Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2007. / Submitted by Thaíza da Silva Santos (thaiza28@hotmail.com) on 2011-02-12T17:38:22Z No. of bitstreams: 1 2007_JairRodriguesAlves.pdf: 1238223 bytes, checksum: abcac04939d5f30d77cf4fbafa25cf44 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2011-03-23T15:47:06Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_JairRodriguesAlves.pdf: 1238223 bytes, checksum: abcac04939d5f30d77cf4fbafa25cf44 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-03-23T15:47:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_JairRodriguesAlves.pdf: 1238223 bytes, checksum: abcac04939d5f30d77cf4fbafa25cf44 (MD5) / A doença de Chagas causada pelo Trypanosoma cruzi é transmitida ao homem através de fezes contaminadas durante o repasto sanguíneo de insetos hemípteros, subfamília Triatominae. É crescente o surgimento de populações de triatomíneos resistentes aos inseticidas disponíveis, além do aparecimento de novas espécies com potencial vetorial, como Rhodnius milesi na Amazônia. Diante da diversidade química das plantas como fonte de novas moléculas ativas, este estudo avaliou a atividade inseticida e a capacidade de atrasar o ciclo de desenvolvimento do inseto de extratos de plantas do Cerrado sobre ninfas de 4° estádio (N4) de R. milesi e acompanhou o ciclo biológico do inseto em condições de laboratório. Entre os 67 extratos testados, 15 causaram entre 12,5 a 42,5% de mortes dos insetos. A partição em sistema líquido-líquido de nove desses extratos ativos permitiu selecionar a fase hexânica do extrato etanólico da folha de Siparuna guianensis, que foi fracionada em coluna aberta de sílica gel e as frações reunidas em grupos (G), segundo perfil cromatográfico em CCD. O grupo G6 apresentou propriedades triatomicida e toxicológicas sobre as ninfas de 4º estádio de R. milesi. Foi observada uma taxa de eclosão de 94,2% dos ovos em ninfas de 1º estádio, com incubação média de 15 dias. O período médio em dias de desenvolvimento pósembrionário foi para ninfas de 1º estádio de 17,2; 2º estádio 18,2; 3º estádio 17,3; 4º estádio 20,5 e 5º estádio 32,5 dias, com 1 a 1,5 repastos sanguíneos em cada estádio. O período médio transcorrido da eclosão da ninfa ao inseto adulto de R. milesi foi de 105,7 dias. O percentual de mortalidade total foi de 11,5%, sendo 4,9% para N1; 3,2% para N2; 2,7% para N3; 0,7% para N5 e nenhuma morte em N4, resultados que corroboram com a utilização de ninfas N4 em ensaios de atividade inseticida. Foi observado o período médio de jejum em ninfa de 5º estádio de 333,5 dias. O presente trabalho registra pela primeira vez a atividade triatomicida de S. guianensis e descreve o ciclo de vida, inédito, da biologia reprodutiva de R. milesi em condições de laboratório. / Chagas’ disease is transmitted to humans through feces of hemoptrous insects, subfamily Triatominae, contaminated during blood feeding. The increase in Triatominae populations resistant to available insecticides, and the appearance of new potential vector species, such as Rhodnius milesi in the Amazon region, are two pressing concerns. Given the uncharted chemical diversity of Cerrado plants as sources of new active molecules, this study assessed the insecticidal properties and the insect development retarding capacities of Cerrado plant extracts on 4th stage (N4) R. milesi nymphs, through the monitoring of the insect’s biological cycle under laboratory conditions. Of the 67 plant extracts tested, 15 caused insect mortalities between 12.5 and 42.5%. Nine of the 15 active extracts were partitioned in a liquid-liquid system allowing the selection of the hexanic phase of the ethanolic extract of the Siparuna guianensis leaf, which was fractioned in an open silicon gel column. The fractions were grouped (G) according to their chromatographic CCD profiles. Group G6 manifested triatomicidal and toxicological activity on 4th instar R. milesi nymphs. An overall ecclosion rate of 94.2% was observed for eggs of the 1st instar nymphs, incubated for an average of 15 days. The average pos-embrionary development period was 17.2 days for 1st instar nymphs, 18.2 for 2nd instar nymphs, 17.3 for 3rd instar, 20.5 for 4th instar, and 32.5 days for 5th instar nymphs, with 1 to 1.5 blood feedings in each stage. The average period between the ecclosion of the nymphs and the adult R. milesi was 105.7 days. The total mortality percentage was 11.5%; 4.9% for N1; 3.2% for N2; 2.7% for N3; and 0.7% for N5. However, no deaths were registered for N4, which corroborates the use of N4 nymphs in insecticidal activity studies. The average period of resistance to starvation for 5th instar nymphs was 333.5 days. This study is an initial investigation of the triatomicidal activity of S. guianensis, and is the first description of the reproductive cycle of R. milesi under laboratory conditions.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2009. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-04-16T22:05:09Z No. of bitstreams: 1 2009_CamilaMirandaCosta.pdf: 4198124 bytes, checksum: d3b4eb30602d04ae4793e2f9c4245f48 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-04-16T22:06:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_CamilaMirandaCosta.pdf: 4198124 bytes, checksum: d3b4eb30602d04ae4793e2f9c4245f48 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-04-16T22:06:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_CamilaMirandaCosta.pdf: 4198124 bytes, checksum: d3b4eb30602d04ae4793e2f9c4245f48 (MD5) / Triatomíneos vetores da doença de Chagas são organismos hematófagos durante todas as fases de seu desenvolvimento. O sucesso de seu repasto se deve, em grande parte, ao conteúdo de suas glândulas salivares. Especialmente o conjunto de proteínas secretadas lhes proporciona ter acesso ao seu alimento contrapondo mecanismos hemostáticos do organismo alvo, como a agregação plaquetária, coagulação sanguínea e vasoconstrição, como também processos inflamatórios. Tendo em vista a relevância desses componentes no controle da transmissão do Trypanosoma cruzi, as salivas de espécies de triatomíneos importantes na epidemiologia dessa enfermidade no Brasil, Panstrongylus megistus no Cerrado e Mata Atlântica, e Rhodnius brethesi e Rhodnius robustus na Amazônia, foram coletadas e submetidas a estudos de caracterização proteômica. Inicialmente foram otimizadas as condições experimentais de separação por eletroforese bidimensional (2DE) em faixas amplas de pH. O número de spots nas salivas analisadas variou entre 129 e 320. As análises comparativas dos mapas bidimensionais de cada saliva revelam perfis de expressão diferentes entre gêneros. A identificação de spots proteicos obtidos a partir desses mapas foi feita por peptide mass fingerprinting, fragmentação de peptídeos e sequenciamento de novo utilizando espectrômetros de massas do tipo MALDI-TOF/TOF. Perfis predominantemente anti-hemostáticos foram observados nas salivas do gênero Rhodnius, mostrando principalmente proteínas com potencial anti-agregação plaquetária como as lipocalinas. A análise proteômica da saliva de Panstrongylus megistus está em andamento, e os primeiros resultados sugerem a presença de proteínas potencialmente anti-agregadoras plaquetária. Os proteomas salivares desses vetores triatomíneos mostraram-se ricos em inibidores da agregação plaquetária que promovem o repasto sanguíneo desses insetos. Análises posteriores destes e novos spots poderão proporcionar melhor compreensão da interação vetor-hospedeiro, além de possibilitar a descoberta de novas moléculas de importância farmacológica para uso terapêutico contra hemopatias. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Triatomine bugs acting as vectors of Chagas‟ disease are haematophagous organisms in all of its evolvement phases. Their feeding success is greatly related to their salivary glands content. The presence of a pool of specific proteins allows this insect to access its food by counteracting host haemostatic mechanisms, such as platelet aggregation, clotting and vasoconstriction, as well as host inflammatory reactions. Since these components are relevant in controlling the Trypanosoma cruzi transmission process, the salivas of epidemiologically significant triatomine bugs in Brazil, Panstrongylus megistus at Cerrado and Atlantic Rainforest Biomas, and Rhodnius brethesi and Rhodnius robustus at Amazon region, were harvested and submitted to proteomic research. Initially, the experimental conditions for wide-pH-ranged separation by two-dimensional electrophoresis (2DE) separation at wide pH range were optimized. The average number of spots of each salivary profile varied from 129 to 320. Comparative analysis of all two-dimensional maps revealed divergence among genera. The identification of the obtained protein spots from such maps was made by peptide mass fingerprinting, peptide fragmentation and de novo sequencing using MALDI-TOF/TOF mass spectrometers. The data revealed largely anti-haemostatic profiles for Rhodnius salivas, which presented mainly lipocalins, potential anti-platelet aggregation proteins. Proteomic analysis of Panstrongylus megistus saliva is still in progress and the first results imply the presence of potentially anti-platelet aggregation proteins too. Salivary proteomes of these triatominae vectors appear to be rich in platelet aggregation inhibitors which promote the blood feeding of these insects. Future analysis of these and other salivary spots will permit better understanding of vector-host interaction and lead to the possibility of new findings on pharmacologically active molecules useful for haemopathy treatments.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina,2011. / Submitted by Shayane Marques Zica (marquacizh@uol.com.br) on 2011-10-17T09:46:53Z No. of bitstreams: 1 2011_CiroDaviCordeiro.pdf: 3713229 bytes, checksum: a14347ffe78d400f239544c332dd71c5 (MD5) / Approved for entry into archive by Leila Fernandes (leilabiblio@yahoo.com.br) on 2011-10-18T11:21:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_CiroDaviCordeiro.pdf: 3713229 bytes, checksum: a14347ffe78d400f239544c332dd71c5 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-10-18T11:21:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_CiroDaviCordeiro.pdf: 3713229 bytes, checksum: a14347ffe78d400f239544c332dd71c5 (MD5) / Os triatomíneos são insetos hematófagos transmissores da doença de Chagas ao homem. Durante a picada, injetam saliva que contém moléculas com ações fisiológicas diversas. O estudo destas moléculas tem ajudado a elucidar como os insetos inibem mecanismos de defesa do hospedeiro em seu favor. Além disso, a caracterização dos componentes salivares pode produzir conhecimento útil para produção de novas drogas. Encontrou-se recentemente evidências de que existem quinases na saliva de Triatomíneos. Neste estudo,foram identificadas e seqüenciadas regiões codificadoras de arginina quinase(AK) e nucleosídeo difosfato quinase da glândula salivar de Triatoma infestans.A AK foi clonada, expressa em bactéria e utilizada em imunização para produção de anticorpos específicos. Ensaios de Western blot permitiramconfirmar a presença de AK na saliva de T. infestans, Panstrongylus megistuse Rhodnius neglectus, na forma de dímeros. Em contrapartida, identificou-se AK monomérica na glândula salivar. A enzima tem potencial alergênico que pode contribuir para reações de hipersensibilidade causada pela picada de triatomíneos. Ainda não se sabe se a AK exerce papel funcional na hematofagia, mas a diferença entre a proteína citosólica e secretada indica que pode haver valor adaptativo para os dímeros de AK salivar. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Triatomines are haematophagous insects that transmit Chagas’ disease tohuman populations. During blood feeding, they inject saliva composed of physiologically active molecules. The research of saliva’s molecules provided better understanding of insect’s adaptations to inhibit host’s defenses mechanisms. Besides, molecular characterization may provide useful knowledge to new drugs development. Recent evidences indicated the possibility that kinases could be secreted by triatomine’s salivary glands. This research identified and sequenced coding regions of arginine kinase (AK) and nucleoside diphosphate kinase from salivary glands of Triatoma infestans. AKwas cloned, expressed on bacteria and used in immunizations to specificantibody production. Through western blot assays we confirmed dimeric AKsecretion in saliva of T. infestans, Panstrongylus megistus and Rhodniusneglectus. However, monomeric AK was identified on the salivary glands. Theenzyme is a potential allergenic that could contribute to hypersensibility reactions associated to triatomines’ bites. Although the role of AK inhaematophagy is still unknown, the difference observed between the cytosolicand secreted AKs indicates that the dimeric AK in saliva may have an adaptive value to the bug.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-05-06T12:27:16Z No. of bitstreams: 1 2013_MartaCarolinaDeusdaraRosa.pdf: 5650381 bytes, checksum: b0f8d3a33003d27e38c48565e316d0d4 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-05-07T10:37:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_MartaCarolinaDeusdaraRosa.pdf: 5650381 bytes, checksum: b0f8d3a33003d27e38c48565e316d0d4 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-05-07T10:37:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_MartaCarolinaDeusdaraRosa.pdf: 5650381 bytes, checksum: b0f8d3a33003d27e38c48565e316d0d4 (MD5) / A saliva do artrópode hematófago Rhodnius prolixus contém atividade apirásica (EC 3.6.1.5) que facilita a hematofagia inibindo a agregação plaquetária, no hospedeiro vertebrado, induzida por ADP. Este trabalho descreve a purificação de proteínas que representam membros da família das apirases da saliva de R. prolixus. O conteúdo das glândulas salivares foi injetado numa coluna Superdex 200 10/300 GL e eluída com o tampão (25 mM Tris-HCl, pH 8.0, 150 mM NaCl, 5.0 mM CaCl2) no fluxo de 0,5 ml/min. Os picos eluídos foram monitorados a 280 nm em cromatografia líquida rápida de proteínas (FPLC). As frações contendo atividade foram reunidas e submetidas à cromatografia de afinidade (coluna Hi-Trap Blue-Sepharose). Após eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), as bandas foram visualizadas por coloração com nitrato de prata. O zimograma revelou bandas proteicas entre 60 e 130 kDa que exerceram atividade apirásica. Os resultados sugerem que pode ocorrer um arranjo oligomérico entre as apirases salivares de R. prolixus. As apirases purificadas da saliva de R.prolixus são capazes de clivar nucleotídeos di- e trifosfato de maneira cálcio dependente. A purificação destas enzimas permitirá a caracterização mais detalhada de sua relação estrutura/atividade. / The saliva of the haematophagous arthropod Rhodnius prolixus contains apyrase (EC 3.6.1.5) activity that facilitates blood-feeding by inhibiting the ADP-induced aggregation of the host platelets. We report here the purification of proteins that likely represent the R. prolixus members of the apyrase family. Salivary glands content was injected into the Superdex 200 10/300 GL column and eluted with a buffer (25 mM Tris-HCl, pH 8.0, 150 mM NaCl, 5.0 mM CaCl2) at a flow rate of 0.5 ml/min. The eluted peaks were monitored at 280 nm on fast protein liquid chromatography. The fractions containing activity were pooled and subjected to affinity chromatography (Hi- Trap Blue-Sepharose column). Following sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, protein bands were detected with silver staining. As revealed by zymography, protein bands between 60 and 130 kDa exerted ATPase activity. The results suggest that oligomeric assembly among R. prolixus members with apyrase activity may occur. The purified R. prolixus apyrases are capable of cleaving nucleotide tri- and diphosphates in a calcium-dependent manner. The purification of these enzymes will allow more detailed characterization of their structure/activity relationship and it is plausible that they might be promising therapeutic molecules to target disorders of platelet aggregation.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Medicina Tropical, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-10-15T12:40:07Z No. of bitstreams: 1 2012_ FernandaMachiner.pdf: 3239295 bytes, checksum: 157e4efcfbf4a8f374aa7919dfd7d03b (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2012-10-15T12:57:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_ FernandaMachiner.pdf: 3239295 bytes, checksum: 157e4efcfbf4a8f374aa7919dfd7d03b (MD5) / Made available in DSpace on 2012-10-15T12:57:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_ FernandaMachiner.pdf: 3239295 bytes, checksum: 157e4efcfbf4a8f374aa7919dfd7d03b (MD5) / Após a interrupção da transmissão vetorial da doença de Chagas por populações domésticas de Triatoma infestans no estado de Goiás, Brasil, a dificuldade para a consolidação do controle dessa doença é a ocorrência generalizada de outras espécies de triatomíneos nativas que invadem e eventualmente colonizam habitações humanas. Uma dessas espécies é Triatoma costalimai, que habita locais rochosos, muito frequentes nas áreas deste estudo. O presente trabalho apresentou duas abordagens, sendo a primeira, descrever o perfil das residências com registros de triatomíneos nos últimos 10 anos, em Mambaí e Buritinópolis, Goiás, e o conhecimento dos moradores sobre a doença de Chagas e seus vetores. Em uma segunda abordagem buscou-se determinar a ocorrência e infecção natural de Triatoma costalimai em habitats rochosos em diferentes ambientes (mata de galeria, mata seca e peridomicílio) e estações climáticas (chuvosa e seca), no município de Mambaí, Goiás. Os dados de registro de residências com triatomíneos foram disponibilizados pelos agentes de saúde de Mambaí. Os triatomíneos foram capturados em outubro de 2010 e junho de 2011 usando dois métodos (coleta manual e armadilhas adesivas com isca animal) e posteriormente foram separados por estádio e sexo, contabilizados e examinados parasitologicamente por compressão abdominal e análise microscópica das fezes. Foram entrevistados 15 moradores, a maioria era do sexo masculino, tinham idade entre 26 e 50 anos e escolaridade fundamental. O estudo mostra que a maioria das residências possuiam paredes de tijolo com reboco, piso de cerâmica e telhas de barro, todas tinham energia elétrica e em média construídas há 9 anos. Todas as residências possuiam animais no domicílio e peridomicílio. Todos os moradores entrevistados souberam identificar um triatomíneo, reconhecendo-o com nomes variados, e a maioria relatou ter encontrado o mesmo dentro de casa e encaminhado à Unidade de Saúde. Os moradores mostraram bom conhecimento sobre triatomíneos, doença de Chagas e meios de controle. Triatoma costalimai foi detectado nos três ambientes e nas duas estações amostradas. O sucesso total de captura das 900 armadilhas e 60 blocos de rochas inspecionados foi 5,8% e 11,7%, respectivamente. A ocorrência de T. costalimai foi maior nas rochas do peridomicílio, onde 97% dos 131 espécimes foram capturados. A proporção de ninfas (98%) foi muito superior à de adultos, os quais só foram detectados no peridomicílio. A ocorrência de T. costalimai foi diferente entre as estações climáticas e a maioria dos insetos (95%) foi capturada na época chuvosa, com predominância de ninfas I. Nenhum dos 43 espécimes examinados estava infectado por tripanosomatídeos. Os resultados indicam maior ocorrência de T. costalimai em ambiente peridomiciliar e na estação chuvosa em Mambaí, Goiás, salientando o comportamento sinantrópico dessa espécie de triatomíneo em uma área do cerrado brasileiro e a sua importância da vigilância entomológica. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / After the interruption of Chagas disease transmission by the domestic vector Triatoma infestans in the state of Goias, Brazil, the difficulty for the consolidation of vector control is the widespread occurrence of native species of triatomines that invade and eventually colonize human dwellings. One such species is Triatoma costalimai that inhabits rocky places very prevalent in the study area. The present study has two approaches, the first to know the profile of households with records of triatomines in the last 10 years in Mambaí and Buritinópolis, Goiás and knowledge of residents about Chagas disease and its vectors. In a second approach we aimed to determine the occurrence and natural infection of Triatoma costalimai in rocky habitats in different environments (gallery forest, dry forest and outdoors) and seasons (wet and dry) in the municipality of Mambaí, Goiás. The survey was based on 15 houses where triatomines were captured in intradomicile between 2001 and 2010 by the health agents in Mambaí. The ecological study of T. costalimai was based on entomological surveys in October 2010 and June 2011 using two methods (manual collection and mouse-baited adhesive traps). The insects were separated by sex and nymphal stage, counted and examined parasitologically for abdominal compression and microscopic analysis of feces. 15 residents were interviewed of which most were male, aged between 26 and 50 years and had elementary school. The study showed that most of the homes have brick walls with plaster, ceramic floor tiles and clay, all with electricity and an average of 9 years of construction. All households had animals at home and peridomicile. All residents were able to identify a triatomine, recognizing it with different names, and most have reported the same finding in the house and arrange for the health unit. Residents have good knowledge about the bugs, the Chagas’ disease and means of control. Triatoma costalimai was detected in the three environments and the two stations sampled. The overall success rate of capture of 900 traps and 60 blocks of rocks surveyed was 5.8% and 11.7%, respectively. The occurrence of T. costalimai was higher in the rocks around houses, where 97% of 131 specimens were collected. The proportion of nymphs (98%) was much higher than in adults, which were only detected around the homes. The occurrence of T. costalimai was different between seasons and most insects (95%) was captured in the rainy season, with predominance of early-stage nymphs. None of the 43 specimens examined were infected by trypanosomatids. The results indicate a greater occurrence of T. costalimai in peridomestic environment and the rainy season in Mambaí, Goiás, highlighting the behavior of this species of synanthropic triatomine in an area of the Brazilian savanna and the importance of surveillance.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Núcleo de Medicina Tropical, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-10-26T11:51:09Z No. of bitstreams: 1 2011_ElianeCardosodePadua.pdf: 1676473 bytes, checksum: ddf7f45a3053db483ea063a857eddc6f (MD5) / Rejected by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br), reason: Alaíde, O arquivo carregado é de outra autora. Por favor, trocá-lo. Obrigada, Jacqueline on 2012-10-29T10:51:00Z (GMT) / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-10-31T10:29:20Z No. of bitstreams: 1 2012_JoyceMendesPereira.pdf: 3622938 bytes, checksum: b50d63ac2756d285929af40885b0d17d (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2012-10-31T10:40:32Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_JoyceMendesPereira.pdf: 3622938 bytes, checksum: b50d63ac2756d285929af40885b0d17d (MD5) / Made available in DSpace on 2012-10-31T10:40:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_JoyceMendesPereira.pdf: 3622938 bytes, checksum: b50d63ac2756d285929af40885b0d17d (MD5) / Casos agudos da doença de Chagas ainda têm sido detectados na Região Centro-Oeste (RCO) do Brasil. O risco de transmissão vetorial de Trypanosoma cruzi ao homem permanece devido à constante presença de triatomíneos em unidades domiciliares. A estimativa de áreas de risco para ocorrência de triatomíneos sinantrópicos na RCO é, portanto, uma informação relevante para a vigilância entomológica. O presente trabalho analisa a distribuição geográfica das espécies de triatomíneos em municípios dos estados da RCO e os fatores climáticos e socioeconômicos para sua ocorrência. Foram compilados 3.396 registros de 27 espécies de triatomíneos sinantrópicos na RCO. Modelos de nicho ecológico baseados em 13 variáveis climáticas e altitude foram produzidos para 8 espécies que ocorreram no mínimo em 20 municípios usando o algoritmo maxent. Análises de regressão foram realizadas para testar a associação entre riqueza de espécies de triatomíneos e variáveis socioeconômicas dos municípios da RCO. Os resultados indicam maior adequabilidade climática para ocorrência de triatomíneos sinantrópicos em áreas de cerrado no estado de Goiás, diferente de áreas de floresta amazônica do norte do estado do Mato Grosso. A sazonalidade da temperatura foi a variável que melhor explicou os modelos, os quais indicaram ainda uma associação negativa entre riqueza de espécies de triatomineos e indicadores socioeconômicos (alfabetização, produto interno bruto, crescimento populacional) nos municipios da RCO. Os resultados indicam que praticamente todo o território da RCO apresenta condições climáticas para ocorrência de pelo menos uma espécie de triatomíneo e que a ocorrência está associada à fatores socioeconômicos. Dessa forma, recomenda-se reforçar a vigilância entomológica na RCO, principalmente nas áreas indicadas no presente estudo. / Acute cases of Chagas disease have yet been detected in the Midwest Region of Brazil (MRB). The risk of vectorial transmission of Trypanosoma cruzi to humans remains due to the constant presence of infected bugs in households. The estimation of greatest risk areas for occurrence of synanthropic triatomine bugs in the MRB is therefore a relevant information for entomological surveillance. In this work, we analyze the climatic and socioeconomic factors for triatomine occurrence in the midwest region of Brazil (MRB). Overall, 3,396 records of 27 species of synanthropic triatomines were recorded and analyzed. Using the maxent algorithm, ecological niche models based on 13 climatic variables and altitude were produced for 8 species occurring in at least 20 municipalities. Regression analyses were performed to test the association between species richness and socioeconomic variables, in the municipalities of MRB. Cerrado areas in the state of Goiás were found to be more suitable to the occurrence of synanthropic triatomines than Amazon forest areas in the north of the state of Mato Grosso. Temperature seasonality constitutes the variable that best explains the models. A negative correlation between triatomine species richness and socioeconomic indicators (literacy, gross domestic product and population growth) was found in the municipalities of MRB. The results indicate that practically the entire territory of MRB presents climatic conditions for occurrence of at least one species of triatomine, and that occurrence is also associated to socioeconomic factors. Therefore, it is recommended that entomological surveillance be reinforced in the MRB, particularly in the areas indicated by this study.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2008. / Submitted by Diogo Trindade Fóis (diogo_fois@hotmail.com) on 2009-10-08T15:51:32Z No. of bitstreams: 1 2008_RodrigoGurgelGoncalves.pdf: 6113992 bytes, checksum: 6877e14dbfe0f48f5a28cf454844cb2b (MD5) / Approved for entry into archive by Gomes Neide(nagomes2005@gmail.com) on 2010-07-21T18:22:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_RodrigoGurgelGoncalves.pdf: 6113992 bytes, checksum: 6877e14dbfe0f48f5a28cf454844cb2b (MD5) / Made available in DSpace on 2010-07-21T18:22:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_RodrigoGurgelGoncalves.pdf: 6113992 bytes, checksum: 6877e14dbfe0f48f5a28cf454844cb2b (MD5) Previous issue date: 2008 / Triatomíneos silvestres do gênero Rhodnius freqüentemente invadem casas na América Latina, mantendo o risco de transmissão da doença de Chagas. Nesta tese, foram feitas análises filogeográficas, morfométricas e de distribuição geográfica potencial de populações de Rhodnius no Brasil central, focando Rhodnius neglectus, a principal espécie encontrada em palmeiras no Cerrado. Os triatomíneos foram capturados em palmeiras (Mauritia flexuosa) de quatro bacias hidrográficas (Tocantins, São Francisco, Paraná e Paraguai) e os índices de infestação e infecção por tripanossomatídeos foram analisados. A morfometria geométrica foi aplicada para identificar quais espécies de Rhodnius do grupo R. prolixus são encontradas em palmeiras e casas no Brasil central e para analisar a variação morfológica de populações silvestres de R. neglectus. A distribuição geográfica potencial de R. neglectus foi analisada usando modelagem de nicho ecológico (GARP) baseada na relação entre variáveis ambientais e os registros de ocorrência obtidos durante o estudo. A análise filogeográfica de R. neglectus foi baseada no polimorfismo de seqüências de citocromo b do DNA mitocondrial, testando a hipótese de diferenciação entre populações pelo processo de isolamento por distância. A freqüência de palmeiras infestadas variou de 11 a 100% nas 40 áreas amostradas, sendo coletados 1.581 espécimes em 177 palmeiras, principalmente em ninhos de pássaros; 3,8% dos triatomíneos examinados estavam infectados por tripanossomatídeos (Trypanosoma cruzi e T. rangeli). As análises morfométricas permitiram uma reclassificação quase perfeita dos indivíduos em suas respectivas espécies. Os padrões de forma não revelaram diferenças consistentes entre a maioria dos espécimes coletados nas casas no Brasil central e R. neglectus, mostrando também que R. robustus e R. neglectus ocorrem simpatricamente ao sul da Amazônia. Esses resultados suportam fortemente a idéia que espécimes de R. neglectus, e não de R. prolixus, têm invadido as casas no Brasil central. Os métodos de morfometria geométrica aplicados para explorar a variação fenotípica em R. neglectus mostraram variação significativa de tamanho de asas e, principalmente, cápsulas cefálicas entre as populações analisadas. A temperatura foi a variável ambiental que mais influenciou o tamanho, sendo os menores espécimes encontrados nas áreas mais frias. Entretanto, nenhuma variação significativa de forma foi observada entre populações de diferentes bacias hidrográficas. Os modelos de nicho ecológico foram capazes de predizer, com alta probabilidade, áreas de ocorrência de R. neglectus no bioma Cerrado. Áreas de Caatinga, savanas amazônicas, Pantanal e Chaco boliviano apresentaram menores probabilidades de ocorrência da espécie. Uma grande sobreposição foi observada entre a distribuição de R. neglectus, palmeiras e pássaros. Ao incluir novos registros de R. neglectus, o presente estudo revelou um aumento da distribuição a oeste e nordeste do Brasil na 'diagonal de ecorregiões abertas/secas da América do Sul'. O seqüenciamento da porção 5´ do citocromo b em 144 indivíduos de 33 populações resultou em um fragmento de 567pb, revelando a existência de 13 haplótipos únicos e 22 sítios variáveis. Os haplótipos obtidos formaram um grupo monofilético bem suportado, sendo identificados como R. neglectus e separados claramente das outras espécies de Rhodnius do grupo R. prolixus. Os dois haplótipos mais freqüentes ocorreram em áreas separadas por distâncias maiores que 1.700 km e de três bacias hidrográficas. Haplótipos compartilhados foram observados em áreas de ambas as margens dos principais rios e ambos os lados da Serra Geral de Goiás. As populações de Alto Paraíso-GO e da bacia do Paraguai (Mato Grosso) apresentaram haplótipos únicos e altos níveis de diversidade nucleotídica e divergência entre populações. A rede de haplótipos apresentou dois grupos geograficamente distintos (oeste e leste), mas não houve evidência de isolamento por distância (Mantel, p = 0,446). A dispersão de espécimes de R. neglectus entre no Brasil central poderia ocorrer a partir de um mecanismo passivo de transporte por aves. Finalmente, esses resultados podem auxiliar os programas de vigilância vetorial da doença de Chagas, visto que a invasão das casas por espécimes de Rhodnius mantém o risco de transmissão e limita a eficiência das estratégias de controle. / Sylvatic triatomines of the genus Rhodnius commonly fly into houses in Latin America, maintaining the risk of Chagas disease transmission. In this thesis, phylogeographical, morphological and potential geographical distribution analyses of Rhodnius populations in central Brazil were carried out, focusing in R. neglectus, the major species found in palm trees in the Brazilian Savannah. Bugs were captured in Mautitia flexuosa palm trees from four hydrogeographic basins (Tocantins, Sao Francisco, Parana and Paraguay); the infestation and trypanosomatid infection indices were analyzed. Geometric morphometric methods were applied to identify the Rhodnius species of the R. prolixus group and to analyze the morphometric variation among R. neglectus populations from these basins. The hypothesis of phenotypic plasticity related to some environment variables was also tested. The potential geographical distribution of R. neglectus was analyzed by using ecological niche modeling (GARP) based on the relation of environmental variables and occurrence records. The phylogeographic analyses of R. neglectus populations were based on polymorphisms of cytochrome b sequences, testing the hypotheses of differentiation and isolation by distance. The frequency of infested palms varied from 11 to 100% in the 40 sampled areas, and 1,581 specimens were collected in 177 palms, mainly in bird nests; 3.8% of the examined bugs were infected by trypanosomatids (Trypanosoma cruzi and T. rangeli). Morphometric analyses of shape variation allowed for an almost perfect reclassification of individuals to their putative species. Shape patterning revealed no consistent differences between most specimens collected inside houses in central Brazil and R. neglectus, and also showed that R. robustus and R. neglectus occur sympatrically in southern Amazonia. These results strongly support the idea that R. neglectus, and not R. prolixus, is the species invading houses in central Brazil. The geometric morphometric methods applied to assess the intraspecific phenotypic variation in R. neglectus showed significant size variation among populations.Wing and head size were influenced by temperature: the smallest specimens were found in the coldest areas. Nevertheless, no significant shape variation was observed among populations of different geographical basins. The ecological niche models were able to predict the occurrence of R. neglectus as a characteristic (although not endemic) species of the Cerrado biome. Meanwhile, Caatinga, Amazonian savannas, Pantanal, and the Bolivian Chaco appear as areas with lower predicted presence probability for the species. A high overlap was observed among the distributions of R. neglectus, some palm trees and birds. By including new records for R. neglectus, the present study has revealed a wider distribution towards the west and northeast areas of Brazil in the ‘diagonal of open/dry ecoregions of South America’. The sequencing of 5´- end of the cytochrome b gene in 144 individuals from 33 populations resulted in a fragment of 567bp, revealing the existence of 13 different haplotypes and 22 variable sites. These haplotypes formed a well-supported monophyletic group identified as R. neglectus and clearly separated for other Rhodnius species of the ‘R. prolixus group’. The two more frequent haplotypes occurred in areas separated by a distance over 1,700 km and from three different hydrogeographic basins. Shared haplotypes were also observed in areas from both sides of large rivers and both sides of ‘Serra Geral de Goias’. The populations from Alto Paraiso-GO and from the Paraguay basin (Mato Grosso) presented unique haplotypes and higher levels of nucleotide diversity and divergence among populations. The haplotype network analysis showed two geographically distinct groups (western and eastern) but there was no evidence of isolation by distance (Mantel, p = 0,446). The dispersal of R. neglectus specimens among the basins may occur through passive carriage by birds. Finally, these results should help the Chagas disease vector surveillance program, given that household invasion by Rhodnius species maintains disease transmission risk and limits the effectivenes of control strategies.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Medicina Tropical, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-02-14T12:58:32Z No. of bitstreams: 1 2013_MarcioCostaVinhaes.pdf: 2341163 bytes, checksum: a2aae894cecfab39ea38c1d93dca4ecc (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-02-17T13:15:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_MarcioCostaVinhaes.pdf: 2341163 bytes, checksum: a2aae894cecfab39ea38c1d93dca4ecc (MD5) / Made available in DSpace on 2014-02-17T13:15:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_MarcioCostaVinhaes.pdf: 2341163 bytes, checksum: a2aae894cecfab39ea38c1d93dca4ecc (MD5) / Apesar da drástica redução da transmissão vetorial de Trypanosoma cruzi no Brasil, casos agudos da doença de Chagas (DC) ainda têm sido registrados. A identificação de áreas com maior vulnerabilidade para ocorrência de triatomíneos sinantrópicos é fundamental para orientar as ações de prevenção, controle e vigilância epidemiológica. Foi realizada uma classificação dos municípios brasileiros quanto a esta vulnerabilidade baseada em nove indicadores (socioeconômicos, demográficos, epidemiológicos, entomológicos e ambiental) usando análise multicritério de decisão (AMD) apoiada por modelagem de nicho ecológico (MNE). A MNE dos casos humanos estimou uma maior adequabilidade climática para transmissão vetorial na região Norte e Nordeste do país. Áreas climaticamente mais adequadas para presença dos triatomíneos foram detectadas na região extra-amazônica. Os modelos produzidos por meio da AMD foram muito diferentes; aqueles em que foi conferido maior peso aos indicadores demográficos e ambiental não mostraram um padrão de vulnerabilidade adequado comparando com municípios historicamente vulneráveis, diferente dos modelos baseados em dados entomológicos e socioeconômicos. Os municípios classificados com maior vulnerabilidade apresentaram maior pobreza extrema na zona rural e maior área antropizada. Os valores das variáveis demográficas foram similares entre os municípios de alta e baixa vulnerabilidade para ocorrência de triatomíneos. Os estados da região Nordeste, principalmente Ceará, e os estados de Goiás, Minas Gerais e Tocantins apresentaram maior porcentagem de municípios classificados com alta vulnerabilidade. A MNE e AMD podem auxiliar a identificar os estados e municípios mais vulneráveis para ocorrência de triatomíneos, o que é fundamental para direcionamento das ações de vigilância e controle em um cenário em que os dados entomológicos são cada vez mais escassos. Os dois novos indicadores entomológicos elaborados no presente trabalho (ocorrência real ponderada das espécies e ocorrência predita das espécies) poderão ser aplicados para aperfeiçoar a vigilância da doença de Chagas no Brasil e outros países. / Despite the drastic reduction of the vectorial transmission of Trypanosoma cruzi in Brazil, acute cases of Chagas disease (CD) still have been recorded. The identification of areas with greater vulnerability for the occurrence of synanthropic triatomines is essential to orient prevention, control and surveillance activities. A classification of municipalities vulnerability for the occurrence of synanthropic triatomines was performed based on nine indicators (socioeconomic, demographic, epidemiological, entomological and environmental) using multi-criteria decision analysis (MCDA) supported by ecological niche modeling (ENM). The ENM of human cases estimated a higher climatic suitability for vector transmission in the North and Northeast regions of Brazil. The most climatically suitable areas for the presence of triatomines were detected in extra-Amazonian region. The models produced by MCAD were very different, and unlike the models based on entomological and socioeconomic data, those in which it was given a greater weight to demographic and environmental indicators did not show an appropriate pattern of vulnerability when compared to historically vulnerable municipalities. The municipalities classified with a high level of vulnerability for the occurrence of synanthropic triatomines were those with high levels of rural poverty and anthropized area. Municipalities with high and low levels of vulnerability for the occurrence of triatomines showed similar demographic variables values. The states of the Northeast region, especially Ceará, and the states of Goiás, Minas Gerais and Tocantins were prioritized to receive proper triatomine surveillance and control activities in Brazil for having the highest percentage of municipalities with high vulnerability. The ENM and MCDA can help to identify the states and municipalities most vulnerable for the occurrence of synanthropic triatomines, which is critical for directing adequate surveillance and control activities in a scenario where entomological data are increasingly scarce. The two new entomological indicators developed in this work (weighted actual occurrence of species and predicted occurrence of the species) may be applied to improve the surveillance of Chagas disease in Brazil and other countries.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-graduação em Patologia Molecular, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2013-01-28T12:51:50Z No. of bitstreams: 1 2012_SilianaMartinsMorais.pdf: 1560393 bytes, checksum: 072d6b25b6af04b8e00c2da7e95026ad (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-02-07T09:50:43Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_SilianaMartinsMorais.pdf: 1560393 bytes, checksum: 072d6b25b6af04b8e00c2da7e95026ad (MD5) / Made available in DSpace on 2013-02-07T09:50:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_SilianaMartinsMorais.pdf: 1560393 bytes, checksum: 072d6b25b6af04b8e00c2da7e95026ad (MD5) / A doença de Chagas, doença tropical negligenciada, tem como agente etiológico o protozoário Trypanosoma cruzi e como um dos principais vetores o triatomíneo hematófago Triatoma infestans. Em sua saliva é possível encontrar moléculas biologicamente ativas que viabilizam o repasto sanguíneo. Nesse trabalho, caracterizamos o peptidoma salivar do T. infestans, conjunto de peptídeos secretados na saliva com massa molecular menor que 10 kDa. A saliva secretada por T. infestans adultos foi coletada na ausência de inibidores de proteases. Após a quantificação, a integridade proteica das moléculas foi conferida por eletroforese unidimensional. Em seguida, por peptide mass fingerprinting, peptídeos com massa molecular de até 7.000 Da foram detectados na saliva. A saliva foi fracionada por centrifugação em microconcentradores com membrana de exclusão molecular de 10 kDa na presença de inibidores de proteases, gerando duas frações: 1) retida, contendo os polipeptídeos de massa molecular superior a 10 kDa; e 2) filtrada, contendo os peptídeos. A primeira foi analisada por gel eletroforético bidimensional e a segunda por nanoLC-MS/MS usando LTQ XL-Orbitrap (ThermoFisher Scientific), sem digestão tríptica in vitro. A análise por nanoLC-MS/MS foi repetida após digestão tríptica em solução e dessalinização em micro-coluna de C18. Ferramentas de bioinformática foram usadas para análise das sequências. No total, foram identificadas 234 proteínas. 164 foram encontradas na fração retida, sendo 130 com função já conhecida na alimentação sanguínea. Na fração filtrada, das 70 sequências identificadas, oito têm uma massa molecular predita < 10 kDa e as outras 62 são fragmentos da proteólise de proteínas maiores. Por análises de bioinformática, observamos que 171 das proteínas apresentam peptídeo sinal de via clássica de secreção, e as demais, com exceção de três, são preditas como secretadas por vias não clássicas. Para concluir, a primeira análise peptidômica da saliva de triatomíneo mostrou que a saliva de T. infestans é rica em peptídeos. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Chagas disease, a Neglected Tropical Disease, is caused by the protozoan parasite Trypanosoma cruzi, which is transmitted by insect vectors. Triatoma infestans is one of the main vectors of the disease. As other disease vectors, it is a hematophagous insect. Feeding behavior implies the production of biologically active molecules in saliva capable of inhibiting hemostasis, inflammatory and immune responses. At the present study, we conducted a broad analysis of the proteome and peptidome, the latter comprises the set of peptides with a molecular weight under 10 kDa, of the saliva of T. infestans. Saliva was collected from insect adults in the absence of protease inhibitors. After protein quantification, the integrity of the proteins were analyzed by polyacrylamide-SDS gel electrophoresis. After that, by peptide mass fingerprinting, we detected peptides with molecular weight up to 7.000 Da. The saliva was then fractionated in the presence of a cocktail of protease inhibitors using a 10 kDa cut-off membrane. Two fractions were obtained: the retained (>10 kDa) and the filtrate (<10 kDa) fractions. The first was submitted to 2-DE electrophoresis, and the latter to nanoLC-MS/MS with reverse-phase high- performance liquid chromatography coupled with a high throughput LTQ XL- Orbitrap mass spectrometer (ThermoFisher Scientific), in the absence of tryptic digestion in vitro. The nanoLC-MS/MS analysis was repeated after in-solution tryptic digestion and desalinization in C18 microcolumn. A total of 234 proteins were identified. 164 proteins were found in the retained fraction, among which 130 have known functions. In the filtrate fraction, among 70 sequences identified, eight have predicted molecular weight lower than 10 kDa, and the other 62 were proteolytic fragments of higher molecular weight proteins. Bioinformatic analysis revealed that 171 proteins present signal peptides, three were not predicted to be secreted, and the other are secreted through non-classical pathways. In conclusion, the first peptidomic analysis of a triatomine bug saliva showed that T. infestans saliva is plenty of peptides.