Orientadores: Susanne Rath, Felix Guillermo Reyes Reyes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-04T03:09:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Andrade_Raquel_D.pdf: 1296343 bytes, checksum: 75bae6e7df5ea905cb027b5ccee291a2 (MD5) Previous issue date: 2004 / Doutorado / Quimica Analitica / Doutor em Ciências

O gênero Baccharis pertence a subtribo Baccharidinae, tribo Astereae, família Asteraceae. Foram investigadas oito espécies de Baccharis pertencentes a seção Caulopterae, do ponto de vista químico e biológico. As espécies B. articulata, B. crispa, B. cf. milleflora, B. microcephala, B. myriocephala, B. stenocephala, B. trimera e B. usterii foram analisadas quanto a composição química de seu óleo volátil por CG e CG/EM. A maioria das espécies apresentou predominância de sesquiterpenos, com exceção das duas espécies bialadas estudadas, B. articulata e B. stenocephala, as quais apresentaram quantidades apreciáveis do monoterpeno -pineno, e da espécie farmacopeica, B. trimera, com a predominância de acetato de carquejila. Devido a dificuldade na diferenciação das espécies B. trimera e B. crispa por meio de caracteres morfo-anatômicos, estas tiveram a composição química de seu volátil acompanhada ao longo de diferente épocas e locais de coleta. Os extratos hexânicos destas espécies foram também analisados por CG e CG/EM a fim de detectar a presença de acetato de carquejila em amostras coletadas no Brasil e Argentina. Os resultados sugerem a presença de acetato de carquejila como um marcador da espécie B. trimera. Os óleos voláteis de B. articulata, B. crispa, B. microcephala, B. myriocephala, B. trimera e B. usterii foram investigados quanto a atividade antimicrobiana pelo método da bioautografia e todas elas apresentaram alguma atividade. Os óleos voláteis de B. articulata, B. crispa e B. trimera apresentaram fraca atividade antinflamatória in vitro pelo método da câmara de Boyden modificada. A DL50 do óleo de B. trimera foi investigada via intraperitoneal em camundongos e calculada em 0,915 g/kg A partir do extrato aquoso de B. usterii, foram isolados seis ácidos cafeoilquínicos. Quando comparados por CLAE acoplada a técnicas de identificação "on-line", os extratos aquosos de B. trimera, B. crispa e B. usterii apresentaram os seis ácidos em comum. O extrato aquoso de B. trimera diferenciou-se dos demais pela presença de flavonóides, em especial, nepetina. Os três extratos aquosos apresentaram atividade antioxidante frente a DPPH, sendo esta atividade também detectada nos seis ácidos cafeoilquínicos isoladamente.

O gênero Baccharis pertence a subtribo Baccharidinae, tribo Astereae, família Asteraceae. Foram investigadas oito espécies de Baccharis pertencentes a seção Caulopterae, do ponto de vista químico e biológico. As espécies B. articulata, B. crispa, B. cf. milleflora, B. microcephala, B. myriocephala, B. stenocephala, B. trimera e B. usterii foram analisadas quanto a composição química de seu óleo volátil por CG e CG/EM. A maioria das espécies apresentou predominância de sesquiterpenos, com exceção das duas espécies bialadas estudadas, B. articulata e B. stenocephala, as quais apresentaram quantidades apreciáveis do monoterpeno -pineno, e da espécie farmacopeica, B. trimera, com a predominância de acetato de carquejila. Devido a dificuldade na diferenciação das espécies B. trimera e B. crispa por meio de caracteres morfo-anatômicos, estas tiveram a composição química de seu volátil acompanhada ao longo de diferente épocas e locais de coleta. Os extratos hexânicos destas espécies foram também analisados por CG e CG/EM a fim de detectar a presença de acetato de carquejila em amostras coletadas no Brasil e Argentina. Os resultados sugerem a presença de acetato de carquejila como um marcador da espécie B. trimera. Os óleos voláteis de B. articulata, B. crispa, B. microcephala, B. myriocephala, B. trimera e B. usterii foram investigados quanto a atividade antimicrobiana pelo método da bioautografia e todas elas apresentaram alguma atividade. Os óleos voláteis de B. articulata, B. crispa e B. trimera apresentaram fraca atividade antinflamatória in vitro pelo método da câmara de Boyden modificada. A DL50 do óleo de B. trimera foi investigada via intraperitoneal em camundongos e calculada em 0,915 g/kg A partir do extrato aquoso de B. usterii, foram isolados seis ácidos cafeoilquínicos. Quando comparados por CLAE acoplada a técnicas de identificação "on-line", os extratos aquosos de B. trimera, B. crispa e B. usterii apresentaram os seis ácidos em comum. O extrato aquoso de B. trimera diferenciou-se dos demais pela presença de flavonóides, em especial, nepetina. Os três extratos aquosos apresentaram atividade antioxidante frente a DPPH, sendo esta atividade também detectada nos seis ácidos cafeoilquínicos isoladamente.

O gênero Baccharis pertence a subtribo Baccharidinae, tribo Astereae, família Asteraceae. Foram investigadas oito espécies de Baccharis pertencentes a seção Caulopterae, do ponto de vista químico e biológico. As espécies B. articulata, B. crispa, B. cf. milleflora, B. microcephala, B. myriocephala, B. stenocephala, B. trimera e B. usterii foram analisadas quanto a composição química de seu óleo volátil por CG e CG/EM. A maioria das espécies apresentou predominância de sesquiterpenos, com exceção das duas espécies bialadas estudadas, B. articulata e B. stenocephala, as quais apresentaram quantidades apreciáveis do monoterpeno -pineno, e da espécie farmacopeica, B. trimera, com a predominância de acetato de carquejila. Devido a dificuldade na diferenciação das espécies B. trimera e B. crispa por meio de caracteres morfo-anatômicos, estas tiveram a composição química de seu volátil acompanhada ao longo de diferente épocas e locais de coleta. Os extratos hexânicos destas espécies foram também analisados por CG e CG/EM a fim de detectar a presença de acetato de carquejila em amostras coletadas no Brasil e Argentina. Os resultados sugerem a presença de acetato de carquejila como um marcador da espécie B. trimera. Os óleos voláteis de B. articulata, B. crispa, B. microcephala, B. myriocephala, B. trimera e B. usterii foram investigados quanto a atividade antimicrobiana pelo método da bioautografia e todas elas apresentaram alguma atividade. Os óleos voláteis de B. articulata, B. crispa e B. trimera apresentaram fraca atividade antinflamatória in vitro pelo método da câmara de Boyden modificada. A DL50 do óleo de B. trimera foi investigada via intraperitoneal em camundongos e calculada em 0,915 g/kg A partir do extrato aquoso de B. usterii, foram isolados seis ácidos cafeoilquínicos. Quando comparados por CLAE acoplada a técnicas de identificação "on-line", os extratos aquosos de B. trimera, B. crispa e B. usterii apresentaram os seis ácidos em comum. O extrato aquoso de B. trimera diferenciou-se dos demais pela presença de flavonóides, em especial, nepetina. Os três extratos aquosos apresentaram atividade antioxidante frente a DPPH, sendo esta atividade também detectada nos seis ácidos cafeoilquínicos isoladamente.

Orientador : Prof. Dr. Obdulio Gomes Miguel / Coorientador : Prof. Dr.Paulo Vitor Farago / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 14/06/2017 / Inclui referências / Resumo: Baccharis milleflora (Less.) DC. popularmente conhecida como carqueja, carqueja do lajeado, possui poucos estudos registrados na literatura. É utilizada na medicina popular como diurética e estomáquica. O objetivo desse trabalho foi realizar a análise morfoanatômica, caracterizar o óleo essencial (OE) e avaliar as atividades antioxidante, antimicrobiana, pediculicida, citotóxica e imunomoduladora. Por meio de microscopia óptica e de microscopia eletrônica de varredura foram evidenciados estômatos anomocíticos e actinocíticos, tricomas glandulares capitados bisseriados, tectores flageliformes simples e dutos secretores de produtos lipofílicos. Os compostos majoritários identificados por CG/EM nas quatro estações do ano foram: trans-cariofileno, ?-humuleno, germacreno D e o biciclogermacreno. A atividade antioxidante pelo método DPPH apresentou IC50 entre 15,45 ?g/mL - 21,06 ?g/mL e pelo método ABTS IC50 entre 3,85 ?g/mL - 4,60 ?g/mL. A atividade antioxidante pelo fosfomolibdênio foi de 77,9% a 79,81%. O índice antioxidante pelo TBARS variou de 12,60% a 29,06%. Foi verificada atividade frente a S. aureus nas quatro estações por microdiluição em caldo. A atividade pediculida apresentou um IR de 80,65% e um KT50 de 10,63 min. O OE apresentou citotoxicidade frente às linhagens Jurkat, Raji e HL-60 pelo ensaio de redução do brometo de 3-(4,5-dimetil-tiazol-2-il)-2,5- difenil-tetrazólio (MTT) e inibiu a proliferação celular (30 e 100 ?g/mL) por afetar o conteúdo de DNA. A 10 ?g/mL diminuiu significativamente o conteúdo de DNA nas três linhagens tumorais mediante o ensaio com o iodeto de propídeo. O óleo essencial a 60 ?g/mL gerou parada em G0/G1 com uma diminuição no número de células nas fases S e G2/M. A coloração com EB/AO e Hoechst 33342 demonstrou que o OE provoca a morte celular por mecanismos de necrose e apoptose. O índice de seletividade de 3,97 obtido reforça a seletividade deste óleo frente às células malignas Raji. Frente às células J774 o óleo essencial (30 e 100 ?g/mL) apresentou moderado efeito citotóxico pelo ensaio do MTT e da sulforodamina com valores de IC50 independentes do tempo de exposição. As células J774 incubadas com OE (8 ?g/mL) apresentaram uma redução estatisticamente significativa na produção de óxido nítrico. A 10 e 20 ?g/mL o OE não inibiu a produção de espécies reativas de oxigênio nos tempos avaliados. A capacidade fagocítica do OE utilizando partículas não opsonizadas de zimozan foi de aproximadamente 40%, sugerindo atividade imunomoduladora. Palavras-chave: Antioxidante. Baccharis milleflora. Cultura celular. Óleo essencial. Pediculicida. / Abstract: Baccharis milleflora (Less.) DC. popularly known as carqueja, carqueja do lajeado, has few studies registered in the literature. It is used in folk medicine as diuretic and stomatal. The objective of this work was to perform the morphoanatomic analysis, to characterize the essential oil (EO) and to evaluate the antioxidant, antimicrobial, pediculida, cytotoxic and immunomodulatory activities. Scanning electron microscopy and optical microscopy revealed anomocytic and actinocytic stomata, bisserial capillary glandular trichomes, simple flagelliform tectonics and secretory ducts of lipophilic products. The major compounds identified by GC/MS in the four seasons were: trans-caryophyllene, ?-humulene, germacrene D and bicyclogermacrene. The antioxidant activity by the DPPH method presented IC50 between 15.45 ?g/mL - 21.06 ?g/mL and by ABTS method IC50 between 3.85 ?g/mL - 4.60 ?g/mL. The antioxidant activity by fosfomolibdenium was 77.9% to 79.81%. The antioxidant index by TBARS ranged from 12.60% to 29.06%. Activity against S. aureus was verified in the four seasons by broth microdilution. The repellent activity had an repellency index of 80.65% and a KT50 of 10.63 min. Essential oil showed cytotoxicity against the Jurkat, Raji and HL-60 cells by the MTT assay and inhibited cell proliferation (30 and 100 ?g/mL) for affecting the DNA content. At 10 ?g/mL significantly decreased the DNA content in the three tumor lines by the propidium iodide assay. The essential oil at 60 ?g/mL generated a G0/G1 arrest with a decrease in the number of cells in the S and G2/M phases. The staining with EB/AO and Hoechst 33342 demonstrated that EO causes cell death by mechanisms of necrosis and apoptosis. The selectivity index of 3.97 obtained reinforces the selectivity of this oil against the Raji malignant cells. The EO (30 and 100 ?g/mL) presented a moderate cytotoxic effect in J744 cells by the MTT and SRD assay with IC50 values independent of the exposure time. J774 cells incubated with EO (8 ?g/mL) showed a statistically significant reduction in nitric oxide production. At 10 and 20 ?g/mL EO did not inhibit oxigen-reactive species production at the times evaluated. The phagocytic capacity of EO using nonopsonized zimozan particles was approximately 40%, suggesting immunomodulatory activity. Key-words: Antioxidant. Baccharis milleflora. Cell culture. Essential oil. Pediculicide.

Neste trabalho empregou-se a técnica de cromatografia gasosa bidimensional abrangente (GC×GC) na análise de compostos nitrogenados presentes em frações pesadas de amostras de petróleo de águas profundas: gasóleo pesado (GOP) e resíduo de destilação à pressão atmosférica (RAT); e na análise de óleos voláteis de Eucalyptus dunnii e Psidium guajava. O detector seletivo de nitrogênio e fósforo (NPD) foi aprimorado para ser utilizado em GC×GC e aplicado às amostras de petróleo. O método desenvolvido com esse sistema (GC×GC-NPD) permitiu a análise quantitativa de compostos nitrogenados presentes no GOP e no RAT. A alta resolução e a estruturação obtida no espaço de separação para a chamada mistura complexa não resolvida (UCM – unresolved complex mixture) levaram à obtenção de resultados inéditos na identificação e quantificação destes compostos utilizando-se GC×GC-NPD e GC×GC/TOFMS (cromatografia gasosa bidimensional abrangente acoplada à espectrometria de massas por tempo de vôo). Por GC×GC-NPD foi possível quantificar o indol, alquil-carbazóis entre C0 e C6+, alquil-benzocarbazóis entre C0 e C4+, alquil-quinolinas, isoquinolinas e alquil-benzoquinolinas; com limites de detecção entre 0,16 e 8,49 pg. Por GC×GC/TOFMS foi possível identificar tentativamente alquil-indóis entre C0 e C3, alquil-carbazóis entre C0 e C8, alquilbenzocarbazóis entre C0 e C6, alquil-quinolinas entre C0 e C5, alquil-indeno-piridinas C0 e C1, alquil-indeno-quinolinas C0 e C2, alquil-benzoquinolinas entre C0 e C5, alquildibenzoquinolinas entre C0 e C4+, e alquil-tribenzoquinolinas C0. Na aplicação das técnicas cromatográficas aos óleos voláteis, foram utilizados os sistemas 1D-GC (cromatografia gasosa monodimensional) com detectores FID (detector por ionização em chama) e qMS (espectrômetro de massas com quadrupolo), e GC×GC com os detectores FID, qMS e TOFMS. Além da otimização da separação bidimensional com diversos conjuntos de colunas e condições cromatográficas, foram realizados estudos comparativos utilizando índices de retenção e espectros de massas obtidos por 1D-GC e GC×GC. No óleo de E. dunnii foram tentativamente identificados 34 compostos por 1D-GC e 112 compostos por GC×GC. Para o óleo de P. guajava, foram tentativamente identificados 43 compostos por 1D-GC e 147 compostos por GC×GC. / In the present work, comprehensive two-dimensional gas chromatography (GC×GC) was applied to analyse nitrogen containing compounds in heavy fractions from deep water petroleum samples: heavy gasoil (HGO) and atmospheric pressure distillation residue (AR); and also to analyse volatile oils from Eucalyptus dunnii and Psidium guajava. Nitrogen-phosphorus selective detector (NPD) was improved to be used in GC×GC and it was also applied to petrochemical samples. The developed method (GC×GC-NPD) was able to quantify nitrogen-containing compounds in HGO and AR. Well-structured and high resolved 2D-plots obtained from these unresolved complex mixtures (UCM) by 1D-GC, provided new analytical information when GC×GC–NPD and GC×GC/TOFMS (comprehensive two-dimensional gas chromatography coupled to time-of-flight mass spectrometer) were applied. GC×GC-NPD was able to quantify indol, alkyl-carbazoles ranging from C0 to C6+, alkyl-benzocarbazoles from C0 to C4+, alkyl-quinolines, isoquinoline, and alkyl-benzoquinolines. LODs of 0.16 to 8.49 pg for individual compounds were achieved. GC×GC/TOFMS provided tentative identification of alkyl-indols ranging from C0 to C3, alkyl-carbazoles ranging from C0 and C8, alkyl-benzocarbazoles from C0 to C6, alkyl-quinolines from C0 to C5, alkylindene- pyridines C0 and C1, alkyl-indene-quinolines C0 and C2, alkyl-benzoquinolines from C0 to C5, alkyl-dibenzoquinolines from C0 to C4+, and alkyl-tribenzoquinolines C0. The application of chromatographic techniques to volatile oils were performed with 1D-GC (one-dimensional gas chromatography) using FID (flame ionization detector) and qMS (quadrupole mass spectrometer), and also with GC×GC using FID, qMS, and TOFMS. Bidimensional separations were optimized through the use of several column sets and different chromatographic conditions. Comparative studies of retention indices and mass spectra obtained under 1D-GC and GC×GC were performed. Thirty four compounds were tentatively identified on E. dunnii volatile oil under 1D-GC conditions, and 112 compounds when GC×GC was employed. On the P. guajava volatile oil, it was possible to tentatively identified 43 compounds by 1DGC, and 147 compounds by GC×GC.

O gênero Eupatorium L. (Asteraceae) apresenta muitas espécies comumente encontradas no Rio Grande do Sul e se caracteriza pela presença de óleos voláteis e outros derivados terpenoídicos entre seus metabólitos secundários. Neste trabalho, o óleo volátil de oito espécies de Eupatorium nativas do estado foi extraído por hidrodestilação em aparelho tipo Clevenger e sua composição química foi avaliada por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (CG/EM). As espécies analisadas foram: E. inulifolium Kunth, E. polystachyum DC, E. picturatum Malme, E. tremulum Hook. & Arn, E. ivifolium L., E. laevigatum Lam., E. casarettoi (B.L.Rob.) Steyerm., E. itatiayense Hieron. e E. gaudichaudianum DC. Os óleos voláteis de partes aéreas de E. tremulum analisados antes, durante e após a floração, aplicando-se análises multivariadas para identificar compostos com variação significativa em cada estágio de desenvolvimento da espécie. Os extratos diclorometano das mesmas espécies foram avaliados na busca de lactonas sesquiterpênicas utilizando como metodologia a mensuração da absorção característica de lactonas no espectro Infravermelho e aplicação de métodos de extração específicos para essa classe de compostos. Foi realizado fracionamento dos óleos voláteis em cromatografia em coluna aberta (CC), cromatografia flash (CC flash) e cromatografia líquida de média pressão (MPLC) com monitoramento das frações por CG/EM para o isolamento de compostos não identificados apenas por seu índice de retenção linear e espectro de massas. Utilizando essa abordagem foi isolado e identificado por seus dados espectrais de RMN um furanossesquiterpeno, 3-oxoverboccidentafurano, descrito pela primeira vez em Eupatorium. Também foi realizado o fracionamento de extratos diclorometano (E. casaretoi e E. inulifolium) em CC flash e MPLC, com monitoramento das frações por CG/EM e cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a detector de arranjo de diodos (HPLC-DAD) na tentativa de isolamento de lactonas sesquiterpênicas. Um composto foi isolado e sua completa elucidação estrutural está em andamento. Considerando as dificuldades encontradas no processo de elucidação estrutural da molécula isolada do extrato de E. inulifolium, mesmo com a abundância de dados de ressonância magnética nuclear (RMN) 13C disponíveis para consulta, e que não foi encontrada uma base digital dedicada a lactonas sesquiterpênicas reunindo esses dados em uma plataforma facilmente acessível e utilizável, foi realizada a transposição de uma base de dados da literatura para um formato digital amigável (baseada em Excel®), com a visualização e comparação de dados facilitadas graças à utilização de formas gráficas em lugar das formas tabulares de apresentação dos espectros comuns na literatura. / The genus Eupatorium L. (Asteraceae) contains several species that are common in Rio Grande do Sul State and it is characterized by essential oils and other terpenic derivatives among its secondary metabolites. Through this survey, it was evaluated the chemical composition of the essential oil from eight species of Eupatorium natives to the State and their chemical composition was analysed by gas chromatogaphy coupled to mass spectrometry. The following species were studied: E. inulifolium Kunth, E. polystachyum DC, E. picturatum Malme, E. tremulum Hook. & Arn, E. ivifolium L., E. laevigatum Lam., E. casarettoi (B.L.Rob.) Steyerm., E. itatiayense Hieron. and E. gaudichaudianum DC. Volatile oils from aereal parts of E. tremulum were analysed before, during and after blooming. Multivariate analyses were employed in order to identify compounds showing significant variation between each developmental stage. Dichloromethane extracts of these same species were evaluated for sesquiterpene lactones by measuring the typical infrared absorption for lactones and applying extraction methods directed to this class of compounds. The essential oils were fractionated by CC, CC flash and MPLC, with fractions being monitored by GC/MS for isolation of unknown compounds, whose retention index and mass spectrum were not enough for identification. Using this approach a furansesquiterpene, 3-oxo-verboccidentafuran, described for the first time for Eupatorium, was isolated and identified based on NMR spectral data. Dichloromethane extracts (E. casarettoi and E. inulifolium) were also fractionated by CC flash and MPLC, fractions were monitored by GC/MS and HPLC-DAD aiming the isolation of sesquiterpene lactones One compound was isolated and its structural elucidation is ongoing. Considering difficulties faced in the process of structural elucidation of the compound isolated from the extract of E. inulifolium, even with plenty of NMR 13C data available for search, and considering that no digital database dedicated to sesquiterpene lactones was found, that gathers these data in an easily accessible and user friendly platform, we performed the transposition of a bibliographic database to a more user friendly digital format (baseada em Excel®), with enhanced data visualization and comparison, thanks to the use of graphical rather than the tabular spectral presentation usually found in the literature.

Óleos essenciais são produtos naturais produzidos no metabolismo secundário de certos vegetais, com propriedades, entre outras, de defesa contra agentes nocivos. No sul do Brasil, destacam-se duas espécies da família Asteraceae, Heterothalamus alienus e Heterothalamus psiadioides, cujas substâncias bioativas ainda são pouco estudadas quanto as suas propriedades. O objetivo do estudo foi avaliar a ação antimicrobiana desses óleos essenciais e a atividade antibiofilme do óleo essencial de H. psiadioides. Os óleos foram obtidos a partir da hidrodestilação das folhas e caracterizados por cromatografia em fase gasosa acoplada a espectrometria de massas. O espectro de ação foi avaliado contra bactérias e fungos. A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada para cocos Gram-positivos resistentes a agentes antimicrobianos, como Enterococcus faecalis resistente a vancomicina (ERV), e a ação antibiofilme foi avaliada tanto pela interferência dos componentes dos óleos sobre a aderência microbiana quanto por sua ação sobre biofilme estabelecido. Os óleos essenciais de Heterothalamus sp. são constituídos por compostos terpênicos, sendo o β-pineno o componente majoritário. Ambos foram eficazes contra as bactérias Gram-positivas e fungos avaliados, porém não inibiram as bactérias Gram-negativas. A CIM variou entre 4 – 16%, sendo que isolados ERV foram também inibidos. A ação do óleo essencial de H. psiadioides diminuiu a aderência microbiana e, em menor escala, causou disrupção do biofilme pré-formado; no entanto, não foi verificada completa inibição do biofilme. Os resultados fornecem informações importantes sobre de ação antimicrobiana desses óleos essenciais e indicam o uso potencial dessas espécies como medicinais. / Essential oils are natural substances produced on secondary metabolism of some plants, with properties, among others, of defense against harmful agents. In southern Brazil, Heterothalamus alienus and Heterothalamus psiadioides (Asteraceae) are recognized by bioactive substances that are still little studied by their properties. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of essential oils from Heterothalamus sp. and the antibiofilm action of H. psiadioides essential oils. The oils were obtained from the hydrodistillation of the leaves and characterized by gas chromatography coupled mass spectrometry. The spectrum of action was determinate against bacteria and fungi. The minimal inhibitory concentration (MIC) was evaluated for Gram-positive cocci with antimicrobial resistance, as vancomycin-resistent Enterococcus faecalis (VRE) and the antibiofim action was assessed both by interference of the components of the oils on microbial adherence and by its action on established biofilm. The essential oils consist in terpene compounds, and the β-pinene was the major component. The essential oils were effective against Gram-positive bacteria and fungi, but did not inhibit Gram-negative bacteria. The MIC range 4 to 16% and the VRE isolates were also inhibit. The action of essential oils reduced microbial adherence and disrupted de pre-formed biofilm. However, the biofilm was not completely inhibited. These findings provide important information about the antimicrobial activity of these essential oils and indicated the potential use of this species as medicinal.

Orientadora : Profª. Drª. Francinete Ramos Campos / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 27/04/2017 / Inclui referências / Resumo: Baccharis L. (Asteraceae) contém aproximadamente 400 espécies, sendo que 178 estão catalogadas no Brasil, principalmente nas regiões Sul, Sudeste e Centro-Oeste. Esse gênero tem sido descrito na literatura por apresentar várias propriedades biológicas, tais como atividade antioxidante, anti-inflamatória, citotóxica, leishmanicida, tripanocida, anti-hipertensiva, hipoglicemiante, diurética, digestiva e antimicrobiana. Tendo em vista o potencial terapêutico do gênero, o presente trabalho teve como objetivos caracterizar os constituintes químicos e avaliar as atividades antioxidante e antimicrobiana de B. aracatubaensis Malag. e B. organensis Baker. Os indivíduos masculinos e femininos, de ambas as espécies, foram coletados no município de Piraquara-PR, durante o período de floração. A partir do material botânico coletado foram separadas as inflorescências de B. aracatubaensis e B. organensis para extração do óleo essencial. Este foi obtido através de hidrodestilação em aparelho de Clevenger modificado e os constituintes químicos foram identificados por CG-EM. Foi possível identificar um total de 25 compostos para B. aracatubaensis e 32 para B. organensis. Os componentes majoritários (masc./fem.) de B. aracatubaensis foram ?-muuroleno (21,4/23,9%), biciclogermacreno (21,4/21,7%), ?-cariofileno (10,9/12,7%), ?-cadineno (6,6/8,2%) e limoneno (5,5% apenas para o indivíduo masculino). Já em B. organensis foram identificados como majoritários (masc./fem.), viridiflorol (23,0/11,9%), biciclogermacreno (15,2/15,1%), ?-muuroleno (6,8/10,4%), epiglobulol (7,4/6,4%). Os compostos ?-cadinol e curcufenol (7,5% e 5,9%, respectivamente) foram majoritários somente para os indivíduos masculinos de B. organensis. Os extratos brutos foram obtidos a partir da extração hidroalcoólica das folhas de B. aracatubaensis e B. organensis, sendo indivíduos masculinos (Ba-M e Bo-M) e femininos (Ba-F e Bo-F), respectivamente. A análise de espectros de RMN de 1H dos extratos masculinos e femininos, de ambas as espécies, apresentaram perfil químico muito semelhante. Assim os extratos Ba-F e Bo-F foram fracionados por procedimentos cromatográficos e as frações de Bo-F analisadas por técnicas de RMN de 1H e espectrometria de massas, resultando na identificação de 19 substâncias: 3-(3,4,5-trimetoxifenil)-prop-2-en-1-al, ácido trans-ferúlico, 1-etoxietil-3,5-dimetoxi-4-hidroxifenol, siringaldeído, cafeato de etila, cirsimaritina, hispidulina, apigenina, ácido trans-isoferúlico, ferulato de etila, ácido siríngico, ácido cafeico, álcool siríngico, 8-metoxi apigenina, cafeato de 4'-O-?-D-glucopiranosil-3',5'-dimetoxibenzila, kaempferol, ácido 3,5-dicafeoilquínico, escopoletina e ácido tricafeoilquínico. Também foram realizadas avaliação in vitro das atividades antioxidante (DPPH e ORACFL) e antimicrobiana (técnica de microdiluição) dos óleos essenciais, extratos e frações de ambas as espécies. Todas as amostras apresentaram atividade antioxidante promissora. No ensaio antimicrobiano os extratos e frações apresentaram atividade que variou de moderada a fraca, entretanto, os óleos essenciais não apresentaram atividade antimicrobiana frente aos micro-organismos testados. Palavras-chave: Baccharis, atividade biológica, RMN, CG-EM, espectrometria de massas. / Abstract: Baccharis L. (Asteraceae) contains approximately 400 species, of that 178 are cataloged in Brazil, mainly in the Sul, Sudeste, and Centro-Oeste regions. This genus has been described in the literature due the several biological properties, such as antioxidant, anti-inflammatory, cytotoxic, leishmanicidal, trypanocidal, antihypertensive, hypoglycemic, diuretic, digestive, and antimicrobial. Considering the therapeutic potential of the genus, the present work had as objectives to characterize the chemical constituents and to evaluate the antioxidant and antimicrobial activities of the B. aracatubaensis Malag. and B. organensis Baker. The male and female individuals of both species were collected in the municipality of Piraquara-PR, during the flowering period. The inflorescences of B. aracatubaensis and B. organensis were extracted to obtain the essential oils. The was obtained by hydrodistillation in a modified Clevenger apparatus and the chemical constituents were identified by GC-MS. It was possible to identify a total of 25 compounds for B. aracatubaensis and 32 for B. organensis. The major components (male / female) of B. aracatubaensis were ?-muurolene (21.4 / 23.9%), bicyclogermacrene (21.4 / 21.7%), ?-caryophyllene (10.9 / 12), ?-cadinene (6.6 / 8.2%) and limonene (5.5% for male subjects only). In the B. organensis, the majorities (male / female), viridiflorol (23.0 / 11.9%), bicyclogermacrene (15.2 / 15.1%), ?-muurolene (6,8 / 10.4%), epiglobulol (7.4 / 6.4%). The compounds ?-cadinol and curcufenol (7.5% and 5.9%, respectively) were predominant only for male individuals of B. organensis. The crude extracts were obtained from the hydroalcoholic extraction of the leaves of B. aracatubaensis and B. organensis, being male (Ba-M and Bo-M) and female (Ba-F and Bo-F) respectively.The analysis of 1H NMR spectra of male and female extracts of both species presented a very similar chemical profile. Thus, the Ba-F and Bo-F extracts were fractionated by chromatographic procedures and the Bo-F fractions analyzed by 1H NMR and mass spectrometry techniques, resulting in the identification of 19 substances: 3-(3, 4, 5-trimethoxyphenyl)propenal acetate, trans-ferulic acid, 1-ethoxyethyl-3,5-dimethoxy-4-hydroxyphenol, syringaldehyde, ethyl caffeate, cirsimaritine, apigenin, trans-isoferulic acid, ethyl ferulate, syringic acid, caffeic acid, siringeal alcohol, 4'- glucopyranosyl-3 ', 5'-dimethoxybenzyl caffeate, kaempferol, 3,5-dicaffeoyl quinic acid, scopoletin and trycaffeoyl quinic acid. Were also evaluated the antioxidant (DPPH and ORACFL) and antimicrobial (microdilution technique) in vitro activities of essential oils, extracts and fractions of both species. All the samples presented promising antioxidant activity. In the antimicrobial assay the extracts and fractions presented activity that varied from moderate to weak, however, the essential oils did not present antimicrobial activity against the tested microorganisms. Keywords: Baccharis, biologic activity, NMR, GC-MS, mass spectrometry.

O gênero Eupatorium L. (Asteraceae) apresenta muitas espécies comumente encontradas no Rio Grande do Sul e se caracteriza pela presença de óleos voláteis e outros derivados terpenoídicos entre seus metabólitos secundários. Neste trabalho, o óleo volátil de oito espécies de Eupatorium nativas do estado foi extraído por hidrodestilação em aparelho tipo Clevenger e sua composição química foi avaliada por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massas (CG/EM). As espécies analisadas foram: E. inulifolium Kunth, E. polystachyum DC, E. picturatum Malme, E. tremulum Hook. & Arn, E. ivifolium L., E. laevigatum Lam., E. casarettoi (B.L.Rob.) Steyerm., E. itatiayense Hieron. e E. gaudichaudianum DC. Os óleos voláteis de partes aéreas de E. tremulum analisados antes, durante e após a floração, aplicando-se análises multivariadas para identificar compostos com variação significativa em cada estágio de desenvolvimento da espécie. Os extratos diclorometano das mesmas espécies foram avaliados na busca de lactonas sesquiterpênicas utilizando como metodologia a mensuração da absorção característica de lactonas no espectro Infravermelho e aplicação de métodos de extração específicos para essa classe de compostos. Foi realizado fracionamento dos óleos voláteis em cromatografia em coluna aberta (CC), cromatografia flash (CC flash) e cromatografia líquida de média pressão (MPLC) com monitoramento das frações por CG/EM para o isolamento de compostos não identificados apenas por seu índice de retenção linear e espectro de massas. Utilizando essa abordagem foi isolado e identificado por seus dados espectrais de RMN um furanossesquiterpeno, 3-oxoverboccidentafurano, descrito pela primeira vez em Eupatorium. Também foi realizado o fracionamento de extratos diclorometano (E. casaretoi e E. inulifolium) em CC flash e MPLC, com monitoramento das frações por CG/EM e cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a detector de arranjo de diodos (HPLC-DAD) na tentativa de isolamento de lactonas sesquiterpênicas. Um composto foi isolado e sua completa elucidação estrutural está em andamento. Considerando as dificuldades encontradas no processo de elucidação estrutural da molécula isolada do extrato de E. inulifolium, mesmo com a abundância de dados de ressonância magnética nuclear (RMN) 13C disponíveis para consulta, e que não foi encontrada uma base digital dedicada a lactonas sesquiterpênicas reunindo esses dados em uma plataforma facilmente acessível e utilizável, foi realizada a transposição de uma base de dados da literatura para um formato digital amigável (baseada em Excel®), com a visualização e comparação de dados facilitadas graças à utilização de formas gráficas em lugar das formas tabulares de apresentação dos espectros comuns na literatura. / The genus Eupatorium L. (Asteraceae) contains several species that are common in Rio Grande do Sul State and it is characterized by essential oils and other terpenic derivatives among its secondary metabolites. Through this survey, it was evaluated the chemical composition of the essential oil from eight species of Eupatorium natives to the State and their chemical composition was analysed by gas chromatogaphy coupled to mass spectrometry. The following species were studied: E. inulifolium Kunth, E. polystachyum DC, E. picturatum Malme, E. tremulum Hook. & Arn, E. ivifolium L., E. laevigatum Lam., E. casarettoi (B.L.Rob.) Steyerm., E. itatiayense Hieron. and E. gaudichaudianum DC. Volatile oils from aereal parts of E. tremulum were analysed before, during and after blooming. Multivariate analyses were employed in order to identify compounds showing significant variation between each developmental stage. Dichloromethane extracts of these same species were evaluated for sesquiterpene lactones by measuring the typical infrared absorption for lactones and applying extraction methods directed to this class of compounds. The essential oils were fractionated by CC, CC flash and MPLC, with fractions being monitored by GC/MS for isolation of unknown compounds, whose retention index and mass spectrum were not enough for identification. Using this approach a furansesquiterpene, 3-oxo-verboccidentafuran, described for the first time for Eupatorium, was isolated and identified based on NMR spectral data. Dichloromethane extracts (E. casarettoi and E. inulifolium) were also fractionated by CC flash and MPLC, fractions were monitored by GC/MS and HPLC-DAD aiming the isolation of sesquiterpene lactones One compound was isolated and its structural elucidation is ongoing. Considering difficulties faced in the process of structural elucidation of the compound isolated from the extract of E. inulifolium, even with plenty of NMR 13C data available for search, and considering that no digital database dedicated to sesquiterpene lactones was found, that gathers these data in an easily accessible and user friendly platform, we performed the transposition of a bibliographic database to a more user friendly digital format (baseada em Excel®), with enhanced data visualization and comparison, thanks to the use of graphical rather than the tabular spectral presentation usually found in the literature.