Remirea maritima Aubl. (Cyperacea) is a species known as "pinheirinho-da-praia" and popularly used to cure diarrhea, fever, kidney diseases, pain and inflammation. Many studies have shown the presence of many secondary metabolites of R. maritima, however, scientific reports about its pharmacological properties are still scarce. Therefore, this work aimed to perform the chemical composition of extracts of R. maritima, to evaluate the antitumor and immunomodulator effects, to investigate the antioxidant activity, cytotoxicity as well as to perform preclinical studies of toxicity of hydroalcoholic extract 40% of R. maritima. The chemical composition of the aquous extract (AE) and hydroalcoholic extracts 40% (40HA) and 70% (70HA) were assessed by HPLC and LC-MS/MS and isovitexina, vitexin, luteolin and caffeyol compounds were identified. Larger quantities of isovitexin and vitexin were found in AE, while luteolin and caffeyol higher percentages were found in the 40HA. In vitro antitumor activity was determined using three human tumor cell lines by the MTT assay and only the 40HA presented potential antitumor property with IC50 of 27.08, 46.62 and 50 μg/mL for OVCAR-8 (ovarian adenocarcinoma), NCI-H385M (bronchus-human alveolar carcinoma) and PC-3 (human prostate carcinoma) human cell lines, respectively. AE and 70HA did not show any significant in vitro antitumor activity. In this context, only 40HA was submitted to others assays. The antitumor activity in vivo was assessed in Sarcoma 180-bearing mice. Body weight loss, leukogram, biochemistry (AST, ALT, Urea and Creatinine), tumor weight and organ weights (liver, spleen, and kidney) were evaluated. Inhibition rate of tumor was 57.16-62.57%, at the doses 25 and 50 mg/kg of 40HA (v.o.), respectively, and the tumor histological sections presented large number of apoptotic cells by Tunel assay. Moreover, 40HA also demonstrated immunomodulary activity with increase production of antibodies ovoalbumin specific by ELISA test and the spleen histology. The determination of TPC was measured by the Folin-Ciocalteu reagent, and the 40HA showed high amount of phenols. The redox activity of 40HA was evaluated with different reactive species generated in vitro and its cytotoxic effect against fibroblast cells (L929) and melanoma (B16F10) was tested by Neutral Red assay. The total reactive antioxidant potential (TRAP) of 40HA showed significant antioxidant capacity in the concentrations tested; 40HA was also effective at reducing hydroxyl radicals, iron and nitric oxide. The lipoperoxidation in vitro was also decreased by 40HA and data showed protection from oxidative damage. Additionally, the 40HA presented decreased of 50% and 30% of cell viability at concentrations of 80 μg/mL for L929 and B10F16, respectively, and although it presented antiproliferative effect, the 40HA was not selective for melanoma. Pre-clinical toxicity studies performed according to ANVISA and OECD. In acute toxicity, the animals received a single dose of 2000 mg/kg, while in subacute toxicity test, the animals received daily doses of 100, 200 and 400 mg/kg of 40HA. Urinalysis was also evaluated. The 40HA showed no indications of toxicity change. In conclusion, the 40HA presented in their chemical constitution the presence of flavonoids and high total phenols content. In pharmacological study, the 40HE presented in vitro and in vivo antitumor effect, potential of inducing apoptosis, immunomodulator and antioxidant properties without presenting substantial toxicity. / A Remirea maritima Aubl. (Cyperacea) é uma espécie conhecida "pinheirinho-da-praia" e usada popularmente para curar diarreia, febre, doenças renais, dor e inflamação. Estudos têm mostrado a presença de muitos metabólitos secundários ativos, entretanto, relatos científicos sobre suas propriedades farmacológicas ainda são escassos na literatura. Desta forma, este trabalho teve como objetivo caracterizar quimicamente extratos da R. maritima, avaliar os efeitos antitumoral e imunomodulador, averiguar a atividade antioxidante, a citotoxicidade assim como realizar estudos pré-clínicos de toxicidade do extrato hidroalcoólico 40% da R. maritima. A composição química do extrato aquoso (EA) e os extratos hidroalcoólicos 40% (EH40) e 70% (EH70) foi avaliada por HPLC e LC-MS/MS e os compostos isovitexina, vitexina, luteolina e cafeoil foram identificados. Maiores quantidades de isovitexina e vitexina foram encontrados no EA, enquanto que a luteolina e o cafeoil foram encontradas em maiores porcentagens no EH40. A atividade antitumoral in vitro foi avaliada em três culturas de células tumorais humanas pelo ensaio do MTT e apenas o EH40 apresentou efeito antitumoral in vitro com IC50 de 27,08; 46,62 e >50 μg/mL para as linhagens de células de OVCAR-8 (adenocarcinoma de ovário humano), NCI-H385M (carcinoma brônquio-alveolar humano) e PC-3M (carcinoma de próstata humano), respectivamente. O EA e o EH70 não apresentaram nenhuma atividade antitumoral in vitro. Diante desse resultado, apenas o EH40 foi conduzido aos ensaios subsequentes. A atividade antitumoral in vivo foi avaliada utilizando camundongos transplantados com Sarcoma 180. A evolução do peso, o leucograma, a análise bioquímica (AST, ALT, uréia e creatinina), o peso do tumor e o peso relativo dos órgãos (fígado, baço e rim) foram avaliados. A taxa de inibição do tumor foi de 57,16 62,57%, nas doses de 25 e 50 mg/kg de EH40 (v.o.), respectivamente, e secções histológicas do tumor apresentou elevado número de células apoptóticas através do teste de Tunel. Adicionalmente, o EH40 demonstrou atividade imunomoduladora com aumento da produção de anticorpos específicos para a ovoalbumina mensurada pelo teste de ELISA e pela histologia do baço. A determinação de Fenóis totais foi mensurada pelo reagente de Folin Ciocalteu e o EH40 mostrou alto teor de fenóis. A atividade redox do EH40 foi avaliada com diferentes espécies reativas geradas in vitro e a citotoxicidade contra células de fibroblastos (L929) e de melanoma (B16F10) testada por meio de ensaio do Vermelho Neutro. O potencial total antioxidante reativo (TRAP) mostrou significativa capacidade antioxidante do EH40 nas concentrações testadas; também foi eficaz em reduzir radical hidroxila, ferro e a formação de óxido nítrico. A lipoperoxidação in vitro também foi diminuída pelo EH40 e os dados mostraram proteção aos danos oxidativos. Adicionalmente, o EH40 apresentou diminuição da viabilidade celular em 50% e 30% na concentração de 80 μg/mL para L929 e B10F16, respectivamente, e embora tenha apresentado efeito antiproliferativo, o EH40 não foi seletivo para melanoma. Estudos pré-clínicos de toxicidade foram realizados segundo a ANVISA e a OECD. Na toxicidade aguda, os animais receberam uma dose única de 2000 mg/kg, enquanto que na toxicidade subaguda, os animais testes receberam doses diárias de 100, 200 e 400 mg/kg de EH40. A urinálise também foi avaliada. O EH40 não apresentou alterações que indicassem toxicidade. Em suma, o EH40 apresentou em sua constituição química a presença de flavonoides e altor teor de fenóis totais e, em estudo farmacológico, o EH40 apresentou atividade antitumoral in vitro e in vivo, com potencial indutor de apoptose, propriedade imunomoduladora e antioxidante sem apresentar toxicidade substancial.
| Identifer | oai:union.ndltd.org:IBICT/oai:ri.ufs.br:riufs/3598 |
| Date | 26 February 2015 |
| Creators | Dória, Grace Anne Azevedo |
| Contributors | Araújo, Adriano Antunes de Souza |
| Publisher | Universidade Federal de Sergipe, Pós-Graduação em Ciências da Saúde, UFS, BR |
| Source Sets | IBICT Brazilian ETDs |
| Language | Portuguese |
| Detected Language | Portuguese |
| Type | info:eu-repo/semantics/publishedVersion, info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
| Format | application/pdf |
| Source | reponame:Repositório Institucional da UFS, instname:Universidade Federal de Sergipe, instacron:UFS |
| Rights | info:eu-repo/semantics/openAccess |
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