Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao_regis_sturbelle.pdf: 477794 bytes, checksum: d7692995394f46dd2524f4a667bb1ce6 (MD5) Previous issue date: 2009-10-29 / One of the most important sanitary problems that cause economic losses in swine industry is the diarrhea caused by Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC). It is the main infectious cause of mortality for animals in suckling and post-weaning periods. Their primary factors of pathogenicity are the fimbriae, which bond the bacteria to specific receptors of the enterocytes. This causes a succession of events, brought about by the enterotoxins, the stable toxins (ST) and heat-labile toxins (LT), leading to diarrhea. Another important structure is the flagellum, which has an important role in cell stimulation to produce pro-inflammatory cytokines through the interaction with Toll-like receptors (TLR5), signaling cell recruitment and activation, thus increasing local inflammation as well as antigen presentation to lymphocytes. Quorum Sensing is a signaling system among bacteria that uses substances denominated autoinducers (AI). When the auto-inducers reach a certain concentration, due to an increase of cell density, there is an activation of transcriptional factors, which regulate the gene expression. The catecholamines (adrenaline and noradrenalin), produced by nervous cells, use the auto-inducer type 3 (AI-3) pathway. These have a significant role in gene expression as they stimulate the growth and the expression of virulence factors of the Escherichia coli. The goal of the present study was to produce experimental vaccines containing total cultures of ETEC cultivated in different induction conditions, mediated by the conditioned media (mc) so as to study the expression of vaccine antigens. Different concentrations of mc were used, with the 50% of conditioned media added with 500 μM of adrenaline having the major initial growth and antigen expression. In the motility assay, a sixteen-fold increase was observed in comparison to the control. By the ELISA, hemoagglutination, hemoagglutination inhibition and Dot Blot techniques, a higher expression of fimbriae (F4) was observed, whereas by Dot Blot, ELISA and RT-PCR techniques an increase of LT expression was observed. Based on this data a bacterin was prepared using 50% of mc and 500 μM of adrenaline, with Al(OH)3 as an adjuvant. Five weeks old Swiss female mice were vaccinated twice with 250 μL subcutaneously on days 0 and 8 14. The vaccine immune response was evaluated by ELISA and hemoagglutination inhibition. The mc bacterin vaccinated group respond with a seroconversion significantly higher that the control group. These results suggest that the presence of mc with adrenaline is capable of activating the expression of important vaccine antigens, therefore making bacterin more efficient. / Um dos maiores problemas sanitários que causam prejuízo à suinocultura é a diarréia causada por Escherichia coli Enterotoxigênica (ETEC). Esta é a causa infecciosa mais comum de mortalidade em animais em aleitamento e no período pós-desmame. Os fatores primários de patogenicidade desta bactéria são as fímbrias, que as ancoram a receptores específicos dos enterócitos permitindo que as enterotoxinas, toxinas termo estáveis (ST) e toxinas termo lábeis (LT) desencadeiem uma sucessão de eventos levando à diarréia. Outra estrutura é o flagelo que possui um papel na estimulação de células na produção de citocinas pró-inflamatórias através da interação com receptores Toll-like 5 (TLR5), sinalizando o recrutamento e ativação de células, desta forma ampliando a inflamação local bem como a apresentação de antígeno aos linfócitos. Quorum Sensing é um sistema de sinalização entre as bactérias, os quais produzem substâncias denominadas de auto-indutores (AI). Quando os auto-indutores alcançam uma determinada concentração, decorrente do aumento da densidade celular ocorre uma ativação de fatores transcricionais que acabam regulando a expressão gênica. As catecolaminas (adrenalina e noradrenalina), produzidas pelas células nervosas, utilizam a via de sinalização do auto-indutor tipo 3 (AI-3) que têm um papel significante na expressão gênica, estimulando o crescimento e a expressão de fatores de virulência de Escherichia coli. O objetivo deste estudo foi utilizar o sistema de sinalização Quorum Sensing para induzir a expressão in vitro de antígenos vacinais de Escherichia coli Enterotoxigênica cultivadas em diferentes condições de indução mediada pelos meios condicionados (mc). Diferentes concentrações de mc foram utilizadas, sendo que o maior crescimento inicial e a maior expressão de antígenos de interesse foram obtidos com 50% de meio condicionado adicionado de 500 μM de adrenalina. No ensaio de motilidade foi observado um aumento de 16 vezes em relação ao controle. Pelas técnicas de ELISA, hemaglutinação, inibição da hemaglutinaçõa e Dot blot foi observado uma maior expressão de fimbria (F4) e pelas técnicas de Dot blot, ELISA e RT-PCR foi observado aumento da expressão de LT. Baseado nesses dados 6 testou-se uma bacterina utilizando 50% de mc e 500 μM de adrenalina com Al(OH)3 como adjuvante. Foram utilizados camundongos Swiss fêmeas com 5 semanas de idade que foram vacinados por via subcutânea com 250 μL nos dias 0 e 14. A avaliação da resposta imune foi realizada através de soroconversão frente aos antígenos estudados por meio de ELISA e inibição da hemaglutinação. O grupo vacinado com a bacterina com mc obteve uma soroconversão significativamente superior ao grupo controle. Estes resultados sugerem que a presença de mc com adrenalina são capazes de ativar a expressão de importantes antígenos vacinais, tornando desta forma a bacterina mais eficiente.

Listeria monocytogenes é conhecida como um importante patógeno causador de doenças transmitidas por alimentos na última década. Apesar do número de casos por ano ser relativamente baixo, a infecção pode ser grave, com mortalidades acima de 30%. Pesquisas realizadas no Brasil relataram uma incidência de 32% em amostras de produtos cárneos, e o microrganismo foi encontrado em 80% das amostras lingüiças frescal de carne suína. Apesar dos recentes avanços nas tecnologias de controle de patógenos em alimentos, os consumidores têm procurado alimentos \"naturais\", isto é, submetidos a tratamentos menos agressivos e isentos de conservadores químicos. Antimicrobianos naturais são uma opção interessante, mas sua aplicação requer uma melhor compreensão de sua funcionalidade nos alimentos. Os óleos essenciais e seus compostos fenólicos estão se tornando agentes antimicrobianos naturais bastante populares, assim como a nisina, uma bacteriocina produzida por Lactococcus lactis subsp. lactis. Esta pesquisa foi desenvolvida para avaliar o efeito de óleo essencial de orégano (O.E.O.) e de nisina, individualmente ou em combinação, na inibição da multiplicação de Listeria monocytogenes Scott A in vitro (meio de cultura) e in situ -(lingüiça frescal suína). A atividade inibitória foi testada pela metodologia de difusão em poços, e os halos de inibição foram medidos 24 horas após a incubação à 37ºC. Foram testadas as concentrações 0,05%, 0,1%, 0,2%, 0,3%, 0,4% e 0,5% (v/v) de O.E.O. e 0, 100, 200, 400, 600, 800, 1000, 1200, 1400, 1600, 1800 e 2000 ppm de nisina. Quando o óleo essencial foi usado em combinação com a nisina foi observado um efeito sinérgico na inibição de L. monocytogenes. As concentrações que apresentaram o maior efeito contra o patógeno nos testes in vitro, ou seja 0,5% (v/v) O.E.O. com 200 ppm de nisina, foram utilizadas nos experimentos com três formulações diferentes lingüiça frescal, contendo pernil de porco, sal (2%), nitrito (0,015%), condimentos, emulsificantes e antioxidantes, experimentalmente contaminadas com L. monocytogenes Scott A (106 UFC/g). A multiplicação do patógeno foi monitorada no produto refrigerado a 5oC por até 10 dias, através da contagem em placas. Controles sem antimicrobianos também foram estudados. Os resultados indicaram que o O.E.O., usado isoladamente, não conferiu proteção ao alimento. A nisina causou uma redução de 2 log imediatamente após o contato com o microrganismo, mas durante o armazenamento, as células sobreviventes apresentaram a mesma taxa de multiplicação que na lingüiça controle (??0,05), mantendo as contagens 2 log inferiores as do controle por até 9 dias. Quando os dois antimicrobianos foram usados em combinação, a redução imediata após o contato foi de 4 log, e, quando comparado ao controle, a taxa de multiplicação durante o armazenamento a 5oC foi significativamente mais altas que no controle (??0,05). Entretanto, as amostras de lingüiça contendo esses antimicrobianos nas concentrações testadas não foram aprovadas nos testes sensoriais de aceitação (??0,05). Esses resultados indicam que a combinação desses antimicrobianos pode ser utilizada como uma barreira adicional para a multiplicação de L.monocytogenes em lingüiça frescal suína, mas os atributos sensoriais que conferem ao produto podem limitar sua aplicação. / Listeria monocytogenes has been recognized as an important foodborne pathogen for the past decade. Although the number of cases per annum is relatively low, the infections can be acute, with mortality up to 30%. In Brazil, some works reported that 32% of dairy meat products were contaminated with L. monocytogenes, and this organism was found in 80% of fresh pork sausage. In spite of modern improvements in food production techniques, the consumers are seeking for \"natural\" food products, i.e., not submitted to aggressive treatments or added of chemical preservatives. Natural antimicrobials are a promising option, but their application requires a better understanding of their functionality in foods. Naturally occurring antimicrobial agents, such as essential oils and their phenolic components, are becoming increasingly popular as preservation agents. Other compound with increased application in foods is nisin, a bacteriocin produced by Lactococcus lactis subsp. lactis. This study aimed to evaluate the antimicrobial effect of oregano essential oil (O.E.O.) and nisin, individually or in combination, on the inhibition of growth of Listeria monocytogenes Scott A in vitro (agar culture medium) and in situ (fresh pork sausage). The inhibitory activity was tested by the well diffusion method, measuring the inhibition halos after 24hours incubation at 37ºC. The concentrations tested were 0.05%, 0.1%, 0.2%, 0.3%, 0.4%, 0.5% (v/v) for OEO and 0, 100, 200, 400, 600, 800, 1000, 1200, 1400, 1600, 1800 and 2000 ppm for nisin. When the essential oil was used in combination with nisin, a synergistic effect was observed for L. monocytogenes, i.e., the oil enhanced the activity of the bacteriocin. The combination 0.5% (v/v) O.E.O. with 200 ppm nisin presented the best results and was used to test the functionality in fresh pork sausage prepared with three different formulations, containing deboned minced pork meat, 2% salt and 0.015% nitrite, plus spices, emulsifier and antioxidant, and experimentally contaminated with L. monocytogenes Scott A (106 CFU/g). The growth of the pathogen was monitored in the refrigerated product (5oC) up to 10 days, by means of plate counting. Controls without antimicrobials were included in the experiments. Results indicated that O.E.O., used alone, was not effective. Nisin alone caused a 2-log reduction immediately after contact, but during storage the surviving cells presented the same multiplication rate as in the control (? ? 0.5), keeping the counts 2 log lower up to 9 days. When used in combination, the two antimicrobials caused a 4-log count reduction immediately after addition and, when compared to the control, the multiplication rate of the surviving cells during storage under refrigeration up to 10 days was significantly higher (? ? 0.5). However, samples containing these antimicrobials in the tested concentrations failed the sensorial acceptance tests (? ? 0.5). These results indicate that the combination of these antimicrobials can be an additional hurdle for the control of L. monocytogenes in fresh pork sausages, but the final sensorial attributes of the product may hamper their application.

A suinocultura brasileira representa uma importante atividade econômica para o país, o qual ocupa lugar de destaque na produção e exportação de carne suína no mundo. O destaque do país na produção de suínos, deve-se a melhorias na sanidade, manejo, produção integrada e, principalmente, no aprimoramento gerencial dos produtores. O primeiro artigo consistiu em determinar a frequência e a distribuição das doenças infecciosas (DI) diagnosticadas através de exame de necropsia e histopatologia em suínos nas fases de crescimento e terminação ao longo de 12 anos (2005-2016) no sul do Brasil. Foram avaliados 1906 laudos anatomopatológicos de suínos nas fases de crescimento/terminação, dos quais as DI corresponderam a 75,6% (1441 casos) do total. As infecções por circovírus suíno tipo 2 (PCV2) foram as mais frequentes, contabilizando 51,3% (739/1441) dos casos, seguidas por DI que afetam o sistema respiratório (30,1% dos casos). Dentre essas, destacam-se a influenza suína A (15,1%; 218/1441) e pneumonias bacterianas (15%; 216/1441). O diagnóstico de influenza exibiu uma frequência elevada entre os anos de 2010 a 2013, totalizando 43,1% (167/387) dos casos. Após este período, ambas DI respiratórias exibiram caráter endêmico. As DI que afetam o sistema digestório totalizaram 10,5% (151/1441) dos diagnósticos, com as seguintes condições: enterocolite por Salmonella spp. (43,7%; 66/151), enteropatia proliferativa por Lawsonia spp. (41,7%; 63/151) e colite por Brachyspira spp. (14,6%; 22/151). Além dessas, as polisserosites e meningites bacterianas representaram 5,8% (84/1441) e 2,3% (33/1441) dos casos diagnosticados, respectivamente. O segundo artigo descreve três surtos de doença por circovírus suíno tipo-2 (PCVD) com lesões envolvendo musculatura esquelética. Em um curso clínico de 7 a 10 dias, 92 suínos apresentaram apatia, emagrecimento e diarreia. Ainda, cerca de 30 dos suínos afetados, apresentavam dificuldade de locomoção, fraqueza muscular, paresia de membros pélvicos e decúbito permanente. Quatro suínos exibiram palidez em músculos esqueléticos dos membros pélvicos, torácicos e dorso-lombares. As lesões microscópicas observadas consistiam de miosite necrótica granulomatosa, predominantemente, em membros pélvicos e torácicos, e em menor intensidade nos músculos dorso-lombares. No exame imuno-histoquímico para PCV2 observou-se marcação multifocal acentuada, predominantemente, no citoplasma e núcleos de macrófagos, linfócitos e células gigantes multinucleadas, além de marcação discreta no citoplasma no citoplasma de fibras necróticas da musculatura esquelética. As amostras de músculo esquelético foram positivas na reação em cadeia de polimerase para PCV2 e a ampliação exibiu 99% de identidade com sequências pertencentes ao genótipo PCV2b. / Brazilian pig farms represent an important economic activity for the country, which occupies a prominent place in the production and export of pork in the world. The country's prominence in pork production is due to improvements in sanitation, management, integrated production and, mainly, in the managerial improvement of the producers. The first study aimed to determine the frequency and distribution of infectious diseases (ID) diagnosed through necropsy and histopathology examination in growing-finishing swine along 12 years (2005-2016) in Southern Brazil. A total of 1906 anatomopathological exams performed in growing-finishing swine were evaluated, of which ID accounted for 75.6% (1441 cases) of the total. Porcine circovirus type 2 (PCV2) infections were the most frequent, accounting for 51.3% of the cases (739/1441), followed by respiratory system ID (30.1% of the cases). Among these, the main conditions were swine influenza (15.1%; 218/1441) and bacterial pneumonia (15%; 216/1441). Influenza diagnosis had a higher frequency between 2010 and 2013, accounting for 43,1% (167/387) of the cases. After this period, both respiratory ID had an endemic occurrence. Digestive system ID accounted for 10.5% (151/1441) of the diagnosis, with the main conditions diagnosed: Salmonella spp. enterocolitis (43.7%; 66/151), Lawsonia spp. proliferative enteropathy (41.7%; 63/151) and Brachyspira spp. colitis (14.6%; 22/151). Besides these, polyserositis and bacterial meningitis represented, respectively, 5.8% (84/1441) and 2.3% (33/1441) of the cases diagnosed. The second study describes three outbreak of porcine circovirus disease (PCVD) with the involvement of skeletal muscle. In a clinical course of 7 to 10 days, 92 pigs had apathy, weight loss and diarrhea. Approximately 30 of these 92 pigs had stiff gait, muscle weakness, hind limb paresis, and recumbency. 4 pigs necropsied presented pale discoloration from hind and thoracic limbs, as well from dorsal lumbar skeletal muscles. The microscopical lesions consisted of granulomatous necrotizing myositis mainly of hind and thoracic limbs, and mildly from dorsal lumbar muscles. Immunohistochemistry exam for PCV2 revealed marked multifocal intracytoplasmic and intranuclear staining predominantly in macrophages, lymphocytes and multinucleated giant cells, with a lower amount in the cytoplasm of necrotic fibers of the skeletal muscle. Affected muscle samples were polymerase chain reaction– positive for PCV2 and the amplicon exhibited 99% identity with sequences belonging to the PCV2b genotype.

Submitted by Maicon Juliano Schmidt (maicons) on 2015-07-08T14:47:54Z No. of bitstreams: 1 Flavia da Silveira e Silva.pdf: 1863286 bytes, checksum: e3e86c20d4fb6671ec643a466da27f0f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-08T14:47:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Flavia da Silveira e Silva.pdf: 1863286 bytes, checksum: e3e86c20d4fb6671ec643a466da27f0f (MD5) Previous issue date: 2014-07-30 / Nenhuma / A elevada ingestão de aditivos sintéticos em produtos embutidos cárneos tem sido associada ao desenvolvimento de algumas doenças como hipertensão, doenças cardiovasculares e alguns tipos de câncer. Dessa forma, a redução desses aditivos na dieta representa prioridade pelos consumidores na busca de uma vida mais saudável, assim como, uma tendência crescente da indústria de alimentos no desenvolvimento de produtos com rótulos mais limpos, conhecidos como clean label. Nesse contexto, este trabalho teve como objetivo avaliar a funcionalidade do óleo essencial de alecrim examinando sua capacidade antioxidante sobre as características de qualidade de uma linguiça frescal suína orgânica sob os aspectos físico-químicos, microbiológicos e sensoriais. Discutiu-se ainda, o consumo de carne suína orgânica como alternativa à carne suína convencional e os parâmetros dos antioxidantes naturais e sintéticos habitualmente utilizados na elaboração de produtos cárneos. A atividade antioxidante total (AAT) do óleo essencial de alecrim orgânico extraído de folhas frescas comparativamente ao óleo extraído de folhas secas foi avaliada in vitro através da atividade sequestrante de radical DPPH (2,2-difenil-1-picril-hidrazil). Foram produzidas quatro formulações de linguiça suína orgânica: controle, isenta de quaisquer aditivos (Tc), aditivada com sais de cura (Tsc) e aditivadas com diferentes concentrações de óleo essencial de alecrim, 0,01 (T0,01%) e 0,1% (T0,1%). As amostras foram armazenadas sob refrigeração e submetidas às análises físico-químicas de atividade de água, pH, substâncias reativas ao ácido 2-tiobarbitúrico (TBARS); microbiológicas, preconizadas na RDC 12/2001, bem como contagem total de bactérias heterotróficas; e sensoriais, com os testes de aceitação, intenção de compra e preferência. Foi ainda realizada uma pesquisa de percepção do consumidor. Os resultados mostraram que a pré-secagem das folhas afetou negativamente a AAT do óleo essencial, embora o teste estatístico não tenha demonstrado significância. Avaliando o desempenho do óleo essencial de alecrim em substituição aos aditivos tradicionalmente utilizados, observou-se que, ao longo dos dias de armazenamento das quatro amostras produzidas, a atividade de água e o pH mantiveram-se estáveis e dentro da faixa aceitável para produtos cárneos crus. Nos resultados referentes à oxidação lipídica, em valores de TBARS, o Tsc e o T0,1% não diferiram no quinto e último dia de análise. No teste de aceitação, as linguiças apresentaram boa aceitação nos atributos aparência, odor e cor. O sabor residual do alecrim foi bastante destacado na amostra com maior concentração de óleo essencial (0,1%), sendo a amostra com menor concentração (0,01%) apontada como preferida (40,63%). A análise sensorial do produto através do teste de aceitação corroborou a pesquisa de percepção do consumidor sugerindo a formulação com concentração de 0,01% de óleo essencial de alecrim como a amostra preferida além de maior intenção de compra. Conclui-se, ainda, que a demanda por produtos alimentares orgânicos é crescente, apontando uma atitude positiva com relação à compra de uma linguiça frescal suína orgânica com óleo essencial de alecrim como antioxidante natural. / The high synthetic additives ingestion in meat processed products has been associated to the development of some health problems such as cardiovascular diseases and some cancers, so the reduction of these additives in a diet has to be prioritized by consumers seeking a healthier way of life as well as by industries considering the rising trend in developing products bearing clean labels. In this context, this study had the main objective of evaluate the functionality of rosemary essential oil, assessing its antioxidant capacity over quality features of an organic fresh pork sausage, concerning its physical-chemical, microbiological and sensorial aspects. The consumption of organic pork meat as well as the parameters of natural and synthetic antioxidants usually used in meat products production were also discussed. The total antioxidant activity (TAA) of rosemary essencial oil, extracted from fresh organic leaves in comparison with the one extracted from dry organic leaves was evaluated by DPPH radical scavenging activity (2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl). Four different organic pork sausages were formulated: control exempt of additives (Tc), with addition of curing salts (Tsc) and with addition of rosemary essential oil in different concentrations 0,01% (T0,01%) e 0,1% (T0,1%). The samples were stored under refrigeration and submitted to the following analysis: physical-chemical analysis of water activity, pH and 2-tiobarbituric acid reacting substances (TBARS); microbiological analysis as determined by RDC 12/2001, as well as total heterotrophic bacteria counting, and sensorial analysis such as acceptance purchase, intent and preference tests. A consumer perception test was also carried out. The results showed that the drying operation in rosemary organic leaves adversely affected the essential oil TAA even the statistical analysis did not show significance. Evaluating the performance of rosemary essencial oil substituting traditionally used additives, it was verified that, during storage period, for the four samples, water activity and pH remained stable and in acceptable range for raw meat products. Concerning lipid oxidation results in TBARS values, there were no statistical differences in Tc and T0,1% in the fifth and last day of analysis. The four sausages were well accepted in its appearance, odor and color. Rosemary residual taste was strongly mentioned on the sample containing higher essential oil concentration (0,1%) and the sample containing lower concentration (0.01%) was chosen as the favorite one (40,63%). Product sensorial analysis, through acceptance test, has confirmed the consumer perception test suggesting the 0,01% rosemary essential oil sample as the favorite one and the leading to higher purchase intent. Furthermore, it was concluded that the demand for organic food is increasing, indicating a positive attitude toward the purchase of a fresh pork sausage with organic rosemary essential oil as a natural antioxidant.

Estudos in vitro de absorção percutânea são uma importante ferramenta para avaliação de formulações semissólidas e transdérmicas. Embora haja um grande número de agências reguladoras preocupadas com a harmonização metodológica, em muitos parâmetros elas permanecem flexíveis e isto é possível verificar na ampla variedade e divergências encontradas na literatura. O objetivo do trabalho foi avaliar parâmetros ainda flexíveis a respeito dos estudos in vitro como modo de separação das camadas da pele, permeabilidade da pele congelada (tempo de armazenamento) e diferença de permeabilidade dos locais anatômicos. Os estudos foram conduzidos utilizando células de Franz, pele suína como membrana e formulações (comercializada e inovadora) contendo penciclovir. Inicialmente, nanoemulsões foram preparadas utilizando técnica de homogeneização a alta pressão, caracterizadas, incorporadas em gel de carbômero 940 e avaliadas quanto à liberação tópica em pele suína. Simultaneamente ao desenvolvimento da formulação foi desenvolvido e validado método analítico para quantificação do fármaco nas formulações e nas camadas da pele suína. As nanoemulsões apresentaram-se monodispersas com diâmetro de gotícula em torno de 180-200 nm, potencial zeta de -27 mV e teor de penciclovir de 98% mantendo sua estrutura após a incorporação em carbômero 940. A metodologia analítica demonstrou ter alta sensibilidade (LoQ 0,05 μg/mL), especificidade e uma adequada recuperação do fármaco a partir das matrizes biológicas (90 – 104%). Quanto aos estudos in vitro de comparação de metodologias, foi possível observar que, dependendo da solubilidade do fármaco em água e das características da formulação, o método clássico de separação das camadas da pele por imersão em água não é o mais indicado. Já para permeabilidade da pele suína congelada, os resultados obtidos indicam um aumento significativo na penetrabilidade e permeabilidade após um mês de congelamento. Dentre os locais anatômicos testados, não houve diferença entre abdômen e orelha suína desde que obtidos antes do procedimento de escaldo. / In vitro percutaneous absorption studies are an important tool for evaluation of semisolid and transdermal formulations. Although there are a large number of official guides concerned with methodological harmonization in many parameters they remain flexible and it is possible to see the wide variety and differences reported in the literature. The aim of study was to evaluate some parameters regarding the in vitro studies as the mode of skin layers separation, skin frozen stability and permeability difference of anatomical sites. These studies were conducted with porcine skin and formulations (conventional and novel) using penciclovir as model drug. Initially, nanoemulsions were prepared using high pressure homogenization, characterized and incorporated into carbomer 940 gel and evaluated for topical delivery using porcine skin. Simultaneously with the development of the formulation, analytical method for quantification of the drug in the formulations and porcine skin layers was developed and validated. The nanoemulsions presented themselves monodisperse with droplet diameter of 180-200 nm, zeta potential of about -27 mV and penciclovir content of 98% maintaining their structure after incorporation into carbomer 940. The analytical methodology was shown to have high sensitivity (LOQ 0.05 μg/mL), specificity and adequate recovery of drug from the biological matrices (90-104%). Regarding the in vitro comparison methodologies, it was observed that, depending on the solubility of the drug in water and the characteristics of the formulation, the classical separation is not the most suitable for separation of the skin layers. For the stability of frozen porcine skin, the results indicate a significant increase in permeability and penetrability after one month of freezing. Within the anatomical sites tested, there was no difference between the abdomen and ear porcine skin since obtained before the scald procedure.

A contaminação cruzada por Salmonella spp. durante o processo de abate de suínos contribui para o aumento da prevalência de carcaças positivas no pré-resfriamento. Um dos fatores que pode contribuir para a contaminação cruzada é a execução de cortes e palpação de carcaças durante o processo de inspeção. O presente estudo teve como objetivo estimar, por meio de ensaios laboratoriais, a transferência de Salmonella Typhimurium DT 177 entre faca e carne suína, para subsidiar análises futuras aplicadas ao processo de abate. Foram conduzidas observações independentes e aleatórias da transferência de uma cepa de S. Typhimurium resistente a Ampicilina (AmpR), entre faca e carne suína, as quais formaram quatro coleções de dados: Coleção de dados A: transferência de S. Typhimurium AmpR de faca contaminada para porção de carne suína cortada uma vez (n=20); Coleção de dados B: transferência de S. Typhimurium AmpR de faca contaminada para porção de carne suína cortada cinco vezes no mesmo lugar (n=20); Coleção de dados C: Transferência de S. Typhimurium AmpR de porção de carne suína contaminada para faca após execução de um corte (n=20); Coleção de dados D: Transferência de S. Typhimurium AmpR de porção de carne suína contaminada para faca após execução de cinco cortes no mesmo lugar (n=20). As bactérias transferidas foram quantificadas na lâmina da faca e na superfície da carne, a porcentagem de transferência foi calculada em todas as coleções de dados. As porcentagens de transferência entre as coleções de dados foram comparadas por meio de teste t para amostras independentes usando o programa R Core Team. As percentagens médias de transferência na coleção de dados A e B foram de 6,26% (4,7% – 7,7%) e 8,32% (6,4% - 10,2%). Nas coleções de dados C e D, as percentagens médias de transferência foram, respectivamente, 0,42% (0,3% - 0,5%) e 0,3% (0,2% - 0,4%). Não houve diferença significativa entre as percentagens de transferência após um e cinco cortes consecutivos. A partir disso, conclui-se que há transferência de S. Typhimurium da faca para a carne suína, bem como da carne suína para a faca. A porcentagem de transferência da carne suína contaminada para a faca é baixa, ao passo que a faca contaminada transfere alta percentagem do total de células de S. Typhimurium que carreia, durante a realização dos cortes. / Cross-contamination by Salmonella spp. during the pig slaughtering process contributes to increase the prevalence of positive carcasses in pre-chilling. One of the factors that may contribute to cross-contamination is the implementation of cuts and palpation of carcasses during the inspection process. The present study aimed to estimate, through laboratory tests, the transfer of Salmonella Typhimurium between knife and swine meat, to support future analyzes applied to the slaughter process. Independent and random observations of the transfer of a strain of S. Typhimurium Ampicillin-resistant (AmpR) between knife and swine meat were conducted, which formed four collections of data: Data collection A: Transfer of S. Typhimurium AmpR from contaminated knife to one portion of swine meat cut once (n = 20); Data collection B: Transfer of S. Typhimurium AmpR from contaminated knife to swine meat portion cut five times in the same place (n=20); Data collection C: Transfer of S. Typhimurium AmpR from portion of contaminated meat swine to knife after a cut (n=20); Data collection D: Transfer of S. Typhimurium AmpR from swine meat portion contaminated to knife after five cuts in the same place (n=20). The transfer percentages between the data collection were compared by t-test for independent samples using the R Core Team software. The mean transfer percentages in the data collection A and B were 6,26% (4,7% - 7,7%) and 8,32% (6,4% - 10,2%). In the C and D data collections, mean transfer rates were, respectively, 0.42% (0.3% - 0.5%) and 0.3% (0.2% - 0.4%). There was not significant difference between transfer rates after one and five consecutive cuts. From this, it is concluded that there is transfer of S. Typhimurium from the knife to the swine meat as well as from the swine meat to the knife. The percentage of transfer of contaminated pork to the knife is low, while the contaminated knife transfers at high percentage of the total number of S. Typhimurium cells it carries during cuts.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study aimed to verify the antioxidant activity of sun mushroom (Agaricus blazei Murrill) and its antioxidant effect in pork sausage. First drawn up the hydroethanolic extracts with different extraction times and temperatures, making the characterization of the total phenolics composition and antioxidant activity in vitro. After the extracts obtained at 70 ° C for 60 minutes at concentrations of 0%, 0.5%, 1.0% and 2.0% and also the sun mushroom powder, at concentrations of 0% , 1.0%, 2.0% and 4.0% were applied to pork sausage. Moisture, protein, ash and fat was analysed to characterize the products and every seven days was performed the analyzes of pH, color, TBARS values and microbiological counts. Sensory analysis was assessed by testing the acceptability through a hedonic scale with seven points and the purchase intent test. The results on the chemical composition, as well as the microbiological analysis for coagulase positive Staphylococcus, Coliforms at 35 º C and 45 º C, Salmonella and Clostridium sp sulfite reducer were in compliance with Brazilian legislation. With respect to product color, those treatments added sun mushrooms, both in extract form as powder, exhibited a yellowish color. At the end of the storage (21 days), the amount of TBARS for the sausages added with 2.0% of the sun mushroom extract was 0.705 ± 0.01 mg MDA/kg of sample and control 1.097 ± 0.11 mg MDA/kg of sample, while the 35th day, the amount of TBARS for sausages added with 1.0%, 2.0% and 4.0% sun mushroom powder was 0.604 ± 0.12 , 0.585 ± 0.11, 0.509 ± 0.12 mg MDA/Kg of sample, respectively, and control 1.131 ± 0.12 mg MDA/Kg of sample. The sun mushroom has no effect on the microbiological stability during storage, as assessed by counting the total mesophilic aerobic and psychrotrophic microorganisms. Regarding sensory characteristics showed good acceptability by consumers. Thus, it is concluded that the hydroethanolic extract of sun mushroom (Agaricus blazei Murrill) proved to be effective on the oxidative stability of pork sausage when added in a concentration of 2.0% by extending the shelf life up to 21 days storage, while in powder form was shown to be effective when added at a concentration of 1.0%, 2.0% and 4.0%, extending the shelf life up to 35 days under conditions of packaging permeable to oxygen and temperature cooling (+ 4 ° C) with a viable applicability as a natural antioxidant source with better performance in powder form. / O presente estudo teve por objetivo verificar a atividade antioxidante do cogumelo do sol (Agaricus blazei Murril) e seu efeito antioxidante em linguiça de carne suína. Primeiramente elaboraram-se os extratos hidroetanólicos com diferentes temperaturas e tempos de extração, realizando a caracterização da composição de fenólicos totais e a atividade antioxidante in vitro. Após, os extratos obtidos em temperatura de 70º C durante 60 minutos de extração, nas concentrações de 0 %, 0,5%, 1,0% e 2,0% e também o cogumelo do sol em pó, nas concentrações de 0 %, 1,0%, 2,0% e 4,0%, foram aplicados em linguiça de carne suína. As analises realizadas nos embutidos foram: composição centesimal (umidade, proteínas, cinzas, gordura) para a caracterização dos produtos e a cada sete dias realizadas as análises de pH, cor, índice de TBARS e análises microbiológicas. A análise sensorial foi avaliada através do teste de aceitabilidade com escala hedônica de sete pontos e teste de intenção de compra. Os resultados obtidos na composição centesimal, bem como nas análises microbiológicas para Staphylococcus coagulase positiva, Coliformes a 35 º C e a 45 º C, Samonella sp e Clostridium sulfito redutor dos produtos estavam de acordo com o exigido pela legislação brasileira. Com relação à cor do produto, todos aqueles tratamentos adicionados de cogumelo do sol, tanto na forma de extrato como em pó, apresentaram uma coloração com tonalidade amarelada. No período final de estocagem, ao 21º dia, o valor de TBARS para as linguiças adicionadas com 2,0% de extrato de cogumelo do sol foi de 0,705±0,01 mg MDA/kg de amostra e para o controle foi de 1,097±0,11 mg MDA/kg de amostra, enquanto que, ao 35º dia, o valor de TBARS para as linguiças adicionadas com 1,0%, 2,0% e 4,0% de cogumelo do sol em pó foi de 0,604±0,12; 0,585±0,11; 0,509±0,12 mg MDA/kg de amostra, respectivamente, e para o controle de 1,131±0,12 mg MDA/kg de amostra. O cogumelo do sol não possui efeito sobre a estabilidade microbiológica ao longo do armazenamento, avaliada pela contagem de microrganismos aeróbios mesófilos totais e psicrotróficos. Quanto às características sensoriais demonstrou boa aceitabilidade pelo consumidor. Desta forma, conclui-se que o extrato hidroetanólico de cogumelo do sol (Agaricus blazei Murril) mostrou ser efetivo sobre a estabilidade oxidativa de linguiça de carne suína quando adicionado na concentração de 2,0%, estendendo a vida de prateleira em até 21 dias de armazenamento, enquanto que na forma de pó mostrou ser efetivo quando adicionado na concentração de 1,0%, 2,0% e 4,0%, estendendo a vida de prateleira até 35 dias, nas condições de embalagem permeável ao oxigênio e temperatura de refrigeração (+ 4ºC). Logo, a aplicação de cogumelo do sol em linguiça de carne suína mostrou-se como uma fonte antioxidante natural viável com melhor desempenho na forma em pó.

A contaminação cruzada por Salmonella spp. durante o processo de abate de suínos contribui para o aumento da prevalência de carcaças positivas no pré-resfriamento. Um dos fatores que pode contribuir para a contaminação cruzada é a execução de cortes e palpação de carcaças durante o processo de inspeção. O presente estudo teve como objetivo estimar, por meio de ensaios laboratoriais, a transferência de Salmonella Typhimurium DT 177 entre faca e carne suína, para subsidiar análises futuras aplicadas ao processo de abate. Foram conduzidas observações independentes e aleatórias da transferência de uma cepa de S. Typhimurium resistente a Ampicilina (AmpR), entre faca e carne suína, as quais formaram quatro coleções de dados: Coleção de dados A: transferência de S. Typhimurium AmpR de faca contaminada para porção de carne suína cortada uma vez (n=20); Coleção de dados B: transferência de S. Typhimurium AmpR de faca contaminada para porção de carne suína cortada cinco vezes no mesmo lugar (n=20); Coleção de dados C: Transferência de S. Typhimurium AmpR de porção de carne suína contaminada para faca após execução de um corte (n=20); Coleção de dados D: Transferência de S. Typhimurium AmpR de porção de carne suína contaminada para faca após execução de cinco cortes no mesmo lugar (n=20). As bactérias transferidas foram quantificadas na lâmina da faca e na superfície da carne, a porcentagem de transferência foi calculada em todas as coleções de dados. As porcentagens de transferência entre as coleções de dados foram comparadas por meio de teste t para amostras independentes usando o programa R Core Team. As percentagens médias de transferência na coleção de dados A e B foram de 6,26% (4,7% – 7,7%) e 8,32% (6,4% - 10,2%). Nas coleções de dados C e D, as percentagens médias de transferência foram, respectivamente, 0,42% (0,3% - 0,5%) e 0,3% (0,2% - 0,4%). Não houve diferença significativa entre as percentagens de transferência após um e cinco cortes consecutivos. A partir disso, conclui-se que há transferência de S. Typhimurium da faca para a carne suína, bem como da carne suína para a faca. A porcentagem de transferência da carne suína contaminada para a faca é baixa, ao passo que a faca contaminada transfere alta percentagem do total de células de S. Typhimurium que carreia, durante a realização dos cortes. / Cross-contamination by Salmonella spp. during the pig slaughtering process contributes to increase the prevalence of positive carcasses in pre-chilling. One of the factors that may contribute to cross-contamination is the implementation of cuts and palpation of carcasses during the inspection process. The present study aimed to estimate, through laboratory tests, the transfer of Salmonella Typhimurium between knife and swine meat, to support future analyzes applied to the slaughter process. Independent and random observations of the transfer of a strain of S. Typhimurium Ampicillin-resistant (AmpR) between knife and swine meat were conducted, which formed four collections of data: Data collection A: Transfer of S. Typhimurium AmpR from contaminated knife to one portion of swine meat cut once (n = 20); Data collection B: Transfer of S. Typhimurium AmpR from contaminated knife to swine meat portion cut five times in the same place (n=20); Data collection C: Transfer of S. Typhimurium AmpR from portion of contaminated meat swine to knife after a cut (n=20); Data collection D: Transfer of S. Typhimurium AmpR from swine meat portion contaminated to knife after five cuts in the same place (n=20). The transfer percentages between the data collection were compared by t-test for independent samples using the R Core Team software. The mean transfer percentages in the data collection A and B were 6,26% (4,7% - 7,7%) and 8,32% (6,4% - 10,2%). In the C and D data collections, mean transfer rates were, respectively, 0.42% (0.3% - 0.5%) and 0.3% (0.2% - 0.4%). There was not significant difference between transfer rates after one and five consecutive cuts. From this, it is concluded that there is transfer of S. Typhimurium from the knife to the swine meat as well as from the swine meat to the knife. The percentage of transfer of contaminated pork to the knife is low, while the contaminated knife transfers at high percentage of the total number of S. Typhimurium cells it carries during cuts.

A suinocultura está amplamente difundida no Brasil, o quarto maior produtor mundial de carne suína. Seu efetivo está concentrado em maior parte na região Sul, com 48,8% dos suínos. Porém, a intensificação e o confinamento das criações expõem os animais a agentes patogênicos, como o Mycoplasma hyopneumoniae (Mhyo), causador da Pneumonia Enzoótica Suína (PES). A doença é caracterizada pela ocorrência de tosse seca não produtiva e lesões pulmonares de consolidação, denominadas hepatização. A vacinação de leitões é uma importante ferramenta empregada no controle da PES. Contudo, é relatado que a imunidade passiva adquirida pelos leitões através do colostro das matrizes suínas pode interferir na sua resposta à vacinação contra o Mhyo. Desta forma, este trabalho teve como objetivo avaliar a influência da imunidade materna na resposta à imunização de leitões contra Mhyo ao desmame. Dez matrizes foram divididas em dois grupos baseado na Razão S/P de um teste ELISA comercial , um com baixo nível de anticorpos (Ac) anti-Mhyo (BAc, Razão S/P <0,75) e outro com alto nível (AAc, Razão S/P ≥0,75). De cada fêmea, dois leitões eram controles (contr) e nove vacinados (vac) contra Mhyo. Estes grupos e tratamentos foram comparados entre si quanto a parâmetros de imunidade humoral, celular e comprometimento pulmonar ao abate. Após a ingestão de colostro, os leitões das fêmeas AAc mantiveram os maiores níveis de Ac, até os 56 dias de idade. Quando avaliados através do teste ELISA, dos 13 aos 99 dias depois de vacinados os leitões BAc-vac apresentaram níveis de Ac mais estáveis, com um aumento significativo aos 113 dias pós-vacinação. Os parâmetros celulares não diferiram entre grupos e tratamentos, com exceção dos linfócitos T CD4+CD8+, com menores percentuais entre os vacinados. Independente do grupo, os vacinados tiveram menor comprometimento pulmonar, porém os BAc-vac tiveram menos lesões que os AAc-vac. Os resultados demonstraram que a vacinação dos leitões contra Mhyo ao desmame os protege contra o agente, levando ao menor comprometimento pulmonar, principalmente quando a imunização ocorre na presença de baixos níveis de Ac passivos. / Swine production is widespread in Brazil, being the fourth largest producer of pork meat. Swinesare concentrated in the Southern region, comprising 48.8%of pig population. However, due to confinement system, pigs are exposed to pathogens such as the bacteria Mycoplasma hyopneumoniae (Mhyo), responsible for swine enzootic pneumonia (SEP). The disease is characterized by a dry, nonproductive cough, and macroscopic areas of consolidation in the lung. The piglet vaccination is an important practice to SEP control. However, it is reported that passive immunity acquired by the piglets through the colostrum of sows may affect their response to vaccination against Mhyo. The objective of this study was to evaluate the influence of maternal immunity in the pig vaccination against Mhyo after weaning. Ten sows were divide in two groups according with the ELISA’s S/P Ratio, with low (LAb, S/P Ratio <0.75) or high (HAb, S/P Ratio ≥0.75) level of antibodies (Ab). From each sow, two piglets were controls (contr) and nine vaccinated (vac) against Mhyo. Piglets' humoral and cellular immunity and pulmonary lesions were compared between the treatments and groups of sows.The Ab level after colostrum intake was higher in piglets from HAb group of sows until 56 days of age. When evaluated by ELISA, LAb-vac piglets showed a more stable Ab levels from 13 to 99 days post-vaccination, with a significant increase at 113 days post-vaccination. No differences were detected between groups and treatments according with cellular parameters, except T CD4+CD8+ lymphocytes percentages, that were lower in vaccinated piglets. Regardless of the group, vaccinated pigs had lower pulmonary lesions, but the LAb-vac piglets had less damage than the HAb-vac. These results demonstrated that piglet vaccination against Mhyo at weaning protects them against the pathogen and provides lower pulmonary lesions, especially when the immunization occurs in the presence of low levels of maternal Ab.

Estudos in vitro de absorção percutânea são uma importante ferramenta para avaliação de formulações semissólidas e transdérmicas. Embora haja um grande número de agências reguladoras preocupadas com a harmonização metodológica, em muitos parâmetros elas permanecem flexíveis e isto é possível verificar na ampla variedade e divergências encontradas na literatura. O objetivo do trabalho foi avaliar parâmetros ainda flexíveis a respeito dos estudos in vitro como modo de separação das camadas da pele, permeabilidade da pele congelada (tempo de armazenamento) e diferença de permeabilidade dos locais anatômicos. Os estudos foram conduzidos utilizando células de Franz, pele suína como membrana e formulações (comercializada e inovadora) contendo penciclovir. Inicialmente, nanoemulsões foram preparadas utilizando técnica de homogeneização a alta pressão, caracterizadas, incorporadas em gel de carbômero 940 e avaliadas quanto à liberação tópica em pele suína. Simultaneamente ao desenvolvimento da formulação foi desenvolvido e validado método analítico para quantificação do fármaco nas formulações e nas camadas da pele suína. As nanoemulsões apresentaram-se monodispersas com diâmetro de gotícula em torno de 180-200 nm, potencial zeta de -27 mV e teor de penciclovir de 98% mantendo sua estrutura após a incorporação em carbômero 940. A metodologia analítica demonstrou ter alta sensibilidade (LoQ 0,05 μg/mL), especificidade e uma adequada recuperação do fármaco a partir das matrizes biológicas (90 – 104%). Quanto aos estudos in vitro de comparação de metodologias, foi possível observar que, dependendo da solubilidade do fármaco em água e das características da formulação, o método clássico de separação das camadas da pele por imersão em água não é o mais indicado. Já para permeabilidade da pele suína congelada, os resultados obtidos indicam um aumento significativo na penetrabilidade e permeabilidade após um mês de congelamento. Dentre os locais anatômicos testados, não houve diferença entre abdômen e orelha suína desde que obtidos antes do procedimento de escaldo. / In vitro percutaneous absorption studies are an important tool for evaluation of semisolid and transdermal formulations. Although there are a large number of official guides concerned with methodological harmonization in many parameters they remain flexible and it is possible to see the wide variety and differences reported in the literature. The aim of study was to evaluate some parameters regarding the in vitro studies as the mode of skin layers separation, skin frozen stability and permeability difference of anatomical sites. These studies were conducted with porcine skin and formulations (conventional and novel) using penciclovir as model drug. Initially, nanoemulsions were prepared using high pressure homogenization, characterized and incorporated into carbomer 940 gel and evaluated for topical delivery using porcine skin. Simultaneously with the development of the formulation, analytical method for quantification of the drug in the formulations and porcine skin layers was developed and validated. The nanoemulsions presented themselves monodisperse with droplet diameter of 180-200 nm, zeta potential of about -27 mV and penciclovir content of 98% maintaining their structure after incorporation into carbomer 940. The analytical methodology was shown to have high sensitivity (LOQ 0.05 μg/mL), specificity and adequate recovery of drug from the biological matrices (90-104%). Regarding the in vitro comparison methodologies, it was observed that, depending on the solubility of the drug in water and the characteristics of the formulation, the classical separation is not the most suitable for separation of the skin layers. For the stability of frozen porcine skin, the results indicate a significant increase in permeability and penetrability after one month of freezing. Within the anatomical sites tested, there was no difference between the abdomen and ear porcine skin since obtained before the scald procedure.