Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005-11-22Bitstream added on 2014-06-13T18:32:29Z : No. of bitstreams: 1 nobrega_fjo_me_araca.pdf: 1565763 bytes, checksum: 329aeaf5bcd90629d9755c4db87d2dcb (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / O processo de reparo de feridas em indivíduos imunossuprimidos pelo uso de medicação corticóide representa um problema para a área da saúde. Diversos tipos de tratamento têm sido propostos para se obter uma melhor qualidade no processo de reparo, dentre esses destaca-se o uso do laser em baixa intensidade e, mais recentemente, a terapia fotodinâmica (PDT), representada pela associação do laser com drogas fotossensibilizadoras, como o Azul de Toluidina O (TBO). O propósito deste trabalho foi avaliar, histologicamente, a ação do laser em baixa intensidade e da PDT no processso de reparo em feridas cutâneas em ratos tratados com corticóide. Foram utilizados 90 ratos, nos quais foi criada, com o auxílio de um punch, uma ferida de 8 mm de diâmetro na porção média da região dorsal. Os animais foram divididos em 5 grupos: grupo 1 (n=18): os animais não receberam nenhum tipo de tratamento, tanto local quanto sistêmico; grupo 2 (n=18): os animais receberam corticóide sistêmico e nenhum tratamento local; grupo 3 (n=18): os animais receberam sistemicamente o mesmo tratamento do grupo 2, sendo as feridas tratadas com laser de baixa intensidade; grupo 4 (n=18): os animais receberam o mesmo tratamento sistêmico do grupo 2, sendo as feridas tratadas com irrigação de TBO; e grupo 5 (n=18): os animais receberam o mesmo tratamento do grupo 4, sendo as feridas tratadas imediatamente após a sua execução, com laser em baixa intensidade. Os animais, em número de 06 (seis) para cada grupo, foram sacrificados nos períodos de 3, 7 e 14 dias após a execução dos procedimentos terapêuticos. As peças foram processadas para análise histológica e coradas pela técnica da hematoxilina e eosina (H&E) e Tricômico de Masson. Os resultados mostraram que o grupo 2 promoveu um retardo na reparação tecidual em todos os períodos experimentais... / The process of wounds repair in immunosuppressed individuals for the use of corticoid therapy represents a problem for the area of health. Several treatment types have been proposed to obtain a better quality in the repair process. Among those, the use of low level laser may be emphasized and, more recently, the photodynamic therapy (PDT), represented by the association of that laser with photosensibilized drugs like toluidine blue O (TBO). The aim of this study was to evaluate, histologically, the action of the laser and of PDT in the repair process in cutaneous wounds in rats treated with corticoid. Ninety rats were used, in which was created, with the aid of a punch of 8 mm diameter, a wound in the medium portion of the dorsal region. The animals were divided in 5 groups: group 1 (n=18): the animals didn't receive any treatment type, local or systemic; group 2 (n=18): the animals received systemic corticoid and any local treatment; group 3 (n=18): the animals received systemically the same treatment of the group 2, being the wounds treated with low level laser; group 4 (n=18): the animals received the same systemic treatment of groups 2, being the wounds treated with irrigation of TBO; and group 5 (n=18): the animals received the same treatment of the group 4, being the wounds immediately treated after their execution with laser. The animals, in number of 06 (six) for each group, were sacrificed in the periods of 3, 7 and 14 days after the execution of the therapeutic procedures. The pieces were processed for histologic analysis and colored for the technique of hematoxylin-eosin (H&E) and Masson trichrome stains. The results showed that the group 2 promoted a retard in the tissue repair in all the experimental periods; the group 3 presented a more accelerated repair process than the group 4, as well as the group 5 was presented... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2016-08-17T18:39:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 3807.pdf: 2911104 bytes, checksum: 2c7ae1e3c12f5cd9fa989ae4f5ece3f6 (MD5) Previous issue date: 2011-07-26 / Universidade Federal de Sao Carlos / The Photodynamic Antimicrobial Chemotherapy (PACT) has shown that is a promising alternative for buccal disinfection. The objective of this in situ work is to investigate the antimicrobial effect of photodynamic therapy over biofilms by the use of curcumine and Photogem® presented in a solution. In this research 18 volunteers were selected randomly from both sexes, with age over than 18 years. These patients wore a removable palatine device that contained six enamel/dentin specimens of 5 square millimeters by 2 millimeters of thickness. Those patients wore those devices during the period of four days, after that the biofilm created over the specimens were treated using different PACT protocols. The effect of the PACT treatments was evaluated by the microbial reduction of the Streptococcus mutans by UFC counting. This study compared a control group with the curcumine group that didn't received light irradiation with another group that was treated with the PACT protocol using curcumine solution, and other group that used the photosensitizer presented in solution with Photogem®. The obtained results of this investigation showed the reduction of the amount of the S. mutans UFC. The highest reduction (p=0.02) was observed when the PACT is applied with solution using Photogem as the photosensitizer. In conclusion, this study suggests that there is a antimicrobial effect of photodynamic therapy over biofilms by the use of curcumine (1.500&#956;g/mL) and Photogem® (1.000&#956;g/mL) followed by LED system irradiation (&#955;=640±5nm). / A Terapia Fotodinâmica (TFD) antimicrobiana tem se mostrado uma promissora alternativa para a desinfecção bucal. Os objetivos deste trabalho in situ foram de investigar o efeito antimicrobiano em biofilme dental por meio da TFD, utilizando-se bochecho e aerosol contendo, respectivamente, curcumina e Photogem®. Nesta pesquisa, foram selecionados 18 voluntários de ambos os sexos, com idade acima de 18 anos e de forma aleatória na população. Esses voluntários usaram uma placa contendo blocos de esmalte bovino, durante 4 dias. Após a formação de biofilme dental sobre a superfície dos blocos, as amostras foram submetidas ao tratamento com TFD. O efeito da TFD foi avaliado pela redução de Streptococcus mutans em meio de cultura Mitis Salivarius com Bacitracina e sacarose. Os grupos experimentais investigados foram, Grupo II: tratado com solução de curcumina (1.500&#956;g/mL); Grupo III: tratado com TFD (&#955;=450±5nm) e solução de curcumina (1.500&#956;g/mL); Grupo IV: que recebeu TFD (&#955;=640±5nm) com solução contendo Photogen® (1.000&#956;g/mL) comparados com o grupo controle(Grupo I), o qual não recebeu tratamento. Os dados resultantes obtidos foram submetidos ao teste de análise estatística ANOVA a nível de 5% (p<0,05). A análise estatística mostrou que houve redução significativa na quantidade de S. mutans no grupo tratado com a curcumina + luz (p=0,04) e no grupo com Photogen® + luz (p=0,02). Ocorreu redução de S. mutans quando comparamos o Grupo I com os demais grupos experimentais, nas seguintes proporções: 8% para o Grupo II, 15% para o Grupo III e 18% para o Grupo IV. Em conclusão, sugere-se que há efeito antimicrobiano em biofilme dental por meio da TFD quando do uso de solução de curcumina (1.500&#956;g/mL) e ou de Photogen® (1.000&#956;g/mL) seguidos da irradiação com sistema LED (&#955;=640±5nm).

Orientador: Alessandra Nara de Souza Rastelli / Patrícia Petromilli Nordi Sasso Garcia / Clóvis Wesley Oliveira de Souza / Resumo: O objetivo deste trabalho, dividido em dois estudos, foi avaliar: (1) in vitro o efeito da terapia fotodinâmica na viabilidade de cultura planctônica de Streptococcus mutans mediada por azul de metileno associado ou não por nitrato de sódio em combinação com Laser; e (2) avaliar in vitro o efeito da terapia fotodinâmica na viabilidade do biofilme de Streptococcus mutans mediado por azul de metileno associado ou não por nitrato de sódio, ambos em associação com Laser em comprimento de onda vermelho (660nm). No primeiro estudo, a suspensão bacteriana contendo Streptococcus mutans 1x108 UFC/mL foi preparada e 250µL foi pipetada de acordo com os grupos: L-D- (controle negativo), L-D+ (fotossensibilizador associado ou não em 6 concentrações: 0,625; 1,25; 2,5; 5; 10 e 20µM), L+D- (Laser 30J/cm2), clorexidina (controle positivo), nitrato de sódio e o grupo L+D+ (azul de metileno associado ou não ao nitrato de sódio e irradiado com Laser). Para citotoxicidade no escuro, foram acrescidos 250µL do azul de metileno associado ou não, incubado no escuro por 5 minutos. Os grupos da terapia fotodinâmica foram incubados no escuro por 5min e irradiados por Laser 30 segundos. Alíquotas de cada diluição foram cultivadas em Placa de Petri com BHI ágar e incubadas a 37° C em estufa por 48h para posterior contagem das UFC/mL. Os resultados obtidos demonstraram que não houve citotoxicidade no escuro para as diferentes concentrações utilizadas do azul de metileno associado ou não. Observou-se reduçã... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this work, divided into two studies, was to evaluate: (1) the in vitro the effect of photodynamic therapy on the viability of Streptococcus mutans planktonic culture mediated by methylene blue associated or not by sodium nitrate in association with red Laser; and (2) the in vitro the effect of photodynamic therapy on the viability of Streptococcus mutans biofilm mediated by methylene blue associated or not by sodium nitrate in association with red Laser (660nm). In the first study the bacterial suspension containing Streptococcus mutans 1x108 CFU/mL was prepared and 250µL pipetted according to the groups: L-P- (negative control), L-P+ (photosensitizer associated or no at 6 concentrations: 0.625, 1.25, 2.5, 5, 10 and 20µM), L+P- (Laser 30J/cm2), chlorhexidine (positive control), sodium nitrate and group L+P+ (methylene blue associated or not with sodium nitrate and irradiated with Laser). For the dark cytotoxicity test, 250 µL of methylene blue associated or not, were added and incubated in the dark for 5 minutes. The groups of photodynamic therapy were incubated in the dark for 5 minutes and irradiated by red Laser during 30 seconds. Samples were incubated at 37° C during 48h for subsequent visual counting of CFU/mL. The results showed that there was no cytotoxicity in the dark for the different concentrations of methylene blue associated or not. The photodynamic therapy promoted complete reduction in the viability of Streptococcus mutans at concentrations between ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

CAPES / O estudo de alguns dos efeitos das radiações ultravioleta C (UV-C) e terapia fotodinâmica (TFD) em células das leveduras Saccharomyces boulardii e Candida albicans foi realizado expondo-se células destes micro-organismos a diferentes intensidades destas radiações, calculadas com base no tempo de exposição e potência das fontes utilizadas. A exposição à UV-C foi realizada após inoculação dos micro-organismos em ágar YEPD que em seguida foram expostos a uma distância de 35cm da fonte em tempos que variaram entre 5s e 40s para S. boulardii e 10s e 60s para C. albicans. Os experimentos foram realizados em triplicatas, sendo uma para verificação da sensibilidade da célula à radiação e uma para verificação da fotorreativação após a irradiação com UV-C. As células consideradas mutantes, isoladas em um segundo experimento, foram submetidas a provas bioquímicas, para avaliação de alterações em seu metabolismo, e posteriormente a microscopia, para avaliação de alterações morfológicas. Os experimentos com TFD foram realizados expondo-se os microrganismos aos agentes fotossensibilizantes e posteriormente a lâmpada de LEDs em tempos entre 3 min e 12min. Os resultados mostram que a radiação UV-C é eficiente na redução populacional dos micro-organismos estudados, além de terem sido observados, nos testes bioquímicos, alterações no metabolismo da S. boulardii, como perda da capacidade de assimilar açúcares e fontes de nitrogênio. As alterações morfológicas foram o alongamento celular e diminuição no tamanho da colônia. A TFD, por sua vez, não demonstrou ação antimicrobiana com a metodologia utilizada, apenas observou-se uma aparente recuperação das células que foram expostas às substâncias tóxicas utilizadas para sua fotossensibilização. Conclui-se que a levedura patogênica C. albicans é mais resistente à radiação UV-C comparando-se com a S. boulardii, pois necessita 60s de exposição à UV-C contra 40s para redução decimal de S. boulardii. A metodologia para TFD utilizada neste trabalho não provocou redução populacional as células estudas / The study of some effecs of ultraviolet C (UVC) and photodynamic therapy (PDT) in S. boulardii and C. albicans cells was performed by exposing the cells to different radiation intensities, and was computed based on the exposure time and power sources used. The exposure to UV-C was performed after the inoculation of microorganisms in YEPD agar and immediately exposed to UV-C rays at distance of 35 cm from the source for lengths of time ranging from 40s to 5s for S. boulardii and from 10s to 60s for C. albicans. The experiments were performed in triplicate, once for checking the cell’s sensitivity by radiation and once to test the occurrence of photoreactivation after irradiation with UV-C. The cells considered mutants, isolated in another experiment, were submitted to biochemical tests to assess changes in their metabolism, and, later, microscopy to assess morphological changes. The experiments with PDT were done by exposing the microorganisms to the photosensitizing agents and later to the LED bulb for lengths of time ranging from 3 min to 12 min. The results show that UV-C is effective in reducing the population of microorganisms. The biochemical tests also showed changes in the metabolism of the S. boulardii such as a loss in the ability to assimilate sugars and nitrogen sources. The morphological changes were cell elongation and reduction of the colony size. PDT, in turn, showed no antimicrobial action with this methodology. There was only an apparent recuperation of cells that were exposed to toxic substances used in its photosensitization. Our conclusion is that the pathogenic yeast C. albicans is more resistant to UV-C rays compared with the S. boulardii because it needs 60 seconds of exposure to UV-C against 40 seconds for a decimal reduction of S. boulardii. The methodology used for PDT in this study did not cause population reduction in the studied cells.

Orientador: Lívia Nordi Dovigo / Resumo: A formação de biofilmes em dentes e mucosas é considerada principal fator associado ao desenvolvimento de infecções bucais. Antimicrobianos tópicos, como a clorexidina (CLX), são utilizados para descontaminação de lesões cariosas, bolsas periodontais, e descontaminação bucal previamente a procedimentos cirúrgicos, porém podem promover efeitos adversos, além da possibilidade de promover resistência nos micro-organismos (MOs). Dessa forma, a busca por tratamentos antimicrobianos alternativos, como a Inativação Fotodinâmica (PDI) é muito relevante nas ciências odontológicas. Estudos prévios sugeriram que a curcumina (CUR) pode ser um promissor fotossensibilizador para PDI, porém existem ainda alguns aspectos que precisam ser mais bem avaliados. Assim, o presente estudo avaliou a eficácia da PDI mediada pela CUR para eliminação do biofilme dental e a existência de possíveis efeitos que essa terapia pode promover sobre algumas propriedades de materiais restauradores e superfície dental. O projeto foi dividido em três estudos consecutivos sendo que o Estudo 1 avaliou a eficácia da PDI utilizando diferentes formulações de CUR (líquida - DMSO a 10%; microemulsão eumulgin, hidrogel quitosana e microemulsão ácido oleico) sobre biofilmes mono-espécie de Streptococcus mutans (UA 159 ATCC 700610; Sm), Lactobacillus casei (ATCC 4646; Lc) e Candida albicans (ATCC 90028; Ca) formados in vitro. Previamente à realização dos tratamentos, a análise da taxa de fotodegradação das diferentes formul... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract Formation of dental biofilm is the main factor associated to development of oral infections. Although topic antimicrobials, such as chlorhexidine (CHX), have been used to decontaminate the oral surfaces, they may promote adverse effects on hard and soft tissues as well as the possibility of promoting microbial resistance. Thus, the investigation of alternative antimicrobial treatments, such the Photodynamic Inactivation (PDI), is relevant to dental sciences. Previous research suggested that the curcumin (CUR) might be a promising photosensitizer for PDI, but there are some aspects that need to be better evaluated. The aim of this study was to assess the efficacy of CUR-mediated PDI against dental biofilms and the existence of possible negative effects of PDI on the properties of composite resins and dental surface. The research was divided into 3 consecutive studies. The study 1 aimed to evaluate the PDI efficacy using different CUR formulations (liquid - DMSO (dimethylsulfoxide) at 10%; eumulgin hydrogel, chitosan hydrogel and oleic acid hydrogel) on mono-species biofilm of Streptococcus mutans (UA 159 ATCC 700610; Sm), Lactobacillus casei (ATCC 4646; Lc) and Candida albicans (ATCC 90028; Ca) formed in vitro. Prior to the execution of the treatments, the photodegradation rate of each formulation in concentrations 20, 40, 60 and 80 µM was performed and the results showed that the chitosan hydrogel (R2=0,989) and oleic acid hydrogel (R2=0,976) were able to be used in the tests, both at 80 µM. Then, cell concentration of each species was standardized in order to the grow biofilm and the following treatment groups were tested for all formulations and evaluated species: C-L- (no CUR and light; negative control), C-L+ (no CUR and with light - 18J/cm2; blue LED), C+L- (with CUR and no light) and C+L+ (with both CUR and light; PDI). Data were analyzed... (Complete abstract electronic access below) / Doutor

Orientador: Alessandra Nara de Souza Rastelli / Banca: Patrícia Petromilli Sasso Garcia / Banca: Clovis Wesley Oliveira de Souza / Resumo: O objetivo deste trabalho, dividido em dois estudos, foi avaliar: (1) a influência da terapia fotodinâmica antimicrobiana na alteração de cor da dentina utilizando azul de metileno e curcumina como fotossensibilizadores nas concentrações de 20, 40 e 60 µM e nos tempos de pré-irradiação de 2 e 5 minutos, irradiados com fonte de luz LED; e (2) a influência do mesmo tratamento antimicrobiano com os mesmos fotossensibilizadores, concentrações e tempos de pré-irradiação utilizados no estudo anterior, porém sobre alteração de cor em uma resina composta microhíbrida. No primeiro estudo foram confeccionados 130 espécimes a partir de dentes humanos extraídos, os quais foram seccionados em máquina de cortes Isomet. Após a imersão nos fotossensibilizadores, avaliou-se as alterações de cor através de um espectrofotômetro de colorimetria em quatro momentos: antes do início da imersão nas soluções dos fotossensibilizadores (L0), após imersão nos fotossensibilizadores (L1), após irradiação (L2), após 10 dias (L3), após 30 dias (L4) e após 60 dias (L5). Observou-se uma variação alta das médias de ∆E nos grupos com azul de metileno independentemente da concentração e do tempo de exposição, diminuindo a partir da leitura de 10 dias. Com os grupos com curcumina, houve uma variação inicial sem diferença significativa do controle, mantendo-se próxima a ele nas leituras seguintes. Ambos fotossensibilizadores apresentaram alterações significantes clinicamente em dentina segundo a classificação da ―National Bureau of Standards‖ (NBS), sendo a alteração com a curcumina menor que do azul de metileno. No segundo estudo foram confeccionados 130 espécimes de resina composta microhíbrida (Filtek Z250XT) utilizando uma matriz de aço (10x2mm). Após a confecção dos espécimes, estes foram imersos...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study, divided in two studies, was to evaluate: (1) the influence of antimicrobial photodynamic therapy in color change dentin using methylene blue and curcumin as photosensitizers in concentrations of 20, 40 and 60 uM and pre irradiation times 2 to 5 minutes, irradiated with a LED light source; and (2) the effect of the same antimicrobial treatment with the same photosensitizers, concentrations and pre-irradiation times used in the previous study, but on color change in a microhybrid composite. In the first study were produced 130 specimens from extracted human teeth, which were cut in Isomet cuts machine. After immersion in the photosensitizers, the color changes were evaluated using a spectrophotometer colorimeter in four stages: before the immersion in solutions of photosensitizers (L0) after immersion in photosensitizers (L1) after irradiation (L2), after 10 days (L3) after 30 days (L4) and 60 days (L5). There was a high variation of ΔE averages of the methylene blue groups independently of the concentration and exposure time, decreasing from a reading of 10 days. With curcumin groups, there was no significant difference initial variation control, remaining next to it in the subsequent readings. Both photosensitizers showed clinically significant changes in dentin according to the classification of ―National Bureau of Standards‖ (NBS), with a lowest change to curcumin that of methylene blue. In the second study were made 130 specimens microhybrid composite resin (Filtek Z250XT) using a steel matrix (10x2mm). After preparation of the specimens, they were immersed in solutions of photosensitizers and subsequently evaluated with a spectrophotometer Colorimetry in the same color reading moments performed in the previous study (initial, after immersion, after light irradiation, after 10, 30 and 60 days). In methylene blue groups was no statistically significant difference... (Complete abstract access below) / Mestre

Orientador: Janaina Habib Jorge / Banca: Ana Cláudia Pavarina / Banca: Nara hellen Campanha Bombarda / Resumo: Estudos têm sido conduzidos com o intuito de prevenir a formação do biofilme em biomateriais ou buscar terapias alternativas para o tratamento de doenças decorrentes da instalação do biofilme. Como terapia alternativa, este estudo avaliou (1) a citotoxicidade da terapia fotodinâmica (PDT), através da utilização de queratinócitos humanos co-cultivados com Candida albicans. Em relação à prevenção da formação do biofilme, (2) foi avaliada a citotoxicidade de nanopartículas (NP) de tungstato de prata (Ag2WO4) e de molibdato de prata (Ag2MoO4), em solução e como revestimento de biomateriais. No estudo 1, a co-cultura foi realizada utilizando uma membrana Transwell, em que células e micro-organismos cresceram separadamente durante 24h, e ficaram em contato por mais 24h. Após este período, a PDT foi realizada utilizando-se a curcumina como fotossensibilizador. As seguintes condições foram testadas: P+ L+; P- L+; P+ L; P- L. Além disso, como controle negativo, três membranas de cada placa foram destinadas apenas ao crescimento de microorganismos e outros três poços para o crescimento de células separadamente, com seus respectivos meios. A proliferação celular, foi avaliada através dos testes Alamar Blue, MTT, XTT e UFC. Para o estudo 2, as NP foram sintetizadas e caracterizadas através de Microscopia Eletrônica de Varredura e Difração de Raios X. A partir da confecção das NP, foram feitas as soluções e o revestimento de titânio (Ti), zircônia (Zi), resina acrílica (RA) e silicone (Si). Para a realização do teste de citotoxicidade, 100 µL da suspensão composta por 1,5 x 104 células/ml (HaCat) foram colocados em cada compartimento de uma placa com 96 orifícios, incubada em estufa com 5% de CO2, a 37ºC por 24 horas. Após tal período de incubação, o meio de cultura foi desprezado, permanecendo as células aderidas no fundo da placa...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Studies have been conducted in order to prevent biofilm formation on biomaterials or seek alternative therapies for the treatment of diseases caused by biofilm installation. As an alternative therapy, this study evaluated (1) the cytotoxicity of photodynamic therapy (PDT) by the use of co-cultured human keratinocytes with Candida albicans (Ca). In relation to prevention of biofilm formation, (2) the cytotoxicity was evaluated nanoparticles (NP) silver tungstate (Ag2WO4) and silver molybdate (Ag2MoO4), in solution and as a biomaterial coating. In study 1, the co-culture was performed using a Transwell membrane, and cells in which micro-organisms grown separately for 24 h, and were in contact for a further 24h.After this period, PDT was performed using curcumin as a photosensitizer. The following conditions were tested: P+ L+; P- L+; P+ L; P- L. In addition, as a negative control, three membranes of each plate were assigned only to the growth of microorganisms and another three wells for cell growth separately with respective means. Cell proliferation was evaluated by testing the Alamar Blue, MTT, XTT, and CFU. For the study 2, the NP were synthesized and characterized by scanning electronic microscopy and X-ray diffraction. Since the making of the NP, they were made solutions and the titanium coating (Ti), zirconium (Zi), acrylic resin (RA) and silicon (Si). To perform the cytotoxicity assay, 100 µL of suspension composed of 1.5 x 104 cells / mL (HaCaT) were placed in each compartment of a plate with 96 wells, incubated in an incubator with 5% CO2 at 37 ° C for 24 hours. After this incubation period, the culture medium was discarded, remaining adhered cells at the bottom of the wells. 100 µL of culture medium containing the nanoparticles in solution and the extracts were placed on each plate hole. The plate was incubated for another 24 hours. Cell proliferation was assessed using the Alamar ... (Complete abstract electronic access below) / Mestre

Orientador: Lívia Nordi Dovigo / Banca: Ewerton Garcia de Oliveira Mima / Banca: Clovis Wesley Oliveira de Souza / Resumo: Este estudo teve por finalidade: I. estabelecer um protocolo reprodutível utilizando a metodologia dos halos de precipitação em meio Ágar para avaliação da produção de fosfolipase e proteinase pela espécie Candida albicans (C. albicans); II. analisar a expressão dos fatores de virulência de Ca após inativação fotodinâmica (IF) mediada pela curcumina (CUR). No primeiro estudo utilizou-se 30 isolados clínicos e uma cepa de referência de C. albicans para obtenção de suspensões celulares (108ufc/mL) que foram plaqueadas nos meios específicos. Três variáveis independentes (nº de replicatas, cor de fundo e instrumento de leitura) originaram oito protocolos de leitura. A reprodutibilidade intra e interexaminadores da medida de produção de enzima (Pz) foi avaliada por meio do Coeficiente de Correlação Intraclasse (CCI). A enzima proteinase apresentou dois protocolos com ―Boa‖ reprodutibilidade intraexaminador (CCI ≥ 0,71) para todos os examinadores e o protocolo que utilizou leituras em triplicata sobre as fotografias contra luz natural atribuiu maior reprodutibilidade interexaminador para os valores de Pz-proteinase. Três protocolos com ‗Boa' concordância intraexaminador de Pz-fosfolipase foram selecionados para a análise interexaminador. Tanto as leituras em paquímetro como as realizadas em computador, em triplicata, mostraram reprodutibilidade ‗Muito Boa'. No estudo II, a concentração de CUR a 0,1µM foi utilizada associada a iluminação LED para promover dose subletal de IF. O grupo tratamento (C+L+) teve suas células fotossensibilizadas com CUR e iluminadas. O grupo controle positivo consistiu de amostras que receberam apenas CUR (C+L-), e o controle negativo não recebeu nem CUR nem luz (C-L-). A capacidade de adesão foi avaliada por meio das unidades formadoras de colônias (ufc/mL) e do método XTT. A formação de biofilme foi analisada ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: This study aimed to: I. to establish a reproducible protocol using the agar-Based methodology to evaluate the production of the phospholipase and proteinase by the species Candida albicans (C. albicans); II. to analyze the expression of virulence factors after photodynamic inactivation (PDI) mediated by curcumin (CUR). In the first study 30 clinical isolates and a reference strain of the C. albicans were used to obtain cell suspensions (108CFU/mL) that were plated in specific media. Three independent variables (number of replicates, background color and reading instrument) originated eight reading protocols. The intra- and inter-examiner reproducibilityof the enzyme production measure (Pz) was assessed using the intraclass correlation coefficient (ICC). The enzyme proteinase presented two protocols with "good" intra-rater reproducibility (ICC≥0.71) and the readings in triplicate against natural light showed the highest inter-examiner reproducibility for Pz-proteinase values. Three protocols with 'Good' intra-rater agreement for Pz-phospholipase were selected for interexaminer analysis. Caliper and computer readings, performed in triplicate, showed 'Very Good' reproducibility. In Study II, CUR at 0,1μM was used with LED light to promote sublethal dose of the PDI. The treatment group (C+L+) had its cells photosensitized with CUR and illuminated. The control group consisted of the samples that received only CUR (C+L-), and another which received neither CUR or light (C-L-). The adhesion ability was evaluated by means of CFU/mL and the XTT method. Biofilm formation was analyzed by means of CFU/mL, XTT and Crystal Violet (CV). The ability to secrete degradative enzymes was evaluated by the agarbased method and a colorimetric method. The results CFU/mL, XTT, CV were evaluated using a one-way multivariate analysis of the variance (MANOVA) and when statistically significant effects were detected, One... (Complete abstract electronic access below) / Mestre

A fotoquimioterapia (FQT) é uma técnica de tratamento de doenças graves, inclusive o câncer, que utiliza que utiliza compostos que, sendo introduzidos dentro de um organismo, não possuem alguma atividade contra ele e quando são excitados, através de luz na região espectral de 320 até 800 nm, produzem espécies reativas que induzem a morte celular. Dentre as formas desenvolvidas em FQT, a de maior destaque, e a que vem sendo mais utilizada em clínica, é a Terapia Fotodinâmica (TFD). Apesar das vantagens do uso da TFD, esta técnica possui limitações em sua eficiência, pois seu mecanismo está associado com à formação dos estados excitados do FS e do oxigênio molecular e, por isso, depende dos tempos de vida e rendimentos quânticos destes estados. Outro fator que limita a ampla aplicação da FQT na clínica é o alto custo dos FS utilizados atualmente. No grupo de fotobiofísica do Departamento de Física e Matemática da FCLRP-USP, tem-se trabalhado na busca de novos FS que possuam espécies reativas não excitados como, por exemplo, os radicais livres (peróxidos, ânion superóxido, radical hidroxila etc.), e que sejam mais viáveis economicamente em relação a outros FS já existentes no mercado. Os derivados de nitrofurano são fármacos já utilizados na rotina clínica que possuem as características promissoras para aplicação em FQT. Este trabalho dá continuidade à busca de novos FS. Escolhemos dentre inúmeros derivados de nitrofurano a Nitrofurantoína (NFT), que já é utilizada em clínica desde 1950, e que possui um custo baixo. Sua atividade fototóxica já foi documentada como reações fotoalérgicas em pacientes depois de ser administrada e nos estudos in vitro contra diversas linhagens das células neoplásicas. Contudo, os mecanismos e a dinâmica da fotoação da NFT não estavam ainda bem estabelecidas. Como objetivos gerais deste trabalho, definimos estudar a dinâmica da fotodecomposição da NFT e a liberação de radical NO em soluções aquosas, em função da composição do ambiente, tendo em vista analisar sua potencialidade para aplicação em fotoquimioterapia de diversas doenças, inclusive o câncer. Demonstramos que durante a sua fototransformação, a NFT libera o NO, e o rendimento do processo depende do estado de protonação da NFT. A liberação de NO se realiza por duas vias paralelas: liberação direta pela molécula de NFT e através da fotólise do seu fotoproduto. O estado tripleto da NFT apresenta tempo de vida (t) muito curto, provavelmente devido à participação ativa em formação de um dos fotoprodutos. Pelo fato de ser muito curto, é pouco provável que o estado T1 produza efetivamente, o oxigênio singleto. Assim, podemos associar a fotoatividade da NFT com a liberação de NO. Por fim, propusemos um esquema para a fotoliberação de NO pela fototransformação da NFT. / Photochemotherapy (PCT) is a technique applied in the treatment of serious diseases. For example in cancer, the PCT uses compounds that are introduced into an organism that do not have some activity against him, and that when are excited with light, in the spectral region from 320 to 800 nm, produces reactive species that induce the cell death. The photodynamic therapy (PDT) is the most widely used PCTtechnique in clinical applications. Despite the advantages of the use of PDT, this technique has efficiency limitations, because the PDT mechanism is associated with the formation of excited states in photosensitizer (PS) and in molecular oxygen and therefore, depends on the lifetimes and quantum yields of these states. Another limiting factor of the PDT in more PCT clinical applications is the high cost of the PS used today. The photo-biophysic group of the Department of Physics and Mathematics of the FFCLRP-USP has been working on searching of new PS without reactive species with exited states and cheaper than others PS on the market. For example, our group has investigated the free radicals: peroxide, superoxide anion, hydroxyl radical. This work continues the search for new PS. We chose the Nitrofurantoin (NFT), a nitrofuran derivative, which it is used in clinical applications since 1950 and have a low cost. The nitrofuran derivatives are drugs used in clinical applications with promising characteristics for applications in PCT. The photo-toxic activity of the NFT has been observed in photo-allergic reactions of patients and in vitro studies of several neoplastic cell lines. However, the NFT photo- action mechanisms and kinetics are not well established. The objective of this work was the study of the photo-decomposition dynamics of the NFT and the delivery of the NO radical in aqueous solutions depending on the composition of the environment, aiming to analyze its potential for application in PCT of several diseases, including cancer. In this work we demonstrated that during the photo-transformation, the NFT delivery NO and the yield of this process depends on the protonation state of the NFT. We observed that the NO delivery is made of two parallels ways: a direct delivery by NFT molecule and a delivery by photolysis of their photo-products. Probably due to the active participation in the photo-products formation we observed that the triplet state of NFT has very short lifetime (T) and therefore, it is not expected that the state T1 produces singlet oxygen. Thus, we can associate the NFT photo-activity with the NO delivery. Finally, this work proposes a scheme for NO photo-delivery using the NFT photo-transformation.

Hypothesis of the study: It is assumed that the use of photodynamic therapy (PDT) as an adjuvant in root canal therapy can promote the repair of teeth with periapical lesions treated in one session. Objectives: This in vivo study was to evaluate the effects of photodynamic therapy as an adjuvant in root canal therapy in one session for the repair of periapical lesions. Method: Fourteen human teeth with mortification pulp and periapical lesions were randomly divided into two groups (n=7): G1- endodontic treatment was performed in one session and G2 underwent endodontic therapy in one session associated with photodynamic therapy. The photodynamic therapy used methylene blue dye (100&#956;/mL) for five minutes and diode laser low power (685nm, 100mW) for three minutes. The follow-ups were performed by periapical radiographs. The images were evaluated by the computer program Adobe Photoshop CS 5.1, using the system K values. By which we assessed the area of periapical bone healing. Radiographs were taken prior to execution, immediately after treatment, and six months following the treatment. Results: There were statistically significant differences between the G2- endodontic therapy in one session associated with photodynamic therapy and G1- endodontic therapy in one session (p<0.05) without PDT. Conclusion: The endodontic treatment in one session associated with photodynamic therapy was more effective in repair of the periapical lesion. / Hipótese do estudo: O emprego da terapia fotodinâmica (PDT) como coadjuvante do tratamento endodôntico possa favorecer a reparação de dentes portadores de lesão periapical, tratados em sessão única. Objetivos: Este estudo in vivo, teve por objetivo avaliar, os efeitos da terapia fotodinâmica como coadjuvante do tratamento endodôntico em sessão única, na reparação de lesões periapicais. Método: Quatorze dentes humanos portadores de mortificação pulpar e lesão periapical, foram aleatoriamente divididos em dois grupos (n=7): G1- foi realizado tratamento endodôntico em sessão única, G2- foi submetido à terapia endodôntica em sessão única, associado à terapia fotodinâmica. Para a terapia fotodinâmica utilizou-se como corante o azul de metileno (100&#956;/mL) por cinco minutos e o laser de diodo de baixa potência (685nm, 100mW) por três minutos. A proservação foi realizada por meio de radiografias periapicais. As imagens foram avaliadas por um programa de computador Adobe Photoshop CS 5.1, valendo-se dos valores médios de K. Pelo qual foi avaliado a área de cicatrização óssea periapical. As radiografias foram tomadas antes da execução do tratamento endodôntico, imediatamente após e proservado com cento e oitenta dias após o tratamento. Resultados: Houve diferença estatísticamente significante entre o grupo G2- terapia endodôntica em sessão única associado à terapia fotodinâmica e G1- terapia endodôntica em sessão única (p< 0,05). Conclusão: O tratamento endodôntico em sessão única associado à terapia fotodinâmica mostrou-se mais eficaz na reparação da lesão periapical.