Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2017-06-09T20:26:25Z No. of bitstreams: 2 Tese - Marco Júnio Peres Filho - 2014.pdf: 2890867 bytes, checksum: 94c9616394d6a389aadabf3d9a0b128c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-06-12T12:31:24Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Marco Júnio Peres Filho - 2014.pdf: 2890867 bytes, checksum: 94c9616394d6a389aadabf3d9a0b128c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-12T12:31:24Z (GMT). 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Coencapsulation of anticancer drugs in the same pharmaceutical carrier can coordinate pharmacokinetics of encapsulated drugs. In the present work, liposomal formulations targeted to folate receptor with paclitaxel (PTX) and imatinib (IB) coencapsulated were obtained, aiming to combine cytotoxic and antiangiogenic effects of the drugs, respectively. New analytical method was developed and validated for simultaneous quantification of IB and PTX. Soy phosphatidylcholine liposomes were prepared, with cholesterol and DSPEmPEG( 2000), to obtain long circulation particles. DSPE-PEG(2000)-FA was obtained by an unpublished method of synthesis, and this product was further used in the formulation by post-insertion technique. Cytotoxic effect and VEGF gene suppression were studied in vitro in two different cell lines, MCF7 (breast adenocarcnioma) and PC3 (prostatic adenocarcinoma), after treatment with liposomal vesicles. Analytical procedures were developed with isocratic elution, 6,5 minutes runs, with linearity, specificity, precision and accuracy. Quantification limit was 750 Ng/mL and 1000 Ng/mL for IB and PTX, respectively. After extrusion, liposomes had mean diameter close to 100 nm and low polidispersion index. Post-insertion of folic acid attached to lipid anchor procedure increased polidispersion, because the procedure lasted 24h. Drug to lipid ratios were 1:26 and 1:27 (IB and PTX respectively). Lyophilized formulations containing trehalose remained stable after 60 days of storage in terms of %EE. Synthesis of DSPE-PEG(2000)-FA was confirmed by RMN, FT-IR and ESIMS techniques. Liposomal PTX was more cytotoxic (p<0,05) than free drug in MCF7 cell line, after both 24h and 48h of exposion, for all tested concentrations. Targeted formulation containing folic acid ligand, had more impact on cell viability reduction (p<0,05) than non targeted liposomes (LPIP), also after 24h. On PC3 cell line cell viability reduction was greater (p<0,01) when the cells were exposed to targeted vesicles loaded with 1 and 10 Ng/mL of IB and PTX, after 24 and 48h. VEGF gene expression was reduced in MCF7 and PC3 (p<0,05), and once more targeted vesicles showed better results than non-targeted liposomes. It is, thus, plausible to conclude, through in vitro experiments results, that the attachment of folic acid to liposomal formulations, resulting in multi-functional liposomes, is an interesting strategy to achieve enhanced internalization and accumulation of drugs in targeted cells. This was observed by the enhancement of cytotoxic and antiangiogenic effects in breast and prostate cell lines. / A nanotecnologia tem ganhado cada vez mais destaque em várias áreas da ciência, no sentido de desenvolver novos produtos que possam trazer benefícios em comparação com alternativas já existentes no mercado. Uma série de vantagens emergem da nanoencapsulação de fármacos quimioterápicos, principalmente, a possibilidade de diminuição da dose administrada através de estratégias de direcionamento. Dentre elas, podem ser citadas a vetorização passiva, relacionada ao aumento da permeabilidade vascular em regiões tumorais, e a vetorização ativa, que significa o uso de ligantes específicos, cujos receptores são superexpressos em células tumorais, e que ficam ancorados na superfície de nanoestruturas. A coencapsulação de fármacos antitumorais é altamente relevante, uma vez que permite a utilização de diferentes abordagens para eliminação de tumores e a sincronização da farmacocinética dos agentes coencapsulados. No caso deste trabalho, o objetivo foi a associação do efeito citotóxico do paclitaxel (PTX) ao efeito antiangiogênico do imatinibe (IB), encapsulados no mesmo lipossoma direcionado para o receptor folato, superexpresso em vários tumores sólidos. Foi desenvolvido e validado novo método analítico para quantificação simultânea do IB e do PTX. Os lipossomas foram desenvolvidos usando fosfatidilcolina de soja (PC) como lipídio estrutural, colesterol e DSPE-mPEG(2000), este último para conferir efeito de longa circulação. Foi desenvolvido método inédito de síntese da molécula DSPEPEG( 2000)-AF, âncora lipídica ligada ao ácido fólico destinada a biorreconhecimento. Essa molécula foi adicionada à formulação por pós-inserção. Os nanossistemas obtidos foram testados in vitro quanto à citotoxicidade e quanto à inibição da expressão gênica de VEGF em células de adenocarcinoma mamário (MCF7) e de próstata (PC3). O método analítico foi isocrático, com corrida de apenas 6,5 minutos, linear, seletivo, preciso e exato, com limite de quantificação 750 Ng/mL para o IB e 1000 Ng/mL para o PTX. Os lipossomas tiveram diâmetro médio próximo de 100 nm e baixo índice de polidispersão. Apenas após a inserção da âncora ligada ao ácido fólico as amostras ficaram mais polidispersas, devido ao tempo de agitação desse processo (24 h). O IB foi encapsulado na razão molar fármaco:lipídio 1:26 e o PTX na razão 1:27. As formulações liofilizadas, usando o crioprotetor trealose, mantiveram a estabilidade em termos de %EE após 60 dias de armazenamento. O método desenvolvido para síntese do componente DSPEPEG( 2000)-AF foi bem sucedido, o que pôde ser verificado através dos espectros de RMN, FT-IR e IES-EM, que evidenciam a formação de uma nova substância a partir dos reagentes, que tem as características químicas esperadas. O paclitaxel lipossomal foi mais citotóxico (p<0,05) para a linhagem MCF7, tanto em 24h como em 48h, em comparação com o fármaco livre, em todas as concentrações testadas. A formulação vetorizada com a âncora ligada ao ácido fólico, com IB e PTX coencapsulados, foi mais citotóxica (p<0,05) que a não vetorizada (LPIP) nas concentrações testadas, no tempo 24 h. Na linhagem PC3 a redução da viabilidade celular causada pela vetorização ativa, em comparação com o resultado da formulação não vetorizada, foi ainda maior (p<0,01) tanto em 24 como em 48h, nas concentrações 1 e 10 Ng/mL. Houve redução, nas linhagens MCF7 e PC3, da expressão gênica de VEGF, e também nesse caso o tratamento com a formulação vetorizada causou maior efeito em comparação com a não vetorizada (p<0,05). É razoável chegar-se à conclusão, através dos testes in vitro, de que o direcionamento de fármacos nanoencapsulados ao receptor folato, através do emprego de lipossomas multi-funcionais, é uma estratégia interessante no sentido de aumentar a quantidade de fármaco que entra nas células, o que pôde ser observado através do aumento dos efeitos citotóxico e anti-angiogênico em linhagens tumorais de mama e próstata.

A Terapia Fotodinâmica (TFD) é um tratamento usado principalmente na terapia anticâncer e que depende da retenção de um composto fotossensibilizante nas células tumorais e posterior irradiação dessas células com luz visível. Após ativação, o fármaco pode gerar espécies reativas de oxigênio (EROs), como o oxigênio singlete (1O2) e radicais (O2-, OH), que são capazes de danificar membranas, DNA e outras estruturas celulares, induzindo a apoptose ou necrose das células tumorais. O ácido fólico, por ser super expressado na superfície das células de alguns tipos de cânceres (principalmente os ginecológicos), pode desempenhar o papel de vetorizador, tornando-se um importante aliado aos sistemas de liberação de fármacos. Neste trabalho foi avaliado o uso de ácido fólico como aditivo aos lipossomas contendo ftalocianina de cloro-alumínio como fármaco fotossensibilizante, aplicados em TFD com células MCF7. Os estudos demonstraram que os sistemas lipossomais desenvolvidos apresentam tamanho nanométrico (menor que 200 nm) e possuem biocompatibilidade quando avaliados em cultura celular de monocamada. Além disso, foi possível observar o efeito fototóxico satisfatório das formulações e o aumento da internalização do fármaco, quando utilizado o ácido fólico como vetorizador. / Photodynamic Therapy (PDT) is mainly used in anticancer therapy. The efficiency of this treatment is dependent on retention of photosensitizer compound at the tumor cells and posterior irradiation of these cells with visible light. After activation, the drug may generate reactive oxygen species (ROS) such as singlet oxygen (1O2) and radicals (O2-, OH), which are capable of damaging membranes, DNA and other cell structures, inducing apoptosis or necrosis of tumor cells. Folic acid is super-expressed on the surface of some cancers cells (especially gynecological cancer cells) and can play the role of target system, becoming an important ally for drug delivery systems. This study evaluated the use of folic acid as an additive to liposomes containing chloro-aluminum phthalocyanine as a photosensitizer drug, applied in PDT with MCF7 cells. These studies showed that liposomal systems have nanometer size (less than 200 nm) and have biocompatibility when evaluated in monolayer cell culture. Moreover, it was possible to observe satisfactory phototoxic effect of the formulations and increased internalization of the drug when folic acid is used.

Introdução: Malformações congênitas afetam 2-3% recém-nascidos e estima-se que metade desses problemas poderiam ser prevenidos. Considerando que o ácido fólico reduz o risco de DTN, que a fortificação compulsória das farinhas, de trigo e milho com ferro ácido fólico ocorre desde julho de 2004 e ainda que o Brasil é um país de grande heterogeneidade. Justifica-se, conhecer a evolução dos DTN e sua distribuição espaço-temporal, com vistas a contribuir para o aperfeiçoamento das políticas públicas que visem a prevenção e a minimização desse problema na população brasileira. Objetivo: Analisar a intervenção da fortificação de farinhas com ácido fólico na prevalência de defeitos do fechamento do tubo neural no Brasil. Método: Estudo ecológico, transversal, de desenho misto. Dados foram obtidos do Sinasc. População de estudo foi composta pelos 12.992 casos de DTN (anencefalia, encefalocele e espinha bífida) entre 32.996.065 nascidos no período de 2000-2010. A prevalência de DTN foi calculada para cada 10.000 nascidos vivos. Foi realizada uma analise descritiva exploratória e posterior analise de regressão segmentada e análise espacial com utilização do Índide Global de Moran e indicador Local de Associação espacial. Foram utilizados os softwares Epi info versão 3.4; SPSS versão 17 Terraview versão 3.2.1 e o programa R (The R Foundation for Statistical Computing, Vienna, Austria; http://www.r-project.org).. Todos os aspectos éticos foram respeitados quanto ao uso das informações obtidas no banco de dados disponíveis no Datasus. Resultados: A prevalência global dos DTN foi de 3,94 casos para cada 10000nv. Ao longo dos anos, entre os anos de 2000 a 2010, verifica-se que o número de casos apresentou uma taxa de variação positiva de 17,3%. Crescimento representado em 2000, por 3,26 casos/10000nv que passou em 2010 para 4,28 casos/10000nv. Em 2005, verificou-se um declínio na prevalência, momento em que a fortificação estava de fato sendo implantada. Constata-se na análise de regressão segmentada que a tendência em praticamente todos os estados tem três segmentos: uma tendência de aumento, seguido de queda no momento da intervenção e posterior tendência de aumento. Foram mapeadas as prevalências da doença em dois triênios, o primeiro antes da fortificação, entre 2001-2003 e o segundo após entre 2008-2010. A prevalência de DTN aumentou no segundo triênio em 19 estados brasileiros. Observou-se áreas de conglomerados embora nem sempre exista a autocorrelação espacial. Conclusão: Conclui-se que embora a prevalência dos DTN tenha declinado em meados de 2005, ela volta a crescer após esse período de modo significativo em alguns estados. Deve-se buscar monitorar o teor do ácido fólico nas farinhas através da implantação de uma metodologia analítica para monitoramento dos alimentos fortificados. A distribuição espaço temporal dos agravos abordados é importante, pois permite a compreensão desses eventos complexos e dinâmicos. Estudos nessa área contribuem na elaboração de políticas públicas para reduzir a prevalência dessas doenças. / Introduction: Congenital malformations affect 2-3% of newborns and it is estimated that half of these problems could be prevented. Considering that folic acid reduces the risk of NTDs, the mandatory fortification of flour, wheat and corn with iron folic acid occurs since July 2004 in Brazil and this is a country of great diversity. These aspects justify studying the evolution of NTD and their distribution in time and space, to contribute to the improvement of public policies for the prevention and reduction of these diseases in Brazilian population. Objective: To analyze the intervention of the fortification of flour with folic acid in the prevalence of neural tube defects in Brazil. Methods: Ecological study, cross, mixed design. Data were obtained from SINASC. Study population consisted of 12 992 cases of NTDs (anencephaly, encephalocele and spina bifida) between 32,996,065 born in 2000-2010 period. The prevalence of NTDs was calculated for every 10,000 live births. An exploratory descriptive analysis and later segmented regression analysis and spatial analysis using the Global index Moran and Local. Epi Info version 3.4 software were used; SPSS version 17, Terraview version 3.2.1 and the R program (The R Foundation for Statistical Computing, Vienna, Austria; http://www.r-project.org). All ethical aspects were respected in the use of information obtained the database available in Datasus. Results: The overall prevalence of NTDs was 3.94 cases per 10000nv. Over the years between 2000 and 2010, it was found that the number of cases showed a positive rate of change of 17.3%. Growth represented in 2000 by 3.26 cases / 10000nv that passed in 2010 to 4.28 cases / 10000nv. In 2005, there was a decline in the prevalence, at which time the fortification was actually being implemented. Notes on the segmented regression analysis that the trend in every state has three segments: an increasing trend, followed by a decrease at the time of intervention and subsequent increasing trend. The prevalence of the disease in two periods were mapped, the first before fortification, between 2001-2003 and between 2008-2010 after the second. The prevalence of NTDs increased in the second three years in 19 Brazilian states. It was noted areas where clustering though not always there spatial autocorrelation. Conclusion: Although the prevalence of NTDs has declined in mid-2005, it grows back after this period significantly in some states. It should seek to monitor the content of folic acid in flour through the implementation of an analytical methodology for monitoring of fortified foods. The timeline distribution of diseases covered is important because it gives an understanding of these complex and dynamic events. Studies in this area contribute to the development of public policies to reduce the prevalence of these diseases.

Introdução: Defeitos do tubo neural (DTN) são as malformações mais freqüentes do sistema nervoso. Decorrem de falha no fechamento do tubo neural embrionário entre 21-28 dias após a concepção e representam importante causa de morbimortalidade infantil passível de prevenção. Os defeitos mais freqüentes são anencefalia e espinha bífida. Considerando que o ácido fólico reduz o risco de DTN, a fortificação compulsória das farinhas de trigo e milho com ferro e ácido fólico passou a ser obrigatória no Brasil desde junho de 2004. Assim, delineou-se este estudo com vistas a proporcionar uma base de referência sobre a evolução do problema no Estado de São Paulo e contribuir para o aperfeiçoamento das políticas públicas que visam a prevenção e a minimização desse problema de saúde em nível populacional. Objetivo: Comparar a prevalência de DTN no Estado de São Paulo, antes e após a fortificação das farinhas com ácido fólico. Método: Estudo transversal analítico que utilizou dados do Sistema de Informações sobre Nascidos Vivos (Sinasc) nos períodos antes (2001-2003) e após (2006-2008) a fortificação obrigatória das farinhas com ácido fólico. A variável dependente foi a presença de DTN, identificado pelos códigos Q00 (anencefalia), Q01 (encefalocele) e Q05 (espinha bífida, que inclui meningocele e mielomeningocele) da 10ª Classificação Internacional de Doenças (CID-10). Avaliou-se a prevalência de DTN segundo período (antes/após-fortificação), características maternas e do recém nascido. Odds Ratio (OR) e respectivos intervalos de confiança (IC95%) foram utilizados para análise dos dados, conduzida no software R. Utilizou-se o teste de qui-quadrado com nível de confiança de 5%. Resultados: A prevalência total de DTN diminuiu significativamente no período estudado, passando de 0,57 por mil nascidos vivos antes da fortificação para 0,37 por mil nascidos vivos após a fortificação (OR:0,65; IC95%:0,59-0,72). Tanto a espinha bífida (OR:0,52; IC95%:0,45-0,59) quanto a anencefalia (OR:0,79; IC95%:0,67-0,92) foram menos prevalentes no período após a fortificação. Encefalocele foi a menos freqüente e não mostrou diferença na prevalência entre os períodos. Análise estratificada segundo características maternas e infantis mostrou associação estatisticamente significativa de DTN com idade materna no período antes da fortificação e com escolaridade materna, número de consultas de pré-natal e duração da gestação em ambos os períodos. As variáveis do recém-nascido que se associaram estatisticamente com DTN foram sexo no período antes da fortificação e peso ao nascer em ambos os períodos. A análise estratificada da prevalência de DTN mostrou redução significativa após a fortificação para mulheres de todas as faixas etárias (exceto para <15 anos), para aquelas com mais de três anos de estudo, com ou sem companheiro, com sete consultas de pré-natal ou mais e menos de 42 semanas de gestação. Em relação às características do recém-nascido, a análise apontou redução significativa para ambos os sexos, para nascidos com menos de 4000g e todas as raça/cor (exceto preta e outros). Conclusões: O estudo mostrou redução significativa na prevalência total de DTN no Estado de São Paulo após a fortificação das farinhas com ácido fólico e também nas prevalências de anencefalia e espinha bífida. Embora tenha que se considerar que outros fatores possam ter contribuído para esse declínio, os resultados reiteram a importância da fortificação das farinhas como medida de prevenção primária na redução da ocorrência de DTN. / Introduction: Neural tube defects (NTDs) are the most frequent malformations of the nervous system. Result of failure in the embryonic neural tube between 21-28 days after conception and are an important cause of preventable child mortality. The most frequent defects are anencephaly and spina bifida. Considering that folic acid reduces the risk of NTDs, Considering that folic acid reduces the risk of NTD, the compulsory fortification of wheat and corn flour with iron and folic acid became mandatory in Brazil since June 2004. Thus, this study was outlined in order to provide a baseline on the evolution of the problem in the State of Sao Paulo and contribute to the improvement of public policies aimed at prevention and minimization of this health problem at the population level. Objective: To compare the prevalence of NTDs in the State of Sao Paulo, before and after fortification of flour with folic acid. Methods: Analytical transversal study used data from the Information System on Live Births (Sinasc) in the periods before (2001-2003) and after (2006-2008) the mandatory fortification of flour with folic acid. The dependent variable was the presence of NTDs, identified by the codes Q00 (anencephaly), Q01 (encephalocele) and Q05 (spina bifida, meningocele and myelomeningocele including) the 10th International Classification of Diseases (ICD-10). Evaluated the prevalence of NTDs second period (before / after-fortification), and maternal characteristics of the newborn. Odds Ratio (OR) and confidence intervals (95%) were used for data analysis, conducted in the software R. Was used the chi-square test with a confidence level of 5%. Results: The total prevalence of NTDs decreased significantly during the study period, from 0,57 per thousand live births before fortification to 0,37 for a thousand live births after fortification (OR:0,65; IC95%: 0,59-0,72). Both spina bifida (OR:0,52; IC95%: 0,45-0,59) and anencephaly (OR:0,79; IC95%: 0,67-0,92) were less prevalent in the period after fortification. Encephalocele was less frequent and showed no difference in prevalence between periods. Analysis stratified by maternal characteristics and infant showed a statistically significant association of NTDs with maternal age in the period before fortification and maternal education, number of prenatal visits and duration of pregnancy in both periods. The variables of the newborn that is statistically associated with NTDs were sex in the period before fortification and birth weight in both periods. The stratified analysis of the prevalence of NTDs showed a significant decrease after fortification for women of all ages (except for <15 years) for those with more than three years of study, with or without a partner, with seven prenatal consultations or more and less than 42 weeks of gestation. In relation to the characteristics of the newborn, the analysis showed a significant reduction for both sexes, born to less than 4000g and all race/color (except black and others). Conclusions: The study showed a significant reduction in the overall prevalence of NTDs in the State of Sao Paulo after fortification of flour with folic acid and also in the prevalence of anencephaly and spina bifida. Although it is found that other factors may have contributed to this decline, the results reiterate the importance of fortification of flour as a measure of primary prevention in reducing the incidence of NTDs.

Com o início da fortificação de farinhas com ácido fólico (AF) no Brasil, a partir 2004, a população passou a estar exposta de modo compulsório a maiores quantidades desta vitamina. Sabe-se que o AF na sua forma sintética pode não ser completamente convertido para formas metabolicamente ativas, levando ao aparecimento de uma fração não metabolizada no organismo. Este fato é mais preocupante nos indivíduos que além da fortificação, fazem uso terapêutico dessa vitamina, como em pacientes com anemias hemolíticas (esferocitose hereditária (EH), &#946;-talassemia heterozigótica (&#946;-TH), entre outras). O objetivo desse estudo foi avaliar se as concentrações séricas de AF não metabolizado (UMFA) afetam a metilação global do DNA; a expressão de RNAm de genes da DHFR, MTHFR, interferon-&#947;, TNF-&#945; e interleucina (IL)-8; e a citotoxicidade de células NK. Foram incluídos 27 pacientes com EH, 50 indivíduos com &#946;-talassemia heterozigótica (&#946;-TH) e 136 indivíduos saudáveis. Outros 30 indivíduos saudáveis foram incluídos num estudo de intervenção com 5mg/dia de AF durante 90 dias. Foram realizadas as análises de: ácido fólico sérico, eritrocitário e UMFA, vitamina B12, homocisteína total; expressões de RNAm dos genes de MTHFR, DHFR, IFN-&#947;, TNF-&#945; e IL-8; citotoxicidade das células NK; metilação global do DNA e citocinas séricas IL6, IL-8, IL10, IFN-&#947; e TNF-&#945;. Resultados: Os pacientes EH apresentaram maiores concentrações de AF (sérico, eritrocitário e UMFA) que seus controles, sendo que 55,5% (método microbiológico) e 74,1% (método LC-MS/MS) apresentaram concentrações suprafisiológicas da vitamina, e 74,1% apresentaram concentrações aumentadas de UMFA. No grupo &#946;-TH foi observado maiores concentrações de folato eritrocitário comparado ao controle e 22% dos indivíduos tinham concentrações suprafisiológicas de AF. No estudo de intervenção, após 45 e 90 dias de uso de AF as concentrações suprafisiológicas estavam presentes em 93,3% dos indivíduos e 100% deles apresentavam concentrações aumentadas de UMFA. Não foram observadas diferenças nas taxas de metilação global do DNA entre os grupos EH e &#946;-TH quando comparados aos seus controles e não foi verificada correlação entre metilação global e concentrações de UMFA. Tanto EH quanto &#946;-TH apresentaram maior expressão de RNAm de IL-8, quando comparados aos seus controles. No grupo de intervenção houve maior expressão de IL-8 após 45 dias de uso de AF quando comparado ao período pré-intervenção. Foi mostrada uma correlação inversa entre as concentrações de folato eritrocitário com o número de células NK no grupo EH e com a capacidade citotóxica das células NK no grupo total (EH + controle). No grupo intervenção foi observado menor número e menor capacidade citotóxica das células NK após 90 dias de uso de AF. Conclusões: O uso de AF 5mg/dia foi associado com aumento expressivo das concentrações de folato sérico, eritrocitário, UMFA, na expressão de RNAm de genes da citocina inflamatória IL-8 e redução do número e da citotoxicidade das células NK. Dessa forma, altas doses de AF podem resultar em alterações de componentes do sistema imune podendo prejudicar os mecanismos de vigilância celular das células NK. Os nossos achados sugerem que é importante o acompanhamento terapêutico dos pacientes que fazem uso de AF, especialmente aqueles indivíduos que fazem uso crônico desta vitamina por longo tempo, como os pacientes com anemias hemolíticas, mulheres que desejam engravidar e gestantes. / With the beginning of the fortification of flour with folic acid (FA) in Brazil, since 2004, the population has been exposed compulsorily to larger amounts of this vitamin. It is known that FA in its synthetic form can not be completely converted to metabolically active forms, leading to the appearance of an unmetabolized fraction in the body. This fact is more worrying in subjects beyond fortification, make therapeutic use of this vitamin, such as patients with hemolytic anemia (hereditary spherocytosis (HS), &#946;-thalassemia heterozygotic (&#946;-TH), among others). The aim of this study was to evaluate if serum concentrations of unmetabolized FA (UMFA) affect the global DNA methylation; mRNA expression of DHFR, MTHFR, interferon-&#947;, TNF-&#945; and interleukin (IL)-8 genes; and on cytotoxicity of NK cells. It was included 27 patients EH, 50 subjects &#946;-TH and 136 healthy subjects. Another 30 healthy subjects were included in an intervention study with 5 mg/FA daily during 90 days. Analyzes performed were: serum and erythrocyte folate, and UMFA, vitamin B12, tHcy; mRNA expression of MTHFR, DHFR, IFN-&#947;, TNF-&#945; and IL-8 genes; cytotoxicity of NK cells; global DNA methylation and serum cytokines IL6, IL-8, IL10, IFN-&#947; and TNF-&#945;. Results: EH patients presented higher FA concentrations (serum, erythrocytes and UMFA) than controls ones, and 55.5% (microbiologic method) and 74.1% (LC-MS/MS method) showed supraphysiologic concentrations of vitamin, and 74.1% presented increased concentrations of UMFA. In &#946;-TH group, it was observed higher erythrocyte folate concentrations compared with the control and 22% of subjects had supraphysiological concentrations of FA. In the intervention study, after 45 and 90 days of FA use, supraphysiological concentrations were present in 93.3% of subjects and 100% of them showed increased concentrations of UMFA. It was not observed differences in global methylation of DNA between EH and &#946;-TH groups when compared to their controls and it was not observed significant correlation between global DNA methylation and UMFA levels. Both EH and &#946;-TH showed higher mRNA expression of IL-8 gene, when compared to controls. In the intervention group, there was higher mRNA expression of IL-8 gene after 45 days of FA use when compared to pre-intervention period. It was demonstrated an inverse correlation between erythrocyte folate levels and the number of NK cells in EH group; and cytotoxic capacity of NK cells on total group (EH + control). In intervention group, it was observed fewer number and lower cytotoxic capacity of NK cells after 90 days of AF use. Conclusions: The use of AF 5mg daily was associated with a significant increase in serum and erythrocytes folate levels, accompanied by increase in UMFA levels, an increase in mRNA expression of IL-8 gene, and reduction of the number and the cytotoxicity capacity of NK cells. Thus, high doses of AF can result in modifications of the immune system components, which may damage the cell surveillance mechanisms of NK cells. Our findings suggest that is important the therapeutic follow up of patients that are using AF, especially those subjects with chronic use of this vitamin, such as patients with hemolytic anemia, women who wish to become pregnant and pregnant women.

A homocisteína plasmática é considerada marcador de risco para doenças cardiovasculares e sua associação com a hipertensão arterial essencial parece ser importante no agravamento desta doença. O exercício físico tem mostrado eficácia na redução da pressão arterial e o ácido fólico suplementar a dieta como a melhor conduta para a redução da homocisteinemia. O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito da suplementação de ácido fólico e/ou do exercício físico sobre as concentrações plasmáticas de homocisteína em hipertensos essenciais medicados. Para tanto foram estudados 69 hipertensos (57&#177;10 anos), sendo 22 do sexo masculino e 47 do sexo feminino, divididos em dois grupos: grupo 1 medicado com diurético e grupo 2 medicado sem diurético, sendo o tiazídico o diurético mais utilizado (80%). Foram realizadas avaliações médica, antropométrica, dietética, pressórica, bioquímica e o teste de aptidão cardiorrespiratória. Os indivíduos receberam suplementação com 500 &#181;g/dia de ácido fólico, em estudo do tipo cruzado, e foram submetidos a treinamento com exercícios físicos supervisionados, sendo reavaliados a cada dois meses até o final do estudo. Os grupos foram homogêneos em relação a todas as variáveis estudadas exceto a homocisteína plasmática que foi maior significativamente no grupo 1. Não houve diferença significativa entre os sexos para todas as variáveis estudadas. Os hipertensos eram em sua maioria (62%) não controlados e portadores de síndrome metabólica (77%). O exercício físico apresentou efeito benéfico na reclassificação dos hipertensos leves e moderados para a classe de limítrofes sem normalizar a pressão arterial. Não houve efeito do exercício na composição corporal e na homocisteinemia. A suplementação de ácido fólico reduziu a hiperhomocisteinemia em 11% no grupo 1 e 19% no grupo 2 frente a aumentos similares na folacemia. Em relação à pressão arterial houve normalização da homocisteinemia apenas nos hipertensos com pressão arterial normalizada. Os hipertensos limítrofes e leves apresentaram reclassificação da hiperhomocisteinemia limítrofe para moderada. A presença de diurético potencializou a normalização da pressão pelo exercício físico e indiretamente influenciou, nesses casos, a normalização da homocisteína. Entretanto, a maior redução das concentrações médias de homocisteína ocorreu coma oferta de ácido fólico na ausência de diurético. Desta forma, recomenda-se a adequação dietética do folato como adjuvante terapêutico da hipertensão arterial associadamente ao exercício físico e/ou medicamentos / The plasma homocysteine is considered to be a risk indicator for cardiovascular diseases and its association with essential hypertension seems to be important to the worsening of this disease. Physical exercises are efficient to reduce blood pressure and the dietary supplements of folic acid are considered the best way to decrease homocysteine. The aim of this study was investigate the effect of acid folic supplementation and physical exercises on plasmatic levels of homocysteine in essential hypertensive medicated individuals. In order to that, 69 hypertensive subjects were studied (22 men and 47 women) divided in two groups: group 1 medicated with diuretic and group 2 medicated without diuretic. Medical, anthropometrical, dietetic, blood pressure, biochemistry and cardio-respiratory capacity evaluations were performed. These individuals received 500 &#181;g/dia of folic acid supplementation in a cross-over design and were submitted to daily supervisioned physical exercise. They were evaluated every two months until the end of the study. The groups were similar for all variables except for the homocysteine which was significantly greater in the group 1. There were no difference for the gender to all variables. The high blood pressure was not controlled (62%) and 77% of the patients showed metabolic syndrome. The physical exercise showed benefit on the reclassification of slight and moderated hypertensives to border-line hypertension, however, it did not normalize the blood pressure. There were no effects on the body composition and on homocysteine values . Folic acid supplementation decreased 11% of hyperhomocysteinemia in the group 1 and 19% in group 2 face to similar increases in folate. Regarding to high blood pressure subjects the homocysteine normalization occurred only in hypertensive subjects with normalized blood pressure. The border and slightly hypertensive individuals had border-line hyperhomocysteine wich were reclassificated to moderated c1ass. The use of diuretic enhanced blood pressure normalization with the physical exercise and indirectly influenced the plasma homocysteine normalization. However the greater decreasing mean homocysteine concentration occurred with folic acid but in the diuretic absence. So we strong recommend an adequate folate intake as a terapheutical adjuvant to arterial hypertension treatments either with physical exercise and/or antihipertensive drugs.

Introdução: Malformações congênitas afetam 2-3% recém-nascidos e estima-se que metade desses problemas poderiam ser prevenidos. Considerando que o ácido fólico reduz o risco de DTN, que a fortificação compulsória das farinhas, de trigo e milho com ferro ácido fólico ocorre desde julho de 2004 e ainda que o Brasil é um país de grande heterogeneidade. Justifica-se, conhecer a evolução dos DTN e sua distribuição espaço-temporal, com vistas a contribuir para o aperfeiçoamento das políticas públicas que visem a prevenção e a minimização desse problema na população brasileira. Objetivo: Analisar a intervenção da fortificação de farinhas com ácido fólico na prevalência de defeitos do fechamento do tubo neural no Brasil. Método: Estudo ecológico, transversal, de desenho misto. Dados foram obtidos do Sinasc. População de estudo foi composta pelos 12.992 casos de DTN (anencefalia, encefalocele e espinha bífida) entre 32.996.065 nascidos no período de 2000-2010. A prevalência de DTN foi calculada para cada 10.000 nascidos vivos. Foi realizada uma analise descritiva exploratória e posterior analise de regressão segmentada e análise espacial com utilização do Índide Global de Moran e indicador Local de Associação espacial. Foram utilizados os softwares Epi info versão 3.4; SPSS versão 17 Terraview versão 3.2.1 e o programa R (The R Foundation for Statistical Computing, Vienna, Austria; http://www.r-project.org).. Todos os aspectos éticos foram respeitados quanto ao uso das informações obtidas no banco de dados disponíveis no Datasus. Resultados: A prevalência global dos DTN foi de 3,94 casos para cada 10000nv. Ao longo dos anos, entre os anos de 2000 a 2010, verifica-se que o número de casos apresentou uma taxa de variação positiva de 17,3%. Crescimento representado em 2000, por 3,26 casos/10000nv que passou em 2010 para 4,28 casos/10000nv. Em 2005, verificou-se um declínio na prevalência, momento em que a fortificação estava de fato sendo implantada. Constata-se na análise de regressão segmentada que a tendência em praticamente todos os estados tem três segmentos: uma tendência de aumento, seguido de queda no momento da intervenção e posterior tendência de aumento. Foram mapeadas as prevalências da doença em dois triênios, o primeiro antes da fortificação, entre 2001-2003 e o segundo após entre 2008-2010. A prevalência de DTN aumentou no segundo triênio em 19 estados brasileiros. Observou-se áreas de conglomerados embora nem sempre exista a autocorrelação espacial. Conclusão: Conclui-se que embora a prevalência dos DTN tenha declinado em meados de 2005, ela volta a crescer após esse período de modo significativo em alguns estados. Deve-se buscar monitorar o teor do ácido fólico nas farinhas através da implantação de uma metodologia analítica para monitoramento dos alimentos fortificados. A distribuição espaço temporal dos agravos abordados é importante, pois permite a compreensão desses eventos complexos e dinâmicos. Estudos nessa área contribuem na elaboração de políticas públicas para reduzir a prevalência dessas doenças. / Introduction: Congenital malformations affect 2-3% of newborns and it is estimated that half of these problems could be prevented. Considering that folic acid reduces the risk of NTDs, the mandatory fortification of flour, wheat and corn with iron folic acid occurs since July 2004 in Brazil and this is a country of great diversity. These aspects justify studying the evolution of NTD and their distribution in time and space, to contribute to the improvement of public policies for the prevention and reduction of these diseases in Brazilian population. Objective: To analyze the intervention of the fortification of flour with folic acid in the prevalence of neural tube defects in Brazil. Methods: Ecological study, cross, mixed design. Data were obtained from SINASC. Study population consisted of 12 992 cases of NTDs (anencephaly, encephalocele and spina bifida) between 32,996,065 born in 2000-2010 period. The prevalence of NTDs was calculated for every 10,000 live births. An exploratory descriptive analysis and later segmented regression analysis and spatial analysis using the Global index Moran and Local. Epi Info version 3.4 software were used; SPSS version 17, Terraview version 3.2.1 and the R program (The R Foundation for Statistical Computing, Vienna, Austria; http://www.r-project.org). All ethical aspects were respected in the use of information obtained the database available in Datasus. Results: The overall prevalence of NTDs was 3.94 cases per 10000nv. Over the years between 2000 and 2010, it was found that the number of cases showed a positive rate of change of 17.3%. Growth represented in 2000 by 3.26 cases / 10000nv that passed in 2010 to 4.28 cases / 10000nv. In 2005, there was a decline in the prevalence, at which time the fortification was actually being implemented. Notes on the segmented regression analysis that the trend in every state has three segments: an increasing trend, followed by a decrease at the time of intervention and subsequent increasing trend. The prevalence of the disease in two periods were mapped, the first before fortification, between 2001-2003 and between 2008-2010 after the second. The prevalence of NTDs increased in the second three years in 19 Brazilian states. It was noted areas where clustering though not always there spatial autocorrelation. Conclusion: Although the prevalence of NTDs has declined in mid-2005, it grows back after this period significantly in some states. It should seek to monitor the content of folic acid in flour through the implementation of an analytical methodology for monitoring of fortified foods. The timeline distribution of diseases covered is important because it gives an understanding of these complex and dynamic events. Studies in this area contribute to the development of public policies to reduce the prevalence of these diseases.

Os defeitos de fechamento de tubo neural constituem uma das malformações mais freqüentes na espécie humana, apresentando alta morbi-mortalidade. Sua etiologia é considerada multifatorial, estando envolvidos fatores genéticos e ambientais. Estes fatores estão relacionados principalmente com o metabolismo da homocisteína. Realizamos um estudo de caso-controle com o objetivo de estudar os fatores bioquímicos e genéticos relacionados ao DTN na nossa população. Em pares de afetados com DTN e suas mães e pares de pacientes normais e suas mães foram avaliados dosagem de folato, vitamina B12, homocisteína e polimorfismos da enzima metileno tetraidrofolato redutase (MTHFR), C677T e A1298C. A dosagem de folato nos casos foi 11,37 ng/mL(±6,72) e nos controles 5,64 ng/mL(±4,16) (p<0,001). O folato sérico das mães foi 7,27 ng/mL (±4,48) e 3,90 ng/mL (±1,77) nas mães controles (p<0,001). A média de dosagem de vitamina B12 foi de 641,88 pg/mL ((±262,21) nos casos e 743,27 pg/mL (±433,52) nos controles (p= 0,205). A média de dosagem de vitamina B12 nas mães dos casos foi 354,75 pg/mL (±142,06) e 465,25 pg/mL (±194,91) nas mães controles (p=0,004). O nível de homocisteína plasmático médio foi 6,89 μmol/L(±4,48) para os casos e 5,41 μmol/L (±2,55) para os controles (p=0,099). Nas mães dos casos a dosagem média de homocisteína foi 7,23 μmol/L (±2,64) e 7,00 μmol/L (±2,24) nas mães controles (p=0,666). Não houve diferença entre a freqüência dos genótipos C677T e A1298C da MTHFR nos casos e controles e suas mães. Para o polimorfismo C677T as freqüências dos alelo C e T foram respectivamente 0,6585 e 0,3414 nos pacientes com DTN; 0,6590 e 0,3410 nos controles; 0,6460 e 0,3540 nas mães dos casos e 0,6136 e 0,3860 nas mães controles. Para o polimorfismo A1298C as freqüências dos alelos A e C foram respectivamente 0,7436 e 0,2564 nos pacientes com DTN; 0,7610 e 0,2390 nos controles; 0,8055 e 0,1945 nas mães dos casos e 0,8065 e 0,1935 nas mães controles. Identificamos que indivíduos homozigotos 677TT apresentam um maior nível de homocisteína e este é inversamente relacionado com os níveis de vitamina B12. Estes achados sugerem que uma alteração metabólica relacionada ao metabolismo da homocisteína e principalmente devido à diminuição da vitamina B12 seja um fator de risco para DTN na nossa população. / Neural tube defects (NTD) are among the most common birth defect leading to great disabilities. The etiology is multifactorial, involving the combined action of both genetic and environmental factors. Those factors have been related to homocysteine metabolism. We performed a case control study in order to evaluate the biochemical and genetic factors related to NTD in the South of Brazil. A mother- NTD children pair and mother normal children were evaluated for folate, vitamin B12, homocysteine and two polymorphism of the methylene tetrahydrofolate reductase (MTHFR), C677T and A1298C. The folate level was 11,37 ng/mL (±6,72) in the NTD patients and 5,64 ng/mL(±4,16) in the controls (p<0,001). The folate was 7,27 ng/mL (±4,48) in the NTD mothers and 3,90 ng/mL (±1,77) in the control mothers (p<0,001). The level of vitamin B12 was 641,88 pg/mL ((±262,21) in the NTD case and 743,27 pg/mL (±433,52) in the controls (p= 0,205). The levels of vitamin B12 in the NTD mothers was 354,75 pg/mL (±142,06) and 465,25 pg/mL (±194,91) in the control mothers (p=0,004). The pasmatic homocysteine level was 6,89 μmol/L(±4,48) for the NTD cases and 5,41 μmol/L (±2,55) for the controls (p=0,099). The NTD mothers showed homocysteine level of 7,23 μmol/L (±2,64) and the controls mothers demonstrated 7,00 μmol/L (±2,24) (p=0,666). We could not observed a difference between the frequency of the genotypes C677T and A1298C in case and controls. The frequency of the alele C and T for the polymorphism C677T were respectively 0,6585 and 0,3414 for the NTD patients; 0,6590 and 0,3410 for the controls; 0,6460 and 0,3540 for NTD mothers; 0,6136 and 0,3860 for the control mothers. The frequencies of the allele A and C for the polymorphism A1298C were respectively 0,7436 and 0,2564 for NTD patients, 0,7610 and 0,2390 for controls; 0,8055 and 0,1945 for NTD mothers; 0,8065 and 0,1935 for controls mothers. We could demonstrated that the homozygous 677TT had a higher level of homocysteine and this was related to low level of vitamin B12. Those findings suggest that biochemical and genetic factors related to homocysteine metabolism and vitamin B12 deficiency are a risk factor to NTD in our population.

Os defeitos de fechamento de tubo neural constituem uma das malformações mais freqüentes na espécie humana, apresentando alta morbi-mortalidade. Sua etiologia é considerada multifatorial, estando envolvidos fatores genéticos e ambientais. Estes fatores estão relacionados principalmente com o metabolismo da homocisteína. Realizamos um estudo de caso-controle com o objetivo de estudar os fatores bioquímicos e genéticos relacionados ao DTN na nossa população. Em pares de afetados com DTN e suas mães e pares de pacientes normais e suas mães foram avaliados dosagem de folato, vitamina B12, homocisteína e polimorfismos da enzima metileno tetraidrofolato redutase (MTHFR), C677T e A1298C. A dosagem de folato nos casos foi 11,37 ng/mL(±6,72) e nos controles 5,64 ng/mL(±4,16) (p<0,001). O folato sérico das mães foi 7,27 ng/mL (±4,48) e 3,90 ng/mL (±1,77) nas mães controles (p<0,001). A média de dosagem de vitamina B12 foi de 641,88 pg/mL ((±262,21) nos casos e 743,27 pg/mL (±433,52) nos controles (p= 0,205). A média de dosagem de vitamina B12 nas mães dos casos foi 354,75 pg/mL (±142,06) e 465,25 pg/mL (±194,91) nas mães controles (p=0,004). O nível de homocisteína plasmático médio foi 6,89 μmol/L(±4,48) para os casos e 5,41 μmol/L (±2,55) para os controles (p=0,099). Nas mães dos casos a dosagem média de homocisteína foi 7,23 μmol/L (±2,64) e 7,00 μmol/L (±2,24) nas mães controles (p=0,666). Não houve diferença entre a freqüência dos genótipos C677T e A1298C da MTHFR nos casos e controles e suas mães. Para o polimorfismo C677T as freqüências dos alelo C e T foram respectivamente 0,6585 e 0,3414 nos pacientes com DTN; 0,6590 e 0,3410 nos controles; 0,6460 e 0,3540 nas mães dos casos e 0,6136 e 0,3860 nas mães controles. Para o polimorfismo A1298C as freqüências dos alelos A e C foram respectivamente 0,7436 e 0,2564 nos pacientes com DTN; 0,7610 e 0,2390 nos controles; 0,8055 e 0,1945 nas mães dos casos e 0,8065 e 0,1935 nas mães controles. Identificamos que indivíduos homozigotos 677TT apresentam um maior nível de homocisteína e este é inversamente relacionado com os níveis de vitamina B12. Estes achados sugerem que uma alteração metabólica relacionada ao metabolismo da homocisteína e principalmente devido à diminuição da vitamina B12 seja um fator de risco para DTN na nossa população. / Neural tube defects (NTD) are among the most common birth defect leading to great disabilities. The etiology is multifactorial, involving the combined action of both genetic and environmental factors. Those factors have been related to homocysteine metabolism. We performed a case control study in order to evaluate the biochemical and genetic factors related to NTD in the South of Brazil. A mother- NTD children pair and mother normal children were evaluated for folate, vitamin B12, homocysteine and two polymorphism of the methylene tetrahydrofolate reductase (MTHFR), C677T and A1298C. The folate level was 11,37 ng/mL (±6,72) in the NTD patients and 5,64 ng/mL(±4,16) in the controls (p<0,001). The folate was 7,27 ng/mL (±4,48) in the NTD mothers and 3,90 ng/mL (±1,77) in the control mothers (p<0,001). The level of vitamin B12 was 641,88 pg/mL ((±262,21) in the NTD case and 743,27 pg/mL (±433,52) in the controls (p= 0,205). The levels of vitamin B12 in the NTD mothers was 354,75 pg/mL (±142,06) and 465,25 pg/mL (±194,91) in the control mothers (p=0,004). The pasmatic homocysteine level was 6,89 μmol/L(±4,48) for the NTD cases and 5,41 μmol/L (±2,55) for the controls (p=0,099). The NTD mothers showed homocysteine level of 7,23 μmol/L (±2,64) and the controls mothers demonstrated 7,00 μmol/L (±2,24) (p=0,666). We could not observed a difference between the frequency of the genotypes C677T and A1298C in case and controls. The frequency of the alele C and T for the polymorphism C677T were respectively 0,6585 and 0,3414 for the NTD patients; 0,6590 and 0,3410 for the controls; 0,6460 and 0,3540 for NTD mothers; 0,6136 and 0,3860 for the control mothers. The frequencies of the allele A and C for the polymorphism A1298C were respectively 0,7436 and 0,2564 for NTD patients, 0,7610 and 0,2390 for controls; 0,8055 and 0,1945 for NTD mothers; 0,8065 and 0,1935 for controls mothers. We could demonstrated that the homozygous 677TT had a higher level of homocysteine and this was related to low level of vitamin B12. Those findings suggest that biochemical and genetic factors related to homocysteine metabolism and vitamin B12 deficiency are a risk factor to NTD in our population.

Os defeitos de fechamento de tubo neural constituem uma das malformações mais freqüentes na espécie humana, apresentando alta morbi-mortalidade. Sua etiologia é considerada multifatorial, estando envolvidos fatores genéticos e ambientais. Estes fatores estão relacionados principalmente com o metabolismo da homocisteína. Realizamos um estudo de caso-controle com o objetivo de estudar os fatores bioquímicos e genéticos relacionados ao DTN na nossa população. Em pares de afetados com DTN e suas mães e pares de pacientes normais e suas mães foram avaliados dosagem de folato, vitamina B12, homocisteína e polimorfismos da enzima metileno tetraidrofolato redutase (MTHFR), C677T e A1298C. A dosagem de folato nos casos foi 11,37 ng/mL(±6,72) e nos controles 5,64 ng/mL(±4,16) (p<0,001). O folato sérico das mães foi 7,27 ng/mL (±4,48) e 3,90 ng/mL (±1,77) nas mães controles (p<0,001). A média de dosagem de vitamina B12 foi de 641,88 pg/mL ((±262,21) nos casos e 743,27 pg/mL (±433,52) nos controles (p= 0,205). A média de dosagem de vitamina B12 nas mães dos casos foi 354,75 pg/mL (±142,06) e 465,25 pg/mL (±194,91) nas mães controles (p=0,004). O nível de homocisteína plasmático médio foi 6,89 μmol/L(±4,48) para os casos e 5,41 μmol/L (±2,55) para os controles (p=0,099). Nas mães dos casos a dosagem média de homocisteína foi 7,23 μmol/L (±2,64) e 7,00 μmol/L (±2,24) nas mães controles (p=0,666). Não houve diferença entre a freqüência dos genótipos C677T e A1298C da MTHFR nos casos e controles e suas mães. Para o polimorfismo C677T as freqüências dos alelo C e T foram respectivamente 0,6585 e 0,3414 nos pacientes com DTN; 0,6590 e 0,3410 nos controles; 0,6460 e 0,3540 nas mães dos casos e 0,6136 e 0,3860 nas mães controles. Para o polimorfismo A1298C as freqüências dos alelos A e C foram respectivamente 0,7436 e 0,2564 nos pacientes com DTN; 0,7610 e 0,2390 nos controles; 0,8055 e 0,1945 nas mães dos casos e 0,8065 e 0,1935 nas mães controles. Identificamos que indivíduos homozigotos 677TT apresentam um maior nível de homocisteína e este é inversamente relacionado com os níveis de vitamina B12. Estes achados sugerem que uma alteração metabólica relacionada ao metabolismo da homocisteína e principalmente devido à diminuição da vitamina B12 seja um fator de risco para DTN na nossa população. / Neural tube defects (NTD) are among the most common birth defect leading to great disabilities. The etiology is multifactorial, involving the combined action of both genetic and environmental factors. Those factors have been related to homocysteine metabolism. We performed a case control study in order to evaluate the biochemical and genetic factors related to NTD in the South of Brazil. A mother- NTD children pair and mother normal children were evaluated for folate, vitamin B12, homocysteine and two polymorphism of the methylene tetrahydrofolate reductase (MTHFR), C677T and A1298C. The folate level was 11,37 ng/mL (±6,72) in the NTD patients and 5,64 ng/mL(±4,16) in the controls (p<0,001). The folate was 7,27 ng/mL (±4,48) in the NTD mothers and 3,90 ng/mL (±1,77) in the control mothers (p<0,001). The level of vitamin B12 was 641,88 pg/mL ((±262,21) in the NTD case and 743,27 pg/mL (±433,52) in the controls (p= 0,205). The levels of vitamin B12 in the NTD mothers was 354,75 pg/mL (±142,06) and 465,25 pg/mL (±194,91) in the control mothers (p=0,004). The pasmatic homocysteine level was 6,89 μmol/L(±4,48) for the NTD cases and 5,41 μmol/L (±2,55) for the controls (p=0,099). The NTD mothers showed homocysteine level of 7,23 μmol/L (±2,64) and the controls mothers demonstrated 7,00 μmol/L (±2,24) (p=0,666). We could not observed a difference between the frequency of the genotypes C677T and A1298C in case and controls. The frequency of the alele C and T for the polymorphism C677T were respectively 0,6585 and 0,3414 for the NTD patients; 0,6590 and 0,3410 for the controls; 0,6460 and 0,3540 for NTD mothers; 0,6136 and 0,3860 for the control mothers. The frequencies of the allele A and C for the polymorphism A1298C were respectively 0,7436 and 0,2564 for NTD patients, 0,7610 and 0,2390 for controls; 0,8055 and 0,1945 for NTD mothers; 0,8065 and 0,1935 for controls mothers. We could demonstrated that the homozygous 677TT had a higher level of homocysteine and this was related to low level of vitamin B12. Those findings suggest that biochemical and genetic factors related to homocysteine metabolism and vitamin B12 deficiency are a risk factor to NTD in our population.