Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Compara la supervivencia global y libre de enfermedad en pacientes mayores de 18 años con leucemia linfática aguda con y sin trasplante alogénico de progenitores hematopoyéticos en el Hospital Nacional Edgardo Rebagliati Marttins en Lima, Perú. Realiza un estudio transversal donde se revisaron 100 historias clínicas. Se obtuvieron 50 historias clínicas de pacientes sometidos a trasplante de progenitores hematopoyéticos entre los años 2008 - 2012 y 50 historias clínicas de pacientes sometidos solo a quimioterapia según protocolo vigente de leucemia linfática aguda en el mismo período, todos mayores de 18 años con datos completos en las historias clínicas y que hayan continuado seguimiento. Se compararon los grupos con prueba chi cuadrado, y se estableció la sobrevida global y libre de enfermedad según método de Kaplan-Meier. Encuentra que un total de 100 pacientes cumplieron los criterios de selección, la sobrevida libre de enfermedad a 5 años fue de 42% post quimioterapia más trasplante de progenitores hematopoyéticos. La sobrevida libre de enfermedad a 5 años fue de 11% post quimioterapia. Se observa una sobrevida global a 5 años post quimioterapia más trasplante de progenitores hematopoyéticos fue 79%, en comparación al 48% de los que solo recibieron Quimioterapia. Además, el costo total de realizar el trasplante de progenitores hematopoyéticos asciende a $285,857 versus $264,140 con quimioterapia. Concluye que la eficacia clínica del trasplante alogénico de progenitores hematopoyéticos como tratamiento de pacientes adultos portadores de leucemia linfática aguda, ha demostrado ser mejor en cuanto costo-efectividad comparado con las obtenidas solo con tratamiento quimioterápicos. / Tesis

OBJETIVO: Determinar los factores asociados a las complicaciones postquirúrgicas con autoinjerto de piel parcial en pacientes con quemaduras de segundo grado profunda en el hospital militar central 2010 – 2016. METODOLOGÍA: Se realizó un estudio descriptivo, observacional, analítico y retrospectivo, de tipo casos y controles. La investigación contó con una muestra de 300 pacientes (96 casos y 204 controles). El estudio se llevó a cabo en el Servicio de Cirugía Plástica de los atendidos en el Hospital Militar Coronel Central en el periodo 2010 al 2016. RESULTADOS: La SCQ > 15% tuvo valor de p=0.00 y su OR = 13.43 (IC95%: 7.49 –24.09) que nos indica que actúa como factor de riesgo para el desarrollo de complicaciones. Para la estancia hospitalaria se encontró un p=0.00 y OR = 11.55 (IC95%: 6,53 – 20,44) indicando que es un factor de riesgo. De igual forma, la asociación entre cobertura tardía y complicaciones postquirúrgicas tuvo un OR = 10,63 (IC95%: 6.03 – 18.74) por lo tanto actúa como factor de riesgo y el valor de p=0.00 indicando que esta asociación es estadísticamente significativa. CONCLUSIONES: Los factores asociados a complicaciones postquirúrgicas en quemaduras de segundo grado profunda en el Hospital Militar Central durante 2010-216 fueron: Superficie corporal >15%, Estancia Hospitalaria <30 días y cobertura tardía a excepción de la atención inmediata que más bien fue un factor protector.

El presente trabajo se realizó con el propósito de evaluar el efecto de la transferencia embrionaria ipsilateral y contralateral a la posición del cuerpo lúteo sobre la tasa de preñez en llamas. Se utilizaron 43 llamas hembras receptoras de 4 a 6 años, distribuidas aleatoriamente en 4 grupos de estudio: G1 (n=10): Cuerpo lúteo en ovario derecho y transferencia ipsilateral, G2 (n=10): Cuerpo lúteo en ovario derecho y transferencia contralateral, G3 (n=15): Cuerpo lúteo en ovario izquierdo y transferencia ipsilateral y G4 (n=8): Cuerpo lúteo en ovario izquierdo y transferencia contralateral. Se utilizaron 10 llamas hembras como donadoras de embriones, las cuales fueron sincronizadas con LH (1ml), superovuladas con 1000 UI de eCG y se provocó luteólisis con prostaglandina (1ml), siendo empadradas posteriormente. El día del empadre las llamas receptoras recibieron tratamiento con LH, con el propósito de sincronizarlas con las donadoras. Siete días post empadre se realizó el lavado uterino para la recolección, evaluación y transferencia de los embriones. La transferencia embrionaria a los grupos experimentales se realizó con embriones frescos el mismo día. Los resultados obtenidos señalan una tasa de preñez de 60% (G1) y 75% (G3) en las hembras con transferencia embrionaria ipsilateral derecha e izquierda respectivamente, mientras que en la transferencia contralateral derecha e izquierda fueron 30% (G2) y 25%(G4) respectivamente. Sin embargo, no se registraron diferencias significativas (p>0.05) entre el grupo G1 con los grupos G2, G3 y G4, además G2 no muestra diferencias significativas (p>0.05) con G4. Mientras que se encontró diferencia (p menor 0.05) entre el grupo G3 con los grupos G2 y G4. Estos resultados indicarían una mayor tasa de sobrevivencia embrionaria en llamas al realizar la transferencia en el cuerno ipsilateral a la posición del cuerpo lúteo ubicado en el ovario izquierdo. / The study was carried out with the objective of to evaluate the embryo survival after the embryo transfer to the uterine horn ipsilateral and contralateral to the corpus luteum (CL) in llamas. Fourtythree llamas recipient females, from 4 to 6 years old were randomly assigned in 4 groups: G1 (n=10): CL in right ovary and ipsilateral embryo transfer, G2 (n=10): CL in right ovary and contralateral transfer, G3 (n=15): CL in left ovary and ipsilateral transfer, and G4 (n=8): CL in left ovary and contralateral transfer. Ten llamas were used as embryo donors, they were synchronized with LH (1ml), then superovulated with 1000 UI eCG and induced to luteolysis with PGF2α; after that, all of them were mated. The same day of mating, the recipients were treated with LH, with the purpose of synchronization with donors. Seven days postmating, the uterine horns were flushed to recover, evaluate and transfer the embryos. The nonsurgical embryo transfer was used the same day with fresh embryos. The results of pregnancy rate were 60% (G1) and 75% (G3) in recipient females with ipsilateral embryo transfer right and left respectively. On the other hand, contralateral embryo transfer right and left were 30% (G2) and 25% (G4) respectively. However, the differences did not reach significance (p>0.05) between G1 with G2, G3 and G4. Furthermore, G2 not differ (p>0.05) from G4. Whereas, there is difference (p less 0.05) between G3 with G2 and G4. These results indicate that pregnancy rate is major in llamas when the embryo transfer was to the uterine horn ipsilateral to the CL in the left ovary.

INTRODUCCIÓN: Por los resultados y calidad de vida que proporciona, así como por su excelente relación costo-efectividad, el Transplante Renal es la mejor opción terapéutica para una parte significativa de pacientes con Insuficiencia Renal Crónica Terminal (IRCT). Los resultados del transplante han mejorado de forma continuada gracias al conocimiento de los factores involucrados en la reacción de rechazo, al uso apropiado de inmunosupresoras para su prevención y tratamiento y al diseño de estrategias para la profilaxis y tratamiento de las infecciones. El rechazo agudo es la principal causa de pérdida del injerto y la infección representa la complicación más frecuente y con mayor índice de mortalidad en los primeros meses del transplante. Por tanto, es fundamental conseguir un adecuado equilibrio entre el efecto inmunosupresor y mantener una respuesta inmunológica suficiente para proteger al huésped de las infecciones. Para valorar la eficacia y seguridad de un fármaco inmunosupresor, hay que considerar tres aspectos principales: potencia inmunosupresora, complicaciones relacionadas con la inmunodepresión y toxicidad de la droga. La aparición de la Ciclosporina A (CsA) ha optimizado dramáticamente la sobrevida del injerto en el primer año del transplante renal, debido a la reducción de la incidencia de rechazo agudo. Sin embargo, la vida media del injerto al final del primer año, permanece invariable. Desde que el rechazo agudo fue considerado el más poderoso predictor de la nefropatía crónica del transplante, ha habido una aparente contradicción entre la eficacia de la CSA para prevenir el rechazo agudo y su fracaso en modificar la historia natural de la nefropatía crónica del transplante. La pregunta en torno a la CsA es si se responsabiliza por la nefropatía crónica del injerto, manteniendo el problema en discusión. La prednisona es el corticoide más comúnmente utilizado en el transplante renal, remontándose a los inicios del mismo. Constituyó la inmunosupresión convencional y actualmente se asocia a CsA. L Micofenolato Mofetil (MMF) es un nuevo agente inmunosupresor que ha demostrado una sustancial reducción de la incidencia del rechazo agudo después de un transplante renal en casi un 50%. En tres estudios multicéntricos recientes randomizados, la asociación de MMF con CsA y prednisona, ha demostrado reducir la incidencia del rechazo agudo después de un transplante renal en casi un 50%. Los principales efectos colaterales son gastrointestinales, con un leve aumento en la incidencia de leucopenia y de infecciones, principalmente virales, encabezadas por el Citomegalovirus (CMV). El CMV es el virus más importante que infecta a los enfermos transplantados. Puede producir diversos síndromes clínicos que van desde fiebre aislada hasta neumonías, gastroenteritis, hepatitis y coriorretinitis. Además la CMV produce un estado añadido de inmunosupresión en el receptor que favorece el desarrollo de infecciones por otros gérmenes oportunistas. HIPÓTESIS: Hipótesis Asociativa sin relación de dependencia. La incidencia de infección por Citomegalovirus en Trasplantados Renales tratados con Micofenolato Mofetil combinado con Ciclosporina A y Prednisona, es alta. OBJETIVOS : 1.Objetivo General : -Identificar la incidencia de infección por Citomegalovirus en transplantados renales tratados con Micofenolato Mofetil combinado con Ciclosporina A y Prednisona. 2.Objetivos Específicos : a)Identificar al grupo etáreo más numeroso con PCR (+) para CMV b)Determinar el cuadro clínico más frecuente en pacientes infectados con CMV. c)Evaluar los pacientes con otras infecciones oportunistas, post ó comórbidas al CMV. d)Conocer el tiempo promedio de aparición de la infección en la población trasplantada renal. e)Conocer la sobrevida del injerto y del paciente con infección por CMU después del trasplante renal.

En el manejo del paciente quemado, muchas veces, el tratamiento de las zonas lesionadas, requiere del injerto de piel parcial, tomado de otras áreas del cuerpo, que si no se manejan adecuadamente, se pueden infectar, aumentando por lo tanto el área de superficie corporal lesionada y el tiempo de reepitelización. En pacientes quemados del Hospital Nacional Arzobispo Loayza no es raro ver infecciones de zonas dadoras; no existiendo un criterio único de cómo manejarlas. El objetivo del presente estudio fue comparar la diferencia en resultados, de la utilización de dos métodos: monocapa de gasa vs gasa parafinada, como coberturas de zonas dadoras de piel parcial, en pacientes quemados del Hospital Loayza. Se realizó un ensayo clínico controlado con tratamiento cruzado (Crossover design) que permitió comparar los resultados en 41 pacientes quemados entre 14 y 65 años a quienes se les aplicó ambos métodos de cobertura en la zona dadora en forma simultánea. En el estudio encontramos una tasa de infección del 2.44% (1 de 41) de la zona dadora cuando se utilizó una monocapa de gasa, y del 26,83% (11 de 41) cuando se utilizó gasa parafinada; ésto nos permite concluir que existe diferencia significativa en la utilización de estos dos métodos, es decir, menor probabilidad de infección con monocapa de gasa, con una p menor a 0.05; sin embargo la reepitelización de la zona dadora se da con mayor rapidez, cuando se utiliza gasa parafinada, en un promedio de 15.37 días; mientras que con la monocapa de gasa se da en 16.55 días.

Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / El presente trabajo ha sido orientado al estudio y formulación de un protocolo para la determinación de los niveles plasmáticos de ácido micofenólico en pacientes pediátricos trasplantados renales. La cuantificación del ácido micofenólico fue hecha en el Servicio del Laboratorio Clínico del Hospital Luis Calvo Mackenna, a través de la técnica de EMIT (Enzime Multiplied Immunoassay Technique), utilizando como referencia la determinación por HPLC (High Performance Liquid Chromatography) realizada en el Laboratorio de Farmacocinética de la Facultad de Medicina de la Universidad de Chile. El criterio adoptado en relación a las condiciones de toma de muestra para el fármaco se basó en la revisión bibliográfica de las características farmacocinéticas y formas de administración del fármaco y se estableció en consenso con todo el equipo de salud, que comprende al cuerpo Médico, Químico Farmacéutico y Enfermeras. Este estudio constituye una herramienta para crear un Servicio de Farmacocinética Clínica, que proporcione ayuda e información a la comunidad del hospital, con el fin de obtener un uso racional de los niveles plasmáticos y mejorar la relación costo/beneficio de las mediciones de las concentraciones plasmáticas de medicamentos. Para que la determinación de niveles de ácido micofenólico en el laboratorio de Bioquímica Central del Hospital tuviera validez, se revisaron las fichas clínicas de los pacientes y se diseñaron fichas adecuadas para un servicio de Farmacocinética clínica que recogerán datos sobre el paciente, cumplimiento y adherencia de la terapia, hora de última toma de dosis, hora de toma de muestra, entre otros

Memoria para optar al título de Ingeniero Civil Industrial / Para Chile el año 2017, en el ámbito de trasplantes de órganos, fue histórico, ya que se realizaron 457 trasplantes de órganos debido a los 173 donantes efectivos que hubo. Lo que se traduce en una tasa de 10 donantes por millón de habitantes (pmp). Cifra lejana a España, quien es líder mundial con una tasa de 46,9 pmp. Estos 457 trasplantes de órganos distan de la demanda por ellos, la cual sobrepasa las 1.900 solicitudes al año, si a esto se le suma el impacto positivo en la calidad de vida de las personas trasplantadas y a la reducción de gastos que tendría el estado de Chile, es correcto señalar que es necesario encontrar una forma de mejorar este índice. Las unidades de procuramiento en Chile, que son las encargadas de detectar posibles donantes de órganos, operan de manera distinta entre ellas, es decir, no siguen exactamente el mismo proceso, lo que provoca una diferencia en los resultados que obtienen cada año. Esta diferencia en cómo operan se debe, entre otros factores, al bajo control existente sobre éstas, donde los resultados son revisados dentro de largos periodos de tiempo y donde el coordinador nacional, quien es la máxima autoridad en temas de donación y trasplante órganos, solo se debe limitar a entregar lineamientos técnicos, ya que cada Hospital es autogestionado. El trabajo entrega una propuesta de 12 indicadores para el desarrollo de un sistema de control de gestión que permita medir y controlar el proceso realizado por las unidades de procuramiento en Chile, logrando así aumentar la efectividad del proceso. Estos indicadores abarcan los resultados, el proceso, las capacidades del personal, así como su satisfacción frente a otros actores. Para lograr esto se desarrolló el trabajo en tres etapas, una investigación sobre la situación actual, donde se modeló el proceso. Una propuesta de indicadores para la herramienta de control de gestión y por último una serie de recomendaciones para su implementación. La creación e implementación del sistema de control de gestión no se podrán realizar debido a que se encuentra fuera de los alcances de este trabajo. El valor del sistema de control de gestión recae en que permitirá cuantificar el proceso, entregar información real acerca del desempeño de éste, por etapas y centros de procuramiento. Además la información obtenida será uno de los principales drivers para la toma de decisiones del coordinador nacional, decisiones que deben ir hacia el objetivo de aumentar la cantidad de donantes en Chile. Se espera que, a futuro, con el sistema de control de gestión se logre aumentar el índice de donaciones en Chile. Si se aumentase la tasa de donación de órganos en 1 donante efectivo pmp, se estima que significaría un ahorro anual de $551.939.800 y para el estado, solo por concepto de disminución de costos. Cifra superior al costo de $35.000.000 que costaría la implementación de los indicadores.

Introduction: Severe ischemia-reperfusion injury (IRI) after liver transplantation are correlated with lower early and late graft and patient survival, higher infection rates, appearance of acute and chronic rejections and other complications. In this field, it has been demonstrated that the prostaglandin E1 (PGE1) presents cytoprotective, anti-inflammatory and vasodilator effects. Therefore, the PGE1 assembles most of the requirements necessary to prevent the development of the ischemia-reperfusion injury, especially if it is administered through via portal vein at full doses in the moment of graft reperfusion.Materials and methods: Female Largewhite-Landrace pigs (body weight between 30-35 kg) were used. The orthotopic liver transplantation were performed in 18 pairs of pigs. The study was divided into three groups as follows: Control group, 4 experiments of orthotopic liver transplantation with a cold preservation time of 3 hours in Wisconsin solution; Groups A and B, 7 experiments with 24 hours of cold preservation time in each group. Concerning intraportal infusion of medication, the Group B was infused with prostaglandin E1 at a dose of 0.15 ug/kg/min (Alprostadil 500ug) for 90 minutes in the portal reperfusion of the graft; and Group A was infused with saline solution for 90 minutes in the same time period. In the recipient surgery, biochemical (GOT, GPT, LDH, B-Galactosidase, Hialuronic Acid), hemodynamic and histological studies were carried out to evaluate the ischemia-reperfusion injury (IRI).Results: Survival rate in control group was 100 % and it presented a lower level of sinusoidal-hepatocellular injury and leukocyte activation than the groups A and B. From the beginning of the surgery until the moment of the PGE1 administration, both the group A and the group B were similar in relation to the histology, hepatocellular, endothelial and inflammatory damage markers. After the infusion of the medication (PGE1), the group B developed an increase of the total hepatic flow and a lower alteration of all the parameters of hepatocyte-sinusoidal injury and hepatic function, with an statistical significance in the great majority of them. The portal PGE1 infusion at full doses did not generate hemodynamic instability. Conclusions: The liver transplantation in pigs with 24 hours of cold ischemia of the graft produced a severe IRI that caused the death of all the animals in the groups A and B due to primary graft nonfunction. Nevertheless, with the intraportal PGE1infusion, the group B presented an increase of the total hepatic flow and a lower alteration of all the parameters of hepatocellular injury, sinusoidal damage and hepatic function. The portal PGE1 perfusion at full doses was well tolerated at hemodynamic level.

A pesar de la experiencia acumulada, la mortalidad postoperatoria temprana del trasplante pulmonar continua siendo elevada. Los factores asociados a este evento permanecen siendo controvertidos. Objetivo: Revisar la serie de trasplantes pulmonares realizados en el Hospital Vall d' Hebron para establecer la supervivencia acumulada e identificar los factores asociados con riesgo de mortalidad postoperatoria precoz. Pacientes y métodos: Estudio retrospectivo de una serie consecutiva de 208 pacientes adultos sometidos a trasplante pulmonar durante el período comprendido desde enero de1997 hasta diciembre de 2004. El análisis estadístico se realizó con el paquete informático SPSS, versión 13.0. Para el análisis de la supervivencia se usó el método de Kapplan-Meier. Se realizó un análisis bivariante de variables del receptor (sexo, IMC, diagnóstico), del donante (sexo, días de intubación orotraqueal, oximetría arterial, hábito tabáquico, traumatismo torácico, radiografía de tórax, secreciones pulmonares, calidad del injerto, solución de perfusión) y del acto quirúrgico (tipo de trasplante y realización de circulación extracorpórea) para identificar su asociación con la mortalidad a los 30 y 90 días del postoperatorio. Las variables que presentaron significación estadística se sometieron a un análisis multivariante, mediante modelo de regresión logística para calcular Odds Ratio (OR) y su intervalo de confianza (IC) del 95%. Resultados: El diagnóstico de hipertensión arterial pulmonar tuvo mayor mortalidad que el resto de los diagnósticos aunque sin significación estadística. La calidad subóptima del injerto fue la única variable del donante que en el análisis multivariante se asoció a mayor mortalidad a los 30 días OR=2.8 (IC 95%:1.3-6.1). El trasplante unipulmonar se asoció a mayor mortalidad a los 90 días OR=4.1 (IC 95%: 1.9-9.1). La realización de circulación extracorpórea fue la variable que se asocio a mayor mortalidad a los 30 días OR=2.4 (IC 95%:1.2-5.4) y a los 90 días OR=3.2 (IC 95%:1.5-6.8). Conclusiones: La supervivencia en el primer, segundo , tercer y quinto año fue del 64%, 55%, 52% y 43% respectivamente. La mortalidad a los 30, 60 y 90 días fue del 18%, 22% y 25% respectivamente. Las variables asociadas a mortalidad a los 30 días fueron la calidad subóptima de los injertos pulmonares y la realización de circulación extracorpórea. Las variables asociadas a mortalidad a los 90 días fueron el tipo de trasplante unipulmonar y la realización de circulación extracorpórea. / Despite years of experience, early postoperative mortality rate in lung transplantation remains high. Risk factors associated with this event are still controversial. Objective: To check the number of lung transplantations carried out at Vall d' Hebron Hospital in order to establish cumulative survival rates and identify possible factors associated with early postoperative mortality risk. Patients and methods: A retrospective study of 208 consecutive adult patients receiving lung transplantation during January 1997 and December 2004. Statistcal analysis was carried out by using SPSS 13.0 software. Survival analysis was done by means of Kapplan-Meier method. A bivariate analysis of the recipient's variables was carried out ( sex, IMC, diagnosis), as well as the donor's (sex, time of tracheal intubations with mechanic ventilation, arterial oximetry, smoke habit, chest trauma, chest X-ray, lung secretion, graft quality and perfusion solution) and of the surgery (type of transplantation and extracorporeal circulation ) to identify its association with 30 and 90-day postoperative mortality rates. Variables which showed statistic significance were subjected to a multivariate analysis, by means of a logistic regression model to calculate odds ratio (OR) and 95% confidence intervals (CI). Results: Patients with arterial pulmonary hypertension had a higher mortality rate than other diagnoses, but without statistical significance. Marginal graft quality was the only donor's variable in the multivariate analysis associated with higher mortality rate within 30 days OR=2.8 (IC 95%: 1.3-6.1). Unilateral lung transplantation was associated with higher mortality within 90 days OR=4.1 (IC 95%: 1.9-9.1). The use of extracorporeal circulation (CEC) was the variable associated with higher mortality within 30 days OR=2.4 (IC 95%: 1.2-5.4) and within 90 days OR= 3.2 (IC 95%: 1.5-6.8). Conclusions: Survival rate within the first, second, third and fifth years was 64%, 55%, 52% and 43% respectively. Mortality rate within 30, 60 and 90 days was 18%, 22%, and 25% respectively. Variables associated with 30- day mortality were marginal graft quality and the use of CEC. Variables associated with 90- day mortality were unilateral transplantation and the use of extracorporeal circulation.

Introducción: La sangre de cordón umbilical (SCU) contiene una elevada cantidad de progenitores hemopoyéticos (PH) circulantes con capacidad de repoblación medular a largo plazo. Como consecuencia, dicho tejido se ha convertido en alternativa para trasplante. El volumen limitado condiciona que el número absoluto de células madre sea bajo, repercutiendo en la probabilidad de injerto, fundamentalmente a corto plazo. La evaluación de las experiencias clínicas iniciales han permitido demostrar la correlación entre dosis de PH comprometidos infundidos y velocidad de injerto mieloide. Además, la rápida recuperación de granulocitos y plaquetas disminuye la morbimortalidad relacionada con el procedimiento.La hemopoyesis puede mantenerse in vitro aplicando unas condiciones de cultivo específicas. Mediante la utilización de citoquinas selectivas se pueden generar células in vitro con características funcionales definidas, en unos cultivos llamados de expansión.Hipótesis: La coinfusión de PH obtenidos mediante expansión reducirá el tiempo de neutropenia tras trasplante de SCU.Objetivos: La evaluación de la eficacia, aplicabilidad y resultados de un método de generación de PH mediante expansión. Para ello se han desarrollado los siguientes objetivos específicos, que han sido publicados:- definición de las condiciones de cultivo de expansión que permitan generar PH diferenciados (Haematologica 1999; 84: 493-98).- adaptación de las condiciones básicas de expansión a los requerimientos de los protocolos clínicos: utilización de medios libres de suero y proteínas de origen animal (Haematologica 1999; 84: 675-82).- desarrollo de un protocolo tecnológico de expansión de células CD34+ seleccionadas de SCU y su aplicación clínica (Transfusion 2000; 40: 625-31).Resultados: 1) Papel de la selección celular en el cultivo: A concentración de 105 células/ml la amplificación de PH es significativamente mayor partiendo de células seleccionadas que de células mononucleadas (16 veces mayor).2) Generación de células según combinación de citoquinas: la adición de citoquinas de acción temprana, de acción intermedia y/o tardía promueve una mayor generación de PH comprometidos, así la presencia de SCF y G-CSF es necesaria para amplificar 4 veces el nº de células nucleadas en 6 días.3) Presencia continuada de citoquinas: En cultivos de 6 días, existe un mayor rendimiento proliferativo (hasta 2 veces más) si se adicionan citoquinas diariamente, y/o se utilizan formas glicosiladas que aumentan su vida media.4) Cultivo libre de suero: Es posible substituir la función del suero de ternera fetal utilizando medios libres de suero comerciales y citoquinas de amplio espectro: SCF, IL6 e IL3. Se consiguen tasas de expansión equivalentes y se disminuye el coeficiente de variación (107% frente 61%).5) Papel de FLT3-L y TPO en la expansión: Para generar de forma continua PH comprometidos es necesario mantener funcionales las células madre hemopoyéticas. Mediante el análisis de las células formadoras de área en empedrado (CAFC) de 5 semanas, se ha podido de terminar que la combinación más beneficiosa incluye SCF, FLT3-L, IL6, IL3 y MIP-1a (recuperación del 95% de CAFC a los 6 días de cultivo). La substitución de IL3 y MIP por TPO mejora los resultados y permite recuperar hasta un 145% de CAFC.6) Método de selección positiva tras descongelación de SCU: Se ha adaptado un método de uso clínico (Isolex-300i de Baxter) para pequeñas muestras de SCU criopreservadas. Se realiza sensibilización previa de las bolas magnéticas con el monoclonal anti-CD34 (9C5) y se adiciona un tampón con DNAasa recombinante humana. La pureza media es del 69% y la recuperación del 52%.7) Selección y expansión en bolsas semipermeables para uso clínico: Se realiza la selección celular con el método inmunomagnético directo descrito y se traspasan las células obtenidas a bolsas semipermeables de Teflon para expansión. Tras 6 días de cultivo en medio libre de suero en presencia de SCF, FLT3-L, IL6 y TPO, las células CD34+ iniciales se incrementan 7 veces.8) Estudio piloto: doble trasplante de SCU (una unidad expandida, otra no manipulada). Este método se utilizó en 5 procedimientos clínicos. Se incrementó el nº de PH en un 100% aproximadamente (0,23x106 CD34 expandidas /kg). Sólo se detectó quimera molecular de la unidad expandida los primeros 14 días. La recuperación de neutrófilos se produjo en los días 17-27 a partir de la unidad no manipulada.Discusión: El método descrito permite la generación de PH comprometidos. Durante 6 días de cultivo se amplifica 1 logaritmo el contenido inicial. Este aumento no tiene relevancia clínica. Experiencias de otros autores han mostrado que las células expandidas son capaces de generar neutrófilos en sangre periférica cuando se infunden alrededor de 40x106 CN/kg. Esto supone incrementar hasta 3 logaritmos la expansión, y sólo puede conseguirse incrementando el tiempo de cultivo con el método propuesto. Para ello, se debe establecer un protocolo de al menos 14 días de expansión.Conclusiones: El método biotecnológico descrito, constituye una plataforma terapéutica que permite su desarrollo y adaptación a diferentes objetivos clínico-biológicos basados en la expansión ex vivo de PH. / Introduction: Peripheral blood contained in placental vessels after birth has a high amount of hemopoietic progenitors with long term repopulating ability. Then, this tissue has become an interesting alternative for transplantation. Stem cells collected are limited by the small volume available, and influence the engraftment, resulting in a delayed short-term engraftment. Clinical experiences shown a correlation between committed progenitor infused and speed of myeloid engraftment. Furthermore, a shorten aplasia promotes a decrease in transplant related mortality.Specific conditions maintain hemopoiesis in vitro. Using defined combination of cytokines progenitor cells can be generated in vitro, in a called expansion cultures.Hypothesis: Hemopoietic progenitor coinfusion obtained after expansion can accelerate neutrophil recovery after cord blood transplantation.Objectives: To evaluate a method to generated expanded progenitors in terms of efficacy, applicability and clinical result. The specific objectives developed have been published:- definition of expansion culture conditions allowing the generation of committed progenitor (Haematologica 1999; 84:493-98)- adaptation of basic condition defined to a clinical grade practice: animal-origin protein and serum-free conditions (Haematologica 1999; 84:675-82)- technological protocol development based in cord-blood CD34+ cell expansion for clinical use (Transfusion 2000; 40:625-31)Results:1) Role of CD34-cell positive selection in expansion: Progenitor expansion is significantly higher using CD34+ cells than mononuclear cells at 105 cells/ml (16-fold vs 1 respectively).2) Cell generation depending cytokine combination: exogenous additon of early-acting cytokines and intermediate and/or late-acting ones promotes a higher generation. Minimum combination promoting CFU expansion (4-times at 6-days) contains SCF and G-CSF.3) Continous feeding of cytokines: At 6-days, daily cytokine feeding promotes 2-times more expansion than the unique addition of cytokine at day 0.4) Serum-free culture: Fetal calf serum can be successfully substituted by commercial serum-free media supplemented with broad spectrum cytokines: SCF, IL3 and IL6. Expansion rate is equivalent by a decrease in coefficient of variation was observed (107% vs 61%)5) Role of FLT3-l and TPO in stem cell expansion: Stem cell maintenance is necessary to obtain a constant progenitor cell generation in medium-long term cultures. The analysis of CAFC 5th weeks in expansion cultures has shown the combination including SCF, FLT3-L, IL6, IL3 y MIP-1-alfa as the most benefit (up to 95% of cells were recovered after 6-days of culture). Furthermore, the substitution of IL3 and MIP-1-alfa with TPO has increased the recovery up to 145% of starting CAFC. 6) Description of a positive selection method after CB thawing: Method consists of the use of a clinical available technology (Isolex-300i from Baxter) adapted to cryopreserved cord blood samples: use of 9C5-monoclonal antibody (anti-CD34) sensitized immunobeads and addition of a human recombinant DNAase-based buffer. A purity and yield of 69% and 52% was obtained.7) Selection and expansion of progenitor cells in semipermeable bags for clinical use: Expansion starts in Teflon bags after positive selection using the above described direct immunomagnetic methodology. The assessment of number of CD34+ cells before cryopreservation and after 6-day expansion in serum-free medium containing SCF, FLT3-L, IL6 and TPO shows an increase of 7-times the CD34+ cells number.8) Pilot study: double CB transplant. This strategy was used in 5 clinical transplants. The number of progenitor cells was incresed in 100% aprox (0,23x106 CD34 expanded cells/kg). Only molecular chimera was observed until day 14 but neutrophils counts in peripheral blood were lower than 500/ml. Unmanipulated cord blood engrafted between 17-27 days.Discusion: The described methodology allows the generation of committed progenitor cells. One-log amplification in 6-days was achieved. But this increase had subclinical effects. Experiences published by other authors have shown early presence of neutrophil cells in peripheral blood after infusion of more than 40x106 NC/kg. To achieve this number of cells from cord blood a 3 log expansion of progenitor cells is necessary, and this should be obtained increasing the time of expansion. To do this, a new protocol based in 14-days expansion must be proposed.Conclusions: The described methodology is a therapeutic platform that allows its adaptation and development to different clinical-biological objectives based on ex vivo expansion of progenitor cells.