides present, besides detecting enzymatic activities. The research has found a variety of peptides and proteins, showing the richness and the biological potential of this venom. Two PAMs were purified, fallaxin and pentadactylin, which have already been isolated from other species of the genus Leptodactylus. Both peptides were active against Gram-positive and Gram-negative bacterias; moreover, fallaxin showed a weak hemolytic activity. As some PAMs of broad spectrum of action are also toxic to cancer cells, the two peptides isolated were tested against the cancer cell lines HeLa, MCF-7 and B16F10, being effective against all of them. We noticed that both PACs aren’t specific, since they have been more toxic to normal fibroblast cells (FHN) than to tumor cells. Therefore, it is mandatory that the therapeutic use of these PACs be accompanied by strategies that enhance their selectiveness. The studies of action mechanism with pentadactylin were not conclusive, suggesting that MCF-7 cells die by apoptosis; however it may be followed by necrosis. The peptide PGL-Ll, rich in glycine and leucine, and the fragment Flx-16 from fallaxin were tested, though no biological activity was found. The research of enzyme activity of the secretion revealed the presence of proteolytic enzymes of the clans metallo- and serine-peptidases, and that they act optimally at neutral to slightly basic pH, and of phospholipases A2. The study and characterization of the skin secretion of amphibians is of extreme relevance, helping to elucidate taxonomic issues, identifying putative therapeutic drugs, besides helping to understand the biology of amphibians.

Orientador: Antonio Carlos Boschero / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T19:19:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Delattre_Edson_D.pdf: 8025457 bytes, checksum: ce0a341bbc8af8368dc36028f49008fd (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Investigaram-se a secreção de insulina e os efluxos de K+ e Ca2+,em ilhotas pancreáticas de rato, isoladas em seis diferentes momentos do dia (0,4, 8, 12, 16 e 20 h) Para o estudo da secreção de insulina, utilizaram-se ilhotas de ratos, alimentados ou submetidos a jejum durante 48 horas, incubadas (60 min a 37°C) em condição estática, em tampão-Krebs contendo glicose (entre zero e 27,7 mM), após pré-incubação durante 30 minutos. Os efluxos de K+ e Ca2+ foram determinados pela medida das taxas de efluxo de 86Rb e 45Ca, respectivamente, em ilhotas previamente carregadas desses traçadores e perfundidas por Krebs contendo diferentes concentrações de glicose. Ritmo diário da secreção de insulina foi observado em G 5,6 (Krebs contendo glicose [5,6 mM]) e em G 8,3, concentrações nas quais a maior secreção ocorreu no período escuro. O grupo do período escuro apresentou deslocamento, para a esquerda, da curva de secreção de insulina em resposta a glicose, com menor limiar estimulatório que o grupo do período claro. Incremento da concentração extracelular de glicose (de 5,6 para 8,3 mM) provocou maior aumento da secreção de insulina, no período escuro. o ECso das curvas de secreção de insulina foi mínimo à O h e máximo às 8h. Verificou-se correlação negativa, ao longo do dia, entre o efeito da retirada de glicose do Krebs, sobre o efluxo fracional de 86Rb, e os valores da secreção de insulina em G O. Constatou-se variação diária do efeito da supressão de glicose do Krebs, sobre o efluxo de 86Rb, com valores máximo e mínimo às 16 e 4 h, respectivamente. Jejum durante 48 horas não impediu a ocorrência de variação diária do efluxo de 86Rb. Contudo, provocou redução, tanto dos valores de parâmetros que medem esse efluxo, quanto da amplitude de variação dos mesmos, nas 24 horas do dia. Provocou, também, aparente deslocamento de fase dos parâmetros que representam o efeito da retirada de glicose do meio de perfusão. o efeito máximo de glicose (8,3 mM), ao reduzir a taxa de efluxo de 86Rb, foi observado à O h, enquanto o mínimo foi registrado às 12 h. Verificou-se significativa correlação, ao longo do dia, entre os valores da secreção de insulina e a intensidade da inibição do efluxo de 86Rb, provocada por glicose (8,3 mM). Embora se tenha constatado variação diária do efluxo de 45Ca, em G 16,7, com valor máximo às 20 h, não se observou correlação entre este parâmetro e os valores da secreção de insulina, em presença de G 16,7. Diante desses resultados, conclui-se que, em células beta de ilhotas pancreáticas isoladas de rato: A sensibilidade a glicose está diminuída no período claro. A responsividade a glicose é máxima à O h e mínima às 8 h. A secreção de insulina, estimulada por concentrações fisiológicas de glicose, é maior durante o período de atividade dessa espécie, o que decorreria do maior efeito de glicose, ao reduzir a permeabilidade a potássio, no período escuro. A ativação de canais K+ATP provocada por glicopenia é, aparentemente, mais extensa ao final do período de repouso dessa espécie. o ciclo alimentação-jejum, aparentemente, exerce efeito mascarador sobre o ritmo diário do efluxo de potássio / Abstract: This thesis examines the insulin secretion and the t<" and Ca2+ effluxes in pancreatic islets at different times of the day. Insulin secretion was measured during a 60 min incubation (37°C) of islets from fed or 48 h-starved rats. The t<" and Ca2+ effluxes were determined by measuring the rate of Rb + and Ca2+ efflux, respectively, from islets preloaded with these tracers and incubated in Krebs solution containing different concentrations (O; 2.8; 5.6; 8.3; 11.1; 16.7 and 27.7 mM) of glucose. A diary rhythm was observed in insulin secretion, with the highest release occurring during the dark period in G 5.6 (Krebs containing 5.6 mM glucose) and G 8.3. The dark period insulin secretion curve in response to glucose was shifted to the left compared with the light period response and showed a lower stimulatory threshold. Thus, the lowest ECso for stimulation by glucose was observed at 12:00 a.m. (7.8 mM) and the highest at 8:00 a.m. (12.4 mM). During the day, a negative correlation was shown between the effect of the glucose withdraw from the Krebs, on the fractional efflux of the 86Rb and the levei of insulin secretion in G O. For the former, the maximum and minimum occurred at 4:00 p.m. and 4:00 a.m., respectively. Starvation for 48 h did not inhibit the occurrence of 86Rb efflux although there was a reduction in the absolute values and in the range of variation over a 24 h period. It also induced apparent shift of phase of the parameters that represents the effect of the glucose remova I from the perfusion medium. The maximum and minimum effects of 8.3 mM glucose in reducing the efflux rate were observed at 12:00 a.m. and 12:00 p.m., respectively. Over a 24 h period, there was a significant correlation between the levei of insulin secretion and the inhibition of 86Rb efflux induced by 8.3 mM glucose. Although the efflux of 45Ca in G 16.7 peaked at 8:00 p.m., there was no correlation between this parameter and the levei of insulin secretion in thisconcentration of glucose. These results indicate that in response to physiological concentrations of glucose, beta cells of the rar s isolated pancreatic islets release more insulin during the normal activity period of the species. This higher secretion may be related to an improved ability of glucose to reduce the permeability of these ceUs to potassium during the dark period. The glycopenia-mediated activation of t(" ATP channels in rat pancreatic beta ceUs is greater at the end of this species' rest period. The feeding-starvation cycle appears to mask the daily rhythm of potassium efflux from beta ceUs / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Ciências

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Estudo 1 - A ghrelina demonstrou ser um estímulo mais potente do que o GHRP-6 e o GHRH para a secreção de GH em controles e em pacientes com hipertireoidismo. Porém, a resposta do GH após todos os estímulos foi menor na tireotoxicose quando comparada aos indivíduos normais. Portanto, o excesso de hormônios tireoidianos interfere com as vias hipotalâmicas e hipofisárias de liberação de GH ativadas por ghrelina, GHRP-6 e GHRH. Os valores basais de glicemia dos pacientes com hipertireoidismo não foram significativamente diferentes dos observados em controles. A ghrelina promoveu um aumento similar nas concentrações plasmáticas de glicose em ambos os grupos, enquanto que o GHRP-6 não alterou os níveis circulantes de glicose. Portanto, o excesso de hormônios tireoidianos não interfere nos mecanismos de liberação de glicose estimulados pela ghrelina. Estudo 2 - Foi observado um aumento nos valores basais de ACTH e de cortisol nos pacientes com hipertireoidismo comparado com controles, sugerindo que o excesso de hormônios tireoidianos interfere com o eixo hipotálamo-hipófise adrenal. A administração da ghrelina promoveu uma liberação maior de ACTH e de cortisol em ambos os grupos, confirmando que a ghrelina é um estímulo potente para ativação do eixo hipotálamo-hipófise adrenal. A resposta do cortisol à ghrelina e ao GHRP-6 em pacientes com hipertireoidismo foi semelhante a dos controles. A liberação de ACTH após ghrelina na tireotoxicose foi maior que em indivíduos normais, enquanto que com GHRP-6 os valores não alcançaram significância estatística. Nossos dados sugerem que as vias de liberação de ACTH estimuladas pela ghrelina são ativadas pelo excesso de hormônios tireoidianos, porém sem repercussões significativas na resposta adrenocortical.. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2017. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2017-05-03T17:13:16Z No. of bitstreams: 1 2017_DalilaJulianaSilvaRibeiro.pdf: 2929027 bytes, checksum: 1b32a05c986132c8e68368e458010955 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2017-05-16T17:10:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_DalilaJulianaSilvaRibeiro.pdf: 2929027 bytes, checksum: 1b32a05c986132c8e68368e458010955 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-16T17:10:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_DalilaJulianaSilvaRibeiro.pdf: 2929027 bytes, checksum: 1b32a05c986132c8e68368e458010955 (MD5) Previous issue date: 2017-05-16 / Infecções por Escherichia coli (E. coli) ainda são um problema de saúde pública graças ao seu alto potencial zoonótico e ao fato de que em muitos países ainda existem altos índices de mortalidade. Sistemas de secreção são descritos como importantes aparatos celulares para que bactérias sejam capazes de translocarem proteínas efetoras para células hospedeiras. Dentre as proteínas efetoras que compõe o sistema de secreção do tipo VI (SST6), destacam-se ClpV e IcmF, por sua importância em manter o SST6 funcional. Desta forma, o objetivo do presente trabalho foi analisar o papel do SST6 bacteriano, via ClpV e IcmF, na ativação dos inflamassomas durante a resposta imune inata. Através dos resultados observamos que o SST6 é crucial para a replicação intracelular de E. coli em macrófagos, modulando a secreção de citocinas, o metabolismo redox da célula e a ativação dos inflamassomas através da clivagem de caspase 1. As proteínas NLRP3 e as caspases 1 e 11 são necessárias para o aumento da secreção de IL-1β induzida por E. coli. Demonstramos que a presença das caspases 1 e 11, bem como do receptor NLRP3 podem atuar em outros processos e mecanismos celulares ativados durante a infecção por E. coli, como a apresentação de antígenos lipídicos, geração de espécies reativas de oxigênios, produção de óxidos nítrico e outras citocinas pró-inflamatórias. A ausência de componentes do inflamassoma favoreceu a replicação intracelular bacteriana assim como a colonização de órgãos vitais em camundongos como o fígado e o baço. Investigamos também o papel do metabolismo lipídico durante a infecção através da análise da biogênese de corpúsculos lipídicos e ainda constatamos que a replicação intracelular bacteriana está relacionada com a presença da enzima ácido graxo-sintase. Portanto o presente trabalho caracterizou os diferentes mecanismos celulares envolvidos durante a ativação da resposta imune inata frente à infecção com uma linhagem patogênica de E. coli focando no papel do sistema de secreção do tipo VI, através do uso de cepas onde suas proteínas efetoras são ausentes, e ainda a relevância de componentes do inflamassoma nesse processo. / Escherichia coli (E. coli) infections remains a public health problem since its higher zoonotic power and the fact that in a lot of countries there are still cases with mortality risk. Secretion systems are described as important cellular apparatus to make bacteria capable of translocate effectors proteins to the host cell. Among all proteins constituent of type six secretion system (T6SS) effectors proteins, ClpV and IcmF are highlighted due to their importance to maintain T6SS functional. Therefore, the aim of the present work was to analyze the role of T6SS through ClpV and IcmF in inflammasome activation during innate immune response. Taken together, odemonstrated that T6SS is crucial to control intracellular bacterial replication in macrophages by modulating cytokines release, cell redox metabolism and inflammasome activation through caspase 1 cleavage. The NLRP3 receptor, as well as caspases 1 and 11, are necessary to increase IL-1β release induced by E. coli. We showed that the presence of caspases 1 and 11 and NLRP3 can influence in other process and cellular mechanisms active during E. coli infection, such as, lipid antigen presentation, generation of oxygen reactive species, nitric oxide and other pro-inflammatory cytokines production. The absence of inflammasome components improved bacterial intracellular replication and the colonization of the liver and spleen in mice. We also investigated the role of lipid metabolism during infection through analyses of lipid droplet biogenesis and verified that intracellular bacterial replication can be associated with fatty acid synthase. Therefore, this work characterized the different mechanisms involved during innate immune response activation upon infection with a pathogenic strain of E. coli focusing in the role of bacterial T6SS, using strains where its effector proteins are absent, and the relevance of inflammasome components in this process.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2016. / Submitted by Camila Duarte (camiladias@bce.unb.br) on 2017-01-13T14:54:38Z No. of bitstreams: 1 2016_CésarAugustoPríasMárquez.pdf: 13896752 bytes, checksum: 0f77b4787c74c9521a4b65abcfbac820 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-02-13T16:37:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_CésarAugustoPríasMárquez.pdf: 13896752 bytes, checksum: 0f77b4787c74c9521a4b65abcfbac820 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-13T16:37:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_CésarAugustoPríasMárquez.pdf: 13896752 bytes, checksum: 0f77b4787c74c9521a4b65abcfbac820 (MD5) / No presente trabalho foi avaliado pela primera vez o potencial anticâncer da secreção cutânea do anuro sul-americano Hypsiboas crepitans (Wied-Neuwied, 1824). O fracionamento por RP-HPLC de secreções de indivíduos coletados na Colômbia e no Brasil permitiu a caracterização dos perfis cromatográficos das duas populações, obtendo-se registros das massas moleculares monoisotópicas de vários peptídeos presentes nessas secreções. Testes de atividade antimicrobiana realizados com a secreção de indivíduos da Colômbia levaram ao isolamento e à caracterização química e biológica de dois novos peptídeos da família das hilinas. Estes peptídeos, denominados de HCC76 e HCC77 apresentam cadeia polipeptídica curta, são altamente hidrofóbicos, possuem baixa cationicidade e são propensos a formarem estruturas em α-hélice anfipática. Versões sintéticas dos dois peptídeos (HCC76 e HCC77(K)) foram usadas para a determinação das suas concentrações inibitórias mínimas (MICs) em bactérias e fungos e da concentração hemolítica 50 % (HC50) em hemácias humanas. Os peptídeos HCC76, HCC77(K) e dois análogos deste último, denominados HCC77(K)1 e HCC77(K)2, tiveram seus efeitos antiproliferativos avaliados sobre células aderentes de mamíferos. Adicionalmente foram utilizados nesses ensaios dois peptídeos sintéticos da família das ocelatinas (ocelatina-F1 e G16OCP1), isolados previamente de secreções de anuros do gênero Leptodactylus. Os resultados mostram que os peptídeos HCC76 e HCC77(K) possuem grandes diferenças quanto à sua atividade biológica em bactérias e células de mamíferos, enquanto os dois análogos do peptídeo HCC77(K) conservaram a atividade em células aderentes de mamífero e tiveram melhora na potência, com relação a este. De forma similar, os peptídeos G16OCP1 e ocelatina-F1 mostraram diferenças quanto à sua atividade em células cancerosas e normais de mamíferos. Ensaios utilizando citometria de fluxo e microscopia de contraste de fase mostram que os peptídeos HCC77(K) e ocelatina-F1 induzem morte celular em uma linhagem de melanoma murino por um processo que envolve apoptose, com evidência de fragmentação de DNA e alteração do potencial de membrana mitocondrial e, no caso do peptídeo HCC77(K), efeitos na membrana plasmática e no ciclo celular. / The present study assessed, for the first time, the anticancer potential of the skin secretion of the South American anuran Hypsiboas crepitans (Wied-Neuwied, 1824). Fractionation of skin secretions of Colombian and Brazilian specimens by RP-HPLC allowed the characterization of chromatographic profiles of those two populations, while obtaining records of the monoisotopic molecular masses of several peptides present in these secretions. Antimicrobial activity assays performed using the secretion obtained from specimens collected in Colombia led to the isolation and chemical and biological characterization two new peptides belonging to hylins family. These peptides, named HCC76 and HCC77, are short-chain, highly hydrophobic, lowly cationic, and exhibit propension to adopt amphipatic α-helix structures. Synthetic forms of these two peptides (HCC76 and HCC77(K)) were used for determination of minimum inibitory concentrations (MICs) on bacteria and fungi, and also for determination of hemolytic concentration 50 % (HC50) on human erythrocytes. The peptides HCC76, HCC77(K) and two analogs of the last one, were used in assays assessing their antiproliferative effects on adherent mammalian cells. Additionally, two synthetic peptides (ocellatin-F1 and G16OCP1) belonging to the ocellatin family, previously isolated from the skin secretions of Leptodactylus spp. were used in the same tests. The results show that HCC76 and HCC77(K) have great differences regarding their biological activity on bacteria and mammalian cells, while the two HCC77(K)-derived analogs maintained activity on mammalian adherent cells and had a better potency compared to HCC77(K). Similarly, the peptides G16OCP1 and ocellatin-F1 showed differences regarding their biological activity on normal and cancerous mammalian cells. Assays using flow cytometry and phase-contrast microscopy show that the peptides HCC77(K) and ocellatin-F1 lead to cell death on a murine melanoma cell line through a process involving apoptosis, with evidence of DNA fragmentation and disruption of mitochondrial membrane potential; and also, in the case of HCC77(K), effects on the plasma membrane and cell cycle. / En este trabajo se evaluó por primera vez el potencial antitumoral de la secreción cutánea del anuro suramericano Hypsiboas crepitans (Wied-Neuwied, 1824). El fraccionamiento por RP-HPLC de secreciones de individuos colectados en Colombia y Brasil permitió la caracterización de los perfiles cromatográficos de las dos poblaciones, obteniéndose registros de las masas moleculares monoisotópicas de varios péptidos presentes en estas secreciones. Ensayos de actividad antimicrobiana, realizados con la secreción de individuos colombianos, condujeron al aislamiento y a la caracterización química y biológica de dos nuevos péptidos de la familia de las hilinas. Estos péptidos, denominados HCC76 y HCC77, presentan cadena polipeptídica corta, son altamente hidrofóbicos, poseen baja cationicidad y son propensos a formar estructuras en α-hélice anfipática. Versiones sintéticas de los dos péptidos (HCC76 y HCC77(K)) fueron usadas para la determinación de sus concentraciones inhibitorias mínimas (MICs) en bacterias y hongos, así como de sus concentraciones hemolíticas 50 % (HC50) en eritrocitos humanos. Los péptidos HCC76 y HCC77(K), así como dos análogos de este último, denominados HCC77(K)1 y HCC77(K)2, fueron usados para evaluar su efecto antiproliferativo en células adherentes de mamíferos. Adicionalmente fueron utilizados en esos ensayos, dos péptidos sintéticos de la familia de las ocelatinas (ocelatina-F1 y G16OCP1), aislados previamente de secreciones de anuros del género Leptodactylus. Los resultados muestran que los péptidos HCC76 y HCC77(K) poseen grandes diferencias con relación a su actividad biológica en bacterias y células de mamífero, mientras los dos análogos del péptido HCC77(K) conservan su actividad en células adherentes de mamífero, mejorando su potencia respecto a este. Ensayos usando citometría de flujo y microscopía de contraste de fase muestran que los péptidos HCC77(K) y ocelatina-F1 inducen muerte celular en un linaje de melanoma murino através de un proceso que involucra apoptosis, con evidencia de fragmentación de DNA y alteración del potencial de membrana mitocondrial y, en el caso del péptido HCC77(K), efectos sobre la membrana plasmática y el ciclo celular.