Orientador: Paulo Cesar de Jesus. / Dissertação (mestrado) - Universidade Regional Blumenau, Centro de Ciências Exatas e Naturais, Programa de Pós-Graduação em Química.

Orientador : Fumio Yokoya / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-17T06:44:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 OrdoricaFalomir_CesarAbelino_M.pdf: 2394220 bytes, checksum: f6c4aa0fc0874657855ba39d139ba526 (MD5) Previous issue date: 1977 / Resumo: Os parâmetros da resistência térmica, D e z, de 21 linhagens de Salmonella foram determinados em gema de ovo, clara com pH ajustado a 7,0 e na clara natural com 0,05% de agua oxigenada. Tais de terminações foram feitas pelo método do tubo TDT nao selado e pelo método do frasco, usando temperaturas de 57, 53 e 50°C. Células de Salmonella, semeadas em TSB+2% YE e incubadas a 37°C durante 48 horas, foram inoculadas artificialmente nos produtos de ovo para dar uma contagem inicial de aproximadamente 10 células por grama de produto. Foi estudado, também, o efeito da concentração de água oxigenada, adicionada na clara de ovo, sobre a resistência térmica de Salmonella. Este experimento foi conduzido com 4 espécies de Salmonella (S. Anatum, S. Derby, S. Enteriditis e S. Typhirium Tm-1) e a concentrações de agua oxigenada de 0,01, 0,03, 0,05, 0,07,e 0,1%. Os resultados obtidos neste trabalho indicam que a clara de ovo pode ser pasteurizada a baixas temperaturas, de modo que não afetem as suas propriedades funcionais, quando a H2O2 é usada como auxiliar desse procesro. Condições de tempo-temperatura de pasteurização da clara de ovo são apresentadas, as quais foram calculadas de modo a proporcionar um tratamento letal suficiente para produzir 99,99% de destruição da Salmonella presente / Abstract: The heat resistance parameters of 21 strains of Salmonella were measured in egg yolk, egg white pH adjusted to 7,0 and in natural egg white with 0.05% of hydrogen peroxide. These measure¬ments were carried out by unsealed TDT tube method and flask method, using temperatures of 57, 53 and 50°C. Salmonella cells, which were grown in TSB-YE medium and incubated at 37°C during 48 hours, were inoculated artificially in egg products giving an initial count of approximately 10 cells per gram of the product. The effect of hydrogen peroxide concentration added egg white on heat resistance of Salmonella species (S. anatum, S. derby, S. enteridittis and S. typhirium Tm-1) were determined by adding hydrogen peroxide at the concentrations of .0.01, 0.03, 0.05, 0.07 and 0.l%. The results obtained indicated that egg white may be pasteurized at low temperatures to minimize the effect on functional pro¬perties, when hydrogen peroxide was added as an auxiliary in this process. Temperature-time relationship of egg white pasteurization were determined and they were calculated to provide a sufficiently lethal effect to cause a 99.99% destruction of the Salmonella in the product / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos

Orientador : Lucia Pereira da Silva / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-02T23:42:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silveira_LeonardodosReis_D.pdf: 5178373 bytes, checksum: b6a1f4dd4f5fda026138aa19f6e9deda (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Embora níveis moderados de ERas e NO possam exercer importantes funções fisiológicas no tecido muscular, como regulação do fluxo sanguíneo, angiogênese e aumento da força de contração, pouco é conhecido a respeito da formação intracelular de ERas e NO durante a atividade muscular. Por outro lado, uma excessiva produção dessas espécies pode ser prejudicial ao nosso organismo, superando a capacidade do sistema de defesa antioxidante e conduzindo a um desequilibro no estado redox intracelular. Em nosso estudo, examinamos a formação intra e extracelular do NO e H202 em culturas de células, a formação extracelular do H202 em músculo esquelético de rato in vivo e a formação de O2. - em culturas de células e músculos isolados. Para realização deste estudo nós utilizamos as sondas fluorescentes DAF-2-DA (reativa ao NO), DCFH-DA (reativa ao H2O2) e fluoróforo nitróxido (reativa ao ). Nossos resultados in vitro usando culturas de células musculares mostraram que o H2O2 e NO são formados em grandes quantidades no meio intracelular, seguido de um grande efluxo para o espaço extracelular durante atividade muscular intensa (P < 0,05). Por outro lado, durante atividade muscular moderada a produção dessas espécies é mantida em níveis basais sem nenhuma alteração significativa na sua produção (P > 0,05). Os resultados in vitro utilizando cultura de célula e músculos sóleo e EDL isolados mostraram um alto efluxo do do meio intra para o meio extracelular dirante contrações intensas (P < 0,05). O músculo EDL apresentou um maior efluxo do quando comparado que o músculo sóleo (P < 0,05). Os resultados in vivo utilizando o DCFH em combinação com a técnica de microdiálise mostraram uma alta detecção de H2O2 no meio intersticial quando os valores de repouso foram comparados com os valores durante a atividade muscular intensa, sugerindo um alto efluxo dessa espécie do meio intra para o meio extracelular. Nossos resultados mostram que estas sondas fluorescentes utilizadas em nosso estudo são de grande sensibilidade e especificidade na detecção de ERas e NO em tecido muscular submetido a contrações. Em adição, nossos resultados sugerem que a atividade muscular intensa aumenta significativamente a produção de ERas e NO e que essas espécies produzidas intracelularmente são amplamente transportadas para o meio extracelular, processo que protege as células contra os possíveis ataques oxidativos intracelulares gerados por essas espécies / Abstract: Although moderate levels of ROS and NO may exert important physiological functions in muscle tissue, such as regulation of blood flow, angiogenesis and contractile force, little is still known about ROS and NO formation in response to muscle activity. In addition, an excessive level of these species may be harmful as it may overcome the antioxidant capacity, leading to oxidative stress. In this study we examined intra- and extracellular H2O2 and NO formation during contractions in primary rat skeletal musc1e cell culture and isolated muscle. The fluorescent probes DCFH-DA/DCFH (2,7-DicWorofluoresceindiacetate/2,7-DicWorofluorescein) and DAF-2-DA/DAF-2 (4, 5-diamino fluorescein diacetate/4,5-diaminofluorescein) were used to detect H2O2 and NO, respectively. Intense electrical stimulation of musc1e cells increased the intra- and extracellular DCF fluorescence by 171% and 105% respectively, compared with control non-stimulated cells (P < 0.05). Addition of glutathione (GSH) or tiron prior to electrical stimulation inhibited the intracellular DCFH oxidation (P < 0.05), whereas addition of GSH-PX + GSH inhibited the extracellular DCFH oxidation (P < 0.05). Intense electrical stimulation also increased (P < 0.05) the intra- and extracellular DAF-2 fluorescence signal by 56% and 20%, respectively. Addition of W-nitro-L-arginine (L-NA) completely removed the intra- and extracellular DAF-2 fluorescent signal. In isolated musc1es intense estimulation increase superoxide release compared with control non-stimulated (P < 0.05). H202 detection in vivo through DCFH-BSA combined with microdia1ysis technique showed an significant increase on DCFH oxidation during intense contractions. GSH-PX antioxidant completely inhibited DCFH oxidation. The current results show that H2O2, NO and O-z are formed in skeletal musc1e cells during contractions. Our results also suggest that a rapid release of these species may constitute an important defense mechanism against the formation of intracellular 'OH and 'ONOO. Furthermore, our data show that DCFH and DAF-2 are suitable probes for the detection of ROS and NO both intra- and extra-cellulary in skeletal musc1e cell cultures / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Marcos Rivail da Silva. / Dissertação (mestrado) - Universidade Regional de Blumenau, Centro de Ciências Tecnológicas, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Ambiental.

Orientador: Pilar Rodriguez de Massaguer / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia e Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-28T11:39:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Delgado_DeniseAparecida_D.pdf: 47828000 bytes, checksum: a60e86fd22c7f8d3017a574a66eac76a (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: o objetivo do presente trabalho foi avaliar a atividade esporicida do peróxido de hidrogênio sobre bolores isolados de laminado para a confecção de embalagens destinadas ao envase asséptico de polpa de tomate. ¿Observação: O resumo, na íntegra poderá ser visualizado no texto completo da tese digital. / Abstract: The aim of this work was to evaluate the sporicidal activity of hydrogen peroxide against molds isolated from packaging laminate designed for aseptic packaging of tomato pulp ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations. / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientadores: Giselle Maria Marchi, Carlos Alberto de Souza Costa / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-13T06:19:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lima_AdrianoFonsecade_M.pdf: 16947758 bytes, checksum: c368a477af40a0e63ffe78a57bea6537 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Os objetivos do presente trabalho foram: a) avaliar os efeitos citotóxicos diretos e transdentinário de diferentes concentrações de peróxido de carbamida (PC) sobre as células de linhagem odontoblástica MDPC-23; b) avaliar o efeito protetor (antioxidante) do ascorbato de sódio (AS) sobre estas células expostas a agentes clareadores, na forma direta e transdentinária; c) avaliar o montante de peróxido de hidrogênio (H2O2) liberado por agentes clareadores a base de PC 10% e 16% que se difunde através de discos de dentina com 0,5mm de espessura. No Experimento 1, células odontoblásticas foram cultivadas em wells e incubadas por 48 horas. O gel clareador foi solubilizado em meio de cultura (DMEM) originando diferentes extratos, e a quantidade (µg/mL) de H2O2 liberado em cada extrato foi mensurada através da técnica de leucocristais violeta/enzima horseradish peroxidase (LCV/HRP). Os seguintes grupos foram estabelecidos (n=10): G1-DMEM sem gel clareador (controle); G2-0,0001% PC (0,025µg/ml de H2O2); G3-0,001% PC (0,43µg/ml de H2O2); G4-0,01% PC (2,21µg/ml de H2O2); e G5-0,1% PC (29.74µg/ml de H2O2). As células foram expostas por 60 minutos aos diferentes extratos, e então realizada a análise da viabilidade celular (Teste de MTT). Somente os grupos 2 e 3 não apresentaram diferença estatística quando comparados ao controle (G1) (p>0,05). Os maiores efeitos citotóxicos foram observados para G4 e G5, sendo que G5 foi estatisticamente diferente que G4, apresentando-se mais tóxico às células. No experimento 2, células MDPC-23 foram cultivadas e incubadas por 48h. O PC e o AS foram solubilizados em meio de cultura (DMEM), para obtenção dos extratos experimentais. Os seguintes grupos foram estabelecidos: G1-DMEM sem gel clareador (controle); G2- 0,25mM de AS; G3-0,5mM de AS; G4-0,25mM de AS + 0,01% de PC; e G5-0,5mM de AS + 0,01% PC e G6-0,01% de PC. As células foram expostas por 60 minutos aos diferentes extratos, e depois foi realizado o teste de MTT. O grupo 6 apresentou a maior citotoxicidade quando comparado com os demais grupos, enquanto que o AS produziu uma diminuição dos efeitos citotóxicos do agente clareador, demonstrando uma proteção frente aos componentes deste produto. No Experimento 3, discos de dentina (0,5mm de espessura) obtidos de terceiros molares humanos foram fixados em uma câmara pulpar artificial (CPA). As células odontoblásticas foram semeadas na superfície pulpar dos discos, e os seguintes grupos foram estabelecidos: Grupo 1 - Sem tratamento (Controle); Grupo 2 - Antioxidante 10% (AS)/6h; Grupo 3- Peróxido de Carbamida (PC) 10% /6h; Grupo 4- AS10%/6h+PC10%/6h; Grupo 5- PC16% /6h; Grupo 6- AS10%/6h+PC16%/6hs. Após os tratamentos, foi realizado o teste de MTT. A difusão de H2O2 somente para os grupos 3 e 5 foi mensurada através da técnica de LCV/HRP. Todos os grupos foram estatisticamente semelhantes, exceto o G6. O PC 16% apresentou a maior difusão transdentinária. Pode-se concluir que o PC apresenta efeitos citopáticos para as células odontoblásticas MDPC-23, na forma direta ou transdentinária e que esta citotoxicidade é dose-dependente. O ascorbato de sódio possui a capacidade de reduzir os efeitos citotóxicos do peróxido de carbamida, sobre estas mesmas células em cultura. / Abstract: The aims of this present study were: a) to evaluate the direct and transdentinal cytotoxic effects of carbamide peroxide (CP) bleaching gel at different concentrations on odontoblast-like cells MDPC-23; b) to evaluate the protective effect (antioxidizing) of sodium ascorbate (SA) on these cells expose to bleaching agents, on direct and transdentinal mode; c) to evaluate the amount of hydrogen peroxide (H2O2) released by bleaching agents based to CP 10% and 16%, that diffuses through dentin discs with 0.5mm thickness. In Experiment 1, odontoblastic cells were seeded in wells and incubated for 48 hours. The bleaching gel was diluted in DMEM culture medium originating different extracts, and the amount (µg/mL) of H2O2 released from each extract was measured by the leukocrystal violet/horseradish peroxidase enzyme (LCV/HRP) assay. The following groups were established (n=10): G1-DMEM without bleaching gel (control); G2-0.0001% CP (0.025 µg/mL H2O2); G3-0.001% CP (0.43 µg/mL H2O2); G4-0.01% CP (2.21 µg/mL H2O2); and G5-0.1% CP (29.74 µg/mL H2O2). MDPC-23 cells were exposed to the bleaching gel extracts for 60 minutes and then performed the cell viability analysis (MTT assay). Only G2 and G3 were not significantly different from control group (G1) (p>0.05). The most severe cytotoxic effects were observed in G4 and G5, and G5 was statistically different to G4, presenting more toxic to the cells. In Experiment 2, MDPC-23 cells were seeded in wells and incubated for 48 hours. CP and SA were dissolved in culture medium (DMEM) in order to obtain the experimental extracts. The following groups were established: G1-no treatment (control); G2-0,25mM SA; G3-0,5mM SA; G4-0,25mM SA + 0,01% CP; e G5-0,5mM SA + 0,01% CP e G6-0,01% CP. The cells were expose to different extracts for 60 min, and then was performed the MTT assay and. Group 6 presented higher cytotoxicity than the other groups, while the SA decreased the cytotoxic effects caused by CP, demonstrating its protective effect against the toxic components of this dental product. In Experiment 3, dentin discs (0.5mm thick) obtained from human third molars were fixed in an artificial pulp chamber (APC). The odontoblastic cells were seeded on pulp surface of the discs, and the following groups were established: Group 1 - No treatment (Control); Group 2 - Antioxidizing 10% (SA)/6h; Group 3- Carbamide Peroxide (CP) 10%/6h; Group 4- SA10%/6h+CP10%/6h; Group 5- CP16%/6h; Group 6- SA10%/6h+CP16%/6hs. After the treatments, MTT assay was performed. The H2O2 diffusion only to the groups 3 and 5 was measured by the LCV/HRP assay. All groups were statistically similar, except G6. The CP 16% presented the higher transdentinal diffusion. It can be conclude that CP presents citotoxic effects to the odontoblastic-like cells MDPC-23, in direct and transdentinal mode and this citotoxicity is dose-dependent. The sodium ascorbate was able to reduce the cytotoxic effects the concentration of 0.1% of PC caused the most intense cytopathic effects of carbamide peroxide on the same cells in culture. / Mestrado / Dentística / Mestre em Clínica Odontológica

Orientadores : Carmen Verissima Ferreira, Hiroshi Aoyama / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T11:58:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pinheiro_KarinaCristinaSeregatte_M.pdf: 2536223 bytes, checksum: 84daa316e88c5a44bbbb304adbae7323 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Neste trabalho foi avaliada a citotoxicidade do peróxido de hidrogênio sobre as células V79, bem como o efeito deste oxidante sobre a fosfatase total isolada destas células. A viabilidade celular foi avaliada através de 4 parâmetros: incorporação do vermelho neutro (NRU) - (integridade lisossomal); conteúdo de ácidos nucléicos (NAC) - (número de células); redução do MTT (integridade mitocondrial) e atividade fosfatásica (metabolismo celular), tendo sido obtidos os seguintes valores de ICso 970, 1470, 840 e 870 IJM para NRU, NAC, MTT e fosfatase, respectivamente. Para os parâmetros NRU e NAC observou-se efeito diferente do peróxido, dependendo da concentração, como aumento da incorporação do corante pelos lisossomos e do número de células até as concentrações de 500 e 750 IJM respectivamente. O efeito de potenciais inibidores de fosfatases sobre a fosfatase total das células V79 revelou que a principal hidrolase presente no extrato corresponde a uma proteína tirosina fosfatase. Estes resultados foram reforçados pela sensibilidade desta enzima ao peróxido (ICso = 10mM). A presença de antioxidantes reverteu a ação inibitória do peróxido de hidrogênio. Do mesmo modo, a atividade fosfatásica também foi inibida, em maior grau, pelo pervanadato (ICso = 1001JM) o qual também atua como oxidante. O efeito inibitório do H202 e o pervanadato sobre a fosfatase foi aumentado após diálise do extrato celular. As células V79 apresentam alta concentração de glutationa reduzida, sugerindo que a maior resistência destas células frente ao peróxido de hidrogênio pode ser devido à presença deste antioxidante. Tanto o peróxido quanto o pervanadato apresentaram maior efeito inibitório após diálise, reforçando a importância da glutationa reduzida / Abstract: In this work was evaluated the hydrogen peroxide cytotoxicity on V79 cells, and the effect of this oxidant on the total phosphatase trom these cells. The cell viability was analyzed through 4 parameters: neutral red uptake (NRU) (Iisossome integrity); nucleic acid content (NAC) - (cell number); MTT reduction (mitochondria function) and phosphatase activity (cell metabolism). The following ICso values were obtained: 970, 1470, 840 and 870 J.lM for NRU, NAC, MTT and phosphatase, respectively. Hydrogen peroxide presented different effect on the NRU and NAC depending on its concentration. In concentrations up to 500 and 750 J.lM, was observed increase of dye uptake and cell number, respectively. The inhibiton studies using phosphatase inhibitors showed that the major phosphatase present on the V79 cells extract is a protein tyrosine phosphatase. This result was reinforced by the high sensibility of this phosphatase when hydrogen peroxide (ICso = 10 mM) and pervanadate (ICso = 100J.lM) were addictioned in the reaction medium. In the presence of antioxidant this effect was prevented. Finally, the concentration of reduced glutathione was determined, V79 cells presented high content of this compound then, our results suggest that the low toxicity of this compound on these cells could be due to the action of this antioxidant. Other result reinforce this hypothese, both oxidant (hydrogen peroxide and pervanadate) presented higher inhibitory effect of the phosphatase activity after dialyse / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Lucia Pereira da Silva / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T03:20:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Molnar_AgnesMargarethe_D.pdf: 1768684 bytes, checksum: 1a2bd930dfbfe16abbddc4f60dbd22d9 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Nosso trabalho consistiu em avaliar as alterações no funcionamento e estrutura de mitocôndrias de músculo de ratos (consumo de oxigênio, produção de H2O2 e composição lipídica) em diferentes situações de exercício físico (treinamento intermitente excêntrico ou concêntrico e/ou exercício agudo excêntrico) e após uma suplementação em ácidos graxos Ômega-3. Foram também analisadas as atividades de diferentes enzimas antioxidantes (catalase - CAT, glutationa peroxidase - GPx e superóxido dismutase dependente de manganês ¿ Mn-SOD) e o conteúdo em HSP72 muscular nestas mesmas situações. O treinamento físico excêntrico e concêntrico induziu aumento da atividade de enzimas oxidativas (citrato sintase - CS ou citocromo c oxidase - CCOX) o que também foi observado no consumo de oxigênio por mitocôndrias. Já a produção de H2O2 diminuiu ou tendeu a diminuir dependendo do tipo do treinamento e do substrato utilizado. A atividade das enzimas antioxidantes não foi alterada após os dois tipos de treinamento. Após o exercício agudo excêntrico observou-se também a diminuição na produção de H2O2 de mitocôndrias, porém sem alteração do consumo de oxigênio e com diminuição paralela da atividade da Mn-SOD. Após suplementação em Ômega-3 o funcionamento das mitocôndrias não foi alterado, apenas sua composição lipídica apresentou modificações. Quando a suplementação em Ômega-3 foi associada ao treinamento físico, apenas durante 15 dias, a concentração em proteínas das mitocôndrias apresentou-se 50% menor que nos demais grupos e os parâmetros respiratórios e de produção de H2O2 estavam diminuídos. Concluindo o mecanismo pelo qual a produção de H2O2 foi diminuída parecendo ser diferente após treinamento ou exercício agudo excêntricos. O primeiro parece estar relacionado com o desacoplamento das mitocôndrias e o segundo com a diminuição da atividade da Mn-SOD. A suplementação sozinha não produziu efeitos prejudiciais para o músculo, porém sua associação com uma situação onde a produção de EROS poderia estar elevada, o exercício físico, causou prejuízos / Abstract: Dans ce travail nous avons étudié les altérations du fonctionnement des mitochondries de muscles de rats (consommation d¿oxygène, production d¿H2O2 et composition lipidique) dans différentes situations d¿exercice (entraînement et/ou exercice aigu), ainsi qu¿après une supplémentation en acides gras Omega-3. L¿activité des enzymes antioxydants (catalase - CAT, glutathion peroxydase - GPx et superoxyde dismutase mitochondriale ¿ Mn-SOD) et le contenu en HSP72 musculaires étaient aussi évalués. L¿entraînement physique excentrique ou concentrique a induit une augmentation de la capacité oxydative à travers l¿elevation de l¿activité des enzymes oxydantes (citrate synthase - CS et cytochrome c oxydase - CCOX) parallèle à une augmentation de la consommation d¿oxygène. La production d¿H2O2 est diminuée ou tend à diminuer selon l¿entraînement réalisé et le substrat utilisé. L¿activité des enzymes antioxydants n¿était pas changée après les deux entraînements. Après l¿exercice aigu excentrique nous avons aussi observé une diminution de la production d¿H2O2 parallèle à la diminution de l¿activité de la Mn-SOD, cependant sans modification de la consommation d¿oxygène. Dans une autre étude la supplémentation en acides gras Omega- 3 n¿a pas modifié le fonctionnement des mitochondries, seulement leur composition lipidique était modifiée. Après l¿association de la supplémentation en Omega-3 avec l¿entraînement physique, pendant 15 jours, la concentration en protéines était diminuée en 50% par rapport les autres groupes et les paramètres respiratoires et de production d¿H2O2 étaient aussi diminués. En conclusion, le mécanisme par lequel la production d¿H2O2 était diminuée après l¿entraînement et l¿exercice aigu semblerait être différent dans les deux cas. Le premier semble être lié à un léger découplage des mitochondries et le deuxième à la diminution de l¿activité de la Mn-SOD. Dans la deuxième étude, la supplémentation toute seule n¿a pas produit des effets délétères sur le muscle, tandis que son association avec l¿exercice (entraînement), situation ou la production de ROS peut être augmenté, était préjudicielle / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Lauro Tatsuo Kubota / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-10T12:02:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mendes_RenataKelly_D.pdf: 1152307 bytes, checksum: c6e7b97417285a7bb4d70d28ba880353 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Neste trabalho foram investigados diferentes métodos de imobilização da enzima HRP empregando como matrizes as monocamadas auto-organizadas formadas sobre eletrodos de ouro, bem como a avaliação da influência do processo de imobilização do elemento biológico no desempenho analítico do biossensor. Para isso. as monocamadas utilizadas foram formadas por meio de tióis com diferentes estruturas, tamanho de suas cadeias carbônicas e grupos terminais. Foi possível constatar que o tamanho da cadeia carbônica de um tioI influencia especialmente no empacotamento da monocamada e, conseqüentemente, na eficácia da imobilização das biomoléculas. Pelos estudos realizados visando a caracterização das SAM sobre a superfície eletródica foi possível verificar que os tióis que possuem em sua cadeia um número menor de carbonos (< 9) tendem a formar monocamadas com uma quantidade considerável de defeitos na superfície do ouro, o que leva a um recobrimento mais baixo. No entanto, os tióis que contém um número mais elevado de carbonos na cadeia apresentam um grau de recobrimento mais elevado e, no entanto, não são boas matrizes para biossensores eletroquímicos, pois podem passivar a superfície, diminuindo a transferência de elétrons e, como conseqüência, a sensibilidade do eletrodo. Quanto a imobilização da enzima nos eletrodos de ouro, verificou-se, por diferentes técnicas, que as monocamadas que possuem grupo terminal -NH2 foram aquelas que proporcionaram os melhores resultados, provavelmente devido ao uso do glutaraldeído como ligante no processo de imobilização. Ao analisar adicionalmente o desempenho do biossensor para a determinação de peróxido de hidrogênio, verificou-se que a SAM formada pela cisteamina é a mais adequada para a imobilização da HRP, por propiciar tanto uma melhor eficácia na adsorção enzima quanto uma sensibilidade mais elevada para H2O2 / Abstract: In this work different immobilization procedures of HRP were investigated using as support mIatrices the self-assembled monolayers formed on gold electrodes, as well as the evaluation of the influence of these immobilization processes in the biosensor performance. For this, the used monolayers were prepared by thiols with different structures, carbon chains size and terminal groups. It was possible to have evidence that the thiol carbon chain size influences especially in the coverage monolayer and, consequently, in the efficiency of the biomolecule immobilization. From the studies carried out for the SAM characterization on the electrode surface it was possible to verify that thiols with smaller chain (n<9) trends to form monolayers with a considerable amount of defects on gold surface, that it leads to a lower coverage. However, the thiols with a higher carbon chain present a higher coverage degree, are not being good matrices for electrochemical biosensors, because it can passive the surface, making difficult the electron transfer and, consequently, the electrode sensitivity. In relation to the enzyme immobilization on gold electrodes it was verified, for different techniques, that monolayers that possess -NH2 terminal group provided the best results, probably due to the use of glutharaldeyde as ligant at the immobilization process. Analyzing the biosensor performance for the hydrogen peroxide determination was verified that SAM formed by cysteamine is more adequate for HRP immobilization, because provide the better efficiency in the enzyme immobilization associated to high sensitivity for H2O2 / Doutorado / Quimica Analitica / Doutor em Ciências

Orientadores: Débora Alves Nunes Leite Lima, Luis Alexandre Maffei Sartini Paulillo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-22T12:36:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Publio_JulianadoCarmo_M.pdf: 1849984 bytes, checksum: 80c6278fc7a03f56e6011fd3f302e6ea (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a influência da espessura do esmalte e a aplicação prévia de dessensibilizante na eficácia do tratamento clareador. O trabalho foi dividido em 2 estudos. No primeiro estudo foi testada a influência da espessura do esmalte (0,5mm de espessura, 1,0mm de espessura planificada, 1,0mm de espessura não planificada e sem esmalte- controle) na eficácia do clareamento em profundidade, variando-se o tipo de agente clareador, peróxido de carbamida (PC) 10% e peróxido de hidrogênio (PH) 35%. No segundo estudo foi avaliada a influência da aplicação prévia de agente dessensibilizante, fluoreto de sódio 2% e nitrato de potássio 5% associado ao fluoreto de sódio 2% e, sem agente dessensibilizante (controle) na eficácia do clareamento dental com PH35%. Nos dois estudos foram usados fragmentos dentais bovinos, pigmentados por chá preto, e distribuídos por esquema inteiramente casual no primeiro estudo e aleatório por sorteio no segundo estudo (n=10) em grupos de acordo com os tratamentos acima. As amostras foram armazenadas em saliva artificial durante as 3 semanas de tratamento. As leituras de cor da dentina oposta (1,75mm de espessura) do estudo 1 e as leituras de cor do esmalte (1,0mm de espessura) e dentina oposta (1,75mm de espessura) do estudo 2 foram realizadas após o manchamento (baseline) e após cada semana de tratamento clareador, utilizando o método CIE Lab através de espectrofotômetro (Konica Minolta CM 700 d, Japan). Para o estudo 1 os valores de ?E, ?L, ?a e ?b datados foram submetidos à análise de variância ANOVA em esquema fatorial e teste de Tukey (?=0,05). Para o estudo 2, a coordenada L* datada (L=100 - lightness; L=0 - darkness) foi submetida por meio de análise de medidas repetidas PROC MIXED e teste de Tukey-Kramer e os valores de ?E datados foram submetidos à análise de variância ANOVA e teste de Tukey (?=0,05). O esmalte de 2 amostras de cada grupo do estudo 2 foi observado em microscopia eletrônica de varredura (MEV). Nos resultados destes estudos pode-se observar que o clareamento com PC10% foi mais efetivo que o PH35% em profundidade dentinária para todos os parâmetros de delta, com exceção no terceiro tempo dos deltas. A presença da camada aprismática no esmalte interferiu na eficácia do PC10% somente no primeiro tempo de clareamento em ?E1, ?L1 e ?b1, entretanto não interferiu nos tempos de clareamento testado com PH35% (estudo 1). Ainda, o uso de agente dessensibilizante realizado previamente ao clareamento dental não interferiu no mecanismo de ação do PH35% em profundidade (estudo 2) / Abstract: The aim of this study was to evaluate the influence of enamel thickness and prior application of a desensitizing agent on the effectiveness of bleaching treatment. This project was divided into two studies. Firstly, we tested the influence of enamel thickness (0.5 mm thick, 1.0 mm planned thick, 1.0 mm unplanned thick and absence of enamel - control) on the effectiveness of bleaching, in-depth, according to the type of bleaching agent, as follows: 10% carbamide peroxide and 35% hydrogen peroxide. Secondly, we evaluated the influence of prior application of a desensitizing agent (potassium nitrate associated with 2% sodium fluoride, 2% neutral fluoride, or with no desensitizing agent - control) on the effectiveness of tooth bleaching by using 35% hydrogen peroxide. In both studies we used bovine teeth fragments, stained with black tea, which were allocated into groups according to the aforementioned treatments, by an entirely causal scheme for the first study and by random drawing for the second one (n=10). The specimens were stored in artificial saliva during the 3-week-treatment. Color readings of the underlying dentin (1.75 mm thick) concerning the study 1, and color readings of enamel (1.0 mm thick) and underlying dentin (1.75 mm thick) of the study 2, were performed after staining (baseline) and after each week of bleaching treatment using the CIE Lab method by means of spectrophotometer (Konica Minolta CM 700d, Japan). For the study 1, the values of ?E, ?L, ?a and ?b recorded were subjected to factorial analysis of variance (ANOVA) and Tukey's test (? = 0.05). For the study 2, the coordinate L* recorded (L = 100 - lightness, L = 0 - darkness) was submitted to analysis of repeated measures PROC MIXED and Tukey-Kramer's test, and the ? values registered underwent analysis of variance (ANOVA) and Tukey's test (? = 0.05). The enamel of 2 specimens from each group of the study 2 was observed under scanning electron microscopy. According to the findings, it could be observed that the bleaching with 10% CP was more effective than that with 35% PH as regards dentin depth for all parameters delta, except the third time deltas. The presence of the prismless layer of enamel interfered with the effectiveness of 10% CP just in the first time of bleaching in ?E1, ?L1and ?b1, however it did not affect the times of bleaching when 35% HP was tested (study 1). In addition, the use of a desensitizing agent prior to tooth bleaching did not interfere with the mechanism of action of the 35% hydrogen peroxide concerning tooth depth (study 2) / Mestrado / Dentística / Mestra em Clínica Odontológica