Thèse numérisée par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal.

No / Background: Previous studies have shown extensive vascularisation surrounding subcutaneously implanted fibres when the duration of the US National Cancer Institute (NCI) hollow fibre assay was prolonged. Materials and Methods: The feasibility of adapting the NCI assay for evaluating agents targeting the tumour vasculature was investigated in vitro and in vivo. Finally, in the optimised assay, changes in neovasculature formation around the fibres following treatment with the anti-vascular agent paclitaxel were quantified by immunohistochemistry. Results: Correlations between cell number seeded, time in culture and vascular endothelial growth factor (VEGF) secretion were seen. In vivo studies showed that transplanting single rather than 3 fibres at a site reduced inflammation, reducing the length of the fibre transplanted, as did without any significant loss in cell growth over 21 days. A statistically significant reduction in neovascularisation surrounding the fibres was seen accompanying paclitaxel treatment. Conclusion: Modifications made here to the NCI hollow fibre assay demonstrate its potential for analysing anti-tumour vasculature agents.

Mémoire numérisé par la Direction des bibliothèques de l'Université de Montréal. / L'utilisation d'oligodésoxyribonucléotides antisens est un outil puissant pour réguler 1'expression génique et le développement de nouvelles structures représente un domaine en pleine effervescence en chimie médicinale. En effet, nous cherchons à développer des molécules dont l'affinité de liaison pour l'ARNm serait plus élevée, tout en possédant la capacité d'activer la RNase H, l'enzyme qui reconnaît le complexe ADN / ARNm et qui dégrade l'ARNm. Il a déjà été démontré qu'une inversion de configuration en position C2' du ribose de l'ADN (ANA), combinée à la substitution du groupement 2'OH par un atome fluor (2'F-ANA) augmente l'affinité de liaison de l'oligonucléotide à l'ARNm. Lors de notre étude, nous avons évalué l'activité antisens d'oligonucléotides phosphorothioates chimériques composés de 2'-désoxy-2'-fluoro-P-D-arabinose et de 2'-désoxyribose (chimère S-2'F-ANA / ADN) comportant un sucre en confonnation L à leur extrémité 3'. Nous avons déterminé la capacité de ces molécules à inhiber 1'expression et la phosphorylation de Flk-1, un récepteur du VEGF ainsi que les effets médiés par le VEGF, soit la prolifération, la migration et la synthèse du «platelet-activating factor» (PAF) au niveau des cellules endothéliales (CE). Le traitement de CE d'aorte bovine avec les chimères S-2'F-ANA / ADN a pennis de réduire l'expression protéique ainsi que la phosphorylation de Flk-1 plus efficacement qu'un traitement avec les antisens d'ADN phosphorothioates (S-DNA) utilisés comme témoins positifs. Par contre, ces deux classes d'antisens ont inhibé les effets biologiques du VEGF de la même manière. Cette étude démontre aussi la capacité des antisens chimériques à activer la RNase H et leur meilleure affinité de liaison envers l'ARN comparativement aux antisens S-DNA.

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L’angiogenèse est la formation de nouveaux vaisseaux sanguins à partir d’un réseau vasculaire existant. C’est un phénomène essentiel pour des processus physiologiques et pathologiques. L’activation des cellules endothéliales est contrôlée par plusieurs facteurs de croissance. Le VEGF et son récepteur le VEGFR-2 ont été prouvés comme étant spécifiques et critiques pour la formation des vaisseaux sanguins alors que Tie2, le récepteur auquel se lie l’Ang-1, est requis aussi bien dans le développement vasculaire que dans l’angiogenèse tumorale. Il est connu que l’activation de Tie2 est nécessaire à la stabilisation finale de la vascularisation en inhibant la perméabilité vasculaire induite par le VEGFR-2. Nous avons premièrement découvert que le facteur de croissance pro-angiogénique, l’Ang-1 contrecarre les effets de perméabilité cellulaire induits par le VEGF en inhibant la production de NO dans les cellules endothéliales. Cet effet inhibiteur de Tie2 intervient directement au niveau de l’activité de l’enzyme eNOS. Suite à l’activation de Tie2 par l’Ang-1, eNOS devient fortement phosphorylé sur la Thr497 après la phosphorylation et l’activation de la PKCζ. Nos résultats suggèrent que l’inhibition, par Tie2, de la perméabilité vasculaire durant l’angiogenèse serait due, en partie, à l’inhibition de la production de NO. Deuxièmement nous avons pu distinguer entre deux modes de migration cellulaire endothéliale induits par l’Ang-1 et le VEGF. À l’opposé du VEGF qui promeut une migration individuelle aléatoire, l’Ang-1 induit une migration collective directionnelle. Dans cette étude, nous avons identifié la β-caténine comme un nouveau partenaire moléculaire de la PKCζ. Cette association de la PKCζ à la β-caténine amène le complexe de polarité Par6-aPKC et le complexe des jonctions d’adhérences cellulaires à interagir ensemble à deux localisations différentes au niveau de la cellule endothéliale. Au niveau des contacts intercellulaires, le complexe PKCζ/β-caténine maintien la cohésion et l’adhésion cellulaire nécessaire pour le processus migratoire collectif. Ce complexe se retrouve aussi au niveau du front migratoire des cellules endothéliales afin d’assurer la directionalité et la persistance de la migration endothéliale en réponse à l’Ang-1. D’une manière intéressante, lors de l’inhibition de la PKCζ ou de la β-caténine on assiste à un changement du mode de migration en réponse à l’Ang-1 qui passe d’une migration directionnelle collective à une migration individuelle aléatoire. Ce dernier mode de migration est similaire à celui observé chez des cellules endothéliales exposées au VEGF. Ces résultats ont été corroborés in vivo par une polarité et une adhésion défectueuses au cours de la vasculogenèse chez le poisson zèbre déficient en PKCζ. En résumé, Ang-1/Tie2 module la signalisation et les réponses biologiques endothéliales déclenchées par le VEGF/VEGFR-2. L’identification des mécanismes moléculaires en aval de ces deux récepteurs, Tie2 et VEGFR-2, et la compréhension des différentes voies de signalisation activées par ces complexes moléculaires nous permettra de mettre la lumière sur des nouvelles cibles thérapeutiques pour le traitement des maladies angiogéniques. / Angiogenesis is the formation of new blood vessels from a pre-existing vascular network. It is an essential mechanism for many physiological and pathological conditions. Also, the general mechanism in both conditions remains the same. VEGF and its receptor VEGFR-2 have been proven to be specific and critical for blood vessel formation. The Angiopoietin-1 receptor, Tie2, is required for vascular development as well as in tumor angiogenesis. It is known that the activation of Tie2 is required for vascular stabilization by inhibiting vascular permeability induced by VEGFR-2. First, we found that the pro-angiogenic growth factor, Ang-1 counteracts the effects of VEGF-induced permeability by inhibiting NO production by endothelial cells. This inhibitory effect of Tie2 acts directly on eNOS activity. Following activation of Tie2 by Ang-1, eNOS becomes highly phosphorylated on the inhibitory site, the Thr497, following PKCζ phosphorylation and activation. Our results suggest that the inhibition by Tie2 of vascular permeability during angiogenesis is due, in part, to the inhibition of NO production. In our second study we distinguished between two types of endothelial cell migration induced by Ang-1 and VEGF. At the opposite of Ang-1 that induced collective and directional cell migration, VEGF promoted individual and random cell motility. We identified β-catenin as a new molecular partner of PKCζ. This association of PKCζ with β-catenin brings the Par6-aPKC polarity complex and the adherens junctions complex to interact with each other at two different locations in endothelial cells. PKCζ/β-catenin complex is located specifically at cell-cell contacts to maintain cohesion and cell adhesion necessary for the collective migration process. This complex was located also at the leading edge of endothelial cells during migration to ensure the directionality and the persistence of migration in response to Ang-1. In addition, inhibition of PKCζ or β-catenin switched the migration mode, in response to Ang-1, from directional and collective to a more random and individual cell migration which resembles the type of migration of endothelial cells exposed to VEGF. These results were confirmed in vivo by aberrant cell polarity and cell adhesion defects of tip cell during vascular sprouting of intersegmental vessels in PKCζ deficient zebrafish embryos. In summary, Ang-1/Tie2 modulates endothelial cell signaling and biological responses induced by VEGF/VEGFR-2. The identification of molecular mechanisms involved in the action of these two receptors, VEGFR-2 and Tie2, and the understanding of the different signaling pathways activated by these molecular complexes will allow us to identify new therapeutic targets for the treatment of angiogenic diseases treatment.

Les jonctions adhérentes (JA) sont nécessaires à l’élaboration d’une barrière vasculaire sélective dans laquelle la VE-cadhérine joue un rôle crucial. En effet, la VE-cadhérine est une molécule d’adhérence entrant dans la constitution des JA et présente spécifiquement au sein de l’endothélium. Lorsque la VE-cadhérine est exprimée à la surface des cellules endothéliales, l’intégrité de la barrière est préservée. En revanche, des modifications de la VE-cadhérine, comme par exemple sa phosphorylation, provoquent son internalisation, la dissociation des complexes adhésifs ou la désorganisation générale des jonctions endothéliales, défavorisant ainsi la sélectivité de la barrière. De manière générale, une perméabilité vasculaire élevée peut être observée au cours de l’activation de l’endothélium, telle que l’angiogenèse ou la réponse inflammatoire, en conditions physiologiques comme pathologiques. Par exemple, la phosphorylation de la VE-cadhérine provoquée par le facteur VEGF (vascular growth endothelial facteur) entraîne l’augmentation de la perméabilité vasculaire. En outre, une molécule pro-inflammatoire telle que l’interleukine-8 (IL-8) peut également provoquer la phosphorylation de la VE-cadhérine, aboutissant ainsi à l’augmentation de la perméabilité vasculaire. Tandis que les voies de signalisation régissant les effets pro-angiogéniques ou pro-inflammatoires du VEGF et de l’IL-8, respectivement, sont bien caractérisées, les mécanismes moléculaires sous-tendant spécifiquement l’augmentation de perméabilité endothéliale sont moins bien connus. Au cours de mon doctorat, je me suis donc attachée à examiner les interactions moléculaires entre la VE-cadhérine phosphorylée et la molécule d’échafaudage β-arrestine1, dans les cellules endothéliales humaines exposées au VEGF. J’ai également exploré la distribution de la VE-cadhérine dans les cellules endothéliales cérébrales dans un contexte tumoral, récapitulé par le sécrétome de cellules gliomateuses (GB). Mon travail a permis d’identifier la partie C-terminale (C-tail) de la β-arrestine1 qui comporte 43 acides aminés, comme une région interagissant directement avec la VE-cadhérine lorsqu’elle est phosphorylée sur le résidu S665. Cette liaison pourrait conduire alors à l’internalisation de la VE-cadhérine, lors de la stimulation par le VEGF. En outre, nous avons démontré le rôle inattendu du domaine C-tail de la β-arrestine1 dans la régulation négative de l’activité du promoteur de la VE-cadhérine. Ceci se traduit par une réduction des niveaux d’expression de la VE-cadhérine, contribuant ainsi à l’affaiblissement de la barrière endothéliale en réponse au VEGF. En outre, nous avons voulu évaluer l’effet des différents facteurs secrétés par le GB sur la perméabilité vasculaire. L’étude du sécrétome du GB a révélé une production abondante et majoritaire d’IL-8, qui provoque l’internalisation de la VE-cadhérine et la désorganisation des jonctions endothéliales. En plus de son action sur la perméabilité, l’IL-8 favorise la tubulogenèse des cellules endothéliales cérébrales. En conclusion, nous avons mis en évidence un rôle nouveau de la β-arrestine1 dans la régulation de la VE-cadhérine dans les cellules endothéliales humaines. Nous avons également démontré que la sécrétion d’IL-8 par le GB entraîne le remodelage des jonctions de la VE-cadhérine et conduit à une perte de la fonction de barrière des cellules endothéliales cérébrales. L’ensemble de nos résultats a donc permis d’améliorer nos connaissances des mécanismes moléculaires modulant la perméabilité endothéliale. / VE-cadherin is a major adhesion molecule composing endothelial adherens junctions (AJ), which ensure selectivity of the endothelial barrier. Stabilization of the VE-cadherin complex at the surface of endothelial cells plays a pivotal role in the maintenance of vascular homeostasis. Conversely, the disorganization or internalisation of VE-cadherin is a frequent consequence of VE-cadherin modifications (e.g phosphorylation), which promotes in turn vascular permeability. In general, vascular leakage can be observed in both physiological and pathological conditions. Indeed, VE-cadherin phosphorylation caused by pro-angiogenic and pro-permeability factors, among which vascular endothelial growth factor (VEGF) is the prototype, occurs during physiological angiogenesis, as well as tumour-associated angiogenesis. Besides, pro-inflammatory molecules, such as interleukin-8 (IL-8) can also participate in the phosphorylation of VE-cadherin and thereby promote vascular permeability. To best characterise VE-cadherin-mediated increase in vascular permeability under physiological VEGF challenge, we notably investigated the molecular interactions between serine (S665) phosphorylated VE-cadherin and the scaffolding molecule β-arrestin. We also studied the distribution of VE-cadherin in brain endothelial cells under pathological conditions, as provided by the secretome of glioblastoma (GB) brain tumour cells. My work allows the identification of a 43 amino-acid sequence within the C-terminus tail of β-arrestin1 (C-tail) that can directly bind to (S665) phosphorylated VE-cadherin and further triggers its internalisation upon VEGF stimulation. Moreover, we demonstrated the unexpected role of β-arrestin1 C-tail in the down-regulation of the VE-cadherin promoter activity, which results in reduction of VE-cadherin RNA and protein levels, thus contributing to the endothelial barrier properties. Furthermore, in order to evaluate the effects of tumour-secreted factors on the hyper-permeability associated with the tumour microenvironment, we explored the composition and function of the GB secretome on brain endothelial cells. We found that abundant secretion of IL-8 by GB cells causes VE-cadherin-mediated endothelial junction disorganization. Moreover, IL-8 promotes both brain endothelial cell permeability and tubulogenesis. In conclusion, we established a new role for β-arrestin1 in the control of VE-cadherin-based junctions in human endothelial cells. Likewise, we demonstrated that tumour cell-released IL-8 chemokine provokes VE-cadherin-dependent junction remodelling and thereby increases the permeability of human brain endothelial cells. Our results reinforce the central role of VE-cadherin in the modulation of the vascular barrier function in physiological and pathological conditions.

A laserterapia tem sido muito utilizada como tratamento alternativo em pacientes com dores crônicas relacionadas às disfunções temporomandibulares. Isso se deve aos efeitos: analgésico, antiinflamatório, miorrelaxante, de redução da fadiga durante as contrações tetânicas, aumento da força de mordida e diminuição da dor orofacial. Embora sejam observados resultados clínicos, ainda não é bem compreendido o seu efeito em nível celular. Assim, este estudo tem como objetivo analisar os efeitos das diferentes densidades (doses) de irradiação do laser de baixa intensidade (LLLI), em nível celular, sobre o músculo masseter de ratos Wistar. Os animais foram alocados aleatoriamente em 6 grupos (n=10), receberam 10 irradiações do laser (GaAlAs,780nm, 5mW e spot 0,04cm²) sobre o músculo masseter esquerdo variando a densidade de energia (I. 0; II. 0,5; III. 1,0; IV. 2,5; V. 5,0 e VI. 20 J/cm²). Após as 10 irradiações os músculos masseteres foram obtidos dos animais sob anestesia para análises: 1. Histoenzimológicas para atividade da nicotinamida adenina dinucleotídeo diaforase(NADH), succinato desidrogenase (SDH) e adenosina trifosfatase (ATPase), 2. Microscopia de luz (HE), 3. Microscopia eletrônica de transmissão e 4. Imunohistoquímica para fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF) e o receptor 2 para VEGF (VEGFR-2). A atividade do NADH nos grupos IV, V e VI (30±1,26; 33,47±2,15; 31,67±1,77 - fibras intermediárias) apresentou um aumento significativo (p>0,05) no metabolismo oxidativo em relação aos demais grupos. Na atividade do SDH, o aumento foi discreto, com aumento significativo (p>0,05), apenas no grupo V (32,2±1,61 fibras intermediárias), com o padrão de aumento metabólico muito parecido nas reações de NADH e SDH. A atividade da ATPase não revelou diferenças entre os grupos tanto em meio ácido como no alcalino. A microscopia de luz revelou fibras musculares arredondadas e núcleos periféricos achatados, os quais tornaram mais arredondados com as densidades maiores de energia. Ultraestruturalmente as irradiações com as maiores densidades de energia revelaram mitocôndrias de tamanhos e formas variadas e cisternas do retículo sarcoplasmático dilatadas entre as miofibrilas. As análises qualitativas mostraram um padrão de aumento a expressão do VEGF e VEGFR-2 proporcionais à densidade de energia do laser usada. Conclui-se que o laser com densidades maiores foi capaz de aumentar o metabolismo oxidativo, sem alterar a capacidade contrátil, aumentar o volume do núcleo, modificar a ultraestrutura das fibras musculares e as expressões do VEGF e VEGFR-2. / The laser therapy has been widely used as an alternative treatment in patients with chronic pain related to temporomandibular disorders. This is due to the effects: analgesic, anti inflammatory, muscle relaxant, reducing fatigue during tetanic contractions, increased bite strength and decrease in orofacial pain. Although clinical results are observed, is not well understood its effect on the cellular level. This study aims to analyze the effects of different densities (doses) irradiation of low level laser therapy (LLLI) on cellular level, on the masseter muscle of rats. The animals were randomly assigned to 6 groups (n=10), received 10 laser irradiation (GaAlAs, 780nm, 5mW spot and 0.04 cm²) on the left masseter muscle by varying the energy density (I. 0; II. 0.5; III. 1.0; IV. 2.5; V. 5.0 and VI. 20 J/cm²). After 10 irradiations the masseter muscles were obtained from animals under anesthesia for analysis: 1. Histoenzimologic for nicotinamide adenine dinucleotide (NADH), succinate dehydrogenase (SDH) and adenosine triphosphatase (ATPase), 2. Light microscopy (HE), 3. Transmission electron microscopy and 4. Immunohistochemistry for vascular endothelial growth factor (VEGF) and receptor 2 for VEGF (VEGFR-2). The activity of NADH in groups IV, V and VI (30±1,26; 33,47±2,15; 31,67±1,77 - intermediate fiber) increased significantly (p> 0.05) in oxidative metabolism in relation to other groups. The activity of SDH showed a slight increase, only the group V (32,2±1,61 intermediate fiber) increased significantly (p> 0.05), but the pattern of metabolic increase was very similar in both reactions. The ATPase activity showed no differences between groups nor in acid or alkaline. The qualitative analysis showed a pattern of increased expression of VEGF and VEGFR-2 directly proportional to the energy density of laser. Light microscopy showed rounded muscle fibers and peripheral flattened nuclei, which become more rounded with the highest energy densities. Ultrastructurally the irradiation with higher energy densities showed mitochondria of different sizes and shapes and dilated cisterns of sarcoplasmic reticulum between the myofibrils. It is concluded that higher densities of laser was able to increase the oxidative metabolism without altering the contractile capacity, increasing nuclei volume, modify ultrastructure of muscle fibers and the expressions of VEGF and VEGFR-2.

Made available in DSpace on 2016-01-26T12:51:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 marinagobbemoschetta_dissert.pdf: 2656918 bytes, checksum: d63acce15a1feb7170b4c9270fd920d9 (MD5) Previous issue date: 2013-09-16 / Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de São Paulo / Introduction: Mammary tumors are the most common type of tumor in dogs, with approximately half of these tumors are malignant. Hypoxia, characterized by oxygen levels below normal, is a known adverse factor to cancer treatment. The transcription factor HIF-1&#945; is the central regulator of pathophysiological response of mammalian cells to low oxygen levels, able to activate transcription of the vascular endothelial growth factor (VEGF), which in turn promotes angiogenesis through its ability to stimulate growth, migration and invasion of endothelial cells, contributing to tumor growth. Objectives: To evaluate the serum concentration and the gene expression of VEGF and HIF-1&#945; linking them with clinicopathological parameters and survival of dogs with mammary tumors in order to infer the possible prognostic value of these factors. Material and Methods: We collected tumor fragments of 30 bitches with mammary tumors to verify protein expression of VEGF and HIF-1&#945; by immunohistochemistry and gene expression by RT-PCR. To determine the serum concentration of VEGF and HIF-1&#945; by ELISA (Enzyme-linked immunosorbent), serum was collected from 50 bitches control (healthy) and 30 bitches with mammary neoplasia (study group). The results were statistically related to clinicopathological features. Results: The comparison between immunohistochemical staining of the two proteins analyzed showed increased intensity of immunostaining of VEGF (p=0.03). By ELISA, we observed relationship between high serum levels of VEGF and abundant vascularization (p=0.02), metastasis (p=0.003), death rate (p=0.007) and low survival (p<0.0001). In addition, increased serum levels of VEGF in the study group compared to the control group (p=0.03). In contrast, the percentage of serum HIF-1&#945; bitches with mammary neoplasia was 20% lower than the control group of female dogs (p=0.0006). However, bitches with a history of recurrent tumor showed a 15% increase in the percentage of serum HIF-1&#945; (p=0.03). Regarding gene expression, there was a relationship between increased gene expression of VEGFA and tumor abundant vascularization (p=0.02), bitches with a history of recurrence (p=0.01) and death (p=0.02). Moreover, we observed a statistically significant increase in gene expression of HIF-1A with moderate vascularization (p=0.01) and bitches that remained alive during the follow-up period (p=0.003). Conclusions: Our results demonstrate a correlation between VEGF and features of poor prognosis, suggesting that this factor plays an important role in tumor progression and can be used as a potential prognostic marker in clinical practice and is useful in predicting tumor progression in dogs with mammary neoplasia. / Introdução: As neoplasias mamárias são o tipo mais comum de tumor na espécie canina, sendo aproximadamente metade desses tumores de caráter maligno. A hipóxia, caraterizada por níveis de oxigênio abaixo do normal, é um conhecido fator adverso ao tratamento do câncer. O fator de transcrição HIF -1&#945; é o regulador central da resposta fisiopatológica das células de mamíferos para baixos níveis de oxigênio, capaz de ativar a transcrição do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), que por sua vez, promove a angiogênese através da sua capacidade de estimular o crescimento, migração e invasão de células endoteliais, contribuindo para o crescimento tumoral. Objetivos: Avaliar a concentração sérica e a expressão gênica do VEGF e do HIF-1&#945; relacionando-os com os parâmetros clínico-patológicos e a sobrevida de cadelas com neoplasia mamária a fim de inferir o possível valor prognóstico desses fatores. Material e Métodos: Foram coletados fragmentos tumorais de 30 cadelas com neoplasia mamária para verificar a expressão protéica do VEGF e do HIF-1&#945; por imuno-histoquímica e a expressão gênica por PCR em Tempo Real. Para determinar a concentração sérica do VEGF e do HIF-1&#945; pelo método de ELISA (Enzyme-linked immunosorbent), foram coletados soro sanguíneo de 50 cadelas controle (saudáveis) e 30 cadelas com neoplasia mamária (grupo de estudo). Os resultados encontrados foram estatisticamente relacionados às características clínico-patológicas. Resultados: A comparação entre a marcação imuno-histoquímica das duas proteínas analisadas demonstrou aumento da intensidade da imunomarcação do VEGF (p=0,03). Por meio da técnica de ELISA, foi possível observar relação entre altos níveis séricos de VEGF com vascularização abundante (p=0,02), metástase (p=0,003), óbito (p=0,007) e baixa taxa de sobrevida (p<0,0001). Além disso, houve aumento dos níveis séricos de VEGF no grupo de estudo quando comparados ao grupo controle (p=0,03). Ao contrário, o percentual sérico de HIF-1&#945; das cadelas com neoplasia mamária foi 20% menor do que das cadelas do grupo controle (p=0,0006). No entanto, cadelas com histórico de recidiva tumoral demonstraram aumento de 15% no percentual sérico de HIF-1&#945; (p=0,03). Quanto à expressão gênica, houve relação entre o aumento da expressão gênica do VEGFA e tumores com vascularização abundante (p=0,02), cadelas com histórico de recidiva tumoral (p=0,01) e óbito (p=0,02). Por outro lado, foi observado aumento estatisticamente significante da expressão gênica do HIF-1A com vascularização moderada (p=0,01) e cadelas que continuaram vivas durante o período de acompanhamento (p=0,003). Conclusões: Nossos resultados demostram correlação entre o VEGF e as características de pior prognóstico, sugerindo que este fator desempenha um importante papel na progressão tumoral, podendo ser utilizado como um potencial marcador prognóstico na rotina clínica, sendo útil na predição da progressão tumoral em cadelas com neoplasia mamária.

La compression nerveuse chronique (CNC) est un modèle d’étude expérimental définit pour l’examen du syndrome du canal carpien. Notre travail consistait à étudier chez le rat sain, l’effet d’une CNC de courte ou de longue durée sur la microcirculation cutanée, ainsi que la capacité de récupération fonctionnelle du nerf suite à une décompression, et les mécanismes moléculaires impliqués dans la régénération nerveuse. L’originalité de l’équipe de recherche est d’avoir montré un mécanisme physiologique original permettant d’étudier l’interaction neurovasculaire cutanée qui peut être observée sur le nerf. La PIV (Pressure‐Induced Vasodilation) est un outil original de commande de la vasomotricité par les fibres C. Les dysfonctions neurovasculaires cutanées et nerveuses induites par une CNC de courte durée sont associés à l’altération des fibres C et, à des mécanismes angiogéniques et inflammatoires du nerf lésé. Ces atteintes sont réversibles après une décompression nerveuse, malgré une modification de la balance des facteurs angiogéniques, une augmentation de l’expression de facteurs inflammatoires et l’activité de protéines à profil apoptotique. La CNC de longue durée provoque des traumatismes plus importants auxquels s’ajoutent des atteintes vasculaires. Par conséquent la décompression du nerf sciatique n’a pas permis de rétablir les fonctions nerveuses périphériques. La PIV fournit un diagnostic précoce de l’atteinte nerveuse suivant sa réduction, synonyme d’une CNC de courte durée, ou de son abolition, synonyme d’une CNC longue durée. Ces niveaux d’atteintes nerveuses et inflammatoires pourraient être responsables ou non de la récupération fonctionnelle nerveuse / Chronic nerve compression (CNC) is an experimental study model for the examination of the carpal tunnel syndrome. Our work aimed to study the effect of short or long‐term CNC on the cutaneous blood flow, on the nerve ability to recover following to nerve release, and the molecular mechanisms involved in the nervous regeneration. For that purpose, our laboratory established an original physiological mechanism in the study of the relationship between vessel and nerve in the sciatic nerve but also at the periphery, in the cutaneous tissue. Therefore, PIV (Pressure‐Induced Vasodilation) is an original tool of vasomotion linked to C‐fibers. Cutaneous and nervous neurovascular dysfunctions induced by a shortterm CNC were associated to cutaneous C‐fibers impairment and, angiogenic and inflammatory mechanisms of the injured nerve. These achievements are reversible after nerve release, even though the nerve showed a modification of the balance of angiogenic factors, an increase of the expression of inflammatory factors and the activity of proteins with apoptotic type. The long‐term CNC induced more important trauma that further affected the vascular function. Consequently the decompression of the sciatic nerve did not allow restoring the peripheral nervous function. PIV allows to early diagnosing nerve damage with a reduction referring to a short‐term CNC or an abolition referring to a long‐term CNC. Activation of the inflammatory pathway during CNC could compromise nerve recovery following nerve decompression

La maladie d’Alzheimer est caractérisée par un déclin progressif des capacités cognitives. Les Aßo induisent des dysfonctionnements de la transmission via une altération des récepteurs au glutamate et une perte de synapses.Nos récents résultats démontrent que le VEGF facilite la plasticité synaptique et la mémoire chez des souris via son action sur son récepteur VEGFR2. Nous avons montré que le VEGF stimule l’insertion synaptique des récepteurs glutamatergiques et la formation de synapses, suggérant ainsi un rôle dans la modulation des altérations synaptiques observées dans la maladie d’Alzheimer.Notre objectif est d’étudier le rôle du VEGF, spécifiquement dans la maladie d’Alzheimer. Tout d’abord, nous avons examiné son expression en relation avec les plaques séniles chez des patients et dans un modèle de la maladie d’Alzheimer. Nos résultats ont démontré une colocalisation entre le VEGF et ces plaques.Afin d’examiner plus finement l’interaction Aß-VEGF, nous avons analysé la liaison entre les Aßo et le VEGF en test ELISA et puces à peptides. Nous avons ainsi démontré un potentiel blocage de l’interaction entre le VEGF et son récepteur, menant à des défauts de son activation.Enfin, nous avons examiné si le VEGF prévient les altérations synaptiques par des approches électrophysiologiques, biochimiques et immunocytochimiques. Nos résultats démontrent que lors d’un traitement aux Aßo, le VEGF restaure la LTP, l’expression des récepteurs au glutamate et limite la perte synaptique.Dans l’ensemble, nos résultats suggèrent que l’interaction Aß-VEGF altère la voie du VEGF chez les patients. De plus, le VEGF réduit la toxicité induite par les Aßo sur les synapses / Alzheimer disease (AD) is characterized by a progressive decline in cognitive abilities. Amyloid-ß oligomers (Aßo) trigger synapse dysfunction through defects in glutamate receptor function and subsequent dendritic spine loss. These synaptic impairments compromise memory and contribute to cognitive deficits.Our recent findings revealed that VEGF facilitates synaptic plasticity and memory in mice through its VEGFR2 receptor in neurons. We showed that VEGF promotes glutamate receptor synaptic insertion and stimulates dendritic spine formation, suggesting it may be a key candidate for alleviating synapse damage in AD.Our objective is to study the role of VEGF in synapse protection in AD models and unravel the underlying mechanisms.First, we examined the VEGF expression pattern in postmortem brain tissue from AD patients and APPPS1 model of AD. Our results showed a partial colocalization between VEGF and Aß plaques in AD patients and APPPS1 brains.To further investigate the Aß-VEGF interaction, we used Elisa assay and peptide arrays and demonstrated that Aßo binds several domains of VEGF, impedding VEGFR2 activation.Finally, we examined whether VEGF can prevent synapse damage induced by Aßo using electrophysiological, biochemical and 3D modelling approaches. Our results demonstrated that VEGF treatments can restore LTP in Aßo-treated hippocampal slices, glutamate receptor content at synapses and increase dendritic spine density.All together, our results suggest that Aß-VEGF interaction may alter VEGF pathway in AD and that VEGF reduces Aßo-induced toxicity at synapses by modulating glutamate receptor expression and promoting spine formation and/or stabilization