Made available in DSpace on 2014-10-09T12:49:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:01:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Considerando os efeitos da radiação gama sobre proteínas e a capacidade do sistema imune de reconhecer macromoléculas modificadas, decidimos avaliar alguns aspectos imunológicos de camundongos B10.PL frente a ovalbumina e bothropstoxina–1 (BTHX-1), nas formas nativa e irradiada. Para avaliar prováveis modificações estruturais nas moléculas das proteínas após o processo de irradiação (radiação gama de 60Co), foi realizada a eletroforese em gel de poliacrilamida 15% para a ovalbumina e para a BTHX-1, nas formas nativa e irradiada. A ovalbumina também foi submetida à cromatografia de exclusão molecular, enquanto a BTHX-1 foi submetida à espectrometria de massa. Os resultados destes ensaios mostraram que a radiação gama foi capaz de promover alterações nas moléculas de ovalbumina e BTHX-1. A fim de avaliar a toxicidade da BTHX-1 irradiada em relação à nativa realizou-se um ensaio de citotoxicidade celular em células CHO. O resultado mostrou que a toxina na sua forma irradiada apresentou, aproximadamente, cinco vezes menos toxicidade do que a toxina na sua forma nativa. Com relação aos aspectos imunológicos, foram realizados ensaios de produção e identificação de anticorpos, nos quais, os animais foram imunizados com ovalbumina e BTHX-1, nas formas nativa ou irradiada. Observou-se que as proteínas nativas induziram, preferencialmente, uma resposta do tipo Th2, enquanto que as proteínas irradiadas induziram uma resposta do tipo Th1. Realizou-se um ensaio de proliferação celular para avaliar o comportamento de esplenócitos, retirados do baço de camundongos B10.PL, imunizados com ovalbumina e BTHX-1, nativas ou irradiadas, cultivados em presença de ambas as formas das proteínas. Em relação à ovalbumina, os resultados mostraram que tanto as células dos animais imunizados com a ovalbumina nativa como aquelas dos animais imunizados com a proteína na sua forma irradiada apresentaram crescimento semelhante. No caso da BTHX-1, os resultados mostraram que as células dos animais imunizados com a toxina irradiada foram capazes de reconhecer a forma nativa da toxina, pois apresentaram crescimento semelhante ao das células dos animais imunizados com a BTHX-1 nativa. / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:49:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:02:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 09994.pdf: 3905779 bytes, checksum: 7cdc8d8ae9585729a6a818ed202c59c8 (MD5) / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:49:28Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:02:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 10386.pdf: 2709613 bytes, checksum: e5193eaf23e32490bcf76fc5ad0d8789 (MD5) / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares, IPEN/CNEN-SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:27:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:04:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Os acidentes causados por serpentes peçonhentas são considerados um problema de saúde pública no Brasil, e é muito importante que sejam feitos mais estudos para um melhor conhecimento desse agravo. O objetivo deste trabalho é descrever as características clínicas e epidemiológicas que foram observados no Hospital de Doenças Tropicais de Araguaína, Estado do Tocantins, Brasil, que é uma unidade de saúde que cuida de pacientes que sofrem de doenças tropicais, no período de 2007 a 2009. Foram estudados 556 indivíduos e as características mais comuns observadas foram: sexo masculino, idade entre 19-40 anos, picada em membros inferiores e os ferimentos causados por serpentes do gênero Bothrops. Os sinais e sintomas mais freqüentes foram dor, edema e hemorragia. A manifestação sistêmica mais observada foi alteração da coagulação sanguínea. As complicações mais freqüentes foram abscesso, insuficiência renal aguda, necrose e infecção bacteriana. Os principais microorganismos identificados foram Morganela morganii (17,1%), Pseudomonas aeruginosa (14,6%) e Staphylococcus epidermidis (4,9%). Esta flora bacteriana foi semelhante às descritas no veneno e na boca das serpentes por outros pesquisadores. Com base nos resultados dos testes de suscetibilidade sugere-se a continuidade no uso de ciprofloxacin para o tratamento desses abscessos que não respondem à simples drenagem. O conjunto dos resultados obtidos representa um completo levantamento da atual situação dos acidentes envolvendo serpentes no estado do Tocantins e arredores e certamente contribuirá para o aprimoramento das ações de combate aos problemas de Saúde Pública da região Norte. / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:55:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:05:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / A variabilidade na composição e nas atividades biológicas dos venenos de serpentes vem sendo documentada por diversos autores e pode ser observada em diversos níveis. As diferenças na composição dos venenos apresentam relevância na terapêutica dos envenenamentos ofídicos, tornando o estudo da variação dos venenos de extrema importância para a confecção de antivenenos mais específicos e de maior eficácia nos tratamentos de envenenamentos ofídicos em humanos. Os estudos das variações do veneno de serpentes em populações isoladas são raros, sendo no Brasil os casos mais conhecidos os da Bothrops insularis e Bothrops alcatraz. Diversos estudos sugerem que as oscilações do nível marinho, ocorridas há 11.000 anos, teriam isolado populações de serpentes nas ilhas recentemente formadas, resultando em duas diferentes rotas evolutivas que deram origem a estas espécies. Tendo em vista que a formação da Ilha de São Sebastião-SP ocorreu no mesmo período, isolando populações de animais ali existentes, nos propusemos a avaliar a variação nas atividades do veneno de 80 exemplares de serpentes Bothrops jararaca provenientes da ilha e da sua área de distribuição continental, comparando-as com o Veneno Referência Nacional, para as atividades proteolítica sobre caseína, fosfolipásica indireta, hemorrágica e amidolítica, assim como de seus perfis eletroforéticos (SDS-PAGE) e seu reconhecimento pelo soro antibotrópico comercial através da técnica de Western Blot. A análise eletroforética (SDS-PAGE 12,5%) através de densitometria óptica evidenciou, em sua maioria bandas protéicas de baixo peso molecular e a presença de duas áreas majoritárias com grande variação no número, disposição e intensidade das bandas nas faixas de pesos moleculares de 45 kDa e 25 kDa. A variação da disposição das bandas apresentadas nos géis correlacionou-se com a variação nas atividades. Amostras que apresentaram baixa atividade fosfolipásica foram exatamente aquelas que apresentaram poucas e tênues bandas com aproximadamente 14 kDa. A análise das atividades proteolítica sobre caseína, fosfolipásica e esterásica apresentou um padrão de similaridade que nos permitiu estabelecer duas grandes subpopulações de venenos; uma ao norte da distribuição geográfica amostrada, apresentando altas atividades proteolítica sobre caseína, fosfolipásica e amidolítica e outra ao sul apresentando menores valores para tais variedades. Não foi possível estabelecer uma relação direta entre o padrão de distribuição geográfica com a variação nas atividades hemorrágicas dos venenos amostrados. A técnica de Western Blot permitiu concluir que o soro antibotrópico comercial não apresenta um bom reconhecimento para proteínas de baixo peso molecular. A análise das atividades dos venenos dos exemplares insulares apresentou similaridade com as atividades das amostras de veneno de serpentes coletadas próximas à ilha, sugerindo que o intercâmbio gênico não tenha sido de todo interrompido, provavelmente devido à sua proximidade para com o continente. / Dissertação (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:32:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:09:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 03268.pdf: 1411071 bytes, checksum: 329c08d164e3d0d4d2a4ce77f1e2aa13 (MD5) / Dissertacao (Mestrado) / IEA/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:32:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:10:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 03181.pdf: 1949463 bytes, checksum: c34e1f3d7f43777cbd9147685ab2ea6e (MD5) / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / PeÃonhas de Hymenoptera, particularmente das famÃlias Apidae (abelhas) e Vespidae (vespas), sÃo uma rica fonte de peptÃdeos e proteÃnas com atividades biolÃgicas. A espÃcie Polybia Paulista à uma vespa social neotropical muito agressiva e endÃmica no Sudeste do Brasil. O objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos renais e vasculares induzidos pelo veneno da Polybia paulista (VPp). Foram utilizados ratos (n = 4) machos Wistar pesando entre 250 e 300g, cujos rins foram isolados e perfundidos com SoluÃÃo de Krebs-Henseleit modificada contendo 6g% de albumina bovina previamente dialisada. A menor concentraÃÃo (1Âg/mL) nÃo apresentou efeito nos parÃmetros avaliados. PorÃm, a concentraÃÃo de 3Âg/mL produziu um aumentou na pressÃo de perfusÃo renal (PP), na resistÃncia vascular renal (RVR), no fluxo urinÃrio (FU) e no ritmo de filtraÃÃo glomerular (RFG). Foi tambÃm observada uma reduÃÃo aos 60â no percentual de transporte tubular de sÃdio (% TNa+). Na avaliaÃÃo histolÃgica do rim perfundido com VPp foi observado depÃsito de proteÃnas nos tÃbulos renais e nos espaÃos urinÃrios, bem como regiÃes focais de necrose/apoptose. A citotoxidade do veneno da Polybia paulista em cultura de cÃlulas MDCK foi analisada atravÃs do ensaio colorimÃtrico com sal de tetrazolium (MTT). O veneno promoveu um efeito citotÃxico dependente de concentraÃÃo com um valor de IC50 de 25.81Âg/mL. TambÃm foram mensurados os nÃveis de lactato desidrogenase (LDH) e observado um aumento significativo nas maiores concentraÃÃes estudadas. No estudo em leito mesentÃrico a pressÃo de perfusÃo foi mensurada atravÃs de um transdutor de pressÃo. O efeito vascular do VPp (3Âg/mL) nÃo alterou a pressÃo basal, na concentraÃÃo de 10Âg/mL, foi observado um aumento pressÃrico discreto e na concentraÃÃo de 100 Âg/mL, foi observado um acentuado aumento na pressÃo de perfusÃo basal. O efeito vasoconstritor observado no estudo renal e em leito mesentÃrico, tambÃm foi demonstrado no protocolo de anel de aorta, sendo observado de maneira concentraÃÃo dependente, um aumento do tÃnus basal apÃs a infusÃo do VPp. Em conclusÃo, o VPp causou nefrotoxidade, sugestivo de uma aÃÃo direta com morte celular em cÃlulas do tÃbulo renal por necrose. O efeito vascular contrÃtil que envolve influxo de cÃlcio atravÃs de canais operados por voltagem, provavelmente à mediado pela ativaÃÃo de receptores alfa adrenÃgicos.

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A espécie Bothrops atrox é responsável por grande parte dos acidentes no estado do Amazonas. No entanto, ainda são poucos os estudos sobre as toxinas que compõem o veneno dessa serpente, os mecanismos envolvidos na sintomatologia dos acidentes, bem como de formas de inibição. Os soros antiveneno utilizados atualmente com o objetivo de neutralizar as atividades sistêmicas e locais dos venenos mostraram reatividade cruzada entre componentes dos venenos de serpentes do gênero Bofhrops (MOURA DA SILVA et al., 1990). No entanto alguns componentes do veneno não apresentaram essa reatividade (SILES-VILARROEL et al.., 1974), mostrando a existência de toxinas espécie específicas.Os venenos de serpentes estão sujeitos a grandes variações induzidas por diversos aspectos ontogenéticos e influencia do habitat. Assim, essas variações podem gerar toxinas espécie específicas cujos mecanismos de ação ainda são desconhecidos e que os anticorpos presentes nos antivenenos disponíveis não sejam capazes de reconhecer e neutralizar eficientemente. O gênero Bothrops possui espécies extremamente variáveis, algumas de difícil classificação taxonõmica, e novas espécies têm sido descobertas recentemente. Como contribuição para o acúmulo de informações a respeito das diferentes composições do veneno do gênero Bothrops, e para o conhecimento de toxinas já isoladas e as ainda não isoladas na espécie tipo Bothrops atrox, foi construída uma biblioteca de cDNA da glândula de veneno.Os dados obtidos são importantes para a elaboração de um painel da expressão gênica dessa espécie e permitirá a identificação de toxinas que podem ser comuns ou não ao veneno de outras espécies do gênero. Aliado a isso, esses dados permitirão a correlação com o estudo proteõmico, e possivelmente fornecerão subsídios para a melhoria da terapêutica empregada no tratamento dos casos envenamento na região. / The species Bothrops atrox is responsible for most accidents in state of Amazonas. However, there are few studies on toxins that make up the venom of this snake, mechanisms involved in symptomatology of accidents, as well as inhibition forms. Sera antivenom currently used in order to neutralize the systemic and local activities of the venoms showed cross-reactivity between components of the venom of Bothrops (MOURA DA SILVA et al., 1990). However some components of the venom showed no reactivity (SILES-VILARROEL et al., 1974), indicating the existence of species-specific toxins. Snake venoms are subject to large variations induced by several aspects and influences of ontogenetic habitat. Thus, these variations can produce toxins whose mechanisms of species-specific action are still unknown and antibodies present in available antivenoms maybe not are capable to recognize and neutralize some toxins efficiently. Bothrops species have highly variable, some of difficult taxonomic classification and new species have been discovered recently. As a contribution to gain of information about of different compositions of Bothrops venom and to knowledge of toxins not yet isolated and the isolated in Bothrops atrox type species we constructed a venom gland cDNA library . The data obtained are important for the development of gene expression panel of this species and enable the identification of toxins common or not in the venom of other species. These data will allow correlation with the proteomic study, and possibly provide input for improving the therapeutic used in the treatment of accidents cases in the region.