In vivo, l'épiderme se régénère en continu à travers la prolifération des cellules souches basales. Celles-ci obtenues à partir d'une biopsie cutanée, peuvent être greffées pour régénérer la peau. En vue de la transplantation kératinocytaire, nous avons étudié in vitro leur capacité à régénérer un épithélium en fonction de leur origine anatomique, et précisé leur phénotype. Par rapport aux différents sites étudiés, nous montrons que les kératinocytes issus de prépuce ont la plus grande capacité proliférative et régénérative, associée à une expression exacerbée de marqueurs d'immaturité, la p63 et la kératine 19 et une faible expression des marqueurs de la différenciation (involucrine et filagrine). Ces résultats nous ont amené à utiliser ces kératinocytes préputiaux en suspension pour transplanter les enfants brûlés, ce qui évite l'utilisation d'une membrane de transfert, source potentielle d'inefficacité. La transplantation des brûlures avec ces cellules autologues conduit à une épithélialisation accélérée avec une cicatrice de grande qualité. Ces résultats et la facilité de la procédure nous permettent de proposer la greffe autologue kératinocytaire de prépuce comme une procédure standard, qui peut être ajoutée à l'arsenal thérapeutique des équipes prenant en charge les enfants brûlés. / In vivo, the skin regenerates continuously through the proliferation of basal stem cells. That can be obtained from a skin biopsy and may be grafted to regenerate skin. In vitro, we studied the regenerative keratinocyte capacities according to site donors, and we noted that keratinocytes from foreskin have the greatest proliferative and regenerative capacities, combined with expression of progenitor cell markers (p63 and keratin 19) and low expression of epidermal differentiation markers (involucrin and filaggrin). These results led us to use these preputial keratinocytes in suspension for graft in burned children. Apply directly cells with a suspension device, eliminates the use of a transfer membrane and a potential source of inefficiency. In our study, boys grafted with autologous keratinocytes isolated from foreskin leads to epithelialization with a high quality of scar. This technique is easily applicable to a large number of pediatric surgery teams. Our clinical success and the safety of the procedure in the operating room enable us to propose the kératinocyataire autologous transplantation as a standard procedure, which can be added to the therapeutic armamentarium in burns.

RAS é a oncoproteína mutada mais encontrada em tumores sólidos, o que mostra seu grande potencial transformador. Não obstante, células que carregam essa mutação apresentam estresse oncogênico gerado por excessiva sinalização mitogênica, o que direciona preferencialmente as células portadoras para a morte em detrimento da transformação maligna. Basicamente a transformação direcionadapela proteína RAS mutada age sinergicamente com deficiência em supressores de tumor para evitar o destino celular preferencial frente ao estresse oncogênico. Este é o caso da interação observada entre HRASG12V e E6E7 de HPV, sendo que a infecção pelo vírus aparentemente é condição necessária em cânceres cervicais e muito presente em cânceres de cabeça e pescoço. A sinergia entre HRASG12V e queratinócitos imortalizados por E6E7 desequilibra o balanço homeostático entre subsistemas pró-morte, devido ao estresse oncogênico, ou pró-sobrevivência, que garante viabilidade por meio de novos padrões de robustez celular. Em ambos os casos, o processo que gera uma célula transformada, ou as elimina pelo caminho, apresenta pistas de vulnerabilidades às quais os queratinócitos são expostos uma vez que carreguem tal combinação de fatores. Apresentamos nesse trabalho os principais atores que compõem o estresse oncogênico deletério desencadeado pela atividade de HRASG12V: estresse mitogênico, replicativo e oxidativo; todos eles são responsáveis por provocar dano no DNA, que por sua vez promove parada no ciclo celular até que as células não possam mais suportar tamanha injúria, o que acaba levando-as maciçamente a morte. Mostramos que a alta intensidade mitogênica gerada pela atividade de HRASG12V provoca um desequilíbrio metabólico que leva ao aumento de espécies oxidantes e ao estresse replicativo. Todavia, um tratamento exógeno com o antioxidante NAC restaurou parcialmente a proliferação celular assim como a sobrevivência, agindo como um amenizador do dano no DNA gerado pelas espécies oxidantes. Já uma suplementação com nucleosídeos exógenos restaurou fortemente a sobrevivência celular, sugerindo que o desequilíbrio metabólico pode estar agindo no pool de nucleotídeos, o que poderia ser uma das causas do estresse replicativo. Como mecanismo intrínseco de sobrevivência, a autofagia se intensifica em resposta ao desequilíbrio sistêmico desencadeado pela atividade de HRASG12V. Por meio de sublinhagens defectivas para autofagia, mostramos que o processo retarda o aparecimento de espécies oxidantes, além de evitar sua elevação a níveis ainda mais drásticos, o que consequentemente ameniza o dano no DNA observado. Além disso, hipotetizamos que o processo poderia também estar contribuindo fortemente para a reciclagem de substratos básicos tais como nucleotídeos, assim acarretando em menor estresse replicativo. Na literatura atual, debate-se a noção de que, dependendo do contexto celular, a autofagia poderia promover tanto morte celular como transformação maligna. Entretanto, nesta tese mostramos que, na interação entre queratinócitos, E6E7 e HRASG12V, a autofagia é um mecanismo pró-sobrevivência: se por um lado a demanda autofágica é recrutada além de sua capacidade de processamento, fazendo com que seu fluxo seja bloqueado, por outro a eliminação do sistema se torna demasiadamente deletério, direcionando as células expostas ao estresse oncogênico causado pela atividade de HRASG12V necessariamente à morte. / Mutated RAS is the oncoprotein most found in solid tumors, which shows its huge tumorogenic potential. Despite of that, mutated RAS triggers a strong oncogenic stress, which very often drives cells to death instead of malignant transformation. Basically, the success of the Ras malignant transformation driving activity depends on a synergy between that mutated protein and inhibition of tumor suppression genes. This is the case of the interaction between HRASG12V and E6E7 proteins of HPV: It seems that HPV infection is an initial necessary condition for cervical cancer development and is also very frequent in head and neck carcinomas. The synergy between HRASG12V and E6E7, in pre-malignant keratinocytes, imbalances the homeostasis between pro-death subsystems, due oncogenic stress, and pro-survival subsystems that ensure new patterns of cellular robustness. In both cases, the process responsible for generating a malignant transformed cell or, more frequently, eliminating those cells carrying the combined characteristics, exposes the keratinocytes vulnerabilities. We showed in this work that the main actors of deleterious oncogenic stress triggered by HRASG12V activity are: Mitogenic, replicative and oxidative stresses; all of them induce DNA damage, hence cell cycle arrests until the cell cannot resist such injury any further, which leads to massive cell death. The intense mitogenic activity triggered by HRASG12Vcauses metabolic imbalance, which is responsible for an increase of oxidative species and replicative stress levels; the exogenous treatment with antioxidant NAC partially restored cell growth and cell survival, acting as a softener of the DNA damage caused by oxidative species. On the other hand, nucleoside supplementation strongly restored cell survival, suggesting that the aforementioned metabolic imbalance might be acting in the pool of nucleotides, hence it might be a possible cause of replicative stress. As an intrinsic survival mechanism, the autophagy is intensified in response to systemic imbalance triggered by HRASG12V activity. Through the autophagy defective subline, we showed that that mechanism both delays the increase of oxidative species and avoids their elevation to catastrophic highlevels. Furthermore, autophagy could strongly contribute to the recycling of basic substrates such as nucleotides, which might be mitigating the replicative stress. Nowadays, there is a debate on the role of autophagy promoting either malignant transformation or cell death depending on metabolic context. In this work, we showed an instance of the interaction between E6E7 and HRASG12V triggering autophagy pro-survival mechanisms and hence increasing general cell viability

O câncer não-melanoma corresponde a 25% de todos os tumores e é caracterizado por uma neoplasia dos queratinócitos. Evidências mostram que a resistência a apoptose é uma das características para o surgimento e evolução dos tumores malignos. A proposta deste trabalho foi estudar quais funções as moléculas BIM, PUMA e Fas desempenham nos queratinócitos quando submetidas à transformações celulares, como UVB e DMBA, e indutores de apoptose. Para isso foi estabelecido cultura primaria de queratinócitos de neonatos das linhagens C57Bl/6 WT; PUMA KO; LPR. As células foram tratadas com AD, VP-16, CHX, UVB e DMBA in vitro. Observamos a expressão de Bid, Bim, Bax no tratamento com UVB. Avaliamos o perfil de desenvolvimento do tumor nesses animais utilizando um modelo de tumorigenese química in vivo. Os queratinócitos deficientes em PUMA e Fas se comportam de maneira semelhante no tratamento com quimioterápicos, no entanto, no tratamento com carcinógenos a molécula Fas desempenha um papel mais relevante na indução de morte celular e no desenvolvimento da carcinogênese. / The non-melanoma cancer accounts for 25% of all tumors and is characterized by a neoplasm of keratinocytes. Evidence shows that apoptosis resistance is one of the characteristics for the emergence and development of malignant tumors. The This study investigated what roles the BIM, PUMA and Fas molecules play in keratinocytes when subjected to cell transformations, such as UVB and DMBA, and apoptosis inducers. For this, keratinocytes primary culture was established from neonatal skin to C57BL / 6 WT; PUMA KO; LPR. The cells were treated with AD, VP-16, CHX, UVB and DMBA in vitro. We observed the expression of Bid, Bim, Bax in treatment with UVB. We evaluated tumor development profile in these animals using a model of chemical tumorigenesis in vivo. PUMA-deficient keratinocytes and Fas mutant have similarly behave in chemotherapy treatment, however, Fas molecule plays a more important role in the induction of cell death with the treatment with carcinogens in the development and carcinogenesis.

Epitélios confluentes de queratinócitos autólogos, cultivados segundo metodologia padronizada por Rheinwald e Green em 1975, têm sido usados como enxertos em diferentes situações clínicas. Contudo, a presença de componentes xenobióticos empregados nesta metodologia implica na possibilidade de transmissão de zoonoses, príons e viroses aos pacientes, além de envolver questões éticas relacionadas à utilização de animais. Tais preocupações têm direcionado pesquisadores a buscar alternativas que superem este impasse; no entanto, as formulações obtidas até o momento não são completamente satisfatórias. Assim, nossa proposta neste estudo, foi omitir ou substituir os componentes xenobióticos tradicionalmente utilizados no meio para queratinócitos, por similares humanos. Como resultado, padronizamos um meio de cultura onde omitimos o emprego de toxina colérica, substituímos o soro fetal bovino por lisado de plaquetas humanas na concentração de 2,5% e a insulina de origem bovina foi substituída por insulina recombinante humana na mesma concentração do método original (5 μg/mL). Com os resultados obtidos foi possível concluir ser viável o cultivo de queratinócitos humanos, mantidos em meio de cultura livre de componentes xenobióticos. / Confluent epithelia of autologous keratinocytes, cultivated according to standardized methodology by Rheinwald and Green in 1975, have been used as grafts in different clinical situations. However, the presence of xenobiotics components applied in this method implies the possibility of transmission of zoonoses, príons, and viruses to patients, besides involving ethical issues related to the use of animals for components obtainment. Such concerns have driven researchers to seek alternatives that overcome this deadlock, as the formulations obtained so far are not completely satisfactory. Thus, our proposal in this study was to omit or replace the xenobiotics components traditionally used in the medium to keratinocytes culture, by human similar. As a result, we have standardized a culture medium whereby we omitted the use of cholera toxin, replaced fetal bovine serum by human platelet lysate at a 2.5% concentration and bovine insulin was replaced by recombinant human insulin at the same concentration as the original method (5 μg/mL). With the results obtained we could conclude that the method to be viable to cultivate human keratinocytes, kept in culture medium free of xenobiotics components.

Freqüentemente as condutas terapêuticas utilizadas no tratamento de patologias bucais são cirúrgicas, resultando em falhas de continuidade da mucosa bucal. A possibilidade de obtenção de epitélios transplantáveis, a partir do cultivo in vitro de células da mucosa bucal, abre novas perspectivas de utilização, não se restringindo somente ao seu local de origem, ou seja, a boca, mas também como material de reconstrução para outras regiões, tais como: uretra, córnea, superfície ocular e epitélio córneo-limbal. Os métodos utilizados para a obtenção dessas células ainda são controversos na literatura. Neste sentido, avaliamos e comparamos a eficiência de dois métodos, enzimático e explante, para a obtenção de queratinócitos de mucosa bucal humana. Os fragmentos utilizados para a obtenção dessas células foram obtidos durante procedimentos cirúrgicos de pacientes voluntários saudáveis. Os queratinócitos foram cultivados sobre uma camada de sustentação, feeder-layer, confeccionada com fibroblastos murinos irradiados (3T3 - Swiss albino). Neste estudo foram comparados: o tempo para a obtenção dos queratinócitos, o rendimento obtido entre os dois métodos, a duração da vida útil em cultura, a capacidade que estas células tiveram em formar um epitélio in vitro e a morfologia dos mesmos. Os resultados obtidos, na avaliação dos dois métodos, comprovaram a possibilidade de obtenção dos queratinócitos, a partir de um pequeno fragmento bucal, porém pode-se verificar que existem vantagens e restrições peculiares a cada um dos métodos estudados. / The therapeutic procedures frequently used in oral treatments for the pathological diseases are surgical, resulting in failures of the mucosal continuity.The possibility to obtain transplantable oral epithelia from an in vitro cell culture opens new utilization perspectives not only to where it comes from, but also as a reconstructive matherial for other parts of the human body, such as: urethra, epithelia corneo-limbal, cornea, ocular surface. Many researchers still use controversial methods for obtaining cells. It was therefore evaluated and compared the efficiency in both methods: enzimatic and direct explant to obtain oral keratinocytes from human oral mucosa. Fragments of intra oral epithelial tissues from healthy human subjects, undergoing dental surgeries, were donated to the research project. The keratinocytes were cultivated over a feeder-layer from a previously irradiated 3T3 Swiss albino fibroblasts. In this study it was compared the time needed in the cell obtaintion, the best cell amount between both methods, the life-span, the cell capacity to form an in vitro epithelia and its morphologic structure. The results in the accessment of both methods have shown the possibility to obtain keratinocytes from a small oral fragment, but at the same time we may verify the advantages and peculiar restrictions for each one of both analyzed methods.

Epitélios confluentes de queratinócitos autólogos, cultivados segundo metodologia padronizada por Rheinwald e Green em 1975, têm sido usados como enxertos em diferentes situações clínicas. Contudo, a presença de componentes xenobióticos empregados nesta metodologia implica na possibilidade de transmissão de zoonoses, príons e viroses aos pacientes, além de envolver questões éticas relacionadas à utilização de animais. Tais preocupações têm direcionado pesquisadores a buscar alternativas que superem este impasse; no entanto, as formulações obtidas até o momento não são completamente satisfatórias. Assim, nossa proposta neste estudo, foi omitir ou substituir os componentes xenobióticos tradicionalmente utilizados no meio para queratinócitos, por similares humanos. Como resultado, padronizamos um meio de cultura onde omitimos o emprego de toxina colérica, substituímos o soro fetal bovino por lisado de plaquetas humanas na concentração de 2,5% e a insulina de origem bovina foi substituída por insulina recombinante humana na mesma concentração do método original (5 μg/mL). Com os resultados obtidos foi possível concluir ser viável o cultivo de queratinócitos humanos, mantidos em meio de cultura livre de componentes xenobióticos. / Confluent epithelia of autologous keratinocytes, cultivated according to standardized methodology by Rheinwald and Green in 1975, have been used as grafts in different clinical situations. However, the presence of xenobiotics components applied in this method implies the possibility of transmission of zoonoses, príons, and viruses to patients, besides involving ethical issues related to the use of animals for components obtainment. Such concerns have driven researchers to seek alternatives that overcome this deadlock, as the formulations obtained so far are not completely satisfactory. Thus, our proposal in this study was to omit or replace the xenobiotics components traditionally used in the medium to keratinocytes culture, by human similar. As a result, we have standardized a culture medium whereby we omitted the use of cholera toxin, replaced fetal bovine serum by human platelet lysate at a 2.5% concentration and bovine insulin was replaced by recombinant human insulin at the same concentration as the original method (5 μg/mL). With the results obtained we could conclude that the method to be viable to cultivate human keratinocytes, kept in culture medium free of xenobiotics components.

Freqüentemente as condutas terapêuticas utilizadas no tratamento de patologias bucais são cirúrgicas, resultando em falhas de continuidade da mucosa bucal. A possibilidade de obtenção de epitélios transplantáveis, a partir do cultivo in vitro de células da mucosa bucal, abre novas perspectivas de utilização, não se restringindo somente ao seu local de origem, ou seja, a boca, mas também como material de reconstrução para outras regiões, tais como: uretra, córnea, superfície ocular e epitélio córneo-limbal. Os métodos utilizados para a obtenção dessas células ainda são controversos na literatura. Neste sentido, avaliamos e comparamos a eficiência de dois métodos, enzimático e explante, para a obtenção de queratinócitos de mucosa bucal humana. Os fragmentos utilizados para a obtenção dessas células foram obtidos durante procedimentos cirúrgicos de pacientes voluntários saudáveis. Os queratinócitos foram cultivados sobre uma camada de sustentação, feeder-layer, confeccionada com fibroblastos murinos irradiados (3T3 - Swiss albino). Neste estudo foram comparados: o tempo para a obtenção dos queratinócitos, o rendimento obtido entre os dois métodos, a duração da vida útil em cultura, a capacidade que estas células tiveram em formar um epitélio in vitro e a morfologia dos mesmos. Os resultados obtidos, na avaliação dos dois métodos, comprovaram a possibilidade de obtenção dos queratinócitos, a partir de um pequeno fragmento bucal, porém pode-se verificar que existem vantagens e restrições peculiares a cada um dos métodos estudados. / The therapeutic procedures frequently used in oral treatments for the pathological diseases are surgical, resulting in failures of the mucosal continuity.The possibility to obtain transplantable oral epithelia from an in vitro cell culture opens new utilization perspectives not only to where it comes from, but also as a reconstructive matherial for other parts of the human body, such as: urethra, epithelia corneo-limbal, cornea, ocular surface. Many researchers still use controversial methods for obtaining cells. It was therefore evaluated and compared the efficiency in both methods: enzimatic and direct explant to obtain oral keratinocytes from human oral mucosa. Fragments of intra oral epithelial tissues from healthy human subjects, undergoing dental surgeries, were donated to the research project. The keratinocytes were cultivated over a feeder-layer from a previously irradiated 3T3 Swiss albino fibroblasts. In this study it was compared the time needed in the cell obtaintion, the best cell amount between both methods, the life-span, the cell capacity to form an in vitro epithelia and its morphologic structure. The results in the accessment of both methods have shown the possibility to obtain keratinocytes from a small oral fragment, but at the same time we may verify the advantages and peculiar restrictions for each one of both analyzed methods.

Neste trabalho foi estudada a formação de membranas para obtenção de compostos dermo-epidérmicos. A porção dérmica foi desenvolvida utilizando-se mistura de polímeros sintéticos, o poli(álcool vinílico) - PVAl ou poli(vinilpirrolidona) – PVP, com polímero natural, a quitosana. As membranas foram reticuladas pela radiação g ou glutaraldeído. A porção epidérmica destas membranas foi formada por queratinócitos cultivados in vitro, os quais foram semeados sobre as membranas correspondentes e verificada sua interação. As membranas que melhor interagiram com os queratinócitos foram aquelas preparadas com quitosana pela reticulação com glutaraldeído, porém não satisfazendo as características mecânicas de manipulação. As membranas que possuíam as melhores características mecânicas, porém com moderada interação com os queratinócitos, foram as compostas de PVAl, liofilizada e intumescida com quitosana. Os componentes foram caracterizados isoladamente, bem como as membranas formadas pelos mesmos. O PVAl foi caracterizado quanto a sua dose gel e a quitosana quanto à determinação das constantes de Mark-Houwink, grau de acetilação e dissolução em diferentes valores de pH. As membranas foram caracterizadas quanto a sua cinética de intumescimento com água. Na membrana de PVAl com quitosana incorporada foi avaliada sua degradação in vitro, determinada sua cinética de intumescimento com a quitosana e estimado o tamanho do poro. As membranas de quitosana reticuladas com glutaraldeído foram caracterizadas quanto à cinética de intumescimento e verificado o possível desprendimento de glutaraldeído. As duas membranas caracterizadas isoladamente foram unidas para formação de uma única membrana, como a parte dérmica do composto, onde a membrana de PVAl incorporada com quitosana foi recoberta com a membrana de quitosana reticulada com glutaraldeído. Quitosanas de outras procedências foram avaliadas na interação com os queratinócitos. / Membrane formations were studied to obtain dermal-epidermal compounds. The dermal portion was developed using synthetic polymers mixture, poly(vinyl alcohol)-PVAl or poly(vinylpyrrolidone)-PVP, with natural polymers, and chitosan. The membranes were crosslinked by gamma irradiation or glutaraldehyde. The epidermal portion of these membranes was formed by keratinocytes cultured in vitro, seeded on these membranes to verify their interaction. The membranes that interacted better with keratinocytes were those prepared with chitosan by glutraldehyde crosslinking, although not satisfying handling mechanical characteristics. The best mechanical characteristic was observed at PVAl membranes frezed dried and chitosan incorporated, but with moderate keratinocytes interaction. The components were characterized separately as well as the membranes formed by both. The PVAl was characterized as to its gel dose and to chitosan were determined Mark-Houwink equation, deacetilation degree and solubility under changes of pH. The membranes were characterized as to their swelling kinetic degree in water. In the membrane of PVAl with chitosan incorporated was evaluated its degradation in vitro, swelling kinetic degree with chitosan solution and the pore size. The chitosan membranes crosslinked by glutaraldehyde were characterized as to their swelling kinetic degree and verified the possibility of deatached glutaraldehyde. Membranes characterized separetelly were joined to perform the ideal dermal component, where the PVAl with chitosan incorporated membrane was covered by chitosan crosslinked by glutaraldehyde membrane. Chitosan from other sources were evaluated in the interaction with keratinocytes.

A fototerapia laser (FTL) tem sido usada clinicamente para auxiliar na cicatrização de inúmeras doenças bucais, especialmente no tratamento de lesões ulceradas. Os mecanismos celulares através dos quais o laser é capaz de promover a bioestimulação não são completamente compreendidos. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar in vitro o efeito da FTL no comportamento de queratinócitos bucais no processo de cicatrização. Células epiteliais bucais (NOK-SI) foram cultivadas sob duas condições nutricionais: suplementadas com 10% de soro fetal bovino (FBS) e sob déficit nutricional (2% FBS) seguido de irradiação com laser de diodo InGaAlP (660nm, 40mW, 4 e 20J/cm2, 4 e 20s), através da técnica pontual e em contato. Foram realizados ensaio de viabilidade celular (MTT), migração celular (cicatrização) e análise proteica (Western Blotting e Fluorescência). Os resultados obtidos indicaram que a FTL influencia diretamente a migração epitelial evidenciado pelo fechamento acelerado das feridas irradiadas e polarização do citoesqueleto celular (F-actina). Conclui-se que os efeitos clínicos da FTL estão associados, entre outros fatores, ao aumento da migração epitelial. / Laser phototherapy (LPT) has been used clinically to accelerate wound healing in a variety of oral diseases. The cell mechanisms by which LPT can promote biostimulation have not yet been fully elucidated. Epithelial cells play an important role in the reparative process since it proliferation and migration from the wound margin is crucial for restore epithelial continuity. It is unclear whether LPT has an effect on epithelial cell migration. Based on this, the aim of this study was to investigate the effect of LPT in oral wound healing process using oral keratinocytes. Oral keratinocytes were maintained under two nutritional conditions supplemented with 10% of fetal bovine serum (FBS) and in nutritional deficit (2% FBS). Laser irradiation was delivered with InGaAlP laser (660nm, 40mW, 4 e 20J/cm2, 4 e 20s). Irradiations were performed in contact, using the punctual irradiation mode. The following tests were performed cell viability, cell migration and protein analysis. Results obtained suggest that LPT influences epithelial migration and cytoskeleton polarization. Interestingly, LPT effect under epithelial cell migration occurs independently of cell viability. In conclusion, clinical LPT effects are associated with an increase in epithelial cell migration.

Der Transkriptionsfaktor NF-κB ist von großer Bedeutung, da er verschiedene zelluläre Prozesse wie Proliferation, Apoptose, Invasion oder Inflammation beeinflusst. Im Gegensatz zu den meisten anderen Zelltypen ist in der humanen Epidermis ein wachstumsinhibierender Effekt mit der Aktivierung von NF-ĸB assoziiert. Die epidermale Homöostase dient der Aufrechterhaltung der intakten Hautbarriere und beschreibt das Gleichgewicht zwischen proliferierenden und differenzierenden epidermalen Keratinozyten. Schädliche äußere Einflüsse wie übermäßige Sonnenlichtexposition können die epidermale Homöostase stören, was zur Entstehung epidermaler Neoplasien wie aktinischer Keratosen oder Plattenepithelkarzinomen beiträgt. Das Ziel dieser Arbeit war die Expressions- und Funktionsanalyse der einzelnen NF-κB Proteinuntereinheiten in humanen Keratinozyten in vitro. Die siRNA-vermittelte transiente Reduktion von c-Rel beeinflusste deutlich das Zellschicksal von Keratinozyten. Obwohl vorangegangene Experimente durch eine stärkere Zellproliferation nach Inhibierung der NF-ĸB Proteine p50 und p65 das Gegenteil suggerierten, konnte für die Reduktion von c Rel ein inhibierender Effekt auf das Zellwachstum festgestellt werden. Außerdem zeigten sich eine veränderte Zellzyklusphasenverteilung sowie eine Akkumulation mitotischer Zellen mit aberranter, hauptsächlich monopolarer Spindelformation. Die zusätzlich detektierte Apoptose-Induktion könnte aus dem verlängerten mitotischen Arrest der c-Rel Knockdown Keratinozyten resultieren. Insgesamt lässt sich ein regulatorischer Effekt von c-Rel beim Eintritt in die Mitose oder der mitotischen Progression vermuten, wobei die beteiligten Zielgene noch zu identifizieren sind. Des Weiteren bewirkte der c-Rel Knockdown phänotypische Veränderung von HaCaT Keratinozyten mit tendenziell spindelzellartiger Elongation und einem insgesamt veränderten Wachstumsmuster. Die Adhäsion und besonders die Wundheilung von c-Rel reduzierten HaCaT Zellen war vermindert, möglicherweise bedingt durch ein reduziertes Stressfaservorkommen. Dieser Effekt zeigte sich allerdings nicht in c Rel herunter regulierten primären Keratinozyten, was auf Mutationen der spontan immortalisierten HaCaT Keratinozytenzelllinie zurückzuführen sein könnte. Zusammenfassend konnte in dieser Arbeit ein neuer Aspekt der einzelnen NF-ĸB Proteine aufgezeigt werden, besonders in Bezug auf die Proteinuntereinheit c-Rel. Hieraus resultiert ein besseres Verständnis der vielfältigen und komplexen Regulation von NF-κB abhängigen Funktionen und deren Effekte auf die epidermale Homöostase.