Orientadores: Telma Teixeira Franco, Gustavo Paim Valença / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química / Made available in DSpace on 2018-08-26T21:59:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ayres_BiancaMairaTeixeira_D.pdf: 23160216 bytes, checksum: 967289613483c430d41cd88562085d44 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi a biocatálise de acrilatos de carboidratos, desde glicose até maltodextrina. Maltodextrinas (MD) são produtos da hidrólise do amido, caracterizadas por cadeias de 5 a 20 unidades de ?-D-glicose unidas por ligações ?-1,4 (principalmente). Análises por cromatografia de permeação em gel (HPSEC) caracterizou ampla distribuição de massa molar de amostras padrão ou industriais de MD, apresentando de 1 a 100 unidades de glicose (G1). O fracionamento por etanol para seleção de menores cadeias de glicose não foi efetivo pois variadas frações volumétricas de etanol forneceu contaminação de cadeias curtas no precipitado. Os principais fatores limitantes para a esterificação enzimática da MD com ácido acrílico são baixa solubilidade do substrato sacarídico, inibição por ácido acrílico, polaridade do solvente orgânico que permita atividade enzimática, a qual depende das características da lipase imobilizada como tipo de suporte e origem da lipase. Lipases disponíveis comercialmente na forma imobilizada de Thermomyces lanuginosa (TL IM) ou Candida antarctica (Novozyme 435) e, imobilização por adsorção das lipases de T.lanuginosa, C.antarctica, Candida rugosa e Rizomucor miehei em Accurel EP-100 foram investigadas em triagem associada de solventes orgânicos. Dioxano e Novozyme 435 foram a melhor associação que alcançou maior conversão de G1 e G2. Acrilatos de maltodextrina foram também observados sob incubação com TL IM em TBA. A solubilidade da MD é completa em água, piridina e DMSO, cerca de 1 kg L-1, mas as lipases não são ativas para esterificação nestes solventes. A água é um subproduto da esterificação e sua presença pode deslocar a reação em favor da hidrólise. A adição de DMSO como co-solvente para o sistema reacional contendo 2M2B ou TBA foi comprovado ser menos eficiente que sistemas com 100% dos solventes apolares. A maior área de taxa de aumento da produção direta de acrilatos de maltodextrina foi alcançada com 2-metil-2- butanol como meio reacional. Analogicamente, a acrilação enzimática de n-butanol foi catalisada pela Novozyme 435. Diferentemente dos acrilatos de carboidratos, o produto acrilato de butila pôde ser quantificado por cromatografia em fase gasosa (CG). Sistemas de solventes e co-solventes (tolueno, ciclohexano, 2-metil-2-butanol (2M2B), álcool terc-butílico (TBA) e associações com parcial volume de dimetilsulfoxido (DMSO)) foram estudados para determinar o efeito destes na atividade enzimática específica. O uso de ciclohexano e tolueno resultaram em atividade da enzima três vezes maior que em TBA e 2M2B. n-Butanol e MD são substratos diferenciados pela solubilidade nos solventes orgânicos, os quais devem ser apolares ou pouco polares para permitir atividade catalítica. Uma reação secundária de acrilação com o solvente orgânico, TBA ou 2M2B, foi verificada por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas. A esterificação enzimática de maltose, de maltotriose e maltodextrina com ácido acrílico catalisada pela lipase Novozyme 435 em 2M2B foram analisadas por espectrometria de massas com ionização por eletrospray, ou acoplada à cromatografia líquida de alta eficiência. Essas análises confirmaram a presença de uma até quatro hidroxilas acriladas da maltose (G2) ou da maltotriose (G3). Um processo em duas etapas de biocatálise para produção de acrilatos de carboidratos foi investigado. Inicialmente, G1 ou G2 foram esterificadas enzimaticamente com propionato de vinila ou acrilato de etila por incubação com Novozyme 435 em dioxano. Em subsequente etapa, a cadeia glicosídica destes ésteres foram alongadas a partir da atividade da cicloglicosil transferase de Bacillus macerans com ?-ciclodextrina como doador de grupo glicosil. Cromatografia líquida de alta eficiência com detecção amperométrica e aerossol carregado e cromatografia em camada delgada foram utilizados para identificar os ésteres de oligossacarídeos. Cerca de 75% ou 55% de ?-ciclodextrina foi convertida com consumo de 40.5% de propionato de glicose (G1P) ou 86.3% de propionato de maltose (G2P) pela atividade da CGTase. A composição da solução final foi, desde 2 a 14 unidades de glicose com uma unidade acrilada ou propilada / Abstract: The aim of this work was the biocatalysis of the acrylates of carbohydrates, from glucose up to maltodextrins. Maltodetrins (MD) are starch hydrolysates consisting of ?-D-glucose units bounded by ?-1,4 glycosidic linkages (primarily). Analysis of standard or industrial samples of MD in gel permeation chromatography presented a huge molecular mass distribution, from 1 to 100 units of glucose (G1). An ethanol fractionation step for selection of narrow range of the chains of glucose was unsuccesfull because the precipitate and supernatant were contamined with small molecules. The main limitant factors for enzymatic esterification of MD with acrylic acid are the catering saccharidic substrate (increase its solubility) to the lipase, to avoid (or overcome) inhibition from acrylic acid, and to allow enzymatic activity, which depends on the characteristics of the immobilized lipases (type of support, source of the lipase) and solvent of the system. Commercial immobilized lipases from Thermomyces lanuginosa (TL IM) or Candida antarctica (Novozyme 435) and, lipases from T.lanuginosa, C.antarctica, Candida rugosa and Rizomucor miehei immobilized by absorption in Accurel EP-100 were investigated in a screening of organic solvents. Dioxane and Novozyme 435 were the best association for higher conversion of G1 and G2. TL IM in tert-butanol (TBA) was the only system, which produced acrylates of maltodextrina on TLC plates. The solubility of the MD is complete in water, pyridine and dimethylsulfoxide (DMSO), about 1 kg L-1, but lipases are not active for esterification in these solvents. The water is a byproduct of the esterification and shifts the reversible reaction toward the hydrolysis. The partial addition of the co- solvent DMSO to the reactional system containing 2-methyl-2-butanol (2M2B) or TBA was tested for partial solubilization of the maltodextrin. The systems with only one organic solvent were more efficient than the presence of DMSO. The highest area in high performance liquid chromatography (HPLC) for production of the MD acrylates was achieved with 2M2B as adjuvant. Analogically, the acrylation of n-butanol by Novozyme 435 was studied to better understand the enzymatic acrylation, since the quantification of the product butyl acrylate is possible by gas chromatography (GC). Solvent systems (toluene, cyclohexane, 2M2B, TBA and partial volume of DMSO) were studied to determine the effect of the solvents on the specific enzymatic activity. It was found that cyclohexane and toluene achieved 3-fold the enzyme activity that in TBA and 2M2B. However, n-butanol and MD as substrate are mainly differentiated regards to the solubility in non polar organic solvents which are more suitable for lipase activity. A side reaction of acrylation of the organic solvent, TBA or 2M2B, was verified by GC-Mass Spectrometry. Meanwhile, the enzymatic esterification of maltose, maltotriose and maltodextrin with acrylic acid by Novozyme 435 in 2M2B were analyzed in electrospray ionization (ESI) mass spectrometry (MS) associated to HPLC, which confirmed the presence of mono- until tetra- acrylated hydroxyls for maltose (G2) and maltotriose (G3). A two-step process of biocatalysis for producton of sugar acrylates was investigated. G1 or G2 was acylated with either vinyl propionate or ethyl acrylate by Novozyme 435 in dioxane. Then, the elongation of the chain by cyclodextrin glucanotransferase (CGTase) from Bacillus macerans with ?-cyclodextrin as acyl donor provided maltoligosaccharides esters. CGTase from Bacillus macerans converted these products from the first step and ?-cyclodextrin into oligosaccharide esters. HPLC coupled to charged aerosol detector and amperometric exchange and thin layer chromatography were used to identify the oligosaccharide esters. About 75% or 55% of ?-cyclodextrin was converted under consumption of 40.5% of glucose propionate (G1P) or 86.3% of maltose propionate (G2P) by CGTase activity. The composition of the final solution was since 2 to 14 glucose units with one acrylate or propionate moiety / Doutorado / Engenharia Química / Doutora em Engenharia Quimica

Orientadores: Eliana Cotta de Faria, Daniel Zanetti Scherrer / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-27T08:40:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vieira_IsabelaCalanca_M.pdf: 2013538 bytes, checksum: 1da69ffe7e1902f9886b224c58868207 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: As doenças cardiovasculares (DCV) são as principais causas de morte no Brasil e no mundo. Reduções no colesterol da lipoproteína de alta densidade (HDL-C) estão associadas à DCV aterosclerótica. A lipase hepática (LH) é uma serina esterase que hidrolisa triglicérides e fosfolípides das lipoproteínas plasmáticas e facilita a ligação destas aos receptores celulares, e tem efeitos pró e anti-aterogênicos. O polimorfismo de nucleotídeo único (SNP) do promotor do gene da LH (LIPC) -250G/A (rs2070895) reduz a sua atividade e aumenta as concentrações de HDL-C, entretanto seu efeito sobre a DCV é controverso. Este estudo foi realizado para identificar as relações entre este SNP e a aterosclerose carotídea, atividade da LH, lípides plasmáticos, apolipoproteína A-I (apo A-I) e parâmetros do transporte reverso de colesterol (TRC). Um total de 285 voluntários normolipidêmicos e assintomáticos participaram do trabalho. O SNP foi detectado na plataforma TaqMan® OpenArray® Real Time PCR. A espessura da camada íntimo-medial das artérias carótidas (cIMT) e a presença de placas ateroscleróticas foram determinadas por ultrassonografia modo-?. As frequências genotípicas foram 44%, 41% e 15% para indivíduos GG, GA e AA, respectivamente. Os grupos de genótipos não diferiram significativamente para sexo, idade, índice de massa corpórea, circunferência de cintura e pressão arterial diastólica e sistólica. Não foram observadas variações para cIMT, mas a proporção entre indivíduos com placas e sem placas foi 3,5 vezes maior em AA do que em GG (p?0,05). A análise de regressão linear multivariada demonstrou associações positivas do genótipo AA com HDL-C, tamanho da partícula de HDL e atividade da lipoproteína lipase (LPL), além da relação inversa com a atividade da LH. A análise de regressão logística mostrou que o risco de desenvolvimento de placas aumentou em indivíduos portadores do alelo A em relação ao alelo G (OR=3,9; IC95% = 1,54-10,33; p?0.004), apesar de maiores concentrações de HDL-C, tamanho de HDL e apo A-I, após ajuste para a idade e sexo. As atividades da LH e da lecitina: colesterol aciltransferase (LCAT) endógena reduziram-se (38 e 19%, respectivamente) e a LPL aumentou em 30% (AA x GG). Em conjunto, esses resultados fornecem evidências de que o alelo A é associado com a aterosclerose carotídea em indivíduos aparentemente saudáveis e de baixo risco, o que levanta a questão deste SNP poder ser um marcador de DCV utilizado para medidas de sua prevenção e tratamento / Abstract: Cardiovascular diseases (CVD) are the leading causes of death in Brazil and worldwide. Reductions in high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C) levels are associated with atherosclerotic CVD. Hepatic lipase (HL) is a serine esterase which hydrolyzes triglycerides and phospholipids of plasma lipoproteins, facilitates their binding to cellular receptors and has pro and antiatherogenic effects. The single nucleotide polymorphism (SNP) of the HL gene promoter (LIPC) -250G/A (rs2070895) reduces the activity of HL and increases HDL-C levels, but its effect on CVD is controversial. This study was conducted to identify the relationships between this SNP and carotid atherosclerosis, HL, plasma lipids, apolipoprotein A-I (apo A-I) and reverse cholesterol transport (RCT) parameters. A total of 285 asymptomatic and normolipidemic volunteers participated in the study. SNP detection was performed in the TaqMan® OpenArray® Real Time PCR Plataform. Carotid intima-media thickness (cIMT) and the presence of atherosclerotic plaques were determined by ?-mode ultrasound. Genotype frequencies were equal to 44%, 41% and 15% for GG, GA and AA individuals, respectively. The genotype groups did not differ significantly for sex, age, body mass index, waist circumference and systolic and diastolic blood pressure. No variations were observed for cIMT, but the proportion of individuals with plaques to without plaques was 3.5 times higher in AA than in GG (p?0.05). Multivariate linear regression analysis showed positive associations of AA genotype with HDL-C, HDL size and activity of lipoprotein lipase (LPL) and an inverse relationship with HL activity. The logistic regression analysis showed an increased risk of development of plaques in individuals with A allele as compared with G (OR=3.9; 95%CI=1.54-10.33; p?0.004) despite the increases in HDL-C, HDL size and apo A-I, after adjustment for age and sex. HL and endogenous lecithin: cholesterol acyltransferase (LCAT) were reduced by 38 and 19% respectively, and LPL increased by 30% (AA x GG). Together, these results provide evidence that the A allele is associated with carotid atherosclerosis in apparently healthy and low-risk individuals, which raises the question of this SNP as a CVD marker for preventive and treatment efforts / Mestrado / Clinica Medica / Mestra em Ciências

O comércio mundial de enzimas industriais estava estimado em 2.3 bilhões de dólares entre detergentes (U$ 789 milhões), aplicações alimentícias (U$ 634 milhões), agricultura (U$ 237 milhões), entre outros. Neste contexto, as enzimas lipolíticas estão atraindo enorme atenção devido ao seu potencial biotecnológico, visto que estas podem catalisar múltiplas reações (hidrólise, acidólise, interesterificação e glicerólise). Enzimas lipolíticas de origem microbiana são economicamente atrativas por serem biodegradáveis, atuarem normalmente em condições brandas, e serem quimio-seletivas propiciando à indústria farmacêutica a obtenção de drogas com efeito colateral reduzido. Neste projeto, quatro genes potenciais codificadores de esterases/lipases, advindos de uma biblioteca metagenômica de um consórcio microbiano degradador de óleo diesel, foram clonados em vetores de expressão e expressos em Escherichia coli BL21 (DE3), e as proteínas correspondentes foram submetidas a ensaios funcionais e estruturais. / The global trade of industrial enzymes is estimated at 2.3 billion U.S. dollars, divided mainly between detergents (US$ 789 million), food applications (US$ 634 million), and agriculture (US$ 237 million). Within this trade, lipolytic enzymes have attracted enormous attention because of their biotechnological potential as catalysts of multiple reaction types (including hydrolysis, acidolysis, interesterification and glycerolysis). Lipolytic enzymes of microbial origin are economically attractive because they are easily biodegradable, usually act in mild conditions, and are chemo-selective, providing the pharmaceutical industry a method for obtaining drugs with reduced side effects. In this project, four individual genes encoding putative esterases/lipases identified in a metagenomic library obtained from a microbe consortium isolated from diesel oil-contaminated soil were cloned into expression vectors and expressed in Escherichia coli BL21 (DE3), and their corresponding recombinant proteins were used for functional and structural studies.

No description available.

No description available.

Na indústria coureira há uma grande preocupação com o meio ambiente, já que a maioria das etapas para o processamento do couro são realizadas através de processos químicos. Estes processos devem ser controlados para um baixo impacto ambiental e menor custo de tratamento de resíduos. Este trabalho visa desenvolver um extrato enzimático completamente biodegradável, constituído por lipases de microrganismos, para diminuir o uso de tensoativos nos curtumes. Para tal foi necessário o uso de microrganismos que produzem lipases de maneira eficiente para substratos específicos com a variação no espectro de temperatura e pH utilizados nos processos de processamento do couro. Portanto, foi realizado o isolamento de diversos microrganismos em um curtume e estes foram submetidos à análise da produção de lipases induzida por gordura animal. A partir destes isolados foram selecionados e identificados os melhores produtores de lipases: Bacillus cereus, Bacillus licheniformis, Bacillus subtilis, Pichia pastoris e Proteus sp. Dentre estes microrganismos, o mais promissor, foi a levedura P. pastoris. A produção de lipases é afetada por diferentes fatores ambientais, assim foram testados, em escala piloto, a influência do tempo de cultivo, pH, temperatura de cultivo e agitação. Além disso, também foram testados o uso de goma arábica e três diferentes surfactantes no cultivo para o possível aumento da produção da enzima. As melhores condições de crescimento para uma maior produção de lipase por P. pastoris foram otimizadas em 72 h, 28ºC, pH 8,0 e 200 rpm. A adição de Triton X-100 ao final do cultivo também aumentou a atividade de lipase. A partir destes resultados a levedura foi submetida ao cultivo em reator de 10 L e determinados o melhor tempo de cultivo, o consumo de glicose e a densidade óptica a 600 nm. O melhor tempo de cultivo manteve-se em 72 h. Ao final deste cultivo, o extrato bruto foi utilizado para determinar a estabilidade da enzima à formulação empregada nos processos de curtimento, já que as condições destes processos podem afetar a atividade de algumas enzimas. A enzima não se mostrou estável aos químicos utilizados no processamento de couros. Por isto, para testar a eficácia da enzima em relação aos produtos encontrados no mercado algumas etapas foram reformuladas para que a enzima pudesse manter a sua atividade original. Os resultados destes experimentos mostraram-se satisfatórios, provando que a produção e utilização desta enzima no mercado é promissora. / The tanning industry has a great concern with the environment, since the majority of stages for leather processing is carried out using chemicals. These processes must be controlled for a low ambient impact and lesser cost of residues treatment. This work aims to develop a completely biodegrading enzymatic extract consisting of microbial lipases, to diminish the use of surfactants in the tanneries. For this product production is necessary the use of efficient microorganisms producing lipases for specific substrates with the variation in the specter of temperature and pH used in the tannery. Therefore, the screening of diverse microorganisms in a tannery was carried out and these had been submitted to the analysis of the induced lipases production with animal fat. It had been selected and identified the best lipases producers: Bacillus cereus, Bacillus licheniformis, Bacillus subtilis, Pichia pastoris and Proteus sp. Among these microorganisms, the most promising was P. pastoris. The lipase production is affected by different ambiental factors, thus it was tested, in scale pilot, the influence of the growth time, pH, growth temperature and agitation. Moreover, also the use of arabic gum and three different surfactants in the culture for the possible increase of the enzyme production was tested. The best growth conditions for the best lipase production of P. pastoris are 72 h, 28ºC, pH 8.0 and 200 rpm. The addition of Triton X-100 in the cultivation end also increases the lipase activity. Through these results the yeast was grown in 10 L culture reactor. During this cultivation the best growth time, the glucose consumption and the optical density at 600 nm were determined. The best growth time remained in 72 h. This culture crude extract was used to determine the enzyme stability to the formulation used in the tanning processes, since the conditions of these processes may affect enzyme activity. The enzyme was not stable in the presence of these chemicals. To compare the enzyme effectiveness with the chemicals and commercial enzymes, some processing stages were improved, so that the enzyme could keep its original activity. These results were satisfactory, suggesting that this enzyme production and its commercial use are promising.

Resumo: Lipases são enzimas amplamente distribuídas nos seres vivos e apresentam a função biológica de hidrolisar ligações ésteres de triacilgliceróis, liberando diacilgliceróis, monoacilgliceróis, ácidos graxos e glicerol. Dependendo da atividade de água estas enzimas catalisam outras reações como esterificação, transesterificação, aminólise e lactonização, importantes em diversas aplicações biotecnológicas dessas enzimas. Neste trabalho, uma linhagem de Candida viswanathii foi selecionada, entre outras noventa linhagens de fungos filamentosos e leveduras, como produtora de lipase e suas condições de cultivo foram estudadas em cultivos submersos e em substratos sólido, visando o aumento da produção da enzima. Outro objetivo deste trabalho também foi purificar, imobilizar e caracterizar a lipase produzida nas condições estabelecidas em cultivos submersos. Os resultados obtidos nos cultivos submersos indicaram que, entre as substâncias puras testadas, trioleína e ácido oléico foram os melhores indutores da atividade lipase. Contudo, as melhores condições de cultivo e produção de lipase foram alcançadas utilizando azeite de oliva 1,5% (m/v), extrato de levedura 0,2% (m/v), agitação de 210 rpm, pH 6,0, temperatura de 27,5 ºC, após 72 h de cultivo (biomassa 19,0 g/L; atividade 100 U). A adição de 0,1% (m/v) de lecitina de soja aumentou em 1,5 vezes a produção de lipase (147,5 U). A caracterização bioquímica da lipase do caldo fermentado revelou que se tratava de uma lipase ácida com pH ótimo de 3,5, propriedade descrita pela primeira vez para uma lipase do gênero Candida. A temperatura ótima foi de 40 ºC. Esta enzima bruta mostrou-se altamente estável na faixa de pH 4,0 a 5,0 e na temperatura de 40 ºC após 24 h (100%). Nos cultivos sólidos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Lipases are widely distributed enzymes in animals, plants, bacteria, yeasts and fungi, which hydrolyses ester bonds of triacylglycerols and fatty acids. In addition, these enzymes also catalyse other reactions as esterification, transesterification, aminolysis and lactonization, depending their water activity. The ability of lipases to perform very specific chemical transformation and their enantioselective properties has made them increasingly popular in many biotechnological applications. In this work, Candida viswanathii was selected among ninety filamentous fungi and yeast strains, due to as its lipase activity and culture conditions were studied aiming to increase the enzyme production. Furthermore, this study aimed to purify, immobilize and characterize the lipase produced in submerged cultures. The results showed that triolein and oleic acid are the best inducers of lipase activity. However, the highest lipase production was obtained from 1.5% (w/v) olive oil and 0.2% (w/v) yeast extract in rotary shaker experiments at 27.5 ºC, pH 6.0 and 210 rpm, after 72 h (19.0 g/L biomass; 100 U lipase activity). The addition of 0.1% (w/v) soy lecithin increased 1.5-fold the lipase production (147.5 U). Biochemical characterization of the crude enzyme revealed an acid lipase with optimum pH of 3.5, a property first described in Candida genus. Optimum temperature activity was 40 ºC. Crude lipase was highly stable at pH 4.0 to 5.0 and at temperature 40 ºC during 24 h (100%). Solid substrates cultures from industrial byproducts, xiv the highest lipase production was obtained in wheat bran and barley spent grain (1:1), 40% (w/w) chicken fat, 3.5% (w/w) yeast extract, humidity 40% after 5 days, at 30°C (153 U/gds). Under these culture conditions, the lipase showed optimum activity at pH 5.0 and 50 ºC, and thermal enzyme stability at pH... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Sâmia Maria Tauk-Tornisielo / Coorientador: Eleonora Cano Carmona / Banca: Carlos Renato Corso / Banca: Cintia Duarte de Freitas Milagre / Banca: Rosa dos Prazeres Melo Furriel / Banca: Sandra Regina Ceccato Antonini / Doutor

Orientador: Renato Wendhausen Júnior. / Dissertação (mestrado) - Universidade Regional de Blumenau, Centro de Ciências Exatas e Naturais, Programa de Pós-Graduação em Química.

published_or_final_version / Biochemistry / Master / Master of Philosophy

Using tricaprylin (TC) and trilinolenin (TLN) as substrates, biosynthesis of medium-long-medium (MLM) type structured lipids (SLs), by Lipozyme IM from Rhizomucor meihei and Novozym 435 from Candida antarctica , was investigated to determine their capacity as biocatalysts for the biosynthesis of SLs. At 30°C, Lipozyme IM showed higher bioconversion yield (24.7%) and initial enzyme activity (6.3 mumol CLnC/g enzyme/min) as compared to that of 24.0% and 1.6 mumol CLnC/g enzyme/min, respectively, for the Novozym 435 at 50°C. As a result, Lipozyme IM was subsequently used for further investigations. The SLs were recovered and characterized by silver-ion exchange high-performance liquid chromatography and gas-liquid chromatography. The structural analyses indicated that the major products of the enzymatic reaction were 1,3-dicapryl-2-linolenyl glycerol (CLnC) and 1(3)-capryl-2,3(1)-dilinolenyl glycerol (CLnLn). In order to optimize the bioconversion yield of CLnC, selected parameters, including initial water activity and solvent type, lipase concentration (5 to 20 mg solid enzyme), substrate molar ratios (TC:TLN of 1:4 to 8:1) and molecular sieve (5 to 20 mg/mL, Type 3A), were investigated. The experimental results showed that using hexane at initial aw 0.06, 10 mg solid enzyme/mL and substrate molar ratio of TC to TLN of 6:1 resulted in the highest bioconversion yield of 73.2% of CLnC. However, the addition of molecular sieve to the reaction medium resulted in a 14.0% decrease in the bioconversion yield of CLnC. Using the optimized conditions, the effects of TLN concentration and other selective limiting parameters, including the denaturation of enzyme, aw and the formation of glycerol layer, on the mass productivity (PM), enzymatic productivity (PE) and volumetric productivity (PV) of the interesterification reaction were investigated. Using 80 mM TLN, the maximum PM of 15.5 mg CLnC/g substrates/h was obtained; however, using 200 mM TLN, the maximum PE and PV were 0.07 mg/enzyme unit/h and 6.1 g CLnC/L/h, respectively. The addition of 3 mg Silica gel to the reaction medium resulted in 52.0, 37.3 and 37.3% increase in PM, PE and PV, respectively.