O vírus da anemia das galinhas (CAV) pode causar imunodepressão em galinhas de todas as idades e doença nos frangos jovens, a qual é caracterizada por severa anemia, atrofia da medula óssea e hemorragias. A doença clínica é rara hoje, porém a forma subclínica é freqüentemente encontrada em criações comerciais e resulta num considerável decréscimo do desempenho. O CAV apresenta variabilidade genética, entretanto, em relação às amostras brasileiras do CAV, pouco ou quase nada desta variabilidade é conhecida. O presente trabalho descreve um protocolo de Nested-PCR para a detecção do CAV diretamente de amostras clínicas e analisa filogeneticamente as seqüências nucleotídicas das amostras positivas buscando verificar se a patologia apresentada por estas está relacionada com a variabilidade genética. Para a extração de DNA, o método baseado em tiocianato de guanidina mostrou-se mais eficiente e prático de executar que os demais testados. Foi selecionado um par de primers que amplifica uma região de 664 pb do gene vp1 e outro par que amplifica uma região interna de 539 pb para a realização da Nested-PCR. A especificidade dos primers foi avaliada utilizando amostras de lotes controlados para CAV e 30 diferentes isolados de vírus e bactérias causadoras de doenças em galinhas, as quais não geraram produto de amplificação. A sensibilidade foi determinada a partir de diluições seriadas da vacina comercial para o CAV. A Nested-PCR mostrou ser mais sensível do que a PCR e foi capaz de detectar 0,16 DICC50% da cepa vacinal. Além disso, a Nested-PCR detectou DNA viral em tecidos, soro e cama aviária de lotes com e sem sintomas clínicos.O produto de amplificação de 539 pb do gene vp1 de 44 amostras, provenientes de diferentes Estados produtores de frangos do Brasil, foi seqüenciado e foram encontradas 10 novas seqüências nucleotídicas do CAV. Estas 10 seqüências nucleotídicas foram analisadas filogeneticamente pelo método de distância neighbour joining com 1000 replicações o qual, mostrou que não houve correlação entre a patogenia apresentada nos animais e os grupos genéticos. Estas seqüências nucleotídicas também foram comparadas com 30 cepas de CAV isoladas em outros países e não foi observada correlação entre a distribuição geográfica e a variabilidade genética. Substituições de amino ácidos foram observadas em 9 posições sendo que, 65R substituindo o resíduo Q e 98F substituindo o resíduo Y ainda não haviam sido observadas. Conclui-se que, como técnica de detecção do CAV, o protocolo de Nested-PCR aqui descrito é mais sensível e menos trabalhoso do que o isolamento viral. As amostras Brasileiras de CAV possuem características filogenéticas similares às isoladas em outros países.

Orientador: Marilia de Freitas Calmon / Coorientador: Paula Rahal / Banca: Carolina Colombelli Pacca / Banca: Sebastião Roberto Taboga / Resumo: O Papilomavirus humano (HPV) é um dos vírus mais prevalentes entre as infecções sexualmente transmissíveis e está associado com doenças malignas. Os HPVs de alto risco possuem proteínas, denominadas de E6 e E7, caracterizadas como oncoproteínas devido aos seus papéis na transformação celular e na inativação de supressores de tumor. Um dos mecanismos usados na transformação celular pela proteína E6 do HPV de alto risco é a interação do seu domínio carboxi-terminal, PDZ, com domínios PDZs presentes em algumas proteínas celulares, destinando-as à degradação. Uma proteína que está associada com várias condições patológicas e tem domínio PDZ é a protease HtrA1. Esta proteína é pouco expressa em alguns cânceres, sugerindo um papel supressor de tumor. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da superexpressão de HTRA1 em linhagem celular HPV16 positiva (HF698) e HPV negativa (C33). As linhagens celulares foram transfectadas com vetor contendo a ORF de HTRA1 ou vetor vazio. A superexpressão do mRNA e proteína foi confirmada por qPCR e imuno-histoquímica, respectivamente. As linhagens celulares transfectadas foram submetidas a ensaio de formação de colônia, de viabilidade celular, de apoptose e ciclo celular. As células C33 superexpressando HtrA1 formaram significantemente menos colônias e apresentaram redução de viabilidade celular comparadas as células sem expressão de HtrA1. Diferentemente, na linhagem HPV positiva ocorreu aumento no número de colônias nas células superexpressando HtrA1 e não houve diferença no ensaio de viabilidade celular. Esses resultados sugerem que os diferentes padrões observados nas duas linhagens celulares são decorrentes da presença do HPV na HF698 e da ausência na C33. A fim de confirmar se o aumento do número de colônias nas células HF698 superexpressando HtrA1 é decorrente da interação dessa proteína com E6, foi produzida linhagem estável de C33 com ... / Abstract: The Human Papillomavirus (HPV) is one of the most prevalent virus among sexually transmitted infections and it is associated with some malignancies. High risk HPVs contain proteins, E6 and E7, characterized by oncoproteins due to their roles in cellular transformation and suppressor tumor inactivation. One of the mechanisms used in cell transformation by E6 protein from high-risk HPVs is the interaction of its carboxy-terminal domain, known as PDZ, with PDZs domains present in some cellular proteins, triggering them to degradation. A protein that is associated with various pathological conditions and has PDZ domain is the protease HtrA1. This protein is poorly expressed in some cancers, suggesting its tumor suppressor role. The aim of this study was to evaluate the effect of the HtrA1 overexpression in HPV 16 positive (HF698) and HPV negative (C33) cell lines. The cell lines were transfected with vector containing the HTRA1 ORF or empty vector. The mRNA and protein overexpression were confirmed by qPCR and immunohistochemical, respectively. The cell lines transfected were subjected to cell proliferation, viability, apoptosis and cell cycle assays. C33 cells expressing HtrA1 presented significantly fewer colonies and showed reduced viability than cells without HtrA1 expression. On the other hand, in HPV-positive cell line there was an increase in the number of colonies in cells expressing HtrA1 and there was no difference in the cell viability assay. These results suggest that the different patterns observed between the two cell lines studied may be due to the HPV presence in HF698 and its absence in C33 cells. To confirm if the increase in the number of colonies in HPV positive cells (HF698) overexpressing HtrA1 arises from the interaction of this protein with E6, stable lines of C33 containing gene E6 were produced and subsequently performed cell proliferation assay. C33 cells overexpressing E6 and HTRA1 showed an increased number of ... / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-03-09Bitstream added on 2014-06-13T19:35:17Z : No. of bitstreams: 1 santana_vs_me_sjrp.pdf: 385683 bytes, checksum: ccbda8f1740d544806e6c55fd2801145 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-12-01T14:49:48Z: santana_vs_me_sjrp.pdf,Bitstream added on 2014-12-01T14:50:25Z : No. of bitstreams: 1 000610662.pdf: 4780545 bytes, checksum: 6398f15b690bb94e2d25e5daa3b06e45 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A região Amazônica apresenta extensas áreas de floresta e ecossistemas naturais, provendo condições favoráveis para a existência de muitos arbovírus. Mais de 200 arbovírus foram isolados na região Amazônica, e aproximadamente 40 estão associados a doenças humanas. Quatro dos 40 são considerados ser de importância para a saúde pública no Brasil: vírus da Dengue (sorotipos 1 a 4), Oropouche, Mayaro e Febre Amarela. Juntamente com os arbovírus, a malária é uma doença endêmica, e aproximadamente 98% dos casos estão restritos á região da Amazônia Legal. Este trabalho teve como objetivo analisar 111 amostras clínicas de soro de pacientes que residiam em Novo Repartimento (Pará), Porto Velho (Rondônia), Plácido de Castro (Acre) e Oiapoque (Amapá) previamente confirmados para malária. Para tal finalidade, foi utilizada a técnica de Multiplex-Nested-PCR e RT-Nested-PCR para a detecção e identificação dos principais arbovírus brasileiros, pertencentes aos gêneros Flavivirus, Alphavirus e Orthobunyavirus. Duas amostras de pacientes de Novo Repartimento foram positivas para Dengue sorotipo 2, e também, ambos tinham infecção por Plasmodium vivax . Apesar de dados escassos, infecções duplas por dengue e malária deveriam ser comuns em áreas onde ambas as doenças são co-endêmicas em muitas partes do mundo. Na região Amazônica Brasileira, esta situação provavelmente ocorre mais frequentemente que a detectada. Apesar de ambas as doenças causarem sintomas similares, e infecções simultâneas com dois agentes etiológicos podem resultar em uma doença com sintomas sobrepostos, e possivelmente, tanto o espectro clínico da doença e/ou o tratamento pode ser afetado. Neste contexto uma coinfecção por malaria e dengue não poderia ser descartada, e o diagnóstico deveria ser realizado concomitantemente para dengue e malária... / The Amazon region has extensive forested areas and natural ecosystems, providing suitable conditions to the existence of several aboviruses. Over 200 arboviruses were isolated in the Amazon region, and about 40 are associated to human diseases. Four out of 40 are considered to be of public health importance in Brazil: dengue virus (serotypes 1-4), Oropouche, Mayaro and Yellow Fever. Along with aboviruses, malaria is an endemic disease caused by protozoans Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax and Plasmodium malariae in Brazil, and about 98% of the cases are restricted to the Legal Amazon region. The aim of this study was to test 99 serum clinical samples from patients living in Novo Repartimento (Pará), Porto Velho (Rondônia), Plácido de Castro (Acre) and 12 plasma samples from patients living in Oiapoque (Amapá), previously confirmed for malaria. For this purpose, we used Multiplex-Nested-PCR and RT-Nested-PCR assays for detection and identification of the major Brazilian arboviruses, belonging to the genus Flavivirus, Alphavirus and Orthobunyavirus. We detected Dengue virus serotype 2 in two serum samples from patients living in Novo Repartimento, and both had active Plasmodium vivax infections. Despite scant data, dual dengue and malaria dual infections should be common in areas where both diseases are co-endemic in many places of the world. In the Amazon region, this situation is likely to occur more frequently than detected. In spite of having similar clinical findings, and simultaneous infections with two etiological agents can result in a disease with overlapped symptoms, possibly either clinical spectrum of the disease or treatment can be affected. In this context, concurrent dengue and malaria could not be ruled out, and diagnosis should be made concomitantly in febrile patients living or returning from areas where both diseases are co-endemic... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-03-04Bitstream added on 2014-06-13T20:16:32Z : No. of bitstreams: 1 lavezzo_lc_me_sjrp.pdf: 1608901 bytes, checksum: fe41b66f249b2bbe571fc89130581c47 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O Brasil é um país de dimensões continentais, com 8.512.000 km 2 , tem a maioria de seu território situado em área tropical, que associado a grande diversidade de flora e fauna, o que torna apropriada à ocorrência de zoonoses transmitidas por artropodes. Estudos sobre arbovírus na região, pelo Instituto Evandro Chagas, em 44 anos (1954-1998) identificaram um grande número de vírus, e pelo menos 187 diferentes arboviroses foram isoladas. A prevalência mundial de arboviroses cresceu dramaticamente nas últimas décadas, e nas áreas onde estas doenças são endêmicas, a transmissão por transfusão dificilmente é investigada. A preocupação com a transmissão de arboviroses, principalmente do Vírus Dengue (DENV), por transfusão sanguínea aumentou após a documentação da transmissão de West Nile Vírus (WNV) por transfusão nos EUA. DENV e WNV são semelhantes em alguns aspectos, o que suporta a hipótese de que dengue possa ser transmitida por transfusão sanguínea: são eficientemente transmitidos ao homem através da picada de mosquitos infectados; grande proporção das infecções é assintomática; níveis de viremia durante a fase de incubação pode exceder 106 virions por mL, e a transmissão de ambos foi documentada após transplante de órgão e em acidentes com profissionais da saúde. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi investigar a presença de arboviroses em 205 amostras clínicas de doadores de sangue da Região Amazônica e em amostras obtidas durante uma epidemia de Dengue, em 2006, na cidade de Tupã/SP. O RNA viral foi extraído, Multiplex-Nested-PCR foi realizada com o uso de primers gênero e espécie-específico para Flavivirus, Alphavirus, e, para a detecção e identificação do vírus Oropouche, realizou-se RT- Nested-PCR usando primers que se ligam no segmento S do genoma viral. Apesar da complexidade e número, a transmissão... / O Brasil é um país de dimensões continentais, com 8.512.000 km 2 , tem a maioria de seu território situado em área tropical, que associado a grande diversidade de flora e fauna, o que torna apropriada à ocorrência de zoonoses transmitidas por artropodes. Estudos sobre arbovírus na região, pelo Instituto Evandro Chagas, em 44 anos (1954-1998) identificaram um grande número de vírus, e pelo menos 187 diferentes arboviroses foram isoladas. A prevalência mundial de arboviroses cresceu dramaticamente nas últimas décadas, e nas áreas onde estas doenças são endêmicas, a transmissão por transfusão dificilmente é investigada. A preocupação com a transmissão de arboviroses, principalmente do Vírus Dengue (DENV), por transfusão sanguínea aumentou após a documentação da transmissão de West Nile Vírus (WNV) por transfusão nos EUA. DENV e WNV são semelhantes em alguns aspectos, o que suporta a hipótese de que dengue possa ser transmitida por transfusão sanguínea: são eficientemente transmitidos ao homem através da picada de mosquitos infectados; grande proporção das infecções é assintomática; níveis de viremia durante a fase de incubação pode exceder 106 virions por mL, e a transmissão de ambos foi documentada após transplante de órgão e em acidentes com profissionais da saúde. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi investigar a presença de arboviroses em 205 amostras clínicas de doadores de sangue da Região Amazônica e em amostras obtidas durante uma epidemia de Dengue, em 2006, na cidade de Tupã/SP. O RNA viral foi extraído, Multiplex-Nested-PCR foi realizada com o uso de primers gênero e espécie-específico para Flavivirus, Alphavirus, e, para a detecção e identificação do vírus Oropouche, realizou-se RT- Nested-PCR usando primers que se ligam no segmento S do genoma viral. Apesar da complexidade e número... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-19Bitstream added on 2014-06-13T18:50:20Z : No. of bitstreams: 1 ariede_jr_me_botfm.pdf: 465481 bytes, checksum: 176c1868eb3cbd83f7fadce9ed496bcc (MD5) / A detecção do RNA viral do VHC tem sido documentada em outros compartimentos biológicos além do soro e plasma de pacientes infectados pelo vírus, como nas plaquetas. No entanto, sua influência na terapia antiviral é desconhecida. Poucos estudos têm sido realizados na tentativa de avaliar a quantificação do RNA viral em outros compartimentos biológicos e a significância deste achado no resultado da terapia antiviral. Considerando que o VHC é carreado pelas plaquetas na circulação, a avaliação quantitativa do RNA viral neste compartimento biológico pode se mostrar distinta da observada no plasma.Realizar a avaliação comparativa in vitro do RNA do VHC plasmático e do RNA do VHC carreado à plaqueta e, realizar a avaliação comparativa da quantificação do RNA viral do VHC em plasma e plaquetas de pacientes com recidiva ao tratamento antiviral.Amostras de sangue periférico provenientes de pacientes infectados pelo VHC foram utilizadas para realização de dois experimentos. Experimento in vitro (repetido em triplicata) consistiu na separação de quatro alíquotas da mesma amostra, as quais foram submetidas a incubação a 37oC por 30xg por diferentes intervalos de tempo (0, 48, 96, 144h) e, posteriormente separadas para obtenção de plasma e pellet de plaquetas. A partir de cada uma destas frações foi extraído RNA viral, o qual foi utilizado como fonte para qPCR. Experimento in vivo: Foram acompanhados pacientes que iniciaram e finalizaram a terapêutica entre janeiro de 2011 a julho de 2012 e, dentre estes, os que apresentaram recidiva virológica ao tratamento antiviral estabelecido. Dos pacientes em recidiva virológica foram processadas amostras para a obtenção do plasma e pellet de plaquetas em dois momentos: no momento da recidiva virológica e, no momento imediatamente anterior (12 semanas anteriores... / Treatment for chronic hepatitis C is effective in about 50% of patients treated with exogenous interferon, which induces interferon-stimulated genes leading to endogenous interferon production. Integrins are involved in interferon production and structural modifications of them can be associated with altered function. Some integrins, expressed on the platelet membrane, show polymorphic antigenic determinants called human platelet antigens (HPA). The association between HCV infection and HPA-5b has already been demonstrated, in the same way the HPA profile could be associated with therapeutic response. This study aimed evaluates the association between the HPA-1, -3, -5 frequencies and therapy response in HCV-infected patients. HPA genotyping was performed in 168 HCV-infected patients by PCRSSP or PCR-RFLP. The patients were on interferon- (48.8%: 43.9% carriers of HCV genotype 1 and 56.1% non-1) or peginterferon (51.2%; 87.2% carriers of HCV genotype 1 and 12.8% non-1), both combined with ribavirin. Statistical analysis was performed using the proportional odds model. The genotypic frequency of HPA-1a/1b was significantly higher in the patients with therapeutic failure (odds ratio=3.58, 95% CI -1.18 – 10.82). The results suggest that the HPA-1a/1b genotype is associated with therapy failure... (Complete abstract click electronic access below)

Orientadora : Profª Drª Sonia Mara Raboni / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 29/10/2014 / Inclui referências / Área de concentração / Resumo: As infecções do trato respiratório (ITR) possuem etiologias distintas e variam de processos agudos como bronquites e pneumonias, podendo agravar condições crônicas como asma e doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC). O Serviço de Epidemiologia Hospitalar do Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná implantou como rotina, desde a pandemia por influenza em 2009, o sistema de notificação de casos de pacientes com síndrome respiratória aguda grave (SRAG). Dada a importância das diferentes infecções respiratórias já mencionadas, bem como a significativa interferência dessas na qualidade de vida dos pacientes, afetando questões cruciais como morbimortalidade, é importante que sejam realizados trabalhos de vigilância epidemiológica e acompanhamento de todos os casos suspeitos de pacientes hospitalizados com infecções respiratórias apresentando ou não SRAG. O presente estudo teve como objetivo avaliar a detecção de vírus respiratórios em pacientes hospitalizados com e sem notificação para SRAG no período de 1 ano, constituindo um estudo analítico, observacional, transversal com coleta retrospectiva de dados. Os resultados mostraram que houve menor frequência de febre (55,3%), tosse (63,4%), maior percentual de pacientes imunossuprimidos (35% vs. 12,3%) e de relato de tabagismo (17,9% vs. 3,8%) nos indivíduos não notificados, além da diferença entre os padrões radiológicos nos 2 grupos. O grupo não notificado apresentou também uma maior frequência de internamento em UTI, maior tempo de internação, bem como maior taxa de fatalidade. Houve mudança no padrão de vírus respiratórios encontrados, sendo rinovírus o mais frequente no grupo não notificado e o vírus sincicial respiratório no outro. No entanto o local de internação mais comum foi o serviço de emergência pediátrica em ambos. No total, 40 casos de SRAG não foram notificados pelo Serviço de Epidemiologia do hospital dentre todos os pacientes investigados e que foram submetidos à coleta com material encaminhado para o Laboratório de Virologia, o que representou 32,5% dos casos. A não notificação de tais casos provavelmente foi decorrente do não preenchimento de todos os critérios de SRAG, por falta de informação clínica. Portanto, necessita-se de total comunicação entre os serviços compreendendo as unidades de internação, o laboratório de virologia e o Serviço de Epidemiologia para que seja feita a identificação de todos os casos de SRAG atendidos dentro da instituição, possibilitando a notificação destes aos órgãos competentes, permitindo a adoção de medidas de controle sobre tais infecções. Palavras-chave: SRAG, ITR, vírus respiratórios, virologia, vigilância epidemiológica. / Abstract: Respiratory tract infections (RTI) present distinct etiologies and vary from acute processes, such as bronchitis and pneumonias, and could impair chronic conditions like asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD). The Hospital Epidemiology Division, Hospital de Clínicas, Universidade Federal do Paraná, has by routine, since the 2009 influenza pandemics, a notification system of all acute respiratory distress syndrome (ARDS) cases. Given the already mentioned importance of the various respiratory infections, as well as the significant interference of those infections on the patient quality of life, affecting crucial issues like morbimortality, it is important the epidemiologic vigilance and follow up of all inpatient with respiratory tract infections, whether or not presenting ARDS. The present study aimed to evaluate the detection of respiratory viruses in hospitalized patients with and without notification to ARDS over 1-year period, constituting an analytical, observational, cross-sectional study with retrospective data collection. The results showed that there were lower frequency of fever (55.3%), cough (63.4%), higher percentage of immunosuppressed patients (35% vs. 12.3%) and higher reporting of smoking (17.9% vs. 3.8%) in subjects not reported, in addition the difference among radiological patterns in the two groups. The not reported group had also an increased frequency of ICU hospitalization, longer hospital stays and higher fatality rate. There was a change in the pattern of respiratory viruses found, rhinovirus being more frequent in the not notified group and respiratory syncytial virus in the other. However, the most common setting of hospitalization was the pediatric emergency service in both. In total, 40 cases of ARDS have not been notified by the Hospital Epidemiology Division among all patients investigated, of which samples were drawn and the material sent to the Virology Laboratory, which represented 32.5% of cases. Failure to notify such cases was probably due to the failure to fulfill all the criteria for ARDS, for absence of clinical information. Thus, it requires total communication among the services comprising the inpatient units, the Virology Laboratory and Epidemiology Division to identify all cases of ARDS found within the institution, enabling the notification to the competent agencies allowing the adoption of control measures. Key words: ARDS, RTI, respiratory viruses, virology, epidemiologic vigilance.

Orientador: Rejane Maria Tommasini Grotto / Coorientador: Maria de Moura Campos Pardini / Banca: Giovanni Faria Silva / Banca: Ana Flavia Nacif Pinto coelho Pires / Resumo: A detecção do RNA viral do VHC tem sido documentada em outros compartimentos biológicos além do soro e plasma de pacientes infectados pelo vírus, como nas plaquetas. No entanto, sua influência na terapia antiviral é desconhecida. Poucos estudos têm sido realizados na tentativa de avaliar a quantificação do RNA viral em outros compartimentos biológicos e a significância deste achado no resultado da terapia antiviral. Considerando que o VHC é carreado pelas plaquetas na circulação, a avaliação quantitativa do RNA viral neste compartimento biológico pode se mostrar distinta da observada no plasma.Realizar a avaliação comparativa in vitro do RNA do VHC plasmático e do RNA do VHC carreado à plaqueta e, realizar a avaliação comparativa da quantificação do RNA viral do VHC em plasma e plaquetas de pacientes com recidiva ao tratamento antiviral.Amostras de sangue periférico provenientes de pacientes infectados pelo VHC foram utilizadas para realização de dois experimentos. Experimento in vitro (repetido em triplicata) consistiu na separação de quatro alíquotas da mesma amostra, as quais foram submetidas a incubação a 37oC por 30xg por diferentes intervalos de tempo (0, 48, 96, 144h) e, posteriormente separadas para obtenção de plasma e pellet de plaquetas. A partir de cada uma destas frações foi extraído RNA viral, o qual foi utilizado como fonte para qPCR. Experimento in vivo: Foram acompanhados pacientes que iniciaram e finalizaram a terapêutica entre janeiro de 2011 a julho de 2012 e, dentre estes, os que apresentaram recidiva virológica ao tratamento antiviral estabelecido. Dos pacientes em recidiva virológica foram processadas amostras para a obtenção do plasma e pellet de plaquetas em dois momentos: no momento da recidiva virológica e, no momento imediatamente anterior (12 semanas anteriores... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Treatment for chronic hepatitis C is effective in about 50% of patients treated with exogenous interferon, which induces interferon-stimulated genes leading to endogenous interferon production. Integrins are involved in interferon production and structural modifications of them can be associated with altered function. Some integrins, expressed on the platelet membrane, show polymorphic antigenic determinants called human platelet antigens (HPA). The association between HCV infection and HPA-5b has already been demonstrated, in the same way the HPA profile could be associated with therapeutic response. This study aimed evaluates the association between the HPA-1, -3, -5 frequencies and therapy response in HCV-infected patients. HPA genotyping was performed in 168 HCV-infected patients by PCRSSP or PCR-RFLP. The patients were on interferon- (48.8%: 43.9% carriers of HCV genotype 1 and 56.1% non-1) or peginterferon (51.2%; 87.2% carriers of HCV genotype 1 and 12.8% non-1), both combined with ribavirin. Statistical analysis was performed using the proportional odds model. The genotypic frequency of HPA-1a/1b was significantly higher in the patients with therapeutic failure (odds ratio=3.58, 95% CI -1.18 - 10.82). The results suggest that the HPA-1a/1b genotype is associated with therapy failure... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Paula Rahal / Coorientador: Mânlio Tasso de Oliveira Mota / Banca: Carolina Colombelli Pacca / Banca: Silvana Gisele Pegorin de Campos / Resumo: O carcinoma epidermóide de pênis (CEP) é um tumor epitelial invasivo relativamente raro com alta morbidade, decorrente da própria doença ou de seu tratamento. Pacientes sem tratamento geralmente vão a óbito dentro de dois anos após o diagnóstico, devido o descontrole loco-regional ou a metástases distantes. Nos últimos anos, tem sido constatado que a infecção pelo vírus do papiloma humano (HPV), de alto risco, é um dos principais fatores de risco para o desenvolvimento do CEP. Sabe-se que duas proteínas virais, E6 e E7, estão associadas ao desenvolvimento tumoral em outros tipos de carcinomas causados por HPV. Porém, no CEP, os mecanismos moleculares envolvidos na replicação viral e suas interações com a célula hospedeira ainda não estão bem esclarecidos. A proteína viral E6 está associada à degradação de p53 enquanto a proteína E7 está associada à desestabilização da via de fosforilação da proteína Rb, na qual a ciclina D1 e a proteína p16 estão estreitamente relacionadas. O objetivo deste projeto foi correlacionar a presença de HPV de alto risco com os níveis de expressão das proteínas celulares p53, p16 e ciclina D1 em amostras de CEP. Foi realizado estudo comparativo com 61 amostras de pacientes infectados por HPV de alto risco e pacientes sem infecção. Observou-se que em tecidos com HPV de alto risco há diminuição da expressão de p53 e ciclina D1 e aumento de expressão de p16 em relação às amostras negativas (p<0,05). Não existem muitos estudos sobre este tumor. O presente trabalho pode contribuir para uma maior compreensão deste tumor e permitindo melhores tratamentos e prognósticos do paciente, além de contribuir para a definição de novas metodologias para a distinção entre lesões associadas ou não ao HPV de alto risco / Abstract: Squamous cell carcinoma of the penis (SCCP) is a relatively rare invasive epithelial tumor with high morbidity due to the disease itself or its treatment. Untreated patients usually die within two years after diagnosis, due to the uncontrolled locoregional recurrence or distant metastases. In the last years, it has been observed that infection by the high risk human papilloma virus (HPV) is one of the main risk factors for SCCP development. It is known that the E6 and E7 viral proteins are associated with tumor development in other HPV associated carcinomas. However, about SCCP, the molecular mechanisms involved in viral replication and its interactions with the host cell are not well understood. The E6 viral protein is linked to the p53 cellular degradation whereas the E7 is linked with destabilization via phosphorylation of Rb protein, in which cyclin D1 and p16 are closely related. The goal of this project was to correlate the high-risk HPV presence with the expression levels of cellular proteins p53, p16 and cyclin D1 in SCCP samples. Comparative study was conducted with 61 samples from patients infected or not with high-risk HPV. It was observed that in high-risk HPV tissues there is down expression of p53 and cyclin D1 and overexpression of p16 when compared to negative samples (p <0.05). There are not many studies on this tumor. This study may contribute to a greater understanding of this tumor, allowing better treatments and prognoses for patients, and contribute to the development of new methodologies for the distinction between lesions associated or not with high-risk HPV / Mestre

Orientador: Maurício Lacerda Nogueira / Banca: Luiz Carlos de Mattos / Banca: Maria Roberta Fachini / Resumo: O Brasil é um país de dimensões continentais, com 8.512.000 km 2 , tem a maioria de seu território situado em área tropical, que associado a grande diversidade de flora e fauna, o que torna apropriada à ocorrência de zoonoses transmitidas por artropodes. Estudos sobre arbovírus na região, pelo Instituto Evandro Chagas, em 44 anos (1954-1998) identificaram um grande número de vírus, e pelo menos 187 diferentes arboviroses foram isoladas. A prevalência mundial de arboviroses cresceu dramaticamente nas últimas décadas, e nas áreas onde estas doenças são endêmicas, a transmissão por transfusão dificilmente é investigada. A preocupação com a transmissão de arboviroses, principalmente do Vírus Dengue (DENV), por transfusão sanguínea aumentou após a documentação da transmissão de West Nile Vírus (WNV) por transfusão nos EUA. DENV e WNV são semelhantes em alguns aspectos, o que suporta a hipótese de que dengue possa ser transmitida por transfusão sanguínea: são eficientemente transmitidos ao homem através da picada de mosquitos infectados; grande proporção das infecções é assintomática; níveis de viremia durante a fase de incubação pode exceder 106 virions por mL, e a transmissão de ambos foi documentada após transplante de órgão e em acidentes com profissionais da saúde. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi investigar a presença de arboviroses em 205 amostras clínicas de doadores de sangue da Região Amazônica e em amostras obtidas durante uma epidemia de Dengue, em 2006, na cidade de Tupã/SP. O RNA viral foi extraído, Multiplex-Nested-PCR foi realizada com o uso de primers gênero e espécie-específico para Flavivirus, Alphavirus, e, para a detecção e identificação do vírus Oropouche, realizou-se RT- Nested-PCR usando primers que se ligam no segmento S do genoma viral. Apesar da complexidade e número, a transmissão... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: O Brasil é um país de dimensões continentais, com 8.512.000 km 2 , tem a maioria de seu território situado em área tropical, que associado a grande diversidade de flora e fauna, o que torna apropriada à ocorrência de zoonoses transmitidas por artropodes. Estudos sobre arbovírus na região, pelo Instituto Evandro Chagas, em 44 anos (1954-1998) identificaram um grande número de vírus, e pelo menos 187 diferentes arboviroses foram isoladas. A prevalência mundial de arboviroses cresceu dramaticamente nas últimas décadas, e nas áreas onde estas doenças são endêmicas, a transmissão por transfusão dificilmente é investigada. A preocupação com a transmissão de arboviroses, principalmente do Vírus Dengue (DENV), por transfusão sanguínea aumentou após a documentação da transmissão de West Nile Vírus (WNV) por transfusão nos EUA. DENV e WNV são semelhantes em alguns aspectos, o que suporta a hipótese de que dengue possa ser transmitida por transfusão sanguínea: são eficientemente transmitidos ao homem através da picada de mosquitos infectados; grande proporção das infecções é assintomática; níveis de viremia durante a fase de incubação pode exceder 106 virions por mL, e a transmissão de ambos foi documentada após transplante de órgão e em acidentes com profissionais da saúde. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi investigar a presença de arboviroses em 205 amostras clínicas de doadores de sangue da Região Amazônica e em amostras obtidas durante uma epidemia de Dengue, em 2006, na cidade de Tupã/SP. O RNA viral foi extraído, Multiplex-Nested-PCR foi realizada com o uso de primers gênero e espécie-específico para Flavivirus, Alphavirus, e, para a detecção e identificação do vírus Oropouche, realizou-se RT- Nested-PCR usando primers que se ligam no segmento S do genoma viral. Apesar da complexidade e número... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Maurício Lacerda Nogueira / Banca: Paula Rahal / Banca: Carlos Eugênio Cavasani / Resumo: A região Amazônica apresenta extensas áreas de floresta e ecossistemas naturais, provendo condições favoráveis para a existência de muitos arbovírus. Mais de 200 arbovírus foram isolados na região Amazônica, e aproximadamente 40 estão associados a doenças humanas. Quatro dos 40 são considerados ser de importância para a saúde pública no Brasil: vírus da Dengue (sorotipos 1 a 4), Oropouche, Mayaro e Febre Amarela. Juntamente com os arbovírus, a malária é uma doença endêmica, e aproximadamente 98% dos casos estão restritos á região da Amazônia Legal. Este trabalho teve como objetivo analisar 111 amostras clínicas de soro de pacientes que residiam em Novo Repartimento (Pará), Porto Velho (Rondônia), Plácido de Castro (Acre) e Oiapoque (Amapá) previamente confirmados para malária. Para tal finalidade, foi utilizada a técnica de Multiplex-Nested-PCR e RT-Nested-PCR para a detecção e identificação dos principais arbovírus brasileiros, pertencentes aos gêneros Flavivirus, Alphavirus e Orthobunyavirus. Duas amostras de pacientes de Novo Repartimento foram positivas para Dengue sorotipo 2, e também, ambos tinham infecção por Plasmodium vivax . Apesar de dados escassos, infecções duplas por dengue e malária deveriam ser comuns em áreas onde ambas as doenças são co-endêmicas em muitas partes do mundo. Na região Amazônica Brasileira, esta situação provavelmente ocorre mais frequentemente que a detectada. Apesar de ambas as doenças causarem sintomas similares, e infecções simultâneas com dois agentes etiológicos podem resultar em uma doença com sintomas sobrepostos, e possivelmente, tanto o espectro clínico da doença e/ou o tratamento pode ser afetado. Neste contexto uma coinfecção por malaria e dengue não poderia ser descartada, e o diagnóstico deveria ser realizado concomitantemente para dengue e malária... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The Amazon region has extensive forested areas and natural ecosystems, providing suitable conditions to the existence of several aboviruses. Over 200 arboviruses were isolated in the Amazon region, and about 40 are associated to human diseases. Four out of 40 are considered to be of public health importance in Brazil: dengue virus (serotypes 1-4), Oropouche, Mayaro and Yellow Fever. Along with aboviruses, malaria is an endemic disease caused by protozoans Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax and Plasmodium malariae in Brazil, and about 98% of the cases are restricted to the Legal Amazon region. The aim of this study was to test 99 serum clinical samples from patients living in Novo Repartimento (Pará), Porto Velho (Rondônia), Plácido de Castro (Acre) and 12 plasma samples from patients living in Oiapoque (Amapá), previously confirmed for malaria. For this purpose, we used Multiplex-Nested-PCR and RT-Nested-PCR assays for detection and identification of the major Brazilian arboviruses, belonging to the genus Flavivirus, Alphavirus and Orthobunyavirus. We detected Dengue virus serotype 2 in two serum samples from patients living in Novo Repartimento, and both had active Plasmodium vivax infections. Despite scant data, dual dengue and malaria dual infections should be common in areas where both diseases are co-endemic in many places of the world. In the Amazon region, this situation is likely to occur more frequently than detected. In spite of having similar clinical findings, and simultaneous infections with two etiological agents can result in a disease with overlapped symptoms, possibly either clinical spectrum of the disease or treatment can be affected. In this context, concurrent dengue and malaria could not be ruled out, and diagnosis should be made concomitantly in febrile patients living or returning from areas where both diseases are co-endemic... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre