Orientador: Stephen Hyslo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-03T21:43:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Melo_SilviaElainedeSousaFerreiraCarvalhode_M.pdf: 20518302 bytes, checksum: 2c61842087a09767e6486f92531be39b (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Venenos de serpentes do gênero Bothrops produzem efeitos locais (dor, edema, inflamação, hemorragia, necrose), e sistêmicos (coagulopatias, hemorragia, hipotensão/choque, insuficiência renal aguda). Neste estudo, avaliamos a ação hipotensora do veneno da B. altematus em ratos anestesiados e investigamos os mediadores envolvidos neste fenômeno. Ratos Wistar machos anestesiadoscom pentobarbital sódico (40 mg/kg, Lp.) foram canulados para medição da pressão arterial (artéria carótida) e administração de veneno e de drogas (veia femora!). A pressão arterial e a freqüência cardíaca foram registradas continuamente durante o experimento. O veneno, suas frações e as drogas foram dissolvidos em salina e administrados in bolus (0,1 ml) após 15 minutos para a estabilização da pressão. Em alguns experimentos o veneno foi dialisado utilizando-se membranas de celulose (limites de filtração de 2 kDa e 12 kDa) antes de ser administrado aos ratos. Para identificar a fração hipotensora, o veneno foi fracionado por gel filtração em resina Superdex 75 e as frações testadas na pressão arterial. O veneno causou hipotensão de ormadose-dependente(1-100j.lg/kg)com quedamáximade 69,8.:!::6,2%na maior dose (média:t desvio padrão, n=5) e com retorno da pressão a 80% dos níveis basais em 30 minoO pré-tratamento de ratos com atropina (antagonista muscarínico; 4 mg/kg, Lv.) ou glibenclamida (antagonista de canais de K+ ATP-dependentes; 50 mg/kg, Lv.) não alterou de forma significativa a hipotensão causada pelo veneno (100 j.lg/kg, Lv.). Por outro lado, o N'úJ-L-nitro-argininameti! éster (L-NAME, 20 mg/kg, Lv.), inibidor da biossíntese de óxido nítrico (NO), reduziu a hipotensão máxima causada pelo veneno (100 j.lg/kg) de 69,8.:!:6,2%para 29,1.:!::16,6%(n=5, p<0,05). Ratos prétratados com captopril (2 mg/kg), um inibidor da enzima conversora da angiotensina e potencializador do efeito da bradicinina, apresentaram acentuação da hipotensão máxima causada pelo veneno (50 j.lg/kg) de 51,2:t5,5% para 80,8:t9,4% (n=5, p<0,05). A indometacina (inibidor da ciclooxigenase, 10 mg/kg, Lv.) causou pequena redução na hipotensão máxima, e potencializou a recuperação da pressão para níveis basais; também aumentou a resistência dos ratos a doses maiores. A pré-incubação do veneno com antiveneno comercial aboliu totalmente a atividade hipotensora enquanto que a administração separada do antiveneno antes ou após o veneno não afetou a hipotensão subseqüente. O veneno dialisado produziu hipotensão de 46,9::t6,8% e 30,3::t5,5% com a dose de 100 ~g/kg após diálise em membranas com limites de filtração de 2 kDa e 12 kDa, respectivamente (p<0,05 comparados à queda de 69,8:!:6,2% com veneno não dialisado). Das frações obtidas por gel filtração do veneno, nenhuma sozinha (100 ~g/kg) reproduziu o efeito observado com o veneno total. Na combinação de frações, apenas as frações 2 e 4 reproduziram o quadro hipotensor do veneno, sendo que a fração 4 potencializou a fração 2. A ação da fração 2 também foi potencializada (p<0,05) pelo captopril enquanto que a fração 4 potencializou (p<0,05) a hipotensão causada pela bradicinina (1 mg/kg, Lv.). Estes resultados mostram que o veneno da B. altematus produziu resposta hipotensora dose-dependente em ratos que foi parcialmente mediada por NO, o qual pode ter sido liberado pela bradicinina proveniente da atividade cininogênica do veneno e presente na fração 2. A ação potencializadora da fração 4 sugere a presença de peptídeos potencializadores da bradicinina no veneno. Metabólitos do ácido araquidônico parecem estar envolvidos mais na manutenção da hipotensão do que na queda inicial. A via muscarínica e os canais de K+ATPdependentes parecem não estar envolvidos na hipotensão induzida pelo veneno / Abstract: The venoms of Bothrops snakes produce systemic effects characterized by disseminated bleeding, coagulopathies, shock and acute renal failure. In this study, we investigated the mediators involved in hypotension induced by Bothrops altematus snake venom. Male Wistar rats anesthetized with sodium pentobarbital were cannulated for measurement of blood pressure and heart rate, and for administration of drugs and venom. Venom (1-100 j.!g/kg) produced dosedependent hypotension with no effect on heart rate; a higher dose (200 j.!g/kg)also produced progressive cardiac depression. L-NAME attenuated the venom-induced hypotension whereas captopril potentiated the fali in blood pressure. Indomethacin enhanced the recovery to normal values and prolonged the survival of rats at venom doses up to 200 og/kg, but atropine and glibenclamide had no effect on the hypotensive response. Preincubating venom with commercial antivenom abolished the hypotensive activity. Fractionation of venom by gel filtration chromatography resulted in four peaks, of which only peaks 2 and 4 in combination reproduced the hypotension caused by whole venom. Peak 2 was also potentiated by captopril while peak 4 potentiated the response to bradykinin. These results indicate that the hypotension produced by B. altematus venom is mediated partly by nitric oxide whose formation may be stimulated by bradykinin and potentiated by captopril. Arachidonic acid metabolites may contribute to sustaining the hypotension whereas muscarinic receptors and ATP-dependent K+channels are not involved. / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Gilberto de Nucci, Heitor Moreno Junior / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-24T14:03:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_JoseEduardoTanusdos_D.pdf: 1675172 bytes, checksum: f5387132a5014ae092c21ec04cb80d53 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: O óxido nítrico (NO) tem sido usado no tratamento da hipertensão pulmonar. Alguns estudos experimentais têm sugerido efeitos terapêuticos do NO após embolia com microesferas. Num primeiro estudo, os efeitos protetores da inalação de NO previamente a uma embolia aérea pulmonar (EAP) foram avaliados. Um segundo estudo avaliou os efeitos terapêuticos do NO durante uma infusão endovenosa de ar (IVA). Também foram estudados a liberação de tromboxano A2 e a produção endógena de NO. No primeiro estudo, NO (3ppm) inalatório foi iniciado em 6 cães mestiços anestesiados (grupo NO), enquanto que os controles (n=7) não receberam NO. Decorridos 20 min, os cães receberam 2,5 ml/kg de ar injetados em veia periférica. Foram realizadas avaliações hemodinâmicas e coletadas amostras de sangue (arterial e venoso misto) para análise gasimétrica antes e após a inalação de NO, bem como 5-60 min a após a EAP. Três cães do grupo controle morreram ao passo que apenas um cão tratado com NO morreu. A EAP diminuiu a pressão arterial e o débito cardíaco por mais de 15 min após a EAP no grupo controle, enquanto que os animais tratados com NO apresentaram hipotensão transitória. O NO atenuou a hipertensão pulmonar após a EAP, pois houve menores aumentos de pressão arterial e resistência vascular pulmonares no grupo NO quando comparado com os controles. Estes efeitos hemodinâmicos do NO não foram associados a uma melhor oxigenação sangüínea. No segundo estudo, cães anestesiados receberam uma IV A (0.2 ml.kg-1.min-1) após ter sido feita uma avaliação hemodinâmica basal (BL). Os controles (n=8) não receberam 6outros tratamentos. Após 30 min de IVA (momento EMB), os cães do grupo NO (n=7) inalaram NO 3ppm por 30 min (momento NO 3) e, a seguir, ficaram por mais 30 min sem inalar NO (momento NO O). Nos 30 min seguintes, estes animais inalaram NO 40 ppm (momento NO 40). As variáveis hemodinâmicas foram registradas e foram coletadas amostras de sangue arterial e venoso misto para análise gasimétrica, determinação do tromboxano B2 (por ELlSA) e nitratos/nitritos (por HPLC) nos seguintes momentos do estudo: BL, EMB, NO 3, NO O e NO 40. O índice cardíaco aumentou 24% (p<0.05) e o índice de resistência vascular pulmonar diminuiu 30% (p<0.05) durante ambas inalações de NO. A PaO2 e a SaO2 diminuíram após a inalação de NO. As concentrações de nitratos/nitritos não mudaram no grupo controle. Não houve diferença nas concentrações de nitratos/nitritos entre o sangue arterial e venoso misto. As concentrações de nitrito permaneceram abaixo de 1 µM em ambos os grupos, enquanto que as concentrações de nitrato aumentaram apenas no momento NO 40 (p<0.05). As concentrações de TxB2 aumentaram após 60 min de IVA no grupo controle (p<0.05), porém nenhum aumento foi observado nos animais tratados com NO. Estes resultados indicam que o NO atenuou as alterações hemodinâmicas induzidas pela EAP e pela IVA em cães, contudo sem melhorar a oxigenação pulmonar. Estes efeitos foram associados a menores concentrações de TxA2 nos animais tratados com NO, sem que s-e observasse diferença entre 3 ppm e 40 ppm. Ainda, a produção endógena de NO não foi comprometida pela IVA em cães / Abstract: Inhaled nitric oxide (NO) has been used in cases of pulmonary hypertension. Experimental studies have suggested therapeutic effects of NO after pulmonary microembolism. The protective effects of NO inhalation before a massive pulmonary air embolism (PAE) were evaluated in a first study. A second study focused the therapeutic effects of NO inhalation during a venous air infusion (VAI). The thromboxane a release and in vivo NO production were also studied. In the first study NO(3ppm) was initiated in 6 anesthetized mongrel dogs (NO group) but not in the control group (n=7). After 20 min, each dog received a venous air injection of 2.5 ml/kg. Hemodynamicevaluation was performed and blood samples (arterial and mixed venous) were drawn for blood gas analysis before and after NO inhalation, and 5-60 min after the PAE. Three dogs died in the control group vvhereas one dog died in the NO group. PAE decreased both arterial pressure and cardiac output in the control group for- more than 15 min after PAE, while NO¬ treated animals showed only a transient hypotension. NO attenuated the pulmonary hypertension after PAE, as demonstrated by the lower increases in pulmonary artery pressure and vascular resistance in NO-treated animals compared to the controls. These hemodynamic effects of NO were associated with no differences in blood oxygenation. In the second study, anesthetized mongrel dogs received a VAI (0.2 ml.kg-1.min-1) after a baseline (BL) hemodynamic evaluation. Controls (n=8) received no further treatment. After 30 min of VAI (EMB time point), NO 3ppm was initiated in .the NO group (n=7) for 30 min (NO 3 time point), followed by 30 min without NO inhalation (NO O time point). Thereafter NO 40 ppm was inhaled for 30 min (NO 40 time point). Hemodynamic variables were registered and arterial and mixed venous blood samples were drawn for gas analysis, and serum determinations of thromboxane B2 (by ELlSA) and nitrate/nitrite (by HPLC) at BL, EMB, NO 3, NO O and NO 40 time points. Cardiac index increased 24% (p<0.05) and pulmonary vascular resistance index decreased 30% (p<0.05) during both NO inhalation. PaO2 and SaO2 were slightly lower (p<0.05) after NO therapy. Nitrate/nitrite concentrations did not change in the control group. No differences between arterial and mixed venous serum nitrate/nitrite were found. Nitrite concentrations remained below 1 µ M in both groups whereas nitrate concentration increased only at NO 40 (p<0.05). Serum TxB2 increased after 60 min of VAI in the control group (p<0.05), whereas no increase was observed in NO-treated animals. These results indicate that NO attenuates the hemodynamic changes induced by PAE and by a VAI in dogs, without improving pulmonary oxygenation, however. These effects were associated with lower TxA2 concentrations in NO-treated animals and no differences were observed between NO 3 ppm and 40 ppm. Furthermore, endogenous NO release is not impaired afier a VAI in dogs / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Ciências Médicas

Orientador: Nora Marcela Haun Quiros / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T12:27:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Torsoni_AdrianaSouza_M.pdf: 20635048 bytes, checksum: a01b9994fce1e6c4b016aa22794ba653 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: A farmacodinâmica vascular da síntese endógena de NO ficou conhecida devido ao efeito de drogas nitrovasodilatadoras. Esses agentes exógenos, tais como o nitroprussiato de sódio, agem como doadores de NO e exercem efeito hipotensivo in vivo direto promovendo diminuição na resistência vascular sistêmica decorrente de um aumento nos níveis de GMP cíclico. Nosso interesse reside na possibilidade de complexos de rutênio transnitrosilaminados servirem como veículo para a liberação controlada de NO em sistemas biológicos e, assim, produzir efeitos farmacológicos. O objetivo desse trabalho foi investigar o efeito hipotensor e a toxicidade de um novo complexo de rutênio, o t-[Ru(NH3)4P(OEt)3NO](PF6)3 devido a sua habilidade em liberar NO espontaneamente em solução aquosa. Medidas diretas de PA foram realizadas em ratos Wistar machos adultos cronicamente instrumentados. O efeito hipotensor foi determinado em ratos conscientes (n=10) submetidos a injeções endovenosas "in bolus" de trans-[Ru(NH3)4P(OEt)3NO](PF6)3 e nitroprussiato de sódio (NaNP). Concentrações de 0,0025 a 0,08 µmoles/Kg do complexo de rutênio induziram resposta hipotensora imediata (PAM controle 104 ± 4,1 mmHg) em uma faixa de ação de 7 a 27%, similar ao efeito observado para o NaNP (11a 32%). Uma correlação dose-efeito positiva foi observada. A toxicidade foi avaliada em cultura de células (IC50) e pela toxicidade aguda em camundongos (LD50). Estudos da citotoxicidade foram conduzidos em cultura de hepatócitos (células metabolizantes), V79 (células não metabolizantes) e V79 tratada com o complexo biotransformado pelos hepatócitos. Hepatócitos de rato foram isolados pelo método de perfusão com colagenase em duas etapas do fígado inteiro. A viabilidade celular foi avaliada por três ensaios, os quais são indicativos de citotoxicidade: redução do MTT, incorporação do vermelho neutro (VN) e conteúdo de ácidos nuclêicos (DNA). Esses ensaios permitiram a avaliação dos valores de IC50 para o trans-[Ru(NH3)4P(OEt)3NO](PF6)3 em células V79 e hepatócitos. Na cultura de hepatócitos valores de IC50 superiores a 3,0 mM foram obtidos para todos os ensaios realizados, sugerindo uma baixa toxicidade do complexo. Para cultura de células V79, nossos resultados mostraram efeito citotóxico similar para os três ensaios investigados, com valores de IC50 ao redor de 2,0 mM, mostrando ser este composto menos tóxico que o NaNP (IC50 ~ 0,056 mM). O produto da biorransformação foi avaliado e mostrou baixa toxicidade para os ensaios de DNA, MTT e alta toxicidade para o VN, i.e., o composto biotransformado modificou a integridade lisossomal. A toxicidade aguda foi avaliada e um valor de LD50 igual a 216 mg/Kg foi obtido indicando baixa toxicidade do complexo in vivo. / Abstract: The vascular pharmacology of endogenously synthesised NO is largely predicted by the known effects of nitrovasodilator drugs. These exogenous agents, such as sodium nitroprusside, act as NO donors and exert direct hypotensive effects in vivo promoting a decrease in systemic vascular resistance by increasing levels of cyclic GMP. We have been interested in the possibility that trans-nitrosylammine ruthenium complexes, might serve as vehicles for the controlled delivery of NO into a biological system and thus display useful pharmacological effects, promoting hypotensive effect. The aim of this work was to investigate the hypotensor effect and toxicity of a new ruthenium complex t-[Ru(NH3)4P(OEt)3NO](PF6)3 due to their ability to spontaneously NO release in aqueous solution. Direct measurements of blood pressure were performed in chronically instrumented adult male Wistar rats. The hypotensor effect was determined in conscious rats (n=10) submitted to in bolus intravenous doses of the trans-[Ru(NH3)4P(OEt)3NO](PF6)3 and sodium nitroprusside (NaNP). Concentration range of 0.0025 to 0.08 µmols/Kg induced hypotensive response (MAP control: 104 ±4.1 mmHg) immediately in action range of 7 to 27% similar to that observed for NaNP effect (11 to 32%). A positive dose-effect correlation was observed. The toxicity was evaluated on cell culture (IC50) and by acute dose in mice. Cytotoxicity studies were carried out on cultures of rat hepatocytes (metabolizant cells), V79 (non-metabolizant cells) and V79 treated with the supernatant of the biotransformed complex by hepatocytes. Hepatocytes were isolated from adult male Wistar rats by the two-step collagenase liver perfusion. Cell viability was evaluated by three endpoints which are indicative of cytotoxicity: MTT reduction, Neutral Red Uptake (NRU) and Nucleic Acid Content (DNA). These assays permit the evaluation of IC50 values of trans- [Ru(NH3)4P(OEt)3NO](PF6)3 on V79 and rat hepatocyte cells. On hepatocyte culture values higher than 3.0 mM were determined for all tests, suggesting a low toxicity for the complex. For V79 cultures our results showed a similar cytotoxic effects for the three studied endpoints with an IC50 ranging around 2.0 mM, showing be less toxic than NaNP. The biotransformated product was evaluted and showed low toxicity for DNA, MTT assays and high toxicity for NRU, i.e., the compound biotransformed changed the lysosomal integrity. The acute toxicity was carried out and a LD50 value of 216 mg/Kg was obtained indicating a low toxicity in vivo. / Mestrado / Bioquimica / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Edson Antunes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-25T19:01:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Penteado_CarlaFernandaFranco_M.pdf: 2582288 bytes, checksum: b84812ec12fc6c20a7e59cc8b9799a0b (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Neste trabalho investigamos a participação do NO no edema de pata, permeabilidade vascular e influxo de neutrófilos para cavidade peritoneal induzidos pela enterotoxina estafilocócica tipo B (SEB) em camundongos. Para tanto, utilizamos inibidores não-seletivos (L- NAME) e seletivos (aminoguanidina e 7 -nitroindazol) da NO-sintase, assun como a dexametasona (inibidor da indução da iNOS). Nossos resultados mostraram que o L-NAME (7-28 mg!kg, i.v.) e aminoguanidina (25-75 mg!kg, i.v.) reduziram significativamente o edema de pata induzido pela SEB (25 ~g/pata). A administração subplantar de tais inibidores também causou significante redução do edema de pata. Por outro lado, apenas as maiores doses destes inibidores (administrados pela via endovenosa) foram capazes de inibir de maneira significativa, o extrayasamento de proteínas induzido pela toxina. O D- NAME (enântiomero inativo), administrado local ou sistemicamente, não alterou a resposta edematogênica induzida pela SEB. A inibição do edema de pata causada pelo L-NAME e aminoguanidina foi revertida pelo iloprost (análogo da prostaciclina), sugerindo que o efeito inibitório destes inibidores deve-se, provavelmente, à redução de fluxo sangiiíneo local como conseqüência da inibição do NO. Aadministração sistêmica do L-NAME (14-56 mg!kg), aminoguanidina (25-75 mg!kg) ou dexametasona (0,25-1,0 mg!kg) atenuou o influxo de neutrófilos induzido pela SEB em cavidades peritoneais com número de macrófagos normais. Em cavidades com o número de macrófagos aumentado, os inibidores foram menos eficazes em reduzir o influxo dessas células. O D-NAME não afetou o influxo de neutrófilos induzido pela SEB nas duas cavidades estudadas. Os resultados da medida da atividade da NOS mostraram que a nNOS do cérebro foi significativamente inibida pelo L-NAME 4 (28 mg/kg) e 12 h (14-56 mg/kg) após administração endovenosa deste inibidor. A aminoguanidina (75 mg/kg, i.v.) reduziu a atividade da nNOS em 4 h, mas não em 12 h após a administração sistêmica. O 7-nitroindazol (5-15 mg/kg) não modificou a nNOS em quaisquer das doses utilizadas. A atividade da iNOS foi inibida significativamente pelo L-NAME (14-56 mg/kg, i.v., 12 h) e aminoguanidina (25-75 mg/kg, i.v., 12 h). Concluímos que o NO é um mediador importante na resposta edematogênica e no influxo de neutrófilos induzidos pela SEB. A síntese do NO, no sítio inflamatório, parece envolver a cNOS na fase inicial (4 h) e a iNOS na fase de mais tardia (12 h) / Abstract: In this study we attempted to investigate the role of nitric oxide (NO) on the inflammatory responses (hindpaw oedema, vascular permeability and neutrophil migration) induced by the staphylococcal enterotoxin type B (SEB) in mouse. To achieve this, both non-selective (L-NAME) and selective (aminoguanidine and 7-nitroindazole) NO-synthase (NOS) inhibitors as well as dexamethasone (iNOS induction inhibitor) were used. Our results showed that L-NAME (7-28 mg/kg, i.v.) and aminoguanidine (25-75 mg/kg, i.v.) significantly reduced SEB-induced paw oedema. Similar results were observed when these inhibitors were administered intraplantarly. The inactive enantiomer D-NAME had no effect on the SEB-induced oedema formation. The inhibition of paw oedema by both L- NAME and aminoguanidine were significantly reversed by the local . administration of the prostacyclin analogue iloprost. This suggest that these inhibitors probably acts by reducting regional blood flow. The compound 7¬nitroindazole, a substance which preferentially inhibit nNOS, had no effect on the exsudation and paw oedema induced by SEB. L-NAME and aminoguanidine as well as dexamethasone significant reduced neutrophil accumulation induced. by SEB into mouse peritonenl cavity. In thioglycollate-pretreated cavities, a condition where the number of macrophages is increased, L-NAME and aminoguanidine caused a smaller inhibition of SEB-induced neutrophil migration, as compared to naive cavities. D-NAME had no effect on the neutrophil migration induced by SEB, either in non-stimulated or thioglycollate-treated cavities. In addition, bNOS activity was reduced by L-NAME at 4 h (28 mg/kg) and 12 h (14-56 mg/kg) after endovenous administration, while aminoguanidine (75 mg/kg, i. v.) was able to reduce the nNOs activity only when this inhibitor was injected 4 h before. The nNOS activity was unchanged by 7 -nitroindazole. The activity of iNOS was significant1y inhibited by L-NAME (14-56 mg/kg, i.v., 12 h) and aminoguanidine (25-75 mg/kg, i.v., 12 h).In conclusion, our results indicate that NO modulate both oedema and neutrophil migration induced by SEB. We suggest that NO involved in inflammatory response was produced by cNOS in the early phase (4 h) and iNOS during the sustained phase (12 h) / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Ione Salgado / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T03:06:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Modolo_LuziaValentina_D.pdf: 799010 bytes, checksum: 1363bbb027c17ac1fd3b4e9f93479455 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A origem do óxido nítrico (?NO) em plantas tem sido controversa e uma enzima do tipo óxido nítrico sintase (NOS), bem como nitrato redutase (NR) são consideradas possíveis fontes deste radical livre. Contudo, ainda não há nenhuma evidência direta da formação de ?NO a partir da NR durante interações planta-patógeno. Nos estudos aqui descritos foram utilizadas plantas de Arabidopsis thaliana deficientes na enzima NR para investigar o mecanismo de produção de ?NO em resposta à inoculação da bactéria Pseudomonas syringae pv. maculicola (Psm). Aumento na síntese de L-citrulina a partir de L-arginina foi observado em homogenatos de folhas de plantas do tipo selvagem e daquelas deficientes na síntese de NR, após inoculação com Psm. Experimentos de ressonância paramagnética eletrônica, contudo, mostraram uma produção muito maior de ?NO dependente de NO2-, mas não de L-arginina ou NO3-, síntese esta inibida por alta concentração de L-arginina. A inibição da cadeia de transporte de elétrons da mitocôndria aboliu ou inibiu parcialmente esta atividade em plantas mutantes ou selvagens, respectivamente. A utilização do marcador fluorescente 4,5 diaminofluoresceína diacetato (DAF-2DA) mostrou que a inoculação com Psm aumentou substancialmente a produção de ?NO in situ em plantas selvagens, mas não em mutantes deficientes na síntese de NR. No entanto, a infiltração de L-arginina ou NO2- causou uma produção de ?NO in vivo nas plantas mutantes. Plantas de A. thaliana deficientes na síntese de NR mostraram suscetibilidade à P. syringae que foi prevenida pela co-infiltração de NO2-. O conjunto de resultados sugere que NOS, NR e uma importante atividade mitocondrial de redução de NO2- podem cooperar para produzir ?NO em quantidade suficiente para prevenir a disseminação de Psm em plantas de A. thaliana / Abstract: The origin of nitric oxide (?NO) in plants has been controversial and nitric oxide synthase (NOS)-like enzyme and nitrate reductase (NR) are claimed as potential sources. However, there is still no direct evidence for ?NO formation from NR during plant-pathogen interactions. Here, we used NR-defective double mutants of Arabidopsis thaliana to investigate the mechanism of ?NO production following infection by an avirulent strain of Pseudomonas syringae pv. maculicola (Psm). Increased formation of L-citrulline from L-arginine was observed in leaf homogenates of both wild-type and nia1 nia2 mutant plants. Electron paramagnetic resonance experiments, however, showed a much higher ?NO production that was dependent on NO2- rather than on L-arginine or NO3- and was also inhibited at high L-arginine concentrations. Inhibition of mitochondrial electron transport abolished and inhibited partially this activity in nia1 nia2 mutants and wild-types, respectively. In situ ?NO production was substantially increased in wild type-plants but not in mutants, following Psm challenge, as measured with the fluorescent probe 4,5-diaminofluorescein diacetate. However, in vivo ·NO production in NR-deficient mutants was visualized only after L-arginine or NO2- infiltration into the leaves. A. thaliana plants defective in NR showed susceptibility to P. syringae that was prevented by infiltration of NO2-. The overall results suggest that NOS, NR, and an important mitochondrial-dependent nitrite-reducing activity cooperate to produce ?NO in amounts enough to prevent Psm dissemination in A. thaliana plants / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador: Sergio de Albuquerque / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T03:02:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lopes_ElaineSimoesGuerra_M.pdf: 4414580 bytes, checksum: dc748dd19cb3bcf7c9168b2ca07781b3 (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: Os glicocorticóides são agentes terapêuticos, amplamente utilizados na terapia imunosupressora em doenças auto-imunes. O presente trabalho tenta avaliar as interações entre os glicocorticóides das glândulas adrenais e seus efeitos sobre a evolução da patogenia experimental chagásica em ratos Wistar machos, inoculados intraperitonialmente (i.p.), com 1x105 tripomastigotas sangüícolas, da cepa Y de Trypanosoma cruzi, e dividido em grupos: Controle sem infecção (CNI) e infectado (CI); Sham sem infecção (SHNI) e infectado (SHI); animais adrenalectomizados sem infecção (ADXNI) e infectado (ADXI); e animais adrenalectomizados com reposição de dexametasona sem infecção (A+DNI) e infectado (A+DI). Os parâmetros utilizados para esta avaliação foram: adrenalectomia, parasitemia, hemograma, dosagem de óxido nítrico e histopatologia do coração, baço, fígado e timo. O pico de parasitemia ocorreu no 9º dia após o inóculo, o que condiz com a literatura. O hemograma não apresentou alterações relevantes tanto para a série eritrocitária como para a série leucocitária, mostrando apenas uma ligeira tendência nos A+D, uma polictemia. Sabe-se da importância da produção de óxido nítrico (NO), para o controle da infecção sobre diversos parasitas intracelulares. A análise dos dados revelou que a adrenalectomia não alterou de forma significativa a produção de NO, mesmo no grupo A+D. Este último foi o que apresentou os menores níveis parasitêmicos e a mais alta produção de NO. As alterações histopatológicas durante o decurso da doença de Chagas não foram expressivas. A avaliação das modificações morfológicas do baço, fígado, coração e timo, permitiu a visualização de parasitismo tecidual somente no coração. A análise cariométrica mostrou alterações significativas entre os grupos, principalmente nos animais A+D, que apresentaram núcleos hipertrofiados. De uma maneira geral, podemos inferir que a resposta imune não foi prejudicada em função da adrenalectomia ou reposição de dexametasona / Abstract: Glucocorticoids are therapeutic agents widely used for auto-immune diseases. The number of papers concerning to the actions of glucocorticoids are still not well stabilished. The aim of this work is to evaluate the interactions between adrenal glucocorticoids and its effects on the development of experimental chagasic infection in male Wistar rats infected with 1x105 blood stage tripomastigotes of Trypanosoma cruzi Y strain. Experiments were prformed in groups of animals as follow: Infected and non-infected control (IC and NIC), Infected and non-infected sham operated animals (ISH and NISH), Infected and non-infected adrenalectomized (IADX and NIADX) and Infected and non-infected adrenalectomized with dexametasone reposition (IA+D and NIA+D). The parameters used for assessment were: adrenalectomy, parasitemia, hemogram, NO quantification and histopathological obdervations of heart, thymus, spleen and liver. The peak of parasitemia occured on the 9th. day after infection. The hemogram did not show significant alterations for both erythrocytic and leucocitary series. A slight tendency in displaying policitemia was found in adrenalectomized with dexametasone repositions groups. Nitric Oxide was a major factor in controlling intracellular pathogens. The results revealed that adrenalectomy did not change significantly alter NO production, even in adrenalectomized animals with dexametasone reposition. The latter group showed the most significant low level of parasitemia as well as the highest level of NO production. Histopathological observations did not show any important alterations. Amastigote burdens were found only among heart fibers. The cariometric evaluation showed some alterations, mainly in adrenalectomized group with dexametosone reposition where hypertrofic and more eliptoid nucleus were observed. The adrenalectomy or dexametasone reposition did not change the immune response to T.cruzi. The resistant Wister rat strain used in this work contributed to attenuate the level of parasitemia / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Parasitologia

Orientador: Marcelo Menossi Teixeira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-04T02:01:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 CostaNetto_AntonioPaulinoda_D.pdf: 960397 bytes, checksum: 250e582a4c1b0747546c9f611a5248d2 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: O óxido nítrico (NO) é uma espécie reativa de nitrogênio relativamente instável e possui grande versatilidade. Ele atua como mensageiro secundário, sendo inclusive citotóxico dependendo da sua concentração. Ações do NO como mensageiro secundário são descritas na neurotransmissão, regulação da circulação sanguínea e de processos inflamatórios, principalmente em mamíferos onde a enzima NO-sintase (NOS) foi descoberta. Em plantas, o NO possui importante papel na interação planta-patógeno, na expansão foliar e redução da velocidade de amadurecimento ou senescência de frutos e flores e no processo de apoptose, entre outros. Recentemente duas isoformas de NOS de plantas foram caracterizadas em Arabidopsis thaliana e pouco se sabe da modulação da expressão gênica por NO em plantas. Este trabalho relata a clonagem e caracterização de um gene que codifica uma NOS de A. thaliana e a modulação da expressão gênica em cana-deaçúcar em resposta GSNO, um doador de NO. partir de seqüências depositadas no banco de dados do NCBI, foram sintetizados oligonucleotídeos específicos. A partir de reações de transcrição reversa e PCR o gene foi clonado e seqüenciado, sendo denominado HHP. O gene é mais expresso em folhas e flores e é induzido quando plantas de A. thaliana são submetidas a baixa temperatura. A localização subcelular da proteína foi determinada via fusão com GFP, sendo predominantemente plastídica. Plantas de A. thaliana superexpressando o gene HHP apresentaram uma melhora acentuada na resposta ao frio. O efeito do NO na expressão gênica em cana-de-açúcar foi avaliado empregando macroarranjos de DNA. Foi detectado um aumento na expressão de alguns genes como por exemplo minotransferases e peroxidases, além de proteínas com função ainda desconhecidas. Foi também demonstrada a influência dos plásticos que selam membranas com macroarranjos de DNA, onde compostos a partir de polietileno podem bloquear a emissão de radiação e diminuir o número de spots detectados, o que significa um menor número de genes avaliados / Abstract: Nitric oxide (NO) is a reactive nitrogen species relatively unstable that has great versatility. NO acts as a secondary messenger and may be even cytotoxic, depending on its concentration. Actions of the NO as secondary messenger have been described in neurotransmission, regulation of the blood circulation and inflammatory processes mainly in mammals where the enzyme NO-synthase (NOS) was discovered. In plants, NO has important role in plant-pathogen interactions, in foliar expansion and in the maturation and sencescence of fruits and flowers. Recently two NO isoforms have been characterized in Arabidopsis thaliana, but we are far from a complete understanding of the NO effects on gene expression. This work reports the cloning and characterization of a NOS isoform from A. thaliana and the modulation of gene expression in sugarcane by NO donors. Gene-specific oligonucleotides were designed based on the sequence of an animal NO-synthase deposited in the NCBI. After reverse-transcription and PCR the open reading frame was cloned and the gene was named HHP. The highest levels of gene expression were observed in leaves and flowers. HHP was induced by cold stress. The subcelular localization of the protein, determined using a GFP fusion, was predominantly plastidic. Transgenic A. thaliana superexpressing the HHP gene were more tolerant to cold stress. The effect of NO on sugarcane cells was evaluated using DNA macroarrays. Several genes were found to be modulated by NO, such as those encoding an aminotransferase and a peroxidase. Surprisingly, most of them encode proteins with unknown function. The influence of plastics used to seal macroarray membranes was also evaluated. It was found that some of them block the radiation transmittance, reducing the number of detected spots and consequently the number of genes evaluated in the assay. These findings indicate that the choice of the sealing plastic is very important to obtain the maximum information from nylon arrays / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

Orientador : Edson Antunes / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-07-31T15:56:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pacca_SandraReginaMachadodeCampos_M.pdf: 12752864 bytes, checksum: 1c939232594dee6b0c5f6b349340c5d8 (MD5) Previous issue date: 2001 / Resumo: o óxido nítrico é um importante modulador do tônus vascular. A inibição prolongadade sua síntese, por meio de compostos análogos à L-arginina,tais como o N°O-nitro-L-argininameti! éster (L-NAME),constitui um modelo de hipertensão arterial acompanhado de isquemia miocárdicaem ratos. Neste trabalho, investigou-se, em ratos, o efeito de dois antagonistas dos receptores 13-adrenérgicos, o atenolol (antagonista seletivo 131)e o propranolol (antagonista não seletivo 13),na hipertensão e nas lesões miocárdicas induzidas pela administração crônica (8 semanas) de L-NAME.Para tanto os animais foram divididos em 6 grupos experimentais, (n =15 cada) : 1) Controle (animais que receberam ração e água de torneira); 2) L-NAME(animaisque receberam apenas L-NAMEna dose de 20 mg/rato/dia); 3) L-NAME+ propranolol (animais que receberam L-NAMEe propranolol, nas doses de 20 e 30 mg/rato/dia, respectivamente; 4) L-NA-ME+ atenolol (animais que receberam L-NAMEe atenolol, nas doses de 20 e 30 mg/rato/dia, respectivamente; 5) Propranolol (animais que receberam somente o propranololna dose de 30 mg/rato/dia), e 6) Atenolol( animaisque receberam apenas o atenololna dose de 30 mg/rato/dia). A pressão arterial caudal foi medida semanalmente e observou-se que nos animais tratados com L-NAME, houve uma elevação da pressão arterial tempo-dependente. Os pesos corpóreos foram também avaliados semanalmente e os animais do grupo tratado com L-NAME, tiveram um ganho de peso menor em relação aos outros grupos experimentais. Ao final do estudo, os animais foram sacrificados e os corações removidos para avaliação dos pesos cardíacos e posterior análise histológica qualitativa do miocárdio. No coração dos animais tratados com L-NAME, a área média dos cardiomiócitos aumentou e também foram observadas áreas de lesões com magnitudes diferentes entre os animais...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The effects of the f3-blockers propranolol and atenolol were investigated on arterial hypertension, cardiomyocyte hypertrophy and ventricular ischaemic lesions in response to long-term administration of the nitric oxide (NO) synthase inhibitor NCO-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME) in rats. Male Wistar rats received L-NAME (20 mg/rat per day) in the drinking water for 8 weeks. Propranolol (30 mg/rat per day) and atenolol (30 mg/rat per day) were also given in the drinking water concomitantly to L-NAME. Treatment with L-NAME caused a time-dependent increase in tail-cuff pressure, whereas untreated rats remained normotensive during the whole study period. Propranolol or atenolol markedly attenuated L-NAME-inducedhypertension. When given alone, propranolol and atenolol had no significant effect on tail-cuff pressure. A significant increase in the mean crosssectional area of cardiomyocytes (Acel)of left ventricles was observed in LNAME- treated rats, and this was partly attenuated by either propranolol o atenolol...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador : Marta Helena Krieger / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-31T17:44:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barros_BrigidaFigueiredode_M.pdf: 6332589 bytes, checksum: da0d2a86ffc6ebb2fa4776a145461c61 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Compostos nitrovasodilatadores apresentam como característica principal a capacidade de doar NO tanto in vitro como in vivo e promover o relaxamento do músculo liso vascular, a diminuição da resistência periférica total e conseqüentemente a diminuição da pressão arterial sanguínea. O complexo trans-[Ru(N0)(NH3)4(POEt)3](PF6)3 é um doador de NO com ação similar ao Nitroprussiato de Sódio porém, com menor citoxicidade. Os estudos da administração do RuNO em ratos Wistar machos normotensos acordados nos possibilitaram determinar a curva dose resposta <Emáx= - 38 mmHg e Ec50=nmoles/Kg), o curso temporal e o comportamento do complexo quando incubado com diferentes concentrações de NaN02. Além disso, estudou-se a via de liberação e ação do NO no músculo liso vascular de ratos normotensos, utilizando como ferramentas: um seqüestrador de NO específico (carboxy-PTIO) e um inibidor inespecífico da guanilato ciclase solúvel (azul de metileno), respectivamente. Os estudos em diferentes modelos animais de hipertensão aguda (Fenilefrina, Ang II e L-NAME) e crônica (SHR), nos possibilitaram observar diferenças no efeito hipotensor de vasodilatadores dependentes (Ach) e independentes do endotélio (RuNO e SNP). O complexo RuNO apresentou um aumento na resposta hipotensora de cerca de 135% nos modelos agudos de Fenilemna e Ang lI, 60% no modelo crônico SHR e nenhum aumento significativo para o modelo agudo L-NAME, quando comparada a resposta obtida em ratos normotensos para a dose de 10 nmoles/Kg. O SNP apresentou um aumento significativo na resposta hipotensora, para a dose de 10 nmoles/Kg, de cerca de 75% para o modelo agudo L-NAME e de 56%, 48% e 44% para os modelos de hipertensão AngII, Fenileftina e SHR, respectivamente. E a Ach apresentou resposta vasodilatadora aumentada em cerca de 56% e 89 % para a dose de 10 nmoles/Kg, para o modelo de hipertensão aguda induzida pela Ang II e para o modelo de hipertensão crônica SHR, respectivamente / Abstract: Nitrovasodilators compound show as the principal characteristic liberate NO in vitro as in vivo promoting relaxation of the vascular smooth muscle, decrease of the total peripheric resistance and consequently the arterial blood pressure. The trans [RU(NO)(NH3)4(POEt)3](pF6)3 complex is a NO donor with similar action to SNP even so, with smaller cytoxicity. Our studies of RuNO administration in concious normotensive adult male Wistar rats facilitated to determine the RuNO effect on blood pressure (Emáx = - 38 mmHg and Ec50 =16 nmoles/Kg), the time-course and its stability and activity when incubated with different NaNO2 concentrations. Besides, we investigated the mechanism of NO liberation and the action of RuNO in vasorelaxation in normotensive rats, using: a specific NO scavenger (carboxy-PTIO) and an inibidor of cyclic guanilate soluble (methylene blue), respectively. The studies in different acute (phenylephrine, Ang II and L-NAME) and chronic (SHR) hypertensive models, facilitated us to observe differences in the hypotensive response to endothelium dependent (Ach) and independent (RuNO and SNP) vasodilators. RuNO hypotensive response (10 nmol/Kg) was, on average, 150 % higher in acute hypertension models (phenyl, DMAP= 30 ± 2.3 mmHg; Ang 11, DMAP= 28 ± 2.3 mmHg) in relation to normotensive rats, except for L-NAME rats (DMAP= 1O ± 1.4 mmHg), where that effect was similar to normotensive rats. Chronic SHR showed 60 % of increase (DMAP= 19 ±0.8 mmHg) in the effect compared to normotensive rats (DMAP= 12 ± 0.6 mmHg). SNP hypotensive response showed lower increment (60 %) than RuNO (150 %) in the hypertensive models (phenyl, DMAP= 25 ± 2 mmHg; Ang 11, DMAP= 27 ± 3 mmHg).However, he incremented in the response of SNP was observed in the L-NAME-induced hypertension (DMAP= 30 ±2 mmHg). Ach hypotensive response was 50 and 90 % higher in Ang II hypertensive (DMAP=53 ± 1 mmHg) and SHR rats (DMAP = 67 ±3 mmHg), respectively than in normotensive rats (DMAP = 35 ±0.6 mmHg, but no increment was observed in Phenyl and L-NAME (DMAP= 34 ±3 mmHg and DMAP= 38 ± 5 mmHg, respectively) / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Orientador : Francesco Langone / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-31T21:34:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RodriguezdelaHoz_CristianeLucia_M.pdf: 7821796 bytes, checksum: 830e73a32d4dfd4b30ff2ee2154ef71d (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: A axotomia em um nervo periférico leva ao desencadeamento do processo degenerativo na porção distal à lesão, denominado degeneração Walleriana (DW). Macrófagos e células de Schwann fagocitam e removem os axônios e a mielina em degradação. Além disso, tais células também são responsáveis pela preparação do microambiente adequado à regeneração axonal, através da produção de moléculas com propriedades neurotróficas e neurotópicas. Dentre essas moléculas destacamse as citocinas, produzidas principalmente pelos macrófagos, os fatores neurotróficos e componentes da matriz extracelular, produzidos pelas células de Schwann. Recentemente, foram obtidas evidências de que o óxido nítrico (NO) estaria também envolvido no desenvolvimento da DW e, conseqüentemente, no processo de regeneração axonaL Contudo, pouco ainda se sabe sobre a participação dos macrófagos e células de Schwann na produção do NO no decurso da DW. Alguns trabalhos relataram que camundongos adultos da linhagem C57BU6J apresentam menor capacidade regenerativa axonal, após lesão do nervo ciático, quando comparados a outras linhagens isogênicas. O objetivo deste trabalho foi investigar possíveis diferenças no padrão temporal degenerativo das linhagens C57BU6J e AIJ, utilizando o modelo de seção do nervo ciática e impedindo-o de regenerar. Neste sentido, analisamos inicialmente o desaparecimento dos neurofilamentos axonais, a fragmentação e degradação da bainha de mielina e a atividade da NADPH-diaforase no coto distal do nervo após 1, 3, 5 e 7 días da axotomia. A quantificação estereológica dos neurofilamentos marcados imunoistoquimicamente mostrou que a defosforilação e degradação são mais precoces na linhagem C57BU6J do que na linhagem AIJ. A histoquímíca do Sudan BJack não revelou diferenças temporais na fragmentação da bainha de mielina entre as linhagens. Porém, evidenciou a presença de um maior número de células envolvidas na degradação da mielina nos camundongos C57BU6J, 3 e 5 dias após a lesão. Por sua vez, a técnica histoquímica para NADPH-diaforase, indicadora da produção de NO, revelou que células presentes no coto distal em degeneração expressaram atividade NADPH-diaforase do 1° ao 7° dia após axotomia, em ambas as linhagens. Contudo, 5 dias após a lesão, as células NADPH-diaforase positivas na linhagem C57BU6J apresentaram, predominantemente, uma marcação intensa e bem delimitada, ao passo que na linhagem AlJ foram mais abundantes aquelas com marcação granular e dispersa. Com o objetivo de melhor compreender a participação do NO na DW, utilizamos técnicas de imunofluorescência e microscopia confocal para identificar as células envolvidas na produção de NO e também analisar a expressão temporal e espacial da isoforma induzível da óxido nítrico sintase (iNOS) após a seção do nervo ciático. Observou-se que a imunoreatividade para iNOS foi intensa em macrófagos e menos evidente nas células de Schwann, estando presente em ambos tipos celulares desde o 10 ao 70 dia após a lesão, para ambas linhagens. Contudo, os macrófagos constituíram o mais abundante contingente celular expressando iNOS. Além disso, na linhagem C57BU6J parece ter havido um ligeiro retardo para o início do recrutamento e ativação dos macrófagos quanto à expressão de iNOS no decorrer da DW, comparativamente à linhagem AIJ. Nossos resultados revelaram diferenças entre as linhagens AIJ e C57BU6J quanto a importantes eventos da DWe que parecem refletir diferentes propriedades intrínsicas dos axônios, bem como diferenças comportamentais em algumas células, talvez sob a ação de citocinas. Tais diferenças entre as linhagens devem ser consideradas em trabalhos de degeneração e regeneração nervosa periférica / Abstract: Axotomy of a peripheral nerve leads to a degenerative process in the distal stump known as Wallerian degeneratíon (DW), in which macrophages and Schwann cells participate ín phagocytosis ofaxon and myelin debris. Such cells are also responsible for preparing a favorable microenvironment to axonal regeneration through production of neurotrophic and neurotopic substances. Among these substances are cytokines produced mostly by macrophages and neurotrophic factors and components of extracellular matrix produced by Schwann ceUS. Recently, evidence emerged showing that nitric oxide (NO) would also be involved in DWand, consequently in lhe axonal regeneration processo However, partícipation of macrophages and Schwann cells in NO production during DW remains to be investigated . It has been reported in the literature that adult C57BU6J mire have a lower axonal regeneration potential afier sciatic nerve lesion when compared to olher ísogenic strains. The aim of this work was to investigate possíble differences in time course of some events in DW process between C57BU6J and AIJ strains, by using complete sciatic nerve transection model with prevented axonal regeneration. First, we studied the time course of neurofilament breakdown, fragmentation and clearance of myelin sheath and NADPH-diaphorase activity in the distal stump, 1, 3, 5, and 7 days afier axotomy. The stereologicaJ analysis of immunoreactive neurofilaments showed lhat the dephosphorylation and degradation process of these elements in C57BU6J strain is faster than in AIJ strain. On the olher hand, Sudan Black histochemistry did noí show differences between strains as regards the time course of myelin sheath fragmentation. However, jt was evident that a higher number of cells were involved in myelin degradation in C57BU6J mice at 3 and 5 days post-surgery. NADPH-diaphorase histochemistry, a marker for NO production, showed positivecells in the distal stump of both strains from the first to the seventh day afier lesion. Positive-cells in C57BU6J strain showed predominantty an intense and well defined labeling 5 days afier transection, while in AlJ strain granular and dispersed labeling were more abundant. With the goal of better understanding NO involvement in DW, immunofluorescence techniques and confocal microscopy were used to identify ceUs related to NO production and to examine the spacial and temporal expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS) afier sciatic nerve transection. Immunoreactivity for iNOS was intense in macrophages and less evident in Schwann cells, but it was present in both cells trom the first to the seventh day afier transection in both strains. Macrophages were the main source of iNOS. We noted a delay in macrophage recruitment and activatíon of iNOS expression in the dista! stump of C57BU6J mire when compared to AJJ mies. These differences in DW between C578U6J and AIJ mice may reflect intrinsic properties ofaxons and/or behavioral dífferences in some cells, probably due influence of cytokines. These dífferences between strains should be taken into account in studies of degeneration and regeneration of the peripheral nervous system / Mestrado / Mestre em Biologia Celular e Estrutural