Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-22Bitstream added on 2014-06-13T19:31:45Z : No. of bitstreams: 1 condas_laz_me_botfmvz.pdf: 1052264 bytes, checksum: 8c7756dba0d74f545598e900b1ca1700 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Nocardia é um microorganismo ubíquo, relacionado a processos piogranulomatosos supurativos de difícil resolução terapêutica em humanos e animais. Foi investigada caracterização fenotípica, genotípica, perfil de sensibilidade aos antimicrobianos, e termorresistência à fervura em 95 linhagens de Nocardia spp. provenientes de animais domésticos e humanos. Em animais de produção a afecção mais comum foi mastite bovina identificada em 71 linhagens (74,73%). Em animais de companhia obteve-se mais isolamento nos cães com 12 linhagens (12,63%), principalmente de tecido cutâneo. Foram estudados sete isolados de Nocardia spp. obtidos de humanos, com quadros cutâneos e neurológicos. A caracterização molecular e análise filogenética realizada por PCR da fração 16S rRNA identificaram as seguintes espécies: Nocardia nova (68,42%), Nocardia farcinica (13,68%), Nocardia cyriacigeorgica (4,58%), Nocardia puris (3,67%), Nocardia veterana (3,67%), Nocardia africana (2,10%), Nocardia asiatica (0,91%) e Nocardia arthritidis (0,91%). A ocorrência de multirresistência a três ou mais e a cinco ou mais antimicrobianos ocorreu em, respectivamente, 42,88% e 14,28%. A comparação entre perfil de sensibilidade por disco-difusão e concentração inibitória mínima mostrou correlação fraca, exceto para amicacina. Na avaliação da termorresistência à fervura foi observado reisolamento de 84,21% das linhagens após atingir 100ºC no leite, 50,52% após um minuto de fervura a 100ºC e 2,10% após cinco minutos. Depreendeu-se no estudo alta similaridade entre linhagens de Nocardia sp. isoladas de animais domésticos e humanos, elevada multirresistência aos antimicrobianos utilizados na terapia da nocardiose em animais e humanos, e a termorresistência à fervura do leite, ressaltando riscos de consumo do leite de animais com nocardiose mamária / Nocardia is an ubiquitous microorganism, environmental, related to supurative pyogranulomatous of difficult treatment in humans and domestic animals. The phenotypic and genotypic characterization, antimicrobial susceptibility profile and thermorresistance to boiling of 95 strains of Nocardia spp., from both domestic animals and humans, were investigated. In production animals the most common affection was the bovine mastitis, identified in 71 strains (74,73%). Among the small animal, most of the isolates were from dogs, a total of 12 strains (12,63%), especially from cutaneous manifestations. Seven isolates were obtained from humans, with emphasis for cases with cutaneous and neurological signs. The molecular characterization and the phylogenetic analysis made through PCR of the 16S rRNA resulted in the identification: Nocardia nova (68,42%), Nocardia farcinica (13,68%), Nocardia cyriacigeorgica (4,58%), Nocardia puris (3,67%), Nocardia veterana (3,67%), Nocardia africana (2,10%), Nocardia asiatica (0,91%) and Nocardia arthritidis (0,91%). The occurrence of multi-resistance to three or more and five or more antimicrobials was observed in 42,88% and 14,28%of the studied strains, respectively. The comparison between the susceptibility profile through disc diffusion and the minimum inhibitory concentration showed a weak correlation, except for amikacin. In the evaluation of thermorresistance to boiling 84,21% of the strains were re-isolated after reaching 100°C in milk, 50,52% after boiling for one minute at 100ºC and 2,10% after boiling for 5 minutes. This study showed high similarity between Nocardia sp. strains isolated from domestic animals and humans, increased multi-resistance to some of the most used antimicrobials in the therapy of nocardiosis in animals and humans, thermorresistance to the boiling conditions of milk, emphasizing the risk of consuming products from animals with mammary nocardiosis

Orientador: Márcio Garcia Ribeiro / Banca: Elisabeth Oliveira Costa Freitas Guimarães / Banca: José Paes de Almeida Nogueira Pinto / Banca: Márcio Garcia Ribeiro / Resumo: Nocardia é um microorganismo ubíquo, relacionado a processos piogranulomatosos supurativos de difícil resolução terapêutica em humanos e animais. Foi investigada caracterização fenotípica, genotípica, perfil de sensibilidade aos antimicrobianos, e termorresistência à fervura em 95 linhagens de Nocardia spp. provenientes de animais domésticos e humanos. Em animais de produção a afecção mais comum foi mastite bovina identificada em 71 linhagens (74,73%). Em animais de companhia obteve-se mais isolamento nos cães com 12 linhagens (12,63%), principalmente de tecido cutâneo. Foram estudados sete isolados de Nocardia spp. obtidos de humanos, com quadros cutâneos e neurológicos. A caracterização molecular e análise filogenética realizada por PCR da fração 16S rRNA identificaram as seguintes espécies: Nocardia nova (68,42%), Nocardia farcinica (13,68%), Nocardia cyriacigeorgica (4,58%), Nocardia puris (3,67%), Nocardia veterana (3,67%), Nocardia africana (2,10%), Nocardia asiatica (0,91%) e Nocardia arthritidis (0,91%). A ocorrência de multirresistência a três ou mais e a cinco ou mais antimicrobianos ocorreu em, respectivamente, 42,88% e 14,28%. A comparação entre perfil de sensibilidade por disco-difusão e concentração inibitória mínima mostrou correlação fraca, exceto para amicacina. Na avaliação da termorresistência à fervura foi observado reisolamento de 84,21% das linhagens após atingir 100ºC no leite, 50,52% após um minuto de fervura a 100ºC e 2,10% após cinco minutos. Depreendeu-se no estudo alta similaridade entre linhagens de Nocardia sp. isoladas de animais domésticos e humanos, elevada multirresistência aos antimicrobianos utilizados na terapia da nocardiose em animais e humanos, e a termorresistência à fervura do leite, ressaltando riscos de consumo do leite de animais com nocardiose mamária / Abstract: Nocardia is an ubiquitous microorganism, environmental, related to supurative pyogranulomatous of difficult treatment in humans and domestic animals. The phenotypic and genotypic characterization, antimicrobial susceptibility profile and thermorresistance to boiling of 95 strains of Nocardia spp., from both domestic animals and humans, were investigated. In production animals the most common affection was the bovine mastitis, identified in 71 strains (74,73%). Among the small animal, most of the isolates were from dogs, a total of 12 strains (12,63%), especially from cutaneous manifestations. Seven isolates were obtained from humans, with emphasis for cases with cutaneous and neurological signs. The molecular characterization and the phylogenetic analysis made through PCR of the 16S rRNA resulted in the identification: Nocardia nova (68,42%), Nocardia farcinica (13,68%), Nocardia cyriacigeorgica (4,58%), Nocardia puris (3,67%), Nocardia veterana (3,67%), Nocardia africana (2,10%), Nocardia asiatica (0,91%) and Nocardia arthritidis (0,91%). The occurrence of multi-resistance to three or more and five or more antimicrobials was observed in 42,88% and 14,28%of the studied strains, respectively. The comparison between the susceptibility profile through disc diffusion and the minimum inhibitory concentration showed a weak correlation, except for amikacin. In the evaluation of thermorresistance to boiling 84,21% of the strains were re-isolated after reaching 100°C in milk, 50,52% after boiling for one minute at 100ºC and 2,10% after boiling for 5 minutes. This study showed high similarity between Nocardia sp. strains isolated from domestic animals and humans, increased multi-resistance to some of the most used antimicrobials in the therapy of nocardiosis in animals and humans, thermorresistance to the boiling conditions of milk, emphasizing the risk of consuming products from animals with mammary nocardiosis / Mestre

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / This study aimed to evaluate rainy and dry season effect on plasma seminal composition and semen quality of 17 crossbred male goats raised in tropical region and to investigate if the biochemical composition of seminal plasma (SP) is correlated to semen quality in relation to the season of the year. Other objective of this experiment was to evaluate if the phospholipase A2 (PLA2) activity level in the SP affects the ejaculate and epididymal spermatozoa. This study was divided into three experiments: in the first phase, seventeen male goats were used and then eight animals with low or high PLA2 activity in SP were separated to the second and third phases. In the first experiment, the ejaculates were collected in artificial vagina, weekly, the SP was separated to evaluate the biochemical parameters and biweekly for quality semen determination. The sperm was diluted in coconut water added 2,5% of egg yolk (200 x 106 sperm/mL) and stored at 4 oC for 48 hours. The vigor (0-5) and motility (1-100%) were measured at 2, 24 and 48 hours after cooling by thermoresistance test (TRT). Slides of sperm were made during TRT and 200 cells were classified as normal or abnormal cellular morphology. The fructose, citric acid, total proteins, calcium, phosphorus, magnesium level and the PLA2 activity level in the SP were measured. In the second experiment, eight bucks were separated in two groups according to PLA2 activity level in SP, in group I (<6.7U/mL) and group II (> 11.0 U/mL). The semen was obtained by artificial vagina, diluted and separate in two samples: the first aliquot was the control treatment (nonwashed semen) and the second aliquot was centrifuged at 550 g for 10 minutes to remove the SP (washed semen). In the third experiment, the semen of the eight bucks was collected and the SP obtained by centrifugation. The SP of each buck was added to aliquots of epididymal spermatozoa pool collected from another male goat and a ninth aliquot was added only to diluent (control). After that, the final dilution (200 x 106 sperm/mL) was made in all samples. In the second and third experiments, after the treatment and final dilution, the semen samples were stored at 4 oC for 48 hours and an aliquot was incubated at 38 oC and evaluated to vigor and motility at 0, 2, 12, 24 and 48 hours of cooling. Slides of sperm were made during TRT and 200 cells were classified as normal or abnormal morphology. In all experiments, the semen quality decreased with time (p<0,001). In the first experiment, the semen obtained in the rainy season was better quality than semen collected in the dry season of the year. In addition, the fructose, citric acid, total proteins, phosphorus and magnesium levels in the SP were higher in rainy season, while the PLA2 activity was lower in this period. The fructose, citric acid and total proteins concentration showed positive correlations to vigor and motility in both seasons. The total sperm morphology alterations (TSMA) showed negative correlation with fructose level and positive correlations with citric acid, total proteins concentrations and PLA2 activity level. In the second experiment, the treatment (washed semen) improved the seminal quality, mainly in washed semen of the group I. The PLA2 activity level showed no effect on sperm performance in the ejaculate spermatozoa, except at 48h in washed semen and at 24h in the non-washed semen. Finally, in the third experiment, the SP addition on epididymal spermatozoa decreased the seminal parameters and this effect was higher in group II. However, the TSMA were lower when the PLA2 activity was higher. These results indicated that male goats raised in tropical region showed better seminal quality in the rainy season. In addition, the fructose, citric acid, total proteins, phosphorus and magnesium concentration levels in the SP were higher in rainy season, while the PLA2 activity was lower in this period. The correlations between the seminal and biochemical parameters in SP could indicate that the differences in the semen parameters in the rainy and dry season occurred due the biochemical parameter variations. The SP addition during the semen storage at 4 oC decreased the seminal quality. However the PLA2 activity level was not a determinant factor of the seminal quality in the ejaculate spermatozoa. Therefore, it cannot be used as an indicative of the spermatic quality of male goats raised in tropical region / Este trabalho teve por objetivo avaliar o efeito da Ãpoca chuvosa e seca do ano sobre a composiÃÃo do plasma seminal (PS) e os parÃmetros seminais de 17 caprinos sem padrÃo racial definido (SPRD), criados em clima tropical, alÃm de avaliar se a composiÃÃo bioquÃmica do PS apresenta correlaÃÃo com os parÃmetros seminais, em funÃÃo da Ãpoca do ano, assim como, investigar se o nÃvel de atividade da fosfolipase A2 (FLA2) no PS de caprinos pode ser utilizado como indicativo da qualidade espermÃtica e se esse nÃvel exerce influÃncia na preservaÃÃo dos espermatozÃides ejaculados e epididimÃrios quando conservados a 4 ÂC, por 48 horas. O estudo foi realizado em trÃs etapas: na primeira foram utilizados dezessete machos caprinos e a partir desta, oito bodes com diferentes nÃveis de atividade de FLA2 no PS foram selecionados para realizaÃÃo da segunda e terceira etapas. No primeiro experimento durante a Ãpoca chuvosa e seca, os ejaculados dos animais foram coletados semanalmente, em vagina artificial, para avaliaÃÃo bioquÃmica do PS e a cada 14 dias para determinaÃÃo dos parÃmetros seminais. O sÃmen foi diluÃdo em Ãgua de coco-2,5% gema (200 x 106 sptz/mL), resfriado a 4 ÂC por 48 horas e avaliado o vigor e a motilidade Ãs 2, 24 e 48 horas de resfriamento (T2, T24 e T48), pelo teste de termorresistÃncia lento (TTR). EsfregaÃos do sÃmen diluÃdo foram confeccionados durante o TTR e 200 cÃlulas foram avaliadas e classificadas morfologicamente em normais ou anormais. Determinaram-se ainda as concentraÃÃes de frutose, Ãcido cÃtrico, proteÃnas totais, Ca, P, MG e nÃvel de atividade da FLA2. No segundo experimento, oito caprinos divididos, em funÃÃo do nÃvel de atividade da FLA2 no PS em: grupo I (<6,70 U/mL) e o grupo II (>11,00 U/mL). O sÃmen foi coletado, diluÃdo e dividido em duas alÃquota : a primeira constituiu o tratamento controle (sÃmen nÃo lavado) e a segunda foi centrifugada para remoÃÃo do PS (sÃmen lavado). No terceiro experimento, o sÃmen dos oito animais foi coletado e centrifugado para recuperaÃÃo do PS e adicionados a alÃquotas de um Ãnico âpoolâ de espermatozÃides epididimÃrios obtidos de caprinos castrados cirurgicamente. Uma nona alÃquota foi adicionada apenas de diluidor (grupo controle). Em seguida, procedeu-se a diluiÃÃo final em todas as amostras utilizando o mesmo diluidor. No segundo e terceiro experimentos, apÃs a realizaÃÃo dos tratamentos e diluiÃÃo final, o sÃmen foi resfriado a 4 ÂC por atà 48 horas e amostra de cada tratamento foi avaliada pelo TTR Ãs 0 (fresco), 2, 12, 24 e 48 horas de resfriamento. EsfregaÃos do sÃmen foram confeccionados para avaliaÃÃo da morfologia espermÃtica. Em todos os experimentos, a qualidade espermÃtica diminuiu à medida que se prolongou o tempo de preservaÃÃo (p < 0,001). No experimento 1, o sÃmen apresentou qualidade superior na Ãpoca chuvosa e tambÃm as concentraÃÃes de frutose, Ãcido cÃtrico, proteÃnas totais, P e Mg foram maiores nesta Ãpoca. A FLA2 apresentou menor atividade na Ãpoca chuvosa (p < 0,05). A concentraÃÃo de frutose, Ãcido cÃtrico e proteÃnas totais mostraram correlaÃÃes positivas com o vigor e a motilidade e negativas com a TDM, nas duas Ãpocas. Em relaÃÃo Ãs alteraÃÃes morfolÃgicas totais (AMT), a concentraÃÃo de frutose mostrou correlaÃÃes negativas, enquanto as de Ãcido cÃtrico, proteÃnas totais e atividade da FLA2, positivas. Os nÃveis de fÃsforo no PS apresentaram correlaÃÃo com os parÃmetros seminais apenas na Ãpoca seca, sendo negativa para vigor, motilidade e AMT e positiva para TDM. A concentraÃÃo de Mg correlacionou-se positivamente com a motilidade na Ãpoca chuvosa e AMT na seca. No segundo experimento, o tratamento influenciou a qualidade seminal principalmente no grupo I, sendo o desempenho espermÃtico superior no sÃmen lavado. O nÃvel de atividade da FLA2 nÃo afetou a qualidade dos espermatozÃides ejaculados, exceto em T48 do sÃmen lavado e T24 do sÃmen nÃo lavado. Enquanto no terceiro experimento, a adiÃÃo do PS aos espermatozÃides epididimÃrios diminuiu a qualidade espermÃtica e este efeito foi mais pronunciado quando o nÃvel de atividade de FLA2 foi maior. Contudo, no que se refere e AMT, a adiÃÃo do PS foi benÃfica, reduzindo o nÃmero de alteraÃÃes. Os resultados do presente estudo indicam que caprinos criados em clima tropical apresentam melhor qualidade espermÃtica no perÃodo chuvoso, alÃm das concentraÃÃes de frutose, acido cÃtrico, proteÃnas totais, P e Mg serem mais elevados nesta Ãpoca, enquanto a atividade da FLA2 foi menor neste perÃodo. As correlaÃÃes entre os parÃmetros seminais e a composiÃÃo bioquÃmica do PS podem indicar que as diferenÃas detectadas quanto à qualidade espermÃtica entre as Ãpocas do ano deve-se justamente Ãs variaÃÃes na concentraÃÃo destes componentes. A presenÃa do PS durante a conservaÃÃo do sÃmen caprino a 4 ÂC reduziu a qualidade espermÃtica, contudo o nÃvel de atividade da FLA2 nÃo foi um fator determinante da qualidade seminal para os espermatozÃides ejaculados, por isso, nÃo deve ser utilizado como indicativo de qualidade espermÃtica de caprinos criados em regiÃo de clima tropical

Palliative Therapie inklusive Chemotherapie und andere Behandlungsmethoden wie Hyperthermie ist oftmals die einzig verbleibende Option bei der Behandlung von bestimmten soliden Tumoren wie Magen- und Pankreaskarzinom. Leider ist der Erfolg dieser Therapien limitiert durch geringes Ansprechen der Tumoren auf die Behandlung und die Entwicklung einer Therapieresistenz. In dieser Arbeit wurde die globale Proteinexpression von chemo- und thermoresistenten Varianten der Magenkarzinomzellinie EPG85-257 und der Pankreaskarzinomzellinie EPP85-181 mit Hilfe von Proteomics (Kombination aus zweidimensionaler Elektrophorese, computergestützter Gel-Analyse und Massenspektrometrie) in vitro untersucht, um Kandidatenproteine zu finden, die potentiell mit Thermoresistenz bzw. Chemoresistenz assoziiert sind. In diesem Zusammenhang wurde eine mit Maldi-TOF kompatible Spezialsilberfärbung neu entwickelt. Es zeigte sich eine differentielle Expression einer Vielzahl von Proteinen in den thermoresistenten Zellen, darunter eine Hochregulation von Proteinen mit Chaperonaktivität aus nahezu allen subzellulären Kompartimenten sowie eine Überexpression von Enzymen des Arzneimittelmetabolismus in Zellen mit sowohl chemo- als auch thermoresistentem Phänotyp. Darüber hinaus wurden weitere Proteine identifiziert, welche hinsichtlich ihrer Beteiligung an Resistenzphänomenen im Vorfeld noch gar nicht charakterisiert worden sind (u.a. Aldehyd-Dehydrogenase 1, Transgelin, Phosphoglyceromutase). / Palliative treatment including chemotherapy and other modes of treatment, e.g. hyperthermia, is often the only remaining option in the management of certain solid tumours including gastric and pancreatic carcinoma. Unfortunately, its efficacy is poor due to low tumour sensitivity and the development of therapy resistance. The aim was to study in vitro global protein expression of chemo- and thermoresistant variants of the stomach cancer cell line EPG85-257 and the pancreatic cancer cell line EPP85-181 using proteomics (two-dimensional electrophoresis in combination with computer-assisted image analysis and mass spectrometry) to identify candidate proteins potentially associated with thermoresistance alone or in combination with chemoresistance. In this context, a special silver stain compatible with Maldi-TOF was developed. A large number of proteins was found to be differentially expressed in thermoresistant cells including up-regulation of molecular chaperones at practically every sub-cellular level as well as over-expression of enzymes involved in drug metabolism in both chemo- and thermoresistant cells. Furthermore, other proteins were identified that have not yet been linked to resistance phenomena (e.g. aldehyde dehydrogenase 1, transgelin, phosphoglycerate mutase).