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Taxocenose de serpentes em ambientes aquáticos de áreas de altitude em Roraima (Squamata:serpentes) / Taxocenosis of snakes in aquatic environment of altitudinal areas in roraima (squamata: serpentes)

Farias, Raimundo Erasmo Souza 03 October 2016 (has links)
Submitted by Inácio de Oliveira Lima Neto (inacio.neto@inpa.gov.br) on 2018-02-01T12:56:14Z No. of bitstreams: 2 Raimundo Erasmo Souza Farias.pdf: 3666794 bytes, checksum: e96be7454a9ed0686ba5638ee3f76933 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-01T12:56:14Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Raimundo Erasmo Souza Farias.pdf: 3666794 bytes, checksum: e96be7454a9ed0686ba5638ee3f76933 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-10-03 / Instituto de Amparo a Ciência, Tecnologia e Inovação de Roraima - IACTI-RR / In studies on faunal distribution it is coherent to adopt naturally delimited regions, because allow us to interpret the results with better biogeographic accuracy, and generate more secure data on biological differentiation. In all Roraima region such studies can, depending on the question, to insert their geographic units of work into the Guiana Shield, an old geologic formation comprising part of Colombia, Venezuela, French Guiana and North Amazonia – Roraima is inserted in the central area of the Shield. In this study on snakes distribution, in regional and general scale comprising various vegetal formations, the geographic unit refers to the headwaters of the rivers Samã and Miang, both located in altitudinal areas of the Guiana Shield in Roraima (04o25', 61o08'W), region that makes the transition between the Brasilian Boa Vista Basin, region of lavrado, and the Venezuelan Gran Sabana, region of the tepuyes. The operational hypothesis is that as the geographic unit of the study is inserted into Guiana Shield, its ofiofauna is endemic to this formation – most of the species, more than 50%, will have restricted occurrence to that geologic formation. It was registered in the geographic unit of the study 42 species of snakes, included in 6 families: Leptotyphlopidae 1 genera and 1 species, Boidae 2 genera and 2 species, Colubridae 8 genera and 12 species, Dipsadidae 11 genera and 20 species, Elapidae 1 genera and 3 species and Viperidae 3 genera and 4 species. In the Guiana Shield region occur 149 species of snakes, 17 are said to be endemic to the geological formation. At least 10 species registered at BV-8 in Roraima are restricted to the Amazonian domain and North of South America: Trilepida macrolepis, Chironius multiventris, Phrynonax poecilonotus, Dipsas pavonina, Dipsas variegata, Erythrolamprus breviceps, Pseudoboa neuwiedii, Xenodon severus, Micrurus hemprichii and Bothrops atrox. Two species, Dipsas copei and Erythrolamprus trebbaui have localized distribution, occurring only in some Amazon regions; 29 species have wide distribution and only Micrurus pacaraimae can be considered endemic to the study are, so far. Although the 42 registered species occur in Shield area, the distribution is wider, therefore it can be concluded that there is no such endemic Guiana Shield ofiofauna in the geographic unit of this study. With respect to the natural history, four guilds of snakes are present into the geographic unit of study, prevailing batracophagy and saurivory, followed by those that predate birds and mammals. In respect to the reproduction most species have some link to the rain season, some with more than one reproductive cycle, most of them are oviparous. The most frequent species in this study and with more specimens collected was Bothrops bilineata, which is not common in herpetological reports. Most of the species leaving in the headwaters of the rivers Samã and Miang use forested areas to survive, showing the importance of the microhabitats associated to the headwaters of these rivers. / Nos estudos sobre distribuições faunísticas é coerente adotarmos regiões naturalmente delimitadas, porque nos permite interpretar os resultados com mais acurácia biogeográfica, além de gerar dados mais seguros sobre diferenciações biológicas. Em toda a região de Roraima estudos desta natureza podem, a depender da pergunta da pesquisa, inserir as respectivas unidades geográficas do trabalho no Escudo da Guiana, uma formação geológica antiga que ocupa parte da Colômbia, Venezuela, Guiana Francesa e norte da Amazônia – Roraima está inserido na parte central do Escudo. Neste estudo sobre distribuição de serpentes, em escala regional e geral abrangendo várias formações vegetais, a unidade geográfica de trabalho refere-se às nascentes dos rios Samã e Miang, ambos situados em áreas de altitude do Escudo da Guiana em Roraima (04o25', 61o08'W), região que faz a transição entre a brasileira Bacia de Boa Vista, região do lavrado, e a Gran Sabana venezuelana, região dos tepuyes. A hipótese de trabalho é que como a unidade geográfica do estudo está inserida no Escudo da Guiana, a sua ofiofauna é endêmica a esta formação – a maioria das espécies, mais de 50%, terá ocorrência restrita a esta formação geológica. Foram registradas na unidade geográfica de trabalho 42 espécies de serpentes incluídas em 6 famílias: Leptotyphlopidae 1 gênero e 1 espécie, Boidae 2 gêneros e 2 espécies, Colubridae 8 gêneros e 12 espécies, Dipsadidae 11 gêneros e 20 espécies, Elapidae 1 gênero e 3 espécies e Viperidae 3 gêneros e 4 espécies. Na região do Escudo da Guiana ocorrem 149 espécies de serpentes, 17 são ditas endêmicas a esta formação geológica. Ao menos 10 espécies registradas no BV-8 em Roraima estão restritas ao domínio da Amazônia e norte da América do Sul: Trilepida macrolepis, Chironius multiventris, Phrynonax poecilonotus, Dipsas pavonina, Dipsas variegata, Erythrolamprus breviceps, Pseudoboa neuwiedii, Xenodon severus, Micrurus hemprichii e Bothrops atrox. Duas espécies, Dipsas copei e Erythrolamprus trebbaui têm distribuição localizada, ocorrem em apenas algumas regiões amazônicas; 29 espécies têm ampla distribuição e apenas Micrurus pacaraimae pode ser considerada endêmica na região estudada, até o momento. Embora as 42 espécies registradas ocorram na área do Escudo, a distribuição é mais ampla, portanto conclui-se que não há uma ofiofauna endêmica do Escudo da Guiana na unidade geográfica deste estudo. Com relação à história natural, quatro guildas de cobras estão presentes na unidade geográfica do estudo, com predominância de espécies batracófagas e saurívoras, seguidas pelas que predam aves e mamíferos. Com relação à reprodução a maioria das espécies tem algum vínculo com o período chuvoso, algumas com mais de um ciclo reprodutivo, a maioria ovípara. A espécie mais frequente neste estudo e com o maior número de exemplares coletados foi Bothrops bilineata, o que não é frequente nos relatos herpetológicos. A maioria das espécies que vivem nas cabeceiras dos rios Samã e Miang utilizam as áreas de mata para sobreviverem, evidenciando a importância dos microhábitats associados às cabeceiras destes rios.
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Uso da tetraciclina na neutralização das ações enzimáticas causadores de hemorragia, necrose e inflamação induzidos pela peçonha de Bothropoides erythromelas

Santos, João Victor de Almeida January 2013 (has links)
SANTOS, João Victor de Almeida. Uso da tetraciclina na neutralização das ações enzimáticas causadores de hemorragia, necrose e inflamação induzidos pela peçonha de Bothropoides erythromelas. 2013. 70 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-01-16T14:02:41Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_jvasantos.pdf: 1469674 bytes, checksum: b8474f504a65cd942b4357c94e4aa782 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-01-16T14:03:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_jvasantos.pdf: 1469674 bytes, checksum: b8474f504a65cd942b4357c94e4aa782 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-01-16T14:03:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_jvasantos.pdf: 1469674 bytes, checksum: b8474f504a65cd942b4357c94e4aa782 (MD5) Previous issue date: 2013 / Snake envenoming is a common medical emergency in the countryside of tropical countries. In Brazil, botropic snakes are the major responsible for the ophidian accidents related in that country. In Northeastern Brazil, Bothropoidess erythromelas, popularly known as “jararaca-da-seca”, can be found. Botropic venoms cause tissue damage at the bitesite, such as pain, edema, hemorrhage and necrosis. Traditional serum therapy has no efficacy against these effects, which stimulate the research for neutralizer agents. Several studies showed the neutralizing action of tetracyclines against snake venom local tissue effects. This work aimed to evaluate the effect of tetracycline, when preincubated, against in vitro proteolytic and phospholipase A2 activities, and hemorrhagic, necrotic and inflammatory actions in mice skin induced by B. erythromelas venom, besides investigating gene transcription of the inflammatory mediators involved. Results showed that proteolytic activity (101,2 ± 2,56%) was reduced to 6,59 ± 0,92%. Phospholipase A2 activity was reduced from 0,04 ± 0,001 to 0,02 ± 0,003, in absorbance values. The halo area of hemorrhagic (117,3 ± 7,005 mm2) and necrotic (20,79 ± 0,003 mm2) activities was totally abolished when tetracycline concentration was 10-fold the venom concentration. The neutrophil migration kinetics presented two peaks in 2h (19,977 ± 3,054 neutrophils/mg) and 72h times (115,265 ± 20,106 neutrophils/mg). These values were reduced by tetracycline treatment to 2.020 ± 210,2 neutrophils/mg and 16,506 ± 5.412 neutrophils/mg, respectively. Investigation of the inflammatory mediators involved showed increase in gene transcription levels IL-1β and IL-6 cytokines 30 minutes after envenomation. It was suggested that these effects are due, in part, to the chelation property of tetracycline on venom metalloproteinases enzymes, which are involved in the local tissue effects observed. In conclusion, tetracycline prevents proteolytic, phospholipase A2, hemorrhagic and necrotic activities, and neutrophil migration induced by B. erythromelas venom. / Envenenamentos por serpentes peçonhentas são uma emergência médica comum em zonas rurais de países tropicais. No Brasil, as serpentes botrópicas são as maiores responsáveis pelos acidentes ofídicos notificados no país. Na região Nordeste brasileira, encontra-se a serpente Bothropoides erythromelas, conhecida como jararaca-da-seca. Os venenos botrópicos causam dor, edema, hemorragia e necrose no local da picada. Tais efeitos não são revertidos pela soroterapia tradicional, o que incita a pesquisa por agentes neutralizantes. Vários estudos demonstraram a ação neutralizante das tetraciclinas contra os efeitos teciduais locais induzidos pela peçonha de serpentes. Neste trabalho, objetivou-se avaliar o efeito da tetraciclina, quando pré-incubada, contra as atividades proteolítica e fosfolipásica A2 in vitro, e as ações hemorrágica, necrosante e inflamatória induzidas pela peçonha de B. erythromelas em tecido de pele de camundongos, além de investigar a transcrição gênica dos mediadores inflamatórios envolvidos. Os resultados mostraram que a atividade proteolítica da peçonha (101,2 ± 2,56%) foi reduzida para o percentual de 6,59 ± 0,92%. A atividade fosfolipásica A2 sofreu redução de 0,04 ± 0,001 para 0,02 ± 0,003, em valores de absorbância. A formação dos halos hemorrágico (117,3 ± 7,005 mm2) e necrótico (20,79 ± 0,003 mm2) foi totalmente abolida quando a concentração da tetraciclina foi superior à da peçonha na razão 10. A cinética da migração neutrofílica induzida pela peçonha obteve dois picos nos tempos 2 horas (19,977 ± 3,054 neutrófilos/mg) e 72 horas (115,265 ± 20,106 neutrófilos/mg). Tais valores foram reduzidos pelo tratamento com tetraciclina para 2.020 ± 210,2 neutrófilos/mg e 16.506 ± 5.142 neutrófilos/mg, respectivamente. A investigação dos mediadores inflamatórios envolvidos mostrou aumento dos níveis de transcrição gênica das citocinas IL-1β e IL-6 30 minutos após o envenenamento. Sugere-se que estes efeitos foram, em parte, devidos a ação quelante da tetraciclina sobre as metaloproteinases e fosfolipases A2 presentes no veneno, enzimas envolvidas nos efeitos teciduais locais observados. Em conclusão, a tetraciclina previne as atividades proteolítica, fosfolipásica A2, hemorrágica, necrosante e a migração neutrofílica induzidas pela peçonha de B. erythromelas.
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Padrões de distribuição e conservação de serpentes do bioma Caatinga

Rocha, Wáldima Alves da 31 March 2017 (has links)
Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Zoologia, 2017. / Texto parcialmente liberado pelo autor. Conteúdo restrito: Capítulos 1, 2 e 3. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2017-12-07T15:59:55Z No. of bitstreams: 1 2017_WáldimaAlvesdaRocha _PARCIAL.pdf: 909938 bytes, checksum: bb8b75fa69d24df92140a745e10bdf80 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-02-08T21:38:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_WáldimaAlvesdaRocha _PARCIAL.pdf: 909938 bytes, checksum: bb8b75fa69d24df92140a745e10bdf80 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-08T21:38:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_WáldimaAlvesdaRocha _PARCIAL.pdf: 909938 bytes, checksum: bb8b75fa69d24df92140a745e10bdf80 (MD5) Previous issue date: 2018-01-08 / O bioma Caatinga foi durante anos uma das regiões de menor interesse científico no Brasil. A ideia de uma fauna depauperada e pobre em endemismos contribuiu com essa falta de interesse até o início da década de 90. Atualmente, sabemos que a Caatinga possui uma fauna relativamente rica e caracterizada por uma expressiva presença de elementos endêmicos. No entanto, muito de seu território, principalmente sua área central, continua apresentando uma amostragem deficiente para a herpetofauna em geral. A Caatinga apresenta um baixo número de reservas de proteção integral, com isso poucas espécies estão sob proteção e correm risco de perda hábitat por desmatamento, queimadas e avanço da monocultura. Diante da necessidade de avançar no conhecimento das serpentes deste bioma, este estudo teve como objetivos principais entender os padrões de distribuição das serpentes da Caatinga e que fatores explicam esses padrões, avaliar o estado atual de conservação deste grupo e identificar áreas prioritárias para a conservação. No Capítulo 1, observamos padrões de distribuição das serpentes da Caatinga e suas relações com as subdivisões de ecorregiões do bioma, e utilizando modelagem de distribuição potencial da ocorrência das espécies, nós identificamos áreas de expressiva diversidade dentro do bioma e identificamos as variáveis bioclimáticas mais relevantes para explicar essas áreas de alta diversidade. No Capítulo 2, usamos a distribuição das serpentes associadas a uma árvore filogenética para identificar áreas de endemismo filogenético. No Capítulo 3, utilizamos a distribuição das espécies endêmicas da Caatinga, para identificar áreas prioritárias para a conservação das espécies, através do planejamento sistemático para a conservação. / The Caatinga biome has been for years one of the least studied regions in Brazil. The idea that the region has a poor fauna and is poor in endemisms contributed to this lack of interest until the early 90's. Nowadays, we know that the Caatinga has a relatively rich fauna and is characterized by an expressive presence of endemic elements. However, much of its territory, mainly its central area, is still poorly sampled for the herpetofauna in general. The Caatinga presents a low number of integral protection reserves, and few species are under protection, which puts them under risk of loss habitat by deforestation, burnings and monocultures. Faced with the need to advance the knowledge on the snakes of this biome, this study had as main objectives to: 1) understand the distribution patterns of the Caatinga snakes and which factors explain the observed patterns; 2) evaluate the present conservation state of this group, and 3) identify priority areas for conservation. In Chapter 1, we identified distribution patterns of the Caatinga snakes and their relationships to the ecoregion subdivisions of the biome, using ecological niche modelling of potential distribution of species occurrence, we identified areas of expressive diversity within the biome and identified the most relevant bioclimatic variables for high diversity areas. In Chapter 2, we used the distribution of snakes associated with a phylogenetic tree to identify areas of phylogenetic endemism. In Chapter 3, we used the distribution of endemic Caatinga species to identify priority areas for species conservation through systematic planning for conservation.
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Diversidade regional de serpentes na Amazônia: uma abordagem multidimensional com implicações para conservação de paisagens naturais

Fraga, Rafael de 10 July 2016 (has links)
Submitted by Gizele Lima (gizele.lima@inpa.gov.br) on 2017-04-05T20:11:58Z No. of bitstreams: 2 Rafael de Fraga_tese de doutorado_FINAL.pdf: 11054612 bytes, checksum: 759de3f13e558d5931c2516ba1ace78d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-05T20:11:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Rafael de Fraga_tese de doutorado_FINAL.pdf: 11054612 bytes, checksum: 759de3f13e558d5931c2516ba1ace78d (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-07-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The overexploitation of natural resources have threatened tropical forests at an alarming rate, and integrative studies are necessary for planning effective conservation actions. In this thesis we used snakes as a model-group in studies on community ecology and landscape genomics in three chapters with different goals, but all converging in scientific basis for biodiversity conservation. In the Chapter I we present a cost-benefit evaluation of sampling snakes for environmental impact assessments in the Amazon. We show that the high cost of sampling snakes ($ 120 per individual) associated with the low detection probabilities makes this group inappropriate for short-term studies. Alternatively we suggest that environmental impact assessments are focused on taxonomic groups that simultaneously reflect robust diversity measures and are relatively easy to obtain samples. The remaining chapters of this thesis result from sampling surveys along nine years of monitoring snakes in standardized sampling units. In the Chapter II we tested the effects of ecological gradients of tree density, altitude and soil clay content on measures of taxonomic, functional and phylogenetic β-diversity. We show that the three gradients tested act as filters on the taxonomic diversity, which creates regional patterns of co-occurring species. However, differences in functional traits and phylogenies among sampling units are randomly distributed throughout the landscape, regardless of variation in the gradients tested. In the Chapter III we used thousands of genetic loci (SNPs) to compare patterns of gene flow between two ambush predator snakes and two active foragers. We show that the lower dispersal capability in ambush predators generates genetic differentiation among individuals and reduces the gene flow through isolation by geographic distance and environmental resistance. The active foragers, in turn, have high levels of gene flow over about 880 km of an heterogeneous landscape, and no evidence of genetic structure was found, regardless of the geographic distance and environmental resistance. We expect that the chapters of this thesis are part of integrative studies on biodiversity in the Amazon, which have been conducted through standardized sampling of different groups of animals and plants. / A superexploração de recursos naturais tem ameaçado as florestas tropicais em ritmo alarmante, e estudos integrativos se fazem necessários para o delineamento de ações efetivas de conservação. Nessa tese nós usamos serpentes como um grupo-modelo para estudos em ecologia de comunidades e genômica de paisagens, em três capítulos com objetivos diferentes, mas todos convergindo em embasamento científico para conservação da biodiversidade. No capítulo I nós apresentamos uma avaliação de custo-benefício de amostragem de serpentes para avaliações de impacto ambiental na Amazônia. Nós mostramos que baixas probabilidades de detecção associadas ao alto custo de amostragem de serpentes (U$ 120 por indivíduo) tornam esse grupo pouco adequado para estudos em curto prazo. Alternativamente nós sugerimos que avaliações de impacto ambiental sejam focadas em grupos taxonômicos que simultaneamente reflitam medidas de diversidade robustas, e sejam relativamente fáceis para se obter dados. Os demais capítulos dessa tese resultam de campanhas de monitoramento de serpentes em unidades amostrais padronizadas, distribuídas ao longo de nove anos. No capítulo II nós testamos os efeitos de gradientes ecológicos de densidade de árvores, altitude e porcentagem de argila no solo sobre medidas de β- diversidade taxonômica, funcional e filogenética. Nós mostramos que os três gradientes testados funcionam como filtros à diversidade taxonômica, o que gera padrões regionais de co-ocorrência de espécies. No entanto, diferenças em traços funcionais e filogenias entre unidades amostrais são aleatoriamente distribuídas ao longo da paisagem, independentemente da variação nos gradientes testados. No capítulo III nós usamos milhares de marcadores genéticos (SNPs) para comparar padrões de fluxo gênico entre duas serpentes predadoras senta-e-espera e duas forrageadoras ativas. Nós mostramos que a capacidade de dispersão mais baixa em predadores senta-e-espera gera diferenciação genética entre indivíduos e redução no fluxo gênico por meio de isolamento por distância geográfica e resistência ambiental. Os forrageadores ativos, por sua vez, têm altos níveis de fluxo gênico ao longo de cerca de 880 km de uma paisagem heterogênea, e nenhuma evidência de estruturação genética foi encontrada, independentemente de distância geográfica e resistência ambiental. Nós esperamos que os capítulos dessa tese sejam parte de estudos integrativos de biodiversidade, os quais vêm sendo conduzidos na Amazônia por meio de amostragem padronizada de diferentes grupos de animais e plantas.
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História natural e ecologia de duas taxocenoses de serpentes na Mata Atlântica

Hartmann, Paulo Afonso [UNESP] 15 December 2005 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-12-15Bitstream added on 2014-06-13T19:46:43Z : No. of bitstreams: 1 hartmann_pa_dr_rcla.pdf: 968344 bytes, checksum: b22f49a2a2f5bd021d114db006f9c4d8 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente trabalho aborda a taxonomia, distribuição batimétrica e biologia reprodutiva da classe Ophiuroidea. O material utilizado é procedente dos programas Biodiversidade Bêntica Marinha no Estado de São Paulo- BIOTA/FAPESP-Bentos Marinho, Avaliação do Potencial Sustentável dos Recursos Vivos da Zona Econômica Exclusiva- REVIZEE/Score Sul-Bentos e Utilização Racional dos Ecossistemas Costeiros da Região Tropical Brasileira: Estado de São Paulo- INTEGRADO/Subprojeto Bentos. A área de coleta abrange os Estados do Rio de Janeiro, São Paulo, Paraná, Santa Catarina e Rio Grande do Sul. Os ofiuróides foram amostrados na região entremarés de praias arenosas, costões rochosos e fauna associada a algas, na plataforma e talude continental, até cerca de 800 m de profundidade, com maior riqueza de espécies na região da plataforma continental. Ao todo foram analisados 28.942 ofiuróides pertencentes a 39 espécies e 8 famílias. Amphiuridae foi a família mais representativa, principalmente na região da plataforma interna, seguida por Ophiuridae, que ocorreu principalmente em áreas de maior profundidade. Quatro espécies representam novos registros para o Brasil, Amphiodia trychna, Ophiochiton ternispinus, Ophiura (Ophiuroglypha) clemens e Ophiomusium eburneum. Ophiomusium acuferum, Ophiactis lymani e Ophiactis savignyi foram redescritas e discutidas esclarecendo equívocos de identificação. O estudo da distribuição batimétrica das espécies mostrou que os padrões observados são semelhantes aos descritos na literatura e estas foram agrupadas de acordo com os ambientes e faixas batimétricas em que ocorrem. A análise histológica das gônadas de Ophioderma januarii permitiu definir o padrão reprodutivo da espécie, a qual é gonocorística, reproduz-se durante todo ano... / The present work approached the taxonomy, bathymetric distribution and reproductive biology of the Class Ophiuroidea. All material used came from three projects: Biodiversidade Bêntica Marinha no Estado de São Paulo- BIOTA/FAPESP-Bentos Marinho, Avaliação do Potencial Sustentável dos Recursos Vivos da Zona Econômica Exclusiva- REVIZEE/Score Sul-Bentos and Utilização Racional dos Ecossistemas Costeiros da Região Tropical Brasileira: Estado de São Paulo- INTEGRADO/Subprojeto Bentos. Study area enclosed the Brazilian States of Rio de Janeiro, São Paulo, Paraná, Santa Catarina and Rio Grande do Sul. Ophiuroids were sampled from sandy beaches, sea shores and seaweed as associated fauna, continental shelf and continental slope (until ca. 800 m depth). It was analyzed 28.942 ophiuroids from 39 species and 8 families, and the highest species richness occurred on the continental shelf. Amphiuridae was the most representative family, mainly on the internal continental shelf, followed by Ophiuridae, which mainly occurred in greater depth areas. Four species are new registers to Brazil, Amphiodia trychna, Ophiochiton ternispinus, Ophiura (Ophiuroglypha) clemens and Ophiomusium eburneum. Ophiomusium acuferum, Ophiactis lymani and Ophiactis savignyi were redescribed and discussed, clarifying identification mistakes. The study of the bathymetric distribution of the species showed that the observed patterns were very similar to that described in other studies, and species were grouped according to the environment and bathymetric zones in which they occurred. The reproductive pattern of the gonochoric Ophioderma januarii was described by gonadal histological analysis... (Complete abstract, click electronic address below)
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Ação antibacteriana antifúngica e antiparasitária de veneno de serpentes do gênero Bothrops e suas frações fosfolipase A2 e L-Aminoácido oxidase / Antibacterial, antifungal and antiparasitary action of Bothrops venoms and their fractions phospholipase A2 and L-aminoacid oxidase

Torres, Alba Fabiola Costa January 2009 (has links)
TORRES, Alba Fabiola Costa. Ação antibacteriana antifúngica e antiparasitária de veneno de serpentes do gênero Bothrops e suas frações fosfolipase A2 e L-Aminoácido oxidase. 2009. 101 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Fortaleza, 2009. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-12-14T14:38:42Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_afctorres.pdf: 2178640 bytes, checksum: 4644d2bdefaf8f6b7927d8188303e1ef (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2012-12-17T13:51:24Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_afctorres.pdf: 2178640 bytes, checksum: 4644d2bdefaf8f6b7927d8188303e1ef (MD5) / Made available in DSpace on 2012-12-17T13:51:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_afctorres.pdf: 2178640 bytes, checksum: 4644d2bdefaf8f6b7927d8188303e1ef (MD5) Previous issue date: 2009 / Snakes venoms contain biologically active substances primarily consisting of proteins (90-95%). Some of these present enzymatic activities, such as phospholipases A2 and the L-amino acid oxidases. In this study we verify the action of Bothrops leucurus (BleuTV) and Bothrops marajoensis (BmarTV) venoms, and fractions PLA2 (BleuPLA2 and BmarPLA2) and LAAO (BleuLAAO and BmarLAAO) on strains of bacteria, yeast, Leishmania sp and T. cruzi. The susceptibility of bacterial and yeast strains was analyzed through disc-diffusion assay, for determination of antimicrobial potential; and the microdilution method, for determination of MIC and MLC, with modifications. The antiparasitic activity was evaluated through of the culture treatment of parasites with different concentrations of venoms or their fractions. The forms promastigotes of Leishmania sp. had been cultived, during 72h, in NNN/Schneider media, 28ºC; and the forms epimastigotes of T. cruzi had been cultived in LIT media, during 5d, 28ºC. The macrophages were cultured in RPMI 1640 media, during 24h, 37ºC and 5% of CO2, with different concentrations of venoms or fractions. After, they were analyzed by MTT method. The results was statistically analyzed with t test or ANOVA followed the Bonferroni’s test, when appropriated, with p<0.05. The BmarLAAO was able to inhibit the growth of gram negative P. aeruginosa, of yeast C. albicans and of gram positive S. aureus; and the BleuTV inhibited the growth of S. aureus, being the inhibitions dose-dependent. The order of susceptibility of microorganisms tested against BmarLAAO was S. aureus > C. albicans > P. aeruginosa. On the other hand the BmarTV, BmarPLA2, BleuPLA2 and BleuLAAO had not provided any degree of inhibition on strains in study. The inhibitory effect was more significant on S. aureus presenting CIM= 50µg/mL and CLM=200µg/mL for BmarLAAO, and CIM=CLM=25µg/mL for the BleuTV. In concentrations greater than 1.56µg/mL BmarLAAO was able to inhibit the growth of promastigotes forms of L. chagasi and L.amazonensis, after 72h of culture. The IC50 values were 2.55µg/mL for L. amazonenis, and 2.86 µg/mL for L. chagasi. BmarTV and BleuTV also provided significant inhibition of the parasitic growth, with an IC50 value of 86.56 µg/mL for L. amazonensis and 79.02 µg/mL for L. chagasi, when treated with BmarTV; and 5.49µg/mL for L. amazonensis and 1.94µg/mL for L. chagasi, when treated with BleuTV. The venoms and BmarLAAO showed inhibitory effect on epimastigotes forms of T. cruzi. The IC50 value for BleuTV, BmarTV and BmarLAAO where, respectively 1.14µg/mL, 24.19µg/mL and 0.89µg/mL.This effects presented behavior dose-dependent. The fractions BmarPLA2, BleuPLA2 and BleuLAAO had not been capable to promote any inhibition on the growth of these parasites. The BmarLAAO, BmarTV and BleuTV presented low toxicity in studied concentrations. In conclusion, the whole venoms as well as the L-amino acid oxidase from Bothrops marajoensis showed to be capable to interfere in the growth of several microorganisms as S.aureus, Candida albicans, Pseudomonas aeruginosa, Leishmania sp. and T. cruzi. / Os venenos de serpentes contem substâncias biologicamente ativas, primariamente consistindo de proteínas (90-95%). Algumas delas apresentam atividade enzimática como as fosfolipases A2 e L-aminoácido oxidase. O presente estudo verificou a ação dos venenos de Bothrops leucurus (BleuVT) e Bothrops marajoensis (BmarVT), e suas frações PLA2 (BleuPLA2 e BmarPLA2) e LAAO (BleuLAAO e BmarLAAO) sobre cepas de bactéria, C. albicans, Leishmania sp e T. cruzi, bem com sua toxicidade sobre macrófagos murinos. A susceptibilidade das cepas bacterianas e fúngica foi analisada através do método de difusão em ágar, para determinação do potencial antimicrobiano; e microdiluição em caldo, para determinação da CIM e CLM, com modificações. A atividade antiparasitária foi avaliada através do tratamento das culturas de parasitos com diferentes concentrações dos venenos ou de suas frações. As formas promastigotas de Leishmania sp. foram cultivadas, durante 72h, em meio NNN/Schneider a 28ºC; e as formas epimastigotas de T. cruzi foram cultivadas em meio LIT, durante 5 dias, a 28ºC. Os macrófagos foram cultivados em meio RPMI 1640, em presença de diferentes concentrações dos venenos e frações, durante 24h, e submetidos ao ensaio com MTT. Os resultados foram estatisticamente analisados através do teste t ou ANOVA seguida do teste Bonferroni, quando apropriado, com p<0.05. A BmarLAAO foi capaz de inibir o crescimento bacteriano do Gram-negativo P. aeruginosa, da levedura C. albicans e do Gram-positivo S. aureus; e o BleuTV inibiu o crescimento de S. aureus, sendo a inibição dose-dependente. A ordem de susceptibilidade dos microorganismos testados com BmarLAAO foi S. aureus > C. albicans > P. aeruginosa. Por outro lado o BmarTV, BmarPLA2, BleuPLA2 e BleuLAAO não apresentaram nenhum grau de inibição sobre as cepas em estudo. O potencial inibitório foi mais significante sobre S. aureus apresentando CIM= 50µg/mL e CLM=200µg/mL para BmarLAAO, e CIM=CLM=25µg/mL para BleuTV. Em concentrações maiores que 1.56µg/mL a BmarLAAO foi capaz de inibir o crescimento de formas promastigotas de L. chagasi e L.amazonensis, sendo os valores de IC50, após 72h de cultivo, para L. amazonenis, 2.55µg/mL e 2.86 µg/mL para L. chagasi. BmarTV e BleuTV também apresentaram significante inibição sobre o crescimento parasitário, sendo os valores de IC50 86.56 µg/mL para L. amazonensis e 79.02µg/mL para L. chagasi, quando tratado com BmarTV; e 5.49µg/mL para L. amazonensis e 1.94µg/mL para L. chagasi, quando tratado com BleuTV. Os venenos e BmarLAAO mostraram efeito inibitório sobre formas epimastigotas de T. cruzi. Os valores de IC50 para BleuTV, BmarTV e BmarLAAO foram, respectivamente, 1.14µg/mL, 24.19µg/mL e 0.89µg/mL. As frações BmarPLA2, BleuPLA2 e BleuLAAO não foram capazes de promover nenhum efeito inibitório sobre os parasitos em estudo. O BmarLAAO , BmarTV e BleuTV apresentaram baixa toxicidade sobre macrófagos nas concentrações estudadas. Em conclusão, os veneno de B. leucurus e de B. marajoensis, bem como a L-aminoácido oxidase de Bothrops marajoensis mostraram ser capazes de interferir no crescimento de diferentes microorganismos como S.aureus, C. albicans, P. aeruginosa, Leishmania sp. e T. cruzi.
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Efeitos biológicos e caracterização inicial da peçonha da serpente Philodryas nattereri steindachner 1870 / Biological effects and initial characterization of snake venom Philodryas nattereri steindachner 1870

Nery, Marinetes Dantas de Aquino January 2012 (has links)
NERY, Marinetes Dantas de Aquino. Efeitos biológicos e caracterização inicial da peçonha da serpente Philodryas nattereri steindachner 1870. 2012. 206 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortleza, 2012. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2013-06-06T13:10:33Z No. of bitstreams: 1 2012_tese_mdanery.pdf: 7462167 bytes, checksum: b3210d2007bbb99f761f89651d8fe108 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes(erikaleitefernandes@gmail.com) on 2013-06-06T13:14:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_tese_mdanery.pdf: 7462167 bytes, checksum: b3210d2007bbb99f761f89651d8fe108 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-06T13:14:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_tese_mdanery.pdf: 7462167 bytes, checksum: b3210d2007bbb99f761f89651d8fe108 (MD5) Previous issue date: 2012 / A peçonha da serpente Philodryas nattereri é uma mistura de proteínas e peptídeos tóxicos com diversas ações locais e sistêmicas importantes, similares às que ocorrem nos acidentes botrópicos. Os mecanismos envolvidos nas ações locais e sistêmicas desta peçonha são pouco conhecidos. O objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos renais, cardiovasculares, citotóxicos e a identificação molecular da peçonha bruta. O teor proteíco total da peçonha foi de 85-90% de proteínas. Foram utilizados ratos Wistar nos experimentos de perfusão de rim isolado, em que o orgão foi perfundido com a peçonha da serpente Philodryas nattereri em diversas concentracões para se determinar as possíveis alterações em parâmetros funcionais, além de alterações vasculares em anel de aorta e pressão arterial. A peçonha foi utilizada em células epiteliais de túbulos renais de cachorro (MDCK) e macrófago peritonial de rato (RAW) e mensurada por pletismografia. O edema de pata, as contorções abdominais e a injeção intramuscular foram realizados em camundongos Swiss. A peçonha foi testada em cepas de bactérias Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella choleraesuis subsp, Staphylococcus aureus e as culturas foram diluidas 100x. Para a determinação do número de cromossomos da serpente Philodryas nattereri e Philodryas olfersil, utilizou-se uma cultura temporária de leucócitos. Da glândula de Duvernoy construiu-se uma Biblioteca de cDNA com o objetivo de identificar seus genes. A peçonha bruta foi submetida a RMN (Ressonância Magnética Nuclear). Os resultados encontrados demonstraram que a peçonha da Philodryas nattereri promoveu alterações em todos os parâmetros renais estudados, principalmente na diminuição da pressão renal (PP) e da resistência vascular renal (RVR), assim como um aumento do fluxo urinário (FU) e do ritmo de filtração glomerular (RFG). O resultado mais relevante é que essa peçonha é altamente lesiva aos túbulos renais, sendo tal fato comprovado com a redução do percentual de transporte dos eletrólitos de sódio (Na+), (K+) e cloreto (CI¯) nas concentrações estudadas, independente da redução da PP. O clearance osmótico e as alterações nos glomérulos e túbulos com material proteíco e hemorrágico. As lesões foram observadas por análise histológica, mediante indícios de apoptose/ necrose e verificadas na cultura das células MDCK. A redução da pressão arterial e da frequência cardiaca parecem estar relacionadas ao relaxamento de vasos renais, cujos efeitos vasodilatadores foram comprovados nos protocolos de anel de aorta. A peçonha da Philodryas nattereri parece comprometer os túbulos renais, independentemente das ações vasculares. O edema de pata causado pela peçonha atingiu o máximo 2 horas após a inoculação e foi inibido pelo dexametasona e o soro anti-bothrops já a indometacina não foi capaz de interferir significativamente no edema. A injeção intramuscular de 50μg da peçonha produziu efeitos de desorganização das fibrilas musculares, hemorragia interfibrilar, edema infiltrado inflamatório e mionecrose dos tipos coagulativa e miolítica. Verificou-se que estas alterações diminuiram com o passar do tempo. As contorções abdominais causadas pela peçonha parecem ser tão agressivas quanto o acido acético quando comparado ao controle salino. A atividade da peçonha em cultura de bactérias foi significante para as culturas S. aureus, P. aeruginosa e Salmomela entretanto não apresentou significância para E. Coli. As serpentes Philodryas nattereri e Philodryas olfersii possuem um número de cromossomos 2n = 36. Da extração do RNAtotal da glândula da peçonha, junto com a enzima transcriptase reversa in vitro produziu-se RNAm transcrito a partir de vários genes diferentes. Assim, os DNAc clonados constituem uma biblioteca de cDNA com uma coleção de genes. Os resultados espectrofotômétrico de RMN da peçonha bruta da serpente Philodryas nattereri revelaram na identificação da presença de acoplamentos 13C, !H por comprimento de onda de rádio.
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Estudo da atividade enzimática e dos efeitos do veneno da serpente Bothropoides insularis sobre macrófagos RAW 264.7 in vitro

Menezes, Ramon Róseo Paula Pessoa Bezerra de January 2013 (has links)
MENEZES, Ramon Róseo Paula Pessoa Bezerra de. Estudo da atividade enzimática e dos efeitos do veneno da serpente Bothropoides insularis sobre macrófagos RAW 264.7 in vitro. 2013. 95 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2014-03-17T12:55:11Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_rrppbmenezes.pdf: 1516830 bytes, checksum: 86a400657ecf5d9f932cff467f9e5916 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2014-03-17T12:55:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_rrppbmenezes.pdf: 1516830 bytes, checksum: 86a400657ecf5d9f932cff467f9e5916 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-17T12:55:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_rrppbmenezes.pdf: 1516830 bytes, checksum: 86a400657ecf5d9f932cff467f9e5916 (MD5) Previous issue date: 2013 / Around the world, there are recorded over 3 million accident involving bites of venomous animals per year, of which 125 to 150 thousand culminate in death. In Brazil, most cases occur with snakes from Bothrops and Bothropoides genus, causing several local and systemic complications, such myotoxicity, disseminated intravascular coagulation, cytotoxicity, acute renal failure and sepsis. Bothropoides insularis is a snake from Queimada Grande Island, whose venom shows pronounced toxicity. However, its effect over cells with defense function remains unclear, as well as how these effects can influence the toxicity observed in vivo. The present study aimed to investigate the cellular changes induced by Bothropoides insularis whole venom (BinsVT) over murine macrophage from RAW 264.7 lineage. In this context, colorimetric tests were performed to determine proteolytic activity and the production of hydrogen peroxide in vitro. The results showed high catalytic activity in both tests, suggesting that the biological effects of this venom may be related to the presence of enzymes such metalloproteinases (svMPs) and L-amino acid oxidases (LAAOs) at concentrations relevant in these experimental conditions. The determination of the cytotoxic potential was conducted by MTT reduction assay, a method of assessing redox metabolism, after 2, 6, 12 and 24 hours of incubation. It was observed cytotoxic effect at high concentrations in a time-dependent way, with cell death more evident at 200 and 100 µg/mL after 12 and 24 hours of treatment. In lower concentrations, there was a gradual increase in cell viability, reaching around 200% of cell viability in groups treated for 24 hours. This result suggests that BinsVT possess proliferative effect over these cells. Then, lactate dehydrogenase (LDH) activity was determined in culture supernatants from experimental groups for investigation of cell lysis induced by BinsVT. It was observed a significant increase in enzymatic activity in all groups, suggesting the coexistence of fractions with cytotoxic and proliferative effect and that concentration and exposure time determine its outcomes. For morphological evaluation of RAW 264.7 cells after exposure to BinsVT, the experiments were performed on the surface of coverslips for staining with May-Grunwald Giemsa method. The experimental groups were analyzed by optical microscopy and the most representative morphological characteristics were photographed. Various morphological changes were observed, such as appearance of cellular debris and bare nuclei, vacuolated cells, reduced cell volume and increased cytoplasmic projections. Finally, the mechanism of cell death induced by BinsVT was assessed by flow cytometry, by staining with propidium iodide (PI) and annexin V-FITC. The analysis revealed the presence of apoptosis and necrosis, and the appearance of doubly labeled cells with Annexin-FITC and PI, indicating the occurrence of late apoptosis. In conclusion, BinsVT has a cytotoxic effect on RAW 264.7 cell, which necrotic and apoptotic mechanisms, besides stimulatory effect on these cells in dose-and time-dependent ways. These effects may be related to the enzymatic activities found in vitro. / Em todo o mundo, são registrados mais de 3 milhões de acidentes envolvendo picadas de animais peçonhentos por ano, das quais 125 a 150 mil culminam em óbito. No Brasil, a maioria dos casos ocorre com serpentes dos gêneros Bothrops e Bothropoides, provocando uma grande variedade de complicações locais e sistêmicas, dentre os quais se destacam efeito mionecrótico, coagulação intravascular disseminada, citotoxicidade, insuficiência renal aguda e sepse. A serpente Bothropoides insularis é uma espécie nativa da Ilha de Queimada Grande, cujo veneno apresenta efeito tóxico acentuado em diversos modelos experimentais. Entretanto, pouco é conhecido a respeito do efeito dessa peçonha sobre células com função de defesa, nem o quanto esse efeito pode influenciar na toxicidade observada in vivo. O presente trabalho teve como objetivo investigar as alterações celulares induzidas pelo veneno total da serpente Bothropoides insularis (BinsVT) sobre macrófagos murinos da linhagem RAW 264.7. Nesse contexto, foi realizada a determinação da atividade proteolítica e da produção de peróxido de hidrogênio in vitro de BinsVT através de reações colorimétricas. Os resultados demonstraram alta atividade catalítica em ambos os testes, sugerindo que os efeitos biológicos desse veneno podem estar relacionados à presença de enzimas como metaloproteinases (svMPs) e L-aminoácido oxidases (LAAOs) em concentrações relevantes nas condições experimentais adotadas. A determinação do potencial citotóxico foi realizada pelo método de redução do MTT, um teste de avaliação da capacidade oxirredutora das células, após 2, 6, 12 e 24 horas de incubação. Foi observado efeito citotóxico em altas concentrações de forma tempo-dependente, com morte celular mais pronunciada nas concentrações de 200 e 100 µg/mL após 12 e 24 horas de tratamento. Nas menores concentrações estudadas, ocorreu um aumento gradativo da viabilidade celular, com valores percentuais em torno de 200% em relação ao grupo controle nos grupos tratados por 24 horas. Esse resultado sugere a presença de efeito proliferativo de BinsVT sobre essa linhagem celular. Em seguida, a atividade da enzima lactato desidrogenase (LDH) no sobrenadante de cultivo dos grupos experimentais foi determinado para investigação de lise celular induzida por BinsVT. Foi verificado aumento significativo da atividade dessa enzima em todos os grupos testados, sugerindo a coexistência de frações com efeito proliferativo e citotóxico, e a concentração e o tempo de exposição do veneno determinam qual irá prevalecer. Para avaliação morfológica das células RAW 264.7 após exposição à substância em estudo, os experimentos foram realizados na superfície de lamínulas, para coloração com May-Grunwald Giemsa. Os grupos experimentais foram analisados por microscopia óptica e as características morfológicas mais representativas foram fotomicrografadas. Foram observadas diversas alterações morfológicas, tais como aparecimento de fragmentos celulares e núcleos desnudos, células vacuolizadas, redução do volume celular e aumento de projeções citoplasmáticas. Por fim, o mecanismo de morte celular induzida por BinsVT foi avaliado por citometria de fluxo, pela marcação com o iodeto de propídio (PI) e a anexina V-FITC. A análise revelou a presença de envolvimento necrótico e apoptótico no efeito citotóxico da substância, além do aparecimento de células marcadas duplamente com PI e anexina-FITC, indicando a ocorrência de apoptose tardia. Em conclusão, BinsVT apresenta efeito citotóxico sobre macrófagos RAW 264.7, com aparente envolvimento de necrose e apoptose, além de provável efeito estimulatório sobre essas células, de forma concentração- e tempo-dependente. Esses efeitos podem estar relacionados às atividades enzimáticas encontradas in vitro.
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Venômica e antivenômica de Bothrops erythromelas : estudo da variação intraespecífica / Venomics and antivenomics of the Bothrops erythromelas : study of intraspecific variation

Jorge, Roberta Jeane Bezerra January 2015 (has links)
JORGE, Roberta Jeane Bezerra. Venômica e antivenômica de Bothrops erythromelas : estudo da variação intraespecífica. 2015. 131 f. Tese (Doutorado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2015-03-06T13:00:26Z No. of bitstreams: 1 2015_tese_rjbjorge.pdf: 8490082 bytes, checksum: d6ca5417614b4fb1e727b7db3ef1d01d (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2015-03-06T13:02:35Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_tese_rjbjorge.pdf: 8490082 bytes, checksum: d6ca5417614b4fb1e727b7db3ef1d01d (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-06T13:02:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_tese_rjbjorge.pdf: 8490082 bytes, checksum: d6ca5417614b4fb1e727b7db3ef1d01d (MD5) Previous issue date: 2015 / ABSTRACT Bothrops erythromelas snake is a species of medical importance responsible for snakebites, predominantly in the Northeast of B razil. This study aimed to conduct a comparative proteomic study of venoms pool of this species from five geographical regions of the Northeast: Ceará, Pernambuco, Juazeiro, Paraíba and Itaparica Island. In addition, we investigated the ability of Bothrops antivenom (SAB) of the Vital Brazil Institute and polyspecific serum (BCL) of Costa Rica to neutralize the venoms from these populations (antivenomics) and the ability to neutralize the in vivo haemorrhagic activity of venom. Two - dimensional electrophores is (2DE) showed similar patterns of protein distributed in the range of 14 - 95 kDa molecular mass and isoelectric points ranging from 4 to 8.5. Thirty to forty fractions were collected by Reversed Phase High Performance Liquid Chromatography (RP - HPLC). Each chromatographic fraction collected manually were analyzed by polyacrylamide gel electrophoresis - SDS (SDS - PAGE) and protein bands were excised and subjected to venomic analysis resulting in the identification of approximately 65 proteins and 8 species of peptides belonging to 12 protein families (Bradykinin - Potentiating Peptides (BPPs), Snake Venom Vascular Endothelial Growth Factor (svVEGF), Phospholipase A 2 , Serine Preotease, Metalloproteases class I and class III (PI and PIII - Symp), Disintegrins and Disintegrin - like and Rich in Cysteine domains, C - type Lectins, Nucleotidases (5' - nucleotidase; 5'NT and Phosphodiesterase; PDE), Secretory Proteins rich in Cysteine (CRISP) and snake venoms Phospholipase B. Through this work it was shown that the proteomes of venoms of B. erythromelas of different regions of Northeast are similar and seem to be quite kept according to their geographical distribution, although they contain peculiar differences such as the presence of CRISP detected only in the venoms of Pern ambuco and 5 'NT in the population of Juazeiro; and PDEs only in proteomes of populations of Ceará and Pernambuco and PLB in Ceará, Juazeiro and Itaparica Island. The antivenomics results showed that SAB pentavalent serum immunoreactivity is similar across the five populations and more efficient compared to the polyvalent BCL. However, it can be seen that especially low molecular weight fractions are not efficiently recognized by both antivenoms. Although differences were shown in their neutralization effic acy, both were effective in neutralizing antivenom hemorrhagic activity. Despite the B.erythromelas snake inhabit acomprehensivegeographical area , the five populations showed similar composition, displaying a highly conserved profile of representative venom protein classes. Therefore, this study assigned all proteins in the venom of B. erythromelas that have been characterized in the literature (BPP, PLA2 Asp49, PIII - Symp and svVEGF) and provided additional information to the presence of Serine Proteases and C - type Lectins and other minor or specific components (PDE, 5'NT, PLB, CRISP). / UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEARÁ FACULDADE DE MEDICINA DEPARTAMENTO DE FISIOLOGIA E FARMACOLOGIA PÓS - GRADUAÇÃO EM FARMACOLOGIA ROBERTA JEANE BEZERRA JORGE VENÔMICA E ANTIVENÔMICA DE Bothro p s eryth r omelas : ESTUDO DA VARIAÇÃO INTRAESPECÍ FICA . ORIEN TADORA: HELENA SERRA AZUL MONTEIRO CO - ORIENTADOR : JUAN JOSÉ CALVETE CHORNET Fortaleza 2015 ROBERTA JEANE BEZERRA JORGE VENÔMICA E ANTIVENÔMICA DE Bothro ps eryth r omelas : ESTUDO DA VARIAÇÃO INTRAESPECIFICA . Tese de Doutorado apresentada ao Cur so de Pós - G raduação em Farmacologia da Universidade Federal do Ce ará para obtenção do titulo de Doutor em Farm a cologia ORIENTADORA: HELENA SERRA AZUL MONTEIRO CO - ORIENTADOR : JUAN JOSÉ CALVETE CHORNET Fortaleza 2015 Dados Internacionais de Catalogação na Publicação Universidade Federal do Ceará Biblioteca de Ciências da Saúde J71v Jorge, Roberta Jeane Bezerra. Venô mica e Antivenômica de Bothrops erythromelas : estudo da variação intraespecífi ca. / Roberta Jeane B ezerra Jorge. – 2015. 130 f.: il. color., enc.; 30 cm. Tese (doutorado) – Universidade Federal do Ceará, Faculdade de Medicina, Departamento de Fisiologia e Farmacologia, Programa de Pós - Graduação em Farmacologia, Doutorado em Farmacologia, Fortaleza, 201 5. Área de Concentração: Farmacologia. Orientação: Profa. Dra. Helena Serra Azul Monteiro. Co - Orientação: Prof. Dr. Juan José Calvete Chornet. 1. Bothrops. 2. Proteômica. 3. Venenos de Serpente. I. Título. CDD 615.942 A os meus pais Nádja e Roberto e ao meu irmão Júnior. AGRADECIMENTOS A Deus, minha força maior e inexaurível . A os meus pais pelo que sou hoje. A todos meus familiares e amigos pelo companheirismo e presteza, seria impossível e a té passível de cometer algum esquecimento citar o nome de todos eles, mas cada um sabe o quanto sou grata e que podem sempre contar comigo . Aos que contribuíram diretamente para a realização deste trabalho: M inha orientadora P rofa Dra Helena Serra Azul M onteiro e ao meu co - orientador Prof . Dr. Juan José Calvete e a sua equipe do Laboratório de Ve nômica y Proteinómica Estructural do Instituto de Biomedicina de Valencia e aos grandes amigos que fiz no período de estágio de doutorado na Espanha . A todos os colaboradores deste trabalho no Brasil, Espanha e Costa Rica . A todos do Laboratório de Farmacologia Venenos e Toxina s (LAFAVET) , aos companheiros científicos, em especial aos amigos que fiz e a Pós - graduação em Farmacologia da Universidade Federal do Cea rá, os quais me proporcionaram crescimento profissional e pessoal. A Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior ( CAPES ) pela concessão da bolsa de Doutorado Sanduiche e m Valencia - Espanha . Ao Conselho Nacional de Pesquisa (CNPq) pelo apoio financeiro . “ Entrega teu caminho ao S enhor, confia nele , e ele o fará ” Salmo 37:5 RESUMO A serpente Bothrops erythromelas é uma espécie de importância médica responsável por acidentes ofídicos, com predominância no N ordeste do Brasil. O presente trabalho teve como objetivo realizar um estudo proteômico comparativo do pool de venenos desta espécie procedentes de cinco regiões geográficas do Nordeste: Ceará, Pernambuco, Juazeiro, Paraíba e Ilha de Itaparica. Além disso, foi investigada a capacidade do soro antibotrópico (SAB) do Instituto Vital Brazil e soro poliespecífico (BCL) da Costa Rica em neutralizar os venenos provenientes dessas populações através da antivenômica e a capacidade de neutralização frente à atividad e hemorrágica in vivo . A eletroforese bidimensional (2DE) mostrou padrões similares de proteínas distribuídas no intervalo de 14 - 95 kDa de massa molecular e pontos isoelétricos variando de 4 - 8,5. Trinta a quarenta frações foram recolhidas por meio de Cro matografia Líquida de Alta Eficiência em Fase Reversa (RP - HPLC). Cada fração cromatográfica coletada manualmente foi analisada por eletroforese em gel de poliacrilamida – SDS ( SDS - PAGE) e as bandas de proteínas foram excisadas e submetidas à análise venômi ca que resultaram na identificação de aproximadamente 65 proteínas e 8 espécies de peptídeos pertencentes a 12 famílias de proteínas de venenos de serpentes: (Peptídeos Potenciadores de Bradicinina (BPPs), Fator de Crescimento Endotelial Vascular de Veneno de Serpente (svVEGF), Fosfolipase A 2 , Serinoproteases, Metaloproteases da classe I e da classe III (PI e PIII – SVMP), Desintegrinas e Domínios tipo Desintegrina e rico em Cisteínas, Lectinas do tipo C, Nucleotidases (5' - nucleotidase; 5’NT e Fosfodiester ase; PDE), Proteínas Secretórias Ricas em Cisteína (CRISP) e Fosfolipase B). Através desse trabalho foi demonstrado que os proteomas dos venenos das B. erythromelas das diferentes regiões do Nordeste são similares e parecem ser bastante conservados de acor do com sua distribuição geográfica, embora contenham diferenças peculiares tais como, a presença de CRISP detectadas apenas nos venenos de Pernambuco e da 5’ NT na população de Juazeiro; assim como PDEs apenas nos proteomas das populações do Ceará e Pernam buco e da PLB no Ceará, Juazeiro e Ilha de Itaparica. Os resultados da antivenômica mostraram que a imunorreatividade do soro pentavalente SAB é similar frente às cinco populações e mais eficiente em relação ao polivalente BCL. No entanto, pode - se observar especialmente que as frações de baixo peso molecular não são reconhecidas pelos dois antivenenos de forma eficiente. Embora tenham mostrado diferenças na sua eficácia de neutralização, ambos os antivenenos foram eficazes na neutralização da atividade hemo rrágica in vivo . Apesar da serpente de B. erythromelas habitar uma abrangente área geográfica, as cinco populações estudadas apresentaram composição semelhante, exibindo um perfil altamente conservado das classes das proteínas representativas do veneno. Po rtanto, este estudo identificou as proteínas do veneno de B. erythromelas já caracterizadas na literatura (BPP, PLA 2 Asp49, PIII - SVMP e svVEGF) e forneceu informações adicionais para a presença de Serinoproteases e Lectinas do tipo C e de outros component es minoritários ou específicos (PDE, 5’NT, PLB, CRISP).
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Estudo dos efeitos renais do veneno da serpente Crotalus durissus collilineatus / Study about renal effects of Crotalus durissus collilineatus snake venom

Amora, Daniela Nascimento January 2005 (has links)
AMORA, Daniela Nascimento. Estudos dos efeitos renais do veneno da serpente Crotalus durrissus collilineatus. 2005. 100 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2005. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-03-09T16:25:34Z No. of bitstreams: 1 2005_dis_dnamora.pdf: 2079060 bytes, checksum: 4c0e0d1661e484a80753314f168cfcd4 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-03-12T12:12:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2005_dis_dnamora.pdf: 2079060 bytes, checksum: 4c0e0d1661e484a80753314f168cfcd4 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-03-12T12:12:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2005_dis_dnamora.pdf: 2079060 bytes, checksum: 4c0e0d1661e484a80753314f168cfcd4 (MD5) Previous issue date: 2005 / Crotalus durissus collilineatus is a snake usually found in semideciduous forest, the Cerrado region and its bites constitutes an important health problem. The most serious systemic change and primary cause of death is acute renal failure although the mecanisms of the damaging effects are not totally understood. We investigated the biological effects promoted by Crotalus durissus collilineatus crude venom and its fractions crotoxin and phopholipase A2. The toxic effects of C d collilineatus crude venom were evaluated by the histopathological analysis of organs such as heart, kidney, brain, lung and liver. Wistar rats were inoculated intraperitoneally with C d collilineatus crude venom. The liver showed steatosis and microvacuolation.The other organs showed normal morphological aspects. Renal effects were evaluated by the isolated perfused rat kidney method.The crude venom used at the lowest dose (10µg) increased perfusion pressure (PP), urinary flow (UF), and glomerular filtration rate (GFR), with maximal effect at 120min (PP: control(120) 110.3+/-3.69; venom(120) 126.8+/-10.2; UF: control(120) 0.19+/-0.03; venom(120) 0.23+/-0.06; GFR: control(120) 0.79+/-0.07; venom(120) 1.17+/-0.4). There was no effect on the percent of sodium tubular transport (%TNa+), the percent of potassium tubular transport (%TK+) and the percent of chloride tubular transport (%TCl-) The highest dose of the crude venom (30µg) caused a significantly decrease in PP (control(120) 110.3±3.69; venom(120) 96.7±8.1), RVR (control(120) 6.42±0.78; venom(120)4.8±0.56), UF (control(120) 0.19±0.03; venom(120) 0.12±0.01) and GFR (control(120) 0.79±0.07; venom(120)0.53±0.09). There was not effect on the percent of electrolytes tubular transport (%TNa+, %TK+ and %TCl-). Crotoxin (10mcg) produced a decrease in GFR (control(120) 0.79±0.07; crotoxin(120) 0.31±0.10), while PP, RVR and UF remained stable. Crotoxin also reduced %TK+ (control(120) 69.94±6.49; crotoxin(120) 33.28±4.78) and %TCl- (control(120) 79.53±2.67; crotoxin (120) 64.62±6.93) with maximal effect at 120min. Kidney perfused with phospholipase A2 (PLA2) showed a decrease in GFR (control(120) 0.79±0.07; PLA2 (120) 0.52±0.07) at 120min, whereas PP, RVR, UF and %TNa+ remained stable. PLA2 also reduced %TK+ (control(120) 69.94±6.49; PLA2 (120) 56.26±6.81) and %TCl- (control(60) 82.25±2.72; PLA2 (60) 75.04±4.26) at 60min. These results altogether indicate that Crotalus durissus collilineatus venom caused significative alterations in the renal parameters as well as hepatic damage. / A serpente Crotalus durissus collilineatus é encontrada na região do Cerrado e o acidente causado por esta espécie constitui um problema de saúde pública. A insuficiência renal aguda é a alteração sistêmica mais séria, apesar dos seus mecanismos não serem completamente esclarecidos. O objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos biológicos produzidos pelo veneno bruto de Crotalus durissus collilineatus e pelas frações crotoxina e fosfolipase A2. Foi realizado o estudo da toxicidade aguda do veneno bruto de C d collilineatus, através da análise histológica de coração, cérebro, rins, pulmões e fígado de ratos tratados com doses crescente do veneno. Nesse estudo foi observada a presença de alterações hepáticas como microvacualização e esteatose, enquanto os demais órgãos apresentaram aspectos normais. Os efeitos renais foram avaliados através do método de perfusão de rim isolado de rato. O veneno bruto, usado na dose de 10µg, causou um aumento na pressão de perfusão (PP), no fluxo urinário (FU) e no ritmo de filtração glomerular (RFG), com efeito máximo aos 120min (PP: controle(120) 110,3+/-3,69; veneno(120) 126,8+/-10,2;FU: controle(120) 0,19+/-0,03; veneno(120) 0,23+/-0,06; RFG: controle(120) 0,79+/-0,07; veneno(120) 1,17+/-0,4). Essa dose não produziu alterações no transporte tubular de sódio (%TNa+), potássio (%TK+) e de cloreto (%TCl-). A dose mais elevada de veneno bruto (30µg) causou um decréscimo significativo, com efeito máximo, aos 120min, na PP(controle(120) 110,3+/-3,69; veneno(120) 96,7+/-8,1), na RVR (controle(120) 6,42+/-0,78; veneno(120) 4,8+/-0,56), no FU (controle(120) 0,19+/-0,03; veneno(120) 0,12+/-0,01) e no RFG (controle(120) 0,79+/-0,07; veneno(120) 0,53+/-0,09). Não ocorreram alterações no transporte tubular de eletrólitos. A fração crotoxina não produziu alterações no RFG (controle(120) 0,79+/-0,07; crotoxina(120) 0,31+/-0,10). Esta fração também reduziu os %TK+ (controle(120) 69,94+/-6,49; crotoxina(120) 33,28+/-4,78) e %TCl- (controle(120) 79,53+/-2,67, crotoxina(120) 64,62+/-6,93). O grupo perfundido com FLA2 apresentou um decréscimo no RFG (controle(120) 0,79+/-0,07; FLA2 (120) 0,52+/-0,07), enquanto a PP, a RVR, o FU e o %TNa+ permaneceram estáveis. Foram observadas reduções no %TK+ aos 120min (controle(120) 69,94+/-6,49; FLA2(120) 56,26+/-6,81) e aos 60min, no %TCl- (controle(60) 82,25+/-2,72; FLA2(60) 75,04+/-4,26). Foi observada degeneração hidrópico vacuolar e a presença de material proteináceo nos túbulos renais, na análise histológica dos rins perfundidos tanto com veneno bruto quanto com as frações. Estes resultados indicam que o veneno de Crotalus durissus collilineatus causou alterações significativas nos parâmetros renais e nos aspectos morfológicos hepáticos.

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