A relação entre o álcool e as doenças periodontais destrutivas tem sido avaliada em humanos através de estudos transversais e longitudinais na última década. As investigações apontam para resultados conflitantes sobre a influência do consumo de bebidas alcoólicas na progressão da periodontite. Em quatro estudos recentes realizados em ratos Wistar, o consumo de álcool com concentrações entre 10% e 30% esteve associado a uma maior perda óssea alveolar. Nestes estudos, os métodos de avaliação da perda óssea alveolar em estudos de modelo animal tem sido realizados de formas distintas, impedindo uma comparação direta em investigações que utilizaram diferentes concentrações de álcool. Contudo, a literatura tem correlacionado o consumo de concentrações moderadas de bebidas alcoólicas com uma melhora no sistema imunológico e uma redução em marcadores inflamatórios sistêmicos, reduzindo a ocorrência de eventos cardiovasculares e aterosclerose. O mecanismo de atuação do álcool nestes parâmetros parece ser ambíguo e dependente da dose, do padrão de consumo e de características individuais variáveis. Os resultados conflitantes sobre a relação entre consumo de bebidas alcoólicas e doença periodontal podem sugerir esse padrão bifásico do álcool. Não existem estudos em modelo animal que avaliaram o impacto da administração de concentrações menores de álcool sobre a perda óssea alveolar. A discussão acerca de metodologias adequadas para estudos em animais e interpretação dos resultados encontra-se limitada em poucos estudos. A presente tese propôs-se a avaliar o impacto do consumo de álcool numa concentração de 5% na destruição periodontal em um modelo de periodontite induzida por ligaduras em ratos Wistar. Uma comparação entre dois métodos distintos para a quantificação da perda óssea alveolar também foi realizada. Através de uma avaliação morfométrica, tanto linear quanto de área, verificou-se que os ratos que receberam etanol em uma concentração de 5% apresentaram uma menor perda óssea do que os ratos do grupo controle em dentes que não receberam ligadura (0.32±0.07 e 0.37±0.07 respectivamente;p=0.04). Apesar da menor perda óssea apresentada pelos ratos do grupo teste também nos dentes que haviam recebido ligadura, tais diferenças não foram estatisticamente significantes (0.78±0.14 e 0.84±0.18 respectivamente;p=0.14). Um valor de Correlação de Pearson de 0.98 foi encontrado estre os métodos de avalição de perda óssea alveolar lineares e de área, indicando de uma correlação quase perfeita.Sendo assim, ambos os métodos revelaram eficazes na detecção de alterações na crista óssea alveolar.Os resultados do presente estudo revelam que o consumo de álcool em concentrações moderadas (5%) pode inibir a perda óssea alveolar em ratos Wistar. / The relationship between alcohol and periodontal disease have been evaluated in humans throughout cross-sectional and longitudinal studies in the last decade. The investigations have led to conflicting results about the influence of alcohol drinking on periodontitis progression. In four studies with Wistar rats, alcohol consumption in concentrations ranging between 10% to 30% was associated with greater alveolar bone loss. In these studies,different methods of bone loss evaluation have been used in animal model studies and it turns difficult to make a direct comparison between investigations that utilized different alcohol concentrations. However, the literature has associated moderate alcohol consumption with improvement in immunological status and reduction in inflammatory markers, reducing cardiovascular events and atherosclerosis. The mechanisms by which alcohol influences these parameters seems to be ambiguous and dependent of dose, pattern of consumption and individual characteristics. The conflicting results between beverage consumption and periodontal disease may suggest the biphasic pattern of alcohol. There aren’t studies in animal models that evaluated the impact of low alcohol concentrations on alveolar bone loss. Discussion about methodological issues and results interpretation in relation to studies in animals are restricted to few studies. The aim of the present thesis was to evaluate the impact of alcohol consumption in a concentration of 5% on periodontal breakdown in a ligature periodontitis-induced model. Also, a comparison between two distinct methods for bone loss assessment was evaluated. Linear and area morphometric evaluation revealed that rats receiving ethanol 5% presented less alveolar bone loss than rats in control group in unligated teeth (0.32±0.07 and 0.37±0.07 respectively;p=0.04). Despite the fact that rats in test group presented less alveolar bone loss even in ligated teeth when compared to controls,differences were no statistically significantly (0.78±0.14 and 0.84±0.18 respectively;p=0.14).A value of 0.98 were found in Pearson’s Correlation between linear and area morphometric methods of evaluating alveolar bone loss indicating an almost perfect correlation. Both methods were reliable for detecting alterations in alveolar bone crest. The results of the present study revealed that alcohol consumption in moderate concentrations (5%) may inhibit alveolar bone loss in Wistar rats.

Introdução e Objetivos: A cirurgia traqueal experimental utiliza diversas técnicas para a realização de traqueoplastias. A variabilidade de técnicas pode determinar irregularidades nos resultados obtidos. Este estudo tem como objetivo apresentar um modelo de traqueoplastia em ratos, sob ventilação espontânea, utilizando um molde intraluminal para conferir qualidade e homogeneidade à sutura, mesmo com limitação de recursos. Essas características visam a oferecer substrato adequado para comparação de métodos diferentes propostos para cirurgia traqueal. Material e Métodos: Trinta ratos machos Wistar, com cerca de noventa dias de vida e peso variando entre 326 e 505 gramas foram recrutados para o experimento. Dez animais foram utilizados como pilotos sendo que a destreza técnica e os cuidados para com os animais foram estabelecidos. Os demais vinte animais foram operados para avaliação clínica da permeabilidade da via aérea e identificação de causas de falência do método.Os animais foram anestesiados, e a traquéia cervical foi abordada. Foi ressecado o quarto anel traqueal com preservação da porção membranosa e, a seguir, a traquéia foi entubada de maneira retrógrada para clearance da via aérea e moldagem para a confecção da sutura traqueal. Foi realizada uma traqueoplastia por sutura contínua e, o animal foi extubado. O fator analisado foi o padrão ventilatório tanto no período pós-operatório imediato como no pósoperatório tardio. Resultados: Apenas um animal apresentou insuficiência respiratória imediata após o procedimento e evoluiu a óbito. A causa da disfunção foi a migração do tubo traqueal que não atuou como suporte para a traqueoplastia. Os demais animais apresentaram evolução clínica sem eventos desfavoráveis. Conclusões: O modelo de traqueoplastia proposto, avaliado a partir de parâmetros clínicos, mostrouse viável e reprodutível, podendo ser utilizado para diversos fins em cirurgia traqueal experimental. / Introduction and objectives: This study has the objective to present a tracheoplasty model in rats, in spontaneous ventilation and using an intraluminal stent to secure quality and homogeneity to the suture. And this way offer an adequate substrate to compare different methods proposed to tracheal surgery. Material and methods: thirty male wistar rats, around 90 days of life were included in this study. Ten animals were used as pilots to the study. The last twenty animals were operated for clinical valuation and identification of collapse of the method. The fourth tracheal ring was removed with preservation of the membranous layer and after that the trachea was tubed by reversed way for modeling and confection of the tracheal suture. A tracheoplasty with running suture was accomplished and the tube was removed. The studied factor was the breathing pattern as post – operative period immediately as in the late it. Results: Only one animal had fatal respiratory failure immediately after the surgery. It was caused by the migration of the tracheal tube and this way, do not acting as a stent to the tracheoplasty. The other animals presented good clinical evolution. Conclusions: The proposed tracheoplasty model, evaluated by clinical parameters, presented viable and reproducible and can be used in several tracheal experiments.

A biomenbrana de látex natural (BLN) da serigueira HEVEA brasiliensis, utilizada como curativo no tratamento de úlceras crônicas em humanos, mostra-se eficaz no desbridamento e no estímulo à granulação, acelerando a cicatrização. Seu mecanismo de ação ainda é desconhecido, tornando-se importante avaliar sua atividade como implante na indução tecidual, comparando-a aos outros implantes e à cicatrização normal (SHAM). Foram utilizados camundongos C57BL/6, constituído de 5 grupos distintos pelo implante subcutâneo dorsal (1cm2): 15 implantados com BLN; 15-LUVA cirúrgica (látex desnaturado); 15-ePTFE (PoliTetraFluorEtileno Expandido - implante sintético) e 15-SHAM. A atividade dos implantes foi avaliada no 2º, 7º e 14º dias, sacrificando 5 animais/grupo/tempo para biópsias (punch-4mm). Toda pele da área implantada foi recortada e fotografada. As amostras foram submetidas a estudos histológicos por HE para contagem das células inflamatórias, fibroplasia e angiogênese, utilizando o plugin \"Cell Counter\" no software ImageJ®; pelo Tricrômio de Gomori para quantificação colagênica pelo \"Threshold\" no ImageJ®, e imunohistoquímica para iNOS, IL-1?, VEGF e TGF-?1. A partir do sobrenadante do macerado das biópsias foram realizadas as dosagens de mieloperoxidase (MPO), IL-1? e de TGF-?1 por ELISA. Macroscopicamente, viu-se maior quantidade de tecido neoformado nos animais implantados com BLN já no 2º dia, diferente dos demais grupos. À histologia (HE), constatou-se que a BLN no 2º dia estimulou denso infiltrado inflamatório, principalmente neutrófilos, seguido de maior produção de MPO e de IL-1?, diferente dos demais tratamentos (P<0,01). Com 7 e 14 dias, a quantidade de IL-1? nos grupos LUVA e SHAM foi maior que a da BLN e do ePTFE, mostrando o equilíbrio no estímulo inicial da atividade inflamatória pela BLN. Quanto a angiogênese, os grupos BLN e LUVA com 7 e 14 dias apresentaram maior formação de vasos que o ePTFE e SHAM. Entretanto, na imunohistoquímica observou-se baixa expressão de VEGF no grupo BLN no 7º e 14º dia. Quanto a fibroplasia, o ePTFE com 7 dias apresentou maior fibroplasia que todos os grupos (P<0,01). No 14º dia, a BLN apresentou maior fibroplasia, embora sem diferença estatística entre os grupos. Quanto à colagênese, pelo ImageJ® (\"Threshold\") por Tricrômio de Gomori, os implantes se comportaram de maneira semelhante, inclusive com o SHAM, exceto no 14º dia que o ePTFE apresentou colagênese maior que a LUVA e BLN (P<0,01). O grupo SHAM apresentou maior concentração de TGF-beta1 que os demais grupos no sétimo dia (P<0,01), semelhante à BLN e à LUVA no 14º, entretanto maior que o ePTFE (P<0,01). Conclui-se que a biomembrana de látex da seringueira Hevea brasiliensis atua significativamente na fase inflamatória da cicatrização, importante no recrutamento neutrofílico para o local, confirmado quantitativamente pela concentração de MPO e IL-beta1 e por imunohistoquímica. Este fato parece influenciar diretamente as fases subseqüentes do processo cicatricial, confirmada pela sua capacidade estimuladora de angiogênese, provavelmente não influenciada por VEGF, e pelo estímulo à fibroplasia independente de TGF-beat1 e sem modificação na produção colagênica. / The natural latex biomembrane (NLB) from Hevea brasiliensis rubber tree, used as dressing in the treatment of human chronic ulcers, has been showed efficient in the debridement and the granulation stimulation, accelerating the healing. Its mechanism of action is still unknown, becoming important to evaluate its activity as implantation in the tissue induction, comparing it with the other implants and with the normal healing (SHAM). Mice C57BL/6, consisting of 5 distinct groups had been used of the dorsal subcutaneous implantation (1cm2): 15 implanted with NLB; 15 with surgical GLOVE (unnatural latex); 15 with ePTFE (expanded polytetrafluorethylene - synthetic implantation) and 15 without implant (SHAM). The activity of the implants was evaluated in 2nd, 7th and 14th days. Five animals for group each time were sacrificed for biopsies with 4mm punch. All skin of the implanted area was cut and photographed. The samples had been submitted to the histology studies for haematoxylin-eosin for counting the inflammatory cells, fibroplasia and angiogenesis, using \"Cell Counter\" plugin in the ImageJ® software; by Gomori\'s thrichrome for collagen quantification using \"Threshold\" in the ImageJ®, and iNOS, IL-beta1, VEGF and TGF-beta1 immunohistochemistry. From the biopsies macerated supernatant, the myeloperoxidase assay had been carried through (MPO), IL-beta1 and of TGF-beta1 by ELISA. Macroscopically, it was observed a big amount of new tissue formed in the NLB implanted animals on 2nd day, different of the other groups. In histological analyze by H&E, it was observed that the NLB in 2nd day stimulated dense inflammatory infiltrated, mainly by neutrophils, followed of bigger production of MPO and IL-beta1, different of the other treatments (P<0,01). After 7 and 14 days, the amount of IL-beta1 in the groups GLOVE and SHAM were greater than the NLB and ePTFE, showing the balance in the initial stimulation of the inflammatory activity by the NLB. About angiogenesis, both groups (NLB and GLOVE) after 7 and 14 days had presented greater formation of vessels than ePTFE and SHAM (P<0,01).However, in the immunohistochemistry was observed a low VEGF expression in the NLB group in 7th and 14th days. Related to fibroplasia, ePTFE after 7 days presented greater fibroplasia than all the groups (P<0,01). In 14th day, the NLB presented an important fibroplasia, even so without statistic difference between the groups. The collagen proliferation evaluated by the ImageJ® (\"Threshold\") applied in Gormori\'s thrichrome stained biopsies, the implants showed similar results, also with the SHAM, except in 14th day that ePTFE presented bigger collagen proliferation than the GLOVE (P<0,01).The SHAM group presented greater concentration of TGF-beta1 than the other groups in the seventh day (P<0,01), equal to the NLB and the GLOVE in 14th, however bigger than ePTFE (P<0,01).In conclusion, natural latex biomembrane (NLB) from Hevea brasiliensis rubber tree acts significantly in the inflammatory phase of the healing process, important in the neutrophilic recruitment to injury local, confirmed quantitatively by MPO and IL-beta1 concentrations and by immuno histochemistry. This fact seems to influence directly the subsequent phases of the healing process, confirmed for its stimulatory capacity of the angiogenesis, probably not influenced by VEGF, and the fibroplasia stimulation independent of TGF-beta1 and without modification in the collagen production.

nÃo hà / Os transtornos de ansiedade possuem alta prevalÃncia na populaÃÃo com graus de severidade variÃveis, podendo chegar à incapacitaÃÃo. Deakin & Graeff conceberam um modelo teÃrico relacionando defesa distal, amÃgdala e ansiedade generalizada, de um lado, e defesa proximal, substÃncia cinzenta periaqueductal e pÃnico, de outro. Nesta proposta, a serotonina facilita a ansiedade, porÃm inibe o pÃnico. O modelo do Labirinto em T Elevado (LTE) seria entÃo mais efetivo para distinguir estes dois padrÃes de ansiedade, ao contrario do Labirinto em Cruz Elevado (LCE), um dos modelos mais utilizados para avaliar efeitos ansiolÃticos das drogas. O modelo foi validado para ratos, havendo pouca descriÃÃo sobre o uso em camundongos. No primeiro experimento os animais (camundongos Swiss; 10 em cada grupo) foram tratados com salina (10 ml/kg; i.p.), imipramina (30mg/kg; i.p.), diazepam (1mg/kg; i.p.), paroxetina (5mg/kg; i.p.), paroxetina (10mg/kg; i.p.) e paroxetina (20mg/kg; i.p.) e avaliados no Teste do Nado ForÃado (TNF). No segundo experimento os camundongos foram separados em cinco grupos (n=10) e tratados com salina (10 ml/kg; i.p.), imipramina (30mg/kg; i.p.), diazepam (2mg/kg; i.p.), paroxetina (10mg/kg; i.p.), buspirona (10mg/kg; i.p) diariamente por uma semana (subcronicamente) e depois avaliados no TNF. No terceiro experimento camundongos foram tratados subcronicamnete com salina, imipramina (30mg/kg; IP), paroxetina (10mg/kg; IP), diazepam (2mg/kg; IP) e buspirona (10mg/kg; IP) e depois testados no LCE. No quarto experimento foram utilizados ratos Wistar que recebiam diariamente por gavagem salina, imipramina (10mg/kg), paroxetina (10mg/kg), diazepam (1mg/kg) ou buspirona (10mg/kg) por 24 dias consecutivos (volume constante 1 ml/kg de peso) e depois foram avaliados no LTE e Campo Aberto (CA). O quinto experimento foi semelhante ao quarto, sendo utilizado camundongos e um aparelho para LTE adaptado. Os resultados foram: imipramina e as trÃs dose de paroxetina apresentaram efeito antidepressivo, enquanto diazepam mostrou efeito depressivo no TNF agudo. Jà no TNF subcrÃnico apenas imipramina apresentou efeito antidepressivo. No LCE imipramina apresentou efeito ansiolÃtico enquanto paroxetina apresentou efeito ansiogÃnico. No LTE com ratos tratados cronicamente, paroxetina, diazepam e buspirona apresentaram efeito anti-ansiedade-generalizada enquanto imipramina, diazepam e paroxetina apresentaram efeito anti-pÃnico. No LTE com camundongos tratados cronicamente, imipramina, diazepam, buspirona e paroxetina apresentaram respostas anti-ansiedade-generalizada e apenas a paroxetina demonstrou efeito anti-pÃnico. Assim, imipramina, uma droga eficaz nos transtornos depressivos, ansiedade generalizada e pÃnico, foi responsÃvel por respostas semelhantes nos modelos animais (com exceÃÃo do LTE para camundongos). Diazepam, uma droga utilizada para ansiedade generalizada e com alguns efeitos no pÃnico, apresentou comportamento semelhante nos modelos, tendo efeito antipÃnico no LTE para ratos e nÃo para camundongos. Buspirona, uma droga utilizada na clinica apenas para ansiedade generalizada, nÃo apresentou efeitos antidepressivos ou antipÃnico em nenhum experimento. Paroxetina, inibidor seletivo da recaptaÃÃo da serotonina, antidepressivo, ansiolÃtico e antipÃnico, apresentou atividade ansiogÃnica no LCE (demonstrando este aparelho como inadequado para avaliar esta classe de droga) e efeito anti-ansiedade-generalizada e anti-pÃnico tanto em LTE para ratos quanto para camundongos. Conclui-se que o LTE para camundongos à um modelo adequado para detectar efeitos ansiolÃticos e anti-pÃnico das drogas, este Ãltimo em especial para drogas serotonÃrgicas / The disorders of anxiety use to have high levels of prevalence among population, with varying degrees of severity, eventually causing disability. Deakin & Graeff have conceived a theoretical model, relating distal defence, amygdala and generalized anxiety, on the one hand, and proximal defence, periaqueductal grey substance and panic, on the other. In this proposal, serotonin eases anxiety, but inhibits the panic. The format of the Elevated T Maze (ETM) would be more effective to distinguish these two patterns of anxiety, in contrast to Elevated plus maze (EPM), one of the models most frequently used to evaluate anxiolytic effects of drugs. The model was validated for rats, with little description about the use in mice. In the first experiment, the animals (Swiss mice, 10 in each group) were treated with saline (10 ml / kg, ip), imipramine (30mg/kg; ip), diazepan (1mg/kg; ip), paroxetine (5mg/kg ; Ip), paroxetine (10mg/kg; ip) and paroxetine (20mg/kg; ip) and evaluated in the Forced Swim Test (FST). In the second experiment the mice were divided into five groups (n = 10) and treated with saline (10 ml/kg, ip), imipramine (30mg/kg; ip), diazepan (2mg/kg; ip), paroxetine (10mg / kg, ip), buspirone (10mg/kg; ip), daily for one week (subchronic), and after that they were evaluated in the FST. In the third experiment mice were treated subcronic with saline, imipramine (30mg/kg; IP), paroxetine (10mg/kg; IP), diazepam (2mg/kg; IP) and buspirone (10mg/kg; IP) and then tested in EPM. In the fourth experiment, were used Wistar rats that received daily, by gavage, saline, imipramine (10mg/kg), paroxetine (10mg/kg), diazepam (1mg/kg) or buspirone (10mg/kg) for 24 consecutive days (in volume 1 ml per kg) and then were evaluated in ETM and Open Field Test (OFT). The fifth experiment was similar to the fourth, being used mice and adapted device for ETM. The results were: imipramine and three doses of paroxetine presented antidepressant effect, as diazepam showed depressive effect on acute FST. In subchronic FST, only imipramine presented antidepressant effect. In the EPM, imipramine presented anxiolytic effect as paroxetine presented anxiogenic effect. In ETM with rats chronically treated, paroxetine, diazepan and buspirone showed anti-generalized-anxiety-like effect, as imipramine, diazepan and paroxetine showed anti-panic-like effect. In ETM with mice chronically treated with imipramine, diazepan, buspirone and paroxetine presented responses anti-generalized-anxiety-like and only paroxetine showed anti-panic-like effect. Thus, imipramine, a drug effective in depressive disorders, generalized anxiety and panic, was responsible for similar responses in animal models (except for the ETM for mice). Diazepam, a drug used to generalized anxiety and with some effects in panic, presented similar behavior in the models, with antipanic-like effect in ETM for rats and not for the mice. Buspirone, a drug used in clinic only to generalized anxiety, did not present antidepressant or antipanic effects in any experiment. Paroxetine, a selective serotonin reuptake inhibitor (SSRI), antidepressant, anxiolytic and antipanic, presented anxiogenic activity in EPM (demonstrating this device as inadequate to evaluate this class of drugs) and anti-generalized-anxiety and anti-panic both in ETM for rats and for mice. We concludes that the ETM for mice is an appropriate model to detect anxiolytic and anti-panic effects of drugs, the latter especially for 5-HT drugs

A realização deste estudo teve como objetivo a estimação de componentes de (co) variância e parâmetros genéticos das características: peso (PES18), perímetro escrotal (PE18), precocidade de acabamento (PREC), musculosidade (MUSC) e altura (ALT), mensuradas aos 18 meses de idade, ganho de peso da desmama ao sobreano (GP345) e idade ao primeiro parto (IPP) de bovinos Nelore, utilizando-se modelos multicaracterísticas. Foram avaliados dados de 107.332 mil bovinos criados entre os anos de 1994 e 2009 em fazendas localizadas nos estados de São Paulo, Mato Grosso do Sul e Goiás, e pertencentes ao Programa de Seleção da raça Nelore da Agropecuária CFM Ltda. Utilizaram-se três diferentes modelos: modelo multicaracterísticas padrão, modelo de componentes principais e de análise de fatores, esses dois últimos contemplando os três primeiros componentes e fatores, os quais foram comparados por critérios de informação de Akaike (AIC) e Bayesiano de Schwarz (BIC). O modelo que utilizou a técnica da análise de fatores contemplando os dois primeiros fatores (MFA2) apresentou melhor ajuste, seguido do modelo que contemplou os 3 primeiros fatores (MFA3). Estes possibilitaram estimativas próximas das realizadas pelos modelos multicaracterísticas padrão, às quais se mostraram parecidas com os valores já relatados e estimados no Brasil. / This study was objectified the estimation of (co)variance components and genetics parameters of traits: weight (W18), scrotal circumference (SC18), precocity finishing (PREC), muscularity (MUSC) and height (H), measured at 18 months of age, weight gain from weaning to yearling (WG345) and age at first calving (AFC) from Nellore cattle, using multi trait models, with analysis multi trait standard, analysis of principal components and factor analysis. Were evaluated data from 107,332 bovines, managed between the years of 1994 and 2009 in farms localized on states of São Paulo, Mato Grosso do Sul and Goias, and were participants in Nellore Selection Program from CFM Company Ltda. Was utilized three different models, multi trait model, model of principal components and factor analytic, these two last contemplating the four first principal components and factors analytics and that was compared by information criteria of Akaike (AIC) and Bayesian of Schwarz (BIC). The model that used the factor analysis technique contemplating the first two factors (MFA2) presented better adjustment, followed by the model that contemplated the first 3 factors (MFA3). These allowed close estimates to those performed by the standard multi trait models, which were similar to the values already reported and estimated in Brazil.

Chronic Mild Stress (CMS) é um modelo animal de depressão no qual ratos são submetidos a um protocolo de estressores moderados de forma crônica. Em função disso, o consumo e preferência por água com sacarose diminuem. Tal redução costuma ser considerada uma medida de anedonia, sintoma central da depressão em humanos. Três estudos realizados no Laboratório do Programa de Estudos Pós- Graduados em Psicologia Experimental da PUC-SP demonstraram que esse efeito é atenuado pela exposição a uma condição operante em esquema concorrente FR água FR sacarose. O presente estudo teve por objetivo investigar se a submissão a uma condição operante que envolvesse diferentes estímulos reforçadores teria o mesmo efeito. Para isso, as seguintes condições experimentais foram propostas: 1) exposição a um protocolo de estressores por seis semanas; 2) testes semanais de consumo de água e água + 2% sacarose; 3) sessões operantes. Dos nove sujeitos utilizados, quatroforam expostos também a uma condição na qual a resposta de pressão à barra foi consequenciada com acesso à roda de atividades, dois a uma condição na qual a resposta de pressão à barra foi consequenciada com uma pelota de alimento em FR6 e dois em FR12. Como resultado, observou-se que no sujeito submetido somente aos estressores (sujeito 09) foi replicado mais uma vez o efeito de redução no consumo de solução de sacarose. Esse efeito não pode ser observado em nenhum dos sujeitos submetidos às sessões operantes durante a exposição. Observou-se uma queda somente no primeiro teste após o término dessa, indicando que possivelmente a submissão a essas afetou o efeito tradicionalmente observado em decorrência da exposição ao protocolo de estressores. Tais resultados corroboram e ampliam os estudos anteriores. Nas sessões operantes, observou-se redução na taxa de respostas na quinta semana de exposição para os sujeitos em FR12 (02 e 03) e na quinta ou sexta para o sujeitos em FR6 (01 e 04). O desempenho na roda de atividades pareceu ficar sob controle da alteração no peso corporal (sujeitos 05 a 09). É possível que a exposição à condição operante tenha atenuado os efeitos do protocolo de estressores e a redução no valor reforçador dos estímulos tenha sido retardada e/ou observada em condições com maior custo de resposta. / Chronic Mild Stress (CMS) is an animal model of depression. Chronic exposure of rats to a protocol of mild stressors produces decrease in sucrose intake and reduction in the preference for sucrose over water, which is considered as a measure of anhedonia, a core symptom of depression. Three Brazilian studies from PUC-SP showed that the additional exposure of rats to operant sessions using FR water FR sucrose concurrent schedule of reinforcement attenuates this effect. The objective of this study was to investigate if the submission to operant conditions that involves other reinforcers would also attenuate the decrease in sucrose consumption. Three experimental conditions were proposed: 1) exposure to a protocol of mild stressors for six weeks; 2) weekly tests of water and water + 2% sucrose intake; 3) operant sessions. Subject 09 was exposed only to conditions (1) and (2). Eight subjects were submitted to conditions (1), (2) and (3): access to a running-wheel served as reinforcer, in CRF, for subjects 05, 06, 07 and 08 and food was the reinforcer for other four subjects: 01 and 04 were submitted to a FR6 schedule of reinforcement and 02 and 03 to a FR12 schedule of reinforcement. It was observed that the subject 09, that was submitted only to stressors showed, again, a decrease in sucrose consumption and preference. The other eight subjects did not show this effect. A decrease in sucrose consumption was noted only in the first test after exposure to the protocol. These results suggest that submission to these operant conditions affected the traditional effect of the exposure to mild stressors and it corroborates and amplifies previous studies. During operant conditions, it was observed that lever presses decreased during fifth week of exposure to stressors for subjects responding on FR12 and during fifth or sixth week for subjects responding on FR6. Performance on running wheel changed according to body weight. It is possible that exposure to these operant conditions diminished the stressors effects and that the decrease in the reinforcing value of these stimuli was delayed and/ or observed under conditions with higher response cost.

Atualmente, ainda é incerto se a hidrólise de L-arginil-&beta;-naftilamida (ArgNA) e do leucotrieno (LT) A4 pela LT-A4-hidrolase (LT-A4-H) (EC 3.3.2.6) e pela aminopeptidase básica (APB) (EC 3.4.11.6) tem influência no desenvolvimento da artrite induzida por colágeno (CIA). O objetivo deste estudo foi investigar a inter-relação entre LT-A4-H, APB e LT-B4 em ratos submetidos à CIA. Cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), ensaio imunoenzimático (EIA), espectrofluorimetria e reação quantitativa em tempo real em cadeia da polimerase (qPCR) foram usados como metodologias. A existência dos genes para as proteínas EC 3.3.2.6 e EC 3.4.11.6 foi confirmada no tecido sinovial (TS) de ratos controles sadios. A hidrólise de ArgNA aumentou na fração solúvel (FS) dos animais submetidos à CIA que desenvolveram a doença (artríticos-CIA) em comparação com aqueles que não desenvolveram a doença (resistentes-CIA) e com os controles sadios. No líquido sinovial (SY) e no plasma sanguíneo houve menor hidrólise de ArgNA em resistentes em comparação aos artríticos e controles. Nas células mononucleares do sangue periférico (PBMCs), os níveis de hidrólise de ArgNA aumentaram na FS de controles e na fração de membrana (FM) dos resistentes em comparação aos artríticos. Em comparação com controles sadios, a hidrólise de LT-A4 aumentou no SY e na FS de PBMCs de artríticos e resistentes. A hidrólise de LT-A4 também aumentou na FM do TS de resistentes e diminuiu na FM de PBMCs em artríticos e resistentes. Em todos estes compartimentos a hidrólise de ArgNA permaneceu inalterada ou relacionou-se inversamente com a hidrólise de LT-A4, comparativamente aos controles sadios. A hidrólise de ArgNA diferiu entre os artríticos e resistentes em FM-TS, FS-TS, FM-PBMCs, SY e no plasma sanguíneo. Uma relação no mesmo sentido foi encontrada entre alterações na hidrólise de LT-A4 e nos níveis de LT-B4 apenas em SY e FM-PBMCs dos artríticos e resistentes e em FM-TS dos resistentes, comparativamente aos controles sadios. Em conclusão, a atividade APB é um novo marcador que distingue ratos artríticos e resistentes no modelo CIA. Os níveis de LT-B4 em ratos não são controlados somente pela LT-A4-H. Alterações na atividade LT-A4-H e nos níveis de LT-B4 são indistinguíveis entre artríticos e resistentes, mas tais alterações marcadamente distinguem essas duas condições da condição saudável. LT-A4-H e APB estão relacionadas de uma forma compartimento-dependente, atuando como enzimas independentes, com modulação diferencial das suas especificidades, eficiências e/ou afinidades catalíticas sobre os substratos epóxi e peptídico, ou como enzimas bifuncionais, cujas atividades são inversamente relacionadas devido à inibição concorrente de uma destas atividades / Whether L-arginyl-&beta;-naphthylamide (ArgNA) and leukotriene (LT)-A4 hydrolyses by LT-A4 hydrolase (LT-A4-H) (EC 3.3.2.6) and basic aminopeptidase (APB) (EC 3.4.11.6) influence the development of collagen-induced arthritis (CIA) is presently uncertain. The objective of this study was to investigate the interrelationship among LT-A4-H, APB and LT-B4 in CIA rats. High-performance liquid chromatography (HPLC), enzyme immunoassay (EIA), spectrofluorometry and quantitative real time polymerase chain reaction (qPCR) were used as methodologies. The existence of genes for EC 3.3.2.6 and EC 3.4.11.6 proteins were confirmed in the synovial tissue (TS) of healthy control rats. ArgNA hydrolysis was higher in soluble fraction (FS) in rats submitted to CIA that developed the disease (CIA-arthritic) than in those that did not develop the disease (CIA-resistant) or healthy control. Synovial fluid (SY) and blood plasma had lower ArgNA hydrolysis in CIA-resistant than in CIA-arthritic or control. In the peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) the levels of ArgNA hydrolysis increased in FS of control and in membrane-bound fraction (FM) of CIA-resistant in comparison with CIA-arthritic. Compared with healthy control, LT-A4 hydrolysis increased in SY and in FS from PBMCs of CIA-arthritic and CIA-resistant. LT-A4 hydrolysis also increased in FM from TS of CIA-resistant and decreased in PBMCs-FM of CIA-arthritic and CIA-resistant. In all these locations hydrolysis of ArgNA remained unchanged or it was inversely related with LT-A4 hydrolysis, comparatively to healthy control. ArgNA hydrolysis differed between CIA-arthritic and CIA-resistant in TS-FM, TS-FS, PBMCs-FM, SY and blood plasma. A same-sense relationship was found between changes on LT-A4 hydrolysis and LT-B4 levels only in SY and PBMCs-FM of CIA-arthritic and CIA-resistant and in TS-FM of CIA-resistant, comparatively to healthy control. In conclusion, the APB activity is a novel distinctive marker of CIA-arthritic and CIA-resistant statuses. The levels of LT-B4 in rats are not controlled only by LT-A4-H. Changes on LT-A4-H activity and LT-B4 levels are indistinguishable between CIA-resistant and CIA-arthritic, but such variations markedly distinguish these two statuses from healthy status. LT-A4-H and APB are related in a compartment-dependent manner acting as independent enzymes with differential modulation of their specificity, efficiency and/or catalytic affinity on the aminoacyl and epoxy substrates, or as bifunctional enzymes which activities are inversely related due to the concurrent inhibition of one of these

A osteoporose é um distúrbio esquelético caracterizado pela diminuição da força óssea, resultando em um risco aumentado de fratura. A perda óssea ocorre tanto em mulheres como em homens devido ao processo de envelhecimento natural [Drake et al.,2015]. De acordo com o diagnóstico e classificação da Organização Mundial da Saúde (OMS), a osteoporose é definida pela densidade mineral óssea (DMO) na coluna lombar ou quadril inferior a -2,5 do desvio padrão abaixo da média da DMO para uma população de jovens adultos [Cosman et al., 2014]. Tem uma alta prevalência sendo mais freqüente do que a soma de casos de infarto do miocárdio, câncer de mama e acidente vascular cerebral. Essa doença deve ser considerada como um problema de saúde pública, pois afeta o indivíduo em sua função social, física e de trabalho e, portanto, causa impacto socioeconômico [Haddad et al.,2015]. Neste trabalho, desenvolvemos um novo modelo de osteoporose em ratos nude por ooforectomia visando o uso de células humanas para a Medicina Traslacional. Para tanto, foram estabelecidos dois passos e a osteoporose foi analisada por densitometria óssea aos 0, 21, 45 e 60 dias após a cirurgia e por análises histológicas de ossos femorais, i) padronização do modelo animal de osteoporose por ooforectomia, utilizando ratos Sprague-Dawley fêmeas de 12 semanas; ii) na segunda fase do projeto, a osteoporose foi induzida em ratos imunodeficientes nude Rowett fêmeas (NTacFCfiq: NIJ-Whn) de 12 semanas e os mesmos ensaios foram conduzidos para detectar a osteoporose. O soro foi coletado para a medida de estrogênio. As análises da DMO e histológicas mostraram modificação do contéudo mineral e ósseos e da estrutura óssea, respectivamente, aos 60 dias após a cirurgia em ambas as linhagens de ratos fêmeas. Com este trabalho, pretendemos contribuir para a compreensão da biologia da osteoporose utilizando um novo modelo animal, o que pode levar ao desenvolvimento de novos protocolos clínicos e terapêuticos no futuro. / Osteoporosis is a skeletal disorder characterized by decreased bone strength resulting in an increased risk of fracture. Bone loss occurs in both women and men due to the natural aging process [Drake et al.,2015]. According to the World Health Organization (WHO) diagnosis and classification, osteoporosis is defined by the bone mineral density (BMD) in the hip or lumbar spine being less than or equal to -2.5 of the standard deviation below the BMD average for a population of young adults [Cosman et al.,2014]. It has a high prevalence being more frequent than the sum of cases of myocardial infarction, breast cancer and stroke. This disease should be considered as a public health problem, since it affects the individual in his social, physical and work function and, therefore, causes socioeconomic impact [Haddad et al.,2015]. In this work, we developed a new rat model of osteoporosis by oophorectomy aiming the use of human cells for Traslational Medicine. To this end, two steps were established, i) standardization of the animal model of osteoporosis by oophorectomy, using female Sprague-Dawley rats at 12 weeks. The osteoporosis was analyzed by bone densitometry at 0, 21, 45 and 60 days after surgery and by histological analyzes of femoral bones. The serum was collected for measurement of estrogen markers; ii) at second stage of the project, osteoporosis was induced in immunodeficient female nude Rowett (NTacFCfiq: NIJ-Whn) at 12 weeks and the same assays were conducted to detect osteoporosis. Bone mineral density and bone histological analyzes showed changes in the of bone mineral content and bone structure, respectively, at 60 days after surgery in both rat lineages. With this work, we intend to contribute to the understanding of osteoporosis biology using a new animal model, which can lead to the development of new clinical and therapeutic protocols in the future.

Foi desenvolvido um modelo experimental de Acidente Vascular Encéfalo Isquêmico (AVE) em suínos utilizando seis animais jovens, oriundos de granjas da região da Grande São Paulo, com 20kg de peso vivo em média, sendo todas fêmeas e hígidas. Estes foram submetidos a sedação com Quetamina (5mg/kg), Midazolan (0,5mg/kg) e Fentanil (0,005mg/kg) por via intramuscular e posteriormente intubados via oro - traqueal. A manutenção anestésica foi realizada utilizando isoflurano (vaporizador calibrado a 1,5%). Puncionou-se uma veia auricular para fluido e medicação de emergência se necessário. Os animais em plano anestésico foram submetidos a uma cateterização da artéria femoral que com auxilio de um fluoroscópio (Philips). Guiouse um cateter até a artéria carótida interna esquerda, local onde foi identificada a rede admirável epidural rostral. Mediante injeção de contraste (Telebrix), constatou-se que a cateterização apresentava-se seletiva na artéria carótida interna em posição ventral à rede admirável. Com esta confirmação fez-se a infusão de 1,0g de micro esferas de vidros que possuíam aproximadamente 0,4mm de diâmetro. Este procedimento de seletivação da artéria carótida interna foi repetido no antímero direito, realizandose a infusão de mesma quantidade de micro esferas, perfazendo um total de 2g de micro esferas de vidros por animal. Após 4 dias (96 horas) estes animais foram submetidos ao exame de ressonância nuclear magnética no Instituto de Física da USP. Para este procedimento os animais eram mantidos anestesiados com propofol (3mg/kg) por infusão continua durante todo o exame. A análise das imagens obtidas pela ressonância nuclear magnética indicou que este procedimento causou pontos de isquemia cerebral principalmente no antímero esquerda do cerebelo dos animais. Este fato confirmou as observações realizadas pela sintomatologia clínica apresentada pelos animais nos dias que antecederam o exame de ressonância nuclear magnética. Com estas lesões podemos afirmar que a metodologia desenvolvida para reprodução de AVE em suínos foi estabelecida. O modelo permite realizar estudos terapêuticos para esta doença que acomete um significativa parcela da população economicamente ativa da sociedade brasileira. / An experimental model of ischemic stroke (AVE) was investigated in healthy young female swine, at 20kg weight, of farms of São Paulo. The animals were sedated using an association of ketamine (5m/kg), midazolam (0.5mg/kg) and Fentanyl (0.005 mg/kg) IM; the maintenance was provided by tracheal entubation and isofluorane (1.5%). Fluid therapy was promoted through a catheter displaced in an auricular vein. Followed the catheterization of the femoral artery with the aid of a fluoroscope (Phillips®), the catheter was directed to the left internal carotid artery being possible the identification of the rete mirabile epidurale rostrale with the application of a radiopaque contratst. After the identification of the rete mirabile epidurale rostrale it was promoted the infusion of 1.0g of glass microsphere (0.4mm diameter); the same procedure was promoted on the right antimere through the right internal carotid artery, therefore, 2.0g of glass microsphere was injected in each animal. The animals were submitted to resonance scanning exam at day 4 (96 hours), after the surgical event, at the Physics Institute - USP. The resonance exam was carried out with the animals under intravenous anesthesia using continuous infusion of propofol (3mg/kg). The scanned images were analyzed and revealed focal cerebral ischemia at some regions mainly in the left antimere of the cerebellum, which can explain the clinical symptoms. We would infer the applied technique is suitable to develop ischemic stroke in swine and the animal modeling allows the investigation of therapeutics for this illness which compromises a significant economically.

Dilated cardiomyopathy (DCM) is the third most common cause of heart failure, often associated with arrhythmias and sudden cardiac death if not controlled. Metabolic and/or environmental factors, such as alcohol abuse, obesity, diabetes and Chagas disease, alter glycoprotein glycosylation, can lead to DCM. Inherited genetic disease, such as the human congenital disorders of glycosylation (CDG), causes multi-system manifestations including DCM. Non-congenital changes in glycosylation are also occurred in humans with and in animal models of DCM and heart failure. However, mechanisms responsible for glyco-dependent DCM are not understood. Here we sought to investigate the impact of sialylation and N-glycosylation in cardiac function. Partial reduction of N-α2,3-sialylation achieved through ST3Gal4 deletion (ST3Gal4-/-) led to adult late-onset DCM. The DCM symptoms progressed gradually, developing thinner left ventricular walls and dilation of all four chambers by 18-month old, but with preserved systolic function. Transverse aortic constriction (TAC) was used as a chronic stressor on 16-20 week old mice to determine whether the ability of the ST3Gal4-/- heart to compensate against pathologic insult is compromised. TAC’d ST3Gal4-/- mice presented with insufficient hypertrophy and reduced systolic function that deteriorated into congestive HF within six weeks post-surgery, while constricted WT hearts remained well-adapted throughout (ejection fraction, ST3Gal4-/-=34±5.2%; WT =53.8±7.4%; p<0.05).Calcineurin expression was decreased in ST3Gal4-/- (compared to TAC’d WT), contributed to the maladaptation of TAC’d ST3Gal4-/-. In order to better understand the role of glycosylation on cardiac function, we generated a cardiomyocyte specific knockout (αMHC-Cre) of glycosyltransferase responsible for synthesizing complex and hybrid N-glycans, Mgat1, (Mgat1CKO). Similar to but much more severe than that observed in ST3Gal4-/-, Mgat1CKO developed early-onset of DCM, late adult mortality, severely impaired cardiac systolic and diastolic function and frequent arrhythmias. Marked sex-difference in cardiac phenotype was observed in this autosomal gene (Mgat1) deletion, with male Mgat1CKO more severely affected. Both ST3Gal4 and Mgat1 did not participate in murine cardiogenesis, evidenced by normal litter size, Mendelian distribution of genotypes, no septal defect or vessel deformation under autopsy or echocardiography. In conclusion, we provided here the first and direct evidence of desialylation-elicited idiopathic dilated cardiomyopathy (DCM), reporting the cardiac phenotype of ST3Gal4-/-and cardiac-specific knockout of Mgat1. Our data showed sialylation and complex N-glycosylation are essential for cardiac function, and reduced N-glycosylation or sialylation leads to DCM development, contractile dysfunction and arrhythmia.