RESUMEN
La hipusinación es una modificación post-traduccional dependiente de espermidina
que activa al factor de traducción eIF5A, y que es esencial en todos los eucariotas.
En los últimos años se ha sugerido un importante papel para eIF5A en los procesos
de senescencia y respuesta a estrés ambiental en plantas, en el establecimiento de la
polaridad celular en levadura y su implicación en enfermedades tales como
diabetes, VIH-1 o cáncer en humanos. Con el objetivo de caracterizar a nivel
molecular la actividad biológica de eIF5A en plantas, hemos establecido una
metodología basada en técnicas bioquímicas e inmunológicas para determinar el
patrón de hipusinación de eIF5A en A. thaliana. La puesta a punto de esta
metodología nos ha permitido demostrar que el tratamiento con ácido abscísico
inhibe la activación por hipusinación de la isoforma eIF5A1. Además, para tratar
de estudiar la función de eIF5A durante el desarrollo de A. thaliana, hemos
realizado estudios funcionales basados en la caracterización de plantas transgénicas
capaces de desactivar genéticamente la ruta dependiente de eIF5A mediante ARN
de interferencia, condicionado a la aplicación de dexametasona. La desactivación
condicional de la enzima de hipusinación desoxihipusina sintasa, produjo
alteraciones durante el desarrollo y en respuesta a condiciones adversas de
crecimiento, tales como floración temprana, inhibición del crecimiento de la raíz,
alteraciones en los pelos radiculares, ramificación exacerbada del tallo, presencia
de elementos traqueales completamente lignificados en hipocotilos, niveles
reducidos de óxido nítrico e hipersensibilidad al ácido abscísico, sal y glucosa.
Recientemente se ha demostrado que eIF5A es necesario para la traducción de
proteínas con más de 3 prolinas sucesivas en su secuencia. El análisis de ontología
realizado reveló un enriquecimiento de proteínas con poli-prolinas entre las
implicadas en la organización del citoesqueleto de actina. La alteración de la
actividad de eIF5A provocó defectos en la estructuración de los filamentos de
actina en A. thaliana, S. cerevisiae y H. sapiens. El estudio de mutantes
termosensibles de levadura demostró el requerimiento de eIF5A durante el proceso
de reproducción sexual a través de la traducción de la formina Bni1. Los
experimentos de regulación traduccional en células HeLa demostraron que el
silenciamiento vía ARN de interferencia de eIF5A1 provocaba un defecto en la tasa
de traducción de la formina FMNL1 y la proteína ezrina. Estos resultados
confirman que la actividad esencial de eIF5A en el ribosoma parece conservada en
organismos eucariotas, y afecta fundamentalmente a proteínas con poli-prolinas
implicadas en la organización del citoesqueleto de actina. / Belda Palazón, B. (2014). Hipusinación del factor de traducción eIF5A dependiente de poliaminas [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/48474 / TESIS
| Identifer | oai:union.ndltd.org:upv.es/oai:riunet.upv.es:10251/48474 |
| Date | 30 March 2015 |
| Creators | Belda Palazón, Borja |
| Contributors | Ferrando Monleón, Alejandro Ramón, Serrano Salom, Ramón, Universitat Politècnica de València. Departamento de Biotecnología - Departament de Biotecnologia |
| Publisher | Universitat Politècnica de València |
| Source Sets | Universitat Politècnica de València |
| Language | Spanish |
| Detected Language | Spanish |
| Type | info:eu-repo/semantics/doctoralThesis, info:eu-repo/semantics/acceptedVersion |
| Rights | http://rightsstatements.org/vocab/InC/1.0/, info:eu-repo/semantics/openAccess |
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