Made available in DSpace on 2015-04-14T13:29:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 431505.pdf: 2652734 bytes, checksum: 34930e0dc8e71cd2f8bedee48c925054 (MD5) Previous issue date: 2011-03-25 / O ?cido hialur?nico (AH) ? o material de preenchimento est?tico reabsorv?vel mais empregado na atualidade. Seu uso indiscriminado tem frequentemente evidenciado rea??es indesej?veis nos usu?rios destes produtos. A literatura cient?fica dispon?vel n?o esclarece, de forma conclusiva, a etiologia dos efeitos adversos que podem ocorrer a partir da sua inje??o. A presente pesquisa teve por objetivo avaliar, por meio da an?lise cl?nica e histol?gica, a resposta tissular local e sist?mica de duas concentra??es de AH em l?ngua de ratos. Cinquenta e quatro ratos f?meos (Rattus norvegicus, Wistar) foram distribu?dos em 3 grupos de tratamento (AH 5,5mg/mL, AH 25mg/mL e NaCl 0,9 % - controle) e 3 tempos experimentais (7 dias, 60 dias e 90 dias). Antes da eutan?sia, procedeu-se a avalia??o cl?nica, atrav?s de par?metros de presen?a e aus?ncia de sinais. Posteriormente, removeu-se l?ngua e rim direito para an?lise microsc?pica. Nos cortes de l?ngua corados por hematoxilina e eosina (HE), mensurou-se par?metros de aus?ncia ou presen?a de rea??o inflamat?ria, sendo esta classificada como leve, moderada ou severa. Nos cortes corados com picros?rius, estabeleceuse o percentual de fibras col?genas presentes. Nas amostras obtidas do rim (HE), foram observadas a presen?a ou aus?ncia de resposta inflamat?ria em toda a extens?o da l?mina. As altera??es cl?nicas presentes n?o foram estatisticamente significativas entre os grupos (Kruskal-Wallis; p>0,05). Histologicamente, os grupos AH apresentaram maior grau de inflama??o que os controles em todos os tempos do experimento (Kruskal-Wallis, p< 0,01). Quanto ? fibroplasia, o grupo AH 25mg/mL tendeu a formar mais col?geno se comparado ao grupo controle (ANOVA Mixed Models; p=0.016). Em 100% das amostras de rim analisadas, n?o se observou resposta inflamat?ria. A partir da metodologia utilizada neste estudo, os resultados obtidos permitem concluir que (1) O AH nas concentra??es de 5,5 e 25mg/mL provocou altera??es cl?nicas vari?veis e ocasionais em todos os per?odos; (2) O AH nas Atr 14 concentra??es utilizadas, em at? 7 dias, promoveu um grau moderado de inflama??o tecidual; (3) A rea??o inflamat?ria circunjacente ?s part?culas do AH diminuiu de intensidade entre 60 e 90 dias, reduzindo a possibilidade de rea??es adversas pelo uso do material; (4) O AH 25mg/mL suscitou maior forma??o de col?geno se comparado ao grupo controle; (5) N?o houve resposta inflamat?ria e/ou migra??o sist?mica renal a partir da inje??o do AH a 5,5mg/mL e 25mg/mL em at? 90 dias de observa??o.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-05-07T12:17:11Z No. of bitstreams: 1 468069 - Texto Completo.pdf: 1430495 bytes, checksum: 0bb6fedf792362692d6371829315b2e1 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-07T12:17:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 468069 - Texto Completo.pdf: 1430495 bytes, checksum: 0bb6fedf792362692d6371829315b2e1 (MD5) Previous issue date: 2015-03-31 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Hyaluronic acid (HA) and polymethylmethacrylate (PMMA) are the most used dermal fillers nowadays. The indiscriminate use of such substances has brought to light unwanted adverse effects. Thus biocompatibility studies are a necessity, since the scientific literature does not clarify the etiology of these effects. The current research has evaluated cytotoxic, genotoxic and mutagenic responses from distinct in vitro tests performed in an independent manner. The cytotoxicity potential of the materials was evaluated by the induction of an inhibition halo in a solid yeast cultures. To conduce a preliminary view, the dilutions ranging from 10-2 to 10-5 were verified. For quantitative test, the colonies were counted to estimate the CFU/mL (colony-forming units per milliliter) values. Halo inhibition test showed that only silicone, used as a positive control, was capable of inducing cytotoxicity in this yeast. The preliminary experiment also indicated silicone and HA 16 mg/mL as a cellular toxicity inductor material. Quantitative test indicated that HA 20 mg/mL and 0.1mL volume inhibited cell proliferation (ANOVA, Tukey test, p? 0.05). PMMA was dosedependent to 2 and 10% concentrations (Tukey test, p? 0.05). 30% PMMA showed cell proliferation inhibition similar to the negative control. Silicone proved to inhibit S. cerevisiae cell proliferation (Tukey test, p? 0.05). In a second investigation, in Chinese hamster lung fibroblasts (V79 cells), the cytotoxic, genotoxic and mutagenic potentials of 20 mg/mL HA and 30% PMMA were determined. For testing these effects, clonogenic survival, comet and micronucleus assay were performed. HA and PMMA were able to decrease the colony formation when cultures were exposed to compounds by 24 h followed by 6 days in drug-free media. In addition, no genotoxic effects were detected in the 3 or 24 h of exposure to HA or PMMA. In the same manner, both dermal fillers did not induce increase in the micronucleus frequency in binucleated cells. Taken together, these results suggest that (1) 20 mg/mL HA and 10% PMMA are cytotoxicity inductors for the eukaryotic model S. cerevisiae; (2) 20 mg/mL HA and 30% PMMA have a weak cytotoxic activity in V79 cells; (3) the tested substances do not cause detectable DNA damage and chromosome alterations in V79 cells. / O ?cido hialur?nico (AH) e o polimetilmetacrilato (PMMA) s?o os materiais de preenchimento est?tico mais empregados na atualidade. Seu uso indiscriminado tem evidenciado efeitos indesej?veis nos usu?rios destes produtos, tornando necess?rio o estudo da biocompatibilidade dos mesmos, uma vez que a literatura cient?fica dispon?vel n?o esclarece, de forma conclusiva, a etiologia das rea??es adversas que podem se desenvolver a partir da sua inje??o. A presente pesquisa avaliou a resposta citot?xica, genot?xica e mutag?nica, a partir de testes in vitro distintos e efetuados de maneira independente. Utilizando a levedura Saccharomyces cerevisiae averiguou-se a citotoxicidade do AH (16 mg/mL e 20 mg/mL) e do PMMA (2%, 10% e 30%), por meio de experimentos qualitativos e quantitativos. O primeiro procedeu-se pela indu??o de halo de inibi??o. Para conduzir uma an?lise preliminar, as dilui??es 10-2 a 10-5 foram verificadas. No teste quantitativo, as col?nias formadas foram contadas em UFC/mL (unidades formadoras de col?nias por mililitro). Os dados observados em levedura demonstraram que no teste do halo de inibi??o, o silicone, utilizado como controle positivo, foi o ?nico material capaz de induzir citotoxicidade. O exame preliminar tamb?m indicou o silicone e o AH 16 mg/mL como indutores de toxicidade celular. Na an?lise quantitativa, o AH 20 mg/mL no volume de 0,1 mL inibiu a prolifera??o celular (ANOVA, teste de Tukey, p? 0,05). O PMMA apresentou resposta dose-dependente nas concentra??es de 2% e 10% (teste de Tukey, p? 0,05). Por outro lado, o PMMA 30% exibiu n?veis de crescimento celular semelhantes ao controle negativo. O silicone confirmou o impedimento de prolifera??o celular em S. cerevisiae (teste de Tukey, p? 0,05). Numa segunda investiga??o, em cultura de fibroblastos pulmonares de hamster Chin?s (linhagem V79), foram determinados os potenciais de citotoxicidade, genotoxicidade e mutagenicidade do AH 20 mg/mL e do PMMA 30%. Para esses par?metros, a abordagem envolveu os ensaios clonog?nico, cometa e micron?cleos. O AH e o PMMA foram capazes de diminuir o crescimento de col?nias quando as culturas foram expostas aos produtos por 24 h, seguidos por 6 dias em meio com aus?ncia das drogas. N?o foram detectados efeitos genot?xicos em 3 h ou 24 h de exposi??o ao AH ou PMMA. Da mesma maneira, ambas as subst?ncias n?o induziram aumento na frequ?ncia de micron?cleos em c?lulas binucleadas. Os resultados obtidos permitem sugerir que (1) o AH 20 mg/mL e o PMMA 10% s?o indutores de citotoxicidade em modelo eucarioto S. cerevisiae; (2) o AH e o PMMA possuem fraca citotoxicidade sobre a linhagem V79; (3) os materiais testados n?o provocam danos no DNA e altera??es cromoss?micas detect?veis.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:29:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 431500.pdf: 1563957 bytes, checksum: 69f1b1753af9d037782b9078a3ce2f8f (MD5) Previous issue date: 2011-03-24 / A engenharia tecidual, dispondo de c?lulas, matrizes biocompat?veis e fatores de crescimento, pode exercer um grande papel na regenera??o ?ssea. Atrav?s de biopsias de tecido vivo, pode-se obter c?lulas-tronco mesenquimais que, quando expandidas e cultivadas in vitro, s?o capazes de originar tecidos de diversos fen?tipos. Desta maneira, ? poss?vel estabelecer uma alternativa aos enxertos ?sseos, uma vez que a quantidade de material coletado ? menor quando comparada aos enxertos ?sseos convencionais. Essa pesquisa visou contribuir para a melhor escolha de uma matriz biocompat?vel, avaliando in vitro, de forma direta, a citotoxicidade do ?cido hialur?nico TEOSYAL? sobre as c?lulas da linhagem pr?-osteobl?stica de camundongos denominadas OFCOL II de forma quantitativa e qualitativa. Foram criados os seguintes grupos experimentais: A) c?lulas + ?cido hialur?nico (AH) + Plasma rico em Plaquetas com Trombina (PRP) + Hidroxiapatita (HP); B) c?lulas + AH + PRP + HP; C) c?lulas + AH + HP; D) c?lulas + HP; E) c?lulas + AH; F) c?lulas + PRP com trombina; G) c?lulas + PRP e H) c?lulas + DMEM puro com 15% de soro bovino fetal, utilizado como controle. As c?lulas OFCOL II foram semeadas 24 horas antes dos experimentos e incubadas em estufa a 370C com 5% de CO2. Ap?s atingirem a semi-conflu?ncia, as c?lulas foram expostas aos diferentes est?mulos conforme o grupo experimental por um per?odo adicional de 48 horas nas mesmas condi??es de temperatura e umidade. A viabilidade celular foi avaliada atrav?s do teste MTT e comparada ao grupo controle H. Os valores num?ricos, obtidos atrav?s de absorb?ncia, foram submetidos ? an?lise estat?stica ANOVA, complementados por TUKEY, com n?vel de signific?ncia p < 0,05 para compara??o entre todos os grupos. J? para as compara??es entre cada grupo experimental e o controle foi utilizado o Teste T. Na avalia??o da morfologia celular, foi utilizada a microscopia ?ptica em aumento de 100x e 200x. Os resultados encontrados comprovaram uma diminui??o na viabilidade celular nos grupos B (67% de viabilidade) e C (68% de viabilidade), diferindo do grupo D (99% de viabilidade). Ao comparar cada grupo experimental ao grupo controle, foi obtida uma diferen?a estat?stica (p < 0,05) para os grupos B, C e E. Portanto, foi observado, atrav?s destes resultados, uma diminui??o da viabilidade celular nos grupos com a presen?a do ?cido hialur?nico TEOSYAL?. A adi??o do PRP ao ?cido hialur?nico aumentou a 8 viabilidade celular, j? que foi obtida uma viabilidade de 79% (grupo A), por?m, insuficiente para potencializ?-la. Nas imagens, foram encontradas diferen?as morfol?gicas entre os grupos experimentais e o grupo controle. Pode-se concluir que a presen?a do ?cido hialur?nico TEOSYAL? causou diminui??o na viabilidade da linhagem celular OFCOL II.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:30:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 436389.pdf: 2880203 bytes, checksum: 70f9cf1f3dd05a4856e3878cc076250d (MD5) Previous issue date: 2011-12-19 / Dermal fillers are injectable products commonly used in aesthetic medicine with the intention of alleviating face wrinkles and increasing lip volume. This type of treatment, which often replaces traditional surgical procedures such as rhytidectomies, provides satisfactory cosmetic results. It is known, however, that there is a risk of undesired effects at the site of injection of the product or even at a distance. Dental literature reports numerous cases of orofacial injuries caused by the use of dermal fillers, reflecting a new reality in dental surgeons' practice. In this research, 2 of the most commonly used materials for aesthetic purposes by dermatologists and plastic surgeons were injected in rat tongues: 10% polymethylmethacrylate (n=16) and 20mg/mL hyaluronic acid (n=18), compared to an inert solution for control (n=16). After 7, 60 and 90 days, local clinical and histological alterations of each product were analyzed. The following factors were verified: intensity of the inflammatory response in the injection area (hematoxylin and eosin), the amount of newly formed blood vessels and macrophages (immunohistochemistry) and the density of collagen fibers (picrosirius).At the same experimental times, systemic migration of injected substances was observed through microscopic examination of organs of metabolism and excretion (liver and kidney) stained by hematoxylin and eosin. Results showed that both filling materials triggered some kind of local inflammatory response to a greater or lesser degree. In the comparative analysis, it was found that polymethylmethacrylate showed cases of foreign body reaction, while hyaluronic acid demonstrated characteristics suggesting biocompatibility. This research is part of a set of experiments related to the use of facial dermal fillers for aesthetic purposes and it reinforces the need for dental surgeons to identify and manage adverse reactions which may result from such currently widely used treatment. / Os materiais de preenchimento s?o produtos injet?veis utilizados frequentemente na medicina est?tica com a inten??o de atenuar as rugas da face e aumentar o volume dos l?bios. Essa modalidade de tratamento, que muitas vezes substitui procedimentos cir?rgicos tradicionais, como a ritidoplastia, apresenta resultados est?ticos satisfat?rios, embora se saiba da possibilidade de alguns efeitos indesejados ocorrerem no local da implanta??o do produto ou mesmo ? dist?ncia. A literatura odontol?gica relata in?meros casos de les?es buco faciais decorrentes do uso de materiais de preenchimento, refletindo uma nova realidade na pr?tica do cirurgi?o dentista. Nessa pesquisa, 2 dos materiais com finalidade est?tica mais utilizados por dermatologistas e cirurgi?es pl?sticos foram injetados em l?nguas de ratos: polimetilmetacrilato 10% (n=16) e ?cido hialur?nico 20mg/mL (n=18), al?m de uma solu??o inerte para controle (n=16). Ap?s 7, 60 e 90 dias, avaliaram-se as altera??es locais cl?nicas e histol?gicas de cada produto. Foi verificada a intensidade da resposta inflamat?ria na ?rea da inje??o (hematoxilina e eosina), a quantidade de vasos sangu?neos neoformados e de macr?fagos (imunoistoqu?mica) e a densidade de fibras col?genas (picros?rius).Nos mesmos tempos experimentais, a migra??o sist?mica das subst?ncias injetadas foi verificada por meio do exame microsc?pico de ?rg?os de metabolismo e excre??o (f?gado e rim) pela colora??o de hematoxilina e eosina. Os resultados mostraram que os 2 materiais de preenchimento desencadearam, em maior ou menor grau, algum tipo de resposta inflamat?ria local. Na an?lise comparativa, constatou-se que o polimetilmetacrilato demonstrou casos de rea??o a corpo estranho, enquanto o ?cido hialur?nico apresentou caracter?sticas que sugerem biocompatibilidade. Essa pesquisa faz parte de um conjunto de experimentos vinculados ao uso de materiais de preenchimento facial com finalidade est?tica e refor?a a necessidade do cirurgi?o dentista identificar e manejar as rea??es adversas que podem decorrer desse tipo de tratamento amplamente utilizado na atualidade.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:30:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 454708.pdf: 503289 bytes, checksum: ad5f0c77d8fc1163a56cb76e1be4884d (MD5) Previous issue date: 2014-01-15 / In recent decades, tissue engineering techniques have been reported in the literature as an alternative to conventional autogenous grafts for bone defects and subsequent installation of dental implants, combining a material with the same biological properties of autogenous bone without its limiting factors. This technology requires a carrier for the cells, where hyaluronic acid, a natural glycosaminoglycan, appears to have suitable characteristics to carry out this role. It exerts various biological functions depending on its molecular weight, which can be classified as high (> 1000 kDa), low (from 50 to 1000 kDa) or very low (<50 kDa). Furthermore, there is the hyaluronidase, an enzyme that degrades hyaluronic acid into smaller fragments, influencing the cellular response. Thus, this study aimed to evaluate in vitro the influence of the enzyme hyaluronidase (HYAL) on the high hyaluronic acid (HA-HMW) and low molecular weight (HA-LMW) and their potential cytotoxicity on NIH - 3T3 cells. The MTT assay was performed analyzing cell viability of the following groups: (G1) Cells + HA-HMW; (G2) Cells + HA- LMW; (G3) Cells + HA-HMW + HYAL; (G4) Cells + HA-LMW + HYAL; (G5) Cells + HA-HMW + hydroxyapatite; (G6) Cells + HA-LMW + hydroxyapatite; (G7) Cells + HA-HMW + HYAL + hydroxyapatite; (G8) Cells + HA-LMW + HYAL + hydroxyapatite; (G9) Cells (positive control); (G10) Cells + hypochlorite (negative control). The cell viability for each group were as follows: (G1) 76,0%, (G2) 63,3%, (G3) 67,4%, (G4) 76,5%, (G5) 57,6%, (G6) 60,8%, (G7) 64,4%, (G8) 74,3%, (G9) 100% e (G10) 12,4%. It was found that all groups had significantly higher cell viability compared to the negative control. And although there was no significant difference between experimental groups, only the G1, G4 and G8 groups did not differ significantly from the positive control. Therefore, HA-HMW had better viability in the absence of enzyme hyaluronidase, although HA-LMW provided greater cell viability in the presence of the enzyme. Results indicated that the low-weight hyaluronic acid might be applicable for tissue engineering grafting techniques. / Nas ?ltimas d?cadas, t?cnicas envolvendo engenharia tecidual t?m sido reportadas na literatura como op??o alternativa aos enxertos aut?genos convencionais para corre??o de defeitos ?sseos e posterior instala??o de implantes dent?rios. Estas buscam basicamente um material que apresente as mesmas propriedades biol?gicas do osso aut?geno sem seus fatores limitantes. Tal tecnologia necessita, entre outros componentes, de um scaffold para as c?lulas, onde o ?cido hialur?nico, um glicosaminoglicano natural, parece ter caracter?sticas adequadas para exercer este papel. Ele exerce fun??es biol?gicas diferentes dependendo do seu peso molecular, que pode ser classificado em alto (> 1000 kDa), baixo (de 50 a 1000 kDa) ou baix?ssimo (< 50 kDa). Al?m disso, no organismo humano h? a presen?a da hialuronidase, enzima que degrada o ?cido hialur?nico em fragmentos menores, elementos estes que possivelmente podem influenciar a resposta celular. Desta forma, este estudo buscou avaliar, in vitro, a influ?ncia da enzima hialuronidase (HIAL) sobre o ?cido hialur?nico de alto (AH-APM) e baixo peso molecular (AH-BPM), bem como seu poss?vel potencial citot?xico sobre c?lulas da linhagem NIH-3T3. Para tal, foi realizado o teste de MTT analisando a viabilidade celular dos seguintes grupos: (G1) C?lulas + AH-APM; (G2) C?lulas + AH-BPM; (G3) C?lulas + AH-APM + HIAL; (G4) C?lulas + AH-BPM + HIAL; (G5) C?lulas + AH-APM + Hidroxiapatita; (G6) C?lulas + AH-BPM + Hidroxiapatita; (G7) C?lulas + AH-APM + HIAL + Hidroxiapatita; (G8) C?lulas + AH-BPM + HIAL + Hidroxiapatita; (G9) C?lulas (controle positivo); (G10) C?lulas + hipoclorito (controle negativo). A viabilidade celular m?dia de cada grupo foi: (G1) 76,0%, (G2) 63,3%, (G3) 67,4%, (G4) 76,5%, (G5) 57,6%, (G6) 60,8%, (G7) 64,4%, (G8) 74,3%, (G9) 100% e (G10) 12,4%. Os resultados indicaram que todos os grupos apresentaram viabilidade celular significativamente superior ao controle negativo. E apesar de n?o haver diferen?a significativa entre os grupos experimentais, somente os grupos G1, G4 e G8 n?o diferiram do controle positivo. O AH-APM apresentou melhor viabilidade na aus?ncia da enzima hialuronidase, enquanto que o AH-BPM proporciona uma melhor viabilidade celular na presen?a desta enzima.

Made available in DSpace on 2015-04-14T13:30:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 459191.pdf: 819229 bytes, checksum: 3f5f2f0e1d369ad5b2e6c1504cd4c144 (MD5) Previous issue date: 2014-03-27 / The reposition of a lost osseous structure is challenging in oral rehabilitations involving osseointegrated implants. Tissue engineering techniques aiming reposition of lost calcified tissues has evolved in the last years as an alternative to the autologous bone graft, without the need of a donor site. Among the required techniques and biomaterials, the hyaluronic acid (HA) presents itself as promising alternative for tissue engineering. HA is present in the extracellular matrix of all living tissues, and also allows modifications in its structure, serving as a carrier for several compounds utilized in bone repair. Depending on its molecular weight, studies show that different cytotoxic effects might be observed. Thus, the present study evaluated, in vitro, the cytotoxicity of high and low molecular weight HA on NIH-3T3 cells, following the ISO 10993-12 test standards for cytotoxicity analysis. A MTT test was conducted with the following groups: (G1) cells + high molecular weight hyaluronic acid; (G2) cells + low molecular weight hyaluronic acid; (G3) cells + high molecular weight hyaluronic acid + hydroxyapatite; (G4) cells + low molecular weight hyaluronic acid + hydroxyapatite; (G5) cells (positive control); (G6) cells+ hypochlorite (negative control). The results show that most groups presented higher cellular viability when compared to the negative control and lower than the positive control group (p<0.05). Group G1 presented no statistical difference when compared to the positive control (G5) (p<0.05), indicating that high molecular weight HA might be applicable as a cell carrier for tissue engineering. / A reposi??o de base ?ssea perdida ? um fator de grande complexidade nas reabilita??es orais envolvendo implantes osseointegrados. A engenharia tecidual tem evolu?do nos ?ltimos anos por apresentar-se como uma alternativa ao enxerto ?sseo aut?geno, n?o exigindo um sitio doador de tecido para tal. Dentre as principais t?cnicas e biomateriais utilizados em engenharia tecidual, o acido hialur?nico (AH) apresenta-se como um composto promissor como ve?culo celular. Presente na matriz extracelular de todos os tecidos vivos, ele permite sua modifica??o estrutural, maximizando seu potencial como ve?culo celular em reparos ?sseos. Dependendo do seu peso molecular, estudos mostram diferentes efeitos citot?xicos podem ser verificados. Desta forma, este estudo procurou avaliar, in vitro, a citotoxicidade do AH de alto e de baixo peso molecular, sobre c?lulas da linhagem NIH-3T3, segundo o teste padr?o da norma ISO 10993-12 para analise de citotoxicidade. Para isso, um teste de MTT foi realizado com o seguinte arranjo de grupos: (G1) C?lulas + AH de alto peso molecular; (G2) C?lulas + AH de baixo peso molecular; (G3) C?lulas + AH de alto peso molecular + Hidroxiapatita; (G4) C?lulas + AH de baixo peso molecular + Hidroxiapatita; (G5) C?lulas (controle positivo); (G6) C?lulas + hipoclorito (controle negativo). Os resultados mostram que todos os grupos apresentam viabilidade superior ao controle negativo e inferior ao controle positivo exceto o grupo G1, onde verificou-se aus?ncia de diferen?a estat?stica entre este e o controle positivo. Resultados preliminares apontam para o emprego do AH de alto peso molecular como compat?vel para ve?culo celular em engenharia tecidual.

Submitted by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2017-06-29T15:00:54Z No. of bitstreams: 1 TES_DANIEL_GONCALVES_BOECKEL_PARCIAL.pdf: 676511 bytes, checksum: cb9dde990f100982c7eac5a144973b47 (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2017-06-29T15:01:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TES_DANIEL_GONCALVES_BOECKEL_PARCIAL.pdf: 676511 bytes, checksum: cb9dde990f100982c7eac5a144973b47 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-29T15:01:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TES_DANIEL_GONCALVES_BOECKEL_PARCIAL.pdf: 676511 bytes, checksum: cb9dde990f100982c7eac5a144973b47 (MD5) Previous issue date: 2016-12-19 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The present research aims to characterize the mesenchymal stem cells of adipose origin (MSCAs) and to evaluate its use on the scaffold of hyaluronic acid (HA) as a cellular compound for bone tissue engineering. Firstly, cell characterization was performed through the collection of epididymal adipose tissue, isolation, culture and in vitro expansion. Through the morphological analysis of MSCAs culture it was possible to confirm elongated fusiform characteristic, centralized nucleus, extensions and adhesion to the plastic bottle. Expansion analysis also demonstrated a high cell proliferative index during the 26 days of in vitro culture. The Flow Cytometry test allowed the identification of the main surface markers that characterize the mesenchymal stem cells (CD29 and CD90) and negative for hematopoietic markers (CD31 and CD45). Moreover, MSCAs when induced to adipogenic and osteogenic media showed plasticity, since they were able to differentiate into adipocytes and osteoblasts respectively. The cell viability test was also performed in vitro, through the M.T.T (mitochondrial activity) of MSCAs on the HA scaffold. Concentrations of 100%, 75%, 50%, 25% and 15% were evaluated on the HA scaffold at times of 24, 48 and 72 hours. The results have shown cellular viability above 60% in almost all times and concentrations. Then, 50 critical bone defects were performed in the femoral region with 2 mm in diameter (one defect per femur) in 25 Lewis rats. The grafting treatments were divided as follows: I-negative control / only the defect (C); II-HA Scaffold; III- MSCAs; IV- MSCAs + HA and V- MSCAs previously osteoinduced + HA. After 23 days the rats were euthanized and had 5 femurs used for the microtomographic (?-CT) and histomorphometric analysis and 5 femurs used for the RT-PCR (Real-Time Polymerase Chain Reaction) analysis. The results for the ?-CT tests in the volume of osseous tissue parameter (VOT) and the percentage of osseous tissue (POT) did not present statistical differences among all groups. However, on the osseous contact surface (SCO) and osseous surface density (DSO) parameters, we had groups IV, III and V with higher indexes and differing statistically from the negative control groups I and group II. In histomorphometry we also had groups IV, V and III with greater area of regenerated bone tissue and differing with significance from groups I and II. The results were analyzed statistically by Analysis of Variance one way (ANOVA) and the level of significance was 5% (p <0.05). Regarding RT-PCR, a statistically significant difference was observed only when we evaluated osteonectin (ON) in which group II and V were more expressive in relation to groups III and IV. Regarding osteopontin (OP) and Type I collagen (Col1A), no differences were identified among the treated groups. The results were analyzed using Kruskal-Wallis non-parametric test and the significance level set was 5% (p <0.05). / A presente pesquisa tem por objetivo caracterizar as c?lulas-tronco mesenquimais de origem adiposa (CTMAs) e avaliar seu uso sobre a matriz de ?cido hialur?nico (AH) como composto celular para engenharia tecidual ?ssea. Primeiramente, foi realizada a caracteriza??o celular atrav?s da coleta do tecido adiposo epididimal, isolamento, cultivo e expans?o in vitro. Atrav?s da an?lise morfol?gica da cultura das CTMAs foi poss?vel confirmar caracter?stica fusiforme alongada, n?cleo centralizado, prolongamentos e ades?o ? garrafa pl?stica. A an?lise de expans?o tamb?m comprovou um alto ?ndice proliferativo celular, durante os 26 dias de cultura in vitro. J? o teste de citometria de fluxo permitiu a identifica??o dos principais marcadores de superf?cie que caracterizam as c?lulas-tronco mesenquimais (CD29 e CD90) e sendo negativo para marcadores hematopoi?ticos (CD31 e CD45). As CTMAS tamb?m quando induzidas aos meios adipog?nico e osteog?nico mostraram plasticidade, j? que foram capazes de diferenciarem-se em adip?citos e osteoblastos, respectivamente. Ainda in vitro, foi realizado o teste de viabilidade celular atrav?s do MTT (atividade mitocondrial), ap?s o contato das CTMAs sobre a matriz de AH. As concentra??es de 100%, 75%, 50%, 25% e 15% foram avaliadas sobre a matriz de AH nos tempos de 24, 48 e 72 horas. Os resultados comprovaram uma viabilidade celular acima de 60% em quase todos os tempos e concentra??es. Em seguida, foram realizados 50 defeitos ?sseos cr?ticos (DOC) na regi?o femoral com 2 mm de di?metro (um defeito por f?mur) em 25 ratos Lewis. Os tratamentos de enxertia realizados foram divididos da seguinte forma: I-controle negativo / apenas o defeito (C); II- matriz AH; III-CTMAs; IV-CTMAs + AH e V- CTMAs osteoinduzida + AH. Ap?s 23 dias os ratos sofreram eutan?sia e tiveram 5 f?mures utilizados para as an?lises microtomogr?ficas (?-CT) e histomorfom?trica e 5 f?mures utilizados para a an?lise por RT-PCR (Rea??o em cadeia da Polimerase em tempo Real). Os resultados para os testes por ?-CT no par?metro volume de tecido ?sseo (VTO) e porcentagem de tecido ?sseo (PTO) n?o apresentaram diferen?as estat?sticas entre todos os grupos. J?, nos par?metros superf?cie de contato (SCO) e densidade de superf?cie ?ssea (DSO) tivemos o grupo IV, III e V com maiores ?ndices e diferindo estatisticamente dos grupos controle negativo I e do grupo II. Na histomorfometria tamb?m tivemos os grupos IV, V e III com maiores ?reas de tecido ?sseo regenerado e diferindo com signific?ncia dos grupos I e II. Os resultados foram analisados estatisticamente pela An?lise de Vari?ncia de uma via (ANOVA) o n?vel de signific?ncia estabelecido foi de 5% (p < 0,05). Em rela??o ao RT-PCR, observou-se diferen?a estatisticamente significante apenas quando foi avaliada osteonectina (ON), sendo que o grupo II e V apresentaram maior express?o em rela??o aos grupos III e IV. Em rela??o ? osteopontina (OP) e ao col?geno Tipo I (Col1A) n?o foram identificadas diferen?as entres os grupos tratados. Os resultados foram analisados atrav?s do teste n?o param?trico de Kruskal-Wallis e o n?vel de signific?ncia estabelecido foi de 5% (p < 0,05).

Data de aprova??o ausente. / Submitted by Jos? Henrique Henrique (jose.neves@ufvjm.edu.br) on 2016-12-20T12:32:00Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) leticia_marcia_silva_tinoco.pdf: 1813667 bytes, checksum: cc4f9146534721910e6a3dde4429645b (MD5) / Approved for entry into archive by Rodrigo Martins Cruz (rodrigo.cruz@ufvjm.edu.br) on 2017-01-13T15:55:44Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) leticia_marcia_silva_tinoco.pdf: 1813667 bytes, checksum: cc4f9146534721910e6a3dde4429645b (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-13T15:55:44Z (GMT). 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Assim sendo, este trabalho teve por objetivo principal desenvolver, caracterizar e avaliar a atividade antineopl?sica in vitro de nanoemuls?es contendo AR revestidas e n?o revestidas com AH para tratamento de c?ncer de mama. Primeiramente, foi desenvolvido um m?todo espectrofotom?trico, com detec??o do AR em 324 nm, que foi validado em rela??o ? seletividade em rela??o aos componentes de matriz e aos produtos de degrada??o for?ada, linearidade, precis?o, exatid?o e robustez, conforme a legisla??o pertinente. Em seguida, foram desenvolvidas e caracterizadas nanoemuls?es (NE) preparadas por emulsifica??o espont?nea e revestidas eletrostaticamente com AH em diferentes concentra??es. Ap?s o revestimento com 0,5 mg/mL de AH, a NE escolhida apresentou tamanho de 158 ? 5 nm, distribui??o monodispersa e potencial zeta de -19,7 ? 1,20 mV e um teor de encapsula??o de 99,2 ? 0,5%, estando compat?vel com a administra??o parenteral. Al?m disso, as formula??es revestidas permaneceram est?veis ao longo de 60 dias armazenadas a 4?C. O perfil de libera??o do AR a partir dos nanossistemas foi avaliado e observou-se que segue uma cin?tica de primeira ordem, de forma que a taxa de libera??o depende da concentra??o do f?rmaco ainda presente na matriz. Foram, por fim, avaliados os efeitos citot?xicos em linhagens de c?lulas de c?ncer de mama (MCF-7 e MDA-MB-231) e fibroblastos normais (L929) e observou-se que a formula??o revestida promove aumento de atividade antic?ncer do AR, especialmente nas c?lulas que expressam mais os receptores CD44 (MDA-MB-231) e reduzida toxicidade em rela??o ?s c?lulas normais. Desta forma, a encapsula??o do AR em NE revestida por AH pode ser uma abordagem interessante para aumentar a efic?cia e a biodisponibilidade do AR no tratamento do c?ncer de mama e outros tipos de c?ncer que sobre-expressam esse receptor. / Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-gradua??o em Ci?ncias Farmac?uticas, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2016. / Retinoids, such as all-trans retinoic acid (RA), are structural molecules derived from vitamin A and play important roles in various cell types, especially on vision, cell proliferation and differentiation. RA is a lipophilic acid (log P 4.6) with low aqueous solubility, which limits its pharmaceutical use. In order to allow its parenteral administration, an interesting alternative could be its incorporation in lipid nanocarrier systems, such as nanoemulsions (NE). On the other hand, it is possible to increase the target to CD44 receptor expressing tumor cells, coating the NE surface with hyaluronic acid (HA). Therefore, the main goal of this study was to develop, characterize and evaluate the in vitro antitumor activity of RA-loaded NE coated with HA for the treatment of breast cancer. First, a spectrophotometric method was developed, with RA detection at 324 nm, which was validated with regard to selectivity to matrix components and forced degradation products, linearity, precision, accuracy and robustness, in accordance with the proper legislation. Then, the NE, prepared by the spontaneous emulsification and electrostatically coated with HA in different concentrations, were developed and characterized. After coating with 0.5 mg/mL, the chosen HA-coated NE presented size of 158 ? 5 nm, monodisperse distribution, zeta potential of -19.7 ? 1.20 mV and encapsulating efficiency of 99.2 ? 0.5%, which is compatible with parenteral administration. Moreover, the coated formulations remained stable over 60 days stored at 4 ?C. The RA release profile from the nanosystems was evaluated and it follows the first order kinetics, so that the release rate depends on the drug concentration still present in the matrix. Finally, the cytotoxic effects were assessed in breast cancer cell lines (MCF-7 and MDA-MB-231) and in normal fibroblasts (L929), and found that the coated formulation promotes increased anticancer activity of RA, especially in cells expressing plus CD44 receptors (MDA-MB-231) and reduced toxicity compared to normal cells. Thus, the encapsulation of RA in HA-coated NE can be an interesting approach to increase the RA efficacy and bioavailability in the treatment of breast cancer and other cancers overexpressing that receptor.