Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, 2015. / Made available in DSpace on 2016-03-01T04:06:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 337295.pdf: 8800704 bytes, checksum: ca2946fc44082d1036cc2fac505f1bd8 (MD5) Previous issue date: 2015 / O propósito deste estudo foi o desenvolvimento de um método analítico utilizando a técnica de microextração em fase líquida suportada por membrana oca de polipropileno em configuração trifásica para extração de sulfonamidas de amostras aquosas e urina. Foram otimizados o tipo de solvente orgânico empregado como membrana líquida além de outros parâmetros que afetam a eficiência da extração empregando experimentos multivariados. As condições ótimas da extração foram a adição de 95% de sulfato de amônio na fase doadora, 1-octanol para o preenchimento dos poros da fibra oca, pH das fases doadora e receptora em 5,0 e 10,0, respectivamente, e a não utilização de solvente orgânico como aditivo na amostra. A análise das sulfonamidas foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência e a detecção por arranjo de diodos. Alguns parâmetros analíticos do método proposto foram avaliados para amostra aquosa. O limite de quantificação para as sulfonamidas em amostra aquosa foi maior que 2 µg L-1 e desvio padrão relativo (RSD) menor que 13%. Os estudos de recuperação das sulfonamidas para amostras de água superficial de açude revelaram valores variando entre 61 - 117 %. De acordo com os resultados, o método proposto apresenta-se promissor para análises de rotina em aguas superficiais, tendo em vista a emergente preocupação da contaminação ambiental pelas sulfonamidas.<br> / Abstract : The goal of this study was the development of an analytical method using liquid phase microextraction supported with polypropylene hollow fiber in three phases configuration for the extraction of sulfonamides. The type of organic solvent used for liquid membrane as well as other parameters that influences the extraction efficiency was optimized applying multivariate design. The optimum extraction conditions defined was the addition of 95% ammonium sulfate in the donor phase, 1-octanol for the hollow fiber pores filling, acceptor and donor phase pH at 5 and 10, respectively, and the no use of an organic solvent as sample additive. The sulfonamide analysis was carried out by high performance liquid chromatography and diode array detection. Some analytical parameters of the developed method was evaluated for aqueous samples. The quantification limit for aqueous sample was 2 µg L-1 and a RSD lower than 13%. The recovery obtained for the determination of sulfonamides in surface water dam revealed values ranging from 61 - 117%. According to the results the proposed method has become promising for routine analysis in surface water in view of the increasing concern of the environmental contamination by sulfonamides.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-10-30T10:24:52Z No. of bitstreams: 2 Tese - Mirian Rita Carrilho de Castro - 2017.pdf: 7039906 bytes, checksum: 5d352db979557bb35c672dba708ae0e8 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-10-30T10:26:18Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Mirian Rita Carrilho de Castro - 2017.pdf: 7039906 bytes, checksum: 5d352db979557bb35c672dba708ae0e8 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-30T10:26:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Mirian Rita Carrilho de Castro - 2017.pdf: 7039906 bytes, checksum: 5d352db979557bb35c672dba708ae0e8 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-09-01 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / The chalcones are key intermediates for the biosynthesis of flavonoids and have shown an abundance of pharmacological effects including the antitumor effect. Thus, the synthesis and characterization of several chalcones and derivatives become important to develop a new class of compounds having antitumor activity. In the present work, the synthesis of chalcones, nitrochalcone sulfonamides and quinolinones was performed. By adjusting the reaction time and the sequence of the reactions, hybrids of open-chain chalcone sulfonamide whose molecular hybridization occurred at the ortho position of the benzoyl chalcone group through the Claisen- Schmidt condensation of acetophenone sulfonamide and nitrobenzaldehyde can be obtained at shorter reaction times, whereas quinolinone from cyclization at β carbon can be achieved if the reaction is stopped sequentially later. It is also noted that a novel structure, a chalcone (bis) sulfonamide, was prepared when chalcone was first synthesized and then reacted with benzenesulfonyl chloride. From the sulfonamide chalcones prepared with the m- aminoacetophenone sulfonamide and the o-, m- and p-nitrobenzaldehyde, a single product was formed. Among the 21 compounds prepared, five were ketone sulfonamides and sixteen were hybrid compounds (chalcones, chalcones, sulfonamides and quinolinones), which were purified by extraction, recrystallization and column chromatography and characterized by small molecule crystallography, melting point, Proton Nuclear Magnetic Resonance ( 1 H NMR) and infrared IV (IR). The antitumor activity was evaluated against three cancer cell lines: SF-295 (human glioblastoma), PC-3 (prostate) and HCT-116 (colon). Compounds 39, 40, 42, 43, 45a, 48a, 48b, 48c, 49 and 51 were cytotoxic to the three tumor cell lines tested. However, the quinolinones showed no relevant cytotoxic effect. It is also worth noting that compound 45a with a higher cytotoxic effect than doxorubicin, a drug used today against the three cancer cell lines evaluated, was a promising prototype for a new drug. / As chalconas são compostos intermediários da biossíntese de flavonóides e têm demonstrado uma variedade de efeitos farmacológicos entre eles o efeito antitumoral. Assim a síntese e caracterização de várias chalconas e derivados se tornam importantes para o desenvolvimento de uma nova classe de compostos com atividade antitumoral. No presente trabalho foi realizada a síntese de chalcona, nitro chalconas sulfonamidas e quinolinonas. Ajustando o tempo e a ordem das reações, os híbridos de chalcona sulfonamida de cadeia aberta, cuja hibridação molecularocorreu na posição orto do grupo de chalcona benzoíla através da condensação Claisen-Schmidt da acetofenona sulfonamida e nitrobenzaldeído, podem ser obtidos em tempos de reação mais curtos, enquanto que a quinolinona proveniente da ciclização no carbono β pode ser alcançada se a reação for parada sequencialmente mais tarde. Destaca-se uma nova estrutura, uma chalcona (bis) sulfonamida, foi formada quando se sintetizou a chalcona primeiramente e então reagiu-a com o cloreto de benzenosulfonila. A partir das chalconas sulfonamidas preparadas com a m- aminoacetofenona sulfonamida e o o-, m- e p-nitrobenzaldeído, formou-se apenas um produto. Dos 21 compostos preparados 5 são cetonas-sulfonamidas e 16 compostos híbridos (chalconas, chalconas sulfonamidas e quinolinonas), que foram purificados por extração, recristalização e coluna de separação, e caracterizados por cristalografia de pequenas moléculas, ponto de fusão ressonância magnética de prótons ( 1 H-RMN) e infravermelho (IV). A atividade antitumoral foi avaliada frente a três linhagens de células cancerosas: SF-295 (glioblastoma - humano), PC-3 (próstata) e HCT-116 (colón). Os compostos 39, 40, 42, 43, 45a, 48a, 48b, 48c, 49 e 51, apresentaram citotoxicidade nas três linhagens de células tumorais testadas. Já as quinolinonas não apresentaram efeito citotóxico relevante. Destaca-se ainda que o composto 45a com maior efeito citotóxico do que a doxorrubicina, medicamento utilizado hoje contra as três linhagens celulares de câncer avaliadas, mostra-se como um promissor protótipo a um novo fármaco.

Os quimioterápicos antimicrobianos são considerados contaminantes emergentes, com a capacidade de criar resistência em bactérias. Têm sido o foco de inúmeras pesquisas relacionadas a impactos ambientais, mas no Brasil, as pesquisas sobre a sua ocorrência em ambientes aquáticos continentais e costeiros são escassas. A cidade de Ubatuba tem uma densidade demográfica cinco vezes maior que a média nacional, aumentada em até doze vezes no verão, pressionando ainda mais os ecossistemas da região. Os rios Acaraú, Lagoa-Tavares, Grande e Indaiá deságuam na baía de Ubatuba, comprometendo a qualidade das suas águas. Este trabalho investigou a contribuição da descarga desses rios para a ocorrência e distribuição de quimioterápicos antimicrobianos (fluoroquinolonas e sulfonamidas) na baía de Ubatuba. Foi analisado um total de 36 amostras de água superficial. As coletas foram realizadas no período seco/chuvoso de 2014/2015. Para a determinação e quantificação dos fármacos foi utilizada SPE como método de preparo de amostra e CLAE-MS/MS para a detecção e quantificação dos antimicrobianos estudados. As características físico-químicas pH, temperatura, salinidade, oxigênio dissolvido, potencial redox (ORP), além do Carbono Orgânico Dissolvido (COD) também foram determinados para caracterização das águas da região. A distribuição espaço-temporal dos fármacos e a possível associação com os demais dados investigados foi avaliada pela ferramenta quimiométrica CA, visando à extração da maior quantidade possível de informações. Os rios e, consequentemente a baía estavam impactados pelo despejo de esgoto doméstico e os seguintes quimioterápicos antimicrobianos foram encontrados: sulfametoxazol (SMX), sulfatiazol (STZ), sulfacloropiridiazina (SCP), sulfaquinoxalina (SQX) e norfloxacina (NOR). Observou-se uma variação espacial e temporal, nos perfis de contaminação revelados pela CA. / Antimicrobial chemotherapeutical agents are considered emerging contaminants capable of creating bacterial resistance. They have been the focus of numerous studies related to environmental impacts, but in Brazil, there is little research on their occurrence in continental and coastal aquatic environments. The city of Ubatuba has a population density five times higher than the national average, which may be increased up to twelve times during the summer, pushing further the region\'s ecosystems. The rivers Acaraú, Lagoa-Tavares, Grande and Indaiá flow into Ubatuba Bay, compromising the quality of its waters. This work investigated those rivers\' discharge contribution on the occurrence and distribution of antimicrobial chemotherapeutical agents (fluoroquinolones and sulfonamides) in Ubatuba Bay. Thirty-six samples of surface water were analyzed. The samples were withdrawn during the dry and rainy seasons of 2014 and 2015, respectively. For the determining and quantifying the antimicrobial chemotherapeutical agents, it was used SPE as a sample preparation method and HPLC?MS/MS for their detection and quantification. Physicochemical characteristics like pH, temperature, salinity, dissolved oxygen, and redox potential (ORP), as well as dissolved organic carbon (DOC) were also determined to characterize the waters of the region. The spatial-temporal distribution of the agents and their possible association with other investigated data was assessed by the chemometric tool CA, aiming at extracting the greatest possible amount of information. The rivers and, consequently, the bay were contaminated by domestic sewage discharges and the following antimicrobial chemotherapeutical agents were detected: sulfamethoxazole (SMX), sulfathiazole (STZ), sulfachloropyridiazine (SCP), sulfaquinoxaline (SQX), and norfloxacin (NOR). The contamination profiles revealed by the CA showed a spatial variation and a temporal one.

Os quimioterápicos antimicrobianos são considerados contaminantes emergentes, com a capacidade de criar resistência em bactérias. Têm sido o foco de inúmeras pesquisas relacionadas a impactos ambientais, mas no Brasil, as pesquisas sobre a sua ocorrência em ambientes aquáticos continentais e costeiros são escassas. A cidade de Ubatuba tem uma densidade demográfica cinco vezes maior que a média nacional, aumentada em até doze vezes no verão, pressionando ainda mais os ecossistemas da região. Os rios Acaraú, Lagoa-Tavares, Grande e Indaiá deságuam na baía de Ubatuba, comprometendo a qualidade das suas águas. Este trabalho investigou a contribuição da descarga desses rios para a ocorrência e distribuição de quimioterápicos antimicrobianos (fluoroquinolonas e sulfonamidas) na baía de Ubatuba. Foi analisado um total de 36 amostras de água superficial. As coletas foram realizadas no período seco/chuvoso de 2014/2015. Para a determinação e quantificação dos fármacos foi utilizada SPE como método de preparo de amostra e CLAE-MS/MS para a detecção e quantificação dos antimicrobianos estudados. As características físico-químicas pH, temperatura, salinidade, oxigênio dissolvido, potencial redox (ORP), além do Carbono Orgânico Dissolvido (COD) também foram determinados para caracterização das águas da região. A distribuição espaço-temporal dos fármacos e a possível associação com os demais dados investigados foi avaliada pela ferramenta quimiométrica CA, visando à extração da maior quantidade possível de informações. Os rios e, consequentemente a baía estavam impactados pelo despejo de esgoto doméstico e os seguintes quimioterápicos antimicrobianos foram encontrados: sulfametoxazol (SMX), sulfatiazol (STZ), sulfacloropiridiazina (SCP), sulfaquinoxalina (SQX) e norfloxacina (NOR). Observou-se uma variação espacial e temporal, nos perfis de contaminação revelados pela CA. / Antimicrobial chemotherapeutical agents are considered emerging contaminants capable of creating bacterial resistance. They have been the focus of numerous studies related to environmental impacts, but in Brazil, there is little research on their occurrence in continental and coastal aquatic environments. The city of Ubatuba has a population density five times higher than the national average, which may be increased up to twelve times during the summer, pushing further the region\'s ecosystems. The rivers Acaraú, Lagoa-Tavares, Grande and Indaiá flow into Ubatuba Bay, compromising the quality of its waters. This work investigated those rivers\' discharge contribution on the occurrence and distribution of antimicrobial chemotherapeutical agents (fluoroquinolones and sulfonamides) in Ubatuba Bay. Thirty-six samples of surface water were analyzed. The samples were withdrawn during the dry and rainy seasons of 2014 and 2015, respectively. For the determining and quantifying the antimicrobial chemotherapeutical agents, it was used SPE as a sample preparation method and HPLC?MS/MS for their detection and quantification. Physicochemical characteristics like pH, temperature, salinity, dissolved oxygen, and redox potential (ORP), as well as dissolved organic carbon (DOC) were also determined to characterize the waters of the region. The spatial-temporal distribution of the agents and their possible association with other investigated data was assessed by the chemometric tool CA, aiming at extracting the greatest possible amount of information. The rivers and, consequently, the bay were contaminated by domestic sewage discharges and the following antimicrobial chemotherapeutical agents were detected: sulfamethoxazole (SMX), sulfathiazole (STZ), sulfachloropyridiazine (SCP), sulfaquinoxaline (SQX), and norfloxacin (NOR). The contamination profiles revealed by the CA showed a spatial variation and a temporal one.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:27:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 341241.pdf: 3543052 bytes, checksum: 36790c5c0f439dd829f9e8eaefb5aa21 (MD5) Previous issue date: 2016 / As neoplasias hematológicas, que incluem as leucemias agudas e o mieloma múltiplo compreendem um grupo heterogêneo de doenças originadas a partir da proliferação anormal e descontrolada de uma célula clonal neoplásica de origem hematopoiética. Não é incomum a observação de células neoplásicas que desenvolvem resistência aos fármacos utilizados e pacientes que apresentam morbidade associada ao uso de quimioterápicos. Dessa forma, há necessidade de se investigar novas estruturas para o desenvolvimento de fármacos que tenham maior eficiência em induzir morte apenas nas células tumorais, que sejam de fácil administração, que não causem resistência e com poucos ou insignificantes efeitos adversos. Duas classes de compostos, as sulfonamidas e as quinonas, são bastante relatadas na literatura com atividade citotóxica. Nessa perspectiva, este estudo objetivou investigar o efeito citotóxico de um grupo de sulfonamidas e de uma quinona (GE2, primina) sobre linhagens celulares de neoplasias hematológicas. Entre as 26 sulfonamidas avaliadas, pelo método do MTT, o composto DFS16 (N-(3,3-difenilpropil)-2,4-dinitrobenzenosulfonamida) foi o selecionado para os ensaios posteriores, por apresentar maior atividade citotóxica sobre as três linhagens celulares utilizadas nesse trabalho (K562, Jurkat e MM.1S). Os resultados desse estudo permitem sugerir que a sulfonamida DFS16 possui atividade citotóxica sobre células K562 e Jurkat pela indução de apoptose (observada na microscopia com brometo de etídio e laranjada de acridina, fragmentação de DNA e marcação com Anexina V) por meio da ativação das vias intrínseca e extrínseca, além do envolvimento de alterações do potencial de membrana mitocondrial. A ativação da via intrínseca nessas células parece estar relacionada com a diminuição da expressão da proteína Bcl-2 e aumento da expressão da proteína Bax. Além disso, a diminuição da expressão da proteína de proliferação celular Ki-67 e o aumento da expressão do fator indutor de apoptose, observados por citometria de fluxo, demonstram possível relação com o mecanismo de morte induzido pelo tratamento com DFS16 nas células Jurkat. A apoptose induzida pela sulfonamida DFS16 nas células MM.1S sugere que a ativação ocorre por uma via diferente daquelas investigadas nesse trabalho, sem relação com a sinalização de caspases e com o envolvimento do bloqueio na progressão do ciclo celular na fase G2/M. Os resultados encontrados para a quinona GE2 indicam que a apoptose possivelmente é ativada pelas vias intrínseca e extrínseca nas células K562, Jurkat e MM.1S, com diminuição do potencial mitocondrial, além de diminuição da expressão da proteína Ki-67. Assim como, a quinona GE2 apresentou excelente seletividade para as células neoplásicas quando comparado com o tratamento em células não neoplásicas. O conjunto de resultados sugere que os compostos DFS16 e GE2 são promissores protótipos para o estudo e desenvolvimento de novos fármacos para o tratamento de neoplasias hematológicas.<br> / Abstract : Hematological malignancies, including acute leukemias and multiple myeloma, comprise a heterogeneous group of diseases originated from an abnormal and uncontrolled proliferation of neoplastic clonal cells of hematopoietic origin. It is not uncommon to observe neoplastic cells that develop resistance to the used drugs, as well as patients with morbidity associated to chemotherapy. Thus, it is necessary to investigate new structures for the development of drugs that present higher efficiency and specificity in inducing tumor cells death, that are easy to administer, that do not cause resistance and that have little or negligible adverse effects. Two classes of compounds, sulfonamides and quinones, were reported in the literature with a wide range of pharmacological properties and among them, the antitumor activity. In this perspective, this study aimed to investigate the cytotoxic effect of a group of sulfonamides and a quinone (GE2, primina) on hematological malignancies cell lines. Among the 26 sulfonamides evaluated, by MTT method, the compound DFS16 (N-(3,3-diphenylpropyl)-2,4-dinitrobenzenesulfonamide) was selected for the further tests due to its higher cytotoxic activity against the three cell lines that were analyzed in this study (K562, Jurkat and MM.1S). The results suggest that sulfonamide DFS16 has cytotoxic activity against K562 and Jurkat cells by apoptosis induction (observed in ethidium bromide and acridine orange microscopy, DNA fragmentation and labeling with Annexin V) by the intrinsic and the extrinsic pathways, involving also the mithocondrial membrane potential. The activation of the intrinsic pathway in these cells appears to be related by decreased Bcl-2 expression and increased Bax expression. Furthermore, the decreased expression of the cellular proliferation protein Ki-67 and the increased expression of apoptosis-inducing factor, observed by flow cytometry, also appear to be related to the death mechanism induced by DFS16 in Jurkat cells. Apoptosis induced by sulfonamide DFS16 in MM.1S cells appear to be activated by a different pathway from those investigated in this work, i.e. no relation with caspase signaling and blocking the cell cycle progression at G2/M phase. The quinone GE2 appears to induce apoptosis by activation of the intrinsic and the extrinsic pathways in K562, Jurkat and MM.1S cell lines, and by decreasing the expression of Ki-67 protein. The results suggest that the compounds DFS16 and GE2 are promising molecules for the use in hematological malignancies therapy or as prototypes for the development of new chemotherapics.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2017-02-15T14:12:41Z No. of bitstreams: 1 Paloma Nascimento dos Santos.pdf: 728302 bytes, checksum: d524b8e76e6d05781b7d35ebc0729a99 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-15T14:12:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paloma Nascimento dos Santos.pdf: 728302 bytes, checksum: d524b8e76e6d05781b7d35ebc0729a99 (MD5) Previous issue date: 2009-03-16 / Antimicrobials are widely used in veterinary medicine and these residues may remain in food of animal origin, above values considered safe, creating risks to human health and the environment. This work was validate methodologies for determination of sulfonamides in shrimp and florfenicol in shrimp and tilapia using High Performance Liquid Chromatography as analytical technique. The determination of sulphonamides in shrimp was accomplished using a C18 column and mobile phase composed of ACN:water (25:75) in gradient method. The sample was extracted using acetonitrile and filtrade on anhydrous sodium sulphate. After evaporation, was a clean up in ion exchange cartridges (500 mg/6mL) followed by evaporation of the solvent to dryness and subsequent ressuspension in acetic acid 0.5% for filtration and analysis by HPLC. The determination of florfenicol in shrimp and tilapia was also used a C18 column and isocratic method. The extraction was performed with ethyl acetate, followed by centrifugation and extraction of fat phase with hexane. After a second centrifugation, the upper phase was discarded and the aqueous phase filtered and taken for analysis by HPLC. The methodology for determination of sulfonamides was shown to be selective and linear for a range of work from 100 to 1000μg L-1. The LOD and LOQ (μg L-1) was 6.35 and 20.19 to sulfathiazole, 2.44 and 7.76 for sulfamethazine, 0.58 and 1.83 for sulfamethoxazole, 1.49 and 4.75 for sulfadimethoxine and 3.41 and 10.85 for sulfaquinoxaline. The methodology for determining florfenicol shown to be selective and linear for a range of work from 0.1 to 3.0 mg L-1 and the LOD and LOQ (mg L-1) to matrix shrimp were 2.97 and 15.01 mg kg-1 respectively. For tilapia matrix the lowest concentrations detected and quantified by method, were 3.64 and 18.54 mg kg-1 respectively. All results are in accordance with applicable law for the determination of antimicrobial by HPLC. / Antimicrobianos são largamente empregados na medicina veterinária e resíduos destes podem permanecer nos alimentos de origem animal, acima de valores considerados seguros, gerando riscos para a saúde humana e para o meio ambiente. O objetivo deste trabalho foi validar metodologias para determinação de sulfonamidas em camarão e florfenicol em camarão e tilápia utilizando a Cromatografia Líquida de Alta Eficiência como técnica analítica. A determinação de sulfonamidas em camarão foi realizada usando uma coluna C18 e fase móvel composta por ACN;Água (25:75) em método gradiente. A amostra foi extraída utilizando acetonitrila e filtrada em sulfato de sódio anidro. Após a evaporação, foi feito um clean up em cartuchos de troca iônica (500 mg/6mL) seguida de evaporação do solvente até secura e posterior ressuspensão ácido acético 0,5% para filtração e análise por CLAE. Para a determinação de lorfenicol em camarão e tilápia também foi utilizada uma coluna C18 e méodo isocrático. A extração foi realizada com acetato de etila, seguido de centrifugação e extração da gordura com hexano. Após uma segunda centrifugação, a fase superior foi descartada e a fase aquosa filtrada e levada para análise por CLAE. A metodologia para determinação de sulfonamidas mostrou-se seletivo e linear para uma faixa de trabalho de 100 a 1000μg L-1 a apresentou limites de detecção e quantificação para a sulfatiazol de 6,35 e 20,19, para a sulfametazina 2,44 e 7,76, para a sulfametoxazol 0,58 e 1,83, para a sulfadimetoxina 1,49 e 4,75 e para a ulfaquinoxalina 3,41 e 10,85 μg kg-1 respectivamente. A metodologia para determinação de florfenicol mostrou-se seletivo e linear para uma faixa de trabalho de 0,1 a 3,0 mg L-1 e o limite de detecção e quantificação do método para a matriz camarão foram 2,97 e 15,01 μg kg-1 respectivamente. Para a matriz tilápia as menores concentrações detectadas e quantificadas pelo método foram de 3,64 e 18,54 μg kg-1 respectivamente. Os métodos validados mostraram-se adequados para a determinação dos antimicrobianos citados e todos os resultados encontram-se em conformidade com a legislação vigente.