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Caracterização molecular de elementos VanA em enterococos com genótico e fenótipo discrepantes relativos à resistência aos glicopeptídeos / Molecular characterization of the VanA element in enterococci with incongruent genotype and phenotypes relative to glycopeptide resistance.Henrique, Priscila Moraes 06 March 2007 (has links)
Enterococos resistentes aos glicopeptídeos representam, atualmente, importantes patógenos causadores de infecção nosocomial, sendo isolados em várias regiões do mundo, inclusive no Brasil. Dos fenótipos de resistência descritos até o momento, VanA e VanB são os mais encontrados. O fenótipo VanA é caracterizado por linhagens resistentes a altos níveis de vancomicina e teicoplanina, enquanto VanB é representado por linhagens com altos níveis de resistência à vancomicina, mas com sensibilidade à teicoplanina. O fenótipo VanA é codificado por um grupamento de genes (vanRSHAXYZ) localizados em um elemento genético móvel denominado Tn1546 ou elemento VanA, freqüentemente inserido em plasmídeo conjugativo. Quatro linhagens de enterococos resistentes à vancomicina e sensíveis à teicoplanina que apresentaram genótipo vanA e fenótipo VanB foram estudadas com objetivo de se determinar qual o mecanismo responsável por esta incongruência. A identificação das espécies foi realizada por multiplex PCR, sendo três linhagens identificadas como Enterococcus faecalis e uma linhagem Enterococcus faecium. Todas confirmaram a presença do gene vanA por PCR e, no entanto, apresentaram sensibilidade à teicoplanina, determinada por Etest, condizente com o fenótipo VanB. Reações de Long-PCR e overlapping PCR foram realizadas para amplificação e caracterização do elemento VanA. O elemento VanA das linhagens de E. faecalis mostrou deleção da extremidade direita, correspondente à perda dos genes vanY e vanZ. Na linhagem de E. faecium foi detectada a inserção da ISEfa5 na região intergênica vanXY, como reportado em estudo prévio. A tipagem molecular das linhagens foi realizada pelo perfil de PFGE após macrorestrição do DNA com enzima SmaI e indicou que duas linhagens de E. faecalis pertenciam ao mesmo clone, enquanto a outra era geneticamente não relacionada. Estudos de hibridação com sonda para localização do gene vanA indicaram que este gene estava associado a um plasmídeo de 70Kb. Para verificar a presença de eventuais mutações no gene vanS, relatadas em alguns estudos como causa da perda da sensibilidade à teicoplanina, os elementos VanA das linhagens foram seqüenciados, contudo nenhuma mutação foi encontrada. Os experimentos de clonagem para analisar a possível presença de uma região promotora entre os genes vanY e vanZ indicaram a viii não existência de um promotor nesta região. A presença de elemento VanA com a mesma característica, sendo carreado por plasmídeos de mesmo tamanho em linhagens de E. faecalis com perfil de PFGE diferentes, sugere que este elemento foi transferido horizontalmente. O estudo molecular deste elemento de resistência gerou informações sobre a epidemiologia e eventos genéticos no elemento VanA que estão ocorrendo nas linhagens de VRE isoladas no Brasil. / Vancomycin-resistant enterococci (VRE) have emerged worldwide including in Brazil as important nosocomial pathogens. The most prevalent phenotypes described among glycopeptide resistant enterococci are VanA and VanB. VanA phenotype is characterized by induced high-level resistance both to vancomycin and teicoplanin, whereas VanB resistant strains show inducible resistance to vancomycin and retained susceptibility to teicoplanin. The vanA gene cluster (vanRSHAXYZ) is located in a mobile genetic element called Tn1546 or VanA element, which is often carried by conjugative plasmids. Four VRE showing VanB phenotype and vanA genotype isolated in a Brazilian hospital were investigated to better understand the molecular mechanisms underlying this incongruence. Multiplex PCR was performed for species identification. Three strains were identified as Enterococcus faecalis and the fourth as Enterococcus faecium. All VRE strains harboured gene vanA but showed VanB phenotype as determined by the Etest. Long PCR and PCR amplification of internal regions were employed for Tn1546 structural analysis. Three E. faecalis showed deletion of vanYZ genes corresponding to the inverted repeated right terminal of Tn1546 and E. faecium showed insertion of an IS element, ISEFa5, between vanX and vanY genes, as previously reported. These genetic rearrangements were associated to loss of resistance to teicoplanin. PFGE performed after SmaI digestion of DNA revealed that two E. faecalis were genetically related but the third one was unrelated. Plasmid analysis followed by Southern blotting and hybridization with vanA probe were performed for localization of VanA element. Results indicated that E. faecalis isolates showed the same structure of VanA element and plasmid profile with vanA located into plasmid. Thus, horizontal dissemination of this genetic element was suggested. VanA elements in all isolates were sequenced to detect point mutations in vanS, previously observed in VanB phenotype-vanA-genotype VRE isolates. However, no mutation was found. Assays to detect the presence of a promoter between vanX and vanY genes were negative for this region. Molecular characterization of these VRE furnished additional important information about VanA element epidemiological and evolutionary events in Brazilian isolates.
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Caracterização molecular de elementos VanA em enterococos com genótico e fenótipo discrepantes relativos à resistência aos glicopeptídeos / Molecular characterization of the VanA element in enterococci with incongruent genotype and phenotypes relative to glycopeptide resistance.Priscila Moraes Henrique 06 March 2007 (has links)
Enterococos resistentes aos glicopeptídeos representam, atualmente, importantes patógenos causadores de infecção nosocomial, sendo isolados em várias regiões do mundo, inclusive no Brasil. Dos fenótipos de resistência descritos até o momento, VanA e VanB são os mais encontrados. O fenótipo VanA é caracterizado por linhagens resistentes a altos níveis de vancomicina e teicoplanina, enquanto VanB é representado por linhagens com altos níveis de resistência à vancomicina, mas com sensibilidade à teicoplanina. O fenótipo VanA é codificado por um grupamento de genes (vanRSHAXYZ) localizados em um elemento genético móvel denominado Tn1546 ou elemento VanA, freqüentemente inserido em plasmídeo conjugativo. Quatro linhagens de enterococos resistentes à vancomicina e sensíveis à teicoplanina que apresentaram genótipo vanA e fenótipo VanB foram estudadas com objetivo de se determinar qual o mecanismo responsável por esta incongruência. A identificação das espécies foi realizada por multiplex PCR, sendo três linhagens identificadas como Enterococcus faecalis e uma linhagem Enterococcus faecium. Todas confirmaram a presença do gene vanA por PCR e, no entanto, apresentaram sensibilidade à teicoplanina, determinada por Etest, condizente com o fenótipo VanB. Reações de Long-PCR e overlapping PCR foram realizadas para amplificação e caracterização do elemento VanA. O elemento VanA das linhagens de E. faecalis mostrou deleção da extremidade direita, correspondente à perda dos genes vanY e vanZ. Na linhagem de E. faecium foi detectada a inserção da ISEfa5 na região intergênica vanXY, como reportado em estudo prévio. A tipagem molecular das linhagens foi realizada pelo perfil de PFGE após macrorestrição do DNA com enzima SmaI e indicou que duas linhagens de E. faecalis pertenciam ao mesmo clone, enquanto a outra era geneticamente não relacionada. Estudos de hibridação com sonda para localização do gene vanA indicaram que este gene estava associado a um plasmídeo de 70Kb. Para verificar a presença de eventuais mutações no gene vanS, relatadas em alguns estudos como causa da perda da sensibilidade à teicoplanina, os elementos VanA das linhagens foram seqüenciados, contudo nenhuma mutação foi encontrada. Os experimentos de clonagem para analisar a possível presença de uma região promotora entre os genes vanY e vanZ indicaram a viii não existência de um promotor nesta região. A presença de elemento VanA com a mesma característica, sendo carreado por plasmídeos de mesmo tamanho em linhagens de E. faecalis com perfil de PFGE diferentes, sugere que este elemento foi transferido horizontalmente. O estudo molecular deste elemento de resistência gerou informações sobre a epidemiologia e eventos genéticos no elemento VanA que estão ocorrendo nas linhagens de VRE isoladas no Brasil. / Vancomycin-resistant enterococci (VRE) have emerged worldwide including in Brazil as important nosocomial pathogens. The most prevalent phenotypes described among glycopeptide resistant enterococci are VanA and VanB. VanA phenotype is characterized by induced high-level resistance both to vancomycin and teicoplanin, whereas VanB resistant strains show inducible resistance to vancomycin and retained susceptibility to teicoplanin. The vanA gene cluster (vanRSHAXYZ) is located in a mobile genetic element called Tn1546 or VanA element, which is often carried by conjugative plasmids. Four VRE showing VanB phenotype and vanA genotype isolated in a Brazilian hospital were investigated to better understand the molecular mechanisms underlying this incongruence. Multiplex PCR was performed for species identification. Three strains were identified as Enterococcus faecalis and the fourth as Enterococcus faecium. All VRE strains harboured gene vanA but showed VanB phenotype as determined by the Etest. Long PCR and PCR amplification of internal regions were employed for Tn1546 structural analysis. Three E. faecalis showed deletion of vanYZ genes corresponding to the inverted repeated right terminal of Tn1546 and E. faecium showed insertion of an IS element, ISEFa5, between vanX and vanY genes, as previously reported. These genetic rearrangements were associated to loss of resistance to teicoplanin. PFGE performed after SmaI digestion of DNA revealed that two E. faecalis were genetically related but the third one was unrelated. Plasmid analysis followed by Southern blotting and hybridization with vanA probe were performed for localization of VanA element. Results indicated that E. faecalis isolates showed the same structure of VanA element and plasmid profile with vanA located into plasmid. Thus, horizontal dissemination of this genetic element was suggested. VanA elements in all isolates were sequenced to detect point mutations in vanS, previously observed in VanB phenotype-vanA-genotype VRE isolates. However, no mutation was found. Assays to detect the presence of a promoter between vanX and vanY genes were negative for this region. Molecular characterization of these VRE furnished additional important information about VanA element epidemiological and evolutionary events in Brazilian isolates.
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S.O.S : Smör ost och sill eller hjälpRais, Ing-Marie January 2014 (has links)
Essän består av berättelser och fakta som berör restaurangbranschens olika yrkeskategorier och deras arbete. Den beskriver yrkeskunnande, språket på restaurang samt värdet av manualer och riktlinjer. Språket som används på restaurang belyses även i en del av arbetet.
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Caracterização molecular de Enterococcus spp. resistentes à vancomicina em amostras clínicas, ambientes aquáticos e alimentos / Molecular characterization of vancomycin-resistant Enterococcus spp. in clinical samples, aquatic environments and foodsSacramento, Andrey Guimarães 11 September 2015 (has links)
Enterococos são ubíquos no ambiente e fazem parte da microbiota do trato gastrintestinal de humanos e animais. A importância dessas bactérias tem sido associada com infecções hospitalares e resistência a múltiplas drogas, principalmente à vancomicina. O objetivo do presente estudo foi realizar a caracterização molecular de cepas de Enterococcus spp. resistentes à vancomicina (VRE) isoladas a partir de amostras coletadas de pacientes hospitalizados, água superficial de rios urbanos e carne de frango comercializada no Brasil. A presença do gene vanA foi confirmada em 20 cepas multirresitentes isoladas durante 1997-2011. Dentre os isolados VRE, 12 cepas foram identificadas como E. faecium e oito como E. faecalis. Cepas de E. faecium isoladas de amostras clínicas e águas foram classificadas como clonalmente relacionadas pelo PFGE, com perfil virulência predominante (acm+, esp+). Adicionalmente, enquanto cepas de E. faecium isoladas dos rios pertenceram aos ST203, ST412 e ST478 (previamente caracterizados como endêmicos em hospitais brasileiros), novos STs foram identificados entre as cepas de E. faecalis (ST614, ST615 e ST616) e E. faecium (ST953 e ST954) isoladas de alimentos. Sequências completas do transposon Tn1546 das cepas clínicas VREfm 320/07 (ST478) e ambiental VREfm 11 (ST412) mostraram Tn1546-like element de ~12800 pb, com um ponto de mutação no gene vanA na posição 7.698 (substituição do nucleotídeo T pelo C) e uma no gene vanX na posição 8.234 (G pelo T). Além disso, uma deleção na extremidade esquerda do Tn1546, e as sequências IS1251 e IS1216E na região intergênica vanHS e vanYX, respectivamente, também foram detectados. A este respeito, a IS1216E na região intergênica vanXY constitui um conjunto de genes previamente relatado em cepas clínicas de VREfm no Brasil, denotando uma característica regional. IS1216E tem sido associada com os genes tcrB e aadE que conferem resistência ao cobre e aminoglicosídeos, em E. faecium e Streptococcus agalactiae, respectivamente. Portanto, essa IS pode contribuir para a rápida aquisição de resistência antimicrobiana entre as espécies de cocos Gram-positivos clinicamente importantes. Os tipos de Tn1546 indistiguíveis que foram identificados no atual estudo isolados de humano e ambientes aquáticos sugerem uma comum partilha de um pool de genes de resistência à vancomicina. / Enterococci are ubiquitous in the environment and in the intestinal tract of humans and animals. The importance of these bacteria has been associated with nosocomial infection and multiple resistance to antimicrobial agents, mainly vancomycin. The aim of the present study was to perform molecular characterization of vancomycin-resistant Enterococcus spp. strains (VRE) isolated from hospitalized patients, surface water of urban rivers and retail chicken meat in Brazil. The presence of the vanA gene was confirmed in 20 multidrug-resistant strains isolated in 1997-2011. Among these VRE isolates, (n = 12) were identified as E. faecium and (n = 8) as E. faecalis. E. faecium strains isolated from water and clinical samples were classified as clonally related by PFGE, the predominant virulence profile being (acm+, esp+). Additionally, while E. faecium strains isolated from rivers belonging to ST203, ST412 and ST478 (previously characterized as endemic in Brazilian hospitals), new STs were identified among strains of E. faecalis (ST614, ST615 and ST616) and E. faecium (ST953 and ST954) isolated from food. Complete sequences of transposon Tn1546 from VREfm clinical strain 320/07 (ST478) and environmental strain VREfm 11 (ST412) showed a Tn1546-like element of ~12800 bp, with T7698C vanA and G8234T vanX mutations. Moreover, deletion of the Tn1546 left extremity, and the IS1251 and IS1216E sequence inside the vanHS and vanYX intergenic region, respectively, were also detected. In this regard, the IS1216E sequence inside the vanXY intergenic region constitutes a gene array previously reported for Brazilian VREfm clinical strains alone, denoting a regional characteristic. IS1216E has been associated with tcrB and aadE genes, which confer resistance to copper and aminoglycosides, in E. faecium and Streptococcus agalactiae, respectively. Therefore, IS1216E should contribute to rapid acquisition of antimicrobial resistance among species of the clinically important Gram-positive cocci. On the other hand, Tn1546-like elements were identical among clinical and environmental VREfm isolates, suggesting sharing of a common vancomycin resistance gene pool.
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Caracterização molecular de Enterococcus spp. resistentes à vancomicina em amostras clínicas, ambientes aquáticos e alimentos / Molecular characterization of vancomycin-resistant Enterococcus spp. in clinical samples, aquatic environments and foodsAndrey Guimarães Sacramento 11 September 2015 (has links)
Enterococos são ubíquos no ambiente e fazem parte da microbiota do trato gastrintestinal de humanos e animais. A importância dessas bactérias tem sido associada com infecções hospitalares e resistência a múltiplas drogas, principalmente à vancomicina. O objetivo do presente estudo foi realizar a caracterização molecular de cepas de Enterococcus spp. resistentes à vancomicina (VRE) isoladas a partir de amostras coletadas de pacientes hospitalizados, água superficial de rios urbanos e carne de frango comercializada no Brasil. A presença do gene vanA foi confirmada em 20 cepas multirresitentes isoladas durante 1997-2011. Dentre os isolados VRE, 12 cepas foram identificadas como E. faecium e oito como E. faecalis. Cepas de E. faecium isoladas de amostras clínicas e águas foram classificadas como clonalmente relacionadas pelo PFGE, com perfil virulência predominante (acm+, esp+). Adicionalmente, enquanto cepas de E. faecium isoladas dos rios pertenceram aos ST203, ST412 e ST478 (previamente caracterizados como endêmicos em hospitais brasileiros), novos STs foram identificados entre as cepas de E. faecalis (ST614, ST615 e ST616) e E. faecium (ST953 e ST954) isoladas de alimentos. Sequências completas do transposon Tn1546 das cepas clínicas VREfm 320/07 (ST478) e ambiental VREfm 11 (ST412) mostraram Tn1546-like element de ~12800 pb, com um ponto de mutação no gene vanA na posição 7.698 (substituição do nucleotídeo T pelo C) e uma no gene vanX na posição 8.234 (G pelo T). Além disso, uma deleção na extremidade esquerda do Tn1546, e as sequências IS1251 e IS1216E na região intergênica vanHS e vanYX, respectivamente, também foram detectados. A este respeito, a IS1216E na região intergênica vanXY constitui um conjunto de genes previamente relatado em cepas clínicas de VREfm no Brasil, denotando uma característica regional. IS1216E tem sido associada com os genes tcrB e aadE que conferem resistência ao cobre e aminoglicosídeos, em E. faecium e Streptococcus agalactiae, respectivamente. Portanto, essa IS pode contribuir para a rápida aquisição de resistência antimicrobiana entre as espécies de cocos Gram-positivos clinicamente importantes. Os tipos de Tn1546 indistiguíveis que foram identificados no atual estudo isolados de humano e ambientes aquáticos sugerem uma comum partilha de um pool de genes de resistência à vancomicina. / Enterococci are ubiquitous in the environment and in the intestinal tract of humans and animals. The importance of these bacteria has been associated with nosocomial infection and multiple resistance to antimicrobial agents, mainly vancomycin. The aim of the present study was to perform molecular characterization of vancomycin-resistant Enterococcus spp. strains (VRE) isolated from hospitalized patients, surface water of urban rivers and retail chicken meat in Brazil. The presence of the vanA gene was confirmed in 20 multidrug-resistant strains isolated in 1997-2011. Among these VRE isolates, (n = 12) were identified as E. faecium and (n = 8) as E. faecalis. E. faecium strains isolated from water and clinical samples were classified as clonally related by PFGE, the predominant virulence profile being (acm+, esp+). Additionally, while E. faecium strains isolated from rivers belonging to ST203, ST412 and ST478 (previously characterized as endemic in Brazilian hospitals), new STs were identified among strains of E. faecalis (ST614, ST615 and ST616) and E. faecium (ST953 and ST954) isolated from food. Complete sequences of transposon Tn1546 from VREfm clinical strain 320/07 (ST478) and environmental strain VREfm 11 (ST412) showed a Tn1546-like element of ~12800 bp, with T7698C vanA and G8234T vanX mutations. Moreover, deletion of the Tn1546 left extremity, and the IS1251 and IS1216E sequence inside the vanHS and vanYX intergenic region, respectively, were also detected. In this regard, the IS1216E sequence inside the vanXY intergenic region constitutes a gene array previously reported for Brazilian VREfm clinical strains alone, denoting a regional characteristic. IS1216E has been associated with tcrB and aadE genes, which confer resistance to copper and aminoglycosides, in E. faecium and Streptococcus agalactiae, respectively. Therefore, IS1216E should contribute to rapid acquisition of antimicrobial resistance among species of the clinically important Gram-positive cocci. On the other hand, Tn1546-like elements were identical among clinical and environmental VREfm isolates, suggesting sharing of a common vancomycin resistance gene pool.
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Design vany pro porod do vody / Design of Waterbirth VesselNavrátilová, Sára January 2019 (has links)
The topic of this diploma thesis is a design of bathtub for delivery to water. The goal is to improve shape, ergonomic and safety parameters compared to current representatives. The resulting design is a new product that is suitable for the professional medical environment while reflecting the psychological aspects of childbirth.
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Design vany se sprchou pro tělesně postižené / Design of bathtube with shower for people with disabilitiesRajchl, David January 2011 (has links)
The subject of graduation thesis is design of bathtube for people with disabilities. The machine belongs to the sanitary equipment. The main purpose is the user´s hygiene, in the specific case with an operator assistance. This machine can be used in retirement homes, hospices, nursing homes and hospitals. The thesis is focused on design and ergonomic solution. Solution of construction is more conceptual. Graphic design and brand placement is the part of the solution.
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Role prezidenta v zahraniční politice Brazílie (srovnání Luize Inacia Luly da Silvy a Dilmy Roussefové) / The President´s role in the Foreign Policy of BrazilMelounová, Irena January 2011 (has links)
In recent years, the perception of Brazil in the international arena has changed significantly and the country attracts more and more attention. The key role of the head of state in a presidential political system is reflected in all government agendas, including the foreign policy. Since the 1990s, the Presidents have started to participate more actively in foreign policy decision process, which had been traditionally dominated by the Ministry of Foreign Affairs. The aim of this thesis is to analyze the examples of Lula da Silva and Dilma Rousseff and qualify the role of contemporary Brazilian President in foreign policy, and to benefit from the favourable situation when, for the first time in the history of Brazil, the elected candidate was nominated by his predecessor. Therefore it is possible to abstract in the study period (October 2002 to December 2012) from three levels of foreign policy analysis that are considered constant, and so the only factor influencing foreign policy would be a change in the level of the individual. The core is to compare the personalities of presidents and their foreign policy activities which are studied in three dimensions: foreign travel and foreign visits to the country, way of intervening in resolving the crisis and its own foreign policy initiatives in newly highlighted regions and themes.
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Design hydromasážní vany pro horní končetiny / Design of Hydromassage Bathtub for Upper LimbsVávra, Marek January 2019 (has links)
The topic of this thesis is design of hydrotherapy bathtub for upper limbs that reacts mainly to ergonomic weaknesses of current solutions. Created design concept is mainly focused on users comfort. Its appearance reflects the environment of medical and rehabilitation facilities.
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Caracterização e diversidade molecular do transposon Tn1546, carreador do gene vanA, responsável pela expressão de resistência à vancomicina, em amostras clínicas de diferentes espécies de Enterococcus / Characterization and molecular diversity of transposon Tn1546, carrier of the vanA gene responsible for the expression of vancomycin resistance in clinical isolates of different Enterococcus speciesSabrina Ferreira Santos 06 May 2014 (has links)
Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Enterococcus resistentes à vancomicina (VRE) são reconhecidos como importantes patógenos causadores de infecções nosocomiais, configurando um grave problema de saúde pública, principalmente pela escassez de opção terapêutica eficaz. O fenótipo de resistência VanA é o mais frequente, sendo definido pela resistência a altos níveis de vancomicina e teicoplanina. VanA é caracterizado por um conjunto gênico (vanRSHAXYZ) localizado no elemento genético móvel denominado transposon Tn1546. A diversidade de Tn1546 resulta de alterações estruturais promovidas por deleções ou integração de sequências de inserção (IS) que, exercem papel chave na evolução do elemento VanA, modificando os aspectos relacionados à sua transferência e expressão do fenótipo. O objetivo deste estudo foi caracterizar e avaliar o polimorfismo de elementos Tn1546 presentes em amostras de diferentes espécies de Enterococcus isoladas em instituições hospitalares do Estado do Rio de Janeiro no período de 2000 a 2012. Foram incluídas neste estudo 70 amostras VRE que foram caracterizadas quanto ao gênero, espécies e genótipo de resistência aos glicopeptídeos por métodos convencionais e PCR multiplex. A susceptibilidade a 17 antimicrobianos foi avaliada pelo método de difusão em ágar, e concentração inibitória mínima (CIM) para vancomicina e teicoplanina foi determinada por microdiluição em caldo. O tranposon foi obtido após lise das células bacterianas e amplificação por PCR longo, utilizando-se oligonucleotídeos específicos para a região repetida e invertida que flanqueia este elemento genético. A diversidade dos elementos Tn1546 foi avaliada por um conjunto de métodos moleculares que incluiu a análise do polimorfismo do tamanho de fragmentos de restrição (restriction fragment lenght polymorphism, RFLP), utilizando-se a endonuclease ClaI, amplificação de segmentos internos por PCR de sobreposição de oligonucleotídeos (overlapping PCR) e detecção de sequências de inserção (ISs). A caracterização em espécies considerada para as demais análises foi obtida pela metodologia de PCR de acordo com a seguinte distribuição: E. avium (N=6), E. faecalis (N=12), E. faecium (N=46), E. gallinarum (N=4) e E. raffinosus (N=2). Todas as amostras apresentaram o genótipo vanA. Nos testes de susceptibilidade aos antimicrobianos foi observado que todas as amostras foram multirresistentes, sendo resistente de 6 a 13 dentre os 17 antimicrobianos testados. A presença de elementos semelhantes ao arquétipo de Tn1546 foi observada em 61,5% das amostras; entretanto, 27 amostras apresentaram perfis variantes de Tn1546. Foram identificados nove perfis de RFLP, dentre 66 avaliadas, sendo o perfil I, prevalente e semelhante ao arquétipo de Tn1546. Não foi possível analisar quatro amostras por RFLP. Os produtos de amplificação de Tn1546 alterados, obtidos pela overlapping PCR e pelo rastreamento de IS, levaram à classificação de 15 tipos polimórficos, nomeados de A a O. A maioria dos Tn1546 polimórficos teve suas regiões de ORF1 e/ou ORF2 deletadas; e IS1542 juntamente com IS1216V foram as inserções mais frequentes, que em muitas situações compartilhavam a mesma região de inserção. IS19 foi detectada apenas na região vanS-vanH. Os dados apresentados neste estudo indicam que o polimorfismo de Tn1546 pode ser explorado no rastreamento de rotas de transmissão, acompanhamento da dispersão de elementos VanA e investigação da evolução de amostras VRE. / Vancomycin-resistant Enterococcus (VRE) is a leading cause of nosocomial infections, remaining as a public health concern in the last two decades. VanA phenotype is the most frequently encountered and it is responsible for high-level vancomycin and teicoplanin resistance. VanA is characterized by a gene cluster (vanRSHAXYZ) located on the mobile genetic element called Tn1546. The diversity of Tn1546 results from structural changes promoted by deletions or additions of insertion sequences (IS) that play a key role in the evolution of VanA element, changing its transferability and expression of phenotype. The aim of this study was to characterize and evaluate the polymorphism of Tn1546 genetic elements belong to VRE isolates obtained from patients attending in hospitals located in the Rio de Janeiro state, during the period from 2000 to 2012. Seventy VRE strains were included in this study. The strains were identified by conventional physiological testes and multiplex PCR, including the vancomycin resistance phenotype and genotype. Antimicrobial susceptibilities testing were carried out by disk diffusion method for 17 antimicrobials; and the minimal inhibitory concentrations (MIC) values to vancomycin and teicoplanin were evaluated by microdilution technique. Tn1546 were amplified by long-PCR using primers to inverted-repeat sequences flanking the transposon. Tn1546 diversity was evaluated by a set of molecular methods including restriction fragment length polymorphism (RFLP), using the endonuclease ClaI, overlapping PCR and detection of insertion sequence elements (IS). Among the 70 strains, 6 E. avium, 12 E. faecalis, 46 E. faecium, 4 E. gallinarum, and 2 E. raffinosus were characterized by multiplex PCR, as well as the vanA glycopeptide resistance determinant. All the strains were multirresistant, being resistant from 6-13 among the 17 antimicrobials tested. The presence of similar elements to the archetype of Tn1546 was observed in 61.5% of samples; however, 27 samples had variant profiles of Tn1546. Nine RFLP profiles were identified among 66 strains, and the profile I was the most frequent and showed to be similar to the archetype of Tn1546. It was not possible to analyze four strains by RFLP. The amplification products of Tn1546, obtained by overlapping PCR, and screening the IS elements led to the characterization of 15 different types, named A through O. Most Tn1546 had its polymorphisms based on deletion of the ORF1 and / or ORF2 regions; and IS1542 as the most frequent insertion element, which in many cases shared the same region of insertion with IS1216V. IS19 was detected only in vanS-vanH region. The data presented in this study indicate that the polymorphism of Tn1546 can be exploited in tracking transmission routes, monitoring the dispersion of VanA elements and investigation of the evolution of VRE strains.
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