Introdução: O câncer de laringe é a segunda neoplasia maligna mais comum no segmento cervicofacial. As caderinas epiteliais (E-caderinas) em conjunto com cateninas formam o complexo E-caderina-catenina que atuam na adesão célula-célula. A perda dessa molécula pode levar à redução ou até mesmo ausência de expressão de E-caderina na membrana celular, acúmulo citoplasmático de beta-catenina e sua translocação para o núcleo, contribuindo para eventos carcinogênicos. Objetivo: Avaliar a expressão de E-caderina e beta-catenina em pacientes com tumor laríngeo precoce ou avançado e na presença ou ausência de metástase cervical. Métodos: Realizou-se estudo retrospectivo de 52 pacientes portadores de carcinoma epidermoide glótico ou supraglótico, tratados entre 1998 a 2011 e avaliados de acordo com o sítio de localização tumoral, grau de diferenciação histológica, estádio TNM, dados de sobrevida e confrontados com a expressão imunoistoquímica de E-caderina e beta-catenina. Resultados: Observou-se associação com significância estatística entre a queda da expressão de E-caderina com a localização supraglótica da lesão, a presença de metástase cervical, em tumores pouco diferenciados e em tumores localmente avançados quando em topografia glótica. Com relação à expressão de beta-catenina, também foi encontrada significância estatística ao relacionar a presença de metástase cervical e tumor de baixa diferenciação com a diminuição de expressão deste marcador. Quanto à análise de sobrevida, a baixa expressão de beta-catenina está relacionada a pior sobrevida global e a redução da expressão de ambos os marcadores a pior sobrevida livre de doença. Conclusão: A expressão anômala dos marcadores estudados levam a impacto prognóstico por poder propiciar tumores com maior agressividade local e presença de metástase cervical / Introduction: Larynx cancer is the second most common malignant neoplasm in the cervicofacial segment. Epithelial cadherins (E-cadherins) together with catenins form the E-cadherin-catenin complex that acts on cell-to-cell adhesion. The loss of this molecule may lead to the reduction or even absence of E-cadherin expression in the cell membrane, cytoplasmic accumulation of beta-catenin and its translocation to the nucleus, contributing to carcinogenic events. Objective: To evaluate the expression of E-cadherin and beta-catenin in patients with laryngeal tumor in different locoregional situations. Methods: A study retrospective of 52 patients with glottic or supraglottic squamous cell carcinoma treated between 1998 and 2011 was conducted, evaluated according to the tumor localization site, the degree of histological differentiation, TNM stage and survival analysis. These data were confronted with the immunohistochemical expression of E-cadherin and ?-catenin. Results: We observed statistically significant association between the fall of E-cadherin expression and the supraglottic localization of the lesion, the presence of cervical metastasis, poorly differentiated tumors and locally advanced tumors when in glottic topography. Related to the expression of beta-catenin, statistical significance was also found for the presence of cervical metastasis and tumor of low differentiation with the decreased expression of this marker. Regarding survival analysis, the low expression of beta-catenin is related to worse overall survival and the reduction of expression of both markers to worse disease-free survival. Conclusion: The anomalous expression of the markers studied leads to a prognostic impact in order to provide tumors with greater local aggressiveness and presence of cervical metastasis

A leucemia linfoide aguda (LLA) compreende um grupo heterogêneo de neoplasias caracterizadas por proliferação anormal e acúmulo de células imaturas na medula óssea, o que prejudica a produção de eritrócitos, leucócitos e plaquetas. O fator de crescimento semelhante à insulina 1 (insulin-like growth factor 1; IGF1) e seu receptor (IGF1R) regulam o crescimento celular normal e contribuem para a transformação e crescimento de células malignas através da ativação de vias de sinalização intracelular. A via de sinalização do IGF1 é iniciada através da ativação de seu receptor seguido da ativação de seus substratos, incluindo o substrato 1 do receptor de insulina (insulin receptor substrate 1; IRS1). IRS1 é uma proteína predominantemente citosólica envolvida na transdução de sinal, e também desempenha um papel na transformação maligna, sendo altamente expresso em muitos tipos de câncer. Em fibroblastos de camundongos, Irs1, através da sinalização do Igf1, foi descoberto como uma proteína chave para a translocação nuclear da ?-catenina e ativação da transcrição de seus genes alvos, como o Myc e a ciclina D1. MYC e ciclina D1 podem atuar como oncogenes, contribuindo para o desenvolvimento de diversas neoplasias, inclusive as hematopoéticas. Deste modo, o objetivo deste projeto de pesquisa foi investigar a participação do IRS1 nuclear na via da ?-catenina em LLA. Foram utilizadas no estudo linhagens celulares de LLA (Jurkat, MOLT4, Raji e Namalwa) e células hematopoéticas primárias de doadores normais (n=13) e de pacientes adultos com LLA (n=45) atendidos em nossa Instituição. Estudos de expressão gênica (PCRq), expressão, associação proteica (western blotting, imunoprecipitação) e localização celular (fracionamento subcelular e microscopia confocal) foram utilizados. Células da linhagem Jurkat foram submetidas à estimulação com IGF1 e/ou inibição farmacológica de IGF1R (OSI-906). Observamos elevada expressão gênica relativa de IRS1, ?-catenina e MYC nos pacientes com LLA quando comparada aos controles normais (p<0,05), mas não houve diferença na expressão gênica de ciclina D1 e IGF1R entre os dois grupos. Observamos uma correlação positiva entre a expressão gênica de ?-catenina e MYC (p=0.0004; r=0.50), e entre a expressão de IRS1 e MYC (p=0.001; r=0.45) na coorte de pacientes com LLA. Na análise univariada, idade e expressão de MYC correlacionaram-se negativamente com a sobrevida global de pacientes com LLA; idade foi fator independente de prognóstico para a sobrevida. Em linhagens celulares de LLA (Jurkat, MOLT4, Raji e Namalwa), observamos co-localização de IRS1 e ?-catenina no núcleo e no citoplasma. Em células primárias de doador normal, IRS1 e ?-catenina localizaram-se predominantemente no citoplasma. Em células da linhagem celular Jurkat, observamos interação entre IRS1 e ?- catenina e o estímulo com IGF1 provocou o aumento da fosforilação em tirosina de IRS1. O tratamento com OSI-906 diminuiu a fosforilação em tirosina de IGF1R, a translocação nuclear de ?-catenina e a expressão proteica de MYC em células Jurkat. Em conclusão, nossos dados suportam uma relação entre a via de sinalização IGF1R/IRS1 e a ativação da ?- catenina em leucemia linfoide aguda, o que pode representar um importante eixo de sinalização envolvido na fisiopatologia da doença. / The acute lymphoblastic leukemia (ALL) is a heterogeneous group of malignancies characterized by abnormal proliferation and accumulation of immature cells in the bone marrow, which impairs the production of erythrocytes, leukocytes and platelets. Insulin-like growth factor 1 (IGF1) and its receptor (IGF1R) regulate normal cell growth and contribute to transformation and growth of malignant cells through activation of downstream signaling pathways. The IGF1 signaling pathway is initiated through activation of its receptor followed by activation of its substrates, including insulin receptor substrate 1 (IRS1). IRS1 is well known as a cytosolic protein involved in signal transduction, but also plays a role in malignant transformation, being highly expressed in many cancers. In mouse fibroblasts, Irs1, through Igf1 signaling, was found to be the key protein for nuclear translocation of ?-catenin and transcription activation of its target genes, such as Myc and cyclin D1. MYC and cyclin D1 may act as oncogenes, contributing to the development of cancers, including hematopoietic neoplasm. Thus, the aims of this study were to investigate the role of nuclear IRS1 in the ?-catenin pathway in LLA. We used in the study ALL cell lines (Jurkat, MOLT-4, Namalwa and Raji) and primary hematopoietic cells from healthy donors (n=13) and from adult patients with ALL (n=45) treated at our Institution. Studies of gene expression (qPCR), protein expression, association (Western blotting and immunoprecipitation) and cell location (subcellular fractionation and confocal microscopy) were used. Jurkat cells were submitted to IGF1 stimulation and/or IGF1R pharmacological inhibition (OSI-906). IRS1, ?-catenin and MYC relative gene expression were significantly elevated in ALL patients compared to normal controls (p<0.05), but there was no difference in gene expression of cyclin D1 and IGF1R between the two groups. A positive correlation between ?-catenin and MYC relative expression (p=0.0004; r=0.50) and between IRS1 and MYC expression (p=0.001; r=0.45) was found. Univariate analysis revealed that increasing age and elevated expression of MYC are factors that adversely affect the overall survival; age was an independent prognostic factor for survival. IRS1 and ?-catenin co-localized in the nucleus and cytoplasm of ALL cell lines (Jurkat, MOLT4, Raji e Namalwa). In primary cell of normal donor, IRS1 and ?-catenin were found predominantly in the cytoplasm. In Jurkat cells, a constitutive IRS1 and ?-catenin protein interaction was observed and IGF1 stimulation increased IRS1 tyrosine phosphorylation. OSI-906 treatment decreased IGF1R tyrosine phosphorylation, nuclear translocation of ?-catenin and MYC protein expression in Jurkat cells. In conclusion, our data support a link between the signaling pathway IGF1R/IRS1 and activation of ?-catenin in acute lymphoblastic leukemia, which may represent an important axis involved in the pathophysiology of the disease.

DYRK1A is the most studied member of the DYRK family of protein kinases, because is one of the human chromosoma 21 proteins for which changes in gene dosage result in neuropathological alterations. DYRKs are activated by autophosphorylation on a tyrosine residue in the activation loop, a one-off event that takes place during translation. Accordingly, DYRK1A would be constitutively active once is synthesized. However, DYRK1A is extremely sensitive to gene dosage, and thus it is predictable that not only its activity but also its actual protein amounts have to be tightly regulated by mechanisms not yet characterized. In the present study, the protein kinase NLK has been identified as a novel regulator of DYRK1A protein stability. DYRK1A interacts with NLK in physiological conditions. The interaction results in the phosphorylation of DYRK1A at multiple sites, which have been identified by mass spectrometry analysis. These phosphorylation events promote DYRK1A proteasome-dependent degradation. Moreover, DYRK1A degradation is induced by stimulating cells with Wnt1 or Wnt3a, or overexpressing elements of the Wnt signaling cascade such as the Frizzled-1 receptor or NLK activators such as HIPK2. In addition, DYRK1A interacts with and phosphorylates -catenin and TCF-4 and enhances -catenin-dependent transcriptional activity, at least by phosphorylation of -catenin. Thus, these results suggest that DYRK1A acts as a positive factor in the Wnt--catenin signaling pathway and NLK acts as a negative regulator by targeting both DYRK1A and TCF/LEF transcription factors for proteasome-mediated degradation. / DYRK1A es el miembro más estudiado de la familia de proteína quinasas DYRK, porque es una de las proteínas de la cromosoma humano 21 para la que cambios en la dosis génica dan lugar a alteraciones neuropatológicas. Las quinasas DYRK se activan por autofosforilación en un residuo tirosina localizado en el lazo de activación, un evento único que ocurre durante la traducción. Como consecuencia, DYRK1A sería constitutivamente activa una vez se ha sintetizado. Sin embargo, DYRK1A es extremadamente sensible a la dosis génica, y por tanto es predecible que no sólo su actividad, pero también los niveles de proteína han de estar estrictamente controlados por mecanismos reguladores que todavía no han sido caracterizados. En este trabajo, la proteína quinasa NLK ha sido identificada como un nuevo regulador de la estabilidad de DYRK1A. DYRK1A interacciona con NLK en condiciones fisiológicas, y la interacción tiene como resultado la fosforilación de DYRK1A en residuos serina/treonina, varios de los cuales han sido identificados por espectrometría de masas. La interacción con NLK y la subsecuente fosforilación promueven la degradación de DYRK1A vía el proteasoma. Además, la degradación de DYRK1A es inducida por estimulación de la células con Wnt1 o Wnt3a, o por sobreexpresión de miembros de la cascada de señalización de Wnt, como el receptor Frizzled-1 o de un activador de NLK como HIPK2. Finalmente, se ha demostrado que DYRK1A se une y fosforila -catenina y TCF-4. La fosforilación de, al menos, -catenina es responsable del incremento de la actividad transcripcional dependiente de esta proteína en presencia de DYRK1A. Todos estos resultados sugieren que DYRK1A actúa como un factor positivo en la vía de señalización Wnt--catenina y NLK actúa como un regulador negativo al inducir la degradación vía proteasoma no sólo de los factores de transcripción TCF/LEF sino también del modulador positivo DYRK1A.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:58Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-02-17Bitstream added on 2014-06-13T18:08:59Z : No. of bitstreams: 1 ishii_pl_me_rcla.pdf: 341469 bytes, checksum: 30957c71a427ca667e0c86edb9d40228 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A Nutrigenômica é definida como o efeito da dieta na expressão gênica, e a extensão pela qual as diferenças genéticas entre os indivíduos influenciam a resposta a um padrão específico de dieta, à ingestão de alimentos funcionais e à suplementação de micronutrientes, em termos de um resultado para a saúde humana. A α-tomatina é um glicoalcalóide encontrado no tomate (Lycopersicon esculentum) que possui funções biológicas importantes como a redução dos níveis de colesterol LDL, inibição do crescimento de células cancerosas, estimulação do sistema imune e efeito antimetastático. O objetivo deste estudo foi avaliar a citotoxicidade da α-tomatina, os seus efeitos na proliferação celular, na indução de apoptose e expressão de RNAm dos genes APC, Ciclina A2, Catenina, CASP9, BAK, BAX e BCL-XL em células HT29. As células foram cultivadas em meio de cultura DMEM, suplementado com 10% de soro bovino fetal, e tratadas nas concentrações de 0,1, 1 e 10 μg/mL para o ensaio do MTT e proliferação celular. Na análise de apoptose morfológica utilizou-se as concentrações de 0,1, 1 e 2 μg/mL. Já para a avaliação da expressão gênica utilizou-se a concentração de 1 μg/mL. Após 12 horas de tratamento, o RNA das células foi extraído e a expressão dos genes foi avaliada através do método de PCR em tempo real. O gene GPDH foi utilizado como normalizador. A análise estatística foi realizada por ANOVA/Tukey para o ensaio do MTT. Os resultados do ensaio de cinética de proliferação celular, viabilidade celular e avaliação da indução de apoptose foram analisados estatisticamente através de ANOVA/Dunnet, e para a análise da expressão gênica utilizou-se o método de Pfaffl et al. (2002), através do cálculo estimado pelo método ΔΔCt. Os estudos experimentais indicaram que a α-tomatina foi citotóxica apenas na concentração de 10 μg/mL... / Nutrigenomics is defined as the effect of diet on gene expression, and the extent to which genetic differences between individuals influence the response to a specific pattern of diet, intake of functional foods and micronutrient supplementation, in terms of a result for human health. The α- tomatine is highlighted as a glycoalkaloid found in tomato (Lycopersicon esculentum) that has important biological functions such as reducing levels of LDL cholesterol, inhibit cancer cell growth, stimulation of the immune system and antimetastátic effect. In view of these considerations, the objective of this study was to evaluate the cytotoxicity of α-tomatine, their effects on cell proliferation, induction of apoptosis and morphological expression of mRNA of APC gene, Cyclin A2, β-Catenin, CASP9, BAK, BAX and BCL-XL in HT29 cells. The cells were grown in DMEM culture medium supplemented with 10% fetal bovine serum, and treated at concentrations of 0.1, 1 and 10μg/mL for the MTT assay and cell proliferation. In the morphological analysis of apoptosis, we used concentrations of 0.1, 1 and 2μg/mL. As for the evaluation of gene expression we used a concentration of 1 mg/mL. After 12 hours of treatment, the RNA from cells was extracted and gene expression was evaluated by the method of real-time PCR. The gene GPDH was used as normalizer. Statistical analysis was performed by ANOVA / Tukey test for MTT. The test results of kinetics of cell proliferation, cell viability and assessment of apoptosis were analyzed with ANOVA / Dunnet, and for analysis of gene expression we used the method of Pfaffl et al. (2002), by calculating estimated by ΔΔCt. Experimental studies suggested that α-tomatine was cytotoxic only at concentration of 10μg/mL. In the evaluation of cell proliferation were no significant differences in the treatments with α-tomatine, except that for the concentration... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-07-29T14:46:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Aline Machado Rapello do Nascimento.pdf: 1403008 bytes, checksum: d5736b2cde9e7188a689131927c1127c (MD5) Previous issue date: 2007-12-31 / To evaluate whether complete arteriovenous ischemia followed by reperfusion of mesenteric blood flow aggravates lesions involving small intestine of horses, &#946;--catenin and occludin expressions were measured in jejune epithelia of seven equines, without definite breed. The animals had been submitted to aseptic ventral midline celiotomy and five jejune segments collected corresponding to a baseline segment, a five minutes segment subjected to ischemia, and three segments collected after being subjected to five, sixty and one hundred and twenty minutes of tecidual reperfusion, respectively. Experimentally induced lesions created by total arteriovenous occlusion followed by reperfusion were similar to naturally acquired lesions, as much in the period of ischemia as in the aggravation of the injuries observed during reperfusion. Changes that occur when ischemic intestine is reperfused are progressive, and include mucosal, submucosal, and serosal edema; polymorphonuclear and mononuclear cell infiltrates; and alterations in vascular patterns. Imunohistochemistry analyses have shown strong staining baseline segments for &#946;-catenin in all animals and its progressive lack of staining during ischemia and reperfusion treatments. That indicates progressive lack of intercellular adherence. Similar results of specific decreases of total expression of Occludin, a tight junction protein, were observed. This protein is involved in regulating the movement of solutes in the paracellular pathway and also plays an important role in the maintenance of cell polarity. The reduction of expressions of both intercellular proteins measured directly demonstrates &#946;-catenin injury due to progression of edema during ischemia and its aggravation during reperfusion and also shows an increase of the permeability of paracelular pathways and its related consequences to degradation of Ocludina. / Realizou-se o estudo da patogenia da lesão por isquemia arteriovenosa completa dos vasos mesentéricos e reperfusão jejunal em eqüinos por meio da avaliação da expressão das proteínas &#946;-catenina e ocludina presentes neste epitélio, em sete eqüinos, sem raça definida. Os animais foram submetidos á celiotomia asséptica na linha alba e coleta de cinco segmentos jejunais correspondestes á um segmento controle, um segmento tratado com isquemia por cinco minutos, e três segmentos coletados durante o período de reperfusão tecidual aos cinco, sessenta e cento e vinte minutos, respectivamente. As lesões induzidas experimentalmente por oclusão arteriovenosa total seguida por reperfusão foram similares às lesões adquiridas naturalmente tanto no período de isquemia quanto no agravamento das lesões observado nos tempos de reperfusão. As mudanças que ocorrem quando um intestino isquêmico sofre reperfusão são progressivas e incluem edema de mucosa, submucosa e serosa, infiltração polimorfonuclear e mononuclear e alterações nos padrões vasculares. A análise imunoistoquímica revelou forte expressão da &#946;- catenina em todos os animais e a sua progressiva perda da expressão quando submetidos à isquemia e reperfusão. Isso indica perda progressiva da adesividade intercelular. Resultados similares de redução do total da expressão da Ocludina, uma proteína de junção de oclusão, foram observados. Esta proteína está envolvida na regulação dos movimentos dos solutos na via paracelular e também desempenha um importante papel na manutenção da polaridade celular. A diminuição da expressão de ambas as proteínas intercelulares demonstra a lesão à &#946;-catenina devido à progressão do edema durante isquemia e o agravamento durante a reperfusão tecidual e também mostra um aumento na permeabilidade da via paracelular e suas conseqüências relacionadas à degradação da Ocludina.

INTRODUÇÃO: A molécula HIG2 pode atuar como agonista da via Wnt/beta-catenina, pois se liga ao receptor Frizzled 10 e induz a expressão de genes da mesma. Dados recentes do nosso grupo mostraram expressão diferencial do gene HIG2 em células mononucleares do sangue periférico e em especial linfócitos T CD4+ naïve, mas não em células diferenciadas de memória em indivíduos sadios. Também observamos in vitro em linfócitos T CD4+ de indivíduos saudáveis que o peptídeo sintético HIG2 induziu a ativação da via Wnt/beta-catenina, produção de HIG2 e outros produtos da via, além da proliferação de células T CD4+ naïve sugerindo um papel do HIG2 na proliferação homeostática de linfócitos T CD4+. HIPÓTESE: Como as células T CD4+ naïve são diretamente exportadas pelo timo, os níveis aumentados de HIG2 neste tipo celular sejam decorrentes da ativação da via Wnt/?-catenina nos estágios tardios da diferenciação de timócitos. Portanto, as células T CD4+ naïve e timócitos simples positivos para CD4 (SP CD4) apresentariam perfil semelhante de expressão de HIG2 e genes da via Wnt/beta-catenina, incluindo receptores, fatores de transcrição, genes estruturais da via e alvos quando comparadas as demais populações celulares. OBJETIVO: Avaliar a expressão de HIG2 e outros genes da via Wnt/beta-catenina em timócitos e linfócitos T CD4+ naïve e memória de camundongos. MÉTODOS: Isolamos timócitos duplo negativos (DN), timócitos duplo positivos (DP), simples positivos para CD4 e CD8 (SP CD4 e SP CD8) de timo e também células T CD4+ naïve e memória do baço dos mesmos camundongos pelo procedimento de citometria de fluxo. Analisamos a expressão de vários genes da via Wnt/beta-catenina por PCR em tempo real. RESULTADOS: Em timócitos DN há expressão significativa dos genes que codificam para Frizzled 6, LRP5, TCF-1 e TCF-4 em relação as outras populações celulares. Nos timócitos DP há maior expressão dos genes que codificam para LRP5, LRP6, beta-catenina, GSK-3beta, TCF-1 e Bcl-XL em relação às demais populações. Em timócitos SP CD4 foi detectada expressão diferencial de genes que codificam para Frizzled 10, LRP6, beta-catenina, LEF-1 e HIG2 enquanto que na população de timócitos SP CD8 não observamos expressão significativa de nenhum gene da via Wnt/beta-catenina. Nas células T CD4+ naïve há expressão significativa de Frizzled 5 e Frizzled 10 quando comparadas a timócitos SP CD8 e células T CD4+ de memória . Já nos linfócitos T CD4+ de memória, detectamos maior expressão de Frizzled 6, TCF-4, Bcl-XL e ciclina D1 em relação as demais populações. CONCLUSÃO: Cada população apresenta um perfil distinto de expressão gênica. As maiores semelhanças ocorrem entre os timócitos DN e DP onde as principais diferenças são a expressão de Frizzled 6 e Ciclina D1.Os timócitos SP CD4 e as células T CD4+ naïve não apresentaram níveis semelhantes de expressão gênica de elementos da via Wnt canônica, o que não corrobora a hipótese de que o perfil transcripcional de timócitos SP CD4 e linfócitos T CD4+ naïve é semelhante. Ainda, não observamos expressão aumentada de HIG2 em linfócitos T CD4+ naïve comparados aos de memória, o que contrasta com os resultados obtidos anteriormente por nosso grupo com amostras humanas sugerindo que camundongos não regulam a expressão de HIG2 em linfócitos T CD4+ como os seres humanos / INTRODUCTION: HIG2 molecule can act as an agonist of Wnt/?-catenin pathway, because it able to bind to Frizzled 10 receptor and induce the expression of the genes related to this pathway. Recent data from our group have shown differential expression of the HIG2 gene in peripheral blood mononuclear cells, and particularly in naive CD4 + T cells, but not in memory T cells in healthy individuals. We have also observed that inducing the CD4 + T lymphocytes from healthy individuals with HIG2 synthetic peptide in vitro, led to the activation of Wnt/beta-catenin pathway, HIG2 production and expression of other target genes of this pathway and the proliferation of naïve CD4 + T cells, suggesting that HIG2 may play a role in homeostatic proliferation of CD4+ T cells. HYPOTHESIS: As naïve CD4 + T cells are directly exported from the thymus, we have hypothesized that increased levels of HIG2 in this cell type is due to the activation of Wnt/beta-catenin pathway in the later stages of thymocyte differentiation. Therefore, naïve CD4 + T cells and CD4 single-positive thymocytes (CD4 SP) may share a similar pattern of gene expression of HIG2 and Wnt/beta-catenin genes (genes that encodes receptors and co-receptors, transcription factors, structural and target genes) when compared to other cell populations. AIM: our major aim is to evaluate the expression of HIG2 and other genes of the Wnt/beta-catenin in thymocytes, naïve CD4 + T lymphocytes and memory CD4+ T cells from mice. METHODS: We have isolated thymocytes double negative (DN) T cells, positive double positive (DP) T cells, CD4 and CD8 single-positive thymocytes (CD4 SP and CD8 SP) of thymus from BALB/c mice and we have also isolated naïve CD4 + T cells and memory CD4+ T cells of the spleen from the same mice we have used the thymus. We have analysed the expression of several genes of Wnt/beta-catenin by real time PCR RESULTS: In DN cells there was expression of the Frizzled 6, LRP5, TCF-1 and TCF-4 genes compared to other cell populations. In DP thymocytes it could be observed a greater expression of LRP5, LRP6, beta-catenin, GSK-3beta, TCF-1 and Bcl-XL genes compared to other populations. In CD4 SP thymocytes, it was detected differential expression of the Frizzled 10, LRP6, beta-catenin, LEF-1 HIG2 genes and in CD8 SP cells we could not observe significant expression of any gene of Wnt/?-catenin pathway. In naïve CD4 + T cells there was a significant expression of Frizzled5 and Frizzled 10 genes when compared to all the samples. In memory CD4 + T cells, we have detected higher expression of Frizzled 6, TCF-4, Bcl-XL and cyclin D1 genes than in any other populations. CONCLUSION: Each population has a distinct gene expression pattern. The biggest similarities occur between DN and DP thymocytes where the main differences are the expression of Frizzled 6 and cyclin D1.However, the pattern of gene expression in SP thymocytes is not similar to those presented by naïve CD4+ T cells. Moreover, we have not observed increased expression of HIG2 in naïve CD4 + lymphocytes compared to memory CD4+ T cells, which contrasts the results obtained previously by our group with human samples suggesting that mice might not regulate the HIG2 expression in CD4 + T lymphocytes as human beings do

Introdução: O câncer de laringe é a segunda neoplasia maligna mais comum no segmento cervicofacial. As caderinas epiteliais (E-caderinas) em conjunto com cateninas formam o complexo E-caderina-catenina que atuam na adesão célula-célula. A perda dessa molécula pode levar à redução ou até mesmo ausência de expressão de E-caderina na membrana celular, acúmulo citoplasmático de beta-catenina e sua translocação para o núcleo, contribuindo para eventos carcinogênicos. Objetivo: Avaliar a expressão de E-caderina e beta-catenina em pacientes com tumor laríngeo precoce ou avançado e na presença ou ausência de metástase cervical. Métodos: Realizou-se estudo retrospectivo de 52 pacientes portadores de carcinoma epidermoide glótico ou supraglótico, tratados entre 1998 a 2011 e avaliados de acordo com o sítio de localização tumoral, grau de diferenciação histológica, estádio TNM, dados de sobrevida e confrontados com a expressão imunoistoquímica de E-caderina e beta-catenina. Resultados: Observou-se associação com significância estatística entre a queda da expressão de E-caderina com a localização supraglótica da lesão, a presença de metástase cervical, em tumores pouco diferenciados e em tumores localmente avançados quando em topografia glótica. Com relação à expressão de beta-catenina, também foi encontrada significância estatística ao relacionar a presença de metástase cervical e tumor de baixa diferenciação com a diminuição de expressão deste marcador. Quanto à análise de sobrevida, a baixa expressão de beta-catenina está relacionada a pior sobrevida global e a redução da expressão de ambos os marcadores a pior sobrevida livre de doença. Conclusão: A expressão anômala dos marcadores estudados levam a impacto prognóstico por poder propiciar tumores com maior agressividade local e presença de metástase cervical / Introduction: Larynx cancer is the second most common malignant neoplasm in the cervicofacial segment. Epithelial cadherins (E-cadherins) together with catenins form the E-cadherin-catenin complex that acts on cell-to-cell adhesion. The loss of this molecule may lead to the reduction or even absence of E-cadherin expression in the cell membrane, cytoplasmic accumulation of beta-catenin and its translocation to the nucleus, contributing to carcinogenic events. Objective: To evaluate the expression of E-cadherin and beta-catenin in patients with laryngeal tumor in different locoregional situations. Methods: A study retrospective of 52 patients with glottic or supraglottic squamous cell carcinoma treated between 1998 and 2011 was conducted, evaluated according to the tumor localization site, the degree of histological differentiation, TNM stage and survival analysis. These data were confronted with the immunohistochemical expression of E-cadherin and ?-catenin. Results: We observed statistically significant association between the fall of E-cadherin expression and the supraglottic localization of the lesion, the presence of cervical metastasis, poorly differentiated tumors and locally advanced tumors when in glottic topography. Related to the expression of beta-catenin, statistical significance was also found for the presence of cervical metastasis and tumor of low differentiation with the decreased expression of this marker. Regarding survival analysis, the low expression of beta-catenin is related to worse overall survival and the reduction of expression of both markers to worse disease-free survival. Conclusion: The anomalous expression of the markers studied leads to a prognostic impact in order to provide tumors with greater local aggressiveness and presence of cervical metastasis

Introdução: Agregação familial é observada em cerca de 10% dos casos de câncer e 1 a 3% é hereditário. O tipo difuso pode estar relacionado à agregação familial e a alterações genéticas no gene CDH1, que codifica a proteína E-caderina. Alterações na imunoexpressão de Beta-catenina e p53 também são observadas. Objetivos: Analisar a imunoexpressão da E-caderina, Beta-catenina e TP53 em adenocarcinomas gástricos de pacientes com câncer gástrico familial e comparar com os dados clinicopatológicos, além dos achados das alterações genéticas destes pacientes, estudadas previamente nesta Instituição. Casuística e Métodos: Vinte e seis casos de adenocarcinoma gástrico em blocos de parafina de pacientes do HC-FMUSP foram submetidos ao estudo imunoistoquímico para detecção e análise do padrão de imunoexpressão da E-caderina, Beta-catenina e TP53 através do método da streptavidina-biotina-peroxidase. A análise da imunoexpressão dos marcadores foi classificada segundo escala de intensidade e distribuição e os testes estatísticos utilizados foram o Teste t de Student e Exato de Fisher. Resultados: A localização predominante do tumor foi no antro (61,5%). 11 (42,3%) casos alterados para a imunoexpressão da E-caderina, sendo todos do tipo difuso; 15 (57,7%) casos normais, sendo 9 do tipo difuso e 6 do tipo intestinal (p=0,02). Em estudo prévio realizado nesta instituição, uma mutação missense no exon 12 do gene CDH1, códon 617, nucleotídeo 1849 G>A foi encontrada no mesmo caso em que foi observada ausência de imunorreatividade da E-caderina. 11 (42,3%) casos alterados para a imunoexpressão de Beta-catenina e 46,2% de imunorreatividade nuclear positiva para TP53. Conclusões: 1) O tipo difuso de Laurén está associado à alteração da imunoexpressão da E-caderina no Câncer Gástrico Familial; 2) Não houve associação entre a imunoexpressão da E-caderina, idade, gênero e localização do tumor; tampouco houve associação entre a imunoexpressão da Beta-catenina e os dados clínico-patológicos; houve associação inversa entre a imunoexpressão da E-caderina e TP53; 3) Nos casos em que foram detectadas alterações na imunoexpressão, parece haver duas rotas distintas de carcinogênese envolvidas no CGF. / Introduction: Familial clustering is observed in about 10% of the gastric cancer cases and 1-3% is hereditary. Diffuse type gastric cancer is related to genetic alterations in CDH1 gene, which translates the E-cadherin protein. The abnormal expression of E-cadherin is characterized by low expression of cytoplasmatic staining, or loss of membranous immunoreactivity. Aim: to analyze the immunoexpression of E-cadherin, Beta-catenin and TP53 in gastric adenocarcinomas in patients with Familial Gastric Cancer and compare with clinical-pathologic data, including the genetic alterations of these patients, found previously on this institution. Methods: 26 cases of paraffin-embedded gastric adenocarcinoma tissue of patients of Hospital das Clinicas - School of Medicine of University of Sao Paulo underwent immunostaining to detect the presence and to analyze the pattern of immunoexpression of E-cadherin, Beta-catenin and TP53 using Streptavidine-Biotine-Peroxidade technique. The immunoexpression evaluation was performed utilizing a semiquantitative scale for intensity and distribution. The statistical analysis was done through Students t test and Fishers Exact test. Results: E-cadherin immunoexpression was negative in 11 cases (42.3%), and all of them were diffuse type of Laurén. 15 cases (57.7%) were positive for E-cadherin, from which 9 were of the diffuse type and 6 of intestinal type (p=0.02). In previous study performed on this institution, one missense mutation in exon 12 of CDH1 gene, codon 617, nucleotide 1849 G>A was found on the same case that absence of E-cadherin immunostaining was observed. 61.5% of the tumors were located in the antrum. Beta-catenin immunoexpression was altered in 43.2% and TP53 nuclear immunoreactivity was positive in 46.2% of the tumors. TP53 was solely detected in 12 (46.2%) of the tumors, while E-cadherin was altered in 10/26 (38.5%) negative TP53 tumors, p=0.01. Conclusions: 1) Diffuse type of Laurén is associated to E-cadherin immunoexpression alteration in Familial Gastric Cancer; 2) There was no association between E-cadherin immunoexpression and age, gender or tumor location, as well as there was no association between Beta-catenin and the clinical-pathologic data; there was an inverse association between immunoexpression of TP53 and E-cadherin; 3) There may be two distinct carcinogenesis pathways on familial gastric cancer cases that imunoexpression alterations were detected.

Neoplasias malignas das glândulas salivares são lesões raras e o mecanismo pelo qual esses tumores progridem ainda não está completamente esclarecido na literatura. A galectina-3 é uma proteína multifuncional expressa em uma grande quantidade de tecidos normais, mas que também tem sido associada à progressão tumoral de neoplasias malignas da tireóide, próstata e neoplasias gástricas. Estudos prévios demonstraram que a galectina-3 está também expressa em algumas neoplasias malignas das glândulas salivares como carcinoma adenóide cístico e adenocarcinoma polimorfo de baixo grau de malignidade. Recentemente foi sugerido que a superexpressão da galectina-3 controla alterações nos níveis de expressão de alguns reguladores do ciclo celular, dentre eles a ciclina D1. Além disso, outros estudos revelaram que a ciclina D1 é ativada pela -catenina de uma maneira dependente da galectina-3. O objetivo desse trabalho foi comparar a marcação imunoistoquímica nuclear e / ou citoplasmática da galectina-3 no carcinoma adenóide cístico e adenocarcinoma polimorfo de baixo grau tentando relacioná-la à marcação da -catenina e ciclina D1. Foram realizadas reações de imunoistoquímica para as três proteínas em 15 casos de carcinoma adenóide cístico e em 15 casos de adenocarcinoma polimorfo de baixo grau utilizando-se material parafinado. Para a galectina-3 os carcinomas adenóides císticos apresentaram marcação imunoistoquímica apenas nas células luminais, predominantemente no núcleo. Todos os casos de adenocarcinoma polimorfo de baixo grau revelaram uma marcação predominantemente citoplasmática para essa proteína. Ambos os tumores exibiram intensa marcação citoplasmática e/ou nuclear para a -catenina na maioria dos casos. Não houve imunorreatividade para a ciclina D1 em 14/15 casos de adenocarcinoma polimorfo de baixo grau. Em contraste, os carcinomas adenóides císticos revelaram marcação nuclear específica para a ciclina D1 em 10 de 15 casos estudados em mais de 5% das células neoplásicas e essa marcação estava associada à marcação citoplasmática e nuclear da galectina-3 (p<0,05). Esses resultados sugerem que nos carcinomas adenóides císticos a expressão da galectina-3 pode exercer uma função de proliferação celular e parece estar relacionada à diferenciação celular no adenocarcinoma polimorfo de baixo grau. Além disso, a perda de expressão da galectina-3 no carcinoma adenóide cístico pode estar associada a um comportamento clínico mais agressivo dessa lesão. Embora a -catenina pareça exercer algum papel no mecanismo de carcinogênese dessas duas lesões, ela não parece se ligar à galectina-3 para ativar a ciclina D1. / Salivary gland tumors are uncommon and the mechanism by which malignant tumors progresses is still undefined. In a previous study it was shown that galectin-3 is expressed in malignant salivary gland neoplasms as adenoid cystic carcinoma and polymorphous low-grade adenocarcinoma. Galectin-3 is a multifunctional protein of a group of galactoside-binding lectins expressed in a variety of normal cells, but also has been implicated in tumor progression of some malignancies as thyroid, prostate and gastric cancers. Recently, it has been suggested that galectin-3 may be an important mediator of the -catenin/Wnt pathway. Moreover, nuclear galectin-3 expression has been implicated in cell proliferation, promoting cyclin D1 activation. Thus, in the present study we aimed to correlate galectin-3 expression, either nuclear or cytoplasmic, with the expression of -catenin (nuclear/cytoplasmic) and cyclin D1 (nuclear) in 15 cases of adenoid cystic carcinoma and in 15 cases of polymorphous low-grade adenocarcinoma. For galectin-3, adenoid cystic carcinomas showed specific staining only in luminal cells, mainly in the nuclei. In the cases of polymorphous low-grade adenocarcinoma, all tumor cells revealed a positive, mostly cytoplasmic, reaction to galectin-3. Both tumors showed intense cytoplasmic/nuclear staining for -catenin in the majority of cases. Cyclin D1 immunoreactivity was not detected in 14 of the 15 polymorphous low-grade adenocarcinomas studied. In contrast, adenoid cystic carcinomas showed specific nuclear staining for cyclin D1 in 10 of 15 cases studied in more than 5% of the neoplastic cells. Cyclin D1 expression was correlated with cytoplasmic and nuclear galectin-3 expression in adenoid cystic carcinomas (p<0,05). These results suggest that in adenoid cystic carcinoma galectin-3 may play a role in cellular proliferation through cyclin D1 activation. In polymorphous low-grade adenocarcinoma gal-3 expression seems to be associated with cellular differentiation. In addition, loss of cytoplasmic expression of galectin-3 in adenoid cystic carcinomas may be related to a more aggressive behavior of these lesions. Although -catenin seems to play a role in carcinogenesis, in both lesions, it seems that it does not bind to galectin-3 for cyclin D1 stimulation.

Introdução: A endometriose é uma doença ginecológica comum caracterizada pela presença de estroma e/ou glândula endometrial fora da cavidade uterina, e que não possui sua etiopatogenia bem estabelecida. A transição epitélio-mesênquima (TEM) é um processo que consiste em uma série de mudanças no fenótipo de células epiteliais que fazem com que estas células assumam características de células mesenquimais. Assim como observado na TEM, as células endometriais no contexto da endometriose apresentam capacidade migratória, invasibilidade e elevada resistência à apoptose. As moléculas de adesão têm adquirido crescente relevância na TEM, pois relacionam-se à perda de adesão célula-célula com o aumento da invasão e metástase. O objetivo deste estudo foi investigar a expressão de marcadores relacionados com a TEM na endometriose superficial, ovariana e profunda. Pacientes e Métodos: Foram selecionadas 103 mulheres que preenchiam os critérios de inclusão estabelecidos, constituindo 2 grupos de estudo independentes entre si: 18 mulheres com endometriose peritoneal, ovariana e profunda concomitantes; 85 mulheres com endometriose ovariana e/ou profunda, dividido em 44 mulheres com endometriose ovariana e 41 com endometriose intestinal. Através de reações de imunoistoquímica, a expressão proteica dos marcadores e-caderina, n-caderina, betacatenina, receptor de estrogênio e receptor de progesterona foram avaliados nos tecidos de interesse em cada grupo de estudo. Além dos locais de doença, as mulheres foram avaliadas quanto à relação com a fase do ciclo e à classificação histológica da doença. Resultados: As lesões de endometriose de ovário mostraram uma menor expressão de n-caderina em comparação às lesões de intestino e peritônio (p=0,032). O receptor de estrogênio e receptor de progesterona se mostraram significativamente menos expressos no componente epitelial da doença de ovário do que no epitélio da endometriose de peritônio e intestino (p=0,002; p=0,48). A expressão da n-caderina apresentou uma correlação direta com a expressão do receptor de estrogênio no estroma da endometriose de intestino (p=0,036). Conclusão: Estes resultados sugerem que a transição epitélio-mesênquima esteja envolvida na etiopatogenia da endometriose, demonstrando que a doença de ovário se comporta de maneira diferente da doença superficial e da doença infiltrativa profunda, sendo a n-caderina um importante fator envolvido neste processo possivelmente influenciada pela ação do estrogênio / Background: Endometriosis is a common gynecological disease defined as the presence of ectopic endometrial glands and stroma outside the uterine cavity, and its pathogenesis is not well established. The epithelial to mesenchymal transition (EMT) is a process consisting of a series of changes in the phenotype of epithelial cells that make these cells assume the characteristics of mesenchymal cells. As observed in the EMT, endometrial cells in the context of endometriosis have the capacity of migration, invasiveness and high resistance to apoptosis. . The adhesion molecules have become progressively relevant in EMT, in view of the cell-to-cell adhesion loss, with increased invasion and metastasis. The goal of this study was to investigate the expression of markers related to EMT in superficial, ovarian and deep endometriosis. Patients and Methods: 103 women were selected who met the inclusion criteria, constituting two independent study groups: 18 women with peritoneal, ovarian and deep concomitant endometriosis, 85 women with ovarian and / or deep endometriosis, divided in 44 women with ovarian endometriosis and 41 with intestinal endometriosis. Through immunohistochemical reactions, the protein expression of e-cadherin, ncadherin, beta-catenin, estrogen receptor and progesterone receptor markers were evaluated in tissues of interest in each study group. In addition to the sites of the disease, menstrual phase and histological classification (well-differentiated, undifferentiated, mixed pattern and stromal) of the disease were recorded. Results: The ovarian endometrisis showed less n-cadherin marker than lesions of the peritoneum and bowel (p=0,032). Ovarian endometriosis also showed markedly decreased expression of estrogen and progesterone receptors in epithelial cells, compared with peritoneal and deep endometriosis (p=0,002; p=0,48). The expression of N-cadherin showed a direct correlation with estrogen receptor expression in the stroma of bowel endometriosis (p = 0.036). Conclusion: These results suggest that epithelial to mesenchymal transition involved in the pathogenesis of endometriosis, demonstrating that the ovary disease behaves differently disease than peritoneal and deep disease, so that the n-cadherin is an important factor involved in this process, possibly influenced by the action of estrogen