Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-06-22Bitstream added on 2014-06-13T20:05:19Z : No. of bitstreams: 1 silva_hm_dr_jabo.pdf: 1846283 bytes, checksum: 42e103b4c3b1094d21b0dce483735ad3 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Avaliou-se a transmissão congênita em cabras, infectadas e reinfectadas experimentalmente por T. gondii, em três fases gestacionais. Foram selecionadas 25 fêmeas, negativas para T. gondii e, destas, 20 foram inoculadas (cepa ME 49) e 15 reinoculadas (cepa VEG) com oocistos de T. gondii. As fêmeas foram distribuídas em cinco grupos experimentais (n=5): GI - reinfectadas no 40º dia de gestação (DG), GII - 80º DG, GIII - 120º DG, GIV - infectadas não reinfectadas e GV - não infectadas. Nos dias 0 (antes da inoculação), 3, 6, 9, 15, 21 e a cada sete dias pós-inoculação (DPI) e no 3º e a cada sete dias pós-reinoculação (DPR), foram realizados exames clínicos e sorológicos (RIFI-IgG). Quando as fêmeas apresentaram títulos IgG <1024 iniciou-se o manejo reprodutivo. Após a confirmação da gestação, as ultrassonografias foram realizadas a cada 15 dias até o término do período gestacional. Após as parições, as cabras e suas crias foram eutanasiadas para colheita de tecidos para avaliação de parasitismo por T. gondii (histopatologia, bioprova e PCR). Das crias colheu-se sangue para a realização da RIFI. No 9º DPI registrou-se hipertermia em todas as cabras inoculadas (P<0,05). A soroconversão dos animais primoinfectados ocorreu no 21º DPI, com títulos (IgG) entre 1024 e 16384. No 119º DPI ocorreu a estabilização da fase crônica da toxoplasmose (IgG <1024), em todas as fêmeas infectadas. Após as reinfecções as cabras permaneceram assintomáticas. Aumentos significativos de títulos IgG (≥1024) ocorreram no 28º, 7º e 3º DPR, nos grupos I, II, III, respectivamente (P<0,05). Severos distúrbios reprodutivos foram observados apenas em cabras reinfectadas, assim como determinadas lesões histológicas (renais e hepáticas) em suas respectivas crias. Títulos de anticorpos IgG foram registrados em todas... / We evaluated the congenital transmission in goats experimentally infected and re-infected with T. gondii in three stages of pregnancy. We selected 25 females negative for T. gondii and of these, 20 were inoculated (ME 49 strain) and re-inoculated 15 (VEG strain) with oocysts of T. gondii. The females were distributed into five experimental groups (n = 5): GI – re-infected after 40th days of gestation (DG), GII - 80th DG, GIII - 120 th DG, GIV - infected and not re-infected and GV - uninfected. On days 0 (before inoculation), three, six, nine, 15, 21 and seven days post-inoculation (DPI) and the 3rd and every seven days after reinoculation (DPR), we performed clinical and serological (IFAT -IgG). When the females had titers IgG <1024 began the reproductive management. After confirmation of pregnancy, the ultrasounds were performed every 15 days until the end of pregnancy. After parturition, the goats and their offspring were euthanized to collect tissue for assessment of parasitism by T. gondii (histopathology, bioassay and PCR). Blood’s newborn was collected to perform the IFAT. In the 9th DPI was recorded hyperthermia in all inoculated goats (P <0.05). Seroconversion occurred in animal primoinfectados 21st DPI, with titers (IgG) between 1024 and 16384. At 119th DPI and then leveled off in the chronic phase of toxoplasmosis (IgG <1024) in all infected females. After the goats remained asymptomatic re-infections. Significant increases in securities IgG (≥ 1024) occurred in 28th, 7th and 3rd DPR, in groups I, II, III, respectively (P <0.05). Severe reproductive disorders were observed only in re-infected goats, as well as certain histological lesions (kidney and liver) in their offspring. IgG antibody titers were recorded in all offspring of goats re-infected. Tissue parasitism by T. gondii was diagnosed in both infected and re-infected goats... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:09:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-18. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:26:48Z : No. of bitstreams: 1 000837180.pdf: 2272798 bytes, checksum: 3d9bcb9da2787aa858c4ebae597f9f22 (MD5) / Este estudo teve como objetivo pesquisar a presença de T. gondii no sêmen, testículos e epidídimos de gatos experimentalmente infectados por este coccídio. Para tanto, doze felinos machos, sem raça definida, em idade reprodutiva e sorologicamente negativos para T. gondii foram selecionados e distribuídos em três grupos experimentais, GI: inoculados com 600 cistos teciduais de T. gondii (cepa P), GII: inoculados com 2x105 taquizoítos (cepa RH), e GIII: não inoculados (grupo controle). Anteriormente à inoculação (dias -7 e 0) e no 7º, 14º, 21º, 28º, 42º, 56º e 70º dias pós-inoculação (DPI), todos felinos, foram submetidos a exames clínicos, sorológicos (RIFI) e hematológicos (hemograma e parasitemia pelo T. gondii). As colheitas de sêmen (eletroejaculação), foram realizadas nas referidas datas, sendo posteriormente realizada a pesquisa do T. gondii por meio da nested PCR e bioprova em camundongos. No 70º DPI, os doze felinos foram orquiectomizados, sendo em seus testículos e epidídimos avaliada a presença do parasito (nested PCR, bioprova em camundongos, análises histopatológicas e imunohistoquímicas). Todos os felinos inoculados com T. gondii (GI e GII), soro-converteram à infecção toxoplásmica e apresentaram picos parasitêmicos em diferentes datas experimentais pós-inoculação. Os felinos inoculados com a cepa RH (GII) apresentaram títulos sorológicos mais elevados que os inoculados com a cepa P (GI). Nestes animais (GII) também foram diagnosticados mais picos parasitêmicos e alterações clínicas que nos felídeos pertencentes ao grupo I. Em nenhuma data experimental foi diagnosticada (bioprova e nested PCR) a presença de T. gondii nas amostras seminais colhidas dos felinos (GI, GII e GIII), nem tampouco nos testículos e epidídimos colhidos destes animais (nested PCR, bioprova, análises histopatológicas e imunohistoquímicas). Tais resultados possibilitam inferir... / This study aimed to investigate the presence of T. gondii in semen, testicles and epididymis of cats experimentally infected with this coccidia. Therefore, twelve mongrel male cats of reproductive age and serologically negative for T. gondii were selected and divided into three experimental groups, GI: inoculated with 600 tissue cysts of T. gondii (P strain), GII : inoculated 2x105 tachyzoites (strain HR), and GIII: not inoculated (control group). Prior to inoculation (days -7 and 0) and days 7º, 14º, 21º, 28º, 42º, 56º and 70º post-inoculation (PID), all cats underwent clinical, serological (IFA) and haematological (blood count and parasitemia by T. gondii) examinations. Semen samples were obtained (eletroejaculation) those dates, and later held the T. gondii search by nested PCR and bioassay in mice. On 70º PID, the twelve cats were castrated, and their testicles and epididymis were evaluated for the presence of the parasite (PCR, bioassay in mice, and histopathological and immunohistochemical analyzes). All cats inoculated with T. gondii (GI and GII), seroconverted to T. gondii infection and showed parasitemia peaks in different experimental days post inoculation. The cats inoculated with the RH strain (GII) had higher titers than those inoculated with the P strain (GI). In these animals (GII) were also diagnosed more parasitemia and clinical changes compared to those belonging to Group I. In no trial date was diagnosed (bioassay and nested PCR) the presence of T. gondii in semen samples taken from the cats (GI, GII and GIII), nor their testis and epididymis (PCR, bioassay, histopathological and immunohistochemical analyzes). These results make it possible to infer that sexual transmission in domestic cats is not an important route of infection in the spread of toxoplasmosis among cats

Introdução: A infecção aguda pelo Toxoplasma gondii em gestantes pode determinar infecção fetal através de passagem transplacentária. As crianças afetadas podem desenvolver coriorretinite e déficit neurológico, na ausência de tratamento adequado. Objetivos: Estimar a prevalência de toxoplasmose aguda em gestantes atendidas na maternidade do Hospital Nossa Senhora da Conceição, avaliando possíveis diferenças nas freqüências ao longo do período estudado; medir a incidência de toxoplasmose congênita (TC) e estimar a taxa de transmissão vertical em crianças nascidas neste hospital; avaliar a acurácia de testes diagnósticos em TC, aplicados no momento do nascimento, na população de crianças estudadas. Métodos: Inicialmente um estudo transversal foi desenvolvido para identificar as pacientes que apresentaram critérios de infecção aguda na gestação, atendidas na maternidade no momento do parto, entre outubro de 1998 e dezembro de 2005. Novas tecnologias foram introduzidas para detecção diagnóstica ao longo deste período. Entre outubro de 1998 e dezembro de 2001 (período 1), utilizou-se o método microparticle enzyme immunoassay – MEIA e entre janeiro de 2002 e dezembro de 2005 (período 2) foi utilizada a técnica de captura de IgM e o teste de avidez de IgG com o método enzyme linked fluorescent assay – ELFA (VIDAS). Os recém-nascidos identificados a partir deste estudo inicial foram incluídos em um estudo de coorte histórico, com tempo de acompanhamento aproximado de doze meses, para estabelecer o diagnóstico definitivo de toxoplasmose congênita, obtido em dois momentos: (1) logo após o nascimento; (2) aos 12 meses, aproximadamente. Para a definição de caso da infecção aguda na gestação e de toxoplasmose congênita foi utilizado o sistema de classificação elaborado por Lebech et al., com adaptações (quadro 1). Aqueles casos classificados como improváveis foram excluídos do cálculo da prevalência de toxoplasmose aguda em gestantes e de incidência de TC. Para avaliar a acurácia de testes diagnósticos em TC realizados no momento do nascimento utilizou-se, como padrão ouro para o diagnóstico definitivo, a concentração de anticorpos IgG em torno de 12 meses de vida. Um bebê infectado deve ter concentrações iguais ou mais elevadas de IgG nesta idade quando comparadas às encontradas no nascimento. Houve comparação independente e cega dos métodos diagnósticos avaliados em relação ao padrão ouro. A dosagem de anticorpos IgG e IgM em recém-nascidos foi processada com o método microparticle enzyme immunoassay (MEIA). Análise: Para comparar proporções foi utilizado o teste qui-quadrado com correção de Yates, teste exato de Fisher, quando necessário, e Teste t de Student para comparação entre médias de duas amostras independentes com distribuição simétrica. Na avaliação do desempenho de testes diagnósticos foram obtidos resultados de sensibilidade, especificidade, razões de verossimilhança (RV) positiva e negativa dos testes diagnósticos – hemograma, exame do líquor, ecografia transfontanelar, exame de fundo de olho (EFO) e a detecção de anticorpos IgM para toxoplasmose (MEIA) e do DNA do toxoplasma com reação em cadeia da polimerase – método Nested (RCP-Nested) séricos. Resultados: Em uma população de 41.112 gestantes, a prevalência de toxoplasmose aguda foi de 4,8 para cada 1.000 gestantes (IC95%: 4,2 a 5,6). Houve redução significativa na prevalência de toxoplasmose aguda nas gestantes deste hospital a partir do ano 2002 (P=0,008). O diagnóstico de toxoplasmose congênita foi definitivo em 37 crianças entre 40.727 nascidos vivos no período estudado, atingindo uma incidência de 0,9 para cada 1.000 nascimentos (IC95%: 0,6 a 1,3). Logo após o nascimento, entre os 200 recém-nascidos expostos ao T. gondii, resultado de 199 gestantes infectadas, 25 bebês apresentaram critérios diagnósticos de toxoplasmose congênita, atingindo taxa de transmissão vertical de 12,5% (IC 95%: 8,2% - 17,9%). Após o seguimento foram detectados mais 12 casos, aumentando esta taxa para 18,5% (IC 95%: 13,4% – 24,6%). Para avaliar a acurácia de testes diagnósticos aplicados no momento do nascimento, foram identificadas 31 crianças com TC, de acordo com o padrão ouro, entre 136 expostas ao protozoário intra-útero e que completaram seguimento até os 12 meses de vida. Os testes que apresentaram melhor desempenho isoladamente na predição do diagnóstico, foram detecção de anticorpos IgM específicos, EFO e RCPNested atingindo razões de verossimilhança positivas de 119,3 (IC95%: 7,40 – 1923,92), 49,9 (IC95%: 3,0 – 838,2) e 24,8 (IC95%: 3,22 – 190,35), respectivamente. A RV negativa para IgM foi 0,4 (IC95%: 0,3 – 0,6), mas para o EFO e RCP-Nested foi apenas 0,7 (IC95%: 0,6 – 0,9). Conclusão: A prevalência de toxoplasmose aguda em gestantes incluídas neste estudo foi inferior à encontrada na França e na Bélgica, mas foi mais elevada quando comparada às descritas na Suécia, Noruega, Dinamarca e Nova Iorque. A prevalência estimada neste estudo foi similar a de outros locais do Brasil, como Mato Grosso do Sul, mas inferior à obtida no Distrito Federal. Esta variabilidade nas estimativas pode estar relacionada com os diferentes métodos diagnósticos utilizados no rastreamento, ou ainda, com os diferentes fatores de risco envolvidos na transmissão da doença. Em nosso estudo, esta freqüência diminuiu a partir do ano de 2002, o que não pode ser atribuível à introdução do teste de avidez de IgG, uma vez que a média de idade gestacional na realização deste exame foi tardia. Entretanto, existe a possibilidade de que o teste de captura de IgM com o método ELFA tenha contribuído para diminuir os casos falso-positivos de IgM, o que poderá ser confirmado com futuros estudos. Estes resultados apontam que a introdução de novas tecnologias no laboratório deve ser acompanhada de esforços para melhorar as condições de acesso precoce das gestantes ao pré-natal de referência, com o objetivo de não perder a oportunidade para melhor discriminar as gestantes sem doença e evitar procedimentos invasivos, desnecessários e onerosos. A incidência de toxoplasmose congênita e a taxa de transmissão vertical foram elevadas. Estas freqüências podem estar subestimadas devido às perdas no seguimento. Para avaliar o efeito das perdas na validade do estudo, foram comparadas as características da população de gestantes e de recém-nascidos do grupo de bebês com seguimento completo em relação ao grupo que não retornou para o seguimento. Estas características foram semelhantes nos dois grupos, portanto, consideramos que o percentual de perdas, embora elevado, não prejudicou a validade do estudo. A identificação de 12 casos adicionais de TC com o seguimento dos bebês reforça a necessidade de monitoramento sorológico durante o primeiro ano de vida, mesmo sem evidência de infecção congênita ao nascimento. Na avaliação dos testes diagnósticos aplicados ao nascimento, a detecção de anticorpos IgM específicos no sangue do neonato, o EFO e o RCP-Nested sérico demonstraram melhor desempenho para identificar os bebês com TC. Entretanto, para afastar este diagnóstico, apenas o resultado não reagente de anticorpos IgM específicos apresentou maior utilidade, mas com efeito de pequena magnitude. / Introduction: The acute infection by Toxoplasma gondii in pregnant women may cause fetal infection by means of the transplacental transfer. Affected children may develop chorioretinitis and neurological deficit in the absence of a proper treatment. Objectives: To estimate the prevalence of acute toxoplasmosis in pregnant women cared for at the maternity ward of Hospital Nossa Senhora da Conceição, evaluating possible differences in frequencies along the period of study; to measure the incidence of congenital toxoplasmosis (CT), and estimate the rate of vertical transmission in children who were born in this hospital; to evaluate the accuracy of diagnostic tests in CT, applied at the moment of the birth, in the population of studied children. Methods: Initially a cross-sectional study was developed to identify the patients who presented criteria of acute infection in the pregnancy, cared for at the maternity ward at the moment of the labor, between October 1998 and December 2005. New technologies have been introduced for diagnostic detection along this period. Between October 1998 and December 2001 (period 1) the microparticle enzyme immunoassay – MEIA was used, while between January 2002 and December 2005 (period 2) the IgM capture technique and the IgG avidity test with the enzyme linked fluorescent assay – ELFA (VIDAS) method were used. Those newborns (NB) identified at this initial study were included in a historical cohort study, with an approximate follow-up time of twelve months, to establish the definitive diagnosis of congenital toxoplasmosis, obtained in two moments: (1) soon after birth; (2) at 12 months, approximately. For the definition of cases of acute infection in pregnancy and congenital toxoplasmosis, the classification system elaborated by Lebech et al. was used with adaptations (Picture 1). Those cases that were classified as unlikely were excluded from the prevalence calculation of acute toxoplasmosis in pregnant women and from the incidence of CT. In order to evaluate the accuracy of diagnostic tests in CT accomplished at the moment of birth, the concentration of IgG antibodies around 12 months of age was used as a gold standard for the ultimate diagnosis. An infected baby must have equal or higher concentrations of IgG at this age when compared to the ones found at birth. An independent and blind comparison of the diagnostic methods evaluated in relation to the gold standard was performed. The dosage of IgG and IgM antibodies in newborns was processed with the microparticle enzyme immunoassay (MEIA) method. Analysis: In order to compare proportions, a chi square test with Yates correction, an exact Fisher test when necessary, and a Student's t-test for comparison between means of two independent samples with symmetrical distribution were used. In the performance evaluation of diagnostic tests, results of sensitivity, specificity, positive and negative likelihood ratio (LR) of the diagnostic tests – hemogram, liquor test, transfontanellar ultrasonography brain scan, ophthalmoscopy, and detection of IgM antibodies for toxoplasmosis (MEIA) and the DNA of the toxoplasm with polymerase chain reaction – method Nested (PCR-Nested) serum were obtained. Results: In a population of 41,112 pregnant women, the prevalence of acute toxoplasmosis was 4.8 per 1,000 pregnant women (CI95%: 4.2 to 5.6). There was a significant decrease in the prevalence of acute toxoplasmosis in pregnant women of this hospital from 2002 on (P=0.008). The diagnosis of congenital toxoplasmosis was definitive in 37 children among 40,727 live births in the studied period, reaching an incidence of 0.9 per 1,000 births (CI95%: 0.6 to 1.3). Soon after the birth, among the 200 newborns exposed to the T. gondii, resulting from 199 pregnant women, 25 babies showed diagnostic criteria of congenital toxoplasmosis, reaching a vertical transmission rate of 12.5% (CI 95%: 8.2% - 17.9%). After the follow-up, another 12 cases were detected, increasing this rate to 18.5% (CI 95%: 13.4% – 24.6%). In order to evaluate the accuracy of diagnostic tests applied at the moment of birth, 31 children with CT were identified according to the gold standard, among 164 ones who were exposed to protozoan intra-uterus and who completed their follow-up until 12 months of age. The tests that showed better performance when isolate in the prediction of the diagnosis were the detection of specific IgM antibodies, ophthalmoscopy, and PCR-Nested reaching positive RV of 119.3 (CI95%: 7.40 – 1923.92), 49.9 (CI95%: 3.0 – 838.2), and 24.8 (CI95%: 3.22 – 190.35), respectively. The negative RV for IgM was 0.4 (CI95%: 0.3 – 0.6), but for ophthalmoscopy and PCR-Nested it was 0.7 (CI95%: 0.6 – 0.9) only. Conclusion: The prevalence of acute toxoplasmosis in pregnent women included in this study was lower than the one found in France and Belgium, but was higher when compared to the ones described in Sweden, Norway, Denmark, and New York. The estimated prevalence in this study was similar to the one from other locations in Brazil, such as Mato Grosso do Sul, but lower to the one obtained in Brasília. This variability in the estimates may be related to the different methods for diagnosis used in the screening or even to the different risk factors involved in the transmission of the disease. In our study, this frequency decreased from 2002 on, and this cannot be attributed to the introduction of the IgG avidity test, since the means of gestational age at the accomplishment of this test was late. However, there is a possibility that the IgM capture test with the ELFA method has contributed to decrease the frequency of false-positive cases of IgM, what can be confirmed with future studies. These results signal that the introduction of new technologies in the laboratory must be accompanied by efforts to improve conditions for an early access of pregnant women to the reference prenatal care, aiming to prevent the loss of opportunities of better discriminating pregnant women that are not sick and avoiding unnecessary and expensive invasive procedures. The incidence of congenital toxoplasmosis and the rate of vertical transmission were elevated. These frequencies may be underestimated due to the losses in the follow-up. In order to evaluate the effect of losses in the study validity, characteristics of the population of pregnant women and newborns belonging to the group of babies with full follow-up in relation to the group that did not return for the follow-up were compared. These characteristics were similar in the two groups, therefore we consider that the percentual of losses, even though high, did not endanger the validity of the study. The identification of twelve additional cases of congenital toxoplasmosis with the follow-up of the babies reinforces the need of a serological monitoring during the first year of life, even without any evidence of congenital infection at birth. In the evaluation of diagnostic tests applied at birth the detection of specific IgM antibodies in the blood of the newborn, the ophthalmoscopy, and the serum PCR-Nested showed a better performance to identify babies with CT. However, in order to discard this diagnosis, only the non-reagent IgM specific antibodies result showed higher utility, with a small magnitude effect though.

Orientador: Helio Langoni / Banca: Márcia Marinho / Banca: Antônio Carlos Paes / Resumo: A toxoplasmose é uma protozoonose causada pelo Toxoplasma gondii, de distribuição mundial e que acomete todos os animais homeotérmicos, incluindo o homem. Apresenta desde quadros assintomáticos a manifestações sistêmicas graves. Nos seres humanos a infecção atinge com maior gravidade principalmente indivíduos imunocomprometidos e gestantes, sendo que a primoinfecção, pode levar a óbitos, abortamentos, natimortos além de lesões severas do sistema nervoso central. Técnicas sorológicas precisas de fácil aplicação a campo e de menores custos, podem auxiliar na promoção de medidas de prevenção e controle, mas para isso é importante garantir a produção de antígenos em quantidade e de qualidade, a fim de atender as necessidades do método empregado, para garantir a sua padronização. A produção in vitro de taquizoítos de T.gondii usando células de sarcoma murino TG180 em histoculturas, mostra-se uma alternativa viável para a produção de antígeno de T. gondii, em quantidade e qualidade para uso no diagnóstico dessa infecção utilizando-se o Método de Aglutinação Direta, o que pode permitir sua difusão como um teste rápido a campo, possibilitando a sua utilização por profissionais autônomos ou unidades de saúde, podendo-se assim agilizar com uma maior rapidez as ações de prevenção dessa zoonose. / Abstract: Toxoplasmosis is one protozoonosis caused by Toxoplasma gondii, of world-wide distribution and that acomete to all the animals, including the man. It presents since without symptoms until serious clinical manifestations. In the human beings the infection reaches with bigger gravity immunocompromised patients individuals mainly and pregnant woman, being that the primary infecction, it can take the deaths, abortions, stillborn beyond severe injuries of the central nervous system. Serologicals techniques of easy application in the field and of lesser costs, can assist in the promotion of measures of prevention and control, but for this it is important to guarantee the production of antigens in amount and quality, in order to take care of the necessities of the employed method to guarantee its standardization. The production in vitro of taquizoitos of T.gondii using cells of sarcom murine TG180 in histoculture, reveals to a viable alternative for the antigen production of T. gondii, in amount and quality for use in the diagnosis of this infection by the Direct Agglutination Test, what it can allow its diffusion as a fast test in the field, allowing its use for independent professionals or units of health, and thus allowing to a bigger rapidity in the actions of prevention of this zoonose. / Mestre

Orientador: Alvimar José da Costa / Banca: João Luis Garcia / Banca: Francisco Carlos Rodrigues de Oliveira / Banca: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Cesar Roberto Esper / Resumo: Ovinos machos isentos de Toxoplasma gondii, foram distribuídos em três grupos sendo, G1: um ovino inoculado, pela via oral, com 2,0 x 105 oocistos da cepa P, G2: um ovino infectado, pela via subcutânea, com 1,0 x 106 taquizoítos da cepa RH e G3: um ovino não infectado mantido como controle. Após a inoculação dos machos com T. gondii, 12 ovelhas reprodutoras, não gestantes, sorologicamente negativas para doenças reprodutivas, sobretudo toxoplasmose, foram sincronizadas e em seguida expostas à monta natural pelos machos, anteriormente inoculados, sendo: cinco ovelhas submetidas à monta natural pelo macho do G1; cinco ovelhas expostas à monta natural pelo macho do G2 e duas ovelhas pelo macho pertencente ao grupo controle. Nos soros das ovelhas obtidos nos dias -30, -14, -7, -1, zero (antes da monta natural) e nos dias 1, 3, 5, 7, 11, 14 e semanalmente até o parto, foi pesquisada a presença de anticorpos contra T. gondii pela RIFI. Bioensaio em camundongos e PCR foram realizados em amostras de sêmen e tecidos dos machos, tecidos das fêmeas e de seus respectivos filhotes. Cinco das 12 fêmeas utilizadas apresentaram anticorpos específicos contra T. gondii após a monta natural, sendo duas pelo macho inoculado com oocistos (G1) e três pelo ovino infectado com taquizoítos (G2). Pelo bioensaio foi possível diagnosticar, no dia da monta natural, a presença do T. gondii em amostras seminais dos ovinos infectados (G1 e G2) e em amostras do "pool" de tecidos das cinco fêmeas e em cinco de seus respectivos filhotes. Foi possível, ainda, pela técnica da PCR isolar o DNA de T. gondii em amostras seminais dos machos reprodutores no dia do coito, e no "pool" de tecidos de uma e duas fêmeas expostas à monta natural por reprodutores infectados com oocistos e taquizoítos, respectivamente. É importante relatar que, por meio desta técnica foi possível diagnosticar... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Male sheep in reproductive age and with no prior Toxoplasma gondii disease, were divided into three groups: G1, a sheep inoculated with 2.0 x 105 of P strain oocysts; G2, a sheep infected with 1.0 x 106 of RH strain tachyzoites and; G3 a control uninfected sheep. After inoculation of males with T. gondii, 12 breeding ewes, not pregnant, serologically negative for reproductive diseases, particularly toxoplasmosis, were synchronized and then exposed to natural mating by those males, previously inoculated, being: five ewes submitted to natural mating by male G1, five ewes exposed to natural mating by the male of G2 and two ewes submitted to natural mating by the male control from group. In sera obtained from all ewes on days -30, -14, -7, -1, zero (before natural mating) and on days 1, 3, 5, 7, 11, 14 and weekly until partum, was investigated the presence of antibodies against T. gondii by IFAT. Bioassay and PCR were performed on samples of semen and tissues of males/females tissues and their offspring. Five of the 12 females submitted to natural mating, had antibodies anti-T. gondii, being, two by male inoculated with oocysts (G1) and three for sheep infected with tachyzoites (G2). For the bioassay was possible to diagnose on the day of natural mating, the presence of T. gondii in semen samples from infected sheep (G1 and G2) and in samples of pool of tissues from five females and five of their puppies. It was also possible by PCR to isolate the DNA of T. gondii in semen samples of rams on sexual intercourse, and the pool of tissues of one and two females exposed to breeding by natural mating infected with tachyzoites and oocysts, respectively. It is important to report that through this technique it was possible to diagnose the presence of this parasite also in the pool of tissue from the offspring of a female submitted to the natural breeding sheep infected with oocysts. From the results... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Alvimar José da Costa / Banca: Lindsay Unno Gimenes / Banca: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Welber Daniel Zanetti Lopes / Banca: Carlos Noriyuki Kaneto / Resumo: A toxoplasmose é uma zoonose cosmopolita, importante em medicina veterinária e humana por ocasionar abortos e doenças congênitas em diversas espécies. A viabilidade da transmissão sexual do Toxoplasma gondii em vacas, sorologicamente negativas para a infecção por T. gondii, submetidas à inseminação artificial em tempo fixo (IATF) com sêmen criopreservado e contaminado com taquizoítos de T. gondii, por meio das técnicas (RIFI, bioprova e nested PCR). Inicialmente, utilizou-se a bioprova (em inoculação camundongos) objetivando avaliar a sobrevivência de taquizoítos de T. gondii em sêmen, criopreservado em DMSO (2,5%, 5,0%, 7,5%, 8,0% e 10,0%) e congelado em nitrogênio líquido (-196°C). Foram selecionadas 10 vacas em idade reprodutiva, soronegativas: Brucella abortus, Neospora caninum, Toxoplasma gondii. Os animais foram submetidos ao protocolo de inseminação artificial em tempo fixo (IATF) e tratados com dose única de estreptomicina (25mg/Kg) contra leptospirose. Das 10 vacas, cinco foram inseminadas com sêmen convencional (Glicerol 3%) e mantidas como grupo controle. As outras cinco foram inseminadas com sêmen criopreservado com DMSO (8%), contendo 1x106 taquizoítos de T. gondii. Nas datas experimentais 1, 3, 5, 7, 12, 14, 21, 28, 35, 42, 50, 56, 63, 70, 77 e 100 dias pós-inoculação (IATF), exames clínicos, hematológicos e sorológicos e moleculares (nested PCR) foram realizados. A soroconversão ocorreu em quatro fêmeas bovinas, pertencentes ao grupo que receberam sêmen infecta... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Toxoplasmosis is a cosmopolitan zoonosis, highly relevant in human and veterinary medicine for causing abortion and congenital diseases in several animal species. This study evaluated, using different techniques (indirect immunofluorescence assay, bioassay and nested PCR), the viability of sexual transmission of Toxoplasma gondii in cows, serologically negative for the T. gondii infeccion, submitted to fixed time artificial insemination (FTAI) with cryopreserved semen, infected with tachyzoites of T .gondii. Initially, bioassays (inoculation in mice) were performed, seeking to analyze the survival of T. gondii tachyzoites in semen, cryopreserved in DMSO (2.5%, 5.0%, 7.5%, 8.0% and 10.0%) and frozen in liquid nitrogen (-196 °C). Ten cows at reproductive age were selected, all serologically negative: Brucella abortus, Neospora caninum, Toxoplasma gondii. Animals underwent the protocol for fixed time artificial insemination (FTAI) and were treated with a single dose of streptomycin (25 mg/Kg) against leptospirosis. From these ten cows, five were inseminated with conventional semen (3% Glycerol) and kept as a control group. The five remaining animals were inseminated with semen cryopreserved with DMSO (8%), containing 1x106 T. gondii tachyzoites. On experimental days 1, 3, 5, 7, 12, 14, 21, 28, 35, 42, 50, 56, 63, 70, 77 and 100 after inoculation (FTAI), clinical, hematological and serological exams and molecular tests (nested PCR) were conducted. Seroconversion occurred in four bovine females which belonged to the group which received semen infected with T. gondii tachyzoites (RH strain). 21 days post artificial insemination (DPAI), it was possible to diagnose, in one animal (number 1008) from the same group, mutual increasing of serological titles, varying from 64 to 256 (28th, 35th, and 42nd DPAI). Starting on the 49th, up un... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:10:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 NormaHDM_DISSERT.pdf: 999595 bytes, checksum: c62cdc67318a196202b24c4678092ac5 (MD5) Previous issue date: 2011-03-31 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / Toxoplasmosis, provoked by the intracellular parasite Toxoplasma gondii, is one of the most prevalent parasitoses in the world. In humans, transmission occurs by three evolutionary forms of the parasite: oocysts, tissue cysts and tachyzoites. Wild and domestic felines are definitive hosts. The ocular form of toxoplasmosis can be of congenital origin with early or late clinical manifestations, or acquired after birth. T. gondii is considered the main culprit for most cases of infectious uveitis. This study aimed at assessing ocular toxoplasmosis, relating it to factors associated to the patient s lifestyle and describing the epidemic-serological and clinical profile of affected individuals. A cross-sectional study was conducted with a population of 159 patients. Univariate analysis (odds ratio) was used to evaluate the data, with a confidence interval of 95% and p-value < 0.05. A prevalence of 4% of ocular toxoplasmosis was observed in the population of patients treated at an ophthalmological clinic. Of patients directly examined by immunoenzymatic assay (MEIA-AxSYM?- Microparticle Enzyme Immune Assay), considering only uveitis, a frequency of anti-T. gondii of 73%, most of whom exhibited titulation between 40-99 UI IgG/mL. With respect to location of ocular lesions, bilaterality was observed in 57% of patients assessed by the ophthalmoscopy technique. When compared with the results of an active search of medical records, a similarity in ocular toxoplasmosis (74%) and bilateral lesion location (55%) was observed. Type I lesion was the most frequent type observed, with intraocular disposition in the macula. An epidemiological survey revealed that direct contact with cats; consuming raw or poorly cooked meat and direct contact with the soil were significantly associated with greater likelihood of acquiring ocular toxoplasmosis. Sample characterization in relation to age range was significant for patients between 31 and 40 years [??, chi-square test (p = 0.04)], but population traits such as schooling, sanitary district, and monthly income were not significant. Results confirm that ocular toxoplasmosis is widely distributed in the metropolitan area of Natal, Brazil, with significant prevalence of ocular lesions provoked by T.gondii. It is suggested that sanitary authorities exert greater control in order to minimize the risk of toxoplasmic infection, mainly in pregnant women. / A toxoplasmose, provocada pelo parasito intracelular Toxoplasma gondii, ? uma das parasitoses mais prevalentes em todo o mundo. Nos humanos, a transmiss?o ocorre por meio das tr?s formas evolutivas do parasito: oocistos, cistos tissulares e taquizo?tos. Os fel?deos, silvestres ou dom?sticos, s?o os hospedeiros definitivos. A forma ocular da toxoplasmose pode ser de origem cong?nita com manifesta??es cl?nicas precoces ou tardias, ou ainda ser adquirida ap?s o nascimento. O T. gondii ? considerado o principal respons?vel pela maioria dos casos de uve?tes infecciosas. Este estudo avaliou a toxoplasmose ocular, relacionando-a com fatores associados ao modo de vida dos pacientes e descrever um perfil epid?mico-sorol?gico e cl?nico dos indiv?duos acometidos. Foi realizado um estudo seccional, com uma popula??o de 159 pacientes. Para avalia??o dos dados observados foi utilizada a an?lise univariada com c?lculo de Odds Ratio, tendo como ?ndice de confian?a de 95% e o valor de p < 0,05. Foi observada uma preval?ncia de 4% de toxoplasmose ocular na popula??o de pacientes atendidos na cl?nica oftalmol?gica. Dos pacientes examinados diretamente por ensaio imunoenzim?tico (MEIA-AxSYM?- Microparticle Enzyme Imune Assay), considerando apenas as uve?tes, foi verificada uma freq??ncia de anti- T. gondii de 73%, a maioria dos pacientes apresentaram titula??o entre 40-99 UI IgG/mL. Quanto ? localiza??o da les?o ocular foi observada a bilateralidade em 57% dos pacientes avaliados pela t?cnica de oftalmoscopia. Quando comparados com os resultados da busca ativa de prontu?rios se observou uma similaridade na freq??ncia de preval?ncia para toxoplasmose ocular (74%), e 55 % quanto a localiza??o bilateral da les?o. Quanto ao tipo de les?o observada, a mais freq?ente foi a les?o do tipo I, com disposi??o intraocular na m?cula. O inqu?rito epidemiol?gico revelou que os fatores de riscos: o contato direto com gatos, o consumo de carne crua ou mal cozida e o contato direto com o solo foram significativamente associados com as maiores chances de adquirir toxoplasmose ocular. A caracteriza??o da amostra em rela??o ? faixa et?ria foi significativa para pacientes entre 31-40 anos [??, Teste do qui-quadrado (p = 0,04)], por?m caracter?sticas populacionais tais como escolaridade, distrito sanit?rio, renda mensal n?o tiveram signific?ncia segundo esse teste estat?stico. Os resultados confirmam que a toxoplasmose ocular est? amplamente distribu?da na cidade do Natal, com significativa preval?ncia de les?es oculares provocadas pelo T.gondii. ? recomend?vel um maior controle por parte das autoridades sanit?rias, visando minimizar o risco de infec??o toxopl?smica em toda popula??o.

Made available in DSpace on 2014-12-17T14:10:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AndrewDMoura_DISSERT.pdf: 2171367 bytes, checksum: f41e94b4a019b04f63123834b3af9d4c (MD5) Previous issue date: 2013-04-02 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico / Toxoplasmosis is a zoonosis of worldwide distribution caused by the protozoan Toxoplasma gondii, triggering dangerous complications in immunocompromised patients and pregnant women, as well as having great economic impact for the livestock. So far the control of toxoplasmosis is made primarily by chemotherapy. However, most drugs used routinely have some limitations. In order to control this disease, several research groups, including ours, has been working to develop a medical-veterinary vaccine based on parasite antigens, vectors and protocols of immunization. In this study were implemented and standardized methodologies for amplification and cloning of recombinant immunogens in the system for the development of a prototype vaccine, based on the surface antigens of T. gondii and recombinant adenovirus encoding these antigens. Genes encoding BAG1, GRA2 and SAG1 proteins were amplified. We established a strategy for cloning SAG1, SAG2, SAG3 and TgAMA1- genes in recombinant system. The genes encoding SAG1 and SAG2 were cloned and their sequences showed high similarity with sequences from GenBank. The virtual translation of these proteins showed polymorphisms in the amino acid sequence, which can be correlated with levels of antigenicity. Simultaneously, the adenovirus encoding the SAGs (HAdSAGs) were expanded, purificated and characterizated. Immunization of C57bl/6 mice, using viral supernatant was not enought to elicit immune responses at high levels, being required HAdSAGs titration for future immunizations. Therefore, this study allowed the cloning of the two genes important for the development of a prototype vaccine. Besides, implementations methodologies that permit advancements in the development of a vaccine against toxoplasmosis using adenovirus to express proteins of the parasite / A toxoplasmose ? uma zoonose de distribui??o mundial causada pelo protozo?rio Toxoplasma gondi podendo desencadear graves complica??es em pacientes imunossuprimidos e gestantes; bem como acarretando grande impacto econ?mico para a pecu?ria. At? o momento o controle da toxoplasmose ? feito basicamente pela quimioterapia. Contudo, a maioria das drogas utilizadas na rotina apresentam alguma limita??o. No intuito do controle dessa parasitose, diversos grupos de pesquisas, inclusive o nosso, v?m trabalhando para o desenvolvimento de uma vacina m?dico-veterin?ria com base em ant?genos do parasito, vetores e protocolos para imuniza??o. Nesse estudo foram implantadas e padronizadas metodologias para amplifica??o e clonagem de imun?genos em sistema recombinante visando o desenvolvimento de um prot?tipo vacinal, tendo como base os ant?genos de superf?cie de T. gondii e adenov?rus recombinante codificando esses ant?genos. Os genes que codificam as prote?nas BAG1, GRA2 e SAG1 foram amplificados. Foi estabelecida uma estrat?gia de clonagem dos genes SAG1, SAG2, SAG3 e TgAMA-1 em sistema recombinante. Os genes que codificam SAG1 e SAG2 foram clonados e suas sequ?ncias apresentaram grande similaridade com sequ?ncias depositadas no GenBank. A tradu??o virtual dessas prote?nas apresentou polimorfismos no n?vel de amino?cidos, que poder?o ser correlacionadas com n?veis de antigenicidade. Paralelamente, foi realizada a expans?o, purifica??o e caracteriza??o dos adenov?rus que codificam as SAGs (HAdSAGs). A imuniza??o de camundongos C57BL/6, utilizando o sobrenadante viral, n?o foi suficiente para desencadear respostas imunol?gicas em altos n?veis, sendo necess?ria a titula??o dos HAdSAGs para futuras imuniza??es. Portanto, esse estudo permitiu a clonagem de dois genes importantes para o desenvolvimento de um prot?tipo vacinal, al?m de implementa??es de metodologias que permitir?o avan?os para o desenvolvimento de uma vacina contra a toxoplasmose usando adenov?rus que expressem prote?nas do parasito

Orientador: Antonio Carlos Paes / Banca: Helio Langoni / Banca: Rogério Giuffrida / Resumo: A toxoplasmose e a leptospirose são doenças zoonóticas que acometem animais domésticos e selvagens. Inquéritos soroepidemiológicos em quatis (Nasua nasua) são importantes para conhecimento, vigilância e controle de doenças. O objetivo deste trabalho foi verificar a soroprevalência de anticorpos anti- Leptospira spp. e anti Toxoplasma gondii, em 108 amostras de soro de quatis mantidos em vida livre, provenientes do Parque Ecológico do Tietê, São Paulo, Brasil. Para a pesquisa de anticorpos anti-Toxoplasma gondii foi utilizado o teste de aglutinação modificada (MAT) verificando soroprevalência de 18 animais (16,67%) positivos e 90 animais (83,33%) negativos (IC 95%= 0,09- 0,23). Dos 18 animais positivos a frequência dos títulos apresentados foram: 25 (n=8; 44,44%), 50 (n=3; 16,67%), 100 (n=3; 16,67%), 200 (n=1; 5,56%) e 400 (n=3; 16,67%). Para pesquisa de anticorpos anti- Leptospira spp. foi utilizado o teste de Soroaglutinação Microscópica (SAM), sendo 96 animais negativos (88,89%) e 12 animais positivos, correspondente a soroprevalência de 11,11% (IC 95%= 6,0- 19), e os sorovares reagentes encontrados foram Butembo (n=2; 16,67%); Whitcombi (n=1; 8,33%); Sentot (n=1; 8,33%); Gryppotyphosa (n=1; 8,33%); Panama (n=1; 8,33%); Hardjo bovis (n=1; 8,33%); Hardjo ctg (n=1; 8,33%); Hardjo prajitno (n=4; 33,33%) e a frequência dos títulos apresentados foi: 100 (n=5; 41,67%); 200 (n=5; 41,67%); 400 (n=2; 16,67%). Portanto o presente estudo demonstra a importância da avaliação sorológica anti- Toxoplasma gondii e anti- Leptospira spp. em quatis de vida livre, o que avalia os aspectos epidemiológicos relacionados a estas zoonoses e riscos para a saúde pública, pois mantém contato com humanos / Abstract: The toxoplasmosis and leptospirosis are zoonotic diseases that affect domestic and wild animals. Seroepidemiological surveys in coatis (Nasua nasua) is important for information, surveillance and disease control. The objective of this study was to determine the seroprevalence of antibody against Leptospira spp. and Toxoplasma gondii in 108 samples of coatis serum maintained in the wild, from the Ecological Park of Tietê, São Paulo, Brazil. For research of anti-Toxoplasma gondii antibodies we used the modified agglutination test (MAT) and 18 animals (16.67%) were soropositive and 90 animals (83.33%) negative (95% CI = 0,09- 0.23). Of the 18 positive animals positive the frequency of the antibodies were: 25 (n = 8; 44.44%), 50 (n = 3; 16.67%), 100 (n = 3; 16.67%), 200 (n = 1; 5.56%) and 400 (n = 3; 16.67%). To search the anti-Leptospira spp antibodies. It was used the Microscopic Agglutination Test test (MAT), and 96 were negative 88.89%) and 12 positive (11,11%) (95% CI = 6,0- 19). The serovars reagents Butembo (n = 2; 16.67%); Whitcombi (n = 1; 8.33%); Sentot (n = 1; 8.33%); Gryppotyphosa (n = 1; 8.33%); Panama (n = 1; 8.33%); Hardjo bovis (n = 1; 8.33%); Hardjo ctg (n = 1; 8.33%); Hardjo prajitno (n = 4; 33.33%). The frequency of the presented titles were 100 (n = 5; 41.67%); 200 (n = 5; 41.67%); 400 (n = 2; 16.67%). Therefore, this study demonstrates the importance of evaluating the serological response to anti- Toxoplasma gondii and for anti-Leptospira spp. of captive animals to assess epidemiological aspects related to these zoonoses and risks to public health because it maintains contact with humans / Mestre

Orientador: Alvimar José da Costa / Banca: Kátia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Carlos Noriyuki Kaneto / Banca: Welber Daniel Zanetti Lopes / Banca: Claudio Alessandro Massamitsu Sakamoto / Resumo: Este estudo teve como objetivo pesquisar a presença de T. gondii no sêmen, testículos e epidídimos de gatos experimentalmente infectados por este coccídio. Para tanto, doze felinos machos, sem raça definida, em idade reprodutiva e sorologicamente negativos para T. gondii foram selecionados e distribuídos em três grupos experimentais, GI: inoculados com 600 cistos teciduais de T. gondii (cepa "P"), GII: inoculados com 2x105 taquizoítos (cepa "RH"), e GIII: não inoculados (grupo controle). Anteriormente à inoculação (dias -7 e 0) e no 7º, 14º, 21º, 28º, 42º, 56º e 70º dias pós-inoculação (DPI), todos felinos, foram submetidos a exames clínicos, sorológicos (RIFI) e hematológicos (hemograma e parasitemia pelo T. gondii). As colheitas de sêmen (eletroejaculação), foram realizadas nas referidas datas, sendo posteriormente realizada a pesquisa do T. gondii por meio da nested PCR e bioprova em camundongos. No 70º DPI, os doze felinos foram orquiectomizados, sendo em seus testículos e epidídimos avaliada a presença do parasito (nested PCR, bioprova em camundongos, análises histopatológicas e imunohistoquímicas). Todos os felinos inoculados com T. gondii (GI e GII), soro-converteram à infecção toxoplásmica e apresentaram picos parasitêmicos em diferentes datas experimentais pós-inoculação. Os felinos inoculados com a cepa "RH" (GII) apresentaram títulos sorológicos mais elevados que os inoculados com a cepa "P" (GI). Nestes animais (GII) também foram diagnosticados mais picos parasitêmicos e alterações clínicas que nos felídeos pertencentes ao grupo I. Em nenhuma data experimental foi diagnosticada (bioprova e nested PCR) a presença de T. gondii nas amostras seminais colhidas dos felinos (GI, GII e GIII), nem tampouco nos testículos e epidídimos colhidos destes animais (nested PCR, bioprova, análises histopatológicas e imunohistoquímicas). Tais resultados possibilitam inferir... / Abstract: This study aimed to investigate the presence of T. gondii in semen, testicles and epididymis of cats experimentally infected with this coccidia. Therefore, twelve mongrel male cats of reproductive age and serologically negative for T. gondii were selected and divided into three experimental groups, GI: inoculated with 600 tissue cysts of T. gondii ("P" strain), GII : inoculated 2x105 tachyzoites (strain "HR"), and GIII: not inoculated (control group). Prior to inoculation (days -7 and 0) and days 7º, 14º, 21º, 28º, 42º, 56º and 70º post-inoculation (PID), all cats underwent clinical, serological (IFA) and haematological (blood count and parasitemia by T. gondii) examinations. Semen samples were obtained (eletroejaculation) those dates, and later held the T. gondii search by nested PCR and bioassay in mice. On 70º PID, the twelve cats were castrated, and their testicles and epididymis were evaluated for the presence of the parasite (PCR, bioassay in mice, and histopathological and immunohistochemical analyzes). All cats inoculated with T. gondii (GI and GII), seroconverted to T. gondii infection and showed parasitemia peaks in different experimental days post inoculation. The cats inoculated with the "RH" strain (GII) had higher titers than those inoculated with the "P" strain (GI). In these animals (GII) were also diagnosed more parasitemia and clinical changes compared to those belonging to Group I. In no trial date was diagnosed (bioassay and nested PCR) the presence of T. gondii in semen samples taken from the cats (GI, GII and GIII), nor their testis and epididymis (PCR, bioassay, histopathological and immunohistochemical analyzes). These results make it possible to infer that sexual transmission in domestic cats is not an important route of infection in the spread of toxoplasmosis among cats / Doutor