Orientador: Glaucia M. Pastore / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-21T18:50:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SousaNeto_Roselide_M.pdf: 5421437 bytes, checksum: bb45f47bcfa77af3377a10cacce24442 (MD5) Previous issue date: 1996 / Resumo: Quinhentas e cinquenta linhagens de microrganismos foram isolados do solo, frutas, resíduos industriais e testados quanto à capacidade de hidrolisar glicerídeos em meio alcalino. Cinco linhagens de bactérias foram selecionadas como produtoras de lipase alcalina. Entre elas, uma linhagem identificada como Alcaligenes sp., apresentou alta produção de lipase alcalina em meio de cultivo composto por: 2% de farinha de soja torrada, 1% farinha de trigo, 0,5% de K2HPO4, 1 % de água de maceração de milho (com steep liquor) e 0,2% de Na2CO3. A enzima lipolítica de Alcaligenes sp. hidrolisou as ligações éster de triglicerídeos insolúveis em água, podendo assim, ser classificada como lipase (Glicerol Éster Hidrolase E.C.3.1.1.3). Estudou-se a produção da lipase extracelular pela linhagem selecionada, a caracterização da enzima no estado bruto e a purificação através de fracionamento com sulfato de amônio e cromatografia em coluna DEAE- Sephadex A-50. Na purificação das proteínas, foram detectadas 2 frações com atividade de lipase, sendo denominadas de frações I e II. As frações foram coletadas e concentradas em membrana de ultrafiltração. A fração I apresentou atividade ótima. em pH 8 a 40°C. A fração II apresentou atividade ótima em pH 9 a 45°C. A presença de MgSO4 e CaCl2 provocaram um aumento da atividade enzimática das duas frações, por outro lado, ZnSO4 e FeSO4 inibiram moderadamente a atividade enzimática de ambas frações. Os reagentes cisteína e f3-mercaptoetanol inibiram significativamente a atividade enzimática das frações I e II. A esterificação de ácido graxo e glicerol pela lipase bruta de Alcaligenes sp. foi examinada e verificou-se que a enzima esterificou apenas 34% após 48 horas de incubação. A lipase bruta de Alcaligenes sp. mostrou-se estável na presença de detergentes e protease a pH 9. / Abstract: The screening of alkaline lipase of producing microorganisms was performed using 550 strains of microorganisms wich were isolated from samples of soil, fruits and industrial residues. It was found that five strains of bacteria produced high activity of extracellular lipase and one of them produced exceptionally high alkaline lipase activity. This strain was identified as Alcaligenes sp. The medium for lipase production was composed of 2% roasted soybean meal, 1 % wheat meal, 0,5% K2HP04, 1 % of com steep liquor and 0,2% Na2C03. Maximum enzyme activity with olive oil as substrate was observed at pH 9,0 at 45°C. The enzyme extract was purified by fractionation with ammonium sulfate and DEAE Sephadex A-50 column chromatography. In the elution between 0,lM and 0,3M of NaCI, two active fractions were separately, collected, concentrated by ultrafiltration on membrane and characterized. It was observed that optimum pH activity for the fraction I was 8,0 at 40°C with olive oil as substrate. The optimum pH activity for the fraction II was 9,0 at 45°C with olive oil as substrate. The effects of various metal ions and other reagentes at the final concentration of 1 mM on the lipase activity were studied. The fractions I and II were inhibited by ZnS04 and FeS04, on other hand CaCl2 and MgS04 increased the activity. Both fractions were inhibited by f3- mercaptoethanol and cysteine. The enzimatic esterification using oleic acid and glycerol by lipase from Alcaligenes sp was examined. It was found that the reaction system esterified only 34% after 48 hours of reaction time. The lipase from Alcaligenes sp was estable on detergents and protease systems / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador: Glaucia Maria Pastore / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-23T02:49:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Macedo_GabrielaAlves_D.pdf: 9030250 bytes, checksum: 47a229aeca60ac9fd2f042205a387ab7 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: A síntese por esterificação direta de 54 ésteres de cadeia curta, componentes de aroma, foi testada utilizando lípases microbianas não comerciais de Geotrichum sp, Alcaligenes sp, Aspergillus linhagem 1068 e 1099 sp, Rhizopus sp e a lipase comerciai de Candida rugosa. Os ésteres testados foram os derivados dos ácidos acético, butírico, propiônico e láurico com os álcoois metanol, etanol, propanol, isopropanol, butano!, isobiitanol, isopentanol, citronelol e óleo fúsel, constituído por uma mistura de álcoois onde predomina o álcool isoamilico. As lipases não comerciais foram produzidas no Laboratório de Bioquímica de Alimentos da UNICAMP. A síntese foi realizada em meio livre de solvente orgânico e adição de água. Muitos ésteres foram sintetizados com boas taxas de conversão, as quais dependeram do tipo de substrato e da especificidade da lípase empregada. Foram selecionadas as lípases de Geotrichum sp e Rhizopus sp bem como os ésteres acetato, propionato e butirato de isoamila, para o estudo e otimização das condições de síntese. Foi realizado um delineamento experimental inicial do tipo íátorial completo com pontos centrais a fim de se avaliar o efeito das variáveis: temperatura, relação molar entre substratos, quantidade de lípase e tipo de lípase no processo. Como resultado deste delineamento experimental inicial foi selecionada a lípase de Rhizopus sp dentre as duas lípases testadas por ter apresentado melhor rendimento e produtividade na síntese dos três ésteres. A concentração enzimática e relação molar entre os substratos foram, as variáveis mais importantes na síntese dos ésteres acetato e butirato de isoamila. Para a síntese do propionato, a temperatura também foi importante no processo. Em seguida foi realizado um segundo delineamento experimental fatorial completo com dois níveis mais os pontos central e axiais, totalizando 5 condições para cada variável estudada na síntese de cada éster a fim de se otimizar as condições do processo proposto para a síntese dos ésteres acetato, propionato e butirato de isoamila. Baseado nos resultados obtidos, foi passível estabelecer as condições ótimas para a síntese de acetato e butirato de isoamila; relação molar entre ácido e álcool de (1,5:l),concentração enzimática em massa dos reagentes de 5,5 %,temperatura de 40 °C, após 48 horas de reação. Foi também possível estabelecer as condições ótimas para a síntese de propionato de isoamila: relação molar entre ácido e álcool de (3:1), concentração enzimática ein massa dos reagentes de 5,5 %, temperatura de 50 °C, após 48 horas de reação. / Abstract: The preparative synthesis of 54 short chain flavour esters by non commercial lipases from Geotrichum sp, Rhizopus sp, Aspergillus sp, Alcaligenes sp and commercial Candida rugosa, was investigated in organic solvent free medium. Acetic, propionic, butyric and lauric acids as well as methanol, ethanol, butanol, i-butanol, propanol, i-propanol, i-pentanol, citronellol and fusel oil, were used as substrates. The non commercial lipases were isolated and produced in the Laboratório de Bioquímica de Alimentos of UNICAMP. Most of the esters were synthesized in good yield by at least one of the lipase specificity toward the acid or alcohol moiety of the ester. It was selected the lipases from Geotrichum sp and Rhizopus sp to continue the study and optimize the sinthesys of isoamyl acetate, butyrate and propionate esters. A two level Fatorial Design (with central point) was used to evaluate the effects of synthetic variables, such as temperature, molar ratio of isoamyl to acid, enzyme amount and type of lipase used. Rhizopus sp lipase was the most effective in the synthesis. Molar ratio and amount of lipase were the most important variables for the isoamyl acetate and butyrate synthesis. Temperature was important to propionate synthesis. Another five level central composite design were used to optimize the synthesis of these three esters. Based on surface plots, optimum conditions to the isoamyl acetate and butyrate synthesis were; time reaction 48 hours, temperature 40°C, enzyme amount 5,5 % and molar ratio (alcohol: acid) ( 1,5:1). Based on surface plots, optimum conditions to the isoamyl propionate synthesis were: time reaction 48 hours, temperature 50°C, enzyme amount 5,5 % and molar ratio (alcohol: acid) (3:1) / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Glaucia Maria Pastore / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-23T08:30:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_JoaquimGilbertode_M.pdf: 47283557 bytes, checksum: 29eaaa38c27e972895c6571b67b3664b (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Foram estudados alguns parâmetros de processo para a produção de metilcetonas por uma nova linhagem de Aspergillus sp. pré-selecionada como produtora de lipase extracelular, ainda não relatada na literatura. Através da utilização da técnica de cromatografia gasosa acoplada a detetor seletivo de massas e de cálculo de índice de retenção, foram identificadas as quatro principais metilcetonas produzidas que são: 2-pentanona, 2-heptanona, 2-nonanona e 2-undecanona. As maiores concentrações de metilcetonas (2-pentanona, 2-heptanona, 2-nonanona e 2-undecanona) encontradas quando foi utilizado creme de leite de cabra foram: 0.5, 1.4, 2.4 e 0.4 mg/g de substrato respectivamente e de 0.3, 0.8, 1.04 e 0.22 mg/g de substrato quando se utilizou creme de leite de vaca. Creme de leite de cabra e creme de leite de vaca foram os dois substratos adequados para a produção das metilcetonas, devido a sua composição de ácidos graxos, sendo que, a maior concentração de ácidos graxos de cadeia média esteve presente no creme de leite de cabra e portanto foi obtida uma maior concentração de metilcetonas quando se utilizou este substrato. Foi observado que as melhores condições para produção de metilcetonas foram: período de incubação de 96 horas a 30°C, pH 4,5 e sistema de reação contendo uma mistura de lipase e esporos da linhagem n° 1099. Uma suspensão de lipase isenta de esporos foi incapaz de produzir metilcetonas / Abstract: A newly strain of Aspergillus sp. which produced extracellular lipase was chosen to study some of the process parameters for the production of methyl ketones. Four methyl ketones (2-pentanone, 2-heptanone, 2-nonanone and 2undecanone) were identified from their retention indices and using a gas chromatograph equipped with a mass detector. Of the two substrates used (goat's milk cream and cow's milk cream) the best results were obtained with in the goat's milk cream. The reason for this behavior could be differences in the fatty acid composition of the two substrates. The high concentrations of methyl ketones (2-pentanone, 2-heptanone, 2-nonanone and 2-undecanone) observed were: 0.5, 1.4, 2.4 e 0.4 mg/l respectively, when goat's milk cream was used as substrate. When cow's milk cream was used, the concentrations of methyl ketones were: 0.3, 0.8, 1.04 e 0.22 mg/g respectively. The results suggest good conditions to produce methyl ketones in 96 hours of incubation at 30°C, pH 4,5 and a reaction system with a mixture of lipase and spores of strain n° 1099 / Mestrado / Mestre em Ciências

Orientador : Eliana Cotta de Faria / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-01T22:54:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zaratin_AguedaCleofeMarques_D.pdf: 7095838 bytes, checksum: 7f5b6bccdcafe23fc43cdd8e85f59fe1 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: A aterosclerose é uma doença imuno-inflamatória e de caráter multifatorial. O tabagismo é um de seus principais fatores de risco, existindo grande controvérsia na literatura quanto aos mecanismos fisiopatológicos de sua aterogenicidade. Avaliamos os efeitos metabólicos e oxidantes do fumo em urna população sadia adulta, composta de fumantes crônicos moderados. Não fumantes, de ambos os sexos também foram estudados. Para a avaliação dos efeitos metabólicos do tabagismo determinamos a composição química de sub-frações da lipoproteína de alta densidade, as atividades da lipoproteína lipase (LPL), da lipase hepática (LH), da lecitina:colesterol acil transferase (LCAT), da proteína de transferência de colesteril-éster (CETP), da proteína inibidora da transferência de lípides (L TIP) e da proteína de transferência de fosfolípides (pL TP). A massa de CETP também foi determinada. Observamos aumento de fosfolípides da sub-fração de lipoproteínas de alta densidade, HDL3-PL, e redução da atividade de diversas proteínas envolvidas no transporte reverso do colesterol: LH, PLTP e CETP (corrigi da por triglicérides). Não observamos modificações em LCAT, LPL e LTIP. Sugerimos que a menor atividade destas proteínas reduz o transporte de colesterol para o figado, assim corno a geração de lipoproteínas imaturas aceptoras do colesterollivre proveniente dos tecidos periféricos. Para a avaliação dos efeitos oxidantes do tabagismo, a susceptibilidade da lipoproteína de baixa densidade (LDL) à oxidação e a medida de auto-anticorpos contra LDL-oxidada foram determinados. A oxidabilidade não se mostrou diferente entre os grupos, porém os níveis de anti LDL-oxidada foram significativamente menores nos fumantes, diferença explicada pelas mulheres fumantes. Estes resultados sugerem um aumento nos níveis de LDL oxidada e formação de imunocoplexos. À parte destes achados, o tabagismo provocou mudanças na pressão arterial e aumento nos níveis de fibrinogênio plasmático. Com base nestes resultados, sugerimos que a aterogenicidade do fumo se deva, em parte, à maior oxidação das lipoproteínas plasmáticas, à redução no transporte do colesterollivre dos tecidos periféricos para o fígado, a variações da pressão arterial e à tendência a um estado de pró-coagulabilidade / Abatract: Atherosclerosis is a multifactorial immuno-inflammatory disease. One of its main risk faetors is smoking. There is a great deal of controversy in the literature regarding the physiopathological mechanisms ofthe atherogenicity of cigarette smoking. The metabolic and oxidizing effects of smoking were studied in a healthy adult population that consisted of moderate chronic smokers and non-smokers ITom both sexes. In order to assess the metabolic effects of smoking, the chemical composition the sub-fractions of high-density lipoproteins (HDL), lipoprotein lipase (LPL), hepatic lipase (HL), lecithin:cholesterol acyl transferase (LCAT), cholesteryl-ester transfer protein (CETP), lipid transfer inhibiting protein (L TIP) and phospholipid transfer protein (PL TP) were determined. The CETP mass was also measured. An increase in the phospholipids ofthe sub-fraction ofhigh-density lipoproteins, HDL3-PL, and a reduction in the activity ofvarious proteins involved in reverse cholesterol transport: LH, PLTP, and CETP (when corrected by triglyceride) were observed. No modifications were observed in LCAT, LPL and LTIP. The authors suggested that the diminished activity of those proteins reduced the transport of cholesteryl ester to the liver, as well as the generation of immature highdensity lipoproteins, the free cholesterol acceptors in the peripheral tissues. The oxidizing effects of smoking were assessed by determining the susceptibility of low-density lipoproteins (LDL) to oxidation as well as the presence of auto-antibodies against oxidized LDL. The oxidation did not differ between the groups. However, the anti-oxidized LDL levels were significantly lower in smokers, by the female smokers group. These results suggest an increase in oxidized LDL levels resulting in the formation of immune complexes. Besides these findings, smoking produced alterations in the blood pressure and an increase in the plasma fibrinogen levels. Based on the results obtained in this study, we suggest that atherogenesis caused by smoking is partly due to greater oxidation of plasma lipoproteins, reduction in the transport of free cholesterol from the peripheral tissues to the liver, alterations in the blood pressure and a tendency towards a state of pro-coagulability / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Gonçalo Amarante Guimarães Pereira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T16:10:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bogo_Eliane_M.pdf: 6070806 bytes, checksum: af60bcf86017001374916b61216b223b (MD5) Previous issue date: 2003 / Mestrado

Orientadores: Glaucia Maria Pastore, Gabriela Alves Macedo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T20:56:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Melo_LauroLuisMartinsMedeirosde_M.pdf: 884946 bytes, checksum: 5186705d88503555f6c035cd82e22868 (MD5) Previous issue date: 2004 / Mestrado

Orientador: Maria Isabel Rodrigues / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-24T18:16:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Medeiros_JanainaFernandesde_M.pdf: 7633859 bytes, checksum: b94ba7283c3616ea00a9e6d4af34d7a0 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Enzimas lipolíticas como as lipases, presentes nos reinos animal e vegetal, constituem um importante grupo de enzimas associadas com o metabolismo e com a degradação de lipídios. A aplicação biotecnológica de microrganismos, enzimas livres ou imobilizadas, apresenta vantagens sobre as reações químicas tradicionais. Uma das principais vantagens destes processos é não requerer condições elevadas de temperatura e pressão. Dentre os processos utilizados nessas biotransformações, as lipases se destacam por sua versatilidade em processos hidrolíticos e de síntese. o interesse na produção de lipases microbianas tem aumentado significativamente nas últimas décadas, devido ao seu amplo potencial de aplicações industriais como: aditivos em alimentos (modificação de aromas), química fina (síntese de ésteres), detergentes (hidrólise de gorduras), tratamento de efluentes (decomposição e remoção de substâncias oleosas), cosméticos(remoção de lipídios), farmacêutica (digestão de óleos e gorduras em alimentos), couro (remoção de lipídios da pele de animais) e médica (determinação de triglicerídeos no sangue). Neste trabalho foi realizado um estudo para verificação da influência da fonte de carbono (glicose, óleo de oliva e óleo de soja) e da fonte de nitrogênio (nitrato de amônio e água de maceração de milho) na produção de lipase obtida da linhagem de Geotrichum sp. As fermentações foram conduzidas em frascos agitados a 30°C e 120 rpm, retirando-se amostras ao longo do tempo para determinação da atividade lipolítica. Utilizou-se a metodologia de planejamento experimental e análise de superfície de resposta para verificar os efeitos das variáveis em estudo e as condições que levavam a melhor atividade enzimática para o microrganismo estudado. Verificou-se que a glicose não apresentou nenhum efeito sobre a atividade de lipase, não sendo uma fonte de carbono que induza sua produção. No entanto, o óleo de soja mostrou-se um indutor tão eficiente quanto o óleo de oliva. As melhores condições encontradas utilizando o óleo de oliva foram: nitrato de amônio na faixa de 0,8% a 1%, água de maceração de milho na faixa de 13% a 15% e óleo de oliva a 0,6% atingindo aproximadamente 12 U/mL; e com o óleo de soja foram: nitrato de amônio na faixa de 2,1% a 2,5%, água de maceração de milho na faixa de 13% a 15% e óleo de soja a 0,6% alcançando valores em tomo de 18 U/mL / Abstract: Lypolytic enzymes, as lipases, can be found in animals, plants and microorganisms. They consist of an important group of enzymes related with lipid metabolism and degradation. Biotechnology applications of microorganisms, free and immobilized enzymes have some advantages in relation to chemical reactions. The main advantages of these processes are the mild temperature and pressure conditions. The interest in microbial lipase production increased in the last decades, because of the large potencial in industrials applications as: aditives in foods (flavor modification), fine chemicals (synthesis of esters), detergents (hydrolysis of fats), waste water treatment (decomposition and removal of oily substances), cosmetics (removal of lipids), pharmaceuticals (digestion of oil and fats in foods), leather (removal of lipids of animal skins) and medicals (blood triglyceride assay). In these work a study was carried out to verify the effect of the carbon source (glucose, olive oil and soy oil) and nitrogen source (ammonium nitrate and com steep liquor) in lipase production obtained by Geotrichum sp. strain. The fermentations were realized in shaken-flasks at 30° C and 120 rpm, with determination of lypolytic activity with the time. The experimental design and response surface analysis were employed to verify the effect of the variables and the conditions for the higher enzymatic activity. Glucose did not show any effect of induction in lipase activity and was descarded as carbon source. However, both soy oil and olive oil were efficient inducers showing a similar effect. The best conditions for olive oil were: ammonium the nitrate in the range of 0,8 - 1%, com steep liquor in the range of 13 - 15% and olive oil 0,6% giving an activity of about 12 U/mL; and for soy oil were: ammonium nitrate in the range of 2,1 - 2,5%, com steep liquor in the range 13 - 15% and soy oil 0,6% with an activity of about 18 U/mL / Mestrado / Mestre em Engenharia de Alimentos

Orientador: Daniel Barrera-Arellano / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-25T22:46:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 BellaCruz_Alexandre_D.pdf: 21404382 bytes, checksum: 97f6251301b8d7a6fc9fd7deedbdf327 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Extratos bruto de lipase (EB) obtidos a partir de farelo de arroz previamente desengordurado, foram extraídos com três diferentes soluções: 1(CaCb 10mM), 2 (Sacarose 0,6M, KCI 10mM, MgCb 1mM, Ditiotreitol 2mM) e 3 (Sacarose O,4M, DitiotreitoI2mM). A metodologia de superfície de resposta foi aplicada, sendo os fatores (variáveis) estudados: pH (6,0; 7,0 e 8,0) e tempo de extração (1h, 2h e 3h). A temperatura de extração foi fixada em 4°C. Os extratos obtidos apresentaram diferentes graus de atividade de lipase, sendo que o extrato bruto que apresentou a maior atividade específica de lipase, foi a solução 1 (13,5mU/mg). Realizou-se a purificação parcial deste extrato bruto através de dois métodos distintos de precipitação de lipase, resultando em extrato semipurificado com acetona (ESP-acetona) e extrato semi-purificado com sulfato de amônio (ESP-sulfato amônio), que apresentaram atividade específica de 50,7mU/mg e 63mU/mg, respectivamente. Os extratos semi-purificados foram imobilizados por adsorção sobre vários suportes, dos quais poliamida e sílica, apresentaram os maiores índices de atividade específica de lipase, correspondente a 48,4mU/mg e 48,2mU/mg respectivamente para o ESP-acetona e 59,3mU/mg e 59,7mU/mg para o ESP-sulfato amônio. Dos ESP imobilizados, avaliou-se sua capacidade hidrolítica sobre diferentes triacilgliceróis e de síntese de ésteres utilizando diferentes substratos. A tributirina seguida do óleo de oliva e óleo de arroz, foram os substratos que apresentaram os maiores índices de hidrólise. A reação entre álcool metílico e ácido butírico apresentou o maior índice de conversão de ácidos em ésteres para os ESP imobilizados em poliamida e álcool butírico e ácido butírico para os ESP imobilizados sobre sílica. Avaliouse o comportamento de atividade de lipase de todos os extratos durante 8 meses. Os ESP acetona e sulfato de amônio imobilizados apresentaram atividade cerca de 2,4 a 2,6 vezes maior que os ESP não imobilizados. O extrato bruto armazenado congelado a -18°C, apresentou atividade de lipase muito reduzida e o EB refrigerado a 4°C, não mais apresentou atividade no tempo final do experimento / Abstract: Crude lipase extracts (CE), obtained from previously defated rice bran, were extracted with three different solutions: 1 (CaCb 10mM), 2 (Sucrose 0.6M, KCI 10mM, MgCb 1mM, Dithiothreitol 2mM) and 3 (Sucrose O.4M, Dithiothreitol 2mM). The surface response methodology was applied, being pH (6.0, 7.0 and 8.0) and time of extraction (1:00, 2:00 and 3:00) the studied factors (variables). The extraction temperature was settled in 4°C. The obtained extracts have presented different degrees of lipase activity, and the crude extract that presented the largest specific activity of lipase, was the solution 1 (13.5mU/mg). The partial purification of this crude extract was accomplished through two different methods of lipase precipitation; resulting in semi-purified extract with acetone (SPE-acetone) and semi-purified extract with ammonium sulfate (SPE-ammonium sulfate), that presented specific activity of 50.7mU/mg and 63mU/mg, respectively. The semipurified extracts were immobilized by adsorption on several supports, from which polyamide and silica presented larger lipase specific activity corresponding to 48.4mU/mg and 48.2mU/mg, respectively, for the SPE-acetone and 59.3mU/mg and 59.7mU/mg for the SPE-ammonium sulfate. Immobilized SPE were evaluated regarding their hydrolytic capacity on different triacylglycerols and esters synthesis using different substrate. The tributyrin, followed by the olive oil and rice oil, were the substrate that presented the largest hydrolysis rates. The reaction between methilic alcohol and butyric acid presented the largest acids in esters conversion rate for SPE immobilized in polyamide and butyric alcohol and butyric acid for SPE immobilized on silica. The behavior of lipase activity of ali the extracts has been evaluated for 8 months. The SPE acetone and immobilized ammonium sulfate presented about 2.4 to 2.6 times more activity than the not immobilized SPE. The frozen stored crude extract at -18°C, for 8 months presented a very reduced lipase activity and CE refrigerated at 4°C, has not presented activity in the same time anymore / Doutorado / Doutor em Tecnologia de Alimentos

The study of the role of adipose tissue in the maintenance of the caloric homeostasis of organisms is currently the object of widespread research. In particular, the enzymes of lipid metabolism in adipose tissue are being extensively investigated in both intact fat pads and in broken-cell preparations. Special attention is being paid to factors which control the activity of these enzymes. We have examined some properties of a lipase in epididymal fat pads of rats. The enzyme has been assayed by measuring the free fatty acids liberated when triglycerides are incubated with crude adipose tissue extracts. Quantitative measurements of free fatty acids were performed by (a) titrating the liberated acid with dilute alkali solution, and (b) reacting the free fatty acids with Cu⁺⁺ to form the chloroform-soluble copper soap of long chain fatty acids, then assaying the copper with diethyl-dithiocarbamate spectrophotometrically. It is well known that lipase activity in adipose tissue decreases during incubation in a Krebs-Ringer bicarbonate medium at 37°C. The de-activated enzyme can be activated by briefly exposing the intact tissue to epinephrine. The study of this epinephrine-sensitive lipase in adipose tissue has been the main object of this thesis. When epinephrine was added to media containing intact epididymal fat pads, the dramatic mobilization of free fatty acids from the pads into the media was observed. When epinephrine was added directly to unfractionated homogenates, little, if any, response was elicited, indicating perhaps that some activating factor was destroyed or diluted out during homogenization. When ATP, cyclic 3',5'-AMP and Mg⁺⁺ were added to unfractionated homogenates of adipose tissue, some lipase activation was observed. Similarly, when these nucleotides and Mg⁺⁺ were added to the supernatant fluid obtained from centrifuged homogenates, some activation of the lipase was observed, although the results obtained were not consistent. Other nucleotide 3',5'-cyclic phosphates generally inhibited lipase activity in the supernatant fluid. Our data indicates that epinephrine activates adipose tissue lipase only when added to the intact fat pad before homogenization. Little or no activation occurred when the amine was added to homogenates. Cyclic 3',5'-AMP had some ability to reactivate the lipase, both in unfractionated homogenates and in the supernatant fluid prepared by centrifugation. The effects, however, were not marked. It is concluded that if epinephrine-activation of adipose tissue is mediated through cyclic 3',5'-AMP, precise conditions for showing this have not yet been achieved. Additional experiments were performed on the epinephrine-sensitive lipase. Intact adipose tissue obtained from reserpinized rats was exposed to epinephrine after a 3-hour incubation period. The results indicated that epinephrine does not activate the lipolytic system in adipose tissue of reserpinized rats. Finally, some of the factors regulating the degree of inactivation of the epinephrine-sensitive lipase during incubation were investigated. Fat pads removed from rats which had been either anaesthetized or not anaesthetized prior to sacrifice were incubated for 3 hours. Data collected from a number of experiments indicated that there were virtually no differences in the extent of lipase inactivation between the two groups of rats. / Medicine, Faculty of / Anesthesiology, Pharmacology and Therapeutics, Department of / Graduate

Orientador: Eliana Cotta de Faria / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-31T19:13:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alarcon_SamiraBorgesKauss_M.pdf: 6022653 bytes, checksum: 5a4eda7070f4172dc84d9cd5879c14ad (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Inúmeros estudos epidemiológicos demonstram uma forte associação inversa entre os níveis plasmáticos de lipoproteínas de alta densidade (HDL) e a doença coronariana aterosclerótica. Portanto o metabolismo de HDL tem sido amplamente estudado. Avaliamos fatores que modulam o metabolismo plasmático de HDL em indivíduos adultos que apresentam hiperalfalipoproteinemia moderada, definidos pelo seu nível de HDL-colesterol como igual ou acima do valor percentil 90 de uma população local analisada (n=1700), ou seja 68mg/dL. As lipoproteínas plasmáticas e as principais sub-frações de HDL (HDL2 e HDL3 -col e Tg) e as atividades das proteínas de transferência de lípides e das enzimas envolvidas no metabolismo das lipoproteínas plasmáticas foram determinadas. Quantificou-se as freqüências de doença cardiovascular e de fatores de risco para esta - dislipidemia, hipertensão arterial, tabagismo e história familiar positiva para doença arterial coronariana precoce, bem como as freqüências de fatores moduladores tais como idade, sexo, raça, consumo de álcool, a obesidade, a atividade física, a presença de menopausa e uso de hormônios na mulher. Os indivíduos deste estudo apresentaram o seguinte fenótipo sérico: aumento de colesterol total e de colesterol de HDL2 e HDL3, aumento de apo A-I e discreto aumento de LDL-colesterol. A atividade da lipoproteína lipase (LPL) foi 35% mais alta (3444±255, n=43 X 5301 ± 317, n=43; em controles e HALP, respectivamente) e a da lipase hepática (HL) 40% menor no grupo HALP(2370±231, n=43 X 1410±103, n=43; em controles e HALP, respectivamente). As atividades da proteína de transferência de fosfolípides (PL TP) e proteína de transferência de colesteril éster (CETP) foram similares em ambos os grupos. Em relação à presença de doença arterial coronariana e risco para esta, os grupos apresentaram freqüências semelhantes. A freqüência de atividade física foi mais alta no HALP. A regressão linear múltipla foi usada para avaliar o impacto das proteínas reguladoras sobre a HDL e suas sub-fraçães e dos fatores moduladores sobre estas proteínas. No HALP, HDL-col associou-se com o IMC (inverso), LPL e apo A-I; HDL2-col foi explicado pela apo A-I e LPL e o HD_-col associou-se com apo A-I e idade (inverso). A terapia de reposição hormonal explicou apo A-I e o uso de álcool, obesidade e álcool/obesidade (inverso), explicaram a atividade da LPL. A CETP foi influenciada pela raça (não branco) e a PL TP pela idade (inverso). A atividade física, menopausa e o uso de contraceptivo oral na mulher não explicaram as atividades das proteínas reguladoras. A modulação parcial das proteínas reguladoras sugere importante componente genético no metabolismo da HDL, em pacientes portadores de hiperalfalipoproteinemia moderada. Sugere-se que o fenótipo descrito não tenha caráter aterogênico / Abstract: Not informed / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas