Adesivos protéticos inibem a inflamação da mucosa subjacente e podem receber, em sua composição, componentes antimicrobianos, reduzindo o risco do desenvolvimento da estomatite protética (EP), doença relacionada principalmente à colonização das próteses pelo fungo Candida albicans. Tem sido relatada a atividade antifúngica de fitoterápicos, podendo auxiliar no tratamento da EP. Objetivo: Realizar o estudo fitoquímico de substâncias potencialmente ativas de Equisetum giganteum (Eg) (Cavalinha) e de Punica granatum (Pg) (Romã) e avaliar in vitro se a incorporação de extratos hidroalcóolicos de Eg e de Pg a um adesivo protético (COREGA®) influencia no desenvolvimento do biofilme de C. albicans (SC5314) sobre a superfície de resina acrílica termopolimerizável (Lucitone 550). Material e Métodos: Após identificação dos compostos dos fitoterápicos por HPLC-PAD, foi selecionada a fração e a concentração de interesse por meio da concentração inibitória mínima (CIM). Os biofilmes foram induzidos durante 3, 6 ou 12 horas sobre a superfície de corpos de prova de resina acrílica, previamente submetidos ao tratamento com o adesivo associado aos fitoterápicos (AD/Eg ou AD/Pg). Como controles, corpos de prova foram tratados apenas com adesivo (AD), com a associação adesivo/nistatina (AD/Nt) ou não recebam tratamento (PBS). A atividade antimicrobiana foi avaliada por meio da quantificação do biofilme pela contagem de unidades formadoras de colônias por mililitro (UFC/mL) e pelo percentual de redução da atividade metabólica das células fúngicas pelo ensaio colorimétrico de redução de sais de tetrazólio XTT (2,3 Bis (2-Methoxy-4-Nitro-5-Sulfophenil) 5 - [(Phenyl-Amino) Carbonyl] 2H - Tetrazolium Hidroxide). Os resultados foram expressos como média ± desvio padrão, e submetidos ao teste de Kruskal-Wallis para UFC/mL e Mann-Whitney ou análise de variância ANOVA-2 fatores seguido do teste post-hoc de Tukey HSD e teste de Dunnett para XTT. As médias dos valores obtidos pelas duas metodologias (UFC/mL e XTT) foram submetidas ao teste de correlação de Spearman (α= 0,05). Resultados: Foi possível identificar, pela análise em HPLCPAD, compostos derivados de kaempferol e quercetina em Eg e derivados de elagitaninos, como punicalina, em Pg. A associação de ambos os fitoterápicos ao adesivo (AD/Eg ou AD/Pg) reduziram significativamente o biofilme sobre a superfície da resina, em comparação ao grupo AD. Considerando os corpos de prova tratados, o período inicial (3 horas) apresentou os melhores resultados em relação à inibição do crescimento fúngico, comparando-se com os outros períodos. Conclusão: Possivelmente, o potencial antimicrobiano de Eg e de Pg está associado a compostos como flavonoides e taninos, respectivamente. Por fim, é possível que a associação destes fitoterápicos ao adesivo protético COREGA® poderá constituir uma alternativa temporária, viável e inovadora para auxiliar no tratamento e/ou prevenção da EP, desde que a manutenção das propriedades inerentes deste adesivo seja comprovada após estudos posteriores. / Denture adhesives inhibit inflammation of the underlying mucosal tissue and can receive, in their composition, antimicrobial components, reducing the risk of development of denture stomatitis (DS), a disease related mainly to the colonization of the prosthesis by the fungus Candida albicans. It has been reported the antifungal activity of herbal medicines, which may help in the treatment of DS. Objective: To realize the phytochemical study of potentially active substances of Equisetum giganteum (Eg) (Cola de caballo) and Punica granatum Linne (Pg) (Pomegranate) and evaluate in vitro the incorporation of hydroalcoholic extracts of Eg and Pg to a denture adhesive (COREGA®) influences the development C. albicans biofilm (SC5314) on the surface a polymerized acrylic resin (Lucitone 550). Material and Methods: After identification of compounds of the herbal by HPLC-PAD, the fraction and the concentration were selected by minimum inhibitory concentration (MIC). Biofilms were induced for 3, 6 or 12 hours on the surface of acrylic resin specimens, previously subjected to treatment with the adhesive associated with herbal (AD/Eg or AD/Pg). As controls, samples were treated with adhesive (AD), adhesive/nystatin association (AD/Nt) or not received treatment (PBS). The antimicrobial activity was evaluated by quantifying the biofilm using counting colony forming units per milliliter (CFU/mL) and by reduction percentage of fungal metabolic activity using colorimetric assay XTT (2,3 Bis (2-Methoxy-4-Nitro-5-Sulfophenil) 5 - [(Phenyl-Amino) Carbonyl] 2H - Tetrazolium Hidroxide). The results were expressed as mean ± standard deviation, and subjected to Kruscal-Wallis test for CFU/mL and Mann-Whitney or 2-way analysis of variance (ANOVA) followed by Tukey\'s HSD post-hoc test and Dunnett test for XTT. The mean values obtained by the two methods (CFU/mL and XTT) were submitted to Spearman correlation test (α=0,05). Results: It was possible to identify, by the analysis on HPLC-PAD, compounds derived from kaempferol and quercetin in Eg and ellagitannins derivatives, as punicalin in Pg. The combination of both herbal medicines to the adhesive (AD/Eg or AD/Pg) significantly reduced the biofilm on the surface of the resin, compared to the AD group. Accordingly, there was an increase in the percentage of reduction of the metabolic activity of biofilm at all periods in the presence of herbal medicines. Considering the treated specimens, the initial period (3 hours) showed the best results in relation to inhibition of fungal growth compared with other periods. Conclusion: Possibly, the antimicrobial potential of E. giganteum and P. granatum is associated with compounds such as flavonoids and tannins, respectively. Finally, we suggest that the combination of these herbal medicines to COREGA® prosthetic adhesive may be a temporary, viable and innovative alternative to assist in the treatment and/or prevention of DS, since the maintenance of the inherent properties of this adhesive is proven after further studies.

A resina acrílica para base de próteses removíveis é capaz de acumular biofilme e assim favorecer o aparecimento de diversos problemas na cavidade bucal dos usuários de próteses. A imobilização de um agente antisséptico na matriz polimérica tem potencial preventivo frente a esse acúmulo, mas necessita de maior investigação. O objetivo deste estudo foi avaliar as propriedades biológicas do brometo de metacriloiloxiundecilpiridínio (MUPB), um composto antisséptico capaz de copolimerizar-se com as resinas acrílicas. Foram determinadas as concentrações inibitória e fungicida/bactericida mínimas (CIM, CFM/CBM) do MUPB frente às espécies Candida albicans, Candida dubliniensis, Candida glabrata, Lactobacillus casei, Staphylococcus aureus e Streptococcus mutans, em comparação ao cloreto de cetilpiridínio (CCP). A seguir, investigou-se a citotoxicidade do MUPB em fibroblastos, comparando-o com o metil metacrilato (MMA). A avaliação da atividade antimicrobiana de diferentes concentrações do MUPB em massa (0, 0,3% e 0,6%) incorporado em uma resina acrílica termopolimerizável para base de próteses foi realizada por meio de testes de difusão em disco e quantificação de unidades formadoras de colônia (UFC) aderidas à resina após contato com suspensões de cada micro-organismo. A adesão microbiana também foi avaliada por microscopia eletrônica de varredura. Comparações entre o MUPB e as demais substâncias, bem como entre as concentrações incorporadas na resina, foram realizadas com α=0,05. O MUPB apresentou CIM inferior ao CCP para C. dublinienses e S. mutans (P=0,046 e 0,043, respectivamente). Para as demais espécies, as diferenças não foram significantes. Para a CFM/CBM, só foi encontrada diferença significante para C. albicans (P=0,046). O MUPB não polimerizado mostrou-se em torno de 20 vezes mais citotóxico que o MMA. Independente da concentração incorporada e da espécie, não houve formação de halo de inibição em torno dos espécimes. A incorporação do MUPB só influenciou na adesão de C. albicans (P=0,003), com menores contagens de UFC para o grupo com 0,6%. Conclui-se que o MUPB não polimerizado tem capacidade antimicrobiana próxima à do CCP, e alta citotoxicidade, se comparado ao MMA. A atividade antimicrobiana, após incorporação em uma resina acrílica para base de prótese, não depende de sua eluição, porém apresentou-se restrita à C. albicans. / Acrylic resins for removable denture base are capable of accumulating biofilm and thus favor the appearance of various problems in the edentulous oral cavity. An antiseptic agent immobilized within the polymeric matrix has a preventive potential against this accumulation, but requires further investigation. The aim of this study was to evaluate the biological properties of methacryloyloxyundecylpyridinium bromide (MUPB), an antiseptic monomer capable of copolymerizing with acrylic resins. The minimum inhibitory and fungicidal/bactericidal concentrations (MIC, MFC/MBC) of MUPB were determined against the species Candida albicans, Candida dubliniensis, Candida glabrata, Lactobacillus casei, Staphylococcus aureus and Streptococcus mutans, in comparison with cetylpyridinium chloride (CCP). After this, the cytotoxicity of MUPB was investigated in fibroblasts, compared with methyl methacrylate (MMA). The antimicrobial activity of different concentrations of MUPB (0, 0.3% and 0.6% w/w) incorporated into a heat polymerized denture base acrylic resin was evaluated by means of disk diffusion tests, and the CFUs adhered to the resin after contact with suspensions of each microorganism were quantified. Microbial adhesion was also evaluated by scanning electron microscopy. Comparisons were made between MUPB and the other substances, as well as between the concentrations incorporated into the resin (α=.05). MUPB presented a lower MIC than CCP for C. dubliniensis and S. mutans (P=.046 and .043, respectively). For the other species, the differences were not significant. For MFC or MBC, significant difference was found only for C. albicans (P=.046). Non polymerized MUPB was shown to be 20 times more cytotoxic than MMA. Irrespective of the concentration incorporated and the species, there was no growth of inhibition halo around the specimens. The incorporation of MUPB only influenced the adhesion of C. albicans (P=.003), with lower CFU counts for the group with the concentration of 0.6%. It was concluded that non polymerized MUPB has an antimicrobial capacity close to that of CCP, and high cytotoxicity when compared with MMA. The antimicrobial activity after incorporation within a denture base acrylic resin did not depend on its elution, but was shown to be restricted to C. albicans.

O objetivo deste estudo preliminar foi obter padrões metodológicos para viabilizar a utilização de um dispositivo acrílico intra-oral adaptável à mucosa palatina de ratos e passível de reembasamento com material resiliente temporário (Trusoft) modificado com antimicrobianos em suas mínimas concentrações inibitórias (MCIs) para biofilme de Candida albicans. Para delinear essa adequação, foram determinados parâmetros em relação à dieta e alojamento dos animais enquanto usuários desses dispositivos. A amostra total dos ratos (n=115) foi dividida em seis grupos: Controle Negativo (CN): sem dispositivo acrílico intra-oral; Controle Geral (CG): dispositivo acrílico sem reembasamento; Controle Positivo (CP): dispositivo reembasado com Trusoft sem fármaco; Diacetato de Clorexidina (CLO): dispositivo reembasado com Trusoft contendo clorexidina (0,064 g/mL); Cetoconazol (CET): dispositivo reembasado com Trusoft contendo cetoconazol (0,128 g/mL) e Nistatina (NIS): dispositivo reembasado com Trusoft contendo nistatina (0,032 g/mL). Os animais foram eutanasiados após 7 ou 14 dias da instalação dos dispositivos intraorais. As adaptações para a obtenção dos dispositivos incluíram a técnica de moldagem, método de reembasamento e formas de retenção à mucosa palatina dos animais. Para proporcionar a análise histopatológica descritiva padronizada, foram estabelecidos critérios em relação à obtenção das amostras histológicas, à seleção da região de interesse (RI) da análise e aos determinantes utilizados na descrição. Foi observado que a dieta pastosa e o alojamento em gaiolas com piso aramado sobre base de maravalha e papel craft possibilitaram melhores condições de sobrevivência aos animais. Os dispositivos intra-orais confeccionados individualmente e retidos via amarrilhos com fios ortodônticos nos incisivos e molares se mantiveram satisfatoriamente em posição durante todo o experimento para a maioria dos animais (72,6%), sobretudo no período inicial de 7 dias. O procedimento para o reembasamento dos dispositivos foi considerado apropriado em ambos os períodos testados. Houve perda de alguns animais por desnutrição (9,5%) ou durante a anestesia (4,1%). As amostras histológicas obtidas da mucosa palatina (tecido mole) foram descartadas por serem adequadas para a determinação da RI, sendo utilizadas apenas aquelas provenientes de tecidos mole e duro (n=12). A RI mais satisfatória para análise histopatológica correspondeu à área entre os primeiros molares, de um feixe neurovascular ao outro. A simples comparação visual das fotomicrografias obtidas na análise histopatológica descritiva sugeriu a ausência de infiltrado inflamatório em todos os grupos testados para ambos os períodos de avaliação. Após 7 dias, a espessura da camada córnea, estratificação das camadas do epitélio e disposição das fibras colágenas, dos vasos e das células da lâmina própria dos grupos de estudo se apresentaram similares ao observado para o grupo CN, havendo sinais de reabsorção óssea palatina apenas no grupo CG. Aos 14 dias, foi observado aumento da espessura de ortoqueratina e compressão das células epiteliais e do tecido conjuntivo da lâmina própria de todos os grupos em relação ao CN. Neste período, a reabsorção óssea palatina foi presente em todos os grupos, exceto CN e CP, com maior intensidade no grupo CG. Foi possível sugerir que os dispositivos acrílicos intra-orais podem ser considerados funcionais e viáveis para os testes de materiais para base de próteses e avaliação de tratamento para estomatite protética em ratos, sobretudo em períodos de até 7 dias. / The purpose of this study was to produce preliminary methodological standards to allow the use of an intraoral acrylic device adjusted to the palatal mucosa of rats and capable of relining with temporary resilient material (Trusoft) modified with antimicrobial agents in the minimum inhibitory concentrations (MICs) for Candida albicans biofilm. To design this adjustment, parameters were determined in relation to the diet and housing of animals as users of these devices. The total sample (n=115) was divided into six groups: Negative control (NC): without an acrylic intraoral device; Overall Control (OC): device without relining; Positive Control (PC): device relined with Trusoft without the addition of drugs; Chlorhexidine diacetate (CHL): device relined with Trusoft containing chlorhexidine diacetate (0.064 g/mL); Ketoconazole (KET): device relined with Trusoft containing ketoconazole (0.128g/mL); and Nystatin (NYT): acrylic device relined with Trusoft containing nystatin (0.032 g/mL). The animals were sacrificed after 7 or 14 days from the installation ofthe intra-oral devices. The adaptations for obtaining the devices included the impression technique, the reline method and the means of retaining in the palatal mucosa of animals. To obtain the standard descriptive histopathological analysis, criteria had been established in relation to obtaining the histological samples,selecting the region of interest (RI) of analysis and the criteria utilized in the description. It was observed that a paste diet and housing in cages with a wired fence floor with an additional base of wood shavings and craft paper enabled the best possible survival conditions for the animals. The individually made intra-oral devices retained with stainless steel wires at the incisors and molars remained satisfactorily in position throughout the experiment for most animals (72.6%), mainly in the initial period of 7 days. The procedure for the relining of the devices was deemed appropriate for both test periods. Some animals were lost from malnutrition (9.5%) or failure to recover from the anaesthetic (4.1%). The obtained histological samples of the palatine mucosa (soft tissue) were discarded as inappropriate for the determination of the RI, having utilized only those derived from hard and soft tissues (n = 12). The RI most satisfactory for the histopathological analysis corresponded to the area between the first molars from a palatal neurovascular bundle. A simple visual comparison of the photomicrographs obtained from the descriptive histopathological analysis suggested the absence of an inflammatory infiltrate in all the groups tested for both periods. After 7 days, the thickness of the keratin, the layers of the stratified epithelium and arrangement of the collagen fibers, cells and vessels of the lamina from the mucosa of the study groups presented similar findings to those observed for the NC group, having signals of palatine bone resorption only in the OC group. At 14 days, there was an increasing thickness of the keratin and compression of the epithelial cells and connective tissue of the lamina from the mucosa of all groups in relation to the NC group. In this period, the palatal bone resorption was present in all groups except the NC and PC groups, with a greater intensity in the OC group. It was possible to suggest that the intraoral acrylic devices may be considered as functional and viable for the testing of denture base materials and the evaluation of treatment for denture stomatitis in rats, especially in periods of up to 7 days.

A resina acrílica para base de próteses removíveis é capaz de acumular biofilme e assim favorecer o aparecimento de diversos problemas na cavidade bucal dos usuários de próteses. A imobilização de um agente antisséptico na matriz polimérica tem potencial preventivo frente a esse acúmulo, mas necessita de maior investigação. O objetivo deste estudo foi avaliar as propriedades biológicas do brometo de metacriloiloxiundecilpiridínio (MUPB), um composto antisséptico capaz de copolimerizar-se com as resinas acrílicas. Foram determinadas as concentrações inibitória e fungicida/bactericida mínimas (CIM, CFM/CBM) do MUPB frente às espécies Candida albicans, Candida dubliniensis, Candida glabrata, Lactobacillus casei, Staphylococcus aureus e Streptococcus mutans, em comparação ao cloreto de cetilpiridínio (CCP). A seguir, investigou-se a citotoxicidade do MUPB em fibroblastos, comparando-o com o metil metacrilato (MMA). A avaliação da atividade antimicrobiana de diferentes concentrações do MUPB em massa (0, 0,3% e 0,6%) incorporado em uma resina acrílica termopolimerizável para base de próteses foi realizada por meio de testes de difusão em disco e quantificação de unidades formadoras de colônia (UFC) aderidas à resina após contato com suspensões de cada micro-organismo. A adesão microbiana também foi avaliada por microscopia eletrônica de varredura. Comparações entre o MUPB e as demais substâncias, bem como entre as concentrações incorporadas na resina, foram realizadas com α=0,05. O MUPB apresentou CIM inferior ao CCP para C. dublinienses e S. mutans (P=0,046 e 0,043, respectivamente). Para as demais espécies, as diferenças não foram significantes. Para a CFM/CBM, só foi encontrada diferença significante para C. albicans (P=0,046). O MUPB não polimerizado mostrou-se em torno de 20 vezes mais citotóxico que o MMA. Independente da concentração incorporada e da espécie, não houve formação de halo de inibição em torno dos espécimes. A incorporação do MUPB só influenciou na adesão de C. albicans (P=0,003), com menores contagens de UFC para o grupo com 0,6%. Conclui-se que o MUPB não polimerizado tem capacidade antimicrobiana próxima à do CCP, e alta citotoxicidade, se comparado ao MMA. A atividade antimicrobiana, após incorporação em uma resina acrílica para base de prótese, não depende de sua eluição, porém apresentou-se restrita à C. albicans. / Acrylic resins for removable denture base are capable of accumulating biofilm and thus favor the appearance of various problems in the edentulous oral cavity. An antiseptic agent immobilized within the polymeric matrix has a preventive potential against this accumulation, but requires further investigation. The aim of this study was to evaluate the biological properties of methacryloyloxyundecylpyridinium bromide (MUPB), an antiseptic monomer capable of copolymerizing with acrylic resins. The minimum inhibitory and fungicidal/bactericidal concentrations (MIC, MFC/MBC) of MUPB were determined against the species Candida albicans, Candida dubliniensis, Candida glabrata, Lactobacillus casei, Staphylococcus aureus and Streptococcus mutans, in comparison with cetylpyridinium chloride (CCP). After this, the cytotoxicity of MUPB was investigated in fibroblasts, compared with methyl methacrylate (MMA). The antimicrobial activity of different concentrations of MUPB (0, 0.3% and 0.6% w/w) incorporated into a heat polymerized denture base acrylic resin was evaluated by means of disk diffusion tests, and the CFUs adhered to the resin after contact with suspensions of each microorganism were quantified. Microbial adhesion was also evaluated by scanning electron microscopy. Comparisons were made between MUPB and the other substances, as well as between the concentrations incorporated into the resin (α=.05). MUPB presented a lower MIC than CCP for C. dubliniensis and S. mutans (P=.046 and .043, respectively). For the other species, the differences were not significant. For MFC or MBC, significant difference was found only for C. albicans (P=.046). Non polymerized MUPB was shown to be 20 times more cytotoxic than MMA. Irrespective of the concentration incorporated and the species, there was no growth of inhibition halo around the specimens. The incorporation of MUPB only influenced the adhesion of C. albicans (P=.003), with lower CFU counts for the group with the concentration of 0.6%. It was concluded that non polymerized MUPB has an antimicrobial capacity close to that of CCP, and high cytotoxicity when compared with MMA. The antimicrobial activity after incorporation within a denture base acrylic resin did not depend on its elution, but was shown to be restricted to C. albicans.

A resina acrílica para base de próteses removíveis é capaz de aderir Candida spp. sobre sua superfície, possibilitando o aparecimento das estomatites protéticas. Um fator importante para essa aderência é a hidrofobicidade do polímero. Assim, a adição de radicais hidrofílicos à resina acrílica tem potencial de torná-la menos suscetível à formação de biofilmes, e merece ser investigado. O objetivo deste projeto foi avaliar os efeitos da copolimerização do ácido metacrílico sobre aderência microbiana e propriedades físicas em um material à base de polimetil metacrilato para base de próteses removíveis. Para os ensaios com a resina acrílica, espécimes de diferentes formatos foram divididos em grupos, conforme a concentração do ácido metacrílico, em volume, na porção líquida da resina (A: 0%; B: 10%; C: 20%, D:50%). A aderência de Candida albicans foi avaliada por meio da contagem de unidades formadoras de colônia (UFC) aderidas sobre os espécimes mantidos em caldo de cultura. Também foi estudadas a dureza Vickers, a resistência flexural, a rugosidade e a estabilidade de cor. Os grupos foram descritos por média ± desvios padrão e comparados, dentro de cada variável, por meio de ANOVA, com α = 0,05. No caso da aderência de C. albicans, transformação em log10 foi realizada antes da análise. Como resultado desse estudo, não foi possível observar diferenças na aderência de C. albicans com a adição do ácido metacrílico à resina acrílica (A: 5,0 ± 0.4, B: 5,0 ± 0.4, C: 5.2 ± 0.6 e D: 5.2 ± 0.3 log10(UFC)). Redução significante foi encontrada para os valores de dureza, onde os valores (em VHN) foram A: 19,0 ± 1,4A, B: 19,6 ± 1,3A, C: 19,6 ± 0,9A e D: 14,2 ± 0,6B. Não houve diferença significante para o teste de resistência flexural (A: 96,32 ± 8,25, B: 97,65 ± 6,11, C: 102,43 ± 8,61 e D: 106,34 ± 13,69 MPa); no entanto foi observada redução na rugosidade superficial com o aumento da concentração do ácido (A: 0,26 ± 0,05A, B: 0,17 ± 0,01B, C: 0,18 ± 0,03B e D: 0,13 ± 0,03C µm). Conclui-se que a copolimerização do ácido metacrílico em resina para base protética proporcionou mudanças nas propriedades físicas do material, com melhora na rugosidade, porém menor dureza. A aderência de C. albicans não sofreu interferência; futuros testes com outras espécies e na presença de proteínas salivares devem ser realizados a fim de determinar se a adição do ácido realmente possui potencial clínico. / Acrylic resins for denture base play an important role as reservoirs of micro-organisms, by increasing the risk of Candida ssp. colonization which is implicated in the pathogenesis of associated stomatitis. An important factor for this adherence is the polymer hydrophobicity. Thus, incorporation of polar radicals in the polymer could increase its hydrophylia, reducing this adherence. The main purpose of the present study was to investigate the antifungal activity of a denture base resin incorporating the methacrylic acid (MA) against Candida albicans by the counting of adherent cells and its effect on hardness, roughness and flexural strength of the material. 32 circular (14x4mm), 40 rectangular (65x10x3.3mm) and 40 square-shaped (10x10x3mm) specimens were divided into four groups, according to the concentration of MA substituted into the monomer component of a heat-polymerized acrylic resin (Lucitone 550), as follows: 0% (Control), 10%, 20% and 50% (v/v). Hardness was assessed by a hardness tester equipped with a Vickers diamond penetrator. A surface roughness tester was used to measure the surface roughness of the specimens, and a flexural strength testing was carried out on a universal testing machine. Variables were analyzed by ANOVA/Tukey\'s test (α=.05). Colonies were counted for each plated specimen and the colony-forming units per milliliter (CFU/mL) were then calculated. CFU/mL values for each concentration were compared by means of ANOVA/Tukey test after logarithmic (log 10) transformation (α=.05). A significant difference was found for hardness values (19.0±1.4A, 19.6±1.3A, 19.6±0.9A, 14.2±0.6B) VHN. Surface roughness values decreased with MA concentration increase (0.26±0.05A, 0.17±0.01AB, 0.18±0.03AB, 0.13±0.03B µm). No significant difference was found for flexural strengh (96.3±8.3A, 97.7±6.1A, 102.4±8.6A, 106.3±13.7A MPa) and among the four groups for the adherence assay (A: 5,0 ± 0.4, B: 5,0 ± 0.4, C: 5.2 ± 0.6 e D: 5.2 ± 0.3 log10 (CFU). For the tested acrylic resin, the addition of MA in the concentration of 50% reduced its hardness. Thus, the presence of MA around this concentration inside the monomer may compromise the tested material structure. Although MA didnt lower the flexural strength, regardless of the concentration, the values for surface roughness reduced as MA concentration increased, suggesting that MA addition may improve the acrylic resin texture, leading to less biofilm accumulation. The adherence of C. albicans was not influenced by the presence of MA. Future tests with other microorganisms and salivary proteins should be carried out to determine if this incorporation has a clinical potencial to be used.

O termo doença inflamatória intestinal engloba duas doenças inflamatórias crônicas, imunologicamente mediadas, envolvendo o trato gastrointestinal: a doença de Crohn e a retocolite ulcerativa. Os sintomas intestinais são predominantes, porém, durante o curso da doença, podem ocorrer manifestações extraintestinais, incluindo o envolvimento da cavidade oral. O envolvimento oral na doença inflamatória intestinal pode se dar por diferentes tipos de lesões, sendo o tipo mais comum a afta. Lesões menos frequentes incluem, entre outras, a pioestomatite vegetante e as lesões granulomatosas da doença de Crohn. Apresentamos dez casos de doentes com manifestações orais de doença inflamatória intestinal, sendo que, em alguns desses casos, essas foram essenciais para o diagnóstico definitivo da doença, além de revisão detalhada da literatura. O envolvimento da cavidade oral pode ser prévio ou simultâneo aos sintomas gastrointestinais. Porém, na maior parte dos casos, a doença inflamatória intestinal precede o início das lesões orais em meses ou anos. Em muitos doentes, a sintomatologia intestinal pode ser mínima ou mesmo ausente, o que justifica exame minucioso do trato gastrointestinal em todos os doentes com lesões orais suspeitas, mesmo na ausência de sintomas evidentes. Geralmente, o curso clínico das lesões orais é paralelo à atividade da doença inflamatória intestinal, por isso as manifestações orais são consideradas bons marcadores cutâneos da doença / Inflammatory bowel disease comprises two chronic, tissue-destructive, clinical entities: Crohns disease and ulcerative colitis, both immunologically based. Bowel symptoms are predominant, but extra-intestinal complications may occur, including involvement of the oral cavity. Oral involvement during Inflammatory bowel disease includes several types of lesions: the most common are aphthae; uncommon lesions include, among others, pyostomatitis vegetans and granulomatous lesions of Crohns disease. Starting with a presentation of ten patients with oral manifestations, which were crucial for the final diagnosis of inflammatory bowel disease, a review on the subject is presented. Oral involvement in inflammatory bowel disease may be previous or simultaneous to the gastrointestinal symptoms. However, in the majority of cases, bowel disease precedes the onset of oral lesions by months or years. In many patients, the intestinal symptoms may be minimal and can go undetected; thus, most authors believe that the bowel must be thoroughly examined in all patients with suspected inflammatory bowel disease even in the absence of specific symptoms. Usually, the clinical course of oral lesions is parallel to the activity of inflammatory bowel disease; therefore, oral manifestations are a good cutaneous marker of inflammatory bowel disease

A estomatite protética (EP), também designada de candidíase atrófica crônica, é a infecção fúngica bucal mais comum em indivíduos portadores de prótese total. Possui etiologia multifatorial, no entanto a presença de Candida spp. no biofilme da prótese é tida como o fator mais importante para o estabelecimento da EP. Este trabalho teve como objetivo avaliar o tratamento da EP por meio do uso da terapia fotodinâmica antimicrobiana (PDT), mediada pelo azul de metileno. Foram realizados estudos pré-clínicos e clínicos. Protótipos simuladores de prótese total foram confeccionados com polímero de metilmetacrilato, para servir de base para o crescimento do biofilme das seguintes espécies do gênero Candida: C. albicans, C. glabrata, C. dubliniensis, C. krusei, C. tropicalis, C. parapsilosis e C. guilliermondii. Como fotossensibilizador foi utilizada a solução de azul de metileno em uma concentração de 450μg/mL. Os protótipos com os biofilmes foram irradiados com um laser de comprimento de onda de 660 nm, potência de 100 mW, por um tempo de 80 segundos. Para o estudo clínico, os indivíduos foram divididos em dois grupos. O primeiro grupo recebeu tratamento convencional, à base do antifúngico Miconazol. O segundo grupo recebeu como tratamento a PDT. Os resultados pré-clínicos mostraram que todas as espécies do gênero Candida foram susceptíveis à PDT, ocorrendo uma redução de colônias que variou de 2,48 a 3,93 log10. Os resultados clínicos foram avaliados tanto quanto à redução de colônias de Candida spp. na mucosa e na prótese, como quanto à melhora do aspecto clínico da mucosa afetada. Tanto a terapia convencional quanto a PDT foram eficientes em tratar a EP. Não houve diferença estatística significante entre os tratamentos instituídos para nenhum dos fatores avaliados. Assim, concluiu-se que a PDT é efetiva no tratamento da estomatite protética. / Denture stomatitis (DS), also called chronic atrophic candidiasis, is the most common oral fungal infection in denture wearers. It has a multifactorial etiology, but the presence of Candida spp. biofilm on the denture is considered the most important factor for the establishment of the DS. This study aimed to evaluate the treatment of DS through the use of photodynamic antimicrobial therapy (PAT), mediated by methylene blue. For this purpose, preclinical studies and clinical trials were performed. Simulators prototypes dentures were made of methyl methacrylate polymer to serve as a basis for biofilm growth of the following species of Candida: C. albicans, C. glabrata, C. dubliniensis, C. krusei, C. tropicalis, C. parapsilosis and C. guilliermondii. Methylene blue solution at a concentration of 450μg/mL was used as a photosensitizer. The prototypes and biofilms were irradiated with a laser of wavelength of 660 nm, potency of 100 mW, for 80 seconds. For the clinical study, subjects were divided into two groups. The first group received conventional treatment based on the use of antifungal Miconazole. The second group received the treatment by PAT. The preclinical results showed that all species of the genus Candida were susceptible to PAT, with a reduction in colonies that ranged from 2.48 to 3.93 log10. Clinical outcomes were evaluated for the reduction of colonies of Candida spp. located in the mucosa and in the prosthesis and relative to the improvement of the clinical aspect of the affected mucosa. Both the conventional therapy and PAT were effective in treating DS. There was no significant statistical difference between PAT and conventional treatment for any of the factors evaluated. Thus, it was concluded that PAT is effective in the treatment of denture stomatitis.

Submitted by Angela Maria de Oliveira (amolivei@uepg.br) on 2018-11-04T18:48:07Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Gustavo Moraes.pdf: 5377838 bytes, checksum: 3d28c8b25b98063e3bc2c7a4a8d3efb4 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-04T18:48:07Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Gustavo Moraes.pdf: 5377838 bytes, checksum: 3d28c8b25b98063e3bc2c7a4a8d3efb4 (MD5) Previous issue date: 2018-02-02 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Objetivo: Esta Dissertação foi composta por dois estudos. O primeiro avaliou métodos de esterilização de dispositivos palatais acrílicos para uso animal, bem como realizou a contaminação dos mesmos com Candida albicans. Ademais, verificou-se a duração da candidose bucal induzida por diferentes protocolos em ratos Wistar imunocompetentes e a efetividade da indução da estomatite protética em ratos imunocompetentes sob antibioticoterapia. O segundo avaliou parâmetros histológicos e bioquímicos como marcadores da toxicidade aguda hepática, renal, pulmonar e gástrica causada pela administração via gavage de doses tóxicas de clorexidina (Clx) nesses animais. Material e métodos: No Estudo I, dispositivos acrílicos foram confeccionados a partir de moldagens dos palatos dos animais utilizando moldeiras individuais e poliéter. Verificou-se a esterilização dos dispositivos (n=5) por meio do uso de micro-ondas (MO), luz ultravioleta (UV), ultrassom (US) ou nenhum método (CN), a partir de análises da viabilidade das colônias e em espectrofotômetro. Então, realizou-se a contaminação dos aparatos com um biofilme de C. albicans, a qual foi confirmada por meio de contagem de Unidades Formadoras de Colônia (UFC)/mL (n=6) e microscopia confocal a laser (n=5). Posteriormente, 20 animais foram divididos em cinco grupos (n=4): Cn=nenhum protocolo; Di=cimentação de dispositivo estéril; In=inoculação de suspensão de C. albicans no palato, sem a utilização de dispositivos; Dc=cimentação de dispositivo contaminado com C. albicans; In+Dc=junção dos grupos In e Dc. Os ratos foram monitorados durante uma semana para verificar a presença de sinais clínicos de candidose bucal por meio de fotografias dos palatos e línguas. Foi realizada a contagem de UFC/mL a partir de coletas feitas nos palatos utilizando swabs. Ao final dos sete dias, realizou-se a eutanásia e os palatos e línguas foram removidos para análise histopatológica. Finalmente, outros animais submetidos aos grupos Cn (n=2), Di (n=6) ou In+Dc (n=6) receberam tetraciclina na água de beber 7 dias antes de serem submetidos aos protocolos. Após o período de instalação da infecção (4 dias utilizando os dispositivos), as mesmas análises foram realizadas. No Estudo II, dois grupos foram avaliados (n=9): CN=administração de 1,5 mL de água destilada (veículo) via gavage ou Clx=1,5 g/Kg de Clx diluída no veículo. Após 24 h, os animais tiveram seu sangue coletado e órgãos removidos. No plasma, foram analisados os níveis de ureia, creatinina e ácido úrico (para análise do funcionamento renal), transaminase glutâmico-oxalacética (TGO), transaminase glutâmico-pirúvica (TGP) e fosfatase alcalina (FA) (para análise do funcionamento hepático), glicemia e lactato desidrogenase. Os órgãos foram avaliados por meio de análise histopatológica. Resultados: No Estudo I, o MO foi o único método que esterilizou os dispositivos (p<0,05; ANOVA 1-fator/Tukey HSD) e o protocolo de contaminação foi considerado adequado, com formação de biofilme composto por hifas e leveduras viáveis (1,2 x 106 UFC/mL). Não foram observadas alterações clínicas nos palatos dos animais. Foram observadas regiões despapiladas nas 11 línguas dos animais dos grupos In, Dc e In+Dc em até quatro dias após a indução da infecção. A recuperação de C. albicans a partir das coletas foi considerada baixa e os maiores valores foram obtidos no grupo In+Dc. Histologicamente, os tecidos apresentaram-se sem alterações epiteliais e no conjuntivo. Estando os animais sob antibioticoterapia, o valor recuperado de C. albicans foi 10 vezes superior para o grupo In+Dc após a instalação da infecção (1,3 x 104 UFC/mL). Foram observados eritema puntiforme e edema tecidual no palato e despapilação na língua desses animais. Histologicamente, foram observados microabscessos e infiltrado inflamatório no palato, além de invasão fúngica no epitélio das línguas. No Estudo II, a Clx provocou perda de peso (p=0,001) e redução no consumo de ração (p=0,008; ANOVA 2-fatores de medidas repetidas/Tukey HSD) e aumento nos níveis de TGO (p=0,026) e TGP (p=0,009) e redução nos níveis de FA (p=0,020; teste T nãopareado). Histologicamente, foram encontradas maiores alterações hepáticas (p=0,009; teste Qui-quadrado) para os animais do grupo CN e maiores alterações gástricas (p=0,05), para o grupo Clx, os quais apresentaram danos moderados (escore 3). Conclusão: No Estudo I, o método MO esterilizou os dispositivos; biofilme de C. albicans foi formado sobre os mesmos e a estomatite protética em animais sob antibioticoterapia foi evidenciada macroscopicamente, microscopicamente e histologicamente. No estudo II, a Clx administrada por gavage causou hepatotoxicidade e danos gástricos nos animais. / Purpose: This Dissertation was composed by two studies. The first study evaluated sterilization methods of acrylic palatal devices for animal use, as well as performed their contamination with Candida albicans. In addition, the duration of oral candidosis induced by different protocols in immunocompetent Wistar rats and the effectiveness of the induction of denture stomatitis in immunocompetent Wistar rats under antibiotic therapy was analyzed. The second one evaluated the effectiveness of histological and biochemical parameters as markers of acute hepatic, renal, pulmonary, and gastric toxicity caused by gavage administration of toxic doses of chlorhexidine (Chx) in Wistar rats. Material and methods: For the first study, acrylic devices were made from impressions of the animals’ palate with individual trays and polyether. Sterilization of the devices (n=5) was verified after submission to microwave (MW), ultraviolet light (UV), ultrasonic bath (US), or none method (NC), and assessed by colony viability and spectrophotometric analyses. Then, devices’ contamination with C. albicans was performed and confirmed by counting Colony Forming Units (CFU)/mL (n=6) and by laser confocal microscopy (n=5). Subsequently, 20 animals were divided into five groups (n=4): Nc=none protocol; Id=cementation of a sterile intraoral device; In=inoculation of a C. albicans suspension on the palate, without wearing a device; Cd=cementation of a device contamined by C. albicans; In+Cd=junction of In and Cd groups. The rats were monitored for one week to verify the presence of clinical signs of oral candidosis by taking photographs of their palates and tongues. CFU/mL counts were determined from the collected material of their palates using swabs. After one week, euthanasia was performed and the palates and tongues were removed for histopathological analysis. Finally, other animals of Nc (n=2), Id (n=6), or In+Cd groups (n=6) received tetracycline in the drinking water 7 days before being submitted to the protocols. After the disease installation period (four days using the devices), the same analyzes were performed. For the second study, two groups were evaluated (n=9): NC=administration of 1.5 mL of distilled water (vehicle) via gavage or Chx=1.5 g/Kg of Chx diluted in the vehicle. After 24 h, the animals had their blood collected and organs removed. In the plasma, the levels of urea, creatinine and uric acid (for kidney assessment), glutamicoxaloacetic transaminase (GOT), glutamic-pyruvic transaminase (GPT), alkaline phosphatase (AP) (for liver assessment), glycemia and lactate dehydrogenase were analyzed. The organs were evaluated by histopathological analysis. Results: In the first study, MW was the only method capable of sterilizing the devices (p<0.05; ANOVA 1-way/Tukey HSD), and the protocol used for contamination was considered satisfactory, developing a biofilm composed by viable hyphae and yeasts (1.2 x 106 CFU/mL). No clinical changes were observed in the palates of the animals. Areas of localized papillary atrophy were observed on the tongue dorsum of animals from In, Cd, and In+Cd groups until four days after the infection installation. The recovery of C. albicans was considered low and the highest values were obtained from the In+Cd group. Histologically, no alterations were observed. With the animals under antibiotic 13 therapy, the recovered values of C. albicans were 10 times higher for the In+Cd group after the infection installation (1.3 x 104 CFU/mL). It was observed localized erythema and tissue edema on the palatal mucosa and papillary atrophy on tongue dorsum of these animals. Histologically, microabscesses and inflammatory infiltrate in the palate, as well as fungal invasion in the tongue epithelium were also observed. In the second study, Clx caused weight loss (p=0.001), and reduction in food intake (p=0.008; ANOVA 2-way for the repeated measures/Tukey HSD), respiratory distress, and an increase in GOT (p=0.026) and GPT levels (p = 0.009), and decrease in AP levels (p=0.020; unpaired t-test). Microscopically, higher hepatic alterations (p=0.009; Chi-squared test) were found for NC group and higher gastric alterations (p=0.05), for Chx group, which showed moderate changes (score 3). Conclusion: In the first study, MW sterilized the devices; C. albicans biofilm was formed on their surfaces; denture stomatitis in animals under antibiotic therapy was evidenced macroscopically, microscopically, and histologically. In the second study, Chx gavage administration caused hepatotoxicity and gastric damage.

Orientador: Carlos Eduardo Vergani / Banca: Eunice Teresinha Giampaolo / Banca: Cláudia Helena Lovato da Silva / Resumo: A Candida albicans tem sido considerada o principal agente etiológico da estomatite protética, uma das infecções mais comumente observadas em pacientes usuários de próteses removíveis. A adesão de C. albicans à superfície das próteses é o primeiro passo para o desenvolvimento da estomatite protética. Assim, uma adequada higienização das próteses é essencial para prevenir a formação de biofilme microbiano sobre a superfície protética e, conseqüentemente, o início e propagação desta infecção. O objetivo deste estudo foi avaliar a efetividade da escovação com diferentes soluções (água destilada, dentifrício, digluconato de clorexidina a 2%, hipoclorito de sódio a 1% e Polident fresh cleanse®) na redução da viabilidade de um biofilme maduro de C. albicans, desenvolvido sobre uma resina termopolimerizável para base de prótese. Para isso, 90 corpos-de-prova circulares foram confeccionados, esterilizados e inoculados com uma suspensão de 107 células/mL de C. albicans. Para a formação do biofilme, todos os corpos-de-prova foram incubados por 48 h a 37 °C sob agitação. A seguir, os corpos-de-prova foram aleatoriamente divididos (n=9) e individualmente submetidos à escovação ou exposição por 90 s nas diferentes soluções avaliadas. Os espécimes imersos em água destilada pelo mesmo período de tempo foram utilizados como controle positivo. Para verificar a efetividade da escovação e dos agentes de limpeza, os corpos-de-prova foram submetidos à avaliação da atividade metabólica das células não removidas de C. albicans por meio do teste do XTT. Os resultados obtidos foram analisados estatisticamente pelos testes de Mann-Whitney e Kruskal-Wallis (α=0.05). A escovação com todos os agentes de limpeza apresentou redução significativamente superior (p<0,0001) na viabilidade do biofilme quando comparada à exposição dos corpos-de-prova... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The adhesion of C. albicans to surfaces is the prerequisite for occurrence of denture stomatitis, a common disease diagnosed among denture wearers. Therefore, a strict routine of denture cleansing is essential to prevent biofilm formation on the acrylic denture surface and the onset of this infection. Thus, the aim of the current study was to investigate the effectiveness of combining toothbrushing and cleansing agents (dentifrice, 2% chlorhexidine gluconate, 1% sodium hypochlorite, and Polident fresh cleanse®) in inactivating C. albicans biofilm. Circular specimens (10 x 2 mm) of acrylic resin denture base material were made, sterilized, and individually inoculated with C. albicans (1x107 colony-forming units/mL). After incubation (37 °C/48 h), the specimens were divided into 10 experimental groups (n=9): 5 subjected to toothbrushing with different cleansing agents and 4 exposed to the cleansing agents without toothbrushing. Non-cleansed specimens were used as positive controls. The viability of cells was evaluated by XTT reduction method. Mann-Whitney and Kruskal-Wallis tests were used for comparative analysis between the two methods of cleansing and the cleansing agents, respectively (α=0.05). Toothbrushing with all agents was significantly more effective (p<0.0001) in reducing biofilm viability than exposure to the cleansing agents only. Exposure to all cleansing agents reduced significantly (p<0.0001) the biofilm viability, with 2% chlorhexidine gluconate being most effective (p<0.0001). Toothbrushing with 2% chlorhexidine gluconate and 1% sodium hypochlorite resulted in 100% inactivation of the biofilm. The use of cleansing agents as an adjunct to toothbrushing is an effective method to reduce C. albicans biofilm viability on denture base resins. / Mestre

Reembasadores resilientes temporários contendo fármacos antifúngicos foram sugeridos como um tratamento adjunto para estomatite protética. No entanto, antes de utilizar clinicamente estes reembasadores modificados em humanos, é importante avaliar a sua biocompatibilidade em modelos animais. Este estudo avaliou a biocompatibilidade in vivo de um reembasador resiliente temporário para base de prótese (Trusoft) modificado por agentes antimicrobianos em suas mínimas concentrações inibitórias (MCIs) para biofilme de Candida albicans. Dispositivos acrílicos intra-orais (DIOs) foram confeccionados individualmente para 60 ratos Wistar. Os ratos foram divididos em 6 grupos (n=5): 3 grupos controle (Negativo: sem DIO; Geral: DIO sem reembasamento; Positivo: DIO reembasado com Trusoft sem fármacos) e 3 grupos experimentais (DIOs reembasados com Trusoft modificados por fármacos em suas respectivas MCIs: 0,032 g de nistatina, 0,064 g de diacetato de clorexidina e 0,128 g de cetoconazol). Os ratos com ou sem os DIOs foram eutanasiados após 7 e 14 dias de avaliação. A análise histopatológica qualitativa foi realizada comparando-se fotomicrografias de secções histológicas, que foram obtidas utilizando um microscópio óptico que abrangeu transversalmente a região intermolares. As alterações morfológicas no epitélio e queratina foram analisadas quantitativamente através da realização de planimetria computadorizada. Os dados quantitativos foram analisados utilizando ANOVA 2-fatores e teste de Tukey (=0,05). A análise quantitativa mostrou que apenas o grupo com DIO contendo cetoconazol diminuiu significativamente a espessura e a área do estrato córneo em comparação com os outros grupos (p<0,05), que não apresentaram diferenças significativas entre si (p>0,05). Estes resultados estiveram de acordo com os obtidos para análise qualitativa. A incorporação de MCIs de nistatina e diacetato de clorexidina no Trusoft não induziram alterações histopatológicas na mucosa palatina de ratos, sugerindo a biocompatibilidade in vivo deste protocolo para o tratamento de estomatite protética. / Temporary resilient denture liners containing antifungal drugs have been suggested as an adjunct treatment for denture stomatitis. However, before clinically using these modified liners in humans, it is important to assess their biocompatibility in animal models. This study evaluated the in vivo biocompatibility of a temporary soft denture liner (Trusoft) modified by antimicrobial agents at their minimum inhibitory concentrations (MICs) for biofilm formation by Candida albicans. Methods: Acrylic intraoral devices (IODs) were individually made for 60 Wistar rats. The rats were divided into the following 6 groups (n=5): 3 control groups (Negative: without IOD; General: IOD without relining; Positive: IOD relined with Trusoft without drugs) and 3 experimental groups (IOD relined with Trusoft modified by drugs at MICs: 0.032 g for nystatin, 0.064 g for chlorhexidine diacetate, and 0.128 g for ketoconazole). The rats with or without the IODs were sacrificed after 7 or 14 days of evaluation. Histopathological qualitative analysis was performed by comparing photomicrographs of histological sections, which were obtained using an optical microscope that transversely covered the inter-molar region. Morphological changes in the epithelium and keratin were quantitatively analyzed by performing computerized planimetry. Quantitative data were analyzed using 2-way ANOVA and Tukey\'s test (=0.05). Quantitative analysis showed that only the group with IOD containing ketoconazole significantly decreased the thickness and area of the stratum corneum compared with the other groups (p<0.05), which showed no significant differences between each other (p>0.05). These results were in accordance with those obtained for qualitative analysis. Incorporation of MICs of nystatin and chlorhexidine diacetate in Trusoft did not induce histopathological changes in the palatal mucosa of rats, suggesting the in vivo biocompatibility of this protocol for treating denture stomatitis.