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Estudo do desenvolvimento somático e sensório-motor de Rattus norvegicus machos e fêmeas oriundos de mães tratadas na prenhez com sertralina: análise da distribuição dos neurônios serotoninérgicos nos núcleos da rafe. / Study of development and somatic sensorimotor of Rattus norvegicus males and females from mothers treated with sertraline in pregnancy: analysis of the distribution of serotonergic neurons in the raphe nuclei.Renata Gonçalves de Vasconcelos 29 August 2008 (has links)
Analisamos o efeito do sistema serotoninérgico no desenvolvimento somático e na ontogênese de reflexos dos filhotes, cujas mães foram submetidas a tratamento farmacológico durante a prenhez. Ratas wistar prenhas foram divididas em dois grupos (N=11): Grupo AD, tratadas com água destilada, Grupo Sert, tratadas com sertralina 30mg/kg, 0,5mL/100g, s.c. Um dia após o parto 8 neonatos (4 machos e 4 fêmeas) foram mantidos com suas mães do 1º ao 21º dia pós-natal. O investigador cego avaliou o crescimento somático, características físicas e maturação de reflexos. Aos 22 e 60 dias de idade os encéfalos foram processados com técnicas de imunoistoquímica contra 5-HT. O grupo Sert, macho ou fêmea, apresentou atraso no crescimento somático e na maturação de alguns reflexos. A quantidade de neurônios 5-HT-IR foi alterada nos núcleos da rafe nos ratos aos 22 dias de idade, mas não aos 60 dias. A análise da morfometria dos neurônios 5-HT-IR, em ambas as idades estudadas, revelou alterações em sua forma. Os resultados deste estudo demonstram a ação inibitória da serotonina sobre o crescimento somático e desenvolvimento sensório-motor bem como alterações na quantidade e na forma dos neurônios 5-HT em ratos. / The aim of the present study was to investigate the effects of prenatal sertraline exposure on offspring in growth and somatic development and even in the maturation of reflex in rats. Female wistar rats were treated with sertraline (Sert, 30 mg/kg, 0,5 mL/100 g, s.c., N=11) or distilled water (Control, N=11) during the whole pregnancy. After the birth, 8 pups (4 males and 4 females) were kept in each litter during lactation. The blind investigator evaluated indicators of general body growth parameters, somatic maturation and ontogeny of reflex during the period of lactation. The central nervous system alterations were approached by 5-HT-IR using the ABC-DAB-Peroxidase techniques in animals at the 22st and 60st postnatal day. The Sert group, showed reduction on the somatic growth and on the maturation of reflexes. There was reduction in the amount of the 5-HT-IR neurons in the raphe nuclei at the 22st postnatal day, but did not change at the 60st. The morphometric analysis revealed alterations in the shape of these cells at the 22st and 60st postnatal day. An inhibitory action of the 5-HT on the somatic and sensory-motor growth in these rats was also observed. After the lactation period, the amount and shape of the 5-HT neurons were altered.
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Aspectos morfológicos do desenvolvimento do complexo dentino-pulpar em prole de ratas tratadas com fluoxetina durante a gestaçãoSANTIAGO, Isabela Maria de Albuquerque 31 January 2010 (has links)
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Previous issue date: 2010 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Estudos prévios avaliaram a presença de serotonina no interior do epitélio e
mesênquima de germes dentários. Assim, objetivamos avaliar se o uso da fluoxetina
(um inibidor de recaptação de serotonina) foi capaz de interferir na dentinogênese destes
germes. Para tal, foram utilizadas 12 ratas prenhes da linhagem Wistar, divididas em
três grupos: grupo controle (C), grupo tratado com fluoxetina na dose de 10mg/kg de
peso animal (FL) e grupo tratado com fluoxetina na dose de 20 mg/Kg de peso animal
(FX). Foram administrados solução fisiológica a 0,9% ou cloridrato de fluoxetina a
esses animais do 1º ao 21º dia de gestação, por via subcutânea. Posteriormente, cada
grupo foi divididos em 2 subgrupos, de acordo com a idade do desenvolvimento do
germe dentário a ser estudado (1 e 5 dias de vida). Os animais foram anestesiados, suas
mandíbulas removidas e o maxilar superior com os germes dentários direito e esquerdo
foi seccionado tangentemente a face mesial do primeiro molar. As peças foram fixadas
em formol tamponado a 10%, processadas convencionalmente para microscopia de
rotina e incluídos em parafina histológica. Secções de 4 μm foram coradas com HE e
fotomicrografadas. Uma análise morfológica e quantitativa dos odontoblastos, dentina e
pré-dentina revelou tendências a pequenas diferenças estruturais nos grupos tratados,
com maior incidência nos animais com 1 dia de vida, alterações consideradas
estatisticamente não significantes. Estes dados sugerem que nas doses e condições
estudadas e quando aplicadas durante a gestação, a fluoxetina não alterou o
desenvolvimento da dentina coronária
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Inibição neonatal da recaptação de serotonina: repercussões sobre o desenvolvimento morfológico neuromuscular do esôfago em ratos nutridos ou nãoPEREIRA, Kelli Nogueira Ferraz 31 January 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Existem períodos críticos do desenvolvimento do sistema nervoso que são vulneráveis a
agressões do ambiente. Nessa fase da vida em mamíferos, acontece também o
desenvolvimento do trato gastrintestinal, ressaltam-se suas estruturas neurais responsáveis
pelo controle motor do sistema digestório. Durante essas etapas, estímulos precoces ou
insultos podem resultar em mudanças persistentes na estrutura e função do organismo. Esse
fenômeno, conhecido como programação, pode ser responsável pelo estabelecimento de
doenças na vida adulta. O objetivo do presente estudo foi investigar as possíveis
repercussões da desnutrição e/ou da inibição neonatal da recaptação de serotonina no
desenvolvimento estrutural neuromuscular do esôfago em ratos. A amostra consistiu de 97
ratos machos da linhagem Wistar. Os animais foram divididos em dois grupos: nutrido
(n=39) e desnutrido (n=58). A manipulação farmacológica com inibidor seletivo de
recaptação de serotonina foi realizada durante o período de lactação. Os animais de cada
grupo foram divididos em dois subgrupos: 1o tratados com soro fisiológico (NS, n=21; DS,
n=38); 2o, com sertralina (10 mg/Kg pc, s.c.) (NSert, n=18; DSert, n=20). Ratos de cada
subgrupo foram pesados e sacrificados para retirada de esôfago e posterior análise dos
parâmetros macroscópicos e miscroscópicos aos 22 ou 90 dias de idade. O esôfago de cada
animal era removido e medido o comprimento total; em seguida, dividido por dissecção em
duas porções de igual comprimento. Após aferição do peso da porção proximal, só essa era
então utiliza, fixada, desidratada e seccionada para coloração. Inicialmente, foi utilizada a
Hematoxilina/Eosina para localização dos neurônios do plexo mioentérico. Em seguida,
para confirmação e eventuais medidas, foi empregado o método de impregnação neuronal
por nitrato de prata. A desnutrição e/ou a ação neonatal da sertralina parecem ter sido
responsáveis pela redução do peso corporal na fase de lactação. Nos desnutridos, houve
redução ponderal que persistiu mesmo após o período de recuperação nutricional. A
restrição protéica precoce e o uso neonatal de sertralina tiveram impactos relevantes no
tamanho e no peso do esôfago nos animais com 22 dias de vida. A manipulação nutricional
gerou mudanças persistentes, em ambas as idade estudadas, na área e no perímetro das
fibras musculares longitudinais. Ambos os insultos (nutricional ou farmacológico)
ocasionaram diminuição do número de neurônios mioentéricos. No entanto, esses efeitos só
foram observados nos animais desnutridos no 22o dia de idade. Curiosamente, nos animais
tratados com sertralina houve diminuição de neurônios, somente ao 90o dia de idade.
Quanto à relação entre o número de neurônios do plexo mioentérico e a área das células
musculares longitudinais, os animais desnutridos apresentaram maior proporção a curto e a
longo prazo. Enquanto que na relação entre o número de neurônios e o perímetro das fibras,
os efeitos dieta e droga demonstraram, respectivamente, maior e menor proporções a longo
prazo. A desnutrição e o uso de inibidor seletivo de recaptação de serotonina parecem
programar alterações neuromusculares na morfologia do esôfago. Essas observações
indicam que as mudanças estruturais associadas com a programação estão relacionadas à
função regulatória da serotonina no desenvolvimento neuromotor do trato gastrintestinal
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Distribuição e análise quantitativa de neurônios imunoreativos à enzima triptofano hidroxilase em núcleos de rafe de ratos desnutridos durante a vida perinatalCristinny de Farias Campina, Renata 31 January 2009 (has links)
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Previous issue date: 2009 / Agravos nutricionais ocorridos no período de desenvolvimento do sistema nervoso
podem programar o metabolismo fetal de maneira duradoura para permitir a
sobrevivência do indivíduo às mudanças no ambiente nutricional. A desnutrição
protéica perinatal promove modificações neuroquímicas, inclusive dos níveis de
serotonina e da enzima limitante para sua síntese, a triptofano hidroxilase (TPH).
Ratas virgens da linhagem Sprague-Dawley receberam dieta normoprotéica (Grupo
controle, C) ou hipoprotéica (Grupo desnutrido, D) durante a gestação e lactação. Os
filhotes foram alimentados com dieta normoprotéica após o desmame e submetidos
à experimentação aos 35 dias de vida. Filhotes normonutridos e desnutridos
receberam injeção aguda de fenfluramina (3mg/Kg p.c) ou salina (Nacl 0,9%)
formando os grupos controle salina (CS), desnutrido salina (DS), controle
fenfluramina (CF) e desnutrido fenfluramina (DF). Os encélafos foram
criosseccionados e processados com técnicas de imunohistoquímica contra a
enzima triptofano hidroxilase. Foram analisados a quantidade de neurônios
imunoreativos a triptofano hidroxilase e sua distribuição dentro dos núcleos Dorsal e
Mediano da rafe. O grupo desnutrido não apresentou alterações na quantidade e
distribuição de células serotoninérgicas nos núcleos da rafe quando comparado aos
animais controle. No entanto, quando o sistema serotoninérgico foi estimulado com
fenfluramina, observamos aumento no número de neurônios imunoreativos a enzima
triptofano hidroxilase no núcleo Dorsal da rafe apenas de animais desnutridos. A
investigação da organização topográfica das células marcadas em regiões do eixo
rostro-caudal revelou importantes diferenças entre organismos desnutridos e
nutridos, que não foram observadas na constituição dos núcleos como um todo.
Dessa forma, podemos salientar a relevância de estudos com sub-populações de
neurônios dentro dos núcleos da rafe, apresentando essas susceptibilidades
distintas a ações da desnutrição perinatal
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Origem de aferências monoaminérgicas e CART-érgicas ao circuito elementar do reflexo auditivo de sobressalto /Silva, André Valério da. January 2015 (has links)
Orientador: José de Anchieta de Castro e Horta Junior / Banca: Luiz Takase / Banca: Claudio Aparecido Casatti / Banca: Luciana Pinatto / Banca: Mirela Barros Dias / Resumo: O reflexo auditivo de sobressalto (RAS) é uma reação motora rápida e evidente frente a um estímulo acústico intenso e inesperado. Trata-se de um reflexo acústico-motor do tronco encefálico que está presente em muitas espécies de mamíferos, incluindo o homem. Possui caráter tanto defensivo frente a uma possível agressão quanto de alerta frente a aconteci-mentos não esperados. Além do RAS resultar em uma resposta sobre a musculatura esque-lética, possui ação sobre o sistema nervoso autônomo promovendo aumento da pressão arterial e da freqüência cardíaca. No rato o circuito neural elementar do RAS é constituído por: neurônios do gânglio espiral, neurônios da raiz coclear (CRN), neurônios reticuloespi-nais do núcleo reticular caudal da ponte (PnC) e motoneurônios da medula espinal. O RAS pode ser modulado pela habituação, sensibilização, inibição por estímulo prévio (PPI) e pela potenciação por um estímulo adverso. Estas modulações podem ocorrer mediante a influên-cia de diversas substâncias neuroativas sobre os componentes deste circuito. Neste traba-lho avaliamos a origem de aferências monoaminérgicas (serotonina e noradrenalina) e CART-érgicas para os CRN e PnC. Para isso foram utilizados 54 ratos Wistar, adultos fê-meas, que foram submetidos a injeções de traçadores neuronais anterógrados e retrógrados para mapeamento de vias nervosas e a identificação imuno-histoquímica de substâncias neuroativas. Todos os protocolos experimentais foram aprovados pela Comissão de Ética no Uso de Animais do Instituto de Biociências de Botucatu - UNESP (protocolo no 17/08). Nos-sos resultados demonstram que o grupamento noradrenérgico A5 é uma fonte de aferências noradrenérgicas e CART-érgicas para os CRN e PnC, enquanto que o núcleo dorsal da rafe (DR) é a origem de aferências serotoninérgicas para estas regiões. Existem conexões recí-procas entre o DR, o A5 e o PnC. Além disso,... / Abstract: The acoustic startle reflex (ASR) is a rapid motor reaction elicited by a sudden intense acoustic stimulus. This is an acoustic-motor reflex of brainstem conserved across mammal's species including man. Moreover the ASR is defensive behavior against both possible ag-gressive and alert to unexpected events. The ASR evokes responses of skeletal muscles as well as of autonomic nervous system with elevation of blood pressure and acceleration of the heart rate. In the rat, the elementary neural circuitry of ASR is mediated by ganglion cells of the organ of Corti, the cochlear root neurons (CRN), the pontine caudal reticular nucleus (PnC) and motoneurons of the spinal cord. The ASR could be modulated by habituation, sensitization, prepulse inhibition (PPI), and fear potentiation. These modulations were medi-ated by the influence of neuroactive substances on components of neuronal circuitry of ASR. In this work we evaluate the origin of monoaminergic (serotonin and noradrenaline) and CART-ergic afferents to CRN and PnC. Adult Female Wistar rats (n=54) were submitted to injections of retrograde and anterograde neuronal tracers in track-tracing experiments and identification of neuroactive substances in brain by immunohistochemistry technique. All ex-perimental protocols are according with Ethics Committee on Animal Use (protocol: 17/08). Our results demonstrate that noradrenergic area A5 (A5) is a source of noradrenergic and CART-ergic afferents to CRN and PnC, and dorsal raphe nucleus (DR) is origin of seroto-ninergic afferents to these regions. There are reciprocal connections between DR, A5 and PnC. Furthermore, after 14 and 21 days of lesion in A5, the percentage of PPI increased during intervals of 100 and 150 milliseconds without modification of ASR. This data suggest that A5 have direct action on elementary circuit of ASR evidenced his connections and modulation of PPI. Moreover, A5 and DR connections bring new insights about modulation ... / Doutor
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Efeitos tardios do tratamento neonatal com sertralina sobre a depressão experimental induzida em ratos WistarMaria Pereira Leite, Roberta January 2004 (has links)
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Previous issue date: 2004 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O presente estudo investigou o peso corporal, a depressão experimentalmente
induzida e o comportamento exploratório de ratos adultos jovens, tratados no período
neonatal com sertralina, um inibidor seletivo da recaptação de serotonina. Os animais
receberam via subcutânea, 15mg/kg de sertralina (grupo sertralina, n=42) ou 1ml/kg de
água destilada (grupo controle, n=36), diariamente do 1o ao 21o dia de idade. O peso foi
aferido do primeiro ao 21o dia de idade e aos 60 dias de idade. A depressão experimental
foi induzida através do teste do nado forçado onde se mensuravam a latência das tentativas
de fuga e o tempo de imobilidade. O comportamento exploratório foi observado através da
atividade exploratória no Hole board . Os animais tratados com sertralina apresentaram
redução da evolução ponderal que perdurou até a vida adulta e resistência a indução
experimental da depressão. O nado forçado reduziu a atividade exploratória independente
do tratamento. Esses achados indicam a participação precoce do sistema serotoninérgico no
desenvolvimento dos mecanismos subjacentes relacionados a expressão do humor no
adulto
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Programação pela desnutrição perinatal do controle serotoninérgico da liberação do óxido nítrico por macrófagos alveolares em ratos adultosTatiana Ferreira e Silva, Wylla 31 January 2008 (has links)
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Previous issue date: 2008 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Restrição nutricional no aleitamento tem conseqüências em longo prazo no funcionamento
dos sistemas neuro-imunológico. Receptores e transportador serotoninérgicos presentes em
macrófagos alveolares (MA) estão relacionados ao seu funcionamento. No artigo Perinatal
malnutrition programs sustainable alterations in nitric oxide production and cell viability in
activated macrophages of the adult rat , efeitos da desnutrição perinatal sobre liberação in
vitro de óxido nítrico (LNO) foram analisados em MA nos ratos adultos. Os ratos desnutridos
(D) apresentaram retardo do crescimento, confirmado pelo baixo peso ao desmame,
persistindo até os 90 dias de vida. Os D também apresentaram menor número de células totais
e MA no lavado broncoalveolar. A LNO por MA e a viabilidade dessas células foi menor nos
D. No artigo, Perinatal malnutrition programs sustained alterations in nitric oxide release by
activated macrophages in response to fluoxetine in adult rats , em adultos, nutridos ou
desnutridos na fase perinatal, foi avaliada LNO por MA em resposta a fluoxetina em
diferentes concentrações e tempos, e também em resposta aos agonistas de receptores 5-HT1A
e 5-HT1B. Na presença de fluoxetina, a LNO por MA dos controles foi menor, uma resposta
relacionada à dose, mas não ao tempo. A adição de agonistas não interferiu na produção de
NO por MA nos controles. A LNO por MA de D foi menor em todos os tempos analisados. A
LNO não foi alterada na presença de fluoxetina ou dos agonistas por MA de D. Em
conclusão, manipulação nutricional no período perinatal parece interferir com a programação
da função de macrófagos e afeta sua regulação serotoninérgica, repercutindo no organismo
adulto
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Análise morfológica do órgão do esmalte em primeiros molares superiores de ratos tratados com fluoxetinaSILVA, Igor Henrique Morais January 2007 (has links)
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Previous issue date: 2007 / Estudos prévios avaliaram a presença de serotonina durante a odontogênese no interior do epitélio e mesênquima dentário sugerindo a sua participação no desenvolvimento dos dentes. A serotonina regula uma enorme variedade de processos do desenvolvimento durante a embriogênese. Assim sendo, no presente estudo utilizamos a fluoxetina, um inibidor seletivo de recaptação da serotonina, na dosagem de 10 mg/kg de peso administrada durante 20 dias em ratas grávidas para analisar o papel desta no desenvolvimento do órgão do esmalte em primeiros molares superiores de 36 ratos Wistar, totalizando 72 germes dentários, do 17º dia de V.I.U até o 10 º dia de vida. As ratas grávidas foram anestesiadas por xilazina a 10mg/kg e quetamina a 25 mg/kg. Os fetos foram retirados, decapitados, suas mandíbulas removidas e o maxilar superior exposto. As peças foram fixadas em Bouin, descalcificadas em ácido nítrico a 5% quando necessário, processadas convencionalmente para microscopia de rotina e incluídas em parafina. Secções de 5 μm foram obtidas e coradas em HE, PAS e tricrômico de Masson. A análise morfológica não revelou alterações estruturais no grupo tratado em relação ao controle, o que sugere que a fluoxetina, na dosagem utilizada não interfira no papel da serotonina durante o desenvolvimento do órgão do esmalte, e consequentemente no processo da amelogênese
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Diseño, sintesis, evaluación farmacológica y estudios in silico de nuevos bis-ligandos indólicos multireceptoriales con mecanismo de acción monoaminérgica dual o tripleCerda Cavieres, Christopher David January 2018 (has links)
Tesis presentada a la Universidad de Chile para optar al grado de Doctor en Química / La presente tesis es un aporte al conocimiento en el área de la Química medicinal mediante el diseño y síntesis de nuevos derivados indólicos que actúen como ligandos multifuncionales con potencial acción antidepresiva. Los estudios de afinidad se efectuaron sobre h-TSER (proteína transportadora de serotonina humana), D2s (receptor de dopamina D2 corto humano) e inhibición sobre la enzima MAO-A (monoamino oxidasa de rata). Estructuralmente las nuevas familias corresponden a indolil propilpiperazinas conectadas a: anillos benzoxazínicos (F1), derivados morfolinoetilbenzamidas fluorados (F2) y anillos aminopiridínicos (F3).
Los estudios de afinidad efectuados por desplazamiento de radioligandos en las 3 familias, mostraron que 14 compuestos que exhibieron valores de Ki en el rango nanomolar (3.0-16nM) en la proteína TSER. En los estudios de afinidad por desplazamiento de radioligando para el receptor D2s, 11 compuestos exhibieron afinidades entre 330-910 nM. Finalmente, en los ensayos en MAO–A, 7 compuestos mostraron porcentajes de inhibición sobre el 50%.
Solo una (familia III) exhibió un perfil de acción con acción multimodal dual Los compuestos F3F (Ki TSER = 3,13 nM; e inhibición MAO-A = 50%), F3G (Ki TSER = 13,10 nM; e inhibición MAO-A = 75%) y F3L (Ki TSER = 9,64 nM; e inhibición MAO-A = 67%). Todos los ensayos farmacológicos fueron complementados contrastados y discutidos con estudios de acoplamiento molecular inducido (docking) / The main goal of the present thesis is to contribute to the knowledge of the medicinal chemistry through the design and synthesis of novel indol derivatives functioning as multitargets agents with potential antidepressive action. Binding affinities studies were carried out in h-SERT (human serotonine transporter proteine), hD2s (human short-dopamine receptor) and rat MAO-A enzyme inhibition. Indolylpropyl piperazine moieties were connected to the following scaffolds: functionalized benzoxazine rings (F1), morpholinoethylfluorinated benzamide derivatives (F2) and functionalized aminopyridines (F3).
Radioligand binding assays on SERT carried out for compounds belonging to the three families showed that 14 compounds displayed Ki values in the nanomolar range (3.0-16nM) six of them belonging to the first family. The D2s receptor study gave 11 compounds displaying affinities between 330-910 nM, the MAO-A assays revealed that 7 compounds showed enzyme inhibition values over 50%.
Only Family III displayed a dual mode of biological activity. Compounds F3F (Ki SERT = 3.13 nM, MAO-A inhibition = 50%), F3G (Ki SERT = 13.10 nM, MAO-A inhibition = 75%) and F3L (Ki SERT = 9.64 nM, MAO-A inhibition = 67%). The pharmacological results were supported and discussed using induced molecular coupling studies (docking)
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Propiedades funcionales y farmacológicas de receptores Cys-loop de serotonina humano y del nematodo Caenorhabditis elegans : búsqueda de nuevos fármacosRodriguez Araujo, Noelia Marisol 11 July 2023 (has links)
El sistema nervioso consiste en una red muy compleja de billones de neuronas
que se comunican entre sí. Las sinapsis químicas son primordiales para la comunicación
neuronal rápida y eficiente, y están mediadas por la liberación de neurotransmisores a
la hendidura sináptica para unirse a sus receptores específicos ubicados en otras células
o neuronas postsinápticas.
Entre los receptores de neurotransmisores se encuentran los receptores Cys-loop, que pertenecen a la superfamilia de canales pentaméricos activados por ligando (pLGIC). Son proteínas integrales de membrana que convierten la señal química en una
respuesta eléctrica al permitir el paso de iones de un lado a otro de la membrana. Estos
receptores se constituyen por 3 regiones fundamentales, el dominio extracelular, donde
se encuentra el sitio de unión del neurotransmisor o sitio ortostérico; el dominio
transmembrana, que conforma el poro del canal y contiene los sitios de unión para
diferentes moduladores alostéricos; y el dominio intracelular que posee sitios de
modulación y aminoácidos determinantes de la conductancia del canal. En vertebrados,
esta familia de receptores está formada por los receptores nicotínicos de acetilcolina y
el receptor de serotonina tipo 3 (5-HT3), los cuales son permeables a cationes, y por los
receptores de ácido γ-aminobutírico tipo A (GABAA) y receptores de glicina, permeables
a aniones. El repertorio de receptores Cys-loop en invertebrados es más variado y
extenso, incluyendo entre ellos un canal aniónico activado por serotonina, denominado
MOD-1.
Los receptores Cys-loop son ampliamente estudiados por ser blancos
moleculares terapéuticos en una extensa variedad de patologías. Es por ello por lo que
ampliar el conocimiento de la función y modulación de estos receptores permitirá
generar mejores estrategias farmacológicas.
En esta Tesis Doctoral se realizaron estudios de la función y modulación de los
receptores Cys-loop activados por serotonina humano, 5-HT3, y de Caenorhabditis
elegans, MOD-1, para la búsqueda de nuevos fármacos y la generación de estrategias
de reposicionamiento de medicamentos de uso clínico.
En el Capítulo 1 se estudió la funcionalidad molecular del receptor 5-HT3A
humano. Se logró descifrar las diferencias entre la activación ortostérica y la activación
y modulación alostérica por terpenoides, utilizando la valiosa técnica de patch-clamp.
Se definieron las bases mecanísticas de la activación de 5-HT3A por los agonistas
ortostéricos serotonina y triptamina, y de la activación alostérica por los terpenoides
timol y carvacrol. Se demostró que triptamina es un agonista de muy baja eficacia y
potencia. Mediante registros de whole-cell, se demostró que los terpenoides potencian
las corrientes evocadas por serotonina, pero también poseen capacidad para evocar
alostéricamente respuestas macroscópicas, con mayor potencia y eficacia que
triptamina, aunque de forma más lenta que serotonina. Mediante registros de canal
único, se evidenció que dichos compuestos activan al receptor 5-HT3 como agonistas
muy eficaces dado que generan episodios de activación más prolongados que
serotonina. Nuestro estudio mostró la primera caracterización a nivel de canal único de
la activación de 5-HT3A humano por ligandos alostéricos, de creciente interés como
herramientas terapéuticas.
En el Capítulo 2 se halló un nuevo blanco promisorio para la terapia
antihelmíntica, estudiando ampliamente al receptor MOD-1 de C. elegans. Este
nematodo es un buen modelo parasitario ya que comparte las características
funcionales y farmacológicas con los nematodos parasitarios. Además C. elegans es
sensible a la mayoría de los fármacos antiparasitarios que están dirigidos a los
receptores Cys-loop de los parásitos. Dado que MOD-1 está ausente en vertebrados, se
encuentra limitado al filo, y está presente en nematodos parasíticos, emerge como un
blanco farmacológico promisorio.
En este capítulo se revelaron las diferencias en la selectividad agonista y en los
sitios ago-PAM entre MOD-1 y el receptor de serotonina humano 5-HT3. Se encontró
que la triptamina, un agonista muy parcial de 5-HT3A, es un agonista eficaz de MOD-1, y
se demostró además que posee una acción antihelmíntica. Por otro lado, se realizó un
testeo de una variedad de compuestos en búsqueda de nuevos moduladores de MOD-
1. Se demostró, mediante estudios electrofisiológicos, que muscimol y piperazina (PZE)
son antagonistas no competitivos de MOD-1. Mediante ensayos de comportamiento en
gusanos se confirmó el efecto de PZE sobre MOD-1, hallando de esta manera un nuevo
blanco molecular para este fármaco de uso antiparasitario.
Estos estudios ampliaron el conocimiento de receptores Cys-loop de nematodos
para el descubrimiento de nuevos compuestos con actividad nematicida. Por lo tanto,
se concluye que, derivados de triptamina y PZE podrían ser explorados como nuevos
compuestos con potencial actividad antiparasitaria.
En el Capítulo 3, se comenzó a plantear estrategias para reposicionar
medicamentos de uso clínico, para lograr superar las desventajas de generar un fármaco
de novo, acortando los tiempos y recursos necesarios para realizar los estudios
farmacológicos, famacocinéticos y de toxicidad requeridos para la producción de nuevos
fármacos dirigidos a tratar patologías en las que los receptores estudiados en esta Tesis
están involucrados. Con tal fin, se exploró el efecto de fármacos de uso comercial
derivados de triptamina y PZE, debido a lo postulado en el capítulo 2, y se encontró que
sumatriptan, un fármaco comercializado para tratar la migraña, sería un buen candidato
para reposicionar para la terapia antiparasitaria. Además, PZE podría reutilizarse como
modulador alostérico negativo de los receptores 5-HT3A humano abordando patologías
en las que este receptor está involucrado, tales como náuseas y vómitos relacionados a
la quimioterapia, radioterapia y anestesia, así como para mitigar los síntomas del
síndrome de intestino irritable y para patologías del sistema nervioso como depresión,
ansiedad y esquizofrenia, entre otras en las que este receptor está involucrado.
En resumen, aprovechando la potencialidad que brindan los registros de canal
único y de corrientes macroscópicas en el estudio de las bases moleculares del
funcionamiento y modulación de estos receptores Cys-loop, se logró hallar un nuevo
blanco antiparasitario, descifrar por primera vez las diferencias de activación ortostérica
y alostérica del receptor 5-HT3A humano por timol y carvacrol, y generar estrategias de
reposicionamiento de fármacos de uso clínico mediante la modulación alostérica de
estos receptores tanto en C. elegans como en humano.
Estos estudios amplían el conocimiento de la función y modulación de los
receptores Cys-loop, generando una base para abordar patologías que involucran a
estos receptores y para el desarrollo de nuevos y más selectivos fármacos. / The nervous system consists of a highly complex network of billions of neurons
that communicate with each other. Chemical synapses are key to the rapid and efficient
neuronal communication and are mediated by the release of neurotransmitters into the
synaptic cleft to bind to their specific receptors located either on other cells or
postsynaptic neurons.
Among the neurotransmitter receptors are the Cys-loop receptors, which belong
to the superfamily of ligand-gated pentameric channels (pLGIC). They are integral
membrane proteins that convert the chemical signal into an electrical response by
allowing ions to pass from one side of the membrane to the other. These receptors are
made up of 3 fundamental regions: the extracellular domain, where the
neurotransmitter binding site or orthosteric site is located; the transmembrane domain,
which forms the channel pore and contains the binding sites for different allosteric
modulators; and the intracellular domain which contains modulation sites and amino
acids that determine channel conductance. In vertebrates, this family of receptors
consists of the nicotinic acetylcholine receptors and the serotonin receptor type 3 (5-
HT3), both of which are permeable to cations, and the receptors for γ-aminobutyric acid
type A (GABAA) and glycine receptors, permeable to anions. The repertoire of Cys-loop
receptors in invertebrates is more varied and extensive, including among them, a
serotonin-activated anion channel called MOD-1.
Cys-loop receptors have been extensively studied as they are therapeutic
molecular targets in a wide variety of pathologies. Expanding our knowledge on the
function and modulation of these receptors will therefore contribute to generating
better pharmacological strategies for the treatment of these disorders.
In this Ph. D. thesis studies were carried out on the function and modulation of
the Cys-loop receptors activated by human serotonin, 5-HT3, and of Caenorhabditis
elegans, MOD-1, for the search for new drugs and the generation of repositioning
strategies for drugs for clinical use.
In Chapter 1 the molecular functionality of the human 5-HT3A receptor was
studied. It was possible to decipher the differences between orthosteric activation and
allosteric activation and modulation by terpenoids, using the valuable patch-clamp
technique. The mechanistic bases of 5-HT3A activation by the orthosteric agonists
serotonin and tryptamine, and allosteric activation by the terpenoids thymol and
carvacrol, were defined. It is revealed that tryptamine is an agonist with very low efficacy
and potency. Using whole-cell recordings, they show that terpenoids not only potentiate
the currents evoked by serotonin but also have the ability to allosterically evoke
macroscopic responses, with greater power and efficiency than tryptamine, although
more slowly than serotonin. Using single channel recordings, these compounds were
shown to activate the 5-HT3A receptor as highly effective agonists, since they generate
longer episodes of activation than serotonin. Our study showed the first characterization
at the single channel level of the activation of human 5-HT3A by allosteric ligands, of
increasing interest as therapeutic tools.
In Chapter 2, a promising new target for anthelmintic therapy was found by
extensively studying the MOD-1 receptor of C. elegans. This nematode is a good parasitic
model since it shares functional and pharmacological characteristics with parasitic
nematodes. In addition, C. elegans is sensitive to most antiparasitic drugs that are
directed at the Cys-loop receptors of the parasites. Since MOD-1 is absent in vertebrates,
limited to the phylum, and present in parasitic nematodes, it emerges as a promising
drug target.
In this chapter we revealed the differences in agonist selectivity and ago-PAM
sites between MOD-1 and the human serotonin 5-HT3 receptor. Tryptamine, a very
partial agonist of 5-HT3A, was found to be an effective agonist of MOD-1, and was
further shown to have an anthelmintic action. On the other hand, we carried out a test
of a variety of compounds in search of new modulators of MOD-1. We demonstrated by
means of electrophysiological studies that muscimol and piperazine (PZE) are non-
competitive antagonists of MOD-1. Also, through behavioral tests in worms, we
confirmed the effect of PZE on MOD-1, thus finding a new molecular target for this drug
for antiparasitic use.
These studies have considerably expanded the knowledge of nematode Cys-loop
receptors for the discovery of new compounds with nematicidal activity. We conclude
that tryptamine and PZE derivatives could be explored as new compounds with potential
antiparasitic activity.
In Chapter 3, we began to propose strategies to reposition drugs for clinical use
in order to overcome the disadvantages of generating a new drug, shortening the time
and resources necessary to perform the pharmacological, pharmacokinetic, and toxicity
studies required for the production of new drugs aimed at treating pathologies in which
the receptors studied in this Ph. D. thesis are involved. To this end, the effect of drugs in
commercial use derived from tryptamine and PZE was explored based on the results
collected in Chapter 2. It was found that sumatriptan, a drug marketed to treat migraine,
appears to be a good candidate to reposition for antiparasitic therapy. In addition, PZE
could be reused as a negative allosteric modulator of human 5-HT3A receptors,
addressing pathologies in which this receptor is involved, such as nausea and vomiting
related to chemotherapy, radiotherapy, and anesthesia, as well as to alleviate the
symptoms of irritable bowel syndrome and for pathologies of the nervous system, such
as depression, anxiety and schizophrenia, among others in which this receptor is
involved.
Summing up, taking advantage of the potential offered by single channel
recordings and macroscopic currents in the study of the molecular bases of the
functioning and modulation of the Cys-loop receptors explored in this Ph. D. thesis, it
was possible to: i) find a new antiparasitic target, ii) to decipher for the first time the
differences of orthosteric and allosteric activation of the human 5-HT3A receptor by
thymol and carvacrol, and iii) to generate drug repositioning strategies for clinical use
through allosteric modulation of these receptors in both C. elegans and humans.
These studies broaden the knowledge of the function and modulation of Cys-
loop receptors, generating a basis for addressing pathologies that involve these
receptors as well as for developing new and more selective drugs.
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