A progesterona desempenha uma função de extrema importância para o desenvolvimento embrionário inicial, por meio da regulação do ambiente uterino no período prévio à adesão dos embriões ao endométrio. Nesse contexto o objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos da suplementação com progesterona ou progestágeno durante a fase inicial da gestação sobre o ambiente uterino e desenvolvimento embrionário de suínos, bem como seus efeitos no desempenho da leitegada nascida. Foram realizados dois experimentos. No experimento 1 utilizou-se 40 porcas e 28 marrãs que no 6º dia de gestação foram distribuídas em um dos três grupos experimentais: fêmeas suplementadas com 20 mg de altrenogest (Regumate®) do 6º ao 12º dia de gestação (RU; n = 23); fêmeas suplementadas com 2,15 mg/kg de progesterona de longa ação (Sincrogest®), injeção única no 6º dia de gestação (PG; n = 24); fêmeas não suplementadas (CON; n = 21). Esse experimento foi delineado de maneira inteiramente casualizada em um arranjo fatorial, sendo que a categoria (marrã ou porca) foi considerada fator 1 e os grupos (CON, RU e PG) fator 2. 18 fêmeas foram eutanasiadas no 13º dia de gestação, e 50 fêmeas no 28º dia de gestação. Foram analisados: taxa de prenhez, taxa de ovulação, sobrevivência embrionária, tamanho e peso de embriões e útero, volume e peso de corpos lúteos, volume das vesículas embrionárias, dosagem sérica de progesterona e 17β- estradiol, morfometrias glandular e de epitélio luminal do uterino. No experimento 2 foram utilizadas 75 matrizes, que no 6º dia de gestação foram alocadas de maneira interiramente casualisada em um dois grupos: fêmeas suplementadas com 20 mg de altrenogest (Matrix®) do 6º ao 12º dia de gestação (ALT; n = 36); fêmeas não suplementadas (CTR; n = 36). Analisadas: taxa de prenhez, período gestacional, peso médio e homogeneidade da leitegada, número de leitões mumificados, natimortos e nascidos vivos, quantidade de leitões nascidos com menos de 800 gramas. Não houve influência dos tratamentos sobre a taxa de prenhez e a sobrevivência embrionária foi prejudicada apenas para marrãs do grupo RU. Para o desenvolvimento embrionário os resultados divergiram entre as categorias, as marrãs do grupo CON apresentaram embriões maiores e mais pesados quando comparados aos grupos suplementados, bem como vesículas embrionárias maiores. Para as porcas o grupo RU apresentou embriões maiores e mais pesados. De maneira geral as suplementações com progesterona ou progestágeno estimularam o crescimento do epitélio glandular aos 13 dias de gestação, mas não tiveram efeito sobre epitélio luminal. Já aos 28 dias de gestação o efeito da estimulação foi apenas observado para marrãs do grupo PG. Os tratamentos estimularam também o crescimento dos corpos lúteos que foram maiores e mais pesados para os grupos suplementados. Em relação ao desempenho da leitegada, analisado no experimento 2, não houve efeito de tratamento para nenhuma das variáveis analisadas. A suplementação de progesterona/progestágeno a partir do 6º dia de gestação estimulou o crescimento do epitélio glandular uterino e afetou o desenvolvimento embrionário inicial, mas não exerceu efeito significativo sobre o desempenho da leitegada. / Progesterone plays a role of extreme importance for early embryonic development by regulating the uterine environment in the period prior to the adhesion of the embryos to the endometrium. In this context, the objective of the present study was to evaluate the effects of progesterone or progestogen supplementation during early gestation on the uterine environment and embryo development of pigs, as well as their effects on litter performance. Two experiments were carried out. In the experiment 1, 40 sows and 28 gilts were used, which were distributed in one of the three experimental groups: females supplemented with 20 mg altrenogest (Regumate®) from the 6th to the 12thh day of gestation (RU; n = 23); females supplemented with 2.15 mg / kg long acting progesterone (Sincrogest®), single injection at 6th day of gestation (PG; n = 24); females not supplemented (CON; n = 21). This experiment was completely randomized in a factorial arrangement, with the category (gilt or sow) being considered as factor 1 and the groups (CON, RU and PG) factor 2. 18 females were euthanized on the 13th day of gestation, and 50 females on the 28th day of gestation. Pregnancy rate, ovulation rate, embryo survival, embryo and uterus size and weight, volume and weight of corpora lutea, volume of embryonic vesicles, serum progesterone and 17β-estradiol concentrations, morphometric of uterine glandular epithelium and uterine luminal epithelium. In the experiment 2, 75 sows were used, which at the 6th day of gestation were allocated in a randomized manner in one of two groups: females supplemented with 20 mg of altrenogest (Matrix®) from 6 to 12 days of gestation (ALT; = 36); females not supplemented (CTR; n = 36). The variables analyzed were: pregnancy rate, gestation length, average of litter weight, within-litter variation, number of mummified, stillborn and live born piglets, number of piglets born with less than 800 grams. There was no influence of treatments on the pregnancy rate and embryo survival was impaired only for gilts in the RU group. For embryonic development the results differed among the categories, the gilts of the CON group had larger and heavier embryos when compared to the supplemented groups, as well as larger embryonic vesicles. For the sows the RU group presented larger and heavier embryos. In general, progesterone or progestogen supplementation stimulated the growth of the glandular epithelium at 13 days of gestation, but had no effect on luminal epithelium. However, on day 28 of gestation the stimulatory effect was only observed for gilts of the PG group. Treatments also stimulated the growth of corpora lutea that were larger and heavier for the supplemented groups (RU and PG). Regarding the performance of the litter, analyzed in experiment 2, there was no treatment effect for any of the variables analyzed. In conclusion, Progesterone / progestogen supplementation from day 6 of gestation affected the uterine glandular epithelium area, and early embryonic development, but did not have a significant effect on the litter performance.

Durante o puerpério há muita incidência de doenças reprodutivas acarretando aumento do intervalo entre partos, bem como diminuição na taxa de concepção. A endometrite é uma enfermidade puerperal que se caracteriza por um processo inflamatório superficial do endométrio. Com o intuito de se obter novas ferramentas diagnósticas não invasivas, precisas e que proporcionam resultados precoce à reprodução, faz-se uso da ultrassonografia convencional associada a ferramenta Doppler que fornece informações em tempo real sobre a arquitetura vascular e os aspectos hemodinâmicos dos vasos em diversos órgãos. Este estudo tem por objetivo descrever, através da ultrassonografia Doppler, as alterações hemodinâmicas no útero de fêmeas bovinas causadas pela endometrite. Avaliou-se o trato reprodutivo feminino de vacas entre 25 a 35 dias pós-parto utilizando a vaginoscopia, ultrassonografia convencional e Doppler, além de citologia e exame microbiológico em 89 vacas Holandesas sendo 33 sadias (controle) e 56 com endometrite diagnosticadas por citologia (saudáveis <10% de polimorfonucleares). Os resultados obtidos destacam-se a que animais com endometrite apresentavam aumento de cérvix (p=0,04), e de útero representado pelo corno esquerdo (p=0,02). Porém não foi observado diferença quando comparado os escore de condição corporal (ECC). Quanto a ultrassonografia notou-se que animais com fluido intrauterino (FIU) e conteúdo heterogêneo intrauterino (CHIU) tinham endometrite (p<0,0001), além de correlação com a presença de Trueperella pyogenes e leveduras. Com o modo cores do Doppler obteve-se a vascularização de mesométrio (p=0,004) e endométrio (p=0,025) associada aendometrite. Entretanto não foi observado diferença estatística nas medidas do Doppler espectral (índice de resistividade, pulsatilidade e fluxo sanguíneo). Portanto a busca de novas técnicas, menos invasivas e de rápido resultado, como a ultrassonografia Doppler, podem fornecer respostas satisfatórias quanto a evolução de alterações uterinas e com isso associar os resultados à precocidade reprodutiva. / During the puerperium period there is a high incidence of reproductive diseases resulting in increased calving interval and decrease in conception rate. The endometritis is a postpartum disease that is characterized by a superficial inflammation of endometrium. With the aim to obtain new non-invasive and accurate diagnostic tools, that provide early results in reproduction, it is possible to be used the conventional ultrasound associated to Doppler that provides real time information about vascular architecture and hemodynamic aspects of vessels in several organs. This study aims to describe, through Doppler ultrasound, hemodynamic changes in the uterus of cows caused by endometritis. Were evaluated the female reproductive tract of 89 Holstein cows between 25 to 35 days postpartum using vaginoscopy, conventional ultrasound and Doppler, as well as cytology and microbiological examination. From the 89 animals that were studied, 33 were healthy (control) and 56 with endometritis diagnosed by cytology (healthy <10% polymorphonuclear). The obtained results show that animals with endometritis had increase in cervix (p = 0.04) and the uterus represented by left uterine horn (p = 0.02). However, it was not detected difference when compared the body condition score (BCS). About the ultrasound was noted that animals with intrauterine fluid (IUF) and intrauterine heterogeneous content (IUHC) had endometritis (p <0.0001) correlation with the presence of Trueperella pyogenes and yeasts. With the color Doppler mode it was possible to obtain the vascularization of mesometrium (p = 0.004) and endometrium (p = 0.025) associated with endometritis. However, it was not observed statistical difference in the measurements of the spectral Doppler (resistance index, pulsatility and blood flow). Therefore, the search for new techniques, less invasive and fast result, as the Doppler ultrasound can provide satisfactory answers as the evolution of uterine changes and thereby associate the results to the reproductive precocity.

Fragestellung: Eine neuer, gänzlich nichtinvasiver Therapieansatz für die Behandlung von Myomen ist die MRT-gesteuerte Thermoablation mittels fokussiertem Ultraschall (HIFUS). Mit einer Phase-II-Studie sollten Verträglichkeit und Durchführbarkeit der Methode geprüft werden. Patientinnenkollektiv und Methoden: Im Rahmen einer internationalen Multizenterstudie wurden 11 prä- und perimenopausale Frauen mit deutlich vergrößertem und myomatös verändertem Uterus mittels MR-gesteuertem fokussiertem Ultraschall (Fa. Insightec Israel) behandelt. Studienziel war die Abschätzung von Durchführbarkeit und Verträglichkeit des neuen Verfahrens (Phase II). Die klinisch und sonographisch gestellte Diagnose wurde in einer ersten Sitzung mittels MRT bestätigt, die Myomzugänglichkeit abgeschätzt und größere Nekrosen ausgeschlossen. In einer zweiten ambulanten Sitzung wurden die Myome in MRT mittels Ultraschall behandelt. 3-5 Tage nach Therapie wurde der Perfusionsdefekt des behandelten Volumens mittels MRT ermittelt. Innerhalb von 30 Tagen nach der HIFUS-Therapie wurden alle Patientinnen hysterektomiert und die Präparate makroskopisch und mikroskopisch untersucht. Ergebnisse: Bei 9 von 11 Patientinnen konnte die Behandlung planmäßig durchgeführt werden (Dauer der Therapiesitzung 2-4 Std.). Im Allgemeinen wurde die Behandlung gut toleriert. Es traten lediglich leichte Schmerzen während und Schwächegefühl nach der Therapie auf. Bei zwei Patientinnen war aufgrund einer ungünstigen Myomlage der Therapie nicht möglich. Die erreichte Nekrose im histologischen Präparat korrelierte gut mit dem behandelten Myomvolumen. In keinem Fall waren Nekrosen außerhalb des Zielvolumens nachweisbar. Schlussfolgerungen: Die Myombehandlung mittels HIFUS ist eine verträgliche und zuverlässig anwendbare, nichtinvasive Methode. Zur Überprüfung der Wirksamkeit sind weitere Studien in Arbeit. / Introduction: MR-guided focussed ultrasound is a new completely noninvasive therapeutic modality for the treatment of uterine myomas. Feasibilitiy and morbidity were analyzed within the constraints of a phase II study. Patients and Methods: 11 pre- and postmenopausal women with a significantly enlarged uterus due to myomas were treated with MR-guided high frequency focussed ultrasound (HIFUS; Fa. Insightec, Israel) as part of an international multicenter study. The objective was to estimate the feasibility and morbidity of the new modality (phase II). The diagnosis as established by clinical and ultrasound examination was in a first step verified by MR, then the potential acces route was determined and larger necroses were excluded. In a second session the myomas were treated under MR guidance with HIFUS on an outpatient basis. 3-5 days after therapy the perfusion defect of the treated tumor volume was determined by MR. Within 30 days of HIFUS-therapy all patients had their uterus excised and examined pathologically. Results: The treatment could be completed as planned in 9 of 11 patients (duration of treatment 2-4 hours). In general the treatment was tolerated well. Minor pain was experienced during and some exhaustion was felt after therapy. In 2 patients therapy was impossible due to suboptimal localisation of the myoma. The resulting necrosis as seen in the path. specimen was well correlated to the size of the treated volume within the myoma. In no case was necrosis detected outside the myoma. Conclusions: Uterine myomas can be treated by HIFUS noninvasively, reliably and without significant morbidity. Different Studies are under way to verify the efficiency of the modality.

Orientador: Eunice Oba / Resumo: As células-tronco de origem mesenquimal provenientes do tecido endometrial (CTMsE) e seu meio condicionado (MC) apresentam propriedades terapêuticas, e são alternativas promissoras para estudos na medicina veterinária. Estudos envolvendo CTMsE e seu MC ainda são considerados escassos na espécie bovina até o presente momento. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial de diferenciação, perfil imunofenotípico, estabilidade cromossômica, eficiência de clonicidade, resposta à criopreservação das CTMsE de bovinos coletadas em duas fases do ciclo estral. Adicionalmente, avaliar o secretoma, produção de citocinas e de prostaglandina E2 (PGE2) das CTMsE estimuladas ou não com lipopolissacarídeo (LPS) bacteriano. Para tanto, foi colhido o útero de fêmeas hígidas (Fase II n=6/ Fase III n=6) para o isolamento das CTMsE por digestão enzimática. CTMsE em primeira passagem foram avaliadas quanto ao número de cromossomos e as em segunda passagem foi conduzido o ensaio de clonicidade. As CTMsE em terceira passagem (P3) foram submetidas a diferenciação nas linhagens adipogênica, condrogênica e osteogênica e caracterizadas em relação ao perfil imunofenotípico por citometria de fluxo (CF) (vimentina, CD29, CD44, MHC-II, CD34) e imunocitoquímica (vimentina e CD44). Adicionalmente, as CTMsE em P3 foram criopreservadas utilizando-se dois meios de criopreservação e avaliadas por CF antes e após a criopreservação. Para avaliação da produção de citocinas, PGE2 e análise do secreto... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Orientador: Juliana Regina Peiró / Banca: Lina Maria Wehrle Gomide / Banca: Alexandre Secorun Borges / Resumo: A endometrite é uma das pricipais causas de redução da fertilidade em éguas. Desta forma, o diagnóstico de subfertilidade em éguas torna-se importante na tentativa de prevenir ou minimizar perdas econômicas. A quantificação de dímero-D tem sido avaliada em animais com diferentes enfermidades. Os objetivos do presente estudo foram determinar se as concentrações de dímero-D no soro e líquido uterino sofrem alteração em éguas susceptíveis à endometrite em relação a éguas resistentes antes e após lavagens uterinas seriadas e antibioticoterapia, determinar em qual compartimento o aumento do dímero-D refletiria melhor e mais rapidamente as alterações inflamatórias em éguas susceptíveis à endometrite em relação a éguas resistentes antes e após lavagens uterinas seriadas e antibioticoterapia, estabelecer valores de referência para as concentrações de dímero-D no soro e no líquido uterino de éguas resistentes e daquelas susceptíveis à endometrite e verificar se o dímero-D pode ser utilizado como um biomarcador para éguas susceptíveis à endometrite. A quantificação de dímero-D foi obtida de amostras de soro e líquido uterino de doze éguas da raça Quarto de Milha, divididas em dois grupos: éguas resistentes (grupo controle) e susceptíveis à endometrite (grupo experimental). Os resultados do presente estudo mostraram que não houve diferença entre as concentrações de dímero-D séricas ou do líquido uterino nos animais do grupo controle e experimental. Portanto, o dímero-D não pode ser util... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Endometritis is one of the main causes of fertility reduction in breeding mares. Therefore, the diagnosis of subfertility in mares becomes important in attempting to prevent or minimize economic losses. Quantification of D-dimer in animals with a variety of diseases has been published. The goals of this study were to determine whether D-dimer concentrations in serum and uterine fluid suffer changes in mares susceptible or resistant to endometritis before and after serial uterine washes in association with antibiotic therapy, to determine in which compartment increased D-dimer concentrations would reflect better and faster the inflammatory changes in mares susceptible to endometritis in comparison to resistant mares before and after serial uterine washes and antibiotic therapy, to establish reference values for concentrations of D-dimer in serum and uterine fluid of resistant mares and those susceptible to endometritis, and to verify whether D-dimer can be used as a biomarker in mares susceptible to endometritis. D-dimer was quantified in serum or uterine fluid of twelve Quarter Horses mares, divided into two groups: mares resistant to (control group) or susceptible to endometritis (experimental group). The results of this study showed no difference between serum or uterine fluid concentrations of serum D-dimer between groups. We concluded that D-dimer cannot be used as a biomarker to identify mares susceptible to endometritis. / Mestre

Em bovinos , as flutuações nas concentrações de estradiol (E2) e progesterona ( P4) que ocorrem em torno do estro modulam a expressão gênica do endométrio, a composição histotrofo, o desenvolvimento do concepto e assim afetam o resultado da prenhez. Durante o ciclo estral, ações endócrinas bem orquestradas afetam o endométrio bovino (BAUERSACHS et al., 2005). No presente trabalho, a hipótese sustentada é que alterações endócrinas associadas ao crescimento e ovulação de folículos de diferentes tamanhos modulam a distribuição espacial das transcrições no trato reprodutivo de vacas da raça Nelore. O crescimento folicular de vacas Nelore multíparas e não lactantes foi farmacologicamente manipulado a fim de gerar grupos com folículos pré-ovulatórios e subsequente corpo lúteo (ou seja, diferentes ambientes endócrinos periovulatórios) grande (FG CLG; n = 6) ou pequeno (FP CLP, n = 6). Os animais foram abatidos, sete dias após a indução da ovulação e fragmentos das regiões anterior, média e posterior de ambos os cornos uterinos e da vagina foram coletados para a avaliação de expressão gênica por PCR quantitativo. A expressão gênica foi normalizada utilizando os genes referência ciclofilina A e beta actina, como indicado pelo software GeNorm. Os dados foram analisados utilizando-se o procedimento PROC MIXED do SAS (versão 9.2; Instituto SAS) em dois modelos independentes. O primeiro modelo incluiu os efeitos de grupo (FG CLG e FP CLP), lado do corno uterino (ipsolateral ou contralateral ao ovário contendo o CL) e sua interação, o segundo modelo incluiu os efeitos de grupo, região (anterior, médio e posterior) do corno ipsolateral e suas interações. Vacas do grupo FP CLP apresentou maiores folículos pré-ovulatórios e concentrações de E2 durante proestro e maiores CL e níveis de P4 no diestro inicial, quando comparados com os do grupo FP CLP. Animais do grupo FP CLP apresentaram uma maior abundância de transcritos que codificam o receptor de E2 (ESR2; 130%), a aldo-ceto redutase família 1, membro C4 (AKR1C4; 232%), a lipoproteína lipase (LPL; 116%), o carreador de soluto família 2, membro 1 (SLC2A1; 24%) e inibidor da peptidase da serina, subtipo A, membro 14 (SERPINA14; 75%). Por outro lado, a expressão de genes que codificam o receptor de P4 e receptor de oxitocina foi regulada positivamente no tecido endometrial do grupo FP CLP (36 % e 966 %, respectivamente). Além disso, a abundância da transcrição desse genes foi maior no corno contralateral ao CL. Além disso, a região anterior do corno uterino ipsolateral apresentou aumentada expressão de PGR, ESR2, LPL, SLC2A1 e SERPINA14 em comparação com a região posterior. Com exceção da OXTR que apresentou interação grupo e lado, não houve interações grupo por lado ou região. Não houve efeito de grupo sobre a expressão de qualquer um dos genes na vagina. Em conclusão, o presente estudo mostrou que o padrão de expressão de genes específicos em resposta variou quanto a grupo e entre as regiões do trato reprodutivo de fêmeas bovinas. No entanto, os distintos ambientes endócrino periovulatórios não afetaram a distribuição regional de transcritos. / In cattle, fluctuations of progesterone (P4) and estradiol (E2) concentrations that occur around estrus modulate endometrial gene expression, histotroph composition, conceptus development and, thereby affect pregnancy outcome. During the estrous cycle, well-orchestrated endocrine actions affect the bovine endometrium (BAUERSACHS et al., 2005). In the present work, we hypothesized that endocrine changes associated with growth and ovulation of follicles of different sizes modulate the spatial distribution of transcripts in the reproductive tract of Nellore cows. The follicular growth of multiparous non-lactating Nelore cows was pharmacologically manipulated in order to generate groups with large (LF LCL; n=6) or small (SF SCL; n=6) preovulatory follicles and subsequent corpus luteum (i.e., different periovulatory endocrine milieus). Cows were slaughtered seven days after the induction of ovulation and fragments from the anterior, middle and posterior regions from both uterine horns and the vagina were collected. Gene expression assessment was performed by quantitative PCR. Gene expression was normalized using cyclophilin A and actin, beta as reference genes, as indicated by the GeNorm software. Data were analysed using the PROC MIXED procedure of SAS (Version 9.2; SAS Institute) in two independent models. The first model included the effects of group (LF LCL and SF SCL), side of the uterine horn (ipsilateral or contralateral to the ovary containing the CL) and interaction and the second model included the effects of group, region of the ipsilateral horn (anterior, middle and posterior) and interaction. Cows in the LF LCL group presented larger preovulatory follicles and E2 concentrations during proestrus and larger CL and P4 levels during early diestrus when compared to animals from SF SCL group. Animals in the LF LCL group had a greater abundance of transcripts coding the estrogen receptor (ESR2; 130%), aldo-keto reductase family 1, member C4 (AKR1C4; 232%), lipoprotein lipase (LPL; 116%), solute carrier family 2, member 1 (SLC2A1; 24%) and serpin peptidase inhibitor, clade A member 14 (SERPINA14; 75%). Conversely, the expression of genes coding the progesterone receptor and oxytocin receptor was upregulated in the SFSCL endometrial tissue (36% and 966% respectively). Furthermore, transcript abundance of the later genes was observed in the contralateral horn. In addition, the anterior region of the ipsilateral horn showed increased expression of PGR, ESR2, LPL, SLC2A1 and SERPINA14 compared to the posterior region. Except for a group by side interaction for the expression of OXTR, there were no group by region or group by side interactions. There was no effect of group on the expression of any of the genes in the vagina. In conclusion, our study showed that the expression pattern of specific genes varied in response to group and among regions of the female reproductive tract. However, distinct endocrine periovulatory milieus did no affect regional distribution of transcripts.

SK3 channels contribute to membrane repolarization and hyperpolarization that leads to both relaxation of smooth muscle and vascular branching. These two distinct properties are intensified in the SK3T/T mice possibly influencing pregnancy by dampening uterine contractions and causing dysfunctional placental development. SK3T/T mice have delayed or hindered parturition, suggesting a role for SK3 channels in labor contractions (Chapter 2 & 3). Based on these findings, we hypothesized that SK3 channel expression must be reduced late in normal pregnancy to enable the uterus to produce the forceful contractions required for parturition. The mechanism(s) downregulating this channel in the uterus during pregnancy is unknown. The SK3 gene promoter region contains two Specificity Protein (Sp) binding sites; Sp1, a transcription factor that enhances transcription of genes in response to estrogen, and Sp3, a factor that competes for the same binding motif as Sp1 to reduce gene expression (Chapter 4). SK3 channels may also be involved in the vascular remodeling that occurs during pregnancy. The SK3 channel is present in vascular endothelial cells and overexpression of this channel leads to abnormal vessel branching and an increase in vessel diameter. During pregnancy, the vascular system must adapt to accommodate dramatic increases in blood volume necessary to sustain the developing fetus. Overexpression of SK3 channels could produce abnormalities in the placental vascular network, similar to the abnormal vessel branching and vasodilatation found in the mesenteric circulation, thus leading to poor fetal outcome (Chapter 5). The aim of this research was to determine the function of the SK3 channel in pregnancy by focusing on its role in myometrial contractility in addition to identifying its role in remodeling the maternal vasculature and its impact on placental blood flow and fetal demise.

Changes in circulating progesterone (P4) and estradiol (E2) during proestrus produce dynamic changes in endometrial function and pituitary release of gonadotropins. Independent and combined effects of P4 and E2 on endometrium and pituitary were evaluated. In Exp.1, an exogenous hormone model of proestrus was created by removal of CL and follicles >=5 mm followed by gradual removal of intravaginal P4 implants during 18h and treatment with increasing doses of estradiol benzoate during 48h to mimic proestrus using HighE2 (n=9) or LowE2 (n=9). Decreased P4, increased E2, and increased endometrial area (EA) simulated proestrus values in HighE2 cows and this was used subsequently. Experiment 2 used a 2x2 factorial design with: HighE2&LowP4 (n=11); HighE2&HighP4 (n=11); LowE2&HighP4 (n=11); LowE2&LowP4 (n=10). At 48h, GnRH-induced LH and FSH release was determined. Variables were analyzed using PROC MIXED of SAS and AUC calculated with MESS. The EA increased dramatically during 48h only in HighE2&LowP4 cows. For FSH, HighE2 cows had greater AUC and FSH peak after GnRH than LowE2 groups, with mild negative effects of HighP4. For LH, concentration at peak and AUC were 2-fold greater in HighE2 compared to LowE2 groups, with HighP4 reducing in a similar proportion compared to LowP4 groups. Thus, maximal changes in uterus and pituitary during proestrus depend on both LowP4 and HighE2 but E2 and P4 have different actions. Changes in endometrium depend on LowP4 and HighE2, whereas GnRH-induced FSH secretion primarily depends on HighE2, and GnRH-induced LH secretion is independently increased by HighE2 or reduced by HighP4. / As mudanças na progesterona (P4) e estradiol (E2) circulantes durante o proestro produzem alterações dinâmicas na função endometrial e na liberação das gonadotrofinas pela adenohipófise. Efeitos independentes e combinados da P4 e do E2 no endométrio e adenohipófise foram avaliados. No Exp.1, foi elaborado um modelo de proestro usando apenas hormônios exógenos a partir da remoção do CL e folículos >= 5 mm seguido por remoção gradual de dois dispositivos intravaginais contendo P4 durante 18 h e tratamento com doses crescentes de benzoato de estradiol (BE) durante 48 h para mimetizar o proestro, usando AltoE2 (n = 9) ou BaixoE2 (n = 9). Redução da P4, aumento do E2, e aumento da área endometrial (AE) simularam valores similares ao proestro em vacas do grupo AltoE2, o qual foi usado subsequentemente. No Exp. 2 foi realizado um arranjo fatorial 2x2 contendo: AltoE2&BaixaP4 (n = 11); AltoE2&AltaP4 (n = 11); BaixoE2&AltaP4 (n = 11); BaixoE2&BaixaP4 (n = 10). Após 48 h do início dos tratamentos com BE, foi avaliada a liberação de LH e FSH após desafio com GnRH. As variáveis foram analisadas usando o PROC MIXED do SAS e área sob a curva (AUC) foi calculada com MESS. A AE aumentou durante 18 h apenas nas vacas HighE2&LowP4. Para FSH, animais do AltoE2 apresentaram maior AUC e FSH no pico após GnRH comparados aos grupos BaixoE2, com efeitos negativos discretos da AltaP4. Para LH, concentração ao pico e AUC foram 2 vezes maiores nas vacas de AltoE2 comparados a BaixoE2, com AltaP4 reduzindo essas variáveis em uma proporção similar quando comparado aos grupos de BaixaP4. Assim, máximas mudanças no útero e na adenohipófise durante o proestro dependem de ambos, BaixaP4 e AltoE2, mas E2 e P4 apresentam diferentes ações. Alterações no endométrio dependem de BaixaP4 e AltoE2, enquanto que a liberação de FSH induzida por GnRH depende primariamente de AltoE2, e a liberação de LH induzida por GnRH é independentemente aumentada pelo AltoE2 ou reduzida pela AltaP4.

Alfalfa accumulates phytoestrogens and when ingested binds the estrogen receptor and induces morphological changes similar to endogenous estrogens. The objective of this study is to evaluate morphological changes in uteri, vulva, and teats of ovariectomized prepubertal ewe lambs. Eighteen prepubertal ewe lambs were ovariectomized in November 2000 and fed nonestrogenic hay until May 2001. In May, ewes were fed bentgrass straw and cottonseed meal. On day 0 of a 12-day feed trial, ewes were assigned randomly to three treatments (n=6 in each treatment): Estradiol, Control, and Alfalfa. Estradiol treated ewes were fed bentgrass straw and cottonseed meal ad libitum, plus receiving a daily injection of 10 mg estradiol-17�� suspended in corn oil. Control ewes were fed bentgrass straw and cottonseed meal ad libitum and received a daily injection of corn oil vehicle. Alfalfa ewes were fed alfalfa ad libitum and received a daily injection of corn oil vehicle. Three blinded observers assigned each ewe a subjective score ranging from 1 (no change) to 4 (significant change) for vulva and teat morphology on Days 0, 1, 3, 5, 7, 9 and 12. Teat length and circumference were measured on Days 1, 7 and 12. Ewes were slaughtered on Day 13, uteri were weighed, and a cross-section was collected from each uterine horn. Cross-sections were fixed in Lillie's Neutral Buffered Formalin and embedded in paraffin wax, sectioned at 4-5 ��m, and stained with hematoxylin and eosin. An ocular micrometer was used to measure luminal epithelial cell height. Estradiol treated ewes had heavier (p<0.05) uterine weights and greater (p<0.05) uterine luminal epithelial cell height than that of ewes fed alfalfa or control ewes. Uterine weights and uterine luminal epithelial cell height were greater (p<0.05) in alfalfa fed ewes than control ewes. Vulva scores for estradiol treated ewes were higher than those of control ewes (p<0.05). Alfalfa fed ewes had numerically higher vulva scores than control ewes but the difference was not significant statistically (p>0.05). Teat scores or measurements showed no differences (p>0.05) among treatments. Ewes exhibited slight changes in vulva scores due to treatment, but the most noted effects were observed in uterine growth. This research suggests that uterine weight and uterine luminal epithelial cell height are sensitive to the estrogenic activity of alfalfa and estradiol-17 resulting in morphological changes in estrogen target tissues in the prepubertal ewe lamb. / Graduation date: 2003

Graduation date: 1995