Introdução: A relação causal entre infecção genital por papilomavirus humano (HPV) de alto risco e o câncer do colo uterino está bem estabelecida; porém, há controvérsias em diferentes populações quanto à prevalência e distribuição da infecção em relação à idade. Objetivos: Caracterizar, pela Captura Híbrida II (CHII), a prevalência da infecção genital por HPV de alto risco e sua estratificação por idade. Verificar a associação da infecção com fatores de risco, resultados da citologia oncológica (CO), da colposcopia e da biópsia cervical. Casuística e Métodos: Em estudo transversal estudou-se 2300 mulheres (15-65 anos) que buscaram rastreamento para o câncer cervical. Aplicou-se questionário epidemiológico e foi feita a coleta da CO e da CHII, no caso de alteração em destes exames ou ambos indicou-se colposcopia e, nos casos anormais, procedeu-se à biópsia cervical. Resultados: A prevalência da infecção genital por HPV de alto risco em toda amostra foi de 17,8%: 27% (<25 anos), 21% (25-34 anos), 12% (35-54 anos) e de 14% (55-65 anos). Participantes com maior número de parceiros sexuais durante a vida apresentaram uma maior chance de infecção, relacionamento estável, idade entre 30 a 54 anos e ser ex-fumante foram fatores associados à proteção da infecção. Encontrou-se 204 (8,8%) CO anormais e uma relação direta entre severidade do diagnostico citológico e infecção por HPV de alto risco, 14,3% em citologia normal, 78% em lesão escamosa de alto grau, 100% nos esfregaços compatíveis com carcinoma. Foram histologicamente confirmados: 10 casos de Neoplasia intra-cervical grau 2/3 (NIC2/3) entre as mulheres infectadas por HPV, com citologia normal; 4 NIC 2/3 e um carcinoma nas que apresentavam exclusivamente alteração citológica e 15 NIC 2/3 e 3 carcinomas em mulheres com ambos os testes positivos. Conclusão: A prevalência da infecção genital por HPV de alto risco foi alta, seguindo uma curva na qual se observou novo aumento da prevalência após os 55 anos. / The causal role of high risk human papillomavirus (HPV) infection and cervical cancer has been well documented. However HPV prevalence varies greatly across populations, as might the age distribution. Objective: We aimed to determine high risk HPV prevalence and its distribution by age groups. Risk factors, cytological, colposcopic and cervical biopsies results associated with high risk HPV infection in a sample of women who self referred for cervical cancer screening. Methods: In a cross sectional study we interviewed and obtained cervical specimens from a sample of randomized 2300 women (15-65 years). Specimens were tested for the presence of high risk HPV using Hybrid Capture II (HCII) and for cervical cytological abnormalities by Pap smears or liquid based cytology. Women, who had abnormal cytology or positive HCII, or both results, were referred to colposcopy examination. Whenever colposcopy revealed an abnormal pattern, a directed punch biopsy was taken. Results: Four hundred and eight (17.7%) study participants tested positive for high risk HPV types by HC2: 27% (<25 years), 21% (25-34 years), 12% (35-54 years) and 14% (55-65 years). The main risk factor for HPV infection was number of lifetime sexual partners; age at 30 to 54 years, women who live with a partner and former smokers were negative associated with high risk HPV infection. Two hundred four (8, 8%) women had cytological abnormalities. HC II positive was associated with cytology outcome (14, 3% in normal cytology, 78% in HSIL and 100% in cervical cancer). Cervical Intraepithelial Neoplasia grade 2/3 (CIN 2/3) were found in 10 HPV infected women with normal cytological results. Women with abnormal cytological results only had 4 CIN 2/3 and 1 carcinoma and women testing positive in both techniques had 15 CIN 2/3 and 3 carcinomas. Conclusions: High risk HPV prevalence was high in this sample and the prevalence age curve showed a second pick starting around 55 years old.

Em bovinos, a mortalidade embrionária associada a falhas no processo de reconhecimento materno da prenhez atinge 30 a 40%. O sucesso da prenhez , depende de uma apropriada interação bioquímica entre o endométrio materno e o concepto. Objetivou-se a validação de uma técnica cirúrgica de implantação de cateteres intrauterinos para a obtenção de fluídos em diferentes dias do ciclo estral e da prenhez inicial em bovinos, de modo a permitir a análise sistemática e contínua das secreções do microambiente uterino. O funcionamento dos cateteres foi testado e alterações morfológicas conseqüentes da implantação dos cateteres foram descritas. Cateteres de silicone foram inseridos cirurgicamente nos cornos uterinos e exteriorizados pelo flanco de nove vacas Holandesas. As vacas foram divididas para receberem (n = 6) ou não (n = 3) embriões no dia 7 de um ciclo estral sincronizado (dia 0 = dia do cio). Microlavagens uterinas foram realizadas nos dias 14, 16, 18 e 20 pós-estro. Todas as vacas foram abatidas no dia 20, seus tratos reprodutivos submetidos à análise macroscópica e tecidos uterinos coletados e fixados para análise histopatológica. A técnica utilizada: (1) permitiu a obtenção de fluídos uterinos, (2) resultou em 0% de taxa de prenhez, (3) causou afecções nos órgãos reprodutivos, como aderências, infecções focais e endometrites e (4) afetou o tecido uterino com inflamações agudas e crônicas além de fibroplasias e dilatações glandulares. Conclui-se que a implantação e operação dos cateteres e as alterações morfológicas foram incompatíveis com a manutenção da prenhez. A abordagem cirúrgica testada não foi adequada para estudar o microambiente uterino de vacas prenhez prenhes / In cattle, embryonic death related to failure in the maternal recognition of pregnancy is as high as 30 to 40%. The success of pregnancy depends on appropriated biochemical interactions between the maternal endometrium and conceptus. The purposed of this dissertation was to validate a surgical technique to place and operate of intrauterine catheters to obtain fluid on different days of the estrous cycle and early pregnancy in cows, such technique should allow a systematic and continuous analysis of the uterine microenvironment secretions. Function of catheters was tested and resulting morphological changes were described. Silicon indwelling catheters were surgically placed in both uterine horns and exteriorized by the flank in 9 Holstein cows. Cows were divided to either receive (n = 6) or not (n = 3) embryo transfer on the day 7 of a synchronized estrous cycle (day 0 = day of estrus). Uterine flushing was performed through the catheters on days 14, 16, 18 and 20 pos-estrus. All cows were slaughtered on day 20 and reproductive tracts were colleted and prepared for histological analysis. In summary, the technique used: (1) allowed collection of uterine fluids, (2) resulted in 0% pregnancy rate, (3) caused pathologies in the reproductive organ, such as adhesions, focal infections and endometritis and (4) affected the uterine tissue with acute and chronic inflammation besides fibroplasias and glandular dilation. It was concluded that implantation and operation catheters the resulted in morphological changes which were incompatible with maintenance of pregnancy. The surgical approach tested was not suitable to study the uterine microenvironment in pregnant cows

Neste trabalho, procurou-se apresentar a interpretação teórica da estratégia de regionalização dos serviços de saúde e sua aplicação prática. O processo de controle do câncer cérvico-uterino desenvolvido no sistema regionalizado e hierarquizado de saúde do Projeto Cotia, que envolvia serviços privados filantrópicos e serviços públicos estaduais e municipais, permitiu acompanhar o atendimento da clientela desde a unidade básica de saúde até seu encaminhamento a serviços de nível terciário. Este estudo foi baseado em dados obtidos através de observação, entrevistas aos técnicos e em dados prospectivos obtidos nos prontuários de 2495 mulheres matriculadas nas unidades básicas de saúde do Projeto Cotia, no período de dezembro de 1987 a novembro de 1988 e seguidas até novembro de 1989. Através deste estudo, verificou-se que a regionalização da assistência implantada no Projeto Cotia seguia critérios tecnológicos e organizacionais, tentando garantir assistência de nível primário e secundário. Verificou-se ainda que, embora a estratégia de regionalização seja indicada para o aumento de cobertura, o acesso da clientela era seletiva, garantindo a matrícula das gestantes e das mulheres encaminhadas por médicos do Pronto Atendimento; a cobertura das atividades de controle do câncer cérvico-uterino sobre a população estudada foi de 40,6 por cento. Das mulheres que passaram pelo processo de controle do câncer cérvico-uterino, 20 por cento receberam alguma conduta a nível primário, 2 por cento foram encaminhadas a nível secundário e 0,3 por cento a nível terciário. Não se obteve dados sobre conduta tomada pelos serviços em 77,8 por cento dos casos. A falta de registro em prontuários das condutas tomadas pela enfermagem e pelos médicos do pronto atendimento, o abandono de tratamento, o extravio de resultados de exames, a demora no seu recebimento (que chegou a ser de 3 meses) e as duas mudanças de laboratório de referência ocorridas durante a coleta de dados foram identificados como motivos da falta de dados referentes a condutas tomadas pelos serviços. Durante a realização· deste trabalho ocorreu a municipalização dos serviços dos municípios de Cotia e Vargem Grande Paulista. Este fato permitiu a realização de uma breve comparação do processo nos dois municípios que tinham formas diferentes de relacionamento com a SESSP e a AHC, instituição que coordenava o Projeto Cotia. A regionalização da assistência no Projeto Cotia e a política de municipalização dos serviços de saúde apontaram, na prática, alguns pontos críticos como: delimitação de região seguindo critérios político-administrativos; falta de um sistema formal de informação; e a elaboração de um plano de saúde único para uma região que envolvia mais de um município, uma vez que cada um tem autonomia para elaborar o seu próprio. / This paper concerns about the theoretical interpretation of health care regionalization strategy and its practical application. The cervix uteri cancer control process developed in the decentralized health system o f the Cotia Project, that involved private philanthropic services and state and municipal public services, enabled the author to follow the care delivered, right from the enrollment at the basic health unit until the referral process to the other levels of the health care system. This report was based on data obtained through observation o f services, interview of staff and prospective data obtained from medical registers of 2495 women who were enrolled at basic health units during the period of December, 1987 and November, 1988 and followed until November, 1989. The results showed that the health care regionalization undergone in the Cotia Project observed technological and organizational criteria. It assured health care at primary and secondary levels. The author also observed that although the regionalization strategy is recommended to extend coverage, access was selective. It guaranteed expectant mothers and women referred by physicians from first aid services belonging to the basic health centers. Coverage of cervix uteri cancer prevention activities regarding the studied population was about 40.6 per cent. Of these women, 20 per cent received procedures at primary care level, 2 per cent were referred to secondary care level and 0.3 per cent to tertiary care level. No data was available as to procedures undergone in 77. 8 per cent o f the cases. The main causes of deficiency of data on procedures were due to lack of registry on behalf of nursing personnel and physicians, treatment abandon, exams 1 results loss and delay (almost 3 months) on receiving them. During the period when data was being collected, the referral laboratory was twice changed and this fact concurred to the lack of certain data. The municipalization of the health services of Cotia and Vargem Grande Paulista counties occurred during this study. This allowed the author to compare the process that developed in these two counties that had diferente relationship with the State Health Department and the Associação Hospital de Cotia, the institution that coordinated the Cotia Project in these days. Health care regionalization in the Cotia Project and health services municipalization politics pointed out some critical issues: the use of polítical and administrative criteria to limit the region, the lack o f a formal information system, and the difficulty to develop a unique health plan for a region that envelops more than one county, as each o f them detains legal autonomy to elaborate its own.

Em bovinos, o sucesso no estabelecimento da gestação depende de interações entre o concepto e o útero. Tais interações ocorrem através de moléculas presentes no ambiente uterino. Falhas nesse processo causam 30-40% de perdas de gestação. As proteínas são constituintes desse ambiente e possuem um importante papel nesse processo. Objetivou-se na presente dissertação caracterizar o perfil protéico do ambiente uterino de fêmeas bovinas, ciclando ou prenhes, durante o período crítico, utilizando eletroforese bidimensional. O objetivo específico foi comparar a composição protéica de lavados uterinos obtidos in vivo, por sonda de folley ou post-mortem no dia 18 após o estro de vacas não inseminadas ou gestantes. Para a obtenção das amostras, 48 fêmeas bovinos tiveram seu ciclo estral sincronizado e foram alocadas aleatoriamente para receberem lavagens in vivo por sonda de folley (12 inseminadas e sete não inseminadas) ou para receberem lavagens post-mortem (12 inseminadas e cinco não inseminadas) no dia 18 após o estro. Após a coleta, os lavados foram processados e submetidos à eletroforese bidimensional. Os géis foram analisados utilizando o programa Image Master-2D ELITE V. 4.01 (GE Healthcare) para determinação do ponto isoelétrico (PI) e peso molecular relativo (PMR) das proteínas nos diferentes grupos e análise da densidade óptica. Foram selecionadas 178 proteínas presentes nos lavados. Em relação à distribuição das proteínas de acordo com o ponto isoelétrico, 74% (132/178) apresentaram PI entre 5,5 e 8, em relação ao peso molecular, 44% (79/178) das proteínas possuíam PMR menor que 50KDa enquanto 54% (95/178) entre 50 e 100KDa. Nos lavados realizados por sonda de folley (FC ou FP) foram selecionadas 151 proteínas, sendo 96 nos lavados de animais cíclicos e 86 nos prenhes. Os lavados realizados post-mortem (PMC ou PMP) apresentaram apenas 54 proteínas, das quais 24 estiveram presentes nos lavados PMC e 36 nos lavados PMP. Em relação ao estado reprodutivo 115 proteínas foram encontradas nos lavados dos animais cíclicos (FC ou PMC), enquanto 104 proteínas foram selecionadas nos lavados de animais prenhes (FP e PMP). Entre os lavados realizados por sonda de folley (FC e FP) 31 proteínas foram comuns entre os estados, enquanto entre os lavados realizados post-mortem (PMC e PMP) apenas seis proteínas estiveram presentes em ambos os lavados. Nos lavados realizados em animais ciclando (FC e PMC) cinco proteínas estiveram presentes em ambos os tipos de lavados, enquanto nos lavados realizados em animais prenhes (FP e PMP) 18 proteínas foram comuns em ambos os tipos de lavado. Entre os lavados FC e PMP ou FP e PMC, 15 e 6 proteínas, respectivamente, foram comuns. As proteínas presentes exclusivamente nos lavados de vacas prenhes, possivelmente estão envolvidas no diálogo materno-embrionário durante o processo de estabelecimento da gestação. Proteínas detectadas exclusivamente nos lavados obtidos via sonda de folley podem ser devidas ao influxo de proteínas do soro sanguíneo em resposta à manipulação do trato reprodutivo durante a obtenção dos lavados. Esperava-se uma maior efetividade dos lavados realizados post-mortem em relação aos realizados por sonda de folley. Entretanto os lavados obtidos por sonda de folley foram melhores por identificar um maior numero de proteínas, permitindo identificar diferenças maiores entre os lavados de animais ciclando e prenhes. Concluiu-se que a eletroforese bidimendional constitui um método adequado para avaliar quantitativamente o perfil protéico do ambiente uterino bovino e que tanto o estado reprodutivo quanto o método de obtenção de lavados uterinos modificam sua composição protéica. Novos estudos são necessários para se obter a seqüência de aminoácidos das proteínas localizadas para que se conheça sua identidade e função na gestação inicial de bovinos. / In the cattle, the outcome for the establishment of pregnancy depends on interactions between conceptus and uterus. These interactions occur through molecules presents in the uterine environment. Failure in this process causes 30-40% of loss in gestation. The proteins are component of this environment and have a important role in this process. The aim of this dissertation was to characterize the protein profile of the uterine environment in cows, cyclic or pregnant, during the critical period, using two-dimensional electrophoresis. The specific aim was to compare the protein composition of uterine washings recovered in vivo, through a folley catheter, with washings recovered post-mortem at day 18 after estrus of not inseminated or pregnant cows. To obtain the samples 48 cows had their estrous synchronized and here aleatoric put in the group to receive washings in vivo through the folley catheter (12 inseminated and seven not inseminated) or to be washed post-mortem (12 inseminated and five not inseminated) at day 18 after estrus. After the recover, the washings were proceeded and submitted to two-dimensional electrophoresis. The gels were analyzed using the software Image Master-2D ELITE V. 4.01 (GE Heathcare) to determine the isoelectric point (PI) and relative molecular weight (PMR) of the proteins presents in the different groups and analysis of the optical density. One hundred and seventy eight proteins were presents in the washings. The distribution of the proteins according to the PI, 74% (132/178) had PI between 5,5 and 8 and according to the PMR 44% (79/178) of the proteins showed PMR lower than 50KDa, while 54% (95/178) had PMR between 50 and 100KDa. In the washings recovered through the folley catheter (FC and FP) 151 proteins were selected, being 96 from the cyclic cows and 86 from the pregnant cows. The washings recovered post-mortem (PMC and PMP) showed only 54 proteins, from those 24 were present in the cyclic animals and 36 in the pregnant animals. According to the reproductive status 115 proteins were found in the washings from the cyclic animals (FC and PMC), while 104 proteins were selected from the washings of the pregnant animals (FP and PMP). Among the washings recovered through the folley catheter (FC and FP) 31 proteins were the same between the reproductive status. While in the washings recovered post-mortem (PMC and PMP) only six proteins were present in both washings. In washings done in the cyclic animals (FC and PMC) five proteins were presents in both kind of washings, while in washings done in the pregnant animals (FP and PMP) 18 proteins were the same in both kind of washings. Among the washings FC and PMP or FP and PMC, 15 and six proteins, respectively were the same. The proteins presents exclusively in the washings of the pregnant animals are probably involved with the embryo-maternal interplay during the process of pregnancy establishment. Proteins detected exclusively in the washings recovered through the folley catheter may be inflow of proteins from the serum, in response to the uterine manipulation during the process of washing. It was expected a better effect from the washings post-mortem than the ones through the folley catheter. However the washings from the folley catheter had a better result, because they identified a greater number of proteins which allowed identify greater differences between the washings from cyclic and pregnant animals. In conclusion, the two-dimensional electrophoresis is a adequate method to analyze the quantitatively proteins profile of the uterine environment in the cow and that both the reproductive status and the method to obtain the uterine washings modify the proteins composition. New studies are necessary to obtain the amino acids sequence of the proteins found so that we know their identity and function in the beginning of pregnancy in the cow.

Orientador: Christiane Pienna Soares / Coorientador: André Gonzaga dos Santos / Coorientador: Valéria Valente / Banca: Raquel Alves dos Santos / Banca: Marlus Chorilli / Resumo: Atualmente, o câncer cervical é considerado o terceiro tumor mais frequente nas mulheres do Brasil e o seu desenvolvimento, na maioria dos casos, esta relacionado com o Papilomavírus Humano (HPV). Frente ao exposto, tornam-se necessários à busca por tratamentos alternativos no combate do câncer cervical a partir dos produtos naturais, como a cordialina A, isolada da planta Cordia verbenacea DC. A cordialina A possui forte atividade antineoplásica, como também insolubilidade em meio aquoso. Dessa forma, os Sistemas Nanoemulsionados Lipídicos (SNL) têm sido explorados como ferramentas para aumentar a solubilidade de bioativos poucos polares em meio aquoso, como também aumentar a sua eficácia terapêutica. Assim, o presente estudo teve por objetivo avaliar, in vitro, a atividade antineoplásica e os mecanismos de morte celular promovidos pela cordialina A, encapsulada e não encapsulada no SNL, nas linhagens celulares de câncer de colo uterino HPV-16 (SiHa), de HPV negativo (C-33A) e de queratinócitos humanos normais (HaCaT). Para a formulação do SNL foi acrescido de colesterol, tampão fosfato e sistema tensoativo composto por polioxietileno 20-cetil éter e Fosfatidilcolina de Soja (FS). O diâmetro de partícula encontrado nas formulações foi de 159,53 ± 8,0444 nm e 107 ± 0,3333 nm, o índice de polidispersão (PDI) médio foi de 0,38 ± 0,0466 e 0,214 ± 0,0126 e o potencial zeta foi de -16,83 ± 3,15 mV e -20,16 ± 1,68 mV para SNL e cordialina A + SNL, respectivamente. As fotomicrografi... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Currently, cervical cancer is considered the third most frequent tumor in Brazilian women and its development, in most cases, is related to Human Papillomavirus (HPV). In view of the above, they are necessary to search for alternative treatments in the fight against cervical cancer from natural products, such as cordialina A, isolated from the Cordia verbenacea DC plant. The cordialina A has strong antineoplastic activity, as well as insolubility in aqueous medium. Thus, Lipid Nanoemulsion Systems (SNL) have been explored as tools to increase the solubility of a few polar bioactive in aqueous medium, as well as to increase its therapeutic efficacy. The aim of the present study was to evaluate in vitro the antineoplastic activity and mechanisms of cell death promoted by cordialin A, encapsulated and non-encapsulated in the SNL, in cervical cancer cell lines HPV-16 (SiHa) of HPV negative (C-33A) and normal human keratinocytes (HaCaT). For the formulation of the SNL was added cholesterol, phosphate buffer and surfactant system composed of polyoxyethylene 20-cetyl ether and Soy Phosphatidylcholine (FS). The particle diameter found in the formulations was 159.53 ± 8.0444 nm and 107 ± 0.3333 nm, the average polydispersion index (PDI) was 0.38 ± 0.0466 and 0.214 ± 0.0126 and the zeta potential was -16.83 ± 3.15 mV and -20.16 ± 1.68 mV for SNL and A + SNL, respectively. The photomicrographs... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Paula Rahal / Coorientador: Marilia de Freitas Calmon / Banca: Rejane Maira Góes / Banca: Tatiana Rabachini / Banca: Cristiane Damas Gil / Banca: Márcia Guimarães da Silva / Resumo: Os Papilomavírus Humanos (HPV) são uma família de vírus de DNA com mais de 202 tipos, e são divididos em HPVs de alto e baixo risco. A infecção pelo HPV de alto risco foi identificada como agente etiológico de seis tipo de câncer, incluindo o carcinoma de colo de útero, de pênis, vagina, vulva, ânus e orofaringe, sendo que em aproximadamente 99,7 % dos casos de câncer cervical a infecção pelo HPV de alto risco é relacionado como agente etiológico. O tratamento atual para carcinoma invasivo é a terapia combinada do quimioterápico cisplatina com a radiação, contudo a cisplatina apresenta sérios efeitos adversos. Assim, é de extrema importância o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas, que aumentem a eficácia do quimioterápico e diminua os efeitos colaterais, a fim de maximizar a resposta local e promover a sobrevida do paciente. A curcumina é um composto hidrofóbico bioativo muito versátil que possui propriedades antioxidante, anti-inflamatória, anti-hiperlipidêmica, antiangiogênica, antineoplásica e quimioprotetora. Além disso, a curcumina pode ser usada como agente fotossensível na Terapia Fotodinâmica. Entretanto, sua aplicação como agente ativo tem sido limitada pela sua baixa solubilidade em água e biodisponibilidade. Assim, este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos da Terapia Fotodinâmica na viabilidade celular usando nanoemulsões com curcumina, como fármaco fotossensibilizante, em linhagens de carcinoma cervical HPV-16 positivas cultivadas em... / Abstract: The Human Papillomavirus (HPV) is a family of DNA viruses with more than 202 types, and are divided into high and low risk HPVs. High-risk HPV infection was identified as etiologic agent of six types of cancer, including cancer of the cervix, penis, vagina, vulva, anus, and oropharynx, and, approximately, 99.7% of the cases of cervical cancer are caused by high-risk HPV infections. Current treatment modalities for invasive carcinoma are the combination of cisplatinbased chemotherapy with radiation, however cisplatin shows severe adverse effects and a low survival rate. Therefore, ongoing efforts are necessary to developed news effective therapeutic strategies to enhance chemotherapeutic efficacy and decrease these side effects, maximizing the local response and patient survival. Curcumin is a bioactive versatile hydrophobic compound which has anti-inflammatory, anti-hyperlipidaemic, anti-angiogenic, anti-neoplastic and chemoprotective properties. Furthermore, curcumin may be used as a photosensitizing agent in Photodynamic Therapy. This study aimed to investigate the effects of Photodynamic Therapy in cellular viability using curcumin-nanoemulsion as photosensitizing drug in cervical carcinoma HPV- 16 cell lines and identify possible molecular changes. The absence of cytotoxicity of empty nanoemulsion showed its biocompatibility. Additionally, the incubation with curcumin-nanoemulsion at 20 μM of curcumin showed more than 80% of cell viability for cell lines. Nanoemulsions were internalized efficiently in cells and were observed in the intracellular environment for up 36 hours after incubation in SiHa cells and for 48 hours in CasKi cells by fluorescence microscopy. Besides, after the Photodynamic Therapy we observed high phototoxic effect of the curcumin-nanoemulsion with less than 5% of viable cells after irradiation. This was accompanied by an increase in caspase-3/7, ... / Doutor

O objetivo do presente trabalho foi comparar os efeitos dos distintos ambientes endócrinos peri-ovulatórios na proliferação celular, no metabolismo das poliaminas e no ambiente redox do útero bovino durante o diestro inicial. Para isso, controlou-se farmacologicamente o crescimento do folículo objetivando induzir a ovulação de folículos de maior diâmetro (grupo folículo grande-CL grande, FG-CLG) ou de menor diâmetro (grupo folículo pequeno-CL pequeno, FP-CLP). Trinta vacas multíparas Nelore, foram pré-sincronizadas, metade destes animais foram destinados para o grupo FG-CLG e receberam uma dose de prostaglandina F2&#945; (PGF) e um dispositivo de progesterona, juntamente com benzoato de estradiol no D10. No momento da retirada dos dispositivos de progesterona (entre D1,75 e D2,5) todos os animas receberam uma dose de PGF. A ovulação foi induzida com acetato de buserelina (D0). O que diferiu entre os tratamentos foi que os animais do grupo FP-CLP não receberam uma dose de PGF no D10 e o momento da retirada dos dispositivos foi entre D1,25 e o D1,5. No D7 um subgrupo dos animais foi abatido e amostras de endométrio e lavado uterino foram coletadas para as análises laboratoriais. Os animais do grupo FG-CLG apresentaram no D0 um folículo 1,2 vezes maior e estradiol 2,3 vezes maior em relação ao FP-CLP. Consequentemente, as vacas do FG-CLG desenvolveram CL maiores (1,6 vezes) e mais pesados (1,4 vezes) o que proporcionou no D7 concentrações de P4 1,5 vezes maior em relação ao FP-CLP. Primeiramente, uma análise do transcriptoma endometrial foi realizada e indicou que processos celulares como proliferação, composição de matrix extracelular, processos metabólicos e processos de oxirredução foram afetados pelo modelo experimental. Para avaliar a condição proliferativa e/ou apoptótica endometrial análises de imunomarcação foram realizadas (Ki-67, marcador de proliferação e caspase 3 ativada, marcador de apoptose). O número de células positivas para Ki-67 no epitélio luminal foi 4,1 vezes maior no FP-CLP, porém não houve diferença na marcação da caspase 3 ativada. No epitélio glandular tanto o ki-67 (1,4 vezes) como a caspase 3 ativada (2,6) estavam aumentados no grupo FG-CLG. Em relação à síntese das poliaminas não houve diferença entre os grupos nas concentrações das poliaminas e abundância dos transcritos e proteína das enzimas de síntese. Por outro lado, foi detectada uma forte associação entre a expressão do gene SAT1 com o gene ODC1 (r2: 0,73; P<0,01) e também entre os genes AZIN1 e AMD1 (r2: 0,61; P<0,01). Quanto ao ambiente redox não houve diferença entre os tratamentos no lavado uterino mas no endométrio, no grupo FP-CLP, houve redução da atividade das enzimas Catalase (0,5 vs 0,79 U/mg proteína; P<0,01), glutationa peroxidase (2,0 vs 2,43 nmol NADPH/min/mg proteína; P<0,01), aumento da atividade da Superóxido dismutase (44,77 vs 37,76 U; P=0,04) e da peroxidação lipídica (28,5 vs 17,43 nmol/MDA/mg proteína; P<0,001), mas sem alterar as quantidades da espécies reativas. De acordo com os resultados obtidos, pode-se concluir que o ambiente endócrino peri-ovulatório regula a proliferação endometrial mas sem alterar a via de síntese das poliaminas e modula também o ambiente redox uterino / This work aimed to compare the effects of the different periovulatory endocrine milieu on the several molecular pathways: as cellular proliferation, polyamine metabolism and redox environment of the bovine uterus during the early diestrus. For this, we controlled pharmacologically the follicular growth to induce the ovulation of larger follicle (Large Follicle-Large Corpus lutem group LF-LCL) or smaller follicle (Small follicle-Small Corpus luteum group SF-SCL). Thirty multiparous Nelore cows were synchronized. Fifteen cows were assigned for each group. On the LF-LCL, the cows received a dose of prostaglandin F2&#945; (PGF), a progesterone device and an estradiol benzoate on D10. On the time of progesterone device was withdraw (between D1.75 e D2.5) all the animals received a dose of PGF. The ovulation was induced with buserelin acetate (D0). The unique difference between the groups was that animals of SF-SCL did not received a dose of PGF on D10 and the progesterone device withdraw was between D1.25 e o D1.5. On D7 a subset of animals was slaughtered and the endometrial and uterine washings samples were collected for laboratorial analyses. On D0 the animals of LF-LCL had a 1.2 times larger follicles and 2.3 times higher levels of estradiol than animals of SF-SCL. Firstly, an endometrial transcriptome analyses was realized and suggested that several cellular processes as proliferation, metabolic processes and oxi-reduction processes were affected by experimental model. To evaluate the proliferative and/or apoptotic condition, endometrial immunohistochemistry analyses were realized (ki-67, proliferation marker and caspase 3 activated, apoptose marker). The number of Ki-67 positive cells in the luminal epithelium was 4.1 times higher on SF-SCL. However, there was no difference in caspase 3 activated analyses. On the glandular epithelium both ki-67 (1.4) and caspase 3 activated (2.6) were increased on LF-LCL. About polyamine synthesis pathway there was no difference in polyamines levels and gene and protein expression of synthesis enzymes between the groups. In other hand, it was detected a strong association between SAT1 gene expression and ODC1 gene expression (r2: 0.73; P<0.01) and also between AZIN1 and AMD1 gene expression (r2: 0.61; P<0.01). On the redox environment analysis there was no difference between the groups on the uterine washings but the SF-SCL group had lower endometrial catalase (0.5 vs. 0.79 U/mg protein, P<0.001) and glutathione peroxidase (GPx; 2.0 vs. 2.43 nmol NADPH/min/mg protein, P=0.04) activity, as well as higher lipid peroxidation (28.5 vs. 17.43 nmol MDA/mg of protein, P < 0.001) and superoxide dismutase (SOD) activity (44.77 vs. 37.76 U; P=0.04). There were no differences in the endometrial reactive species (RS) between the groups. In conclusion, the periovulatory endocrine milieu regulates the endometrial proliferation but without alterations in polyamine metabolism and also modulates the uterine redox environment in beef cattle

Orientadores : Sophie Françoise Mauricette Derchain, Cecilia Maria Rotelli-Martins / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-11-01T13:11:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_ElianeReginaZambelliMesquitade_M.pdf: 184550 bytes, checksum: 3330947a9ea0e764ec70a73074f41c97 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Objetivo: avaliar a prevalência de infecção por Papilomavírus humano (HPV) em mulheres jovens com baixo risco para doenças sexualmente transmissíveis da região de Campinas e zona leste de São Paulo e sua relação com alterações citológicas pré-neoplásicas, segundo algumas variáveis sociodemográficas e reprodutivas. Sujeitos e métodos: foi realizado um estudo de corte transversal, entre setembro a novembro de 2000, com 600 mulheres de 15 a 25 anos com exame ginecológico aparentemente normal. Após avaliação dos critérios de inclusão e exclusão, as pacientes selecionadas responderam a um questionário relacionado aos dados demográficos. Foram submetidas à história médica e exame ginecológico com coleta de material para citologia cervical em base líquida e detecção de DNA-HPV por técnica da reação em cadeia de polimerase (PCR). Para análise estatística foram descritos como valores percentuais a prevalência do DNA-HPV e as alterações citológicas, e as associações com as variáveis sociodemográficas e reprodutivas foram mensuradas por odds ratio (OR). Resultados: a infecção genital pelo papilomavírus humano apresentou a prevalência de 29,3%, sendo que 148 (24,6%) apresentaram DNA-HPV de alto risco oncológico e 56 (9,3%) DNA-HPV de baixo risco oncológico. A presença de atipias de células escamosas de significado indeterminado (ASCUS) foi a alteração citológica mais freqüente com uma prevalência de 11,3%. A alteração citológica sugestiva de lesão de baixo grau foi detectada em 7% dos casos e a de alto grau foi detectada em 0,5%. Nas mulheres com ASCUS na citologia, o DNA-HPV mais encontrado foi o de alto risco oncológico (38,2%). Nas lesões citológicas de baixo grau, o DNA-HPV de alto risco apresentou a prevalência de 53,5% e nas alterações citológicas sugestivas de lesão de alto grau apresentou-se em 100% dos casos. Houve associação significativa entre o estado civil e o número de parceiros sexuais com a detecção do DNA-HPV. O maior número de parceiros, juntamente com menor tempo de atividade sexual da mulher (= 2 anos), aumentou significativamente a detecção do DNA-HPV (OR=19,0). O número de parceiros sexuais no último ano também esteve associado com a citologia anormal. Conclusão: Os resultados deste estudo evidenciaram a alta prevalência da infecção genital por DNA-HPV de alto risco entre pacientes jovens com baixo risco para doenças sexualmente transmissíveis, contribuindo com a caracterização do perfil desta população para futuros projetos para controle e erradicação dessa infecção com suas possíveis lesões pré-neoplásicas / Abstract: Objective: to determine the prevalence of papillomavirus infection in young women characterizes by relatively low rates of sexually transmitted diseases (STDs) among women in region of Campinas and east area of São Paulo and the relationship with cervical cytologic diagnoses according to some sexual and demographic risk factors. Subjects and methods: 600 women 15 to 25 years of age with normal cervical examination and low risk of STD were enrolled in a cross-sectional study, from September to November 2000. After inclusion and exclusion criteria for enrolment were performed, the women complete a study questionnaire concerning general personal information and medical history. The cervical samples were collected for cytology testing using liquid-based and a PCR testing was performed to detect the high-risk and low-risk HPV-DNA genotypes. Descriptive analysis was made for the association between the results of HPV-DNA and the results of cytology. The odds ratio was calculated to verify the association between risk factors and the results of HPV-DNA and cytology. The logistic regression analysis was made to show association between HPV-DNA and risk factors. Results: HPV-DNA has been detected in 176 scrapes (29.3%), 148 containing a high-risk HPV (24.6%) and 56 containing a low-risk HPV (9.3%). The thin layer cytology detected 68 (11.3%) of atypical squamous cells of undetermined significance (ASCUS) of 600 women, 42 (7%) diagnoses with low-grade squamous intraepithelial lesion (LSIL) and 3 (0,5%) with high-grade squamous intraepithelial lesion (HSIL). Cytological abnormalities reported as ASCUS, the HPV-DNA more frequent detected was the high risk (38.2%). The smears reported as LSIL also presented high risk of HPV-DNA as more frequent. All cervical smears reported as HSIL presented high risk HPV-DNA type. The marital status (OR=2.12) and the number of sexual partners (OR=2.19) were significantly associated with the detection of HPV-DNA. Logistic regression analysis showed a significant association between HPV-DNA and the number of sexual partners. This association was more pronounced when the interval between the first sexual intercourse and examination was less than two years. The number of sexual partners at the last year, were significantly associated with an abnormal Pap test. The number of sexual partners at the last year was significantly associated with abnormal smears. Conclusion: The results of this study indicate the high prevalence of high-risk HPV among women with low risk of STD. The implication of these findings will contribute to characterize these young women population to development projects to the control of the genital human papillomavirus infection and yours squamous intraepithelial lesions / Mestrado / Tocoginecologia / Mestre em Tocoginecologia

Orientador: Wilter Ricardo Russiano Vicente / Coorientador: Maria Emilia Franco Oliveira / Coorientador: Erika da Silva Carvalho Morani / Banca: Eliandra Antonia Pires Buttler / Banca: Luís Guilherme de Oliveira / Banca: Giuliano Queiroz Mostachio / Banca: Fabiana Azevedo Voorwald / Resumo: A manipulação farmacológica da cérvix possui potencial importante na assistência à biotécnicas da reprodução, como inseminação artificial e transferência de embriões, em espécies que o acesso transcervical ao útero é muito difícil e, portanto, necessitam de procedimento cirúrgico para aumentar as taxas de concepção. Por meio de estudos básicos das propriedades mecânicas e farmacológicas da cérvix, objetivou-se com este estudo fornecer maior conhecimento da atividade da musculatura lisa da cérvix e então apresentar e discutir possibilidades de fármacos que possam relaxá-la e, portanto facilitar a passagem transcervical. Segmentos do músculo liso circular (MC) e longitudinal (ML) foram dissecados do útero (corno e corpo) e cérvix de suínos e preparados para tensão isométrica em banhos de órgão isolados de 20mL de solução modificada de Krebs-Henseleit (pH 7,4) gaseificada com 95% O2: 5% CO2 a 37°C. Os segmentos da cérvix apresentaram maiores respostas mecânicas do que os uterinos, mas exibiram menor atividade espontânea. Todas as preparações responderam de maneira dependente à frequência de estimulação de força elétrica (EFE, 2Hz - 32Hz, 300mA, por 30s). Especialmente na cérvix, após as respostas neurogênicas, houve um período de quiescência muscular importante até que as atividades espontâneas retornassem ao normal. Na maioria das preparações cervicais (MC e ML) a atropina aboliu as contrações neurogênicas, destacando um maior envolvimento para inervação colinérgica e receptores muscarínicos, mas uma pequena proporção das preparações se mostraram resistente à atropina. Estas respostas não foram afetadas pela fentolamina, e nem pela prazosina e fenilefrina, sugerindo a ausência de receptores alfa-adrenérgicos. L-NAME (N-nitro-L-arginina-metil-ester) não teve nenhum efeito sobre a atividade muscular cervical, excluindo o envolvimento de óxido nítrico. Diltiazem... / Abstract: Pharmacological manipulation of cervix has a potentially important role for aiding either artificial insemination or embryo transfer in species requiring surgical procedures to aid conception. By studying basic pharmacological and mechanical properties of the cervix, we aimed with this study to provide a better knowledge about cervical smooth muscle activity and then present and discuss insights into possible drugs for the pig that could facilitate biotechnological procedures for reproduction. Circular (CM) and longitudinal (LM) smooth muscle strips were dissected from porcine uterus (cornu and corpus) and cervix and prepared for isometric tension recording in organ-bath of 20mL of modified Krebs Henseleit solution (pH 7.4) maintained at 37oC and gassed with 95% O2 and 5% CO2. Cervical strips produced larger mechanical responses than the uterine segments, but exhibited less spontaneous activity. All preparations responded in a frequency-dependent manner to electrical field stimulation (EFS, 2Hz-32Hz, 300mA for 30s) with a contraction. Especially in cervix, after neurogenic responses, there was a period of important muscular quiescence until the resume of normal spontaneous activity. In most cervical preparations (CM and LM) atropine abolished neurogenic contractions, highlighting a major role for cholinergic nerves and muscarinic receptors, but a small proportion of preparations exhibited atropine-resistant responses. These responses were not affected by phentolamine, and neither by prazosina and phenylephrine suggesting no role for alpha-adrenoceptors. L-NAME (N-nitro-L-arginina-metil-ester) did not affect the cervical smooth muscle activity, excluding the role of nitric oxide. Diltiazem, papaverine and isoprenaline inhibited neurogenic contractions in CM and LM strips of the cervix, consistent with important roles for voltage-sensitive calcium channels, phosphodiesterase and beta-adrenoceptors, respectively. However, RP73401 ... / Doutor

O prolapso uterino tem sua incidência aumentada na pós-menopausa. O objetivo deste estudo é identificar as alterações na matriz extracelular do ligamento cardinal associadas à menopausa e ao prolapso uterino. Ligamento cardinal de três diferentes grupos de mulheres, pré-menopausa, prolapso uterino e pós-menopausa, foram identificados e biopsiados durante 57 histerectomias abdominais ou vaginais. As amostras foram processadas por métodos bioquímicos para caracterização e quantificação de glicosaminoglicanos sulfatados e colágeno. As concentrações relativas de glicosaminoglicanos foram obtidas por eletroforese. Procedimentos histológicos foram feitos para identificar fibras elásticas (Weigert), distribuição de colágeno (Picro Sirius) e decorin (imunohistoquímica). Nossos resultados mostraram aumento na concentração de GAG de 72,2%, redução na concentração de colágeno de 37% e diminuição de 22% de fibras elásticas no grupo de prolapso uterino quando comparado ao grupo da pós-menopausa (p<0,05, p<0,04 e p<0,05 respectivamente). As concentrações relativas de glicosaminoglicanos sulfatados para condroitin sulfato, heparan sulfato e dermatan sulfato não mostraram diferenças entre os três grupos. A organização do colágeno foi similar entre os três grupos e a marcação do decorin pareceu estar diminuída no grupo de prolapso uterino. Nossos resultados indicam alterações no metabolismo do tecido conjuntivo. O ligamento cardinal da mulher na pós-menopausa possui uma matriz extracelular mais densa. Esta alteração não ocorre na mulher com prolapso uterino. / Uterine prolapse has increase of incidence after menopause. The aim of this study was to identify the changes in extracellular matrix of cardinal ligaments associated to menopause and uterine prolapse. Cardinal ligament of 3 different groups (pre-menopause, menopause and uterine prolapse) are identified and biopsied during 57 womens abdominal or vaginal hysterectomy. Biopsy specimens were assessed by biochemical methods to characterize and quantify sulfated glycosaminoglycans and collagen. Relative concentrations of GAG were obtained by electrophoresis. Histological procedures are made to identify elastic fibers (Weigert) collagen distribution (Picro sirius) and decorin (immunohistochemistry). Our results showed increase in GAG concentration 72.2% in uterine prolapse group compared to menopause group (p<0.05). Collagen concentration was 37% lower in uterine prolapse group compared to menopause group (p<0.04). Relative concentration of GAG: heparan sulfate, chondroitin sulfate and dermatan sulfate showed no differences among three groups. Elastic fibers showed a significant reduction of approximately 22% uterine prolapse group compared to menopause group (p<0.05). Collagen organization was similar in three groups and the staining pattern of decorin seemed to be decreased in uterine prolapse group. Our results indicate changes in connective tissue metabolism. Cardinal ligament in postmenopausal women has a denser extracellular matrix. This change is not observed in women with uterine prolapse.