Tesis presentada a la Universidad de Chile para optar al grado de Doctora en Ciencias Farmacéuticas / La epilepsia del lóbulo temporal (ELT) se desarrolla de manera progresiva durante la epileptogénesis, después de la cual se producen crisis epilépticas espontáneas. Para su estudio, se necesitan modelos animales bien caracterizados de este proceso, que permitan aclarar los mecanismos moleculares subyacentes, entre los cuales se encuentra el rol del óxido nítrico (NO), al cual la literatura ha dado roles controversiales. En esta tesis, se utilizó como modelo experimental el kindling farmacológico con pentiléntetrazol (PTZ), que consiste en la administración de 10 dosis subconvulsivantes de PTZ, día por medio. Este modelo fue caracterizado conductual y electroencefalográficamente. Posteriormente, se realizaron experimentos con moduladores de los niveles corticales de NO. Se analizaron conductualmente 3 dosis de PTZ (20, 30 y 40 mg/Kg) durante los días de inyección. El grado de crisis máximo alcanzado mostró que la intensidad de las crisis aumenta conforme aumenta la dosis de PTZ administrada. Además, se observó que a dosis bajas (20 mg/Kg) el aumento de la intensidad de las crisis evoluciona lentamente y no llega a grados 5 y 6 durante los 20 días que dura el kindling, lo que la hizo elegible para la caracterización electroencefalográfica de este modelo. Se analizaron registros de electroencefalograma (EEG), tanto durante los días en que se inyectó PTZ (20 mg/kg) como en los días de no inyección (intermedios a éstas) y, a continuación, 25 días después de la última dosis de PTZ, cuantificando el número, la duración y el perfil espectral de las descargas epilépticas. Los niveles de óxido nítrico fueron modulados localmente en la corteza cerebral. El número de descargas epileptiformes aumentó durante el kindling, así como 25 días después de su finalización, lo que revela la inducción de un proceso epileptogénico auto-sostenible. Las descargas epilépticas se caracterizaron por un aumento en las frecuencias de la banda theta (4-8 Hz), las que se asocian con crisis de tipo ausencia. Sin embargo, durante kindling, cuando la intensidad de las crisis epilépticas aumenta, la potencia espectral de la banda theta disminuyó progresivamente; mientras que, el poder de frecuencias más altas (banda beta bajo) aumentó. El NO en la corteza cerebral inhibió el número y la amplitud de las descargas epilépticas. La caracterización electroencefalográfica de del kindling con PTZ proporciona un valioso modelo para detectar con precisión las consecuencias de las intervenciones terapéuticas en epileptogénesis, especialmente las dirigidas a detener este proceso. La producción local de óxido nítrico en la corteza cerebral podría ser útil para contrarrestar los efectos deletéreos y la propagación de las descargas epilépticas / Temporal lobe epilepsy (TLE) is developed in a progressive manner during epileptogenesis, after which spontaneous seizures occur. To study epileptogenesis, well-characterized animal models of this process are necessary to clarity underlying molecular mechanisms, among which nitric oxide (NO) has a controversial role throughout the literature. In this thesis, a pharmacological kindling model was used by means of administration of 10 subconvulsive doses of pentylenetetrazole (PTZ), every other day. The characterization of this epileptogenesis model was monitored by behavioral and electroencephalographic recordings. Subsequently, NO levels in the cerebral cortex were modulated. PTZ kindling was performed with three doses (20, 30 and 40 mg/Kg) to analyze behaviors during injection days. The maximum degree of seizure recorded each day shows that seizures intensity rises along the days of the protocol. In addition, at low PTZ doses (20 mg/kg), the seizure intensity increased slowly through the protocol, without reaching grades 5 or 6 during the 20 days of the kindling processmaking it a suitable dose for the electroencephalographic characterization of this model. Electroencephalogram recordings (EEG) were analyzed, both during injection and inter-injection days. In addition, EEG recordings were performed 25 days after the last PTZ dose. The number, duration and spectral profile of epileptic discharges. Nitric oxide levels were modulated locally in the cerebral cortex. The number of epileptiform discharges increased during the kindling protocol, and 25 days after its completion, revealing the induction of a self-sustaining epileptogenic process. Epileptic discharges were characterized by an increase in theta band frequency (4-8 Hz) associated with absence-like seizure. However, during the kindling protocol, when the intensity of seizures increases, the spectral power of the theta band decreases progressively, while the power of higher frequencies (low beta band) is increased. NO in cerebral cortex inhibited the number and amplitude of epileptic discharges. The electroencephalographic characterization of this PTZ kindling protocol provides a valuable model to detect precisely consequences of therapeutic interventions on epileptogenesis, especially those targeted towards stopping this process. Local production of nitric oxide in the cerebral cortex could be useful to counteract the deleterious effects and the propagation of epileptic discharges

Orientador: Antonio Condino Neto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-07T16:31:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 OliveiraJunior_EdgarBorgesde_M.pdf: 512340 bytes, checksum: d83efc345a2ad7f2aecfc60038e38380 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Investigamos os efeitos do BAY 41-2272 (5-cyclopropyl-2- [1-(2-fluoro-benzyl)-1H-pyrazolo[3,4-b]pyridin-3-yl]-pyrimidin-4-ylamine) sobre a atividade do sistema NADPH (nicotinamide adenine dinucleotide phosphate) oxidase e expressão do gene CYBB que codifica seu componente principal, a proteína gp91-phox , simultaneamente aos níveis intracelulares de GMPc (cyclic guanosine-3', 5'-monophosphate) e AMPc (cyclic adenosine-3', 5'-monophosphate) em células mielomonocíticas humanas THP-1. ... Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da dissertação digital / Abstract: We investigated the effects of the BAY 41-2272 (5-cyclopropyl-2- [1-(2-fluoro-benzyl)-1H-pyrazolo[3,4-b] pyridin-3-yl]-pyrimidin-4-ylamine) on the NADPH (nicotinamide adenine dinucleotide phosphate) oxidase system, gene expression of gp91-phox, cGMP (cyclic guanosine-3', 5'-monophosphate) levels, and cAMP (cyclic adenosine-3', 5'-monophosphate) levels, in the human myelomonocytic THP-1 cells. ... Note: The complete abstract is available with the full electronic digital dissertation / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Sergio de Albuquerque / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-31T21:40:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GoncalvesNeto_JanainaFernanda_M.pdf: 25773736 bytes, checksum: 5e545a937afbe8e43ce2242cce359004 (MD5) Previous issue date: 2002 / Resumo: Diante da problemática no tratamento da doença de Chagas, a busca por novas substâncias capazes de combater Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas, vem despertando o interesse de vários pesquisadores. Entre os inúmeros compostos testados, os derivados da ftalimida têm apresentado bons resultados no combate ao parasito, conforme a literatura. No presente trabalho, foi avaliada a atividade tripanocida de sete derivados da N-aminometilftalimida sobre duas cepas de T. cruzi, com características distintas, através de ensaios "in vitro" e "in vivo". Além disso, foi verificada a influencia destes compostos na produção de óxido nítrico (NO) pelos macrófagos. O ensaio "in vitro", foi realizado em duas etapas: uma utilizando as formas tripomastigotas e a outra, as formas epimastigotas. No ensaio utilizando as formas tripomastigotas, a substância N-(4-metoxifenil)aminometilftalimida (3) apresentou melhor atividade sobre a cepa Y e a substância N-( 4-nitrofenil)aminometilftalimida (4) sobre a cepa Bolívia. Em relação às formas epimastigotas, a substância N-(fenil)aminometilftalimida (1); N-(4 metoxifenil)aminometilftalimida (3); N-( 4-nitrofenil)aminometilftalimida (4) e N-( 4 - benzenosulfonilguanidil)aminometilftalimida (5) foram mais ativas sobre a cepa Y enquanto as substância N-( fenil)aminometilftalimida (1); N-(4 metoxifenil)aminometilftalimida (3); N-(4-nitrofenil)aminometilftalimida (4); N-(4- benzenosulfonilguanidil) aminometilftalimida (5); N-[4-benzenosulfonil-(2-tiazolil)amino]aminometilftalimida (6) e N-[ 4-benzenosulfonil-(2-pirimidil)amino]aminometilftalimida (7) sobre a cepa Bolívia. No ensaio "in vivo" observou-se a parasitemia, o parasitismo tecidual, e a morfometria dos núcleos celulares dos diferentes órgãos. A substância N-[ 4-benzenosulfonil-(2 pirimidil)amino ]aminometilftalimida (7) apresentou maior atividade sobre a cepa Y e as substâncias N-(fenil)aminometilftalimida (1); N-( 4-metilfenil)aminometilftalimida e N-( 4-metoxifenil)aminometilftalimida (3) sobre a cepa Bolívia. Sabendo da importância da produção do NO no controle da infecção determinada por T.cruzi, os derivados da N aminometilftalimida foram adicionados em cultura de macrófagos e após 24 horas, observou-se uma indução significativa na produção de NO superior àquela determinada por IFN-y e o LPS / Abstract: The search for new compounds capable to kill Trypanosoma cruzi, the etiologic agent of Chagas' disease, been an interesting subject for researches. According to the literature, phthalimide compounds have showed good results against this parasite. The present study was carried out to estimate tripanocidal activity of seven N aminometylphthalimide compounds in two T. cruzi strains, with distinct characteristics, by "in vitro" and "in vivo" assays. The influence of these compounds for nitric oxide (NO) production by macrophages was also analyzed. The "in vitro" assay, were performed in two parsites stages: trypomastigotes and epimastiogotes stages. This assay demonstrated better activity of the N-( 4 metoxyfenyl)aminometylphthalimide (3) against trypomastigote stages of "Y" strain, in contrast to the N-(4-nitrofenyl)aminometylphthalimide (4) which promoted a better activity against T. cruzi Bolívia strain. However, N-(fenyl)aminometylphthalimide (1); N-( 4 metoxyfenyl)aminometylphthalimide (3); N-(4-nitrofenyl)aminometylphthalimide (4) and N-(4-benzenosulfonylguanidyl)aminometylphthalimide (5) showed greater activities against epimastigotes of "Y" strain. In contrast, N-(fenyl)aminometylphthalimide (1); N (4-metoxyfenyl)aminometylphthalimide (3); N-( 4-nitrofenyl)aminometylphthalimide (4) and N-( 4-benzenosulfonyl guanidyl)aminometylphthalimide (5); N-[ 4-benzenosulfonyl-(2 tiazolyl)amino] amino metylphthalimide (6) and N-[ 4-benzenosulfonyl-(2 pirimidyl)amino] aminometyl phthalimide (7), showed greater activities against Bolivia strain. The "in vivo" assays used as criteria parasitaemia, tissue parasitism and nuc1eus morphometric analyses of different tissues. Overall the compound N-[ 4-benzenosulfonyl (2-pirimidyl) amino] aminometylphthalimide (7) showed better activity against the "Y" strain whereas N -( fenyl)aminometylphthalimide (1); N-(4 metilfenyl)aminometylphthalimide (2) and N-( 4-metoxyfenyl)aminometylphthalimide (3) revealed a better activity against the "Bolivia" strain. The importance of Nitric Oxide (NO) production in controlling the acute infection of T. cruzi is well known. The influence of different compounds were analized by adding them in cytokine stimulated macrophage cultures and incubated for 24 hours. N aminometylphthalimide compounds showed a significant induction of NO production when comparing with those stimulated by INFy and LPS / Mestrado / Mestre em Parasitologia

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-04-14T12:39:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Larissa Sayão.pdf: 1829679 bytes, checksum: 8122da24141ab8f22202e615f2243369 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-14T12:39:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Larissa Sayão.pdf: 1829679 bytes, checksum: 8122da24141ab8f22202e615f2243369 (MD5) Previous issue date: 2015-03-30 / CAPEs / A sibilância é um sintoma respiratório comum na prática pediátrica e sua recorrência durante a infância relaciona-se com o acometimento inflamatório das vias aéreas. Com objetivo de alcançar a quantificação da inflamação eosinofílica em crianças pequenas, a fração exalada de óxido nítrico (FENO) vem sendo utilizada mundialmente por se tratar de um método fácil e não invasivo. No entanto, ainda são escassas as informações sobre a acurácia diagnóstica desta medida na idade pré-escolar. Esta dissertação está estruturada sob a forma de três artigos originais. O primeiro trata-se de uma revisão sistemática realizada com objetivo de avaliar a acurácia da FENO no diagnóstico de asma infantil pelo padrão-ouro da espirometria. Os resultados mostram que o melhor ponto de corte para diagnóstico de asma em crianças de 5–18 anos é de ≥19 partes por bilhão (ppb), enquanto que para o diagnóstico de asma atópica nessa mesma faixa etária é de ≥22 ppb. Outros estudos são necessários, com amostras baseadas em cálculo amostral, para padronizar os pontos de corte ideais em diferentes subgrupos etários. O segundo artigo desta dissertação foi realizado com objetivo de avaliar a acurácia diagnóstica da FENO quanto aos tipos de sibilância. Para isso, 423 pais de pré-escolares (3-5 anos) provenientes de creches e escolas públicas responderam a um questionário de doenças respiratórias, e posteriormente, seus filhos foram avaliados quanto à medida da FENO. Observou-se que o valor médio da FENO diferiu entre os grupos de sibilantes e o ponto de corte de 6 ppb foi o que melhor apresentou acurácia para discriminar sibilantes de não sibilantes (RV+= 4,1; IC 95%= 3,07-5,72) enquanto que o ponto de corte de 10 ppb foi o melhor para discriminar sibilantes recorrentes de não recorrentes (RV+= 3; IC 95%= 1,96- 4,68). Para os dois pontos houve aumento da probabilidade pós-teste estimada pelas razões de verossimilhança. As informações advindas do questionário resultaram no terceiro artigo original, que teve como objetivo identificar os possíveis fatores de risco relacionados ao desenvolvimento da sibilância. Entre as variáveis investigadas aquelas que compuseram o modelo de regressão logística foram: valor de FENO ≥ 10 ppb (OR= 11,6; IC 95%= 5,1-26,6; p<0,0001), uso de oxigênio ao nascimento (OR= 2,8; IC 95%= 1,3-6,2; p=0,008), internação hospitalar por doença pulmonar até os dois anos (OR= 7,1; IC 95%= 4,0-12,5; p<0,0001), dermatite atópica (OR= 2,1; IC 95%= 1,2-3,9; p=0,010) e rinite alérgica (OR= 2,1; IC 95%= 1,3-3,5; p=0,002). A probabilidade estimada para desenvolver sibilância com todos os fatores presentes foi de 99,5%, enquanto que foram observados 15,7% de chance na ausência dos fatores mencionados. Dessa forma, o valor de FENO pode ser uma alternativa útil para o diagnóstico e rastreamento de crianças com risco para sibilância. / Wheezing is a common respiratory symptom in pediatric practice and its recurrence during childhood is related to the inflammatory airway impairment. In order to achieve the quantification of eosinophilic inflammation in young children, the fraction of exhaled nitric oxide (FeNO) has been used worldwide for it is an easy and non-invasive method. However, there is still little information on the diagnostic accuracy of this measure in the pre-school age. This dissertation is structured in the form of three original articles. The first is a systematic review to evaluate the accuracy of FeNO in the diagnosis of childhood asthma by the gold standard spirometry. The results show that the best cutoff value for the diagnosis of asthma in children 5-18 years is ≥19 parts per billion (ppb), while for the diagnosis of atopic asthma that is the same age ≥22 ppb. Further studies are needed, with samples based on sample size calculation to standardize the ideal cutoff points for different age subgroups. The second article of this work was carried out to evaluate the diagnostic accuracy of FeNO in the types of wheezing. For this, 423 parents of preschoolers (3-5 years) from day care centers and public schools answered a questionnaire of respiratory diseases, and later, their children were evaluated for measurement of FeNO. It was observed that the average of FeNO differ between the wheezing groups and the cutoff point of 6 ppb was the best prove accurate to discriminate wheezing and non-wheezing (LR+= 4.1; 95% CI = 3.07- 5.72) while the cut-off point of 10 ppb was the best to discriminate recurrent wheezing non-recurrent wheezing (LR+= 3; 95% CI = 1.96 4.68). For the two points there was an increase of the estimated post-test probability for likelihood ratios. The information of the questionnaire resulted in the third original article, which aimed to identify possible risk factors related to the development of wheezing. Among the variables investigated those who composed the logistic regression model were: value of FeNO ≥ 10 ppb (OR = 11.6, 95% CI = 5.1 to 26.6; p <0.0001), use of oxygen to the birth (OR = 2.8; 95% CI = 1.3 to 6.2; p = 0.008), hospitalization for pulmonary disease up to two years (OR = 7.1; 95% CI = 4.0 to 12 , 5, p <0.0001), atopic dermatitis (OR = 2.1; 95% CI = 1.2 to 3.9; p = 0.010) and allergic rhinitis (OR = 2.1; 95% CI = 1 , 3-3.5; p = 0.002). The estimated probability to develop wheezing with all factors present was 99.5%, while 15.7% were observed in the absence of chance factors mentioned. Thus, the FeNO value can be a useful alternative for the diagnosis and screening of children at risk for wheezing.

Orientador: Gilberto de Nucci / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-20T17:03:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Perez_AndreadeCastro_D.pdf: 2860354 bytes, checksum: f5252f16c3187a607381a6265290b0ee (MD5) Previous issue date: 1995 / Resumo: O óxido nítrico (NO) é uma molécula sintetizada à partir da L-arginina, catalizada pela enzima óxido-nítrico sintase (NOS), podendo ser inibida por análogos da L-arginina como L-NG-nitro arginina metil éster (L-NAME). O NO é responsável por vários efeitos biológicos tais como modulação da pressão arterial, atividade plaquetária, etc. Entretanto, seu papel no controle da resposta inflamatória é controverso. O objetivo desta tese foi verificar o envolvimento do NO nas respostas edematogênicas e espasmogênicas induzidas pela histamina e bradicinina. O extravasamento de proteínas plasmáticas em pele de cobaias foi medido pelo acúmulo de 1251 marcado com albumina C25IHSA) injetado intravenosamente. O inibidor de síntese de NO, L-NAME (0.1 _mollsítio) reduziu o extravasamento de proteínas plasmáticas induzido por bradicinina (0.5 nmollsítio) e histamina (4.5 nmollsítio) enquanto que seu enantiomero D-NAME não teve efeito. Esse efeito inibidor foi revertido pela L-arginina (10 _mollsítio) somente nas respostas da bradicinina. L-arginina sozinha potencializou a resposta da bradicinina, enquanto que reduziu a resposta da histamina. Em íleo de cobaia in vitra, L-arginina e D-arginina tiveram um efeito inibidor em contrações isométricas estimuladas pela histamina mas não bradicinina. L-lisina um outro aminoácido de carga semelhante a arginina não teve efeito sobre os diferentes agonistas tanto em permeabilidade como contração. O agonista a-adenoceptor, fenilefrina (6 nmollsítio) e o agonista j3-adenoceptor isoprenalina (10 nmollsítio) inibiram as respostas da bradicinina e da histamina de modo comparáveis. Nossos resultados sugerem que a produção local de NO está envolvida na permeabilidade vascular induzida por mediadores, sendo este efeito mais pronunciado em bradicinina, e que esses dois mediadores tem diferentes mecanismos de ação. Investigamos também o efeito dos aminoácidos L-arginina, D-arginina e L-lisina em músculo liso (traquéias isoladas de cobaias e brônquios de coelhos). Tanto L-arginina como D-arginina (100 mM) reduziram a potência contrátil e a resposta contrátil máxima da histamina (em traquéia e brônquio), o que não ocorreu com metacolina ou cloreto de potássio em traquéias isoladas e sem epitélio de cobaias. Por outro lado L-lisina não mostrou efeito. L-arginina e D-arginina produziram um relaxamento dose dependente em traquéias isoladas de cobaias pré-contraidas com histamina. Este efeito relaxante não foi alterado pela presença ou não do endotélio, ou ainda L-NAME (inibidor da óxido-nítrico sintase). Assim demonstramos que arginina antagoniza contração induzi da por histamina de um modo não competitivo, independente de óxido nítrico e também não relacionado com a sua carga. Em outros experimentos comparamos os efeitos de L-NAME em extravasamento de proteína plasmáticas e fluxo sanguíneo (medido pelo método de clearance do 133Xe) O efeito inibidor de L-NAME em permeabilidade persiste por até 8 horas, enquanto que em fluxo sanguíneo não se nota mais efeito após 4 horas. Fenilefrina (5 nmollsítio) produziu um efeito somente quando co-injetado com bradicinina. Quando comparados, L-NAME, L-NMMA e L-NOArg, produziram semelhante redução no fluxo sanguíneo, porém o efeito de L-NMMA não persistiu por 0.5 horas. L-arginina reverteu os efeitos inibidores de L-NAME, quando injetada com bradicinina somente após 4 horas e não 2 horas, sugerindo que o bloqueio já está fraco nesse tempo. Assim, concluímos que L-NAME está exercendo algum efeito independente de mudanças em fluxo sanguíneo. Numa outra série de experimentos usando os doadores de NO (SNAP, SNP e GTN), observamos que somente SNAP potencializava o extravasamento de proteína plasmática, estando este dado de acordo com o aumento de fluxo sanguíneo causado. Com relação ao fluxo sanguíneo, SNP teve efeito semelhante aumentando o fluxo sanguíneo. GTN não teve nenhum efeito, nem mesmo revertendo os efeitos de L-NAME ou fenilefrina. Esses compostos parecem portanto que têm mecanismos distintos de ação / Abstract: No synthesized from L-arginine, is responsible for various biological effects including oedema formation by plasma protein extravasation (PPE). PPE responses have been measured using local accumulation of intravenously injected 1251-human serum albumin and blood flow by means of a multiple 133 Xenon (Xe) technique in guinea pig skin. L-NAME reduced responses to bradykinin (BK) or histamine and that inhibitory effect was reversed by L-arginine on the response to BK but not on that to histamine. L-arginine alone enhanced the response to BK but inhibited that to histamine. It is therefore possible that NO may play a greater role in the extravasation response to BK than to that induced by histamine. The differential effects of L-NAME and isoprenaline on BK and histamine-induced PPE raise the possibility that BK and histamine may induce vascular permeability via different mechanisms in guinea-pig skin. We also investigated the effect of the amino acids including L-arginine, 0arginine and L-Iysine on airway smooth muscle responsiveness to spasmogen in vitro. Both L-arginine and D-arginine significantly reduced the contractile potency and maximal contractile response to histamine but not to methacholine or potassium chloride in guinea-pig epithelium denuded isolated trachea. In guinea-pig isolated trachea precontracted with histamine, both L-arginine and 0arginine produced a concentration-dependent relaxation. The relaxant response was not significantly altered by epithelium removal or by the presence of LNAME. Thus, very high concentration of arginine non-competitively antagonizes histamine induced contraction of isolated airway preparations that are independent of the generation of nitric oxide and are not dependent on charge, as L-Iysine had no effect. The nitric oxide (NO) synthase inhibitors L-NAME, L-NMMA and L-NO Arg inhibited bradykinin induced PPE when co-injected with the peptide. The inhibitory effect of L-NAME on PPE lasted for 8 hours, whereas its effects on blood flow lasted up to 4 hours, showing that L-NAME is acting by other means other than by only reducing blood flow. In a new series of experiments the nitrovasodilators GTN, SNP and SNAP were tested for their ability to potentiate bradykinin induced PPE. Only SNAP produced significant increases in the BK response. When tested for their ability to increase skin blood flow, SNP, SNAP and PGE2 produced similar increases in basal blood flowwhereas GTN produced smaller responses. The effects of GTN, PGE2 and SNAP on BK induced PPE correlate well with their ability to increase skin blood flow. In contrast, the effect of SNP on mediator induced PPE only becomes evident under conditions where local skin blood flow is reduced e.g. in the presence of L-NAME or phenylephrine. In conclusion (1) arginine appears to have an anti-histaminic effect (2) the effects of NO synthase inhibitors on blood flow does not correlate well with its effects on PPE and (3) the nitrovasodilators utilized have different mechanism of action / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Ciências

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:02:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8905_1.pdf: 270078 bytes, checksum: 21f9540bb19946c6417b71796adee491 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2002 / O presente estudo teve como objetivo verificar a atividade da sintase de óxido nítrico e correlacionar com possível déficit neurológico induzido pela isquemia cerebral focal em modelos experimentais em roedores. Foram utilizados dois modelos experimentais: o primeiro utilizando a ligadura da artéria carótida comum direita por seis horas em gerbil e o segundo utilizando a oclusão filamentar da artéria cerebral média de ratos, com tempos de isquemia de 15 minutos, 60 minutos e 24 horas. A produção do óxido nítrico foi investigada através da determinação da atividade da sintase de óxido nítrico (SON) e da concentração de nitrato em tecidos cerebrais. O tratamento com um inibidor não específico da SON (L-NAME) resultou em uma piora do déficit neurológico induzido pela isquemia cerebral focal por seis horas no gerbil. A atividade da SON e a concentração de nitrato no tecido isquêmico não foram diferentes em relação ao hemisfério controle. No rato submetido a 15 minutos de isquemia focal houve uma diminuição da atividade da SON (controle: 226,01±1,23 pmol/mg/15min; isquêmico: 160,06±8,03 pmol/mg/15min, p=0,0105). Efeito semelhante foiobservado em relação à concentração de nitrato (controle: 10,59±0,44 &#956;M; isquêmico: 4,37±0,57 &#956;M, p=0,0004). Em outros intervalos estudados 1 hora e 24 horas - não houve alteração significante da SON ou da concentração de nitratos. Concluindo, o presente estudo sugere que há redução na produção de ON nas áreas isquêmicas em fases precoces e que o ON endógeno tenha alguma função neuroprotetora nas condições de isquemia cerebral focal aguda

O óxido nítrico (NO) é o principal agente vasodilatador endógeno que regula o tônus e a homeostase vascular. Dentre os compostos doadores de NO, estão os complexos nitrosilos de rutênio. No presente estudo, o doador de NO estudado, RuBPY, não apresenta citotoxicidade para células do músculo liso vascular (MLV) ao contrário do NPS. O RuBPY apresenta eficácia semelhante ao NPS em relaxar o MLV de aorta de ratos, porém o NPS é mais potente. Ambos compostos liberam NO do tipo radicalar (NO) no meio intracelular, mas o NPS libera também íon nitroxil (NO-). O sequestrador da espécie NO (hidroxocobalamina) reduziu mais a resposta relaxante estimulada com RuBPY do que com o NPS. Nenhum dos dois compostos precisa ser reduzido quimicamente para liberar NO, uma vez que houve relaxamento quando utilizamos alta concentração de KCl como agente contrátil. Porém, este relaxamento foi inibido, o que mostra a importância dos canais para K+ no relaxamento induzido pelos doadores de NO. O bloqueador não seletivo de canais para K+ (TEA), inibiu somente o relaxamento ao RuBPY. A via NO-GCs-GK é ativada por ambos doadores de NO, para induzir relaxamento. A inibição da degradação do GMPc potencializou o relaxamento estimulado com RuBPY e NPS. O armazenamento de Ca+2 no retículo sarcoplasmático (RS) via ativação da SERCA é importante somente para o relaxamento induzido com RuBPY. O composto RuBPY inibiu a resposta contrátil estimulada com fenilefrina devido ao armazenamento de Ca+2 no RS e também por inibir o influxo capacitivo de Ca+2. A presença do endotélio vascular não alterou o relaxamento induzido pelo RuBPY, porém potencializou o relaxamento induzido pelo NPS. A análise da liberação de NO por amperometria demonstrou que o RuBPY libera NO somente em presença do tecido aórtico de ratos. Portanto, não houve liberação espontânea de NO, por fotólise pela luz visível ou por redução química. É necessária a presença de heme-proteínas como a guanilil-ciclase solúvel (GCs) inibida pelo ODQ, para haver a conversão do nitrito presente no RuBPY, a NO. Pela quantificação da fluorescência emitida pela sonda DAF-2DA, RuBPY liberou cerca de 3,5 vezes mais NO do que o NPS. Pela medida do potencial de membrana, demonstramos que o RuBPY induz hiperpolarização de membrana de células isoladas do MLV da aorta de rato. RuBPY tem efeito hipotensor dose-dependente, em ratos hipertensos renais, o que não ocorre em animais normotensos. A redução da pressão arterial em ratos hipertensos é maior do que nos normotensos. Em estudos iniciais de farmacocinética, verificamos que o composto RuBPY é absorvido por via oral e é distribuído entre alguns tecidos após ser administrado aos ratos, por gavagem. / Nitric oxide (NO) is the main endogenous vasodilator agent that regulates vascular tone. Among the compounds which are able of releasing NO, are the nitrosyl ruthenium complexes. The NO donor studied, RuBPY, does not present cytotoxicity in smooth muscle cells (SMC), in contrast to SNP. RuBPY has similar efficacy to SNP in inducing rat aorta relaxation, although SNP is more potent. Both compounds release intracellular radicalar NO (NO), and SNP also release ion nitroxyl (NO-). The NO scavenger (hydroxocobalamine) had greater effect on the relaxation induced by RuBPY than by SNP. Both compounds do not need to be chemically reduced to release NO, as demonstrated in aorta relaxation after pre-contraction with high concentrations of KCl. However, this relaxation was impaired, showing the importance of K+ channels to induce relaxation by NO released from these compounds. By using non-selective blocker for K+ channels (TEA), only the relaxation induced by RuBPY was inhibited. The NO-sGC-GK pathway is activated by NO donors to induce relaxation. Inhibition of cGMP degradation, potentiated the effect of RuBPY and SNP. Storage of Ca+2 in the sarcoplasmic reticulum (SR) via activation of SERCA is important only for the relaxation induced by RuBPY. The contractile response induced by phenylephrine was inhibited by RuBPY due to the storage of Ca+2 in RS and also by inhibiting the capacitive influx of Ca+2. The presence of endothelium had no effect on the relaxation induced by RuBPY, but it potentiated the relaxation induced by SNP. RuBPY released NO only in the presence of the rat aorta. The complex RuBPY did not spontaneously release NO, by photolysis by visible light, or by chemical reduction. RuBPY requires the presence of heme-protein such as guanylyl-cyclase, inhibited by ODQ, to convert nitrite to NO. The amount of NO released from RuBPY was about 3.5 times greater than that released from SNP. RuBPY induced membrane hyperpolarization of SMC. RuBPY has hypotensive effect in renal hypertensive rats in a dose-dependent way, which does not occur in normotensive rats. The decreased of blood pressure in hypertensive rats was greater than in normotensive rats. Initial studies of pharmacokinetics demonstrated that RuBPY is orally absorbed and it is also distributed in some tissues after being administered by gavage to rats.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-25. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:00Z : No. of bitstreams: 1 Publico-121a.pdf: 156559 bytes, checksum: 2c154557e891d5c90153851ba16d4ad9 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:01Z : No. of bitstreams: 2 Publico-121a.pdf: 156559 bytes, checksum: 2c154557e891d5c90153851ba16d4ad9 (MD5) Publico-121b.pdf: 377848 bytes, checksum: 1f16cca8d25f6c593fc89b9ae72d44c3 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:01Z : No. of bitstreams: 3 Publico-121a.pdf: 156559 bytes, checksum: 2c154557e891d5c90153851ba16d4ad9 (MD5) Publico-121b.pdf: 377848 bytes, checksum: 1f16cca8d25f6c593fc89b9ae72d44c3 (MD5) Publico-121c.pdf: 1158835 bytes, checksum: 2200b05ae8bd3e1d60fb93b403ba5f89 (MD5). 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A presença da acetilcolina (ACh) no NTS e sua participação na transmissão ou modulação central das funções neurovegetativas foi sugerida desde a década de 80 (Kobayashi et al., 1978; Simon et al., 1981; Criscione et al., 1983; Helke et al., 1983). Contudo, a maioria dos estudos da literatura foram realizados in vitro e não há evidências de estudos da transmissão colinérgica in vivo em animais não anestesiados. Estudos prévios de nosso laboratório mostraram que a microinjeção de ACh no NTS de ratos não anestesiados causa hipotensão e bradicardia dose-dependentes e estas respostas parecem ser mediadas ou moduladas em parte pela liberação de óxido nítrico derivado da isoforma neuronal da enzima óxido nítrico sintase (NOS). A queda de pressão arterial causada pela ACh não foi abolida após o bloqueio parassimpático com metilatropina, indicando que a ativação do sistema colinérgico no NTS causa redução significante do componente simpático. A fim de discriminar as respostas de pressão arterial média (PAM) e frequência cardíaca (FC) causadas pela estimulação dos receptores colinérgicos nicotínicos e muscarínicos no NTS, realizamos as curvas dose-resposta para os agonistas seletivos nicotina (NIC) e pilocarpina (PIL) microinjetados no NTS de ratos não anestesiados. Além disso, investigamos também os efeitos do bloqueio central da NOS neuronal (TRIM) sobre estas respostas. Ratos Wistar foram preparados de acordo com a técnina de implante crônico de cânulas guia em direção ao NTS e da metodologia para microinjeção de drogas em animais não anestesiados e registro de pressão arterial in vivo. A microinjeção unilateral do agonista colinérgico de receptor nicotínico (nicotina) no NTS de ratos não anestesiados causou significante hipotensão e bradicardia que se mostrou dosedependente. Com a microinjeção unilateral do agonista colinérgico de receptor muscarínico (pilocarpina) no NTS observamos significante hipotensão e bradicardia, onde as doses maiores que 1 nmol/100 nL causaram hipotensão seguida de aumento da pressão arterial e bradicardia. A microinjeção unilateral do inibidor da nNOS (TRIM 13,3 nmol/100 nL) no NTS reduziu significantemente a hipotensão e bradicardia causadas pela nicotina e pilocarpina no NTS. O bloqueio da nNOS também reduziu significantemente o aumento de pressão arterial média causado pela microinjeção de pilocarpina na dose de 5 nmol/100 nL. Os resultados são a primeira evidência funcional, em animais não anestesiados, da participação de ambos os subtipos de receptores colinérgicos (nicotínico e muscarínico) na resposta da ACh no NTS. As diferenças observadas com a estimulação seletiva dos receptores colinérgicos no NTS sugerem a participação de cada subtipo de receptor na modulação da transmissão de estímulos cardiovasculares distintos, e, a função do sistema colinérgico sofre influência, ainda por meios desconhecidos, do óxido nítrico de origem central. / The Nucleus of the Solitary Tract is the first sites of cardiovascular reflex afferent terminations in the central nervous system (CNS). Acetylcholine (ACh) is present within neurons and terminals in the NTS and its participation in modulation of neurovegetative function was suggested since the 80´s. However, most part of the studies in literature was performed in vitro and there were no evidences in nonanesthetized rats. Previous studies of our laboratory showed that ACh microinjection into the NTS of non-anesthetized rats elicits dose-dependent hypotension and bradicardia; and NO from nNOS may have a role in modulating these responses. Peripheral blockade of cholinergic muscarinic receptors (i.v. injection of methylatropine) did not alter hypotension induced by microinjection of ACh into the NTS of non-anesthetized rats, indicating that the activation of cholinergic system in the NTS elicits reduction of the sympathetic component. In order to discriminate cardiovascular responses elicited by cholinergic receptors stimulation in the NTS, we performed the dose-response curves for selective agonists nicotine (NIC) and pilocarpine (PIL) microinjected into the NTS of non-anesthetized rats. In addition, we investigated whether inhibition of the nNOS in the NTS affects the responses caused by cholinergic agonists. Male Wistar rats were prepared according to the methodology of guide cannulas implantation in the direction of the NTS for microinjection in freely-moving rats; and recording of blood pressure in nonanesthetized rats. Unilateral nicotine microinjection in the NTS of non-anesthetized rats caused dose-dependent hypotension and bradicardia. Microinjection of the muscarinic agonist (pilocarpine) in the NTS of non-anesthetized rats elicited significant hypotension and bradicardia, and with doses higher than 1nmol/ 100 nL it was observed hypotension followed by an increased in arterial pressure, and bradicardia. Blockade of neuronal nitric oxide syntase (nNOS) (TRIM 13.3 nmol/ 100 nL), in the NTS, significantly reduced responses elicited by nicotine and pilocarpine. Microinjection of TRIM also inhibited the increase in arterial pressure elicited by PIL 5 nmol/ 100 nL. These results are the first functional evidence in non-anesthetized rats of cholinergic receptors participation in ACh transmission s in the NTS. Differences observed with selective stimulation of cholinergic receptors in the NTS suggest the participation of each receptor subtype in modulation of distinct pathways of stimulus of cardiovascular integration to the NTS. Finally, the physiological effects of cholinergic transmission in the NTS are still unclear and NO modulation of this system remains to be elucidated. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2016-04-12T12:34:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 604.pdf: 1039378 bytes, checksum: 6161d09201edd05abe9731999add4b9b (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / Estudos sugerem que há um importante componente imunológico na resposta à quimioterapia na leishmaniose tegumentar americana. Particularmente relevante é o estudo de pacientes curados espontaneamente, uma vez que podem desenvolver resposta imune protetora. Assim, este estudo teve como objetivos determinar a produção das citocinas IFN-gama, TNF-alfa, IL-2 e IL-10 por ELISA de captura e de óxido nítrico pela reação de Griess em sobrenadante de cultura de células mononucleares do sangue periférico (PBMC) de 14 pacientes com LTA ativa e um ano após o término do tratamento com Glucantime, além de 11 pacientes com cura espontânea da LTA e de 9 indivíduos sadios (controle). As células foram incubadas por 24h, 48h, 72h e 6dias na presença dos mitógenos concanavalina A (2,5?g/ml), fitohemaglutinina (5,0?g/ml) e dos antígenos solúvel (AgSol, 1,25?g/ml) e insolúvel (AgIns, 2,5?g/ml) de L. (V.) braziliensis. Os resultados, expressos em pg/ml para o ELISA e em ?M para a reação de Griess, foram submetidos aos testes estatísticos (Wilcoxon e Mann-Whitney, p 0,05). A produção de citocinas e de NO frente aos mitógenos apresentou diferenças estatísticas entre os grupos. IFN-gama foi significativamente produzida em resposta aos antígenos pelos grupos de pacientes em relação ao controle, com o AgIns estimulando maior produção em relação ao AgSol nos três grupos. Tanto antes como após a quimioterapia, os pacientes exibiram TNF-alfa sob estímulo de ambos os antígenos em concentrações significativas em relação ao grupo controle. Em resposta ao AgIns os pacientes tratados produziram níveis significativos de TNF-alfa em comparação aos curados espontaneamente. Além disso, o AgIns estimulou significativamente a produção de TNF-alfa em comparação com o AgSol nos pacientes antes e após o tratamento. Houve diferença significativa na produção de IL-2 em resposta ao AgIns pelos pacientes antes da quimioterapia em relação aos controles. Resultado semelhante nesses pacientes foi visto com IL-10 em resposta ao AgSol. Além disso, os mesmos pacientesproduziram IL-10 em concentrações significativas em relação ao momento pós-tratamento. Níveis significativos de NO foram observados em resposta ao AgSol nos pacientes de cura espontânea em relação aos demais grupos. Sob estímulo do AgIns este grupo mostrou níveis de NO significativos em relação aos pacientes tratados e grupo controle. Resultado estatístico semelhante foi encontrado ao comparar os pacientes antes e após tratamento, bem como os de lesão ativa com os indivíduos sadios. Os resultados indicam uma resposta imune específica de PBMC dos pacientes em resposta aos antígenos. Sugere-se que o AgIns estimule uma resposta predominantemente inflamatória com produção de IFN-gama em pacientes com LTA e de TNF-alfa após tratamento. Por outro lado, o AgSol parece promover uma resposta reguladora com a participação de IL-10 e uma possível modulação autócrina na produção de NO em pacientes curados espontaneamente

O óxido nítrico (NO) é o principal agente vasodilatador endógeno que regula o tônus e a homeostase vascular. Dentre os compostos doadores de NO, estão os complexos nitrosilos de rutênio. No presente estudo, o doador de NO estudado, RuBPY, não apresenta citotoxicidade para células do músculo liso vascular (MLV) ao contrário do NPS. O RuBPY apresenta eficácia semelhante ao NPS em relaxar o MLV de aorta de ratos, porém o NPS é mais potente. Ambos compostos liberam NO do tipo radicalar (NO) no meio intracelular, mas o NPS libera também íon nitroxil (NO-). O sequestrador da espécie NO (hidroxocobalamina) reduziu mais a resposta relaxante estimulada com RuBPY do que com o NPS. Nenhum dos dois compostos precisa ser reduzido quimicamente para liberar NO, uma vez que houve relaxamento quando utilizamos alta concentração de KCl como agente contrátil. Porém, este relaxamento foi inibido, o que mostra a importância dos canais para K+ no relaxamento induzido pelos doadores de NO. O bloqueador não seletivo de canais para K+ (TEA), inibiu somente o relaxamento ao RuBPY. A via NO-GCs-GK é ativada por ambos doadores de NO, para induzir relaxamento. A inibição da degradação do GMPc potencializou o relaxamento estimulado com RuBPY e NPS. O armazenamento de Ca+2 no retículo sarcoplasmático (RS) via ativação da SERCA é importante somente para o relaxamento induzido com RuBPY. O composto RuBPY inibiu a resposta contrátil estimulada com fenilefrina devido ao armazenamento de Ca+2 no RS e também por inibir o influxo capacitivo de Ca+2. A presença do endotélio vascular não alterou o relaxamento induzido pelo RuBPY, porém potencializou o relaxamento induzido pelo NPS. A análise da liberação de NO por amperometria demonstrou que o RuBPY libera NO somente em presença do tecido aórtico de ratos. Portanto, não houve liberação espontânea de NO, por fotólise pela luz visível ou por redução química. É necessária a presença de heme-proteínas como a guanilil-ciclase solúvel (GCs) inibida pelo ODQ, para haver a conversão do nitrito presente no RuBPY, a NO. Pela quantificação da fluorescência emitida pela sonda DAF-2DA, RuBPY liberou cerca de 3,5 vezes mais NO do que o NPS. Pela medida do potencial de membrana, demonstramos que o RuBPY induz hiperpolarização de membrana de células isoladas do MLV da aorta de rato. RuBPY tem efeito hipotensor dose-dependente, em ratos hipertensos renais, o que não ocorre em animais normotensos. A redução da pressão arterial em ratos hipertensos é maior do que nos normotensos. Em estudos iniciais de farmacocinética, verificamos que o composto RuBPY é absorvido por via oral e é distribuído entre alguns tecidos após ser administrado aos ratos, por gavagem. / Nitric oxide (NO) is the main endogenous vasodilator agent that regulates vascular tone. Among the compounds which are able of releasing NO, are the nitrosyl ruthenium complexes. The NO donor studied, RuBPY, does not present cytotoxicity in smooth muscle cells (SMC), in contrast to SNP. RuBPY has similar efficacy to SNP in inducing rat aorta relaxation, although SNP is more potent. Both compounds release intracellular radicalar NO (NO), and SNP also release ion nitroxyl (NO-). The NO scavenger (hydroxocobalamine) had greater effect on the relaxation induced by RuBPY than by SNP. Both compounds do not need to be chemically reduced to release NO, as demonstrated in aorta relaxation after pre-contraction with high concentrations of KCl. However, this relaxation was impaired, showing the importance of K+ channels to induce relaxation by NO released from these compounds. By using non-selective blocker for K+ channels (TEA), only the relaxation induced by RuBPY was inhibited. The NO-sGC-GK pathway is activated by NO donors to induce relaxation. Inhibition of cGMP degradation, potentiated the effect of RuBPY and SNP. Storage of Ca+2 in the sarcoplasmic reticulum (SR) via activation of SERCA is important only for the relaxation induced by RuBPY. The contractile response induced by phenylephrine was inhibited by RuBPY due to the storage of Ca+2 in RS and also by inhibiting the capacitive influx of Ca+2. The presence of endothelium had no effect on the relaxation induced by RuBPY, but it potentiated the relaxation induced by SNP. RuBPY released NO only in the presence of the rat aorta. The complex RuBPY did not spontaneously release NO, by photolysis by visible light, or by chemical reduction. RuBPY requires the presence of heme-protein such as guanylyl-cyclase, inhibited by ODQ, to convert nitrite to NO. The amount of NO released from RuBPY was about 3.5 times greater than that released from SNP. RuBPY induced membrane hyperpolarization of SMC. RuBPY has hypotensive effect in renal hypertensive rats in a dose-dependent way, which does not occur in normotensive rats. The decreased of blood pressure in hypertensive rats was greater than in normotensive rats. Initial studies of pharmacokinetics demonstrated that RuBPY is orally absorbed and it is also distributed in some tissues after being administered by gavage to rats.