O Staphylococcus aureus está freqüentemente envolvido em surtos de intoxicação alimentar. Geralmente esses surtos têm início abrupto, causando náusea e vômito nos acometidos. Na elucidação deste tipo de surtos é necessário que seja investigada a presença da enterotoxina no alimento e/ou a capacidade enterotoxigênica da bactéria isolada. A partir disso, o objetivo do presente estudo foi implantar uma técnica de detecção de enterotoxinas e avaliar a capacidade enterotoxigênica de linhagens de Staphylococcus aureus isolados de surtos. Trinta linhagens isoladas, no período de 2002 a 2003, de alimentos envolvidos em surtos no Rio Grande do Sul foram identificadas e avaliadas quanto à capacidade de produzir enterotoxinas SEA, SEB, SEC e SED, através da técnica de sensibilidade ótima em placa-OSP.Ao lado disso, os dados epidemiológicos relativos aos surtos de origem foram coletados. Os resultados obtidos demonstraram que todas as linhagens foram positivas no teste da catalase, coagulase em tubo, prova de termonuclease, teste de hemólise e fermentaram a maltose e o manitol, sendo confirmadas como Staphylococcus aureus. Todas as linhagens produziram enterotoxina SEA, 24 produziram SEB, 12 SEC e 6 SED, isoladamente ou em associação.A maioria das linhagens foi isolada de alimentos submetidos à grande manipulação durante seu preparo e apresentaram contagens superiores a 106 UFC/g de Staphylococcus aureus, demonstrando que condições favoráveis à produção de enterotoxinas devem ter ocorrido durante o seu preparo e armazenamento. / Staphylococcus aureus often occurs in food poisoning outbreaks. These outbreaks usually start abruptly, causing nausea and vomit on affected people. In order to investigate these outbreaks, it is necessary to check the presence of enterotoxin in food and/or enterotoxigenic capacity of isolate. So the purpose of this study was to propose a method to the enterotoxin detection and evaluate the enterotoxigenic capacity of coagulase positive Staphylococci strains which were isolated from foods involved with outbreaks. On the period of 2002 to 2003, thirty strains detected in foods poisoning outbreaks in RS were identified and evaluated on their SEA, SEB, SEC and SED enterotoxins production capacity checking their sensitivity on OSP - plates. Moreover, epidemiological information related to the origin outbreaks was collected. The results showed that all the strains were positive according to following tests: catalase, coagulase in vitro/tube, termonuclease and hemolysis. Besides the strains have fermented maltose and manitol as to confirm as being Staphylococcus aureus. All the strains produced SEA enterotoxin; 24 of them produced SEB, 12 SEC and 6 SED, isolated or in association. Most strains were isolated in food that had been under intense manipulation during their preparation and which had presented levels higher than 106 CFU/g to Staphylococcus aureus, indicating that favorable conditions to the production of enterotoxins should have occured during their preparation and storage.

abstract: The viscous lung mucus of cystic fibrosis (CF) patients is characterized by oxygen gradients, which creates a unique niche for bacterial growth. Pseudomonas aeruginosa and Staphylococcus aureus, two predominant microorganisms chronically infecting the airways of CF patients, typically localize in hypoxic regions of the mucus. While interspecies interactions between P. aeruginosa and S. aureus have been reported, little is known about the role of low oxygen in regulating these interactions. Studying interspecies interactions in CF lung disease is important as evidence suggests that microbial community composition governs disease progression. In this study, P. aeruginosa lab strain PAO1 and two primary clinical isolates from hypoxic tissues were cultured alone, or in combination, with methicillin resistant S. aureus (MRSA) strain N315 under hypoxic or normoxic conditions. Herein, it is shown for the first time that low oxygen conditions relevant to the CF lung affect the competitive behavior between P. aeruginosa and S. aureus. Specifically, S. aureus was able to better survive competition in hypoxic versus normoxic conditions. Competition data from different oxygen concentrations were consistent using PAO1 and clinical isolates even though differences in the level of competition were observed. PAO1 strains carrying mutations in virulence factors known to contribute to S. aureus competition (pyocyanin/phzS, elastase/lasA and lasI quorum sensing/lasI) were used to determine which genes play a role in the differential growth inhibition. The lasA and lasI mutants competed less effectively with S. aureus regardless of the oxygen level present in the culture compared to the isogenic wild type strain. These results are consistent with previous findings that elastase and lasI quorum sensing play a role in competitive behavior of P. aeruginosa and S. aureus. Interestingly, the phzS mutant competed less effectively in hypoxic conditions suggesting that pyocyanin may be important in microaerophilic conditions. This study demonstrates that oxygen plays a role in competition between P. aeruginosa and S. aureus and contributes to understanding CF environmental factors that may regulate microbial community dynamics important for disease progression with potential for development of therapeutic avenues. / Dissertation/Thesis / Masters Thesis Biology 2014

Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias Animales y Veterinarias . / La mastitis es la principal enfermedad que afecta a vacas productoras de leche a nivel mundial, con costos de tratamiento de hasta US$ 200/vaca/año. Así mismo, las perdidas en producción de leche fluctúan entre 1.335 y 1.539 kg/lactancia/vaca en casos de mastitis sub clínica y clínica respectivamente. En Chile, dentro de los principales patógenos causantes de esta enfermedad se encuentra el Staphylococcus aureus (S. aureus) que es responsable del 22 al 68,6% de los cuadros sub clínicos. Recientemente, se ha reportado la existencia de un alto riesgo de resistencia bacteriana producto del uso inadecuado de antibacterianos para el tratamiento de mastitis causadas por S. aureus. Alternativamente en el último tiempo se ha establecido el uso de células madre mesenquimáticas (MSCs) para el tratamiento de múltiples enfermedades en medicina humana y veterinaria incluyendo infecciones bacterianas. En consecuencia, el objetivo del presente estudio fue evaluar el potencial antibacteriano in vitro contra S. aureus del medio condicionado de MSCs derivadas de médula ósea y tejido adiposo fetal bovino. Se utilizaron las cepas ATCC 25923 y SAU 1S de S. aureus con el fin de determinar su sobrevivencia en medio condicionado de MSCs no concentrado, concentrado, activado y activado concentrado mediante pre-exposición a S. aureus. En estos mismos cultivos de MSCs se cuantificaron los niveles de mRNA de los péptidos antimicrobianos β-defensina 4A (bBD4A), NK-lisina 1 (NK1), catelicidina 2 (CATHL2), hepcidina e indoleamina 2,3 dioxigenasa (IDO) mediante Q-PCR y de bBD4A mediante ELISA. La sobrevivencia de la cepa ATCC 25923 no fue diferente (P>0,05) cuando fue tratada con medio condicionado no concentrado de MSCs en comparación con los controles de fibroblastos y DMEM. Sin embargo, el porcentaje de sobrevivencia de la cepa SAU 1S disminuyó (P<0,05) al ser tratada con medio condicionado no concentrado de MSCs en comparación con el control DMEM. Adicionalmente, el medio condicionado concentrado de MSCs indujo una disminución (P<0,05) en la supervivencia de la cepa SAU 1S con respecto a los medios condicionados concentrados control de fibroblastos y DMEM. El medio condicionado activado, así como el medio condicionado activado concentrado de MSCs disminuyeron (P<0,05) la supervivencia de la cepa SAU-1S con respecto a los medios controles de MSCs no activados, de fibroblastos y DMEM. La activación indujo un aumento (P<0,01) de 3,5 veces en los niveles de mRNA de bBD4A en las MSCs de tejido adiposo y de 1,17 veces en MSCs de médula ósea. Además, la activación aumentó (P<0,05) en 1,66 y 1,37 veces el nivel de mRNA de NK1 en fibroblastos y MSCs de tejido adiposo, respectivamente. Los niveles de proteína bBD4A también aumentaron (P<0,05) en los medios condicionados de MSCs y de fibroblastos por efecto de la concentración. La activación solo aumenta (P<0,05) los niveles de bBD4A en los medios condicionados de MSCs derivadas de médula ósea. En conclusión, los medios condicionados de MSCs derivadas de médula ósea y tejido adiposo fetal bovino poseen efecto antibacteriano contra S. aureus en un sistema de cultivo in vitro. Este potencial antibacteriano se ve aumentado al concentrar por filtración y activar el medio condicionado mediante pre-exposición de MSCs a S. aureus. Estos resultados sugieren que el efecto antibacteriano de MSCs es mediado por la expresión de péptidos antimicrobianos NK1 y bBD4A. / Mastitis is the main disease affecting dairy cows worldwide with treatment costs reaching up to US $ 200/cow/year. Moreover, milk production losses fluctuate between 1,335 and 1,539 kg/lactation/cow in cases of clinical and clinical sub mastitis respectively. In Chile, one of the main pathogens causing mastitis Staphylococcus aureus (S. aureus), which is responsible for 22 to 68.6% of subclinical cases. Recently a high risk of bacterial resistance has been reported due to inappropriate use of antibacterial agents in the treatment of mastitis caused by S. aureus. Alternatively, the use of mesenchymal stem cells (MSCs) has been described for the treatment of multiple diseases in human and veterinary medicine including bacterial infections. Consequently, the aim of the present study was to evaluate the in vitro antibacterial potential against S. aureus of conditioned medium from MSCs derived from bone marrow and fetal bovine adipose tissue. S. aureus trains ATCC 25923 and SAU 1S were used in order to determine their survival in conditioned medium from non-concentrated, concentrated, activated and activated concentrated MSCs by exposure to S. aureus. mRNA levels from antibacterial peptides β-defensin 4A (bBD-4A), NK-lysine 1 (NK1), catelicidin 2 (CATHL2), hepcidin and Indoleamine 2,3 dioxygenase (IDO) were quantified by quantitative-PCR (Q-PCR) and bBD-4A by ELISA. The survival percentage of ATCC strain 25923 was not different (P>0.05) when it was treated with non-concentrated conditioned medium of MSCs compared to controls of fibroblasts and DMEM. In contrast, the survival percentage of SAU-1S strain decreased (P<0.05) when it was treated with nonconcentrated conditioned medium of MSCs compared to the DMEM control. Additionally, the concentrated conditioned medium of MSCs induced a decrease (P<0.05) in the survival percentage of the SAU 1S strain in comparison to the conditioned medium control fibroblasts and DMEM. The activated conditioned medium as well as the conditioned and activated conditioned medium of MSCs decreased (P<0.05) survival percentage of the SAU 1S strain with respect to non-activated MSCs control media, fibroblasts and DMEM. Activation induced a 3.5-fold increase (P<0.01) in bBD4A mRNA levels in adipose tissue MSCs and 1.17-fold in bone marrow MSCs. In addition, activation increased (P<0.05) 1.66 and 1.37-fold levels of NK1 mRNA in fibroblasts and adipose tissue MSCs, respectively. Levels of bBD4A also increased (P<0,05) in the conditioned media of MSCs and fibroblasts by concentration effect. Moreover, activation increased levels of bBD4A in conditioned media of MSCs derived from bone marrow. In conclusion, conditioned medium of MSCs possess antibacterial effect against S. aureus in an in vitro culture system. The antibacterial property is increased when conditioned medium is concentrated by filtration and activated by pre-exposition to S. aureus. The antibacterial potential of MSCs may be exerted by expression of antimicrobial peptides bBD4A and NK1. / Financiamiento: Proyecto Fondef ID 15I10129.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-12-09Bitstream added on 2014-06-13T20:31:20Z : No. of bitstreams: 1 franchi_eplp_me_botfm.pdf: 4815496 bytes, checksum: 1dc26a3719261d8f1f4551fbb04a10f4 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O gênero Staphylococcus está envolvido em infecções adquiridas tanto na comunidade como em hospitais, sobressaindo-se atualmente como um dos maiores problemas clínicos e epidemiológicos em infecções nosocomiais. Diante da importância do S.aureus como um dos microrganismos mais freqüentemente isolados de infecções de pele e tecidos moles e a crescente disseminação dos S. aureus resistentes a oxacilina (MRSA), este estudo objetiva identificar a presença de MRSA em feridas de pacientes atendidos em unidades básicas de saúde da cidade de Botucatu, caracterizar o cassete cromossômico mec e identificar fatores de risco para aquisição de S aureus e MRSA. Foram incluídas no estudo 126 amostras isoladas de 107 pacientes atendidos no período de março de 2010 à fevereiro de 2011. As amostras foram submetidas à identificação e detecção de resistência a oxacilina pelo método de difusão com disco de oxacilina e cefoxitina, penicilina, levofloxacina, clindamicina, eritromicina, gentamicina, sulfametazol/Trimetropim, tigeciclina, ácido fusídico, quinupristina/dalfopristina, linezolida e vancomicina. Foi realizada a caracterização do SCCmec por PCR multiplex nas amostras de S. aureus com gene mecA. Foi investigada a presença dos genes codificadores da Leucocidina Panton-Valentine (PVL). As amostras de Staphylococcus spp. também foram submetidas detecção de produção de -lactamase. Das 126 amostras estudadas, 73(58%) foram identificadas como genero Staphylococcus spp., sendo 49/73(67,1%) isolados S. aureus e 24/73(32,9%) estafilococos coagulase-negativa (ECN). A produção de -lactamase foi positiva em 65/73(89%) das amostras de Staphylococcus spp. Foi encontrado 7/49(14,2%) isolados de S. aureus e 13/24(54,1%) isolados de ECN com presença do gene mec A... / The genus Staphylococcus is involved in both community and hospital-acquired infections, currently standing out as major clinical and epidemiological problems in nosocomial infections. Given the importance of S. aureus as one of the most frequently microorganism isolated from skin and soft tissue infections and the increasing spread of methicillin-resistant S. aureus (MRSA), the aims of this study were to identify the presence of MRSA in wounds of patients treated at basic health units in Botucatu, characterize the cassette chromosome mec (SCCmec) and identify risk factors for acquisition of S aureus and MRSA. The study included 126 isolates from 107 patients treated from March 2010 to February 2011. The samples were identified and the disk diffusion method with cefoxitin and oxacillin disks was carried out in order to detect the resistance to oxacillin. The disk diffusion method was also carried out to set the susceptibility profile for the following antibiotics: penicillin, levofloxacin, clindamycin, erythromycin, gentamicin, sulfamethoxazole/trimethoprim, tigecycline, fusidic acid, quinupristin/dalfopristin, linezolid and vancomycin. mecA positive samples were submitted to SCCmec characterization using multiplex PCR. We also investigated the presence of genes encoding Panton-Valentine Leukocidin (PVL) as far as the - lactamase production. From the 126 samples studied, 73 (58%) were identified as genus Staphylococcus spp., and 49/73 (67.1%) isolates were identified as S.aureus and 24/73 (32.9%) as coagulase-negative Staphylococcus (CoNS). The -lactamase production was positive in 65/73 (89%) samples of Staphylococcus spp. The mecA gene was detected in 7/49 (14.2%) isolates of S. aureus and 13/24 (54.1%) isolates of CoNS. Among MRSA, 4/7 (57.2%) isolates were SCCmec type... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-07-28Bitstream added on 2014-06-13T20:12:19Z : No. of bitstreams: 1 bonesso_mf_me_botfm.pdf: 8474737 bytes, checksum: 25337f4a63c1a6466b17ddf8132b0d73 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Staphylococcus aureus resistentes a meticilina (MRSA) emergiram logo após a introdução desse fármaco para tratamento de infecções hospitalares. A emergência da resistência a meticilina em cepas de Staphylococcus aureus na comunidade (CAMRSA) instiga a pesquisa de novos tratamentos e dos mecanismos de virulência relacionados a essas cepas. Indivíduos que não apresentavam fatores de risco tradicionais para aquisição de MRSA eram gravemente afetados por cepas de CAMRSA que geralmente apresentam-se mais virulentas. O objetivo desse trabalho foi determinar a ocorrência de Staphylococcus spp. e os fatores de risco para aquisição de MRSA como causa de infecções de pele e/ou de tecidos moles. Durante o período de estudo foram atendidos 127 pacientes com diagnóstico de infecções agudas de pele, sendo que 19 (14,9%) pacientes apresentaram cultura bacteriológica negativa e 108 (85,1%) apresentaram cultura positiva para Staphylococcus spp., isolando-se 116 amostras. Dessas 116 amostras, 66 (56,9%) foram identificadas como S. aureus e 50 (43,1%) como Estafilococos coagulase-negativa (ECN). O gene de resistência a meticilina foi detectado em 26 (21%) amostras, sendo sete (26,9%) em S. aureus e 19 (73,1%) em ECN. A resistência fenotípica para os discos de cefoxitina e oxacilina foi detectada em seis (85,7%) das amostras de S. aureus positivas para o gene mecA e, com relação aos ECN, 10 (52,6%) mostraram-se resistentes à oxacilina e somente cinco (26,3%) amostras mostraram-se resistentes para o disco de cefoxitina. Das 7 amostras de S. aureus positivas para o gene mecA 1 (14,2%) foi do tipo Ia, 3 (42,9%) do tipo II e 3 (42,9%) do tipo IV. Para os ECN foram encontrados 2 (10,5%) do tipo I e II cada, 3 (15,8%) do tipo III, 5 (26,4%) do tipo IV e 7 (36,8%) não foram tipáveis. O gene da PVL foi detectado em 15,1% das amostras de S. aureus. Os fatores de risco encontrados... / The emergency of methicillin resistant Staphylococcus aureus strains in the community (CA-MRSA), lead to the search of new options of treatment and the virulence factors regarded to them. Individuals without the traditional risk factors for acquisition of MRSA were severely affected CA-MRSA strains, usually more virulent than health-care associated strains (HA-MRSA). The aim of this work was determinate the Staphylococcus spp. occurrence and the risk factors for MRSA acquisition as the main cause of skin and soft tissue infections. During the study period 127 patients were attended and diagnosed as acute skin infections, and 19 (14.9%) of the patients had negative bacterial culture and 108 (85.1%) had positive culture for Staphylococcus spp. and from that 116 samples were recovered. From these 116 samples, 66 (56.9%) were S. aureus and 50 (43.1%) were CoNS (coagulase-negative Staphylococcus). The methicillin resistance gene mecA was detected in 26 (21%) from the strains where 7 (26.9%) were S. aureus and 19 (73.1%) were CoNS. The phenotypic resistance for the cefoxitin and oxacillin discs was detected in 6 (85.7%) of S. aureus samples and, regarded to the CoNS samples 10 (52.6%) were resistant to the oxacillin disc and just 5 (26.3%) samples were resistant for the cefoxitin disk. From 7 S. aureus samples mecA positive 1 (14.2%) was type Ia, 3 (42.9%) type II and 3 (42.9%) type IV. For the CoNS isolated, 2 (10.5%) were tipe I and II for each one, 3 (15.8%) type III, 5 (26.4%) type IV and 7 (36.8%) were not able to type. The PVL gene was detected in 10 (15.1%) on S. aureus samples. The risk factors attributed to the MRSA acquisition on this study were the previous ciprofloxacin intake [OR: 8.75 (1.59 – 48.29) p= 0.01] and work in the health care settings [OR: 17.5 (1.22 – 250.36) p= 0.04]

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:35:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:04:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Dissertação (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Submitted by KATHERYNE BENINI MARTINS DUARTE null (katheryne_bm@yahoo.com.br) on 2018-01-30T18:14:24Z No. of bitstreams: 1 Tese Sataphylococcus saprophyticcus.pdf: 2788011 bytes, checksum: 35ba8c5339115af4c28fd57ce170e2a7 (MD5) / Approved for entry into archive by ROSANGELA APARECIDA LOBO null (rosangelalobo@btu.unesp.br) on 2018-01-31T16:51:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 duarte_kbm_dr_bot.pdf: 2788011 bytes, checksum: 35ba8c5339115af4c28fd57ce170e2a7 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-01-31T16:51:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 duarte_kbm_dr_bot.pdf: 2788011 bytes, checksum: 35ba8c5339115af4c28fd57ce170e2a7 (MD5) Previous issue date: 2017-02-14 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / As infecções do trato urinário (ITU) estão entre as doenças infecciosas mais comuns na prática clínica, e Staphylococcus saprophyticus se destaca como o segundo agente etiológico mais isolado nessas infecções. Esse estudo objetiva caracterizar o perfil clonal, os fatores de virulência e o perfil de resistência aos antimicrobianos em isolados planctônicos e em biofilme de S. saprophyticus isolado de amostras de urina de pacientes com infecção do trato urinário, além de comparar a identificação de espécies de ECN obtida no Vitek 2 e no Maldi-TOF MS com a identificação genotípica. Foram utilizadas no estudo amostras de S. saprophyticus isoladas da urina de diferentes pacientes. As amostras utilizadas no estudo foram obtidas em estudo prospectivo conforme isolamento no Laboratório de Microbiologia do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu (HC-FMB) nos anos de 2013 e 2014, e comparadas com um banco de amostras previamente coletadas em 2008. As amostras foram coletadas de paciente procedentes de enfermarias, ambulatórios, pronto-socorro e unidades básicas de saúde de Botucatu e região. Foram estudadas 217 amostras de ECN de pacientes com ITU. A concordância do sistema automatizado Vitek 2 com o ITSPCR foi de 84,8%, com sensibilidade e especificidade de 98% e 100%, respectivamente. Maldi-TOF MS identificou corretamente todas as amostras de ECN. Os resultados obtidos através da análise de PFGE permitiram identificar 41 perfis distintos, entre os quais foram encontrados 11 clones entre as 169 amostras de S. saprophyticus. Várias amostras altamente relacionadas foram encontradas entre os isolados nos anos de 2008, 2013 e 2014. Além disso, sete clones estiveram dispersos em diferentes cidades. Das 169 amostras, 166 (98,2%) foram resistentes a oxacilina, 30 (17,7%) amostras foram resistentes a trimetoprim/sulfametoxazol, duas amostras (1,2%) apresentaram resistência intermediária a norfloxacina e todas as amostras foram sensíveis a 9 vancomicina e ciprofloxacina. O gene mecA foi encontrado em cinco amostras de S. saprophyticus, e quatro dessas amostras tiveram o SCCmec identificado e classificado como SCCmec tipo IV. Os genes uafA e aas que codificam proteínas de adesão foram encontrados em todas as amostras, enquanto o gene UafB foi encontrado em 1,2% e o gene sdrI em 8,9% das amostras. Quanto aos genes do operon icaADBC, em 59 amostras (34,9%) foi encontrado o operon ica completo e a produção de biofilme em 119 (70,4%) isolados. A produção de EEs não ocorreu em nenhuma das 113 amostras de S. saprophyticus portadoras de genes para enterotoxinas. Os isolados em sua forma planctônica foram sensíveis à maioria dos agentes antimicrobianos. Já as amostras em biofilme apresentaram considerável aumento da CIM quando comparadas com as planctônicas, com algumas amostras passando da categoria de sensíveis na condição de planctônicas para resistentes quando em biofilme.

Orientador: Ana Claudia Pavarina / Banca: Ana Lúcia Machado / Banca: Francisco de Assis Nollo Junior / Banca: Helena de Freitas Oliveira Paranhos / Banca: Soraya Coelho Leal / Resumo: Esta investigação teve os seguintes objetivos: 1. avaliar in vitro o efeito da Terapia Fotodinâmica (PDT) utilizando diferentes concentrações de curcumina e doses de luz LED na inativação de suspensões planctônicas de S. aureus resistente (MRSA) e susceptível à meticilina (MSSA) e a citotoxicidade dos parâmetros antimicrobianos dessa terapia em cultura celular de fibroblastos; 2. o efeito fotodinâmico da cloro-alumínio ftalocianina (ClAlFt) veiculada em nano-emulsão catiônica e aniônica e comparar com ClAlFt diluída em solvente orgânico na inativação da C. albicans quando em suspensão planctônica e organizados em biofilmes; 3. o efeito antimicrobiano da terapia fotodinâmica utilizando a cloroalumínio ftalocianina em sistema de nanoemulsão em culturas planctônicas e biofilmes de bactérias gram-positivas (MSSA e MRSA). No primeiro estudo, suspensões de MSSA e MRSA foram tratadas com diferentes concentrações de curcumina (entre 0,1 a 20,0 μM) e expostas a diferentes fluências de LED azul (18; 25 e 37,5 J/cm2). Em seguida, diluições seriadas foram obtidas e alíquotas de 25 μl de cada diluição foram plaqueadas em meio de cultura Mannitol Salt Agar. Após o período de incubação de 48 horas a 37°C, as unidades formadoras de colônias foram determinadas (UFC/mL). Para as células L929, essas foram incubadas por 20 minutos com curcumina e irradiadas em seguida com LED (37,5 J/cm2). A viabilidade celular após a PDT foi avaliada utilizando o teste de MTT e as alterações morfológicas foram avaliadas pela microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os resultados foram submetidos à análise descritiva, Análise de Variância (ANOVA) e post hoc de Tukey (α= 5%). As concentrações de 5, 10 e 20 μM resultaram em completa inativação do MSSA quando associadas a qualquer fluência de energia... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this investigation was to evaluate: 1. the Photodynamic Therapy (PDT) mediated by curcumin for in vitro inactivation of methicillin-resistant S. aureus (MRSA) and susceptible S. aureus (MSSA) and its citotoxic effects against L929 fibroblasts; 2. the photodynamic potential of aluminum-chloride-phthalocyanine (ClAlPc) entrapped in cationic and anionic nanoemulsions (NE) to inactivate C. albicans planktonic and biofilm cultures compared with free ClAlPc; 3. the photodynamic effect of ClAlPc encapsulated in NE on methicillin susceptible and resistant S. aureus suspensions and biofilms. In the first study, suspensions of MSSA and MRSA were treated with different concentrations of curcumin and exposed to LED. Serial dilutions were obtained from each sample, and colony counts were quantified. For fibroblasts, the cell viability subsequent to the curcumin-mediated photodynamic therapy was evaluated using the MTT assay and morphological changes were assessed by SEM analysis. Curcumin concentrations ranging from 5.0 to 20.0 μM in combination with any tested LED fluences resulted in photokilling of MSSA. However, only the 20.0 μM concentration in combination with highest fluence resulted in photokilling of MRSA. This combination also promoted an 80% reduction in fibroblast cell metabolism and morphological changes were present, indicating that cell membrane was the main target of this phototherapy. In the second study, fungal suspensions were treated with different types of delivery systems containing ClAlPc. After 30 minutes, the drug was washed-out and samples were illuminated with LED source (660 ± 3 nm). Negative control samples were not exposed to ClAlPc or light. For planktonic suspensions, colonies were counted (CFU/ml) and cell metabolism was evaluated by XTT assay. (Kruskal-Wallis and... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Valdecir Farias Ximenes / Coorientador: Luiz Marcos da Fonseca / Banca: Maria Luiza Zeraik / Banca: Iêda Maria Marinez Paino / Banca: Daniel Rinaldo / Banca: Iracilda Zeppone Carlos / Resumo: Inúmeras patologias têm a sua gênese e/ou progressão relacionadas à produção desregulada de intermediários oxidantes. O complexo multienzimático NADPH oxidase é um dos componentes de maior relevância neste contexto, pois é uma das principais fontes de ânion superóxido no organismo animal. Sendo expresso em inúmeros tecidos, incluindo leucócitos e células do tecido endotelial, o desenvolvimento de inibidores eficientes deste complexo enzimático poderá significar uma nova terapêutica para o tratamento de doenças inflamatórias crônicas. Com objetivo de explorar a relação entre a estrutura molecular, as propriedades químicas e atividades biológicas, utilizamos o éster fenetílico do ácido cafeico (CAPE) como inibidor do complexo enzimático NADPH oxidase e comparamos sua eficácia com o seu precursor ácido cafeico e os derivados, éster fenetílico do ácido cinâmico e o ácido clorogênico, correlacionando-os a respeito a sua hidrofobicidade, propriedades redox e inibição do complexo NADPH oxidase em leucócitos ativados. A hipótese seria de que um aumento da hidrofobicidade provocado pela esterificação do ácido cafeico poderia facilitar o seu acesso à membrana celular e assim alterar seu efeito como possível inibidor de NADPH Oxidase. Os resultados, em ensaios in vitro, mostraram que as alterações na hidrofobicidade não provocaram alterações significativas no potencial de oxidação e potencial antioxidantes dos compostos testados. Quando testados em leucócitos ativados (modelos ex vivo),... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Several diseases have their genesis and / or progression related to unregulated production of oxidants intermediates. The multienzymatic complex NADPH oxidase is one of the most important components in this context because it is a major source of superoxide anion in animal organisms. It is expressed in numerous tissues, including leukocytes and endothelial tissue cells. Developing effective inhibitors of this enzyme complex may indicate a new therapy for the treatment of chronic inflammatory diseases. Several studies have described numerous anti-inflammatory properties attributed to caffeic acid phenethyl ester (CAPE), an active component found in propolis. In order to explore the relationship between the molecular structure, chemical properties and biological activities, we used CAPE to inhibit the enzyme complex NADPH oxidase and compare its efficacy with the its precursor caffeic acid and derivatives, phenethyl ester of cinnamic acid and chlorogenic acid, correlating them with regard to hydrophobicity, redox properties and inhibition of NADPH oxidase complex on activated leukocytes. The hypothesis was that an increase of hydrophobicity caused by the esterification of caffeic acid could facilitate access to cell membranes and thereby alter its effect as a possible inhibitor of NADPH oxidase. The results (in vitro), showed that the changes in hydrophobicity did not provoke significant changes in the oxidation potential and antiradical potency of the tested compounds. But whe... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Maria Stella Gonçalves Raddi / Banca: Mariza Landgraf / Banca: Karina Ferrazzoli Devienne / Resumo: Esse estudo foi realizado com o objetivo de avaliar o efeito da concentração subinibitória de quercetina sobre alguns fatores relacionados à virulência de Staphylococcus aureus (ATCC 25923). A atividade antibacteriana foi determinada através do método de microdiluição em caldo e a concentração de 40μg/mL de quercetina foi utilizada como sub-inibitória. O sobrenadante de culturas de S. aureus em BHI contendo quercetina diminuiu a atividade hemolítica para hemácias de carneiro mas não alterou a atividade de citolisinas extracelulares para células de linhagem contínua (células McCoy B ATCC 1696) quando comparado com o sobrenadante da cultura na ausência do flavonol. O efeito da quercetina na fagocitose do S. aureus por polimorfonucleares neutrófilos (PMN) foi determinado através de técnica quimiluminescente. O burst oxidativo de PMN foi estatisticamente significativo para bactérias tratadas em relação às não tratadas, demonstrando que S. aureus crescidos na presença de quercetina tornam-se menos susceptíveis à fagocitose. A inibição da expressão de fatores relacionados à adesão bacteriana foi evidenciada através dos experimentos de fagocitose/adesão em microscopia óptica (1.000x). Mesmo que a quercetina, abaixo da concentração inibitória, tenha pouco efeito sobre a viabilidade de S. aureus, o conhecimento de que esse flavonol é capaz de alterar a adesão de estafilicocos à superfície celular parece ser atrativo para a sua utilização como profilático em processos infecciosos, visto que a adesão é o primeiro passo na patogênese da infecção bacteriana. Entretanto, deve-se considerar sua interferência com a atividade de células fagocíticas, uma importante função do sistema imune do hospedeiro. / Abstract: The aim of this study was to evaluate the effects of quercetin at sub-inhibitory concentration on some Staphylococcus aureus (ATCC 25923) factors related to the virulence. The antibacterial activity of quercetin was evaluated by broth microdilution method and the concentration of 40 μg/mL was used as sub- inhibitory. S. aureus BHI culture supernatant containing quercetin reduced the hemolytic activity for sheep erythrocytes but did not exhibit a detectable change in cytolysin extracellular activity on continuous cell lines (McCoy B cells ATCC 1696) when compared with quercetin-free medium. The effect of quercetin-grown staphylococci phagocytosis by polymorphonuclear neutrophils (PMN) was compared with the effect on non-treated bacteria by chemiluminescence assay. The level of oxidative burst of PMN was statistically different in untreated versus quercetin-treated bacteria showing that druggrown cells became less susceptible to phagocytic uptake. The inhibition of expression of factors related bacterial adhesion was established though adesion/phagocytosis experiments by optical microscopy (1.000x). Even if quercetin at low level has little effect on S. aureus viability, the knowledge that this flavonol is able to affect the properties of staphylococci adherence to cell surfaces may be an attractive advance for its applications as prophylactic in infectious process, considering that bacterial adherence is the initial event in the pathogenesis of bacterial infection. Conversely, it also interferes with the activities of phagocytic cells, an important function of host immune system. / Mestre