A relação entre o álcool e as doenças periodontais destrutivas tem sido avaliada em humanos através de estudos transversais e longitudinais na última década. As investigações apontam para resultados conflitantes sobre a influência do consumo de bebidas alcoólicas na progressão da periodontite. Em quatro estudos recentes realizados em ratos Wistar, o consumo de álcool com concentrações entre 10% e 30% esteve associado a uma maior perda óssea alveolar. Nestes estudos, os métodos de avaliação da perda óssea alveolar em estudos de modelo animal tem sido realizados de formas distintas, impedindo uma comparação direta em investigações que utilizaram diferentes concentrações de álcool. Contudo, a literatura tem correlacionado o consumo de concentrações moderadas de bebidas alcoólicas com uma melhora no sistema imunológico e uma redução em marcadores inflamatórios sistêmicos, reduzindo a ocorrência de eventos cardiovasculares e aterosclerose. O mecanismo de atuação do álcool nestes parâmetros parece ser ambíguo e dependente da dose, do padrão de consumo e de características individuais variáveis. Os resultados conflitantes sobre a relação entre consumo de bebidas alcoólicas e doença periodontal podem sugerir esse padrão bifásico do álcool. Não existem estudos em modelo animal que avaliaram o impacto da administração de concentrações menores de álcool sobre a perda óssea alveolar. A discussão acerca de metodologias adequadas para estudos em animais e interpretação dos resultados encontra-se limitada em poucos estudos. A presente tese propôs-se a avaliar o impacto do consumo de álcool numa concentração de 5% na destruição periodontal em um modelo de periodontite induzida por ligaduras em ratos Wistar. Uma comparação entre dois métodos distintos para a quantificação da perda óssea alveolar também foi realizada. Através de uma avaliação morfométrica, tanto linear quanto de área, verificou-se que os ratos que receberam etanol em uma concentração de 5% apresentaram uma menor perda óssea do que os ratos do grupo controle em dentes que não receberam ligadura (0.32±0.07 e 0.37±0.07 respectivamente;p=0.04). Apesar da menor perda óssea apresentada pelos ratos do grupo teste também nos dentes que haviam recebido ligadura, tais diferenças não foram estatisticamente significantes (0.78±0.14 e 0.84±0.18 respectivamente;p=0.14). Um valor de Correlação de Pearson de 0.98 foi encontrado estre os métodos de avalição de perda óssea alveolar lineares e de área, indicando de uma correlação quase perfeita.Sendo assim, ambos os métodos revelaram eficazes na detecção de alterações na crista óssea alveolar.Os resultados do presente estudo revelam que o consumo de álcool em concentrações moderadas (5%) pode inibir a perda óssea alveolar em ratos Wistar. / The relationship between alcohol and periodontal disease have been evaluated in humans throughout cross-sectional and longitudinal studies in the last decade. The investigations have led to conflicting results about the influence of alcohol drinking on periodontitis progression. In four studies with Wistar rats, alcohol consumption in concentrations ranging between 10% to 30% was associated with greater alveolar bone loss. In these studies,different methods of bone loss evaluation have been used in animal model studies and it turns difficult to make a direct comparison between investigations that utilized different alcohol concentrations. However, the literature has associated moderate alcohol consumption with improvement in immunological status and reduction in inflammatory markers, reducing cardiovascular events and atherosclerosis. The mechanisms by which alcohol influences these parameters seems to be ambiguous and dependent of dose, pattern of consumption and individual characteristics. The conflicting results between beverage consumption and periodontal disease may suggest the biphasic pattern of alcohol. There aren’t studies in animal models that evaluated the impact of low alcohol concentrations on alveolar bone loss. Discussion about methodological issues and results interpretation in relation to studies in animals are restricted to few studies. The aim of the present thesis was to evaluate the impact of alcohol consumption in a concentration of 5% on periodontal breakdown in a ligature periodontitis-induced model. Also, a comparison between two distinct methods for bone loss assessment was evaluated. Linear and area morphometric evaluation revealed that rats receiving ethanol 5% presented less alveolar bone loss than rats in control group in unligated teeth (0.32±0.07 and 0.37±0.07 respectively;p=0.04). Despite the fact that rats in test group presented less alveolar bone loss even in ligated teeth when compared to controls,differences were no statistically significantly (0.78±0.14 and 0.84±0.18 respectively;p=0.14).A value of 0.98 were found in Pearson’s Correlation between linear and area morphometric methods of evaluating alveolar bone loss indicating an almost perfect correlation. Both methods were reliable for detecting alterations in alveolar bone crest. The results of the present study revealed that alcohol consumption in moderate concentrations (5%) may inhibit alveolar bone loss in Wistar rats.

Introdução e Objetivos: A cirurgia traqueal experimental utiliza diversas técnicas para a realização de traqueoplastias. A variabilidade de técnicas pode determinar irregularidades nos resultados obtidos. Este estudo tem como objetivo apresentar um modelo de traqueoplastia em ratos, sob ventilação espontânea, utilizando um molde intraluminal para conferir qualidade e homogeneidade à sutura, mesmo com limitação de recursos. Essas características visam a oferecer substrato adequado para comparação de métodos diferentes propostos para cirurgia traqueal. Material e Métodos: Trinta ratos machos Wistar, com cerca de noventa dias de vida e peso variando entre 326 e 505 gramas foram recrutados para o experimento. Dez animais foram utilizados como pilotos sendo que a destreza técnica e os cuidados para com os animais foram estabelecidos. Os demais vinte animais foram operados para avaliação clínica da permeabilidade da via aérea e identificação de causas de falência do método.Os animais foram anestesiados, e a traquéia cervical foi abordada. Foi ressecado o quarto anel traqueal com preservação da porção membranosa e, a seguir, a traquéia foi entubada de maneira retrógrada para clearance da via aérea e moldagem para a confecção da sutura traqueal. Foi realizada uma traqueoplastia por sutura contínua e, o animal foi extubado. O fator analisado foi o padrão ventilatório tanto no período pós-operatório imediato como no pósoperatório tardio. Resultados: Apenas um animal apresentou insuficiência respiratória imediata após o procedimento e evoluiu a óbito. A causa da disfunção foi a migração do tubo traqueal que não atuou como suporte para a traqueoplastia. Os demais animais apresentaram evolução clínica sem eventos desfavoráveis. Conclusões: O modelo de traqueoplastia proposto, avaliado a partir de parâmetros clínicos, mostrouse viável e reprodutível, podendo ser utilizado para diversos fins em cirurgia traqueal experimental. / Introduction and objectives: This study has the objective to present a tracheoplasty model in rats, in spontaneous ventilation and using an intraluminal stent to secure quality and homogeneity to the suture. And this way offer an adequate substrate to compare different methods proposed to tracheal surgery. Material and methods: thirty male wistar rats, around 90 days of life were included in this study. Ten animals were used as pilots to the study. The last twenty animals were operated for clinical valuation and identification of collapse of the method. The fourth tracheal ring was removed with preservation of the membranous layer and after that the trachea was tubed by reversed way for modeling and confection of the tracheal suture. A tracheoplasty with running suture was accomplished and the tube was removed. The studied factor was the breathing pattern as post – operative period immediately as in the late it. Results: Only one animal had fatal respiratory failure immediately after the surgery. It was caused by the migration of the tracheal tube and this way, do not acting as a stent to the tracheoplasty. The other animals presented good clinical evolution. Conclusions: The proposed tracheoplasty model, evaluated by clinical parameters, presented viable and reproducible and can be used in several tracheal experiments.

Charles University Faculty of Pharmacy in Hradec Králové Department of Pharmacology and Toxicology Student: Simona Benčová Supervisors: Dr. Claire Demiot, Dr. Aurore Danigo Assoc. Prof. Přemysl Mladěnka, Ph.D Title of diploma thesis: Transcriptomic analysis of cutaneous inflammatory biomarkers in a mouse model of small fiber neuropathy. Peripheral neuropathy is an expanding public health problem conditioned by various diseases and associated with several adverse effects such as the occurrence of chronic pain or increased risk of pressure ulcers (PUs). The aim of this study is to explore, whether the inflammatory state of the skin is modified during peripheral neuropathy and in the course of the formation of a pressure ulcer. The transcriptomic analysis was performed with two different models of mice: PU model and uninjured model, to determine genes that differ in expression and in particular, those involved in inflammation. Small fiber neuropathy was induced in young mice by intraperitoneal injection of resiniferatoxin (50 µg/kg, i.p.) - transient receptor potential vanilloid 1 (TRPV1) agonist. PUs were induced by applying two magnetic plates on the dorsal skin. Gene expression was obtained based on RNA microarray and the results were subsequently verified by qPCR. The transcriptomic analysis of PU...

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-03-06T17:21:16Z No. of bitstreams: 1 Cleiton Silva Santos O papel...2014.pdf: 3463624 bytes, checksum: e0ea46a25188ac23e355981d84456b5f (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2015-03-06T17:44:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Cleiton Silva Santos O papel...2014.pdf: 3463624 bytes, checksum: e0ea46a25188ac23e355981d84456b5f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-06T17:44:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cleiton Silva Santos O papel...2014.pdf: 3463624 bytes, checksum: e0ea46a25188ac23e355981d84456b5f (MD5) Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil / A patogênese da leptospirose é pouco compreendida e os estudos com enfoque na resposta inflamatória sistêmica ou local são escassos, em especial no que se refere ao papel do óxido nítrico (NO) e da enzima óxido nítrico sintase induzível (iNOS). Dados de ensaios em culturas de células renais sugerem um papel importante da liberação de mediadores inflamatórios, tais como NO, na resposta às leptospiras e consequente nefrite intersticial. A transposição destes achados para o modelo in vivo foi pouco explorada. Por outro lado, estudos em humanos sugerem que a liberação sistêmica de NO correlaciona-se com a gravidade da doença renal e, portanto, pode ser um potencial alvo para terapia adjuvante à antibioticoterapia. O presente trabalho estudou a correlação da iNOS com distúrbios hidroeletrolíticos na patogênese da leptospirose. No modelo experimental de hamsters, avaliamos a associação da inibição dos efeitos do NO, através da terapia combinada de antibioticoterapia padrão e azul de metileno, com distúrbios eletrolíticos, alterações histopatológicas em hamsters e sobrevida. Nenhum benefício da terapia adjuvante com azul de metileno foi demonstrado. No modelo de camundongos transgênicos, investigamos o efeito da ausência do gene da iNOS na nefrite intersticial e na quantidade de bactérias observadas nos tecidos. A ausência do gene iNOS esteve associado a menor frequência de nefrite intersticial grave. Maiores estudos são necessários para investigar a função da inibição da produção de NO na patogenia da doença e da nefrite associada a leptospirose. / The pathogenesis of leptospirosis is poorly understood, and there are few studies fusing on the systemic or local inflammatory responses, especially referring to the role of nitric oxide (NO) and the enzyme inducible nitric oxide synthase (iNOS). Data from in vitro studies suggest an important role of inflammatory mediators, such as NO, in the response to leptospires in the development of interstitial nephritis. The transposition of these findings to an in vivo model was little explored. However, studies in humans suggest that systemic liberation of NO is correlated with severity of renal disease and therefore can be potential target to adjuvant therapy along with antibiotic therapy. The present work evaluated the correlation of iNOS with the pathogenesis of leptospirosis. In the experimental hamster model, we evaluated the effect of inhibiting downstream effects of NO on electrolytic disorders, histopathological changes and survival. No benefit of methylene blue treatment could be observed when compared to antibiotic (ampicillin) therapy only. In the mouse transgenic model, we investigated the effect of the absence of the Inos gene in interstitial nephritis and in the bacterial burden in target tissues. The absence of a functional iNOS gene was associated with lower frequency of severe interstitial nephritis.

Introdução: A técnica de criopreservação de tecido ovariano tem sido vista como tratamento promissor e se apresenta como a principal maneira de preservar a fertilidade em pacientes pré-púberes e em mulheres que necessitam de tratamento do câncer de imediato. Contudo, atualmente, ainda existem obstáculos em relação ao autotransplante de tecido ovariano criopreservado, devido a fatores como lesão isquêmica, assim como danos causados pelo processo durante o congelamento, bem como a escolha do melhor local para o enxerto. Objetivo: Verificar a possível restauração da função ovariana, analisando a histologia do ovário transplantado em ratas adultas estéreis, após transplante autólogo de tecido ovariano criopreservado em fase pré-púbere. Métodos: Foram utilizadas 45 ratas Wistar com 30 dias de idade, que foram divididas aleatoriamente em três grupos: Grupo Controle (n = 15), férteis normais; Sham (n = 15), submetidas à ooforectomia bilateral; Transplante (n = 15), submetidas à ooforectomia bilateral, seguida de transplante autólogo na região dorsal entre as escápulas. A partir do d35, foram realizadas observações quanto à maturidade sexual, através da análise da abertura vaginal e de esfregaços vaginais, para avaliação do ciclo estral. Após observação da fase do ciclo estral, os animais foram eutanasiados. E, amostras de tecidos foram coletadas e processadas para avaliação histológica dos implantes ovarianos; considerando: organização estrutural do tecido transplantado e adjacente, bem como o desenvolvimento folicular. Resultados: Quanto às avaliações de maturidade sexual, através das análises de abertura vaginal e da análise microscópica do material obtido dos esfregaços vaginais, foi possível observar que os animais do Grupo Controle, que eram férteis ciclaram normalmente. As ratas do Grupo Sham e Transplante não apresentaram ciclo regular, permanecendo em diestro. As avaliações histológicas das amostras de tecido de ovário pré-púbere, implantados em fêmeas adulto jovens, evidenciaram degeneração ovariana; uma vez que estes apresentaram fibrose e áreas de necrose, o que provavelmente impossibilitou o desenvolvimento folicular, nas ratas que receberam o transplante. Conclusão: A técnica de transplante de tecido ovariano em ratas é uma técnica relativamente simples de ser executada, e se mostrou eficaz na manutenção do massa corporal dos animais durante o período observado. Este achado sugere que houve produção hormonal, oriunda do ovário transplantado, fato este que encoraja as pesquisas neste sentido, a fim de se obter uma técnica que restaure a produção de folículos viáveis em pacientes estéreis. Apesar de ter apresentando indícios de falência do enxerto e isquemia no tecido transplantado, os resultados preliminares desta investigação precisam ser complementados com estudos adicionais, a fim de buscar as melhores condições para a obtenção de maior eficácia dos transplantes autólogos de tecido ovarianos criopreservados. / Introduction: Ovarian tissue cryopreservation is a promising treatment and it is presented as the main way to preserve fertility in prepubertal patients and women who need cancer treatment immediately. However still remain obstacles related to the ovarian tissue cryopreserved autograft due to ischemic injury, damage caused by the freezing process and selecting the best location for the graft. Objective: Investigate a possible restoration of the ovarian function by analyzing the histology of the ovary transplanted into sterile adult rats after autologous transplantation of ovarian tissue cryopreserved in prepubertal phase. Methods: 45 Wistar rats, 30 days old,which were randomly divided into three groups: control group (n = 15), normal fertile; Sham group (n = 15), underwent bilateral oophorectomy; Transplantation group (n = 15), underwent bilateral oophorectomy followed by autologous transplantation in the scapular area. From the d35, sexual maturity was observed by examining the vaginal opening and vaginal smears, for evaluation of the estrous cycle. After observing the phase of the estrous cycle, the animals were euthanized. The tissue samples were collected and processed for histological evaluation of ovarian implants; where structural organization of the transplanted tissue and adjacent as well as follicular development were analyzed. Results: Regarding sexual maturity evaluations, observed by vaginal opening analysis and microscopic analysis of material obtained from vaginal swabs, we could observe that the animals in the control group cycled normally. The rats of Sham and Transplant Group showed no regular cycle, staying in diestrus phase. The histological assessments of prepubertal ovarian tissue samples implanted in young adult females showed ovarian degeneration, since they had areas of necrosis and fibrosis, which probably impeded the follicular development in these rats. Conclusion: The ovarian tissue transplantation technique in rats is a relatively simple technique, and is effective in body mass maintenance of animals during the observed period. This finding suggests that there were hormone production originated from the transplanted ovaries, and this, encourages research in order to obtain a technique to restore the production of viable follicles in sterile patients. Despite presenting evidence of graft failure and ischemia in the transplanted tissue, the preliminary results of this investigation need to be supplemented with additional studies in order to get the best conditions for achieving greater effectiveness of autologous transplantation of cryopreserved ovarian tissue.

Introdução e Objetivos: A cirurgia traqueal experimental utiliza diversas técnicas para a realização de traqueoplastias. A variabilidade de técnicas pode determinar irregularidades nos resultados obtidos. Este estudo tem como objetivo apresentar um modelo de traqueoplastia em ratos, sob ventilação espontânea, utilizando um molde intraluminal para conferir qualidade e homogeneidade à sutura, mesmo com limitação de recursos. Essas características visam a oferecer substrato adequado para comparação de métodos diferentes propostos para cirurgia traqueal. Material e Métodos: Trinta ratos machos Wistar, com cerca de noventa dias de vida e peso variando entre 326 e 505 gramas foram recrutados para o experimento. Dez animais foram utilizados como pilotos sendo que a destreza técnica e os cuidados para com os animais foram estabelecidos. Os demais vinte animais foram operados para avaliação clínica da permeabilidade da via aérea e identificação de causas de falência do método.Os animais foram anestesiados, e a traquéia cervical foi abordada. Foi ressecado o quarto anel traqueal com preservação da porção membranosa e, a seguir, a traquéia foi entubada de maneira retrógrada para clearance da via aérea e moldagem para a confecção da sutura traqueal. Foi realizada uma traqueoplastia por sutura contínua e, o animal foi extubado. O fator analisado foi o padrão ventilatório tanto no período pós-operatório imediato como no pósoperatório tardio. Resultados: Apenas um animal apresentou insuficiência respiratória imediata após o procedimento e evoluiu a óbito. A causa da disfunção foi a migração do tubo traqueal que não atuou como suporte para a traqueoplastia. Os demais animais apresentaram evolução clínica sem eventos desfavoráveis. Conclusões: O modelo de traqueoplastia proposto, avaliado a partir de parâmetros clínicos, mostrouse viável e reprodutível, podendo ser utilizado para diversos fins em cirurgia traqueal experimental. / Introduction and objectives: This study has the objective to present a tracheoplasty model in rats, in spontaneous ventilation and using an intraluminal stent to secure quality and homogeneity to the suture. And this way offer an adequate substrate to compare different methods proposed to tracheal surgery. Material and methods: thirty male wistar rats, around 90 days of life were included in this study. Ten animals were used as pilots to the study. The last twenty animals were operated for clinical valuation and identification of collapse of the method. The fourth tracheal ring was removed with preservation of the membranous layer and after that the trachea was tubed by reversed way for modeling and confection of the tracheal suture. A tracheoplasty with running suture was accomplished and the tube was removed. The studied factor was the breathing pattern as post – operative period immediately as in the late it. Results: Only one animal had fatal respiratory failure immediately after the surgery. It was caused by the migration of the tracheal tube and this way, do not acting as a stent to the tracheoplasty. The other animals presented good clinical evolution. Conclusions: The proposed tracheoplasty model, evaluated by clinical parameters, presented viable and reproducible and can be used in several tracheal experiments.

A relação entre o álcool e as doenças periodontais destrutivas tem sido avaliada em humanos através de estudos transversais e longitudinais na última década. As investigações apontam para resultados conflitantes sobre a influência do consumo de bebidas alcoólicas na progressão da periodontite. Em quatro estudos recentes realizados em ratos Wistar, o consumo de álcool com concentrações entre 10% e 30% esteve associado a uma maior perda óssea alveolar. Nestes estudos, os métodos de avaliação da perda óssea alveolar em estudos de modelo animal tem sido realizados de formas distintas, impedindo uma comparação direta em investigações que utilizaram diferentes concentrações de álcool. Contudo, a literatura tem correlacionado o consumo de concentrações moderadas de bebidas alcoólicas com uma melhora no sistema imunológico e uma redução em marcadores inflamatórios sistêmicos, reduzindo a ocorrência de eventos cardiovasculares e aterosclerose. O mecanismo de atuação do álcool nestes parâmetros parece ser ambíguo e dependente da dose, do padrão de consumo e de características individuais variáveis. Os resultados conflitantes sobre a relação entre consumo de bebidas alcoólicas e doença periodontal podem sugerir esse padrão bifásico do álcool. Não existem estudos em modelo animal que avaliaram o impacto da administração de concentrações menores de álcool sobre a perda óssea alveolar. A discussão acerca de metodologias adequadas para estudos em animais e interpretação dos resultados encontra-se limitada em poucos estudos. A presente tese propôs-se a avaliar o impacto do consumo de álcool numa concentração de 5% na destruição periodontal em um modelo de periodontite induzida por ligaduras em ratos Wistar. Uma comparação entre dois métodos distintos para a quantificação da perda óssea alveolar também foi realizada. Através de uma avaliação morfométrica, tanto linear quanto de área, verificou-se que os ratos que receberam etanol em uma concentração de 5% apresentaram uma menor perda óssea do que os ratos do grupo controle em dentes que não receberam ligadura (0.32±0.07 e 0.37±0.07 respectivamente;p=0.04). Apesar da menor perda óssea apresentada pelos ratos do grupo teste também nos dentes que haviam recebido ligadura, tais diferenças não foram estatisticamente significantes (0.78±0.14 e 0.84±0.18 respectivamente;p=0.14). Um valor de Correlação de Pearson de 0.98 foi encontrado estre os métodos de avalição de perda óssea alveolar lineares e de área, indicando de uma correlação quase perfeita.Sendo assim, ambos os métodos revelaram eficazes na detecção de alterações na crista óssea alveolar.Os resultados do presente estudo revelam que o consumo de álcool em concentrações moderadas (5%) pode inibir a perda óssea alveolar em ratos Wistar. / The relationship between alcohol and periodontal disease have been evaluated in humans throughout cross-sectional and longitudinal studies in the last decade. The investigations have led to conflicting results about the influence of alcohol drinking on periodontitis progression. In four studies with Wistar rats, alcohol consumption in concentrations ranging between 10% to 30% was associated with greater alveolar bone loss. In these studies,different methods of bone loss evaluation have been used in animal model studies and it turns difficult to make a direct comparison between investigations that utilized different alcohol concentrations. However, the literature has associated moderate alcohol consumption with improvement in immunological status and reduction in inflammatory markers, reducing cardiovascular events and atherosclerosis. The mechanisms by which alcohol influences these parameters seems to be ambiguous and dependent of dose, pattern of consumption and individual characteristics. The conflicting results between beverage consumption and periodontal disease may suggest the biphasic pattern of alcohol. There aren’t studies in animal models that evaluated the impact of low alcohol concentrations on alveolar bone loss. Discussion about methodological issues and results interpretation in relation to studies in animals are restricted to few studies. The aim of the present thesis was to evaluate the impact of alcohol consumption in a concentration of 5% on periodontal breakdown in a ligature periodontitis-induced model. Also, a comparison between two distinct methods for bone loss assessment was evaluated. Linear and area morphometric evaluation revealed that rats receiving ethanol 5% presented less alveolar bone loss than rats in control group in unligated teeth (0.32±0.07 and 0.37±0.07 respectively;p=0.04). Despite the fact that rats in test group presented less alveolar bone loss even in ligated teeth when compared to controls,differences were no statistically significantly (0.78±0.14 and 0.84±0.18 respectively;p=0.14).A value of 0.98 were found in Pearson’s Correlation between linear and area morphometric methods of evaluating alveolar bone loss indicating an almost perfect correlation. Both methods were reliable for detecting alterations in alveolar bone crest. The results of the present study revealed that alcohol consumption in moderate concentrations (5%) may inhibit alveolar bone loss in Wistar rats.

Os objetivos desse trabalho foram avaliar in vitro a sensibilidade de zigotos murinos à Brucella abortus, assim como a eficácia das lavagens seqüenciais e do tratamento com tripsina, padronizados pela International Embryo Transfer Society, na sua remoção e/ou inativação, a fim de estabelecer um modelo acessível para o estudo de interações embriões-patógenos. Para a coleta dos zigotos, foram utilizados camundongos fêmeas (Swiss Webster), púberes, nulíparas, 6-8 semanas de idade, acasaladas com machos inteiros da mesma linhagem, após superestimulação ovariana. Para a infecção foi utilizada a bactéria B.abortus 1119.3. A suspensão de bactérias foi preparada no momento da inoculação, na diluição de 106 bactérias/ml. Os zigotos obtidos foram separados em controle e infectados. A infecção dos zigotos foi feita com 30&micro;l da suspensão de bactérias, e após 24h e 96h foram analisados quanto à morfologia e taxa de clivagem. Os procedimentos de lavagem seqüencial e tratamento com tripsina foram realizados após 24h. Para detecção da bactéria após os procedimentos de lavagem, as amostras foram inoculadas em cultura de bactérias e submetidas ao teste de reação em cadeia pela polimerase (PCR). Uma amostra da última gota de lavagem de cada grupo também foi testada. Para analise estatística dos resultados foi utilizado o teste do &chi;2. No grupo controle não foram verificadas alterações morfológicas, já no infectado foi possível verificar a presença de blastômeros irregulares, falha de divisão, citoplasma com granulação e aspecto degenerativo. As taxas de clivagem obtidas foram de 77,4% (controle) e 59,2% (infectados) (&chi;2 de 0,001674; p<0,05) após 24h e após 96h de infecção 14,5% (controle) e 7% (infectados) (&chi;2 de 0,141616; p<0,05). Não foi possível isolar B.abortus em cultura após os procedimentos de lavagem para ambos os grupos. As amostras do grupo controle apresentaram-se negativas na PCR. Já no grupo infectado foram obtidos resultados positivos e negativos, para os embriões e para a alíquota da última gota de lavagem dos grupos tratados com a lavagem seqüencial. Foi verificada apenas em uma amostra a presença de embriões positivos para a B.abortus com amostra da última gota de lavagem negativa. Para outras duas amostras os embriões apresentaram-se livres de B.abortus, mas foram detectadas na alíquota da última gota de lavagem. Apenas em uma amostra foram obtidos resultados negativos tanto para os embriões, quanto para o meio de lavagem. Os resultados da PCR para os grupos infectados tratados com tripsina foram positivos para praticamente todas as amostras, contendo embriões ou apenas da alíquota da última gota de lavagem, com exceção dos embriões de uma amostra que apresentaram-se negativos. As novas tecnologias desenvolvidas em reprodução animal promovem manipulação invasiva do embrião. Portanto, tratamentos preconizados para a remoção de patógenos podem não ser eficazes. O risco a ser considerado é da presença de patógenos associados à zona pelúcida ou nas proximidades, que possam ser introduzidos, ou ter sua entrada facilitada no embrião. Considerando os dados apresentados, torna-se clara a importância do desenvolvimento de um modelo animal para estudos de interações embriões- patógenos, a fim de se evitar a transmissão e disseminação de doenças. / The aim of this study was evaluate in vitro mouse zygotes sensitivity to Brucella abortus, such as the embryo washing procedure and trypsin treatment, recommended by the International Embryo Transfer Society, efficacy in its removal and/or inactivation, with the purpose of established an accessible model for embryo- pathogen interaction studies. The female mice (Balb C) aging 6 to 8 weeks were superovulated and matted with fertile males of the same strain, then the zygote retrieval was performed. The bacterial suspension was prepared in the moment of inoculation and the dilution was 106 brucellas/ml. The zygotes were divided in control and infected groups (30&micro;l of the bacterial suspension); after 24h and 96h their morphology and viability were analised. The zygotes of each group were washed sequentially or treated with trypsin after 24h exposition. To verify the presence of B. abortus pos-washing the zygotes and a sample of the last wash drop of each group were tested on bacterial culture system and polimerase chain reaction (PCR). The statistical analyses was performed with the &chi;2 test. Morphological changes were not observed at the control group, but the infected one presented irregular blastomeres, clivage defective, granular cytoplasm with degenerative like morphology. The clivage rates were 77,4% (control) and 59,2% (infected) (&chi;2 de 0,001674; p<0,05) after 24h and after 96h 14,5% (control) e 7% (infected) (&chi;2 de 0,141616; p<0,05). Our results showed that the bacterial culture presented negative growing for all groups tested. The control group presented only negative results on PCR analyses. The infected group presented positive and negative results on PCR, for embryos or last wash drop sample, submitted to the sequential washing procedure. Positive embryos were found in just one sample with the last wash drop negative. To two other samples embryos presented negative PCR results but positive at the last wash drop. Negative results for embryos and last wash drop was found in just one sample. The PCR results for the groups treated with trypsin were almost all positives, for embryos or last wash drop samples, except one embryo sample that presented negative. The recent developed reproductive technologies promote excessive manipulation of the embryo. Therefore, preexistent procedures for microorganisms\' removal could not be efficient. The preeminent risk to be considered here is the potential or probability of the presence of pathogens associated with or in proximity to the zona pelúcida, which could be introduced, or facilitated its entrance on embryo. According to the data presented become clear the importance of develop a model for studies of embryo- pathogen interactions, with the aim of avoid disease transmission.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O Transtorno Afetivo Bipolar à um transtorno mental severo que acomete cerca de 1,5% da populaÃÃo mundial e se caracteriza pela oscilaÃÃo de humor entre a depressÃo e a mania, interferindo no desempenho do indivÃduo em termos pessoais e profissionais, bem como sendo responsÃvel por alto nÃmero de suicÃdios. Todos esses fatores o caracterizam como um problema de saÃde pÃblica. Seu mecanismo fisiopatolÃgico ainda nÃo à totalmente conhecido e o arsenal terapÃutico atual ainda à escasso, necessitando de contÃnuas pesquisas nesse Ãmbito. Observando a necessidade de maior disponibilidade de modelos animais de mania para maiores pesquisas à que o estudo objetivou investigar um novo modelo animal de mania. O desenho experimental da pesquisa seguiu os critÃrios para determinar um modelo animal que sÃo: a validade de face (onde busca-se mimetizar no animal comportamento caracterÃstico na doenÃa), validade de constructo (a fisiopatologia da doenÃa) e a validade preditiva ( se os medicamentos jà estabelecidos para determinada doenÃa sÃo capazes de reverter e prevenir os efeitos do fÃrmaco que induz a patologia). Logo, o presente trabalho se propÃs a investigar a atividade do Dimesilado de Lisdexanfetamina (LDX), prÃ-fÃrmaco que ao ser metabolizado a d-anfetamina passa a exercer sua atividade psicoestimulante como possÃvel agente em um modelo animal de mania. O tratamento com D-ANF induz hiperlocomoÃÃo e à considerado como um modelo animal de mania bipolar jà estabelecido. Por isso, procurou-se determinar as alteraÃÃes comportamentais e de estresse oxidativo induzidas pela administraÃÃo via oral sub-crÃnica de LDX, bem como a reversÃo e prevenÃÃo deste efeito ao tratar os ratos com lÃtio, medicamento protÃtipo como estabilizante do humor. Um aumento significativo no comportamento locomotor foi induzido por LDX (10 e 30 mg/Kg). Para determinar os efeitos de LÃtio (Li) nas alteraÃÃes induzidas por LDX nos ratos do grupo reversÃo, o protocolo seguiu a administraÃÃo de LDX (10 ou 30 mg / Kg) ou soluÃÃo salina durante 14 dias. Entre os dias 8o e 14o os animais receberam Li (47,5 mg / kg, ip) ou soluÃÃo salina. No protocolo de prevenÃÃo, os ratos foram prÃ-tratados com soluÃÃo salina ou Li antes da administraÃÃo de LDX. Os nÃveis de Glutationa Reduzida (GSH) e de peroxidaÃÃo lipÃdica foram determinados no cÃrtex prÃ-frontal (PFC), hipocampo (HC) e estriado (ST) de ratos. Constatou-se que o LÃtio preveniu a hiperlocomoÃÃo induzida por LDX, nas doses de 10 e 30 mg/kg, mas somente reverteu a hiperlocomoÃÃo quando utilizada a dose de 10 mg/ kg de LDX. AlÃm disso, ambas as doses de LDX diminuÃram o conteÃdo de GSH (em ST e PFC), enquanto que Li foi capaz de reverter e prevenir estas alteraÃÃes, principalmente no PFC. LDX (10 e 30 mg / kg) aumentou a peroxidaÃÃo lipÃdica, que foi revertida e prevenida por Li. Diante dos resultados em termos de hiperlocomoÃÃo e estresse oxidativo demonstrou-se que o LDX conseguiu induzir tais parÃmetros, se mostrando como uma promessa de modelo animal alternativo de mania.

O Acidente Vascular Encefálico (AVE) é a segunda causa de morte mundial, anualmente mais de 20 milhões de indivíduos são acometidos por esta patologia, 5 milhões destes vão a óbito. No Brasil, é a principal causa de morte. Pesquisas demonstram que é crescente o uso de inúmeros modelos animais validos em pesquisas que buscam terapias funcionais para os Acidentes Vasculares. Numerosas espécies são usadas, ratos, coelhos, caninos, suínos, ovelhas e espécies de primatas. Um grande número de estudos tem sido realizado com células-tronco de diferentes fontes em diferentes modelos animais de lesão medular, e tentativas terapêuticas até mesmo em humanos, apresentando resultados promissores. As células-tronco ideais para a realização de transplantes devem ser imunologicamente inertes, provenientes de fontes de fácil acesso, possuir rápida expansibilidade em cultivo, apresentar capacidade de sobrevivência em longo prazo e de integração no sítio hospedeiro além de serem propícias a transfecção e expressão de genes exógenos. Os objetivos desta pesquisa são o de estabelecer um modelo de AVE em coelhos (Oryctolagus cuniculus) para o uso da terapia com células-tronco e avaliar através de Fluroscopia, avaliação comportamental, parâmetros clínicos e exame histopatológico a lesão induzida. Desta forma realizamos o delineamento experimental, a indução do acidente vascular encefálico em coelhos, o cultivo das células-troco do epitélio olfatório de cães e de coelhos, a transdução com retrovírus, a análise da expressão dos genes exógenos, a preparação de células-tronco transduzidas para transplante nos animais, a Fluroscopia, a avaliação comportamental, a avaliação macroscópica e a histológica. Desta forma o modelo experimental foi validado e comprovada a ação celular no tecido lesado via implante das células no tecido, pós-lesado, comprovado clinicamente pelos nossos resultados. Ainda podemos ressaltar que a ausência de trabalhos utilizando marcadores para o rastreamento de células-tronco após o transplante em lesões vasculares encefálicas, aliado a possibilidade de utilização desta terapêutica celular em animais com lesão vascular encefálica proveniente de traumas e diversas patologias na clínica veterinária são fatos que justificam essa pesquisa, desta forma devemos ressaltar a importância de pesquisas com terapia celular sempre visando inserções diretas e indiretas desta biotecnologia à medicina veterinária e humana. / Stroke is the second cause of death worldwide, each year more than 20 million individuals are affected by this disease, 5 million of these die. In Brazil, this is the leading cause of death. Polls show the use of numerous animal models valid in research seeking treatments for stroke functional is increasing. Numerous species are used, rats, rabbits, dogs, pigs, sheep and species of primates. A large number of studies have been done with stem cells from different sources in different animal models of spinal cord injury, and even therapeutic trials in humans, showing promising results. The ideal stem cells for the performance of transplants should be immunologically inert, from sources of easy access, have rapid expansion in culture, ability to provide long-term survival and integration in the host site as well as being suitable for transfection and expression of exogenous genes. The objectives of this research is to establish a model of stroke in rabbits (Oryctolagus cuniculus) to the use of therapy with stem cells and measure the induced lesion and its consequences by fluoroscopic, behavioral assessment, clinical parameters and histological examination. We designed the experiment, the induction of stroke in rabbits, the cell culture of the olfactory epithelium of dogs and rabbits, transduction with retroviruses, the analysis of exogenous gene expression, the preparation of transducted stem cells for transplantation in animals, fluoroscopic, the behavioral assessment, macroscopic evaluation and histology. Thus, the experimental model was validated and the cell implantation in damaged tissue was confirmed. We emphasize that the lack of studies using markers for the tracking of stem cells after transplantation into brain vascular lesions, the possibility of combined use of cell therapy in animals with vascular brain injury from trauma and various diseases in veterinary clinics are facts that justify such a search. So we must reinforce the importance of research on cell therapy to direct and indirect insertions of this biotechnology in human and veterinary medicine.