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Avaliação imunoquimiluminescente em lesões tumorais de mamaPatu, Vasco José Ramos Malta 31 January 2012 (has links)
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Previous issue date: 2012 / Embora o estudo imunoistoquímico seja um método bastante utilizado na rotina do
diagnóstico anatomopatológico, este teste ainda apresenta importantes limitações
principalmente quanto a incapacidade de distinção entre alguns tipos de lesões tumorais.
Dessa maneira, outras ferramentas vêm sendo desenvolvidas a fim de aumentar a
sensibilidade e especificidade da identificação antígeno-anticorpo. Dentre estas, os
ensaios quimiluminescentes vem sendo cada vez mais utilizados em estudos para o
mapeamento de amostras biológicas para fins diagnósticos. Dentre os inúmeros benefícios
da utilização dos métodos quimiluminescentes, podemos citar o limite de detecção ultrasensível,
testes rápidos e um amplo campo de aplicações. O presente estudo buscou
elaborar um protocolo para detecção da proteína galectina-3 em tecidos tumorais da
mama a partir de anticorpo conjugado ao éster de acridina realizando ensaios
imunoquimiluminescentes e compará-los aos resultados da imunohistoquímica
convencional. O anticorpo monoclonal anti-galectina-3 foi conjugado ao éster de acridina
e esse conjugado foi submetido à ensaios imunoquimiluminescentes em tecidos de mama
além da imunohistoquímica convencional. Nossos resultados demonstram a eficiência na
conjugação da anti-galectina-3 ao éster de acridina, um shelf-life do conjugado
anticorpo/éster de acridina (AC-EA) com aproveitamento de 96,51% após 12 meses e a
aplicação desse conjugado em ensaios imunoquimiluminescentes nos tecidos mamários
com carcinoma ductal infiltrante (39.8 x 104 ± 29344) e com fibroadenoma (88.88 x 104
± 17880) demonstraram padrões diferenciais entre a sua contraparte normal (58.87 x 104
± 17880). Concluiu-se então, que o ensaio imunoquimiluminescente proposto pode ser
utilizado como método diagnóstico alternativo na identificação de antígenos
principalmente em amostras teciduais pequenas.
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Avaliação imunoquimiluminescente em lesões tumoriais de mamaPATU, Vasco José Ramos Malta 31 January 2012 (has links)
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Previous issue date: 2012 / Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco / Embora o estudo imunoistoquímico seja um método bastante utilizado na rotina do
diagnóstico anatomopatológico, este teste ainda apresenta importantes limitações
principalmente quanto a incapacidade de distinção entre alguns tipos de lesões tumorais.
Dessa maneira, outras ferramentas vêm sendo desenvolvidas a fim de aumentar a
sensibilidade e especificidade da identificação antígeno-anticorpo. Dentre estas, os
ensaios quimiluminescentes vem sendo cada vez mais utilizados em estudos para o
mapeamento de amostras biológicas para fins diagnósticos. Dentre os inúmeros benefícios
da utilização dos métodos quimiluminescentes, podemos citar o limite de detecção ultrasensível,
testes rápidos e um amplo campo de aplicações. O presente estudo buscou
elaborar um protocolo para detecção da proteína galectina-3 em tecidos tumorais da
mama a partir de anticorpo conjugado ao éster de acridina realizando ensaios
imunoquimiluminescentes e compará-los aos resultados da imunohistoquímica
convencional. O anticorpo monoclonal anti-galectina-3 foi conjugado ao éster de acridina
e esse conjugado foi submetido à ensaios imunoquimiluminescentes em tecidos de mama
além da imunohistoquímica convencional. Nossos resultados demonstram a eficiência na
conjugação da anti-galectina-3 ao éster de acridina, um shelf-life do conjugado
anticorpo/éster de acridina (AC-EA) com aproveitamento de 96,51% após 12 meses e a
aplicação desse conjugado em ensaios imunoquimiluminescentes nos tecidos mamários
com carcinoma ductal infiltrante (39.8 x 104 ± 29344) e com fibroadenoma (88.88 x 104
± 17880) demonstraram padrões diferenciais entre a sua contraparte normal (58.87 x 104
± 17880). Concluiu-se então, que o ensaio imunoquimiluminescente proposto pode ser
utilizado como método diagnóstico alternativo na identificação de antígenos
principalmente em amostras teciduais pequenas
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Efeito do bay 41-2272, na pressão arterial de ratos sob tratamento cronico com inibidor da sintese de oxido nitricoZanfolin, Marcos 30 August 2005 (has links)
Orientador: Gilberto de Nucci / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-05T05:45:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1
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Previous issue date: 2005 / Resumo: Recentemente, o composto BAY 41-2272, um derivado da pirazolopiridina, 5-ciclopropil-2-[ 1-(2-fluor-benzil)-IH-pirazol[3, 4-b]piridina-3-il]-pirimidina-4-ilamina, (Bayer AGGermany), foi descrito como ativador específico de GCs de ação NO-independente (STRAUB et. al., 2001; STASCH et. aI., 2001). Experimentos in vitro demonstraram uma potente ativação da GCs pelo BAY 41-2272 nas concentrações de 0.1 nM a 100 J.IM, sendo esta estimulação potencializada na presença de doador de NO (DEA)/NO 1 J.LM (STACH et. al., 2001). Em estudos utilizando enzimas desprovidas de grupamento heme, o BAY 41-2272 não foi capaz de ativá-Ias demonstrando que seu mecanismo, apesar de ser NO-independente, é heme-dependente (STACH e1.al., 2001). Diante do exposto, observa-se que a inibição da síntese de óxido nítrico é responsável, em grande parte, pelo surgimento de processos patológicos, principalmente para o sistema cardiocirculatório. Neste sentido, o presente estudo foi realizado para investigar, principalmente, o efeito de um recente e potente estimulador da GCs (BAY 41-2272, Bayer AG, Germany) - independente de NO na hipertensão e miocardiopatia em ratos, avaliando desta forma a importância dessa via de estimulação na presença da patologia. Foram utilizados no experimento ratos WistarlUni S.P.F., pesando entre 250 a 350g fornecidos do Centro Multidisciplinar para investigação Biológica da Universidade Estadual de Campinas (CEMIB - Unicamp). Os animais foram mantidos em gaiolas individuais, dentro de estantes ventiladas (ALESCO), sob condições controladas de luminosidade (12/12 horas) e temperatura (22°C). A técnica iniciou-se por intermédio da implantação de uma unidade transdutor/transmissor na aorta descendente, fixado na parede abdominal interna do animal. As gaiolas com os animais foram colocadas em cima de receivers individuais, ligados a um computador no qual registrava a medição da pressão arterial e a freqüência cardíaca dos animais, por um período de 90 segundos, duas vezes por semana. A aquisição desses dados foi realizada de modo contínuo por meio do sistema de telemetria (Data Science Inc., S1.Paul, MN, USA). Os animais foram divididos em quatro grupos experimentais, pesados semanalmente e tratados por oito semanas consecutivas. O grupo Controle (n= 10) recebeu (Iml de DMSO, Dimetil Sulfóxido) por gavagem esofágica; o grupo L-NAME (n=20) recebeu L-NAME (n-nitro-L-arginina-metil-éster), recebeu (20mg/rato/dia); o grupo L-NAME + BAY (n=15)recebeu L-NAME(20mg/rato/dia)+ BAY(lOmg/kg/dia)e o GrupoBAY 41-2272 (n=15)recebeu BAY41-2272(10mg/kg/dia). o L-NAME foi dissolvido em água autoclavada e fornecido normalmente para os animais, e o BAY 41-2272 foi administrado através de gavagem oral diária dissolvido em DMSO 80%. Os resultados demonstraram que o BAY 41-2272 diminui significativamente a hipertensão arterial induzida pelo tratamento crônico com L-NAME, diminui o peso cardíaco, diminui o peso do ventrículo esquerdo e reduz a área de lesão dos cardiomiócitos, e que somente os animais do grupo BAY 41-2272 apresentaram um aumento na freqüência cardíaca que pode ser caracterizado por um mecanismo compensatório devido à queda da pressão arterial nos animais / Abstract: Recently, the compound BAY 41-2272, a pyirazolopyridine derivative, was described as an specific GCs activator by a mechanism that is independent of NO (Straub et al. ,2001; Stasch et al., 2001). In vitro experiments demonstrated that BAY 41-2272 stimulates potently sGC at concentrations of 0.1 nM to 100 Nrn, this effeet is potentiated in the presence of NO donors licke 2-(N, N-diethylamino )-diazendate-2-oxide (DEA)/NO (Staeh et. al., 2001). In studies using enzymes were the harm group was removed, BAY 41-2272 did not activate the harm-free enzyme demonstrating that BAY 41-2272 aetives sGC by an NO-independent, but heme-dependent mechanism (Stach et al., 2001). It is observed that the inhibition of the synthesis of nitric oxide is responsible, largely, for the appearance of pathological processes, mainly in the cardiac system. In this sense, this research seeks mainly to investigate the effects of BAY 41-2272 (BAY 41-2272, Bayer AG-Germany, a potent NO-independent stimulator of sGC) in rats, in a physiologie point of view and in a process physiopathological process (hypertension), evaluating the importance of this stimulation way in the presence of the pathology. For this purpose, WistarlUni S.P.F.(250 to 350g) obtained from the Center of Bioterism of the State University of Campinas (CEMIB - UNlCAMP), were housed in individual cages and kept in ventilated shelves (ALESCO) under controlled conditions of light (l2h light dark eycle) and temperature (22°C). The mean arterial blood pressures (MABP) were collected during 90 seconds two times a week for eight weeks. Rats were equipped with implantable radiotelemetry, and a data acquisition system (Data Science Inc., St. Paul, MN, USA), comprising a chronically implantable transducer/transmitter unit fluid-filled catheter. The transmitter was implanted into the peritoneal cavity and the descending aorta, affixed to the inner peritoneal wall. The animals were divided in four experimental groups as follow: 1) Control receiving 1 ml of DMSO 80% per day; 2) L-NAME, receiving L-NAME, alone (20mg/rat per day), 3) BAY 41-2272, reeeiving alone (lOmglkg per day); 4) L-NAME + BAY 41-2272, receiving concomitantly L-NAME (20mg/rat per day) and BAY 41-2272 (10mglkg per day). L-NAME was dissolved in the drinking autoclavated water daily drunk by the rats, BAY 41-2272 was dissolved in 80% of DMSO and administered by gavages. The experiments were performed for up to 8 weeks. The results obtained showed that BAY 41-2272 reduces significantly the arterial hypertension induced by chronic treatment with L-NAME, as well the weight ofthe heart and of the left ventricle and the cardiomyocite injured area. Only animals had receiving BAY 41-2272 showed an increase in the heart rate that can be characterized by a compensatory mechanism in function of reduction of the arterial pressure in these animals / Mestrado / Mestre em Farmacologia
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Estudo teórico e experimental da obstrução de tubos capilares por adsorção de óleo ésterMarcinichen, Jackson Braz January 2006 (has links)
Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Engenharia Mecânica. / Made available in DSpace on 2012-10-22T09:30:29Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Neste trabalho o fenômeno da obstrução de tubos capilares em sistemas de refrigeração de pequena e média capacidade e que empregam HFC134a como refrigerante e óleo éster como lubrificante foi estudado.
Para tanto, construiu-se uma bancada experimental com capacidade de controlar e medir todas as variáveis envolvidas no processo. Um projeto fatorial de experimentos foi executado avaliando o efeito das seguintes variáveis e nas seguintes faixas, sobre a redução do fluxo de massa: pressão (11bar e 14bar), grau de subresfriamento (7,5ºC e 12,5ºC), diâmetro (0,57mm e 0,79mm) e comprimento do tubo capilar (3m e 4m), concentração de óleo (0,5% e 1,0%) e tipo de ácido presente na composição química dos óleos ésteres (foram utilizados os óleos RL7H e 8E, respectivamente com ácido linear e ramificado). Os testes foram realizados ao longo de um período fixo de dosagem de óleo de 10dias.
Os experimentos mostraram que o tipo de ácido é a variável com maior efeito sobre a obstrução, em particular, que o óleo formado com ácido linear obstrui mais do que aquele formado com ácido ramificado. Em média, a redução percentual do fluxo de massa foi de 27% nos testes com óleo RL7H contra 15% naqueles com óleo 8E.
Medições da vazão de nitrogênio através dos tubos capilares foram também realizadas antes e após os experimentos. Os resultados indicaram que essa técnica fornece vazões sempre inferiores às observadas com HFC134a.
Desenvolveu-se também um modelo matemático para simular o escoamento de HFC134a puro e de misturas HFC134a/óleo éster, com e sem efeitos de adsorção de óleo. Uma analogia com a deposição de partículas em superfícies sólidas foi utilizada para simular a adsorção do óleo éster, o que permitiu concluir que o fenômeno é governado principalmente pela difusão molecular do óleo em refrigerante e pelo arraste na parede do tubo capilar.
As previsões do modelo para o escoamento de HFC134a puro reproduziram de forma razoável os resultados experimentais para o fluxo de massa, dentro de uma banda de erro de ±10%. Desprezando-se aspectos de adsorção concluiu-se que o efeito do óleo sobre o escoamento é desprezível, provocando alterações no fluxo de massa de ±0,2%.
O modelo completo foi comparado com resultados experimentais, quando verificou-se que dos 16 pontos experimentais analisados, 10 (62%) se encontraram dentro de uma banda de erro de ±20%, plenamente aceitável para o fenômeno físico em questão.
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Participação da sinalização purinérgica na hipertensão arterial induzida por L-NAMEBasso, Cristina Ribas Fürstenau January 2010 (has links)
A hipertensão arterial é responsável por mais de 7 milhões de mortes prematuras em todo o mundo. Esta patologia é influenciada por diferentes sistemas pressores e depressores e a sua elevação resulta da perda do equílibrio entre estes fatores. A sinalização purinérgica tem sido apontada como um importante regulador da (pato)fisiologia cardiovascular. Na vasculatura, o ATP, o ADP e a adenosina podem influenciar as respostas vasomotoras, a ativação plaquetária e a função cardíaca, entre outros. No rim, estão associados à modulação da reatividade vascular e ao processo de retroalimentação tubuloglomerular. Os nucleotídeos exercem seus efeitos através dos receptores purinérgicos P2, subdivididos em P2X e P2Y, e a adenosina atua via ativação de quatro subtipos de receptores P1. As ectonucleotidases, atuando sob a forma de uma cascata enzimática, regulam a degradação dos nucleotídeos e a formação dos nucleosídeos. No presente trabalho, avaliamos a influência da hipertensão arterial induzida pela inibição crônica da produção de óxido nítrico sobre o sistema purinérgico vascular e renal de ratos. No primeiro capítulo, demonstramos que as hidrólises de ATP, ADP e AMP foram diminuídas em soro e plaquetas de ratos tratados com L-NAME (30 mg/Kg/dia por 14 dias). Entretanto, a medida dos níveis de purinas indicou uma diminuição nas concentrações de ADP, AMP e hipoxantina circulantes. O segundo capítulo mostrou que as hidrólises de ATP, ADP, AMP e 5’TMP foram aumentadas em membrana renal de ratos tratados com L-NAME, e estiveram acompanhadas por uma elevação significativa na expressão gênica das enzimas NTPDase2, NTPDase3 e NPP3. Os dados preliminares do capítulo III mostram que a hidrólise dos nucleotídeos em soro e sinaptossoma cardíaco de ratos fêmeas permaneceu inalterada nos animais tratados com LNAME (30 ou 50 mg/Kg/dia por 14 dias), sinalizando um possível dimorfismo sexual na resposta à hipertensão no que se refere à sinalização purinérgica. Os dados descritos em anexo no capítulo IV, os quais foram obtidos durante um estágio no exterior, descrevem a participação diferencial da NTPDase1 no controle do vasorelaxamento dependente dos receptores P2Y1 e P2Y2 em aortas de camundongos. O receptor P2Y1 foi facilmente desensibilizado em camundongos deficientes para a enzima, enquanto que o receptor P2Y2 mostrou-se menos suscetível à desensibilização. Finalmente, descrevemos a padronização de uma metodologia para a avaliação da participação dos purinoceptores endoteliais na vasodilatação dependente do conteúdo de plaquetas ativadas. Em conjunto, os dados desta Tese apontam que alguns parâmetros da sinalização purinérgica são alterados pelo modelo de hipertensão arterial induzida por L-NAME. Portanto, concluímos que esta sinalização pode representar mais um fator associado a ser considerado em uma terapia anti-hipertensiva e estudos adicionais são necessários para ratificar a utilização das terapias purinérgicas no contexto da hipertensão arterial. / Hypertension is responsible for more than 7 million deaths around the world. This pathology is influenced by different pressor and depressor systems, and its elevation results from the loss of equilibrium between these factors. The purinergic signaling has been implicated as an important regulator in the cardiovascular (patho)physiology. In the vasculature, ATP, ADP and adenosine may influence the vasomotor responses, platelet activation, cardiac function, among others. In the kidney, they are associated with the modulation of vascular reactivity and the tubuloglomerular feedback process. The nucleotides exert their effects through purinergic P2 receptors, subdivided into P2X and P2Y, and adenosine acts via activation of four subtypes of P1 receptors. The ectonucleotidases, acting as an enzyme cascade, regulate the degradation of nucleotides and the formation of nucleosides. In this study, we evaluated the influence of hypertension induced by chronic inhibition of nitric oxide synthesis on the vascular and renal purinergic system of rats. In the first chapter, we demonstrated that the hydrolysis of ATP, ADP and AMP were decreased in serum and platelets of rats treated with L-NAME (30 mg /Kg/day for 14 days). However, the measurement of purine levels indicated a decrease of circulating ADP, AMP and hypoxanthine. The second chapter has shown that the hydrolysis of ATP, ADP, AMP and 5'TMP were increased in renal membrane of rats treated with L-NAME, which were accompanied by a significant increase in gene expression of the enzymes NTPDase2, NTPDase3 and NPP3. Preliminary data of Chapter III show that the hydrolysis of nucleotides in serum and heart synaptosomes female rats remained unchanged in animals treated with L-NAME (30 or 50 mg / kg / day for 14 days), indicating a possible sexual dimorphism in regard to purinergic signaling in a hypertensive context. The data described in Annex of Chapter IV were obtained during a pre-doctoral training period abroad and describe the differential involvement of NTPDase1 in the control of vasorelaxation dependent of P2Y1 and P2Y2 receptors in mice aortas. The P2Y1 receptor was easily desensitized in mice deficient for the enzyme, whereas the P2Y2 was less susceptible to desensitization. Finally, we describe the standardization of a methodology for assessing the involvement of endothelial purinoceptors in the vasodilation dependent of activated platelets content. Together, the data from this thesis point out that some parameters of purinergic signaling are altered by the model of hypertension induced by L-NAME. Therefore, we conclude that purinergic signaling may represent another associated factor to be considered in an antihypertensive therapy and further studies are needed to confirm the use of purinergic therapies in the context of arterial hypertension.
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Participação da sinalização purinérgica na hipertensão arterial induzida por L-NAMEBasso, Cristina Ribas Fürstenau January 2010 (has links)
A hipertensão arterial é responsável por mais de 7 milhões de mortes prematuras em todo o mundo. Esta patologia é influenciada por diferentes sistemas pressores e depressores e a sua elevação resulta da perda do equílibrio entre estes fatores. A sinalização purinérgica tem sido apontada como um importante regulador da (pato)fisiologia cardiovascular. Na vasculatura, o ATP, o ADP e a adenosina podem influenciar as respostas vasomotoras, a ativação plaquetária e a função cardíaca, entre outros. No rim, estão associados à modulação da reatividade vascular e ao processo de retroalimentação tubuloglomerular. Os nucleotídeos exercem seus efeitos através dos receptores purinérgicos P2, subdivididos em P2X e P2Y, e a adenosina atua via ativação de quatro subtipos de receptores P1. As ectonucleotidases, atuando sob a forma de uma cascata enzimática, regulam a degradação dos nucleotídeos e a formação dos nucleosídeos. No presente trabalho, avaliamos a influência da hipertensão arterial induzida pela inibição crônica da produção de óxido nítrico sobre o sistema purinérgico vascular e renal de ratos. No primeiro capítulo, demonstramos que as hidrólises de ATP, ADP e AMP foram diminuídas em soro e plaquetas de ratos tratados com L-NAME (30 mg/Kg/dia por 14 dias). Entretanto, a medida dos níveis de purinas indicou uma diminuição nas concentrações de ADP, AMP e hipoxantina circulantes. O segundo capítulo mostrou que as hidrólises de ATP, ADP, AMP e 5’TMP foram aumentadas em membrana renal de ratos tratados com L-NAME, e estiveram acompanhadas por uma elevação significativa na expressão gênica das enzimas NTPDase2, NTPDase3 e NPP3. Os dados preliminares do capítulo III mostram que a hidrólise dos nucleotídeos em soro e sinaptossoma cardíaco de ratos fêmeas permaneceu inalterada nos animais tratados com LNAME (30 ou 50 mg/Kg/dia por 14 dias), sinalizando um possível dimorfismo sexual na resposta à hipertensão no que se refere à sinalização purinérgica. Os dados descritos em anexo no capítulo IV, os quais foram obtidos durante um estágio no exterior, descrevem a participação diferencial da NTPDase1 no controle do vasorelaxamento dependente dos receptores P2Y1 e P2Y2 em aortas de camundongos. O receptor P2Y1 foi facilmente desensibilizado em camundongos deficientes para a enzima, enquanto que o receptor P2Y2 mostrou-se menos suscetível à desensibilização. Finalmente, descrevemos a padronização de uma metodologia para a avaliação da participação dos purinoceptores endoteliais na vasodilatação dependente do conteúdo de plaquetas ativadas. Em conjunto, os dados desta Tese apontam que alguns parâmetros da sinalização purinérgica são alterados pelo modelo de hipertensão arterial induzida por L-NAME. Portanto, concluímos que esta sinalização pode representar mais um fator associado a ser considerado em uma terapia anti-hipertensiva e estudos adicionais são necessários para ratificar a utilização das terapias purinérgicas no contexto da hipertensão arterial. / Hypertension is responsible for more than 7 million deaths around the world. This pathology is influenced by different pressor and depressor systems, and its elevation results from the loss of equilibrium between these factors. The purinergic signaling has been implicated as an important regulator in the cardiovascular (patho)physiology. In the vasculature, ATP, ADP and adenosine may influence the vasomotor responses, platelet activation, cardiac function, among others. In the kidney, they are associated with the modulation of vascular reactivity and the tubuloglomerular feedback process. The nucleotides exert their effects through purinergic P2 receptors, subdivided into P2X and P2Y, and adenosine acts via activation of four subtypes of P1 receptors. The ectonucleotidases, acting as an enzyme cascade, regulate the degradation of nucleotides and the formation of nucleosides. In this study, we evaluated the influence of hypertension induced by chronic inhibition of nitric oxide synthesis on the vascular and renal purinergic system of rats. In the first chapter, we demonstrated that the hydrolysis of ATP, ADP and AMP were decreased in serum and platelets of rats treated with L-NAME (30 mg /Kg/day for 14 days). However, the measurement of purine levels indicated a decrease of circulating ADP, AMP and hypoxanthine. The second chapter has shown that the hydrolysis of ATP, ADP, AMP and 5'TMP were increased in renal membrane of rats treated with L-NAME, which were accompanied by a significant increase in gene expression of the enzymes NTPDase2, NTPDase3 and NPP3. Preliminary data of Chapter III show that the hydrolysis of nucleotides in serum and heart synaptosomes female rats remained unchanged in animals treated with L-NAME (30 or 50 mg / kg / day for 14 days), indicating a possible sexual dimorphism in regard to purinergic signaling in a hypertensive context. The data described in Annex of Chapter IV were obtained during a pre-doctoral training period abroad and describe the differential involvement of NTPDase1 in the control of vasorelaxation dependent of P2Y1 and P2Y2 receptors in mice aortas. The P2Y1 receptor was easily desensitized in mice deficient for the enzyme, whereas the P2Y2 was less susceptible to desensitization. Finally, we describe the standardization of a methodology for assessing the involvement of endothelial purinoceptors in the vasodilation dependent of activated platelets content. Together, the data from this thesis point out that some parameters of purinergic signaling are altered by the model of hypertension induced by L-NAME. Therefore, we conclude that purinergic signaling may represent another associated factor to be considered in an antihypertensive therapy and further studies are needed to confirm the use of purinergic therapies in the context of arterial hypertension.
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Participação da sinalização purinérgica na hipertensão arterial induzida por L-NAMEBasso, Cristina Ribas Fürstenau January 2010 (has links)
A hipertensão arterial é responsável por mais de 7 milhões de mortes prematuras em todo o mundo. Esta patologia é influenciada por diferentes sistemas pressores e depressores e a sua elevação resulta da perda do equílibrio entre estes fatores. A sinalização purinérgica tem sido apontada como um importante regulador da (pato)fisiologia cardiovascular. Na vasculatura, o ATP, o ADP e a adenosina podem influenciar as respostas vasomotoras, a ativação plaquetária e a função cardíaca, entre outros. No rim, estão associados à modulação da reatividade vascular e ao processo de retroalimentação tubuloglomerular. Os nucleotídeos exercem seus efeitos através dos receptores purinérgicos P2, subdivididos em P2X e P2Y, e a adenosina atua via ativação de quatro subtipos de receptores P1. As ectonucleotidases, atuando sob a forma de uma cascata enzimática, regulam a degradação dos nucleotídeos e a formação dos nucleosídeos. No presente trabalho, avaliamos a influência da hipertensão arterial induzida pela inibição crônica da produção de óxido nítrico sobre o sistema purinérgico vascular e renal de ratos. No primeiro capítulo, demonstramos que as hidrólises de ATP, ADP e AMP foram diminuídas em soro e plaquetas de ratos tratados com L-NAME (30 mg/Kg/dia por 14 dias). Entretanto, a medida dos níveis de purinas indicou uma diminuição nas concentrações de ADP, AMP e hipoxantina circulantes. O segundo capítulo mostrou que as hidrólises de ATP, ADP, AMP e 5’TMP foram aumentadas em membrana renal de ratos tratados com L-NAME, e estiveram acompanhadas por uma elevação significativa na expressão gênica das enzimas NTPDase2, NTPDase3 e NPP3. Os dados preliminares do capítulo III mostram que a hidrólise dos nucleotídeos em soro e sinaptossoma cardíaco de ratos fêmeas permaneceu inalterada nos animais tratados com LNAME (30 ou 50 mg/Kg/dia por 14 dias), sinalizando um possível dimorfismo sexual na resposta à hipertensão no que se refere à sinalização purinérgica. Os dados descritos em anexo no capítulo IV, os quais foram obtidos durante um estágio no exterior, descrevem a participação diferencial da NTPDase1 no controle do vasorelaxamento dependente dos receptores P2Y1 e P2Y2 em aortas de camundongos. O receptor P2Y1 foi facilmente desensibilizado em camundongos deficientes para a enzima, enquanto que o receptor P2Y2 mostrou-se menos suscetível à desensibilização. Finalmente, descrevemos a padronização de uma metodologia para a avaliação da participação dos purinoceptores endoteliais na vasodilatação dependente do conteúdo de plaquetas ativadas. Em conjunto, os dados desta Tese apontam que alguns parâmetros da sinalização purinérgica são alterados pelo modelo de hipertensão arterial induzida por L-NAME. Portanto, concluímos que esta sinalização pode representar mais um fator associado a ser considerado em uma terapia anti-hipertensiva e estudos adicionais são necessários para ratificar a utilização das terapias purinérgicas no contexto da hipertensão arterial. / Hypertension is responsible for more than 7 million deaths around the world. This pathology is influenced by different pressor and depressor systems, and its elevation results from the loss of equilibrium between these factors. The purinergic signaling has been implicated as an important regulator in the cardiovascular (patho)physiology. In the vasculature, ATP, ADP and adenosine may influence the vasomotor responses, platelet activation, cardiac function, among others. In the kidney, they are associated with the modulation of vascular reactivity and the tubuloglomerular feedback process. The nucleotides exert their effects through purinergic P2 receptors, subdivided into P2X and P2Y, and adenosine acts via activation of four subtypes of P1 receptors. The ectonucleotidases, acting as an enzyme cascade, regulate the degradation of nucleotides and the formation of nucleosides. In this study, we evaluated the influence of hypertension induced by chronic inhibition of nitric oxide synthesis on the vascular and renal purinergic system of rats. In the first chapter, we demonstrated that the hydrolysis of ATP, ADP and AMP were decreased in serum and platelets of rats treated with L-NAME (30 mg /Kg/day for 14 days). However, the measurement of purine levels indicated a decrease of circulating ADP, AMP and hypoxanthine. The second chapter has shown that the hydrolysis of ATP, ADP, AMP and 5'TMP were increased in renal membrane of rats treated with L-NAME, which were accompanied by a significant increase in gene expression of the enzymes NTPDase2, NTPDase3 and NPP3. Preliminary data of Chapter III show that the hydrolysis of nucleotides in serum and heart synaptosomes female rats remained unchanged in animals treated with L-NAME (30 or 50 mg / kg / day for 14 days), indicating a possible sexual dimorphism in regard to purinergic signaling in a hypertensive context. The data described in Annex of Chapter IV were obtained during a pre-doctoral training period abroad and describe the differential involvement of NTPDase1 in the control of vasorelaxation dependent of P2Y1 and P2Y2 receptors in mice aortas. The P2Y1 receptor was easily desensitized in mice deficient for the enzyme, whereas the P2Y2 was less susceptible to desensitization. Finally, we describe the standardization of a methodology for assessing the involvement of endothelial purinoceptors in the vasodilation dependent of activated platelets content. Together, the data from this thesis point out that some parameters of purinergic signaling are altered by the model of hypertension induced by L-NAME. Therefore, we conclude that purinergic signaling may represent another associated factor to be considered in an antihypertensive therapy and further studies are needed to confirm the use of purinergic therapies in the context of arterial hypertension.
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Detecção de Galectina-3 por imunoquimiluminescência em tecidos tumorais próstata E tireóideARAÚJO FILHO, Jorge Luiz Silva 31 January 2011 (has links)
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Previous issue date: 2011 / Embora o estudo imunoistoquímico seja um método bastante utilizado na rotina
do diagnóstico anatomopatológico, este teste ainda apresenta importantes
limitações principalmente quanto a incapacidade de distinção entre alguns tipos
de lesões tumorais. Dessa maneira, outras ferramentas vêm sendo
desenvolvidas a fim de aumentar a sensibilidade e especificidade da
identificação antígeno-anticorpo. Dentre estas, os ensaios quimiluminescentes
vem sendo cada vez mais utilizados em estudos para o mapeamento de
amostras biológicas para fins diagnósticos. Dentre os inúmeros benefícios da
utilização dos métodos quimiluminescentes, podemos citar o limite de detecção
ultra-sensível, testes rápidos e um amplo campo de aplicações. O presente
estudo buscou elaborar um protocolo para detecção da proteína galectina-3 em
tecidos tumorais da tireóide e próstata a partir de anticorpo conjugado ao éster
de acridina realizando ensaios imunoquimiluminescentes e compará-los aos
resultados da imunoistoquímica convencional. O anticorpo monoclonal antigalectina-
3 foi conjugado ao éster de acridina e esse conjugado foi submetido à
ensaios imunoquimiluminescentes em tecidos de próstata e tireóide além da
imunohistoquímica convencional. Nossos resultados demonstram a eficiência na
conjugação da anti-galectina-3 ao éster de acridina, um shelf-life do conjugado
anticorpo/éster de acridina (AC-EA) com aproveitamento de 96,51% após 12
meses e a aplicação desse conjugado em ensaios imunoquimiluminescentes nos
tecidos tireoidianos e prostáticos demonstraram padrões diferenciais entre as
lesões estudadas e sua contraparte normal. Concluiu-se então, que o ensaio
imunoquimiluminescente proposto pode ser utilizado como método diagnóstico
alternativo na identificação de antígenos principalmente em amostras teciduais
pequenas
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Acilação de celulose em meio homogêneo / Cellulose acylation in homogeneousMarson, Guilherme Andrade 27 August 1999 (has links)
Um novo método de dissolução e acilação de celulose no sistema LiCl/N,N-dimetilacetamida (DMAC) foi desenvolvido e aplicado com sucesso nas seguintes celuloses: microcristalina (I), sisal (II), algodão(III) e bagaço de cana de açúcar (IV). O novo método tem as seguintes vantagens: a) uso de sistema acilante simples (anidridos alifáticos sem catalisadores); b) produção direta de ésteres simples (acetatos, propionatos e butiratos) e mistos (acetato/butirato), com eficiente controle do grau de esterificação; c) menor demanda de tempo e reagentes; d) desprezível degradação da celulose; e) eficiente recuperação/reciclagem do solvente e dos demais reagentes. Estudos por microscopia eletrônica de varredura revelam que em II e IV a penetração do solvente é mais lenta que em I devido à diferenças morfológicas. Constantes de velocidade e parâmetros de ativação do processo de descristalização de I e IV, foram determinados sob condições não isotérmicas, a partir do decaimento do índice de cristalinidade (determinado por espectroscopia no infravermelho). O processo de descristalização é globalmente endotérmico e aparentemente não depende do grau de polimerização (GP) da celulose de partida. A diferença na reatividade observada para as celuloses II a IV em relação a I, foi atribuída ao maior GP, maior flexibilidade da cadeia polimérica, além da agregação destas celuloses no sistema. O grau de acetilação individual das posições C6, C3 e C2 na unidade anidra de glicose, determinado por RMN de 13C, revela a seguinte ordem de reatividade para os grupos OH na UAG: C6 > C3 ≈ C2. / A novel procedure for cellulose dissolution and acylation in LiCl/ N,N-dimethylacetamide solvent system has been introduced and successfully applied to the following celluloses: microcrystalline (I), sisal (II), cotton (III) and sugar cane bagasse (IV). The novel procedure has the following attractive features: a) uses acid anhydride and requires no base catalyst; b) can be used for the direct preparation of esters and mixed esters; c) requires less amount of solvent and shorter time; d) causes negligible degradation of cellulose; e) permits recovery/recycling of DMAC and acid anhydride. Scanning electron microscopy studies show that swelling of celluloses II and IV by the solvent is slower than that of I, most probably due to morphological differences. Rate constants and activation parameters for decrystallization of I and IV have been determined from dependence of the index of crystallinity of cellulose, on time, under non-isothermal conditions. The decrystallization was found to be an endothermic process, negligibly dependent on the degree of polymerization (DP) of the starting cellulose. Differences in the reactivities between celluloses are related to GP, polymer chain flexibility and cellulose aggregation. The distribution of the acetyl moiety among the three OH groups was determined by 13C NMR, giving rise to the following order : C6 > C3 and C2.
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Estudo de aplicação de lipases e transaminases como catalisadores na síntese de compostos organoborônicos quirais / Study of application of lipases and transaminases as catalysts in the synthesis of chiral organoboron compoundsReis, Joel Savi dos 09 December 2013 (has links)
Neste trabalho, foi avaliada a resolução cinética de ésteres carboxílicos β-borilados, catalisada por lipases, através de hidrólise e transesterificação. Foram sintentizados ésteres contendo diferentes cadeias carbônicas. A hidrólise enantiosseletiva catalisada por CAL-B forneceu o correspondente ácido carboxílico β-borilado com excesso enantiomérico moderado (e.e. 62%), enquanto os ésteres β-borilados metílico e etílico foram recuperados com excelente pureza enantiomérica (e.e.>99%). A reação de transesterificação enantiosseletiva entre ésteres carboxílicos β-borilados e álcoois, catalisada por CAL-B, demonstrou uma alta seletividade somente quando etanol e (β-pinacolilboronato)-butanoato de metila foram usados como substratos, levando a formação de (β-pinacolilboronato)-butanoato de etila enantioenriquecido (e.e.>99%). Entretanto, ésteres contendo longas cadeias carbônicas ligadas à carboxila não sofreram as reações desejadas, mesmo em temperaturas mais elevadas. Adicionalmente, foi investigada a reação de aminação redutiva assimétrica, catalisada por ω-transaminases, de cetonas pró-quirais contendo grupos borônicos (ácido, éster ou trifluoroborato de potássio). Após as sínteses de cetonas aromáticas e alifáticas, os melhores resultados para a biotransformação foram obtidos com ω-transaminases (R)-seletivas de Arthrobacter sp. e Aspergillus terreus e (S)-seletiva de Chromobacterium violaceum. Sob as condições otimizadas, foram obtidas altas conversões (94%) com perfeitas enantiosseletividades (e.e.>99%), proporcionando assim uma nova via de acesso a aminas (R) ou (S) contendo boro em condições reacionais suaves. / In this work, the kinetic resolution of β-borylated carboxylic esters via lipase-catalyzed hydrolysis and transesterification reactions was evaluated. Esteres with different carbon chains were synthesized. The enantioselective hydrolysis catalyzed by CAL-B furnished the corresponding β-borylated carboxylic acid with reasonable enantiomeric excess (ee 62%), while both methyl and ethyl β-borylated carboxylic esters were recovered with excellent enantiomeric purity (ee>99%). The enantioselective transesterification reaction of β-borylated carboxylic esters and several alcohols, catalyzed by CAL-B, only indicated a high selectivity when ethanol and methyl-(β-pinacolylboronate)-butanoate were used as substrates, which gave the enantioenriched ethyl-(β-pinacolylboronate)-butanoate (ee >99%). However, esters with longer carbon chains or steric hindrance at the carboxyl group did not undergo the desired reactions, even at high temperatures. Additionally, the asymmetric reductive amination ω-transaminase catalyzed of boron-containing (acid, ester or potassium trifluoroborate) prochiral ketones was investigated. After the syntheses of aromatic and aliphatic ketones, the best results of biotransformation were obtained with (R)-selective ω-transaminases from Arthrobacter sp. and Aspergillus terreus and (S)-selective one from Chromobacterium violaceum. Under the optimized conditions, high conversions (94%) with perfect enantioselectivities (ee >99%) were found, providing a new access to (R) or (S) boron-containing amines under mild reaction conditions.
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