Técnicas de cultivo in vitro, associadas à criopreservação, são ferramentas importantes para conservação ex situ de espécies recalcitrantes. O objetivo deste trabalho foi o estudo da criopreservação no sistema A. angustifolia. Um protocolo de criopreservação para culturas celulares da espécie foi desenvolvido e os níveis de PAs, ABA e ROS, ao longo do protocolo, foram avaliados. Embriões zigóticos foram utilizados como modelo para o estudo de diferentes aspectos biofísicos do processo de criopreservação como a permeabilidade dos crioprotetores, a capacidade de resposta osmótica e congelamento, presença de água nos tecidos e a análise histológica da organização e aspectos das estruturas celulares, comparados ao controle, não resfriado. Os resultados deste trabalho permitiram uma melhor compreensão dos diferentes aspectos fisiológicos, bioquímicos e biofísicos durante a criopreservação, em espécies recalcitrantes, além da perspectiva de estabelecimento de bancos de germoplasma ex situ de culturas celulares de A. angustifolia. / The aim of this work was the study of cryopreservation A. angustifolia plant systems. A protocol for cryopreservation of A. angustifolia cell cultures was developed based on optimum DMSO concentration. It was observed that cells exposed to cryoprotectants showed lower levels of PAs, ABA and ROS compared to cells that were not exposed to them. Two low molecular weight bands could be observed more intensely stained only in the cells that were exposed to the cryoprotectant. The zygotic embryos were used as a model to study different aspects of the biophysical process of cryopreservation such as the permeability of cryoprotectants, osmotic and response characteristics of water freezing in tissue. The results of this work led to a better understanding of different physiological, biochemical and biophysical factors during cryopreservation in recalcitrant species and open perspective to the establishment of the ex situ conservation of A. angustifolia.

A produção de papel e celulose representa um importante componente do setor industrial brasileiro, com perspectivas a expandir-se nos próximos anos, sendo o Brasil o principal produtor de celulose a partir de eucalipto. A técnica de transformação genética pode contribuir significativamente para introduzir caracteres de interesse econômico que permitam: aumentar a produtividade da cultura, resistência a doenças e melhorar a qualidade da madeira. Os sistemas de transformação genética requerem um sistema de regeneração de plantasin vitro eficiente associado a um sistema de integração estável do transgene ao genoma das mesmas. Por este motivo o trabalho foi dividido em duas etapas. A primeira parte foi orientada para o desenvolvimento de um sistema de regeneração eficiente e reproduzível por organogênese indireta tanto para E. grandis como para o híbrido E. grandis x E. urophylla. Foram realizados experimentos para avaliar-se o efeito dos diferentes tipos de explantes, genótipos, concentrações de reguladores de crescimento e taxa regenerativa de diferentes clones. A regeneração de cotilédones e folhas de plântulas apresentou uma eficiência de 30 % e 25 respectivamente. Além destes sistemas, o protocolo de regeneração a partir de folhas de clones comerciais de E. grandis mostrou-se bastante eficiente. Na segunda parte do trabalho desenvolveu-se a metodologia de transformação genética de E. grandis e E. grandis x E. urophylla, via Agrobacterium tumefaciens. O efeito de diferentes tempos de pré-cultivo dos explantes, tempo de sonicação, influência dos meios de co-cultivo e dos agentes seletivos, foram avaliados. As sementes pré-cultivadas durante 2 e 15 dias apresentaram as maiores porcentagens de expressão da???? -glucuronidase (GUS) (21,7 e 37,4 %, respectivamente), quando sonicadas. As sementes pré-cultivadas por 2 dias apresentaram mais de 90 % das áreas transformadas localizadas nos cotilédones e no colo. Já as sementes pré-tratadas por 15 e 17 dias apresentaram 60 % das áreas de transformação localizadas no primeiro par de folhas. A condição mais adequada para a transformação de cotilédones foi a sonicação por 120 s, de sementes pré-cultivadas por 2 dias, sendo o melhor meio de co-cultivo o MS. Plantas transgênicas de E. grandis e E. grandis x E. urophylla foram obtidas, abrindo assim uma grande perspectiva na área de melhoramento do eucalipto, com a introdução das técnicas de transformação gênica. / The pulp and paper industry is an important sector of Brazilian industry, showing good perspectives of expansion, once Brazil is the main cellulose producer from Eucalyptus. Genetic transformation may contribute to increase productivity by the introduction of desirable traits, such as pest resistance and improvement of wood quality. However, the prerequisite for the success of the transformation strategy is the establishment of an efficient, in vitro, regeneration system. The recovery of transgenic plants is only possible from cells that respond to both processes: the integration of the transgene and also the plant regeneration. Hence, this work was divided in two phases. The first study was carried out to develop an efficient and reproducible regeneration system by indirect organogenesis of E. grandis and the hybrid E. grandis x E. urophylla. The experiments were organized to evaluate the effect of the different seedling explants, genotypes, hormonal concentration and regenerative rate of clonal material. The regeneration efficiency of cotyledons and leaves of seedling explants was around 30 % and 25 %, respectively. In addition, an efficient regeneration protocol of Eucalyptus grandis was developed which uses leaf explants from clonal plants. In the second study the procedure for genetic transformation of E. grandis and E. grandis X E. urophylla using Agrobacterium is described. Several experimental parameters were evaluated such as the length of precultivation, the sonication effect, the cocultivation media and the selective agents. Germinating seeds of 2 and 15 days had the highest percentage of ? -glucuronidase (GUS) expression (21.7% and 37.4%, respectively), when sonicated. Germinating seeds imbibed for 2 days showed over 90% of the blue sectors localized in cotyledons and in the intersection of the hypocotyls and roots, whereas, seedlings that had germinated for 15-17 days had an average of 60% of the transformed sectors localized in the first pair of leaves. The best condition for an efficient genetic transformation was 2-day precultivation, associated with 120-s sonication and MS media for cocultivation. Transgenic plants of E. grandis and E. grandis x E. urophylla were obtained by this method, opening an important perspective for the breeding of Eucalyptus through genetic transformation techniques.

O presente trabalho teve como objetivos verificar os efeitos da radiação gama em grãos de milho contaminados artificialmente com Aspergillus flavus Link produtor de aflatoxinas; demonstrar a aplicação da técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) no diagnóstico de A. flavus, bem como verificar o efeito da radiação no perfil das bandas de DNA. Vinte amostras de grãos de milho com 200 g cada foram irradiadas individualmente com 20 kGy, para eliminar a contaminação microbiana. Em seguida, as amostras foram inoculadas com A. flavus toxigênico (1 x 106 esporos / ml), incubadas por 15 dias a 25 °C em ambiente com umidade relativa ao redor de 97,5% e irradiadas com 0; 2; 5 e 10 kGy. As amostras, 5 para cada dose de irradiação, foram analisadas individualmente quanto ao número de células fúngicas, atividade de água, teste de viabilidade (diacetato de fluoresceína e brometo de etídio), PCR e detecção de aflatoxinas (AFB). Os resultados demonstraram que as doses utilizadas foram efetivas na redução do número de Unidades Formadoras de Colônias (UFC/g), principalmente as doses de 5 e 10 kGy. Em adição, o teste de viabilidade mostrou uma diminuição de células viáveis com o aumento das doses de irradiação. A redução de AFB1 e AFB2 foi mais eficiente com o emprego de 2 kGy, comparativamente à dose de 5 kGy, enquanto a dose de 10 kGy degradou totalmente as aflatoxinas. Além disso, observou-se que AFB2 apresentou-se mais radiosensível. O emprego da técnica de PCR revelou a presença de bandas de DNA em todas as amostras. / The aim of this present study was to verify the effects of gamma radiation on the growth of Aspergillus flavus Link aflatoxins producer; to demonstrate the application of Polymerase Chain Reaction (PCR) technique in the diagnostic of A. Flavus, as well to verify the effect of radiation in the profile of DNA bands. Twenty samples of grains maize with 200 g each were individually irradiated with 20 kGy, to eliminate the microbial contamination. In following, the samples were inoculated with an toxigenic A. flavus (1x106 spores/ml), incubated for 15 days at 25 °C with a relative humidity of around 97,5% and irradiated with 0; 2; 5 and 10 kGy. The samples, 5 to each dose of irradiation, were individually analyzed for the number of fungal cells, water activity, viability test (fluorescein diacetate and ethidium bromide), PCR and aflatoxins (AFB) detection. The results showed that the doses used were effectives in reducing the number of Colony Forming Units (CFU/g) mainly the doses of 5 and 10 kGy. In addition, the viability test showed a decrease of viable cells with increase of irradiation doses. The reduction of AFB1 and AFB2, was more efficient with the use of 2 kGy in comparison with the dose of 5 kGy, while the dose of 10 kGy, degraded the aflatoxins. Thereby, it was observed that AFB2 showed to be more radiosensitive. The use of PCR technique showed the presence of DNA bands, in all samples

O câncer é hoje a segunda maior causa de morte por doenças em vários países, inclusive no Brasil, sendo um dos problemas de saúde pública mais complexos. O câncer de próstata é o mais comum em homens no Brasil, desconsiderando o de pele do tipo não melanoma. A braquiterapia é uma modalidade da radioterapia na qual fontes radioativas seladas são colocadas dentro ou em contato com o órgão a ser tratado, uma das formas de tratamento para esse tipo de câncer. O radioisótopo mais utilizado é o iodo-125, que se apresenta fixado em um substrato de prata que é selado em uma cápsula de titânio. A técnica exige o implante de 80 a 120 sementes por paciente, sendo este tratamento considerado um procedimento de baixo impacto e não cirúrgico. A maioria dos pacientes pode retornar à atividade normal dentro de um a três dias, com pouca ou nenhuma dor. Este trabalho propõe a construção de um modelo de semente alternativo às sementes atualmente em uso, com a finalidade de reduzir o custo das mesmas. Para atingir esse objetivo, este trabalho buscou obter maior eficiência na fixação do iodo radioativo, utilizando um substrato polimérico. Foram desenvolvidos cinco métodos para a fixação do iodo-125 nesses substratos. Os parâmetros analisados nos experimentos foram: tipo de polímero, tempo de imersão, tipo de reação (estática ou dinâmica), concentração da solução de iodo radiativo, atividade específica da solução, necessidade do uso de carreador e a forma química do iodo radioativo. O estudo desses experimentos definiram o método mais eficaz da fixação do iodo no material polimérico (resina epóxi). Foram avaliados os rendimentos da reação de fixação, a atividade do iodo no substrato polimérico, a variação da distribuição da atividade num lote de núcleos poliméricos e a eficiência da resina epóxi em selar a semente. / Cancer is currently the second leading cause of death by disease in several countries, including Brazil. Prostate cancer is the most common among men. Brachytherapy is a modality of radiotherapy in which radioactive seeds are placed inside or in contact with the organ to be treated. The most widely used radioisotope in prostate brachytherapy is iodine- 125, which is presented fixated on a silver substrate that is subsequently placed inside a titanium capsule. A large dose of radiation is released only in the targeted tumor protecting healthy surrounding tissues. The technique requires the application of 80 - 120 seeds per patient. The implants of seeds have low impact and are non-surgical procedures. Most patients can return to normal life within three days with little or no pain. This work proposes an alternative to the seeds that have already been developed, in order to reduce the cost by obtaining a better efficiency on fixing the radioactive iodine onto the epoxy resin. Methods have been developed to perform the fixation of iodine-125 onto polymeric substrates. The parameters analyzed were the immersion time, type of static or dynamic reaction, concentration of the adsorption solution, the specific activity of the radioactive source, the need for carrier and chemical form of the radioactive iodine. These experiments defined the most effective method to fixate the iodine onto the polymeric material (epoxy resin), the iodine activity in the polymeric substrate, the variation of the distribution of activity in a plot of polymeric cores and the efficiency of the epoxy resin to seal the seed.

A análise radiográfica tem sido eficiente na identificação das principais alterações na morfologia interna de sementes e, juntamente com análise de imagens digitalizadas de plântulas, está sendo cada vez mais utilizada em programas de controle de qualidade de sementes devido à sua praticidade, objetividade e rapidez na obtenção dos resultados. Apesar dessas vantagens, ainda não existem pesquisas comprovando a eficiência dessas técnicas para análise de sementes de café. Assim, esta pesquisa teve como objetivos avaliar a morfologia interna de sementes de café (Coffea arabica L.) por meio da análise de imagens radiográficas e a sua relação com o desempenho germinativo e testar a eficiência da análise de imagens digitalizadas de plântulas pelo Seed Vigor Imaging System (SVIS®) na determinação do vigor, comparativamente com os testes convencionalmente utilizados. Foram utilizadas sementes dos cultivares Bourbon e Catucaí 20/15, cada cultivar representado por seis lotes. A pesquisa foi conduzida em dois experimentos. No experimento I foram avaliadas imagens radiográficas para identificação das principais alterações na morfologia interna das sementes e sua relação com o desempenho germinativo por meio do teste de emergência de plântulas. O experimento II foi realizado em duas épocas de avaliação e o vigor foi determinado por meio das avaliações de primeira contagem de germinação, envelhecimento acelerado, condutividade elétrica, velocidade de emissão de raiz primária e análise de imagens digitalizadas de plântulas com o SVIS®. Concluiu-se que a análise de imagens radiográficas é eficiente na identificação das principais alterações na morfologia interna das sementes, relacionadas com malformações, danos por deterioração de tecidos e danos ocasionados pela broca-do-café, permitindo relacionar a ocorrência destes com o desempenho germinativo dos lotes de sementes. A análise de imagens digitalizadas de plântulas aos vinte dias de idade pelo SVIS® é eficiente na avaliação do vigor de lotes de sementes de café. / Radiographic analysis has been efficient in identifying the main changes in the internal morphology of seeds and, together with the digital image analysis of seedlings has been increasingly used in seed quality control programs due to its practicality, objectivity and rapid results. Despite these advantages, there are still no studies demonstrating the efficiency of these techniques for coffee seed analysis. The objective of this research was to evaluate the internal morphology of coffee seeds (Coffea arabica L.) by radiographic image analysis and their relation with germination performance. Furthermore, this research aimed to evaluate the efficiency of the Seed Vigor Imaging System (SVIS®) in determining seed vigor from digital seedling images in comparison to conventionally vigor tests. Seeds of the cultivars Bourbon and Catucaí 20/15 were used being each one represented by six seed lots. The research was conducted in two experiments. In experiment I radiographic images were taken to identify the main changes in the internal morphology of the seeds and stablish a relationship with the germination performance by the seedling emergence test. The experiment II was carried out in two evaluation periods and seed vigor was determined by the germination first count, accelerated aging, electrical conductivity, primary root emission velocity and analysis of scanned seedlings images by SVIS®. It was concluded that radiographic analysis is efficient in identifying internal morphology alterations in the seeds related to malformations, damages by tissue deterioration and damages caused by coffee borer, allowing to relate the occurrence of these problems with germination performance. The digitized analysis of 20-day-old seedlings by SVIS® is efficient in evaluating the vigor of coffee seeds.

Sementes de alto potencial fisiológico permitem rápida emergência de plântulas e maior crescimento inicial de plantas em relação às provenientes de sementes de baixo potencial fisiológico. Quando na mesma população de plantas, a desuniformidade de crescimento resultante pode influenciar na capacidade competitiva das plantas e ter efeitos diretos no desempenho individual das plantas bem como da população de plantas. Assim, o objetivo da pesquisa foi estudar os efeitos da utilização de lotes constituídos por sementes de milho de alto ou de vigor mais baixo, bem como de lotes resultantes da misturas desses em diferentes proporções, simulando-se a utilização de lotes de sementes homogêneos e heterogêneos quanto ao vigor das sementes, sobre desempenho de plantas e sobre o desempenho da cultura. O experimento foi realizado em dois anos consecutivos, entre novembro de 2006 e junho de 2008, sendo utilizadas sementes certificadas de milho híbrido simples (DOW 8480) provenientes de dois lotes de sementes caracterizados como de alto vigor e de vigor mais baixo. Para tanto, utilizou-se sete distribuições de sementes na linha de semeadura, nas proporções de 100/0, 75/25, 67/33, 50/50, 33/67, 25/75 e 0/100, de sementes de alto vigor e de vigor mais baixo, respectivamente. Em cada distribuição, foram analisadas plantas dispostas em diferentes posições de semeadura e nível de vigor e, também, a média geral da população de plantas. As plantas foram avaliadas quanto ao crescimento inicial, mensurando-as quanto à altura, diâmetro de colmo e índice de área foliar nos estádios fenológicos de quatro e oito folhas. No momento da colheita, avaliou-se o acúmulo de massa de matéria seca, o número de grãos por fileiras, número de fileiras de grãos por espiga, massa de 1000 grãos e a produtividade de grãos. Assim, constatou-se que as plantas originadas de sementes de vigor mais baixo obtiveram crescimento inicial inferior em relação às originadas de sementes de alto vigor, o que contribui para a desuniformidade da população de plantas e resultou na menor capacidade competitiva destas. Quando em populações de plantas uniformes (lotes de sementes homogêneos) o efeito do vigor das sementes decresceu com a sucessão das fases de desenvolvimento da cultura e desapareceram no final do ciclo, porém, quando em populações desuniformes (lotes de sementes heterogêneos), o efeito do vigor das sementes manteve-se até o final do ciclo, sendo ainda constatado na colheita. Individualmente observou-se que as plantas originadas de sementes de alto vigor exerceram efeito dominante sobre as originadas de sementes de vigor mais baixo, porém, não exerceram efeito compensatório e, as perdas resultantes do aumento da competição intraespecífica afetaram negativamente a produção por área. Dessa forma, a desuniformidade de emergência, em função da heterogeneidade de vigor entre as sementes de um lote de sementes, propicia a ocorrência de plantas dominadas, as quais, originadas de sementes de vigor mais baixo, produzem individualmente menos e são responsáveis por perdas de produção de grãos por área. / High physiological potential seeds allow faster seedling emergence and higher plant initial growth than low physiological potential seeds. Within plant populations, the uneven seedling emergence could affect plant competitive ability for resources (light, water and soil nutrients) and have direct effects on plant grain yield and population grain yield. Therefore, the objective of this research was to study the effects of using seed lots constituted by high vigor seeds or low vigor seeds, as well as their mixtures, simulating seed lots homogeneous and heterogeneous on seed vigor, on plant performances and crop performances. A two-year experiment was developed from November 2006 to June 2008, using two seed lots of maize hybrid seeds (DOW 8480), previously characterized as high vigor and low vigor, on seven different seed distributions on the sowing row, at proportions of 100/0, 75/25, 66/33, 50/50, 33/66, 25/75 and 0/100 of high vigor and low seed vigor seeds, respectively. The plants of different vigor levels and positions in the sowing row were evaluated by plant height, stem diameter and leaf area index at development stages of four and eight leaves. At harvest, dry mass accumulation, number of grains per row, number of rows per ear, thousand grain mass and grain yield were also evaluated. It was observed that plants originated from low vigor seeds had inferior initial growth than plants originated from high vigor seeds and it had intensified the irregularity of plant population resulting on lower competitive ability for these plants. On uniform plant populations (homogeneous seed lots) seed vigor effects decreased with plant development stages succession, disappearing until harvest, however, on irregular plant populations (heterogeneous seed lots), it persisted until harvest. Also, individual plants originated from high vigor seeds showed dominant effects on plants originated from low vigor seeds, but did not show compensatory effects and the losses resultant from the intra-specific competition increase affected negatively plant population yield. Therefore, the uneven seedling emergence, caused by seed vigor heterogeneity, results on dominated plants, which are originated from low vigor seeds, with lower productivity and are responsible for plant population yield losses.

O Andropogon L. é uma gramínea forrageira, amplamente distribuída em áreas de Cerrado e com períodos de seca prolongada. Apresenta características de ser denso com grandes touceiras e com inflorescência plumosa, tendo uma elevada capacidade na disseminação de suas sementes. Por sua vez, as sementes são consideradas principais fontes de abrigo e transporte de agentes patogênicos para áreas livres de doenças. No Tocantins, não há registros de trabalhos que relacionem a incidência de fungos em sementes de Andropogon como causadores de doenças em culturas de importância agrícola. Da mesma forma, não há pesquisas sobre o transporte, transmissibilidade e patogenicidade de fungos associados à suas sementes. O trabalho objetivou avaliar a qualidade sanitária de sementes do Andropogon, a transmissão de fungos via semente-plântula e a patogenicidade à plantas de outras espécies de importância agrícola, e também realizar a caracterização morfológica e molecular de Curvularia sp. isolados de sementes de Andropogon. Os experimentos foram conduzidos no Laboratório de Pesquisa em Fitopatologia, Laboratório de Controle Biológico de Doenças e Casa de Vegetação da Universidade Federal do Tocantins. No capítulo 1, utilizou-se o método blotter test para a avaliação da sanidade das sementes com e sem desinfestação. A incidência dos fungos foi avaliada a partir da análise individual das sementes com auxílio de microscópio estereoscópico e ótico. A germinação das sementes foi avaliada após 10 dias de instalação do teste, juntamente com a identificação de fungos associados às sementes não germinadas. Para os fungos detectados na análise sanitária avaliou-se a capacidade de transmissão via semente-plântula. A patogenicidade dos fungos oriundos das sementes de Andropogon foi avaliada por meio da inoculação na própria planta e também foi avaliada a capacidade destes fungos em infectar outras plantas de interesse econômico. No capítulo 2, a identificação morfológica foi realizada a partir de observações macro e micromorfológicas utilizando-se como base as características descritas na literatura quanto ao aspecto da colônia e conídios de Curvularia sp. A caracterização molecular foi realizada a partir da extração do DNA, amplificação e sequenciamento da região do gene Clg2p. A transmissão foi avaliada a partir da semeadura de sementes sem tratamento com fungicidas, onde ao final de 40 dias observou-se sintomas típicos de mancha foliar de Curvularia. A patogenicidade foi avaliada a partir da inoculação de suspensão de conídios de Curvularia sp. nas folhas de plantas sadias, observando ao final de 10 dias, se houve sintomas do patógeno. Foram identificados e quantificados nas sementes de Andropogon L. fungos dos gêneros Alternaria sp., Bipolaris sp., Curvularia sp., Fusarium sp., Phoma sp., Aspergillus sp., Cladosporium sp., Penicillium sp. e Rhizopus sp. A realização da desinfestação das sementes reduziu os fungos presentes nas sementes. O fungo Curvularia sp. foi transmitido das sementes para as plantas de Andropogon. As sementes de Andropogon L. transportaram e disseminaram fungos que uma vez inoculados causaram infecção na própria planta e em outras culturas de importância econômica, tais como: arroz, feijão-caupi, melancia, melão, milho, sorgo e aos capins marandu, mombaça, piatã e quicuia. Baseado em marcadores morfológicos e moleculares, o fungo identificado com elevada incidência associado às sementes de Andropogon coletadas em diferentes regiões produtoras agrícolas, trata-se de Curvularia lunata. C. lunata é transmitido para as plantas de Andropogon via semente, sendo patogênico a esta espécie de gramínea forrageira, causando manchas necróticas foliares. / Andropogon L. is a forage grass, widely distributed in Cerrado areas and with prolonged drought periods. It presents dense characteristics with large clumps and with plumose inflorescence, with high capacity in the seeds dissemination. In turn, seeds are considered the main sources of shelter and transport of pathogens to disease-free areas. In Tocantins, there are no studies records relate the fungi incidence in Andropogon grass seeds as diseases cause in agricultural importance crops. Likewise, there is no research about the transport, transmissibility and pathogenicity of fungi associated with their seeds. The work aim was evaluate the sanitary quality of Andropogon grass seeds, the fungi transmission by seed-seedlings and the fungis pathogenicity to other species plants of agricultural importance, and also perform the Curvularia sp. morphological and molecular characterization, isolated from Andropogon grass seeds. The experiments were conducted at the Phytopathology Research Laboratory, Biologic Control of Disease Laboratory and green house of Tocantins Federal University. In chapter 1, the blotter test method was used to evaluate seed health with and without disinfestation. The fungi incidence was evaluated from seeds individual analysis using stereoscopic and optical microscope. The seeds germination was evaluated after 10 days after test installation, together with the fungi identification associated with non-germinated seeds. For the detected fungus in the sanitary analysis was evaluated the transmission capacity of seed-seedling. The fungi pathogenicity from the Andropogon seeds grass was evaluated by inoculation in the plant itself and was also evaluated the ability of these fungi to infect other plants of economic interest. In chapter 2, the morphological identification was performed from macro and micromorphological observations using as basis the characteristics described in literature regarding the aspect of the colony and conidia of Curvularia sp. Molecular characterization was performed from DNA extraction, amplification and sequencing gene Clg2p region. Transmission was evaluated from seed sowing whitout treatment with fungicides, where at the end of 40 days typical leaf spot symptoms of Curvularia. The pathogenicity was evaluated from the inoculation of conidia suspension on leaves of healthy plants, observing at the end 10 days, if there were symptoms of the pathogen. Were identified and quantified in the seeds of Andropogon L. fungi of the genera Alternaria sp., Bipolaris sp., Curvularia sp., Fusarium sp., Phoma sp., Aspergillus sp., Cladosporium sp., Penicillium sp. and Rhizopus sp. The seed disinfestation reduced the fungi present in the seeds. The fungus Curvularia sp. it was transmitted seed to Andropogon plant. Andropogon L. seeds carried and spread fungi the once inoculated caused infection in the plant itself and other economically important crops, such as rice, cowpea, watermelon, melon, corn, sorghum and grasses marandu, mombaça, piatã and quicuia. Based on morphological and molecular markers, the fungus identified with high incidence associated with Andropogon seeds collected in different agricultural producing regions, is Curvularia lunata. C. lunata is transmitted to plants of Andropogon by seed, being pathogenic to this species of forage grass, causing foliar necrotic spots.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:44:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MARIO GONCALVES.pdf: 4657209 bytes, checksum: bfb4c209e8d19b82748ffe5490dbd89d (MD5) Previous issue date: 2013-05-29 / The objective of the present study was to evaluate the germination of the seeds of pequi (Caryocar brasiliense Camb.) after storage and submission to various thermal (temperatures of 30°C, 40°C and 50°C) and a period of immersion in warm water of five to ten minutes, besides personal observation. Seeds from twenty-five plants were selected by size (medium and large) and period of storage (90 and 120 days). All seeds were subjected to incisions for removing the pulp but preserving the thorns. The experiment was set up in a totally random delineation in factorial scheme of 3 X 2 X 2 + 2 ( three temperatures, two times, two storage periods, two sizes of seeds and two observations) with four repetitions of ten weeks each. After the treatments the seeds were planted in beds of sand evaluated throughout 270 days. Under the conditions of this experiment, considering all the treatments, the results show a 1 cm germination of the pequi and do not establish a significant difference between the treatments. More studies of the storage conditions of pequi are needed. / Objetivou-se com o presente trabalho avaliar a germinação das sementes de pequi (Caryocar brasiliense Camb.) após armazenamento e submissão a diferentes tratamentos térmicos (temperaturas de 30°C, 40°C e 50°C) e tempo de imersão em banho-maria de 5 e 10 minutos, além da testemunha. Sementes de 25 plantas foram selecionadas por tamanho (médias e grandes) e por período de armazenamento (90 e 120 dias). Todas as sementes passaram por escarificação para a retirada da polpa, preservando os espinhos. O experimento foi arranjando em um delineamento inteiramente casualizado em esquema fatorial 3x2x2x2+2 (três temperaturas, dois tempos, dois períodos de armazenamento, dois tamanhos de sementes e duas testemunhas) com quatro repetições de dez sementes cada. Após os tratamentos, as sementes foram plantadas em canteiros de areia e avaliadas durante 270 dias. Nas condições desse experimento e considerando-se todos os tratamentos, os resultados mostraram baixa germinação do pequi e não se constatou diferença significativa entre os tratamentos. São necessários mais estudos sobre as condições de armazenamento de sementes de pequi.

O milho (Zea mays) é um cereal amplamente cultivado no Brasil e no mundo. Sua produtividade pode ser afetada por diversos fatores incluindo a colonização fúngica. Em Fitopatologia, grãos afetados por fungos são denominados grãos ardidos e os gêneros mais encontrados em milho são Stenocarpella e Fusarium. Espécies de Fusarium podem causar podridões nas espigas e também podem produzir fumonisinas, toxina esta tóxica para animais e humanos e associadas ao desenvolvimento de diversas doenças. O presente trabalho teve como objetivo analisar a incidência de Fusarium ssp. com potencial toxigênico em amostras de grãos ardidos através da identificação da presença do gene fum5, responsável pela produção de fumonisinas pelo fungo, bem como quantificar os níveis de fumonisinas encontrados nessas amostras e comparação com os resultados obtidos de grãos assintomáticos. Um total de 100 amostras dos anos de 2006 e 2007 provenientes das principais regiões produtoras do Brasil foram submetidas à três análises. A primeira avaliou a incidência de Fusarium spp. nos grãos através do método do papel de filtro com congelamento e em 100% das amostras foi encontrado o fungo em níveis que variaram de 34 a 91%. A segunda análise utilizou a PCR para confirmação do gênero, identificação de espécies (F. verticillioides, F. proliferatum e F. subglutinans) e identificação da presença do gene fum5. A PCR confirmou 93% dos isolados como pertencentes ao gênero Fusarium. Os isolados negativos passaram por análise morfológica e todos foram confirmados. As PCRs para espécies identificaram 82% dos isolados como F. verticillioides, 3% como F. subglutinans e nenhum como F. proliferatum. A PCR para potencial toxigênico foi positiva para 81% dos isolados. A terceira análise consistiu na quantificação de fumonisinas (B1, B2 e B3 na proporção 5:3:1) através do método de ELISA e os níveis variaram de 4,4 a mais de 90 µg/g. Grãos assintomáticos da segunda safra de 2007 foram analisados separadamente para comparação. Em 100% das amostras houve incidência de Fusarium spp, variando de 74 a 87%. A PCR para confirmação do gênero foi positiva para 87% dos isolados e os demais passaram por análise morfológica e então confirmados. As PCRs para identificação de espécies mostrou 60% dos isolados como sendo F. verticillioides, 3% como F. subglutinans e nenhum como F. proliferatum. A maior concentração de fumonisinas nos grãos assintomáticos foi de 2,1 µg/g e em 53% das amostras não foram detectadas fumonisinas. Os resultados mostraram que há uma alta incidência de Fusarium spp. em grãos ardidos e assintomáticos. Grãos ardidos e assintomáticos têm Fusarium spp. com potencial toxigênico mas os níveis de fumonisinas encontrados nos grãos assintomáticos foram muito baixos em comparação com os encontrados nos grãos ardidos mostrando que, em condições adversas, esse fungo deixa de ser endofítico e passa a ser patogênico, podendo causar doenças na planta e produzir toxinas. Pelo fato das fumonisinas estarem concentradas nos grãos ardidos, a redução dessas toxinas da dieta deve ser baseada na eliminação dos mesmos através do controle do beneficiamento. / Maize is a cereal widely cultivated in Brazil and worldwide. Its productivity can be affected by numerous factors including fungal colonization. In pathological terms, affected grains by fungi are denominated rot grains and the two most prevalent genera found in maize are Stenocarpella and Fusarium. Species of Fusarium can cause rotting in the stalks and also produce fumonisins, which are toxic both for animals and humans since their occurrence is associated to many diseases. The present work aimed to analyse the incidence of Fusarium ssp. with toxigenic potential in rot grains samples through the identification of the presence of the gene fum5, responsible for the production of fumonisins, as well as to quantify the levels of fumonisins found in these samples and compare with the results obtained in asymptomatic grains. A total of 100 samples from the 2006 and 2007 harvests were collected from the main producing regions of Brazil and were submitted to three analyses. The first evaluated the incidence of Fusarium ssp. in the grains through the method of filter paper and freezing, which revealed incidences that varied from 34 to 91%. The second analysis used specific primers and PCR to confirm the genus and species (F. verticillioides, F. proliferatum and F. subglutinans) and to detect the presence of the fum5 gene. The results indicated that 93% of the isolates belonged to the genus Fusarium. The PCR - negative isolates were confirmed as Fusarium after morphological analysis. Eigthy two percent of the isolates were classified as F. verticillioides, 3% as F. subglutinans and none as F. proliferatum using speciesspecific PCR. The fum5 gene was detected in eighty one percent of the isolates. The third analysis consisted in the quantification of the fumonisins (B1, B2 e B3 in the proportion of 5:3:1) through the ELISA method and the levels varied from 4,4 to more than 90 µg/g. Asymptomatic grains from the second cropping season of 2007 were analyzed separately for comparison purposes. The incidence of Fusarium spp. in these varied from 74 to 87%. The PCR for confirmation of the genus was positive for 87% of the isolates. The PCRs for species identification showed 60% of the isolated as being F. verticillioides, 3% as F. subglutinans and none as F. proliferatum. The greater concentration of fumonisins in the asymptomatic grains was of 2,1 µg/g and in 53% of the samples fumonisins were not detected. Rot and asymptomatic grains presented Fusarium spp. with toxigenic potential but the levels of fumonisins found in the asymptomatic grains were much lower compared with rot grains, showing that, in adverse conditions, this fungus changes from endophytic to pathogenic, being able to parasitize the plant and to produce toxins. The fact that fumonisins levels are much higher in rot grains, a simple measure to reduce the levels of these toxins in the animal diet would be to eliminate them during processing.

O presente trabalho objetivou estudar a relação da termoterapia com o potencial fisiológico e sanidade de sementes de tomate, imediatamente após o tratamento e durante o armazenamento, identificando combinações eficientes de temperatura e período de exposição através do teste de sanidade e testes de vigor. O trabalho, dividido em dois experimentos diferenciados pelos tratamentos e métodos de secagem, foi realizado nos laboratórios de Análise de Sementes do Departamento de Produção Vegetal e Patologia de Sementes do Departamento de Fitopatologia da USP-ESALQ e no Centro de Pesquisa Mokiti Okada M.O.A. No experimento I, sementes de dois lotes dos cultivares de tomate UC-82 e Rio Grande foram submetidas à termoterapia úmida com diferentes combinações de tempo e temperatura (52, 53, 54, 55 e 60°C/30 e 60 min), além das testemunhas (sementes tratadas com fungicida e não tratadas) e secadas ao ar livre por 72 horas. Após o tratamento as sementes tiveram seus desempenhos e sanidades avaliados em duas épocas, após a secagem e após 90 dias de armazenamento, através dos testes de porcentagem e primeira contagem de germinação, velocidade e porcentagem de emergência de plântulas, lixiviação de potássio, envelhecimento acelerado e sanidade. No experimento II, as sementes dos mesmos lotes foram submetidas à termoterapia nas combinações de tempo e temperatura de 55°C/30 min e 60°C/60 min, além das testemunhas, sementes tratadas com fungicida e não tratadas. Após o tratamento, as sementes foram cobertas com papel toalha e secadas por 12 horas e, em seguida, avaliadas através dos testes de sanidade, porcentagem e primeira contagem de germinação e envelhecimento acelerado. Os resultados permitiram concluir que a termoterapia (água quente a 55°C/30 min) é uma opção consistente para o controle de fungos associados às sementes de tomate, sem prejudicar o potencial fisiológico das sementes, dependendo da qualidade inicial do lote; os tratamentos 52 a 54°C por 30 ou 60 min não causam prejuízo ao potencial fisiológico de sementes de tomate, enquanto o efeito do tratamento a 55°C/60 min está associado à qualidade inicial do lote; o tratamento com água quente a 60°C por 30 ou 60 min não constitui opção para o tratamento de sementes de tomate, pois é eficiente para o controle de fungos, mas é letal às sementes; os tratamentos com água quente variando de 52 a 55°C por 30 ou 60 min não são eficientes em eliminar a bactéria Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis e acarretam queda da resistência de sementes de tomate, tornando-as vulneráveis à manifestação dos sintomas de cancro bacteriano na plântula; o período de 90 dias de armazenamento em condições controladas (20°C e umidade relativa do ar de 50%) pode reduzir o potencial fisiológico de sementes de tomate tratadas com água quente, mas há necessidade de estudos adicionais com períodos maiores de armazenamento para obtenção de resultados mais consistentes; a termoterapia com água quente deixa as sementes de tomate vulneráveis à contaminação por fungos saprófitos, havendo necessidade de estudos adicionais para determinação de opções de tratamentos complementares que ofereçam efeito residual para evitar futuras contaminações, no armazenamento ou no substrato. / The research had as objective to investigate the relationship between thermotherapy and physiological potential and health of tomato seeds immediately after the treatment and during the storage period, then to identify efficient combinations between temperature and exposure time, through seed health test and seed vigor tests. The research was carried out at the Seed Analysis Laboratory of the Department of Vegetal Production and Seed Pathology Laboratory of Phytopathology Department of USP-ESALQ and at Mokichi Okada Research Center M.O.A.. and was divided in two experiments with different treatment and drying methods. In experiment I, seeds from two lots of UC-82 and Rio Grande tomato cultivars were submitted to humid thermotherapy with different combinations of time and temperature (52,53,54,55 and 60ºC/30 and 60 min.), besides the control treatment (seeds with fungicide treatment and without treatment) and dried at air during 72 hours. After the treatment, seeds were evaluated on their performances and seed health in two different periods (after drying and after 90 days storage), through percentage and first count of germination tests, speed and percentage of seedling emergence, potassium leachate, accelerated aging and seed health test. In experiment II, seeds from the same lots were submitted to thermotherapy under two combination of time and temperature (55ºC/30min and 60ºC/60min), besides the control treatment (seeds with fungicide treatment and without treatment). After treatment, seeds were covered with paper towel and dried during 12 hours, and then evaluated through seed health test, percentage and first count of germination tests and accelerated aging. The results lead to the conclusion that thermotherapy (hot water at 55ºC/30min) is a consistent option to control tomato seedborne fungi, without damaging the physiological potential of the seeds, depending on the initial quality of the seeds lots. Treatments with hot water at 52 to 54ºC during 30 to 60 min do not cause damage to tomato seeds physiological potential, while 55ºC/60 min treatment results are associated with the initial quality of the lots. The treatment with hot water at 60ºC during 30 or 60 min cannot be considered as an option because is very effective to control fungi, otherwise is lethal to the seeds. The treatments with hot water temperature between 52 and 55ºC during 30 or 60 minutes were not effective to eradicate Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis and caused the fall of the tomato seed resistance to diseases, turning the seeds vulnerable to bacterial canker symptoms show up in the seedling. Ninety days storage period under controlled conditions (20ºC and relative humidity of 50%) may reduce physiological potential of the hot water treated seeds, but further investigation is needed with longer periods of storage to obtain more consistent results. Thermotherapy with hot water make the tomato seeds more vulnerable to saprophytic fungi contamination, needing additional studies to define the options of complementary treatments that offer residual effect to avoid future contaminations, during storage and in the substrate.