Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-03Bitstream added on 2014-06-13T19:04:39Z : No. of bitstreams: 1 duarte_kf_dr_jabo.pdf: 413050 bytes, checksum: 2d6d9cfb8e49274f4b726645266116bb (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Quatro experimentos foram conduzidos no Setor de Avicultura da Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias – Campus de Jaboticabal- SP, com o objetivo de estabelecer diferentes critérios de avaliação das exigências dos aminoácidos digestíveis treonina, triptofano, valina e isoleucina para frangos de corte de 22 a 42 dias de idade. Em cada experimento foram utilizados 1.920 frangos de corte machos com 22 dias de idade da linhagem “Cobb”, distribuídos em um delineamento inteiramente ao acaso, com seis tratamentos e oito repetições de 40 aves cada. Os tratamentos consistiram no fornecimento de dietas formuladas com base em aminoácidos digestíveis contendo seis diferentes níveis do aminoácido em estudo. Foram avaliados os dados de desempenho (ganho de peso, consumo de ração, conversão alimentar e viabilidade criatória) e as características de carcaça (rendimento de carcaça, de peito, de coxas+sobrecoxas, de dorso e de asas). Para a determinação das exigências do aminoácido estudado, foram utilizados três modelos de regressão: o modelo quadrático, o modelo exponencial e o de retas segmentadas ou broken line (“linha quebrada”), com 90% do quadrado máximo, estabelecendo equações principalmente para ganho de peso e conversão alimentar. Em caso de significância estatística, foi adotado também o procedimento de comparação das médias pelo Teste de Duncan a 5% de probabilidade. Com base no comportamento dos dados os níveis de 0,7642 e 0,7514% de treonina digestível (treonina:lisina digestíveis de 71,19% e 70,00%), determinados pelo modelo broken line e pelo teste de Duncan a 5% de probabilidade respectivamente, promoveram os melhores resultados de conversão alimentar. O triptofano digestível, quando no nível de 0,2255% (triptofano:lisina digestíveis de 21%) indicou melhora na conversão alimentar e os níveis de 0,1825 e 0,1919%... / Four experiments were conducted to establish different criteria for evaluation the requirements in threonine, tryptophan, valine and isoleucine for broilers from 22 to 42 days of age. In each experiment it was used 1,920 male broilers (Cobb) in a completely randomized design, with six treatments and eight replications of 40 birds each. The treatments consisted in supply diets formulated according to the ideal protein concept and digestible amino acids, with six different levels of the related amino acid. The data from performance and characteristics of carcass had been evaluated. It was used three regression models: quadratic, exponential and broken line, stablishing equations mainly to body weight and feed conversion. In case of significant statistics, it was used the procedure for means comparison using Duncan test (0.05%). The threonine levels of 0.7642 and 0.7515% (threonine:lysine of 71.19% and 70.00%) determined by broken line and Duncan test respectively, showed better results for feed conversion. For digestible tryptophan at the level of 0.2255% (tryptophan:lysine of 21%) indicated a increase in feed conversion and the levels of 0.1825 and 0,1919 (tryptophan:lysine of 17.88% and 17.00%) determined by Duncan test and quadratic equation respectively, indicated the best results for carcass yield. Digestible valine at the level of 0.7729% (valine:lysine of 72.00) determined by Duncan test, showed the best results for feed intake and viability. At the level of 0.8802% (valine:lysine of 82.00%) the best results for body weight and feed conversion and at 0.8265% and 0.9339% (valine:lysine of 77.00% and 87.00%) the best back yield according to Duncan test. The isoleucine at 0.7729% (isoleucine:lysine of 72.00%) showed a improvement in feed conversion according to Duncan test (0.05%).

abstract: Carbonaceous chondrites (CCs) present a unique opportunity for learning about the earliest organic chemistry that took place in our Solar System. The complex and diverse suite of meteoritic organic material is the result of multiple settings and physicochemical processes, including aqueous and thermal alteration. Though meteorites often inform origin-of-life discussions because they could have seeded early Earth with significant amounts of water and pre-biotic, organic material, their record of abiotic, aqueous, and organic geochemistry is of interest as well. CC materials previously resided on asteroidal parent bodies, relic planetesimals of Solar System formation which never accreted enough material to develop long-lived, large-scale geological processes. These bodies were large enough, however, to experience some degree of heating due to the decay of radiogenic isotopes, and the meteorite record suggests the existence of 100-150 parent bodies which experienced varying degrees of thermal and aqueous alteration for the first several 10 Myr of Solar System history. The first chapter of this dissertation reviews literature addressing aqueous alteration as an essential participant in parent body geochemistry, organic synthesis, or both (though papers which address both are rare). The second chapter is a published organic analysis of the soluble organic material of Bells, an unclassified type 2 chondrite. Analytical approaches to assess terrestrial contamination of meteorite samples are also reviewed in the first chapter to allow introduction in chapter 3 of kinetic modeling which rules out certain cases of contamination and constrains the timing of thermal and aqueous alteration. This is the first known application of isoleucine epimerization for either of these purposes. Chapter 4 is a kinetic study of D-allo-isoleucine epimerization to establish its behavior in systems with large, relative abundances of alloisoleucine to isoleucine. Previous epimerization studies for paleontological or geological purposes began with L-isoleucine, the only protein amino acid of the four isoleucine stereoisomers. Kinetic model calculations using isoleucine stereoisomer abundances from 7 CR chondrites constrain the total duration of the amino acids' residence in the aqueous phase. The comparatively short timescales produced by the presented modeling elicit hypotheses for protection or transport of the amino acids within the CR parent body. / Dissertation/Thesis / Doctoral Dissertation Chemistry 2014

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-02-03Bitstream added on 2014-06-13T19:35:48Z : No. of bitstreams: 1 stradiotti_ac_me_botfmvz.pdf: 241069 bytes, checksum: 21117e40580f8c14e3c8c2d7077e5d8a (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O objetivo deste trabalho foi avaliar o processo de incorporação da L-[13C1]metionina no plasma (PL), fígado (FI), músculo Pectoralis major (PM) e gordura abdominal (GA) de frangos de corte no período de 35 a 49 dias de idade pela técnica dos isótopos estáveis, bem como determinar dosagem e a melhor forma de administração desse aminoácido enriquecido. Foram utilizados 99 frangos de corte machos da linhagem Cobb®, que receberam doses de 29μmol/kg de peso vivo/h, durante 6h, submetidos à administração via intravenosa (VI) e via oral (VO), de solução contendo L-[13C1]metionina. Nos tempos 0,5; 1; 2; 3; 4; 5; 6; 12; 24; 48; 72; 96; 120; 144; 168; 336h, após a primeira dosagem e no tempo 0h (controle), foram abatidas 3 aves/tempo de coleta/tratamento, para coleta dos tecidos. Os dados relativos à velocidade de incorporação da L-[13C1]metionina, obtidos pela análise isotópica foram analisados por meio do método de equação exponenciais de primeira ordem do software Origin® 6.0 Professional (Microcal Software, 1999). Comparando os resultados dos dois grupos de animais (VI e VO) para os três tecidos estudados (PL, FI e PM), o valor de meia vida encontrado para os animais submetidos à VO foi parecido em relação àqueles recebendo VI, indicando assim semelhança na velocidade de troca de carbono, o que implica em mesma velocidade de enriquecimento dos tecidos. A dosagem de 29 μmol de L-[13C1]metionina/kg de peso vivo/h, durante 6h, em frangos de corte de 35 a 49 dias de idade, é suficiente para enriquecer e determinar a quantidade de metionina nos tecidos estudados, sendo a VO a melhor forma de administração. A metionina fornecida aos frangos nesta idade é aproveitada na proporção de 3; 5 e 24% para síntese de PL, LI e PM, respectivamente. Não há incorporação deste aminoácido na GA. Palavras-chave: aminoácido enriquecido, isótopos estáveis, metodologia. / The aim of this study was to evaluate the L-[13C1]methionine incorporation in plasma (PL), liver (LI), Pectoralis major muscle (PM) and abdominal fat (AF) of broilers from 35 to 49 days of age by stable isotope technique and determine dosage and the best way of administration of this amino acid enriched. A total of 99 male Cobb® broilers, which received doses of 29 μmol/kg body weight/hr, for 6hr, subjected to intravenous (VI) and oral (VO) administration of solution containing L-[13C1]methionine. At the times 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168, 336hr, after the first dose and at time 0hr (control) were slaughtered 3 broilers/sampled time/treatment for sampled of tissues. The data related to the rate of incorporation of L-[13C1]methionine obtained by isotopic analysis were analyzed by the method of exponential equation of first order the software Origin® 6.0 Professional (Microcal Software, 1999). Comparing the results of two groups of animals (VI and VO) for the three tissues studied (PL, LI and PM), the value of half life found in animals subjected to VO was similar for those receiving VI, thus indicating similarity in rate of exchange of carbon, which implies the same rate of enrichment of tissues. The dosage of 29 μmol L-[13C1]methionine/kg body weight/h, 6h in broilers from 35 to 49 days of age, is enough to enrich and determine the amount of methionine in the tissues studied, VO being the best form of administration. Methionine given to chickens at this age is exploited in the proportion of 3; 5 and 24% for synthesis of PL, LI and PM, respectively. There is no incorporation of this amino acid in AF.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:55:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 366440 bytes, checksum: 2511220b1b0ec987ad7eb7c382dd5258 (MD5) Previous issue date: 2007-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The experiment was conduced with objective of evaluate the effect of digestible tryptophan levels on the performance and carcass characteristics of heavy swine. A number of 80 commercial hybrid castrated swine males of high genetic potential for lean deposition on carcass were used, with initial and final body weight; respectively, of 97.0 ± 2.81 kg and 125.0 ± 3.31 kg distributed in a randomized experimental block design, with five treatments (0.124; 0.133; 0.142; 0.151 e 0.160% % of digestible tryptophan), respectively to the relationships of 16.5; 17.7; 18.9; 20.1 e 21.3% of digestible tryptophan lysine, with eight repetitions and two animals in each experimental unit. The digestible tryptophan level influenced the daily gain that improved by a quadratic way until the level of 0.144 %. The digestible tryptophan intake increased in a linear way when the tryptophan intake level was increased in the diet. It was not observed effect of the treatments on feed intake, feed conversion and carcass characteristics. It was concluded that the level of 0.144% of digestible tryptophan, corresponding a relationship of digestible tryptophan: lysine of 19.2%, provided the best results of weight gain for barrows with high genetic potential for lean deposition, from 97.0 to 125.0 kg. / O experimento foi conduzido para avaliar o efeito dos níveis de triptofano digestível sobre o desempenho e as características de carcaça de suínos pesados. Foram utilizados 80 suínos machos castrados híbridos comerciais, de alto potencial genético para deposição de carne magra na carcaça, com peso inicial de 97,0 ± 2,81 kg, distribuídos em delineamento experimental de blocos ao acaso, com cinco tratamentos (0,124; 0,133; 0,142; 0,151 e 0,160% de triptofano digestível), correspondendo às relações de 16,5; 17,7; 18,9; 20,1 e 21,3%, de triptofano: lisina digestíveis, com oito repetições e dois animais por unidade experimental. Os animais permaneceram no experimento até atingirem o peso final de 125,0 ± 3,31 kg. Os níveis de triptofano digestível das rações influenciaram o ganho de peso dos animais, que melhorou de forma quadrática até o nível estimado de 0,144%. O consumo de triptofano digestível aumentou de forma linear em função dos níveis de triptofano da dieta. Não houve efeito significativo dos tratamentos sobre o consumo de ração, conversão alimentar e características na carcaça. Concluiu-se que o nível estimado de 0,144% de triptofano digestível correspondente à uma relação de 19,2% com a lisina digestível, proporcionou a melhor resposta de ganho de peso dos suínos machos castrados de alto potencial genético, dos 97,0 aos 125,0 kg.

Submitted by MARIANA KIYOMI MARUNO null (mkmaruno@hotmail.com) on 2016-08-27T11:58:08Z No. of bitstreams: 1 MarunoMK_Tese.pdf: 1894584 bytes, checksum: 005c208a24cbace9a87dd40260b94115 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-08-30T14:37:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 maruno_mk_dr_bot.pdf: 1894584 bytes, checksum: 005c208a24cbace9a87dd40260b94115 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-30T14:37:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 maruno_mk_dr_bot.pdf: 1894584 bytes, checksum: 005c208a24cbace9a87dd40260b94115 (MD5) Previous issue date: 2016-08-12 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Este estudo tem por objetivo avaliar se a metodologia de isótopos estáveis convalida e acrescenta informações adicionais às obtidas com a metodologia convencional de dose e resposta de em estudos de exigências nutricionais em frangos de corte. O estudo presente no Capítulo II avaliou o período que compreendeu de 1 a 20 dias de idade e, foi realizado um ensaio experimental aplicando-se a metodologia de dose e resposta outro com a de diluição isotópica. Os ensaios foram em delineamento inteiramente casualisado e em ambos, foram utilizadas dietas experimentais seguindo as recomendações propostas por Rostagno et al. (2011) exceto em lisina digestível. As dietas foram balanceadas a base de plantas do ciclo fotossintético C3 e consistiram em: 100Lys (1,17% de lisina, seguindo a recomendação de Rostagno et al. (2011)); 85Lys (1,01% de lisina); 90Lys (1,06% de lisina); 95Lys (1,11% de lisina); 105Lys (1,23% de lisina); 110Lys (1,29% de lisina) e 115Lys (1,35% de lisina digestível). No ensaio com aplicação da técnica de dose-resposta avaliou-se desempenho e rendimento de carcaça e no ensaio que foi utilizado técnica dos isótopos estáveis, foi avaliado o turnover de 13C do fígado, tíbia, músculo do peito e da coxa. Para desempenho foi observado diferença significativa para consumo de ração (P<0,013), com maior consumo para os frangos do tratamento 100Lys e menor para 95Lys. As aves do tratamento 105Lys (P<0,007) foi o que apresentou maior rendimento de carcaça, porém quando avaliado em termos de peso absoluto, observou-se maior peso para carcaça (P<0,001), peito (P<0,001) e coxa (P<0,027) para o tratamento 115Lys e, maior peso de coxa (P<0,001) para o tratamento 105Lys. Para diluição isotópica pôde-se observar que o nível de lisina presente na dieta influencia diretamente as taxas de turnover, de crescimento e metabólica. As aves do tratamento 85Lys foram as que apresentaram maiores valores de meia vida e troca total, quando avaliadas as taxas de turnover e metabólica. Já quando os níveis de lisina administrados eram acima ou os conforme recomendados por Rostagno et al. (2011), verificou-se reduções das taxas de turnover e metabólica. Baseado nos resultados de rendimento de carcaça e de turnover, observou-se que o tratamento 100Lys foi o mais adequado para frango de corte na fase inicial. O Capílulo III avaliou de 22 a 42 dias de idade e, foi realizado um ensaio utilizando a metodologia de dose e resposta, e outro, com a metodologia de diluição isotópica. Os ensaios foram em delineamento inteiramente casualisado e em ambos foram utilizadas dietas experimentais seguindo as recomendações propostas por Rostagno et al. (2011), exceto em lisina digestível. As dietas foram à base de plantas do ciclo fotossintético C3 e consistiram em: 100Lys (1,04% de lisina, conforme recomendado por Rostagno et al., 2011)); 85Lys (0,89% de lisina); 90Lys (0,94% de lisina); 95Lys (0,99% de lisina); 105Lys (1,09% de lisina); 105Lys (1,14% de lisina) e 115Lys (1,21% de lisina digestível). O ensaio com o uso da técnica de dose e resposta objetivou avaliar o desempenho e rendimento de carcaça e o ensaio com aplicação da técnica dos isótopos estáveis, o turnover de 13C do fígado, tíbia, músculo do peito e da coxa. Para análise de desempenho, rendimento e peso absoluto de carcaça e partes não foram observadas diferenças significativas para nenhuma variável analisada (P>0,05). Com os resultados gerados no ensaio de diluição isotópica, pôde-se observar que o nível de lisina presente na dieta influencia diretamente a taxa de turnover, de crescimento e metabólica, principalmente para os músculos da coxa e do peito. Para os tecidos musculares, o tratamento 85Lys foi o que apresentou menores valores de meia vida e troca total. Quando os níveis eram acima do recomendado Rostagno et al. (2011), o tratamento 115Lys, promoveu redução da taxa de turnover e metabólica. Para essa metodologia, o tecido muscular esquelético e o fígado mostraram ser mais adequado, diferentemente da tíbia. Baseado nos resultados das análises isotópicas, o tratamento 115Lys favoreceu a taxa de troca isotópica, diferentemente do tratamento 85Lys, sendo então considerado menos adequado para frango de corte na fase de crescimento. / This study aims to evaluate and validate the methodology of stable isotopes and adds additional information to those obtained with conventional methodology dose and response in studies of nutrient requirements of broilers from 1 to 20 days of age fed with different levels of lysine digestible. We conducted a trial test using the dose response methodology and another with the isotopic dilution. The tests were completely randomized design and in both the diets followed the recommendations proposed by Rostagno et al. (2011) except lysine. Diets were formulated based on the plants photosynthetic cycle C3 and consisted of: 100Lys (1.17% lysine, according to the recommendation of Rostagno et al. (2011)); 85Lys (1.01% lysine); 90Lys (1.06% lysine); 95Lys (1.11% lysine); 105Lys (1.23% lysine); 110Lys (1.29% lysine) and 115Lys (1.35% digestible lysine). In the assay with dose-response technique, performance and carcass yield were evaluated and the assay technique of stable isotopes was evaluated carbon-13 turnover in the liver, tibia, breast and thigh muscle. Performance analysis showed a significant difference only for feed intake (P<0,013), with higher consumption for 100Lys treatment and lower for 95Lys. The 105Lys treatment showed the highest carcass yield (P<0,007), but when measured in terms of absolute weight, there was a heavier weight for carcass (P<0,001), breast (P<0,001) and thigh (P<0,027) for 115Lys treatment and, the heavier weight for drumstick (P<0,001) for105Lys treatment. In isotope dilution assay, it was observed that the level of lysine in the diet directly influences turnover rates, growth and metabolic. The 85Lys treatment showed the lowest values of half-life and full exchange when evaluated the rates of turnover and metabolic. But when the lysine levels were administered were above or as recommended by Rostagno et al. (2011), there are reductions in the rates and metabolic turnover. Based on the results of carcass yield and turnover, it was observed that the treatment 100Lys was suitable for broilers in the initial stage. / FAPESP: 2014/07099-5

Orientador: Antonio Celso Pezzato / Resumo: Este estudo tem por objetivo avaliar se a metodologia de isótopos estáveis convalida e acrescenta informações adicionais às obtidas com a metodologia convencional de dose e resposta de em estudos de exigências nutricionais em frangos de corte. O estudo presente no Capítulo II avaliou o período que compreendeu de 1 a 20 dias de idade e, foi realizado um ensaio experimental aplicando-se a metodologia de dose e resposta outro com a de diluição isotópica. Os ensaios foram em delineamento inteiramente casualisado e em ambos, foram utilizadas dietas experimentais seguindo as recomendações propostas por Rostagno et al. (2011) exceto em lisina digestível. As dietas foram balanceadas a base de plantas do ciclo fotossintético C3 e consistiram em: 100Lys (1,17% de lisina, seguindo a recomendação de Rostagno et al. (2011)); 85Lys (1,01% de lisina); 90Lys (1,06% de lisina); 95Lys (1,11% de lisina); 105Lys (1,23% de lisina); 110Lys (1,29% de lisina) e 115Lys (1,35% de lisina digestível). No ensaio com aplicação da técnica de dose-resposta avaliou-se desempenho e rendimento de carcaça e no ensaio que foi utilizado técnica dos isótopos estáveis, foi avaliado o turnover de 13C do fígado, tíbia, músculo do peito e da coxa. Para desempenho foi observado diferença significativa para consumo de ração (P<0,013), com maior consumo para os frangos do tratamento 100Lys e menor para 95Lys. As aves do tratamento 105Lys (P<0,007) foi o que apresentou maior rendimento de carcaça, porém quando avaliado e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aims to evaluate and validate the methodology of stable isotopes and adds additional information to those obtained with conventional methodology dose and response in studies of nutrient requirements of broilers from 1 to 20 days of age fed with different levels of lysine digestible. We conducted a trial test using the dose response methodology and another with the isotopic dilution. The tests were completely randomized design and in both the diets followed the recommendations proposed by Rostagno et al. (2011) except lysine. Diets were formulated based on the plants photosynthetic cycle C3 and consisted of: 100Lys (1.17% lysine, according to the recommendation of Rostagno et al. (2011)); 85Lys (1.01% lysine); 90Lys (1.06% lysine); 95Lys (1.11% lysine); 105Lys (1.23% lysine); 110Lys (1.29% lysine) and 115Lys (1.35% digestible lysine). In the assay with dose-response technique, performance and carcass yield were evaluated and the assay technique of stable isotopes was evaluated carbon-13 turnover in the liver, tibia, breast and thigh muscle. Performance analysis showed a significant difference only for feed intake (P<0,013), with higher consumption for 100Lys treatment and lower for 95Lys. The 105Lys treatment showed the highest carcass yield (P<0,007), but when measured in terms of absolute weight, there was a heavier weight for carcass (P<0,001), breast (P<0,001) and thigh (P<0,027) for 115Lys treatment and, the heavier weight for drumstick (P<0,001) for105Lys trea... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Antonio Celso Pezzato / Banca: José Roberto Sartori / Banca: José Albertino Bendassolli / Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar o processo de incorporação da L-[13C1]metionina no plasma (PL), fígado (FI), músculo Pectoralis major (PM) e gordura abdominal (GA) de frangos de corte no período de 35 a 49 dias de idade pela técnica dos isótopos estáveis, bem como determinar dosagem e a melhor forma de administração desse aminoácido enriquecido. Foram utilizados 99 frangos de corte machos da linhagem Cobb®, que receberam doses de 29μmol/kg de peso vivo/h, durante 6h, submetidos à administração via intravenosa (VI) e via oral (VO), de solução contendo L-[13C1]metionina. Nos tempos 0,5; 1; 2; 3; 4; 5; 6; 12; 24; 48; 72; 96; 120; 144; 168; 336h, após a primeira dosagem e no tempo 0h (controle), foram abatidas 3 aves/tempo de coleta/tratamento, para coleta dos tecidos. Os dados relativos à velocidade de incorporação da L-[13C1]metionina, obtidos pela análise isotópica foram analisados por meio do método de equação exponenciais de primeira ordem do software Origin® 6.0 Professional (Microcal Software, 1999). Comparando os resultados dos dois grupos de animais (VI e VO) para os três tecidos estudados (PL, FI e PM), o valor de meia vida encontrado para os animais submetidos à VO foi parecido em relação àqueles recebendo VI, indicando assim semelhança na velocidade de troca de carbono, o que implica em mesma velocidade de enriquecimento dos tecidos. A dosagem de 29 μmol de L-[13C1]metionina/kg de peso vivo/h, durante 6h, em frangos de corte de 35 a 49 dias de idade, é suficiente para enriquecer e determinar a quantidade de metionina nos tecidos estudados, sendo a VO a melhor forma de administração. A metionina fornecida aos frangos nesta idade é aproveitada na proporção de 3; 5 e 24% para síntese de PL, LI e PM, respectivamente. Não há incorporação deste aminoácido na GA. Palavras-chave: aminoácido enriquecido, isótopos estáveis, metodologia. / Abstract: The aim of this study was to evaluate the L-[13C1]methionine incorporation in plasma (PL), liver (LI), Pectoralis major muscle (PM) and abdominal fat (AF) of broilers from 35 to 49 days of age by stable isotope technique and determine dosage and the best way of administration of this amino acid enriched. A total of 99 male Cobb® broilers, which received doses of 29 μmol/kg body weight/hr, for 6hr, subjected to intravenous (VI) and oral (VO) administration of solution containing L-[13C1]methionine. At the times 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168, 336hr, after the first dose and at time 0hr (control) were slaughtered 3 broilers/sampled time/treatment for sampled of tissues. The data related to the rate of incorporation of L-[13C1]methionine obtained by isotopic analysis were analyzed by the method of exponential equation of first order the software Origin® 6.0 Professional (Microcal Software, 1999). Comparing the results of two groups of animals (VI and VO) for the three tissues studied (PL, LI and PM), the value of half life found in animals subjected to VO was similar for those receiving VI, thus indicating similarity in rate of exchange of carbon, which implies the same rate of enrichment of tissues. The dosage of 29 μmol L-[13C1]methionine/kg body weight/h, 6h in broilers from 35 to 49 days of age, is enough to enrich and determine the amount of methionine in the tissues studied, VO being the best form of administration. Methionine given to chickens at this age is exploited in the proportion of 3; 5 and 24% for synthesis of PL, LI and PM, respectively. There is no incorporation of this amino acid in AF. / Mestre

Neste trabalho nós crescemos e caracterizamos oticamente cristais de L-treonina e L-lisina-HCl. Esses materiais pertencem a uma família de cristais orgânicos que tem demonstrado potencial para uso como dispositivos ópticos não lineares. Os cristais foram crescidos em solução aquosa pelos métodos de evaporação lenta do solvente e abaixamento controlado da temperatura. Realizamos medidas de óptica linear, índices de refração e a absorção óptica, e de óptica não linear, a geração de segundo harmônico (GSH). Essa nova classe de materiais não linear é de fácil crescimento e apresentam uma boa qualidade óptica e propriedades não lineares comparáveis as dos cristais de KDP. / In this work we grew and optically characterized L-threonine and L-lysine-HCL crystals. These materials belong to a family of organic crystals that have a potential application in nonlinear optical devices. The crystals were grown in aqueous solution by slow solvent evaporation and controlled cooling techniques. We characterized the linear and nonlinear optical properties of these materials, for exarnple, the index of refi-action, optical absorption and second harmonic generation (SHG). This new class of nonlinear medium is easy to grow and present good optical quality and nonlinear properties comparable to KDP crystals.

Neste trabalho, cristais de DL-metionina (C5H11NO2S) sÃo investigados atravÃs de espectroscopia vibracional variando-se os parÃmetros termodinÃmicos temperatura e pressÃo. Medidas de espalhamento Raman foram realizadas no aminoÃcido DL-metionina (C5H11NO2S) na forma à temperatura ambiente na regiÃo espectral entre 40 e 3200 cm-1. Posteriormente foram computados os modos vibracionais e os nÃmeros de onda da molÃcula isolada da DL-metionina na forma (C5H11NO2S) atravÃs de cÃlculos de teoria do funcional de densidade (DFT), implementando o funcional de troca e correlaÃÃo B3LYP e a funÃÃo de base 6-31 G(d,p) com o auxÃlio do programa Gaussian 03. Os cÃlculos computacionais reproduziram as caracterÃsticas do material em boa concordÃncia com o espectro experimental. Com base neste acordo, foi possÃvel associar os nÃmeros de onda observados aos deslocamentos atÃmicos nas molÃculas. Ainda para a molÃcula de DL-metionina foram realizados cÃlculos de distribuiÃÃo de energia potencial PED, o que possibilitou classificar os modos normais de vibraÃÃo com maior precisÃo e confrontar com as que foram reportadas na literatura. Foram realizadas medidas de espalhamento Raman no cristal de DL-metionina na regiÃo espectral entre 50 cm-1 e 3200 cm-1 desde a temperatura ambiente atà a temperatura de 10 K. Nos espectros nÃo foram observadas mudanÃas significativas, apenas reduÃÃo dos efeitos de anarmonicidade que se refletiu na mudanÃa de intensidades e larguras de linha. Nos experimentos de espectroscopia Raman variando a temperatura entre 298 K e 443 K, verificou-se que o cristal de DL-metionina sofreu uma transiÃÃo de fase estrutural em torno de 338 K, as quais foram detectadas no espectro Raman atravÃs das mudanÃas nos picos associados principalmente Ãs vibraÃÃes atribuÃdas ao grupo carboxila (CO2-), e ao grupo anino NH3+, e à ligaÃÃes CS e CSC e grupos CH2 e CH3. A anÃlise dos espectros Raman obtidos apÃs o retorno a temperatura ambiente revelaram que o cristal de DL-metionina recupera a fase inicial. O experimento de anÃlise tÃrmica confirmou a transiÃÃo de fase estrutural sugerida pelos experimentos de espectroscopia Raman a altas temperaturas. Medidas de espalhamento Raman em funÃÃo da pressÃo hidrostÃtica foram realizadas no cristal de DL-metionina. Os experimentos foram feitos no intervalo espectral entre 50 cm-1 e 1200 cm-1 comprimindo a amostra desde a pressÃo atmosfÃrica atà a pressÃo de 5,1 GPa e em seguida descomprimindo-a atà a pressÃo atmosfÃrica atravÃs do uso de uma cÃlula de pressÃo a extremos de diamante. MudanÃas observadas nos modos externos e em modos relacionados Ãs vibraÃÃes das unidades CO2 e NH3+ evidenciaram que o cristal sofre uma transiÃÃo de fase estrutural em 1,5 GPa, envolvendo ligaÃÃes de hidrogÃnio. Os resultados obtidos na descompressÃo da amostra mostraram que a transiÃÃo de fase à reversÃvel. / In this work, DL-methionine crystals (C5H11NO2S) are investigated by Raman spectroscopy varying the thermodynamic parameters temperature and pressure. Raman scattering measurements were performed on DL-methionine amino acid (C5H11NO2S) in the &#61538;&#61472;form at room temperature in the spectral region between 40 and 3200 cm-1. Subsequently the vibrational modes and wave numbers of the isolated methionine molecule through density functional theory (DFT) calculations were computed by implementing the exchange-correlation functional B3LYP and the basis set of 6-31 G (d, p) with the aid the Gaussian 03. The computational calculations reproduced the characteristics of the material in good agreement with the experimental spectrum. Based on this agreement, it was possible to associate the observed wave numbers with atomic displacements in the molecules. Also for the molecule of DL-methionine calculations distribution of potential energy PED were performed, allowing classifying eigenmodes with greater precision and confront those that have been reported in the literature. Measurements of Raman scattering in the crystal of DL-methionine in the spectral region between 50 cm-1 and 3200 cm-1 were performed from room temperature to the temperature of 10 K. In the spectra, no significant changes were observed, only temperature effects associated with decreasing anharmonicity. In the Raman spectroscopy experiments varying the temperature between 298 K and 443 K, it was found that the crystal of DL-methionine has undergone a structural phase transition at around 338 K, which were detected in the Raman spectra through the changes exhibited by the peaks associated with vibrations mainly attributed to carboxyl (CO2-), NH3+ group, CS and CC bonds and CH2 and CH3 groups. The analysis of the Raman spectra obtained after returning to room temperature revealed the crystal DL-methionine retrieves the beta phase. The experiment of thermal analysis confirms the structural phase transition suggested by Raman spectroscopy experiments at high temperatures. Raman scattering as a function of hydrostatic pressure measurements were done in the DL-methionine crystal. The experiments were performed in the spectral range between 50 cm-1 and 1200 cm-1 compressing the sample from atmospheric pressure up to the pressure of 5.1 GPa and then decompressing it to atmospheric pressure. Changes related to the vibrations of the CO2- and NH3+ units and external modes changes show that the crystal undergoes a structural phase transition at 1.5 GPa involving some of the hydrogen bonds. The results of the decompression show that the phase transition is reversible.

Orientador: Prof. Dr. Luciano Puzer / Tese (doutorado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biossistemas, 2018. / Serpinas sao proteinas inibidoras de serino-proteases, responsaveis pelo controle dos mais diversos processos fisiologicos e que cujo mecanismo de inibicao consite em formar um complexo covalente com a enzima alvo, em um processo de inibicao irreversivel. A alca de centro reativo (RCL) e responsavel por interagir com a protease, mimetizando um substrato, e quando clivada se insere como uma ¿À-fita no interior da serpina, trazendo a protease e causando uma distorcao no seu sitio ativo. Como as serpinas forma ligacoes covalentes com seus alvos durante a inibicao, essas proteinas tem sido utilizadas para o estudo do mecanismo de hidrolise das serino-proteases. No entanto, elas tambem oferecem a possibilidade do desenvolvimento de novas drogas contra enzimas relacionadas com patologias, como pode ser o caso da Vioserpina, uma serpina bacteriana capaz de inibir serino-proteases do tipo tripsina-like como a calicreina tecidual humana 5. Encontrar uma maneira de produzir uma Vioserpina fluorescente pode resultar no desenvolvimento de uma poderosa ferramenta para moniotramento e controle dessa e outras enzimas envolvidas com processos patologicos, como o antigeno prostatico especifico (PSA). Dessa maneira, realizamos mutacoes pontuais no gene da Vioserpina para a incorporacao do aminoacido cumarinico via par ortogonal tRNA/aaRS por supressao do codon ambar de parada. O aminoacido cumarinico e um aminoacido nao-canonico capaz de emitir fluorescencia na comprimento de onda de 450 nm quando excitado a 363 nm, permitindo o facil monitoramento e deteccao de uma proteina. Tres residuo distintos da Vioserpina foram escolhidos para a incorporacao do aminoacido cumarinico: Trp 208, Ile 342 (P4 da RCL) e Val 343 (P3 da RCL). A incorporacao nas posicoes Trp 208 e Ile 342 resultou em proteina fluorescentes, mas truncadas apos a insercao do aminoacido. Foi possivel obter uma Vioserpina completa com o aminoacido cumarinico na posicao Ile 342, embora com rendimento muito baixo. Tal mutante apresentou capacidade de inibicao e especificidade diferentes da Vioserpina wild type, em ensaios de inibicao enzimatica contra Tripsina e Quimotripsina, indicando que o aminoacido cumarinico em P4 parece causar diferentes interacoes no momento de inibicao da serpina. Para averiguar as melhores sequencias resultantes da incorporacao do aminoacido cumarinico, foi gerada uma biblioteca de genes da Vioserpina variando aleatoriamente as posicoes P4, P2, P1 e P1f da RCL, com incosporacao do aminoacido cumarinico na posicao P3 (Val 343). A biblioteca de Vioserpina foi apresentada por Phage Display no capsideo do fago M13 fusionada a proteina PIII, utilizando Biopanning para selecao das melhores sequencias com incorporacao do aminoacido nao-canonico, contra a serino-protease quimotripsina. A biblioteca de fagos gerou cinco sequencias com melhor inibicao que da Vioserpina, e mostrou que a insercao do aminoacido cumarinico parece acontecer com maior frequencia quando flanqueado por aminoacidos hidrofobicos ou sem cargas. A incorporacao do aminoacido cumarinico em sequencias da Vioserpina foi bem sucedida, sendo possivel avaliar a insercao de tal aminoacido na capacidade inibitoria dessa serpina. A investigacao da insercao de aminoacido nao-canonicos por Phage Display e Biopanning representa um grande passo para entender melhor como ocorre a incorporacao de tais aminoacidos, e quais residuos podem ocupar com maior naturalidade suas posicoes laterais. / Serpins are serine protease inhibitor proteins, responsible for the control of the most diverse physiological processes and whose mechanism of inhibition consists in forming a covalent complex with the target enzyme, in an irreversible inhibition process. The reactive center loop (RCL) acts as a bait for the protease, and when cleaved it inserts as a â-strand inside the molecule, distorting the protease active site. As serpins form covalent bonds with their targets, these proteins have been used to study the hydrolysis mechanism of serine proteases. However, they also offer the possibility of developing new drugs against disease-related enzymes, as is the case of Vioserpin, a bacterial serpin capable of inhibiting trypsin-like serine proteases such as human tissue kallikrein. Finding a way of producing fluorescent Vioserpin may result in the development of a powerful tool for monitoring and controlling this and other enzymes involved in pathological processes, such as prostate specific antigen (PSA). Thus, we performed point mutations in the Vioserpin gene for incorporation of the coumarin amino acid through tRNA/aaRS orthogonal pair by suppression of the amber stop codon. The coumarin amino acid is a non-canonical amino acid capable of emitting fluorescence at 450 nm when excited at 363 nm, allowing for easy detection of a protein. Three different residues of Vioserpin were chosen for incorporation of the coumarin amino acid: Trp 208, Ile 342 (P4 in RCL) and Val 343 (P3 in RCL). Incorporation at positions Trp 208 and Ile 342 resulted in fluorescent but truncated proteins following amino acid insertion. A complete Vioserpin bearing the coumarin amino acid at the Ile 342 position was possible, although at very low yield. Such a mutant exhibited different inhibition and specificity compared to Vioserpin wild type in enzymatic inhibition assays against trypsin and chymotrypsin, indicating that the coumarin amino acid at P4 appears to cause different interactions during serpin inhibition. To ascertain the best sequences resulting from coumarin amino acid incorporation, a Vioserpin gene library was generated by randomly varying the P4, P2, P1 and P1' positions in RCL, with coumarin amino acid incorporated at the P3 (Val 343) position. The Vioserpin library was exhibited by Phage Display in the M13 phage capsid fused to the PIII protein, using Biopanning against chymotrypsin to select the best sequences with incorporation of the non-canonical amino acid. The phage library generated five sequences with better inhibition than Vioserpin, and pointed to coumarin amino acid insertion appearing to occur more frequently when flanked by hydrophobic or uncharged amino acids. The incorporation of the coumarin amino acid into Vioserpin sequences was successful, and it is possible to evaluate the insertion of such amino acid in the inhibitory capacity of this serpin. The investigation of non-canonical amino acid insertion by Phage Display and Biopanning represents a great step to better understand how the incorporation of such amino acids occurs, and which residues may more naturally occupy their lateral positions