Orientador : Jose Antonio Rocha Gontijo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T14:12:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_PauloCesarde_D.pdf: 2188887 bytes, checksum: 309e674186fe399fd0cfec935fee1d78 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: No presente estudo, foi investigado os efeitos da administração intracerebroventricular (i.c.v) aguda de insulina sobre os mecanismos centrais responsáveis pela regulação da excreção tubular renal de sódio após injeção prévia de NG-nitro-1-arginine methylester (LNAME) em ratos não anestesiados. Ratos Wistar-Hannover Masculinos foram radomizados em cinco grupos: a) injeção i.c.v. de 0.15 M de NaCl em ratos (controle, N = 10), b) injeção i.c.v. de dose-resposta (1.26, 12.6 e 126 ng/3µL) em ratos (N = 10), c) Injeção i.c.v. de 60µg de L-NAME associada com NaCl (N = 10) ou d) com insulina 126ng (N = 10), e e) Injeção de insulina subcutânea em ratos (N = 5). A insulina injetada centralmente no ventrículo lateral direito de ratos promoveu uma elevação da excreção urinária de sódio (NaCl: 855.6 ± 85.1?%/min; 126 ng de insulina: 2055 ± 310.6?%/min; P = 0.005) e potássio (NaCl: 460.4 ± 100?%/min; 126ng insulina: 669.2 ± 60.8?%/min; P = 0.025). A excreção urinaria de sódio elevada observada após a microinjeção i.c.v. de 126 ng de insulina foi atenuada significativamente com administração prévia de L-NAME (126 ng insulina: 1935 ± 258.3?%/min; L-NAME + 126 ng de insulina do: 582.3 ± 69.6?%/min; P = 0.01). A natriurese induzida pela insulina i.c.v. ocorreu através da elevação da excreção tubular renal de sódio nos segmentos pós-proximais, a despeito de uma filtração glomerular inalterada. Embora o racional para a redução da excreção urinária de sódio induzida pela prévia administração i.c.v. de L-NAME seguida da administração de insulina i.c.v. permanece ainda desconhecida, podemos sugerir que um dos gatilhos responsáveis pela sinalização eferente da insulina no SNC possa ser de natureza nitrérgica / Abstract: In the present study, we investigated the effects of acute intracerebroventricular (icv) insulin administration on central mechanisms regulating urinary sodium excretion in simultaneously centrally NG-nitro-L-arginine methylester (L-NAME)-injected unanesthetized rats. Male Wistar-Hannover rats were randomly assigned to one of five groups: a) icv 0.15 M NaCl-injected rats (control, N = 10), b) icv dose-response (1.26, 12.6 and 126 ng/3 µL) insulin-injected rats (N = 10), c) rats icv injected with 60 µg L-NAME in combination with NaCl (N = 10) or d) with insulin (N = 10), and e) subcutaneously insulininjected rats (N = 5). Centrally administered insulin produced an increase in urinary output of sodium (NaCl: 855.6 ± 85.1 ?%/min; 126 ng insulin: 2055 ± 310.6 ?%/min; P = 0.005) and potassium (NaCl: 460.4 ± 100 ?%/min; 126 ng insulin: 669.2 ± 60.8 ?%/min; P = 0.025). The urinary sodium excretion response to icv 126 ng insulin microinjection was significantly attenuated by combined administration of L-NAME (126 ng insulin: 1935 ± 258.3 ?%/min; L-NAME + 126 ng insulin: 582.3 ± 69.6 ?%/min; P = 0.01). Insulin induced natriuresis occurred by increasing post-proximal sodium excretion, despite an unchanged glomerular filtration rate. Although the rationale for decreased urinary sodium excretion induced by combined icv L-NAME and insulin administration is unknown, it is tempting to suggest that perhaps one of the efferent signals triggered by insulin in the CNS may be nitrergic in nature / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

Orientador: Sisi Marcondes Paschoal / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-15T13:49:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Casarin_AndreLuiz_M.pdf: 791279 bytes, checksum: d5ae52b9c458a272700ec00ce544fce3 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A sepse é um problema grave enfrentado em hospitais e por isso é importante mais estudos que possam esclarecer melhor a sua fisiopatologia. Alguns estudos indicam que as plaquetas podem ter um papel importante nesta condição, já que a gravidade da sepse relaciona-se positivamente com o estado de ativação destes elementos. O LPS é uma substância bastante utilizada no estudo da sepse, uma vez que mimetiza vários efeitos observados neste quadro como a grande produção de espécies reativas de oxigênio (EROs) e nitrogênio (ERNs). Portanto, o objetivo deste trabalho foi investigar as ações do tratamento de ratos com LPS na adesão plaquetária, bem como o envolvimento de EROs e ERNs na modulação deste(s) efeito(s). Para tanto, ratos foram injetados com LPS (1 mg/kg, i.p.) e após 2h a 48h a adesão plaquetária foi avaliada. As plaquetas aderidas aos poços foram quantificadas através da determinação da atividade da fosfatase ácida. Para investigar o papel do NO e de EROs no(s) efeito(s) do LPS na adesão plaquetária, foram realizados co-tratamentos de ratos com o inibidor da óxido sintase L-NAME ou com antioxidante N-acetilcisteína (NAC), bem como a incubação de plaquetas in vitro com o sequestrador de O2- PEG-SOD. Os níveis de GMPc em plaquetas foram determinados por radioimunoensaio. O tratamento de ratos com LPS aumentou a adesão de plaquetas não-ativadas ao fibrinogênio e diminuiu a adesão de plaquetas ativadas por trombina. O tratamento crônico dos ratos com L-NAME (20 mg/kg/dia) por 7 dias antes da injeção com LPS reduziu o aumento da adesão de plaquetas não-ativadas, mas não afetou a adesão de plaquetas ativadas. Os níveis de GMPc em plaquetas de ratos tratados com LPS foram semelhantes aos observados em animais tratados com salina. Os níveis intraplaquetários de GMPc em plaquetas não-ativadas de grupo controle ou no que recebeu o LPS foram reduzidos pelo tratamento crônico do animais com L-NAME. Entretanto, em plaquetas ativadas, o tratamento dos animais com L-NAME reduziu os níveis de GMPc somente no grupo tratado com LPS em 6h. A incubação de plaquetas não-ativadas com PEG-SOD (30 U/ml) reduziu o aumento da adesão de plaquetas de ratos tratados com LPS para níveis semelhantes aos do grupo controle, mas não modificou a adesão de plaquetas ativadas, seja a dos animais controle ou dos injetados com LPS. O tratamento de ratos com NAC (150 mg/kg, i.p.) 30 min após a injeção com LPS impediu o aumento da adesão de plaquetas não-ativadas de ratos injetados com LPS e reduziu o efeito inibitório do LPS na adesão de plaquetas ativadas por trombina. Em conclusão, o tratamento de ratos com LPS apresenta um efeito ambíguo na adesão plaquetária, já que aumenta a adesão de plaquetas não ativadas e reduz a adesão de plaquetas ativadas por trombina. O óxido nítrico (NO) modula o efeito estimulatório do LPS na adesão de plaquetas não ativadas através de mecanismos independentes de GMPc, mas não participa do efeito inibitório do LPS na adesão de plaquetas ativadas. Por outro lado, a geração sistêmica de EROs em ratos tratados com LPS modula a adesão de plaquetas não ativadas ou ativadas por trombina. / Abstract: Platelets are known as hemostatic regulators, but multiple studies have shown that platelets are important in inflammatory reactions including sepsis. Lipopolysaccharide (LPS) is a component of the outer membrane of Gram negative bacteria and has a pivotal role in inducing Gram negative sepsis. LPS triggers the production of various substances including nitric oxide (NO) and reactive oxygen species (ROS) that are involved in the organ failure and death. Therefore, we investigate the role of NO and ROS in modulating the platelet adhesion of LPS-treated rats using the model of platelet adhesion to fibrinogen-coated plates. Wistar rats were injected with LPS (1 mg/kg, i.p.) and 2 to 48h thereafter the platelet adhesion was evaluated. Microtiter plates were coated with fibrinogen, and rat washed platelet suspension (6 x 10(6) platelets) was added to each well. Adherent platelets were quantified through measurement of acid phosphatase activity. Treatment of rats with LPS significantly increased spontaneous platelet adhesion to fibrinogen-coated plates when compared to the control rats. In contrast, in thrombin-stimulated platelets LPS reduced platelet adhesion at 6 to 48h. Chronic treatment of rats with the nitric oxide sinthase inhibitor L-NAME (20 mg/kg/day) for 7 days before injection with LPS reduced the increase of non-activated platelet adhesion, whereas in thrombin-activated cells no differences were found. The cGMP levels in non-activated platelets of control or LPS-treated rats were reduced by chronic treatment of animals with L-NAME. However, the levels of cGMP in thrombin-activated platelets were reduced by L-NAME only in platelets 6h after LPS-treatment. The incubation of non-activated platelets with the O2- scavenger PEG-SOD reversed the stimulatory effect of LPS on spontaneous adhesion, but did not affected the stimulated-platelet adhesion of non-treated or LPS-treated groups. Moreover, the treatment of rats with the antioxidant N-acetylcysteine (NAC, 150 mg/kg, i.p.) 30 min after LPS injection prevented the increase of non-activated platelet adhesion as well as significantly reduced the inhibitory effect of LPS on thrombin-stimulated adhesion. Our findings suggest that NO modulates the stimulatory effect of LPS on non-activated platelet adhesion through GMPc-independent mechanisms, but it does not take part on the inhibitory effect of LPS on thrombin-activated platelet adhesion. In addition, the systemic generation of ROS in the LPS-treated rats plays an important role in both non-activated and thrombin-activated platelet adhesion. / Mestrado / Farmacologia / Mestre em Farmacologia

Orientador: Elenice Aparecida de Moraes Ferrari / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-11T20:16:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Denadai_MagdaAline_M.pdf: 823511 bytes, checksum: 1887972f9e5047fecbd7195247b586a8 (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: O óxido nítrico (NO), um neurotransmissor não convencional, tem papel importante em processos neurobiológicos de comportamento e de memória. Sua síntese é mediada por três isoformas de sintase do óxido nítrico (NOS): a neuronal (nNOS), a endotelial (eNOS) e induzível (iNOS). Este trabalho analisou o efeito do 7-nitroindazole (7-NI), um inibidor seletivo da nNOS, no condicionamento clássico aversivo em pombos. Foram usados 4 grupos: tratados com 7-NI (grupo 7-nitroindazole; G7-NI, n=5), tratados com óleo de amendoim (grupo veículo; GV, n=5), controle/sem tratamento (grupo controle; GC, n=5) e grupo não tratado/não condicionado (grupo manipulação; GM, n=5). A administração i.p. de 7-NI (25 mg/kg), ou do óleo de amendoim foi feita imediatamente após o treinamento. O G7-NI, o GV e o GC receberam três associações som-choque (5°, 10° e 15º minutos) numa sessão de 20 min. O teste a o contexto foi realizado 24 horas depois. As sessões foram gravadas para posterior transcrição e análise comportamental. A ocorrência da resposta de congelamento durante o treino não diferiu entre os grupos (p>0,05), mas durante o teste foi menor para o G7-NI em comparação ao treino (p<0.01) e aos demais grupos no teste (p<0.001). A atividade da NOS dependente de Ca++ no hipocampo foi menor no G7-NI do que nos outros grupos (p<0,01). Análise por Western blot indicou aumento na expressão de nNOS no G7-NI (p<0,05). A administração sistêmica de 7-NI teve um efeito amnésico sobre a memória contextual aversiva, indicando que a atividade da NOS dependente de Ca++ é importante para os processos de condicionamento clássico aversivo em pombos. / Abstract: Nitric oxide (NO) is an unsual neurotransmitter that plays an important role in neurobiological functions underlying behavior and memory. NO synthesis and release can be mediated by three isoforms of NO synthases (NOS): neuronal (nNOS), endothelial (eNOS) and inducible (iNOS). This study examined the effect of 7-nitroindazole (7-NI), a selective nNOS inhibitor, on contextual fear conditioning in pigeons. Four groups of pigeons were used: treated with 7-NI (7-NI; n=5), treated with peanut oil (Vehicle; n=5), non treated controls (Control; n=5) and non treated and no-trained controls (Non-trained; n=5). Treatment consisted in 7-NI (25 mg/kg; i.p.) or vehicle (peanut oil) administration, immediately after training. All the animals were trained in one 20 min session during which three tone-shock pairings (5th, 10th and 15th minutes) were presented. The test to the context was conducted 24h later. Behavioral categories were analyzed through the transcription of video-tapes of the sessions. The groups 7-NI, Vehicle and Control showed no significant differences in freezing during the conditioning session (p>0.05). During the test to the context the group 7-NI expressed significantly lower freezing as compared to Vehicle and Control (p<0.05). The 7-NI pigeons showed lower hippocampal activity of Ca++ dependent-NOS than Vehicle and Control groups (p<0.01). Western blot analysis indicated significant increase in nNOS expression (p<0.05). The systemic administration of 7-NI induced amnestic effects on contextual fear memory that evidence that Ca++-dependent NOS activity is required for fear conditioning in pigeons. / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Objetivo: Na cirurgia de reconstrução aórtica ou cirurgia cardíaca com oclusão da aorta, a ocorrência de isquemia mesentérica e lesão intestinal está associada à maior mortalidade a curto prazo. A proteção vascular dos estrogênios tem sido investigada e é principalmente mediada pelo aumento da disponibilidade de óxido nítrico (NO). Portanto, este estudo investigou o papel do 17beta-estradiol na lesão de isquemia-reperfusão visceral (I/R) decorrente da oclusão da aorta descendente em ratos machos. Métodos: A isquemia mesentérica foi induzida em ratos Wistar machos através da inserção de cateter de embolectomia arterial Fogarty 2F (Edwards Lifesciences, Irvine, Calif.) na aorta descendente, que permaneceu ocluída por 15 minutos, seguida por 2 horas de reperfusão. Os ratos foram divididos em quatro grupos: (1) ratos submetidos apenas à manipulação cirúrgica (falso-operado, n = 22); (2) ratos submetidos à lesão de isquemia-reperfusão I/R (n = 22); (3) ratos tratados com 17beta-estradiol intravenoso (280 ug/kg) 30 minutos antes de I/R (n = 22); (4) ou ao início da reperfusão (n = 22). As alterações histopatológicas intestinais foram avaliadas por histomorfometria. As alterações microcirculatórias mesentéricas foram avaliadas por meio de fluxometria por laser Doppler e técnica de microscopia intravital. A expressão proteica da molécula de adesão intercelular-1, P-selectina, NO sintase endotelial (eNOS) e endotelina-1 foram avaliadas por imuno-histoquímica; além disso, as expressões gênicas de eNOS e endotelina-1 foram quantificadas por Real time PCR. As citocinas séricas foram quantificadas por ensaio imunoenzimático. Resultados: O grupo I/R mostrou perda expressiva da espessura da mucosa do intestino, diminuição do fluxo sanguíneo mesentérico (P = 0,0203), aumento do número de leucócitos migrados (P < 0,05) e alta mortalidade (35%). O tratamento com 17-beta-estradiol antes da oclusão da aorta preservou a espessura da mucosa intestinal (P = 0,0437) e o fluxo sanguíneo mesentérico (P = 0,0251), reduziu o número de leucócitos migrados (P < 0,05) e preveniu qualquer ocorrência fatal. Além disso, o 17-beta-estradiol diminuiu a expressão da molécula de adesão intercelular-1 (P = 0,0001) e da P-selectina (P < 0,0001) no endotélio e aumentou a expressão proteica da eNOS (P < 0,0001). As expressões gênicas de eNOS e endotelina-1 não diferiram entre os grupos. Conclusões: O tratamento profilático com 17beta-estradiol mostrou melhor repercussão global, foi capaz de prevenir qualquer ocorrência fatal e aumentar a expressão de eNOS, preservando assim a perfusão mesentérica e a integridade intestinal, além de reduzir sua inflamação / Objective: In surgical aortic repair or cardiac surgery with aorta occlusion, the occurrence of mesenteric ischemia and bowel injury has been associated with higher short-term mortality. The vascular protection of estrogens has been investigated and is mainly mediated by increasing the availability of nitric oxide (NO). Therefore, this study investigated the role of 17beta-estradiol on visceral ischemia-reperfusion (I/R) injury after descending aorta occlusion in male rats. Methods: Mesenteric ischemia was induced in male Wistar rats by placing a 2F Fogarty arterial embolectomy catheter (Edwards Lifesciences, Irvine, Calif) in the descending aorta, which remained occluded for 15 minutes, followed by reperfusion for up to 2 hours. Rats were divided into four groups: (1) rats that underwent surgical manipulation only (sham, n = 22); (2) rats that underwent I/R injury (n = 22); (3) rats treated with intravenous 17beta-estradiol (280 umg/kg) 30 minutes before I/R (n = 22); (4) or at the beginning of reperfusion (n = 22). Intestinal histopathologic changes were evaluated by histomorphometry. Mesenteric microcirculatory alterations were assessed by laser Doppler flowmetry and intravital microscopy technique. Protein expression of intercellular adhesion molecule-1, P-selectin, endothelial NO synthase (eNOS), and endothelin-1 was evaluated by immunohistochemistry; in addition, eNOS and endothelin-1 gene expressions were quantified by real-time polymerase chain reaction. Serum cytokines were measured by enzyme-linked immunosorbent assay. Results: Relative to the sham group, the I/R group exhibited a highly pronounced loss of intestine mucosal thickness, a reduction in mesenteric blood flow (P = 0,0203), increased migrated leukocytes (P < 0,05), and high mortality rate (35%). Treatment with 17-betaestradiol before aorta occlusion preserved intestine mucosal thickness (P = 0,0437) and mesenteric blood flow (P = 0,0251), reduced the number of migrated leukocytes (P < 0,05), and prevented any fatal occurrence. Furthermore, 17-betaestradiol downregulated the expression of intercellular adhesion molecule-1 (P = 0,0001) and P-selectin (P < 0,0001) on the endothelium and increased the protein expression of eNOS (P < 0,0001). The gene expressions of eNOS and endothelin-1 did not differ between the groups. Conclusions: The prophylactic treatment with 17-betaestradiol showed better overall repercussions and was able to prevent any fatal occurrence, increase eNOS expression, thus preserving mesenteric perfusion and intestinal integrity, and reduce inflammation

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao leonardo ciencia animal.pdf: 381642 bytes, checksum: 916af2bb18068d3efe78bdc7c8582617 (MD5) Previous issue date: 2009-10-29 / Myxomatous mitral valve degeneration (MMVD) or mitral valve endocardiosis is an endocardial age-related disease characterized by the mucopolysaccharide (MPS) accumulation and by collagen degeneration in mitral valves of many species, especially in humans, dogs and swine. Metalloproteinases (MMP) are proteolytic enzymes responsible for the extracellular matrix (ECM) remodelling in regular and pathological tissue. It has been suggested that the changing of the valvular distribution of these enzymes might be responsible for MMVD genesis. Likewise, vasoactive substances like nitric oxide (NO) played a role in the endocardiosis development. The aim of this study was to evaluate the histological changes, the expression of nitric oxide synthase (NADPH-d) and the immunohistochemical localization of MMP-2 and MMP-9 in the anterior leaflet in dogs and swine with regular mitral valves and those with endocardiosis. For this purpose, two experiments were done. First, 12 mitral valves of dogs and 22 of swine were analyzed. Valves were fixed in a 4% paraformaldehyde, exposed to NADPH-d reaction, processed routinely and microscopically evaluated for the detection of MPS deposition, collagen degeneration and fibrosis. In dogs, very high intensity reaction to NADPH-d was associated with higher endocardiosis degree and with presence of MPS deposition as well as collagen degeneration. There was no alteration in colour during the swine valves reaction to NADPH-d. In conclusion, NO works in canine mitral valves, remodeling MEC and playing a role in dogs mitral endocardiosis disease. In swine, it is suggested that NO has restricted action in MEC or there are major differences on the structures of swine valves because there was no reaction to NADPH-d and absence of macroscopical endocardiosis lesions. For the second study, 25 mitral valves of dogs and 32 valves of swine were also analyzed. Valves were macroscopically evaluated for the occurrence or not of endocardiosis. They were fixed in a 4% paraformaldehyde, routinely processed and submitted to immunohistochemical reaction and microscopically evaluated for the intensity of antigen labelling and for the number of positive cells, as well as MPS deposition, collagen degeneration and fibrosis. In dogs, DMVM is characterized by MPS accumulation. This collagen deposition and degeneration are directly related to the endocardiosis level. The MMP-2 and MMP-9 enzymes are involved in dogs myxomatous mitral valve degeneration process. In swine, even with the lack of microscopical endocardiosis there was observed some MPS deposition changes, especially in females. In these animals valves there are constitutive expression of MMP-2 and MMP-9, what suggests the action of these enzymes in the normal MEC mitral valvular remodeling in young and old female pigs / A degeneração mixomatosa da válvula mitral (DMVM) ou endocardiose mitral é uma doença do endocárdio valvular relacionada com a idade e caracterizada por acúmulo de mucopolissacarídeos (MPS) e degeneração do colágeno na mitral de várias espécies mamíferas, sendo observada com maior frequência em humanos, cães e suínos. Metaloproteinases (MMP) são enzimas proteolíticas dependentes do zinco, responsáveis pelo remodelamento da matriz extracelular (MEC) em processos normais e patológicos de vários tecidos. A alteração na expressão e a distribuição valvular dessas enzimas estão envolvidas na gênese da DMVM. Da mesma forma, substâncias vasoativas como o óxido nítrico (NO) tem papel importante no desenvolvimento da endocardiose. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar as alterações histológicas, a expressão da sintase de óxido nítrico (NADPH-d), e o padrão de marcação imunoistoquímica de MMP-2 e MMP-9 no folheto anterior da válvula mitral normal e com endocardiose de cães, de suínos jovens e matrizes. Para isso, realizaram-se dois experimentos. No primeiro foram utilizadas 12 mitrais de cães adultos a idosos, 22 válvulas de suínos, 10 de animais com idade de sete e oito meses, e 12 mitrais de matrizes entre cinco e seis anos. As válvulas foram avaliadas macroscopicamente quanto ocorrência ou não de endocardiose, colhidas, fixadas em paraformaldeído a 4%, submetidas à reação de NADPH-d, incluídas em parafina e avaliadas microscopicamente quanto à deposição de mucopolissacarídeos (MPS), degeneração do colágeno, fibrose e grau de endocardiose. Nas válvulas caninas quanto maior a intensidade da reação de NADPH-d, maiores eram o grau de endocardiose, a deposição de MPS e a degeneração do colágeno. Nas válvulas suínas não houve coloração à reação de NADPH-d. Com isso, concluiu-se que o NO atua na mitral canina, remodelando a MEC e participando da patogenia da endocardiose mitral nessa espécie. Na mitral suína sugere-se a ação restrita do NO no remodelamento da MEC ou diferenças estruturais na válvula desta espécie, já que não houve reação ao NADPH-d e lesões macroscópicas de endocardiose. No segundo estudo foram utilizadas 25 mitrais de cães adultos e idosos e 32 válvulas de suínos, sendo 10 de animais com idade de sete e oito meses, e 22 mitrais de matrizes entre cinco e seis anos. As válvulas foram avaliadas macroscopicamente quanto ocorrência ou não de endocardiose, fixadas em paraformaldeído a 4%, incluídas em parafina, submetidas à reação de imunoistoquímica e avaliadas microscopicamente quanto à intensidade de marcação e número de células marcadas, quanto à deposição de MPS, degeneração do colágeno e fibrose. Nos cães, concluiu-se que a DMVM é caracterizada por acúmulo de MPS e degeneração do colágeno, que estão diretamente relacionadas ao grau de endocardiose e, consequentemente, à gravidade da doença valvular. Ainda, as enzimas MMP-2 e MMP-9 estão envolvidas na degeneração mixomatosa da válvula canina. Em suínos, mesmo na ausência macroscópica de endocardiose podem ser observadas alterações como deposição de MPS, degeneração do colágeno e fibrose, sendo esta última evidente em matrizes. Também, nesses animais há expressão constitutiva de MMP-2 e MMP-9, sugerindo a participação dessas enzimas no remodelamento da MEC valvular mitral normal em suínos jovens e matrizes

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao eduardo martins de sousa med trop.pdf: 881180 bytes, checksum: dec3e190185b786a8f3ab68beeafdecb (MD5) Previous issue date: 2009-02-11 / Atypical mycobacteria are microorganism s appart from the etiological agents responsible for tuberculosis and leprosy. They are currently considered as emerging pathogens associated with simple surgical procedures, and are resistant to conventional antibiotics. The atypical mycobacterial infections is responsible for three in every 10 thousand people per year, but the incidence has been increasing as the number of individuals infected with HIV also increases. The low virulence of atypical mycobacteria associates its pathogenicity to decreased resistance of the host, and consequently it is necessary to better understand the interaction between host and microorganism. The cellular and humoral immune response of BALB/c mice and C57BL/6 mice infected with M. massiliense isolated from an outbreak of hospitals in the city of Goiania was evaluated. The isolate of M. massiliense used in this study was able to infect immunocompetent mice, which completely controlled the bacterial load before the 30 days of infection. The mechanisms by which these animals cleared the mycobacteria were: production of NO by peritoneal macrophages, presence of specific IgG1 and induction of mRNA for inflammatory cytokines, as well as regulatory cytokines in inflammation. / Micobactérias atípicas são microrganismos distintos dos agentes etiológicos responsáveis pela tuberculose e pela lepra (Hanseníase). São considerados atualmente como patógenos emergentes associados a procedimentos cirúrgicos simples, e são resistentes aos antibióticos convencionais. As infecções por micobacterias atípicas atingem três em cada 10 mil pessoas por ano, porém a incidência vem aumentando à medida que cresce o número de indivíduos infectados por HIV. A baixa virulência das micobactérias atípicas condiciona a sua patogenicidade à diminuiçäo da resistência do hospedeiro, por isso faz-se necessário uma melhor investigação da interação do microrganismo com o hospedeiro. Nesta dissertação, a resposta imune celular e humoral de camundongos BALB/c e C57BL/6 frente à infecção por M. massiliense isolada de surto hospitalar na cidade de Goiânia foi avaliada. O isolado de M. massiliense utilizado neste estudo foi capaz de infectar camundongos imunocompetentes, que controlaram completamente a carga bacteriana antes dos 30 dias de infecção. Os mecanismos pelos quais estes animais eliminaram as micobactérias foram: produção de NO por macrófagos peritoneais, presença de IgG1 específica e indução de mRNA para citocinas inflamatórias, assim como de citocinas reguladoras da inflamação.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-09-15T13:48:14Z No. of bitstreams: 2 Tese - Nestor Persio Alvim Agricola - 2016.pdf: 3464018 bytes, checksum: bb77f044b42e5748a94916701560da4c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-09-15T13:48:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Nestor Persio Alvim Agricola - 2016.pdf: 3464018 bytes, checksum: bb77f044b42e5748a94916701560da4c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-15T13:48:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Nestor Persio Alvim Agricola - 2016.pdf: 3464018 bytes, checksum: bb77f044b42e5748a94916701560da4c (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-05-09 / Physical exercise is considered an important variable in the study of human health, especially due the changes induced in several biomarkers. In physical training, body adaptations are quite specific for each type of sport and effort. The quantification of biochemical parameters related to human health, mediated by physical activity in its many variations, provides new scientific eyes, not only for what relates to the interaction between the various systems, but also in relation to physiological and adaptive effects generated by them. This research consists of the systematic monitoring of Jiu Jitsu athletes, quantifying the variations of some biochemical parameters linked to health, in an attempt to assess the modality of sport in its potential for health and verify the variations in these parameters depending on the type and intensity of the effort and the special characteristics of the sport. Jiu Jitsu is a kind of sport that has gained prominence and become popular. Throughout the year of training, athletes alternate periods of high intensity training with low intensity periods. The energy expenditure is high and the maximum or submaximal effort often leads to muscle, joint and bone injuries. This is a longitudinal descriptive observational study of measurement that had the participation of 14 volunteers who were monitored for 9 months in their training routine. Blood and saliva samples were collected and the heart rate was monitored throughout this period. Saliva was used to quantify nitric oxide and blood for hematological parameters. The results of the experiments were submitted to statistical tests. Hematological parameters of the red series are influenced by the physical effort when performed in a long-lasting mode, during the training period, responding to the intensity of the effort made. The white series, related to the immune system, is influenced acutely, responding to the exercise stimulus with significant changes as the effort is more or less intense. The production of NO in the organism tends to follow the level of effort made; however, the modality studied has the characteristic of promoting the stimulation of the sympathetic nervous system, what reduced the activity of salivary gland and nitrite concentrations after training is performed. Musculoskeletal injuries are typical of this kind of sport and very typical, which ends up modulating partly the organic response to training. This stimulation, however, must be seen as positive for activating the adaptive response and the interaction of several systems. / O exercício físico é considerado uma variável importante no estudo da saúde humana, principalmente pelas alterações induzidas em diversos marcadores. No treinamento físico, as adaptações do organismo são bastante específicas para cada modalidade esportiva ou tipo de esforço. A quantificação de parâmetros bioquímicos relacionados com a saúde humana, mediados pelo exercício físico em suas diversas variações, possibilita novos olhares da ciência, não só em relação a interação entre os diversos sistemas, mas também em relação aos efeitos fisiológicos e adaptativos gerados. Esta pesquisa consiste no acompanhamento sistemático de atletas de Jiu Jitsu, quantificando as variações de alguns parâmetros bioquímicos ligados à saúde, na intenção de avaliar a modalidade em suas potencialidades para a saúde e verificar as variações nesses parâmetros em função do tipo e intensidade do esforço e das particularidades da modalidade.O Jiu Jitsu é uma modalidade esportiva que tem ganhado destaque e se popularizado. Ao longo do ano de treinamento, os atletas alternam períodos de alta intensidade do treinamento, com períodos de baixa intensidade. O dispêndio de energia é elevado e o esforço máximo ou submáximo frequentemente leva às lesões musculares, articulares e ósseas. Este é um estudo observacional descritivo longitudinal de mensuração que contou com a participação de 14 voluntários que foram acompanhados durante 9 meses em sua rotina de treinamento. Foram coletadas amostras de sangue e saliva e a frequência cardíaca foi monitorada durante todo o período. A saliva foi usada para a quantificação de óxido nítrico e o sangue para os parâmetros hematológicos. Os resultados dos experimentos foram submetidos a testes estatísticos. Os parâmetros hematológicos da séria vermelha são influenciados pelo esforço físico de forma crônica, ao longo do período de treinamento, respondendo à intensidade do esforço realizado. A série branca, relacionada ao sistema imune, sofre influência de forma aguda, respondendo aos estímulos do exercício com alterações significativas conforme o esforço é mais ou menos intenso. A produção de NO no organismo tende a acompanhar o nível de esforço realizado, contudo, a modalidade estudada tem a característica de promover o estímulo do sistema nervoso simpático, o que reduziu a atividade da glândula salivar e as concentrações de nitrito após o treinamento realizado. As lesões músculo-esqueléticas são típicas da modalidade e muito frequentes o que acaba por modular, em parte, a resposta orgânica ao treinamento. Essa estimulação, entretanto, deve ser considerada positiva por ativar a resposta adapativa e a interação entre diversos sistemas.

O Nitroxil (HNO), forma reduzida em um elétron e protonada do óxido nítrico (NO), apresenta características químicas diferentes do seu congênere redox, com ações farmacológicas distintas e vantagens terapêuticas. Em conjunto, NO e HNO parecem ter um papel fundamental no controle do tônus vascular. A produção e/ou biodisponibilidade do HNO deve estar preservada durante o estresse oxidativo, ao contrário do que acontece com o NO. O HNO também apresenta potencial atividade antioxidante, atuando assim como citoprotetor e exibindo características desejáveis no tratamento de doenças cardiovasculares. O presente trabalho teve como objetivo estudar o efeito relaxante do nitroxil liberado do composto sal de Angeli (SA) e investigar os mecanismos celulares envolvidos nesse efeito em veia cava de ratos. Verificamos que o SA aumentou a concentração citosólica de HNO, medida pela sonda fluorescente DAF-2DA, por citometria de fluxo em células de veia umbilical humana (HUVECs). O aumento na intensidade de fluorescência foi abolido pelo sequestrador de HNO (L-cisteína), mas não foi alterado pelas espécies reativas de oxigênio (EROs). O SA promoveu relaxamento dependente da concentração em aorta e veia cava de ratos, com endotélio. Entretanto, o relaxamento induzido em veia cava foi menor que o relaxamento máximo (Emáx) em aorta. Analisando o tempo necessário para o composto induzir o Emáx, observamos que na aorta de ratos, o tempo máximo foi de 50 seg e na veia cava foi de 20 min. A conversão de HNO a NO pela superóxido dismutase (SOD) não foi necessária para a ativação da via de sinalização, uma vez que o relaxamento foi reduzido na presença de L-cisteína, mas não foi alterado em presença do inibidor da SOD (DDC) e do sequestrador de NO (Hidroxicobalamina). O relaxamento estimulado com o SA também foi inibido pelo L-NAME e ODQ, indicando a participação das enzimas NO-sintase e guanilil-ciclase solúvel (GCs), respectivamente. O bloqueador não seletivo de canais para K+ (TEA) e o sequestrador de ânion superóxido (O2¯) (Tiron) não modificaram o relaxamento para o SA quando realizada a curva concentração-efeito. Porém, ambos inibiram o relaxamento quando estudamos o efeito temporal do composto. Na presença do inibidor da NADPH oxidase (Apocinina), o relaxamento também foi reduzido. Deste modo, canais para K+, O2¯ e a NADPH oxidase parecem contribuir para o relaxamento induzido pelo SA. Aparentemente, não há participação da enzima proteína quinase G (GK), Ca2+-ATPase reticular (SERCA) ou de canais para Ca2+ dependentes de voltagem na via de sinalização. Com relação ao potencial antioxidante, em menor concentração (0,1 mmol/L) o SA apresentou efeito antioxidante, enquanto que em altas concentrações (1 mmol/L) ele atuou como um pró-oxidante. A principal espécie envolvida no efeito pró-oxidante do SA é o O2¯. Este é produzido, pelo menos em parte, pela ação da NADPH oxidase, uma vez que o aumento da produção de EROs estimulado pelo SA foi inibido em pelo Tiron e reduzido em presença de Apocinina. Esses dados foram obtidos por fluorescência da sonda DHE por citometria de fluxo em HUVECs. Apesar da produção de EROs em altas concentrações, o composto não apresentou toxicidade. / Nitroxyl (HNO), the one electron reduced and protonated form of nitric oxide (NO), displays different chemical characteristics compared to its redox sibling, with different pharmacological actions and therapeutic benefits. Together, NO and HNO seem to have an integral role in the control of vascular tone. The production and/or bioavailability of HNO must be preserved during oxidative stress, different from what happens to NO. In addition, HNO also has a potential antioxidant activity, thus acting as a cytoprotector and displaying desirable characteristics in the treatment of cardiovascular diseases. The present study aimed to study the relaxing effect of HNO released from Angeli\'s salt (AS) and to investigate the cellular mechanisms involved in this effect in rat vena cava. We found that AS increased cytosolic concentration of HNO, measured by fluorescent probe DAF-2DA by flow cytometry in human umbilical vein cells (HUVECs). HNO increase was abolished by HNO scavenger (L-cysteine), but it did not change in presence of the reactive oxygen species (ROS). AS promoted concentration-dependent relaxation in aorta and vena cava of rats with endothelium. However, the relaxation induced in vena cava was lower than the maximum relaxation (ME) induced in aorta. Analyzing the time necessary for the compound to induce ME, we observed that the effect in function of time was also significantly different between the vessels. In rat aorta, the maximum time was 50 seconds and in vena cava was 20 minutes. HNO conversion to NO by superoxide dismutase (SOD) was not required for signaling pathway activation, since AS relaxation was reduced in presence of L-cysteine, but it was not modified in presence of SOD inhibitor (DDC) or NO scavenger (Hydroxocobalamin). SA-induced relaxation was reduced by L-NAME and ODQ, indicating the involvement of NO synthase and soluble guanylyl cyclase (sGC), in the relaxation. Non-selective blocker of K+ channels (TEA) and superoxide anion (O2¯) scavenger (Tiron) did not modify the relaxation induced by AS when concentration-effect curve was performed. However, both inhibited relaxation when we performed the temporal effect compound study. Moreover, in the presence of NADPH oxidase inhibitor (Apocynin) relaxation was also reduced. Thus, K+ channels, O2¯ and NADPH oxidase seem to contribute to AS relaxation. Apparently there is no participation of protein kinase G (GK), sarcoplasmic reticulum Ca2+ ATPase (SERCA) or voltage-dependent Ca2+ channels in relaxation signaling pathway. Also, low concentrations (0.1 mmol/L) of AS presented antioxidant effect, whereas in high concentrations (1 mmol/L) it acted as a prooxidant. The main ROS involved in AS prooxidant effect was O2¯, which was produced, at least in part, by the action of NADPH oxidase, since the increase of ROS production by AS was inhibited by Tiron and reduced in the presence of Apocynin. These data were obtained by fluorescence DHE probe by flow cytometry in HUVECs. Despite the production of ROS in high concentrations, the compound did not show toxicity.

O óxido nítrico (NO) é um mensageiro químico detectado em vários tipos celulares como células endoteliais, neurônios e macrófagos, desempenhando também funções variadas como vasodilatação, neurotransmissão e indução de morte celular. O NO é gerado pela atividade da enzima óxido nítrico sintase (NOS), a qual foi detectada em vários órgãos incluindo o sistema reprodutor. O sistema NOS/NO parece desempenhar papel importante na maturação oocitária entre outras funções. No entanto, apesar das evidências, há poucos estudos sobre o possível papel desse sistema em oócitos da espécie bovina. O presente estudo teve por objetivo investigar a importância do sistema NOS/NO na maturação in vitro (MIV) de oócitos bovinos. Para isso, foram avaliados os efeitos da inibição da NOS durante a MIV na presença de concentrações crescentes do inibidor de NOS (L-NAME, 0-1mM) e do aumento do NO durante a MIV na presença de concentrações crescentes do doador de NO (SNAP, 0-1mM) sobre a taxa de maturação (metáfase II) e formação de blastocistos após a fecundação in vitro. Também foi avaliado o efeito da pré-maturação com butirolactona (10µM BLI), seguida de MIV, na presença ou não de doador ou inibidor de NO em cada fase de cultivo, sobre o desenvolvimento de blastocistos. Após 22h de MIV os grupos tratados com L-NAME apresentaram uma taxa de metáfase II (MII) inferior (~80%, P<0,05) ao controle (95,5%). A taxa de blastocisto foi similar entre os grupos (34 a 41,5%, P>0,05). Apenas 7,2% (P<0,05) dos oócitos maturados com a maior concentração de SNAP (10-3M), atingiram o estádio de MII. Os demais tratamentos (71,6; 72,4 e 54,8% para controle, 10-7 e 10-5M, respectivamente) não diferiram entre si (P>0,05). Altos níveis de SNAP (10-3M) bloquearam o desenvolvimento embrionário, enquanto os demais tratamentos apresentaram cerca de 38% de blastocistos (P>0,05). As taxas de blastocistos (26,3 a 34,1%) e de eclosão (14,8 a 22,0%) adicionando ou não L-NAME em baixa concentração (10-7M) durante a pré-maturação, a maturação ou ambas as fases foram similares (P>0,05). Também não houve diferença (P>0,05) na taxa de blastocistos (25,5 a 39,7%) com a adição ou não de baixa concentração de SNAP (10-7M) durante a pré-maturação, a maturação ou ambas as fases. O grupo com SNAP (10-7M) na pré-maturação e MIV superou a taxa de eclosão (27,5%, P<0,05) dos demais grupos que tiveram SNAP adicionado somente no bloqueio, na MIV ou sem adição de SNAP (14,2 a 18,6 %, P>0,05). Esses resultados exibiram o duplo efeito do NO sobre oócitos bovinos, que tiveram a maturação reduzida com a inibição da síntese de NO e a maturação nuclear e citoplasmática bloqueadas pelo excesso de NO. / Nitric oxide (NO) is a chemical messenger detected in several cell types such as endothelial cells, neurons and macrophages, performing also varied functions as vasodilatation, neurotransmission and induction of cell death. NO is generated by the activity of the enzyme nitric oxide synthase (NOS), which has been detected in several organs including the reproductive system. The NOS/NO system seems to play an important role in oocyte maturation besides other functions. However, despite the evidence, there are few studies on the possible role of this system in bovine oocytes. The present study aimed to investigate the importance of the NOS/NO system on in vitro maturation (IVM) of bovine oocytes. The effects of NOS inhibition during IVM in the presence of increasing concentrations of NOS inhibitor (L-NAME, 0-1mM) and of the increase in NO during IVM with the NO donor SNAP (0-1mM) on maturation rates (metaphase II) and on blastocyst development after in vitro fertilization were assessed. The effect of prematuration with butyrolactone I (10µM BLI) followed by IVM, in the presence or not of NO inhibitor or donor in each culture period on blastocyst development was also investigated. After 22h IVM, L-NAME treated groups showed a lower (~80%, P<0.05) metaphase II (MII) rate when compared with controls (95.5%). Blastocyst rates were similar among all groups (34 to 41.5%, P>0.05). Only 7.2% (P<0.05) of oocytes matured with the highest SNAP concentration (10-3M) reached MII. The other treatments (71.6; 72.4 and 54.8% for control, 10-7 and 10-5M, respectively) were similar among them (P>0.05). High SNAP concentration (10-3M) blocked blastocyst development, while the other treatments presented about 38% blastocyst rates (P<0.05). Blastocyst (26.3 to 34.1%) and hatching rates (14.8 and 22.0%) were similar (P>0.05) when low L-NAME concentration (10-7M) was added or not during prematuration, maturation or both. Blastocyst rates (25.5 to 39.7%) were also similar (P>0.05) whether SNAP (10-7M) was added or not during prematuration, IVM or both. When low concentration of SNAP (10-7M) was added during both prematuration and IVM, hatching rates were increased (27.5%, P<0.05) when compared with oocytes cultured in the presence of SNAP only during prematuration or IVM or without it (14.2 to 18.6 %, P>0.05). These results shoe the dual effect of NO on bovine oocytes, which had maturation rates decreased when NO synthesis was inhibited and nuclear maturation and blastocyst development were blocked by excess NO.

O óxido nítrico (NO) é um mensageiro químico gerado pela atividade da enzima óxido nítrico sintase (NOS) a qual foi detectada em vários órgãos incluídos os do sistema reprodutor e parece estar envolvido na maturação oocitária. No entanto, há poucos estudos sobre o papel desse sistema em oócitos da espécie bovina. Sabe-se que o NO atua pela via da guanilato ciclase (GC) estimulando a produção do nucleotídeo GMPc, que por sua vez é capaz de influenciar nos níveis de outro nucleotídeo (AMPc) via fosfodiesterases (PDE). O AMPc é um importante elemento da via de sinalização do FSH nos complexos cumulus-oócitos e no controle da maturação oocitária. O objetivo do presente projeto foi investigar a influência do FSH na via do NOS/NO e seus componentes em oócitos bovinos maturados in vitro e o envolvimento das células do cumulus (CC) na via de sinalização. Para tanto, complexos cumulus-oócito (CCO) e oócitos desnudos (OD - maturados sem células do cumulus) foram maturados in vitro por 24h na presença ou ausência de FSH. As amostras foram avaliadas quanto a: 1) taxa da maturação nuclear; 2) níveis de produção de NO; 3) níveis de AMPc e GMPc; 4) abundância relativa de RNAm de NOS2, PDE5A, PDE6C, PKG1, PKG2, ADCY6, ADCY9, PDE3A e PKA1. O FSH, na concentração de 0,05UI/mL, estimulou positivamente a maturação nuclear em CCO e OD, com 80,6 e 89% de oócitos maturados, respectivamente. Quando comparados diretamente os grupos CCO e OD, o FSH não influenciou as taxas de maturação (71 e 71,3%, p>0,05), nem os níveis de produção de NO (12,8 e 7,4 µM/mL, p>0,05). Os níveis de GMPc em CCO aumentaram após 1 e 3 h de MIV na presença de FSH (266,3 e 187,2 pmol/pool com FSH e 240,5 e 168,5 pmol/pool sem FSH, respectivamente, p<0,05). Após 6 h os níveis de GMPc declinaram de forma mais acentuada no grupo sem FSH (46,3 e 106,9 pmol/pool, com e sem FSH, respectivamente, p<0,05). Os níveis de AMPc em CCO também foram mais elevados na presença de FSH à 1 e 3 h de MIV (7,60 e 7,81 pmol/pool, respectivamente) em comparação com CCO maturados sem FSH (0.30 e 0,76 pmol/pool, respectivamente, p<0,05). Após 6h, os níveis declinaram e foram similares para ambos os grupos (0,43 pmol/pool, p>0,05). Em relação à expressão dos genes selecionados, todos foram detectados nos oócitos (CCO e OD), porém, em células do cumulus, foram detectados apenas PDE5A, ADCY6, ADCY9 e PKA1. Quando observados os resultados do grupo CCO, apenas os genes PKG1, ADCY6 e PDE3A sofreram influência do FSH (p<0,05), apresentando um aumento destes transcritos. No grupo OD, apenas o gene PKG1 sofreu influência do FSH, também apresentando um aumento destes transcritos (p<0,05). Em células do cumulus, os genes ADCY6 e ADCY9 sofreram influência do FSH, sendo que para a ADCY6 provocou um aumentos destes transcritos, e para a ADCY9 provocou uma queda dos mesmos (p<0,05). Em conclusão, o FSH pode exercer influência positiva na maturação nuclear de oócitos bovinos, agindo sobre os níveis de GMPc e AMPc, mas não sobre o NO. O FSH pode influenciar a expressão gênica em oócitos e em células do cumulus de bovinos. / Nitric oxide (NO) is a chemical messenger generated by the nitric oxide synthase (NOS) enzyme, which was detected in several organs including the reproductive system and appears too involved in oocyte maturation. However, there are few studies on the role of this system in bovine oocytes. NO is known to act via guanylate cyclase (GC) stimulating the production of the nucleotide cGMP, which in turn is capable of influencing the levels of another nucleotide, cAMP via phosphodiesterases (PDE). cAMP is an important factor in FSH signaling in cumulus-oocyte complexes (COC) for the control of maturation. The aim of the present work was to investigate the influence of FSH on the NOS/NO pathway and its components in bovine oocytes matured in vitro and the involvement of cumulus cells (CC) in the signaling pathway. COC and denuded oocytes (DO - matured without cumulus cells) were matured in vitro for 24 h with or without FSH. Samples were assessed for: 1) maturation rate; 2) levels of NO production; 3) levels of cGMP and cAMP; 4) relative abundance for mRNA of NOS2, PDE5A, PDE6C, PKG1, PKG2, ADCY6, ADCY9, PDE3A and PKA1. FSH positively stimulated oocyte maturation at 0.05UI/mL concentration for both COC and OD (80.6 and 89% maturation rates, respectively). When COC and OD were compared directly, FSH did not affect maturation rates (71 and 71.3%, p>0.05) nor NO production levels (12,8 and 7,4 µM/mL), p>0.05). cGMP levels increased after 1 and 3 h in vitro maturation (IVM) with FSH (266.3 and 187.2 pmol/pool with FSH and 240.5 and 168.5 pmol/pool without FSH, respectively, p<0.05). After 6 h IVM, cGMP levels in COC declined more in the group cultured with FSH (46.3 and 106.9 pmol/pool, with and without FSH, respectively, p<0.05). cAMP levels in COC were also increased in the presence of FSH at 1 and 3 h IVM (7.60 and 7.81 pmol/pool, respectively) in comparison to COC cultured without the hormone (0.30 and 0.76 pmol/pool, respectively, p<0.05). After 6 h, the levels declined and were similar for both groups (0.43 and 0.02 pmol/pool, p>0.05). Regarding mRNA expression for the selected genes, all of them were detected in oocytes, but only four of them were detected in cumulus cells: PDE5A, ADCY6, ADCY9 and PKA1. For COC only PKG1, ADCY6 and PDE3A were influenced by FSH (p<0.05), with an increase in transcript relative abundance, For DO, only PKG1 was influenced by FSH and also showed an increase in these transcripts (p<0.05). In cumulus cells, ADCY6 and ADCY9 were affected by FSH, with an increase for ADCY6 and a decrease in ADCY9 transcripts (p<0.05). In conclusion, FSH may positively influence nuclear maturation, acting on cGMP and cAMP levels, but not on NO. FSH may also influence gene expression in bovine oocytes and cumulus cells.