La calidad o competencia del oocito se define por su capacidad para ser madurado, fecundado y dar lugar a una gestación normal y a un parto con un nacimiento sano. .La producción in vitro de embriones (PIVE)s posibilita la obtención de un gran número de embriones de una hembra seleccionada. Utilizar oocitos de hembras prepúberes para la PIVE permite acortar el intervalo generacional y de esta forma intensificar la selección genética en los programas de mejora animal. Sin embargo los oocitos de hembras prepúberes son obtenidos de folículos pequeños y son oocitos de menos calidad para formar embriones in vitro. En estudios anteriores en nuestro laboratorio observamos que la calidad del oocito está mas relacionada con el tamaño del folículo del cual provienen que de la edad de la hembra. Así observamos el mismo porcentaje de embriones producidos in vitro en oocitos de cabras prepúberes (30 a 45 días de edad) obtenidos de folículos mayores de 3mm que de oocitos de cabras adultas. LA conclusión a la que se llega es que la calidad y competencia del oocito está estrechamente relacionada con el desarrollo folicular y la composición del liquido folicular del cual proviene. En vacuno se han realizado varios estudios en los que se relaciona la fertilidad de las vacas con su dieta rica en grasas no saturadas. También los grasos poli insaturados son los ácidos grasos que se encuentran en mayor concentración en el líquido folicular. Entre estos ácidos grasos los que más atención y estudios han conseguido son el Acido Linoleico (AL) y el acido Linolenico (ALA) de las familias omega 6 y omega 3, respectivamente. Ambos ácidos han demostrado su efecto sobre la calidad de los oocitos in vivo e in vitro. Las hembras prepúberes tiene una composición corporal pobre en grasa y presumiblemente también su liquido folicular tenga baja concentración en ácidos AL y ALA. Así uno de los objetivos de este trabajo de tesis ha sido estudiar el efecto de la adicción de diferentes concentraciones de AL y ALA en los medios de maduración in vitro de oocitos de corderas sobre su desarrollo embrionario in vitro. El Acido Hialurónico (AH) es un polisacárido con largas cadenas de azucares que se encuentra en la matriz extracelular e intracelular de los tejidos animales. El AH se encuentra como un glicosaminoglicano (GAG) en el tracto reproductivo de las hembras: úteros, oviducto y liquido folicular. Además se ha demostrado que el AH juega un papel importante retrasando la muerte por fragmentación de los oocitos porcinos. En vacuno, la adición del AH ha mejorado la producción in vitro de blastocistos y añadido en los medios de crioconservación también ha mejorado la supervivencia de los embriones crioconservados. El siguiente objetivo de este trabajo es añadir AH en los medios de cultivo embrionario con el objetivo de incrementar el desarrollo hasta blastocisto de los cigotos de corderas producidos in vitro y su resistencia a la crioconservación. Con estos objetivos se han realizado 3 estudios: 1) Efecto del Acido Linolenico (ALA) sobre la maduración del oocito y su desarrollo embrionario en oocitos de oveja prepúber.2) Efecto del Acido Linoleico (AL) sobre la maduración del oocito y su desarrollo embrionario en oocitos de ovejas prepúberes y 3) Efecto del Acido Hialuronico de alto peso molecular sobre el desarrollo a blastocisto y su resistencia a la crioconservación. En el Experimento 1, se añadió al medio de Maduración in vitro (MIV) de oocitos de corderas concentraciones 50, 100 y 200 µM de Acido Linolenico (ALA) y se estudió su efecto sobre la maduración nuclear, la expansión del cumulus, la secreción de prostaglandinas E2 y F2α, estradiol, progesterona y el porcentaje de oocitos que alcanzaban el estadio de blastocistos. Estos resultados se compararon con un grupo control que no llevaba ALA. Los resultados de este experimento demostraron que a concentraciones 200 µM la maduración del oocito y la expansión del cumulus disminuían comparado con los otros grupos (P≤0.05). La adición de ALA incrementaba la secreción de ambas prostaglandinas analizadas después de las 24 h de maduración de los oocitos (P≤0.05). No se observaron diferencias en el porcentaje de blastocistos obtenidos entre el grupo control (12.2%) y los grupos de 50, 100 y 200 µM ALA (6.9, 11.5 y 14.0%, respectivamente). Sin embargo si que hubo diferencias en el total de células por blastocisto (46.50±5.85, 67.94±6.71, 45.20±6.37, y 59.80±5.51, respectivamente, P≤0.05) y en el total de células apoptoticas por blastocisto (6.45±0.89, 2.48±0.81, 4.02±1.15, y 3.67±1.15, respectivamente, P≤0.05). Después de la MIV la concentración de E2 fue mas baja y la de P4 mas alta en los grupos con ALA que en el grupo control (P≤0.05). En conclusión, estos resultados indican que la adición de ALA al medio de MIV han afectado la calidad de los blastocistos producidos y alterado la liberación de hormonas reproductivas En el experimento 2, se añadió al medio de MIV concentraciones de 50, 100 and 200 µM de Acido Linoleico (LA) y se estudiaron los mismos parámetros que en el experimento 1. Los resultados de este experimento no demostraron ningún cambio en el número de oocitos que alcanzaban la metafase II. La producción de PGE2 y PGF2α incrementó en todos los grupos de AL comparados con el control (P≤0.05). La relación PGE2/PGF2α tampoco fue alterada. Después de la FIV el grupo con 50 µM de AL presentaba un porcentaje de cigotos correctamente fertilizados (2PN) superior al control (57.89 vs. 45.45, respectivamente, P≤0.05). No se observaron diferencias en el porcentaje de blastocistos obtenidos. Sin embargo la calidad de los blastocistos fue superior en el grupo de 50 µM con un número total de células por blastocisto superior al control (63.88±4.54 vs. 53.35±3.64, P≤0.05, respectivamente). No hubo diferencias en el número de células apoptoticas. La producción de E2 fue menor en los grupos AL y no hubo diferencias en la producción de P4. En conclusión, la adición de LA no ha afectado la maduración nuclear ni la producción de blastocistos, sin embargo dosis bajas de LA han incrementado el porcentaje de cigotos normales con 2 pronucleos y la calidad de los blastocistos evaluada por el número total de células. En el experimento 3, concentraciones de 0.25, 0.5 y 1 mg/ml de Acido Hialuronico (AH) fue añadido al medio de cultivo de los embriones producidos en in vitro con oocitos de corderas. El medio de cultivo se preparó sin suero. Los embriones de 2-4 células se cultivaron durante 7 días. Los resultados que se obtuvieron fueron que el porcentaje de blastocistos obtenidos con las distintas concentraciones de AH (33±5.7%, 32±6.0%, 35±5.5%, respectivamente) y el porcentaje de supervivencia embrionaria después de la vitrificación (63±17.1%, 83±15.2%, 58±14.2%; respectivamente) fue estadísticamente superior (P≥0.05) al grupo control (25±5.2%, 38±17.1%, respectivamente). Además, la adicción de AH aumentó el número total de células por blastocisto (83.6±4.6, 100.7±3.8, 97.2±3.7, 105.0±3.9; respectivamente, P<0.05) y el número de células de trofoectodermo ((58.4±3.8, 74.2±3.2, 75.6±3.3, 80.1±3.4; respectivamente, P<0.05). Los embriones que sobrevivieron a la vitrificación también presentaron mayor número de células totales (63.2±3.7, 130.8±3.6, 113.9±5.2, 149.8±5.4; P<0.05), del trofoectodermo (42.9±3.0, 96.7±3.1, 85.2±4.5, 111.9±4.7; P<0.05) y del botón embrionario (20.3±2.2, 32.9±1.8, 27.7±2.6, 36.5±2.7; P<0.05) los blastocistos cultivados con AH que los del grupo control. En conclusión, con oocitos de corderas de 3 meses de edad, aproximadamente, la utilización de AL, ALA en el medio de MIV y de AH en el medio de cultivo no ha incrementado el porcentaje de blastocistos obtenidos. Sin embargo, los ácidos grasos LA y ALA han mejorado la calidad de los embriones aumentando su número de células y el AH ha mejorado la calidad de los blastocistos y mejorado su resistencia a la vitrificación. / The prepubertal sheep ovaries have a large number of small follicles containing oocytes with a capability of developing to upper stages of nuclear maturation, cleaving subsequent post insemination and finally being a blastocyst, that can be transferred to surrogate ewes for progressing of animal breeding programs. Whereas, it has shown that oocytes from prepubertal animals have low competence to develop to higher stages. Accordingly, in this study we have tried to do experiments to improve this deficiency by using Alpha linolenic acid (ALA) and Linoleic Acid (LA). Also, we have tried to improve survival of sheep embryos cultured in vitro using Hyaluronan (HA). Polyunsaturated fatty acids (PUFAs) have shown to have beneficial effects on oocyte maturation and embryo development in vivo and in vitro conditions. Also, PUFAs constitute the major portion of the fatty acid content of the follicular fluid in small and large follicles. ALA and LA from PUFAs used in the present study in 2 separate experiments (experiment 1 for ALA and experiment 2 for LA). To our knowledge there are no previous reports using ALA and LA in prepubertal sheep oocytes in vitro. We used in three concentrations (50, 100 and 200µM) of ALA and LA in maturation media. Subsequently, we evaluated parameters such as cumulus cell expansion, nuclear maturation, secretion of prostaglandins (PGE2 and PGF2α) and steroids (E2 and P4), two pro-nuclei, polyspermy, asynchrony, cleavage, blastocyst rate and embryo quality via counting total cell number and apoptotic cells. In experiment 1, oocytes nuclear maturation and the number of fully expanded cumulus cells were reduced in 200 µM ALA treatment compared to other groups (P≤0.05). Supplementation with ALA increased both PGE2 and PGF2α concentration in the spent media (P≤0.05). No differences were observed in blastocyst development among control (12.2%) and 50, 100 and 200 µM ALA groups (6.9, 11.5 and 14.0%, respectively). However, total cells (46.50±5.85, 67.94±6.71, 45.20±6.37, and 59.80±5.51, respectively, P≤0.05) and apoptotic cell number (6.45±0.89, 2.48±0.81, 4.02±1.15, and 3.67±1.15, respectively, P≤0.05) were significantly improved. After IVM, E2 concentration was lower and P4 concentration was higher in ALA groups compared to control (P≤0.05). In conclusion, these results showed that ALA affects prepubertal sheep embryo quality associated with alteration of releasing reproductive hormones. In experiment 2, no changes were observed in the number of oocytes achieving MII nuclear maturation (91.8, 91.6, 87.9, 93.1 and 93.1, respectively). Production of PGE2 and PGF2α increased in all LA concentrations compared to control (P≤0.05). The ratio of PGE2/PGF2α was not altered. LA at 50µM significantly improved the rate of 2 pro-nuclear (2PN) compared to control (57.89 vs. 45.45, respectively, P≤0.05). There were no differences in cleaved embryos and blastocyst rates. However, embryo quality was improved by 50µM of LA with increase in total cell numbers compared to control (63.88±4.54 vs. 53.35±3.64, P≤0.05, respectively). There was no difference in apoptotic cell numbers. Also, production of E2 decreased significantly while there were not differences in P4 production and the rate of E2/P4 ratio. In conclusion, LA supplementation to prepubertal sheep oocytes in IVM media negatively altered the fully expanded cumulus cells significantly without inhibition of MII nuclear stage percentage of oocytes. The results from the present study provide evidence in increased number of zygotes with normal 2PN and also showed beneficial effects of low level LA on embryo quality of blastocysts at 8 day of post insemination in serum free media. HA is a polysaccharide with long polymer chains of sugars and has found in the extracellular matrix and intercellular matrix of animal tissues. HA is found enormously as a plentiful Glycosaminoglycan (GAG) in the female reproductive tract like uterus, oviduct and follicular fluids. Furthermore, it has been illustrated that HA plays a role in introducing a delay of death in the oocyte with preventing of oocyte from fragmentation in porcine. Also HA improves in vitro produced bovine embryos to develop to the blastocyst stage. It has also been indicated that embryo cryo-survival improvement is due to the HA added to cryopreservation medium HA numerically increased blastocyst percentage at 7-day (33±5.7, 32±6.0, 35±5.5; P≥0.05) and survival rates 48 h after culture in serum free media (63±17.1, 83±15.2, 58±14.2; P≥0.05) as compared to the respective controls (25±5.2, 38±17.1). It increased the total cell (TC) number (83.6±4.6, 100.7±3.8, 97.2±3.7, 105.0±3.9; P<0.05) and trophectoderm cells (TE) (58.4±3.8, 74.2±3.2, 75.6±3.3, 80.1±3.4; P<0.05) at 7-day embryos. Survived embryos had higher TC (63.2±3.7, 130.8±3.6, 113.9±5.2, 149.8±5.4; P<0.05), TE (42.9±3.0, 96.7±3.1, 85.2±4.5, 111.9±4.7; P<0.05) and ICM (20.3±2.2, 32.9±1.8, 27.7±2.6, 36.5±2.7; P<0.05). The results indicate that HA improves the embryo development and viability even quality which might have implication for improving embryo transfer.

Objetivo: Determinar la viabilidad y la seguridad microbiológica del tejido corneal y escleral canino [c] , felino [f] y equino [e] crioconservado a -20ºC, comparando tejidos crioconservados durante menos de 1 año (G≤1a) con aquellos crioconservados durante largos periodos de tiempo (G≥6a). Materiales y métodos: Treinta y seis globos oculares de perro, 20 de gato, y 34 de caballo se obtuvieron de la Fundació Hospital ClínicVeterinari entre 2003 y 2013. Todos los animales estaban libres de neoplasias o enfermedades infecciosas y no presentaban alteraciones oculares. Tras un protocolo de descontaminación, los ojos se enuclearon en condiciones estériles antes de las 10 horas post-mortem. Los globos se almacenaron a -20ºC en condiciones atmosféricas con un antibiótico de amplio espectro y se mantuvieron a esa temperatura durante diferentes periodos de tiempo hasta su análisis. Se realizaron estudios microbiológicos, histológicos y ultraestructurales, tanto del tejido corneal como del escleral. La microbiología consistió en sembrar las muestras de córnea y esclera en agar sangre, McConkey y Sabouraud, y en caldo de cultivo cerebro-corazón. Histológicamente se evaluaron los artefactos de crioconservación y mediante microscopia electrónica de transmisión se analizó la integridad del colágeno, y se establecieron el número y las características de los queratocitos, clasificándolos en normales, apoptóticos y necróticos. En una selección de muestras caninas se comprobó la muerte celular por apoptosis mediante TUNEL. Resultados. Microbiología: Los cultivos directos de los G≤1afueron positivos en un 27,5% [c], 15,0% [f] y 0% [e] y los de los G≥6a en un 0% [c], 0% [f] y 0% [e]. Los cultivos enriquecidos de los G≤1afueron positivos en un 47,5% [c], 30,0% [f] y 27,5% [e] y los de los G≥6a en un 16,7% [c], 0% [f] y 25,0% [e]. Histopatología:En las tres especies, los artefactos de crioconservación fueron más frecuentes en muestras G≥6a que en G≤1a. MET: El tipo de queratocito predominante fue el apoptótico en todas las muestras de las 3 especies. La estructura del colágeno se conservó a lo largo del tiempo, clasificándose como organizada o semiorganizada en todos los casos, excepto en una muestra de córnea canina. Conclusión. El tejido corneal y escleral canino, felino y equino puede crioconservarse a -20ºC y utilizarse al menos durante 8, 10 y 9 años respectivamente sin impedimentos microbiológicos o estructurales. El paso del tiempo parece reducir la contaminación bacteriana en estos tejidos. La apoptosis es la vía de muerte celular más importante para los queratocitoscriocongelados a -20ºC. / Objective: To determine the viability and microbiological safety of canine [c], feline [f] and equine [e] corneal and scleral tissue cryopreserved at -20°C, comparing tissues cryopreserved for less than 1 year (G≤1a) with those cryopreserved for long periods (G≥6a). Materials and Methods: Thirty-six eyeballs from dogs, 20 from cats, and 34 from horses were obtained from the Fundació Hospital Clinic Veterinari between 2003 and 2013. All animals were free of neoplasia or infectious diseases and had no ocular abnormalities. After a decontamination protocol, the eyes were enucleated under sterile conditions within 10 hours post-mortem and stored at -20°C under atmospheric conditions with a broad spectrum antibiotic until analysis. Microbiological, histological and ultrastructural studies of both, the scleral and corneal tissue were performed. Microbiology consisted on cultures of corneal and scleral samples on blood, McConkey and Sabouraud agar and brain heart broth. Cryopreservationartefacts were evaluatedby histology. Transmission electron microscopy (TEM) was used to establish collagen integrity, as well asthe number and characteristics of keratocytes, classifying those in normal, apoptotic and necrotic. Cell death by apoptosis was assessed by TUNEL in selected canine samples Results.Microbiology: Direct cultures were positive in 27.5% [c] 15.0% [f] and 0% [e] of G≤1aand in none of the G≥6a.Enriched cultures were positive in 47.5% [c] 30.0% [f] and 27.5% [e] of G≤1aand in 16.7% [c] 0% [f] and 25.0% [e] ofG≥6a.Histopathology: In all three species, cryopreservation artefacts were more frequent in G≤1a samples than in G≥6a. TEM: The predominant keratocyte was apoptotic in all samples of the 3 species. Collagen structure is retained over time, classified as organized or semi-organized in all cases, except in one sample of canine cornea. Conclusion. The canine, feline and equine corneal and scleral tissues cryopreserved at -20°C can be used for at least 8, 10 and 9 years respectively without microbiological or structural impediments. Bacterial contamination in these tissues seems to be reduced over time. Apoptosis is the most important cell death pathway for cryopreserved (-20º)keratocytes.

La cirurgia de mínima invasió, en particular la cirurgia laparoscòpica, s'ha convertit en una opció de referència en molts procediments. Això és degut al seus beneficis ja provats en el pacient. No obstant això, per poder realitzar aquestes tècniques és obligat passar per un període d'aprenentatge, on els simuladors juguen un paper molt important en l'adquisició de noves habilitats quirúrgiques. Els objectius d'aquest estudi són descriure el desenvolupament d'un Simulador Laparoscòpic Caní (SLC) per veterinaris, validar el seu programa de formació i determinar la seva utilitat en l'adquisició de noves habilitats quirúrgiques, així com avaluar els problemes ergonòmics durant la realització de tasques de formació laparoscòpica utilitzant el SLC. Els diferents estudis d'aquest treball inclouen un total de 84 veterinaris amb diferent graus d' experiència en cirurgia laparoscòpica. El programa d'entrenament consistia en quatre tasques realitzades sobre el SLC: coordinació, trasllat d'objectes, tall i sutura. Diversos programes informàtics, així com imatges de tomografia d'ordinadors van ser utilitzats per a la realització del SLC. Com a mesures objectives de valoració, s'ha utilitzat el temps d'execució, l'escala GOALS (Global Operative Assessment of Laparoscopic Skills) i una llista de tasques específiques per avaluar el programa d'entrenament laparoscòpic. Quant a l'estudi d' ergonomia, es va analitzar l'activitat muscular mitjançant electromiografia de superfície i es van enregistrar els moviments de la mà mitjançant un guant virtual. El SLC ha tingut una bona acceptació preliminar en les tasques bàsiques de la laparoscòpia. Els resultats de les proves de validació mostraven que el SLC és adequat per l'entrenament i ensenyament de tasques bàsiques laparoscòpiques. És capaç de distingir el grau d'experiència laparoscòpica entre els veterinaris. Les tasques de tall i sutura mostraven un major grau d'activitat muscular. D'altra banda, el mànec axial mostrava millors postures ergonòmiques en comparació amb el mànec anellat durant les diferents tasques del programa de formació en el SLC. En conclusió, el SLC és una bona eina per a la formació en cirurgia laparoscòpica per a veterinaris, encara que té algunes limitacions inherents a tots els simuladors. A més a més, el SLC ha demostrat la seva validesa de continguts i constructiva amb el seu programa de formació laparoscòpica en veterinaris. Finalment, l'ergonomia laparoscòpica en veterinaris es veu afectada pel tipus de tasca, així com pels instruments utilitzats durant l'entrenament amb el SLC. / La cirugía de mínima invasión, en particular la cirugía laparoscópica, se ha convertido en una opción de referencia en muchos procedimientos. Esto es debido a sus ya demostrados beneficios para el paciente. Sin embargo, para poder realizar estas técnicas se requiere pasar por un periodo de aprendizaje, en el cual los simuladores juegan un papel muy importante en la adquisición de nuevas destrezas quirúrgicas. Los objetivos de este trabajo son describir el desarrollo de un Simulador Laparoscópico Canino (SLC) para veterinarios, validar su programa de entrenamiento y determinar su utilidad en la adquisición de nuevas habilidades quirúrgicas, así como evaluar los problemas ergonómicos durante la realización de tareas de entrenamiento laparoscópico utilizando el SLC. En los diferentes estudios de este trabajo se incluyeron un total de 84 veterinarios con diferente grado de experiencia en cirugía laparoscópica. El programa de entrenamiento consistió en cuatro tareas realizadas sobre el SLC: coordinación, transferencia de objetos, corte y sutura. Para la realización del SLC se utilizaron diversos programas informáticos, así como imágenes de tomografía computarizada. Como medidas objetivas de valoración, se ha utilizado el tiempo de ejecución, la escala GOALS (Global Operative Assessment of Laparoscopic Skills) y una lista de tareas específicas para evaluar el programa de entrenamiento laparoscópico. En cuanto al estudio de ergonomía, se analizó la actividad muscular mediante electromiografía de superficie y se registraron los movimientos de la mano mediante un guante virtual. El SLC tuvo una buena aceptación preliminar en las tareas básicas de laparoscopia. Los resultados de las pruebas de validación mostraron que el SLC es adecuado para el entrenamiento y la enseñanza en las tareas básicas laparoscópicas, siendo capaz de distinguir el grado de experiencia laparoscópica entre los veterinarios. Las tareas de corte y sutura mostraron mayor grado de actividad muscular. Por otro lado, el mango axial mostró mejores posturas ergonómicas en comparación con el mango anillado durante las diferentes tareas del programa de entrenamiento en el SLC. En conclusión, el SLC es una buena herramienta de formación en cirugía laparoscópica para veterinarios, aunque tiene algunas limitaciones inherentes a todos los simuladores. Además, el SLC ha demostrado su validez de contenidos y constructiva en su programa de formación laparoscópica en veterinarios. Finalmente, la ergonomía laparoscópica en veterinarios se ve afectada por el tipo de tarea, así como por el instrumental utilizado durante el entrenamiento en el SLC. / Minimally invasive surgery, including laparoscopy has become a reference option in many procedures. This is due to its proven benefits for the patient. However, to perform these techniques it is required to go through a learning period in which simulators play an important role in the acquisition of new surgical skills. The objectives of this work are to describe the development of a Canine Laparoscopic Simulator (CLS) for veterinarians, to validate the training program and determine its usefulness in the acquisition of new surgical skills and to assess ergonomic problems while performing laparoscopic training tasks using the CLS. A total of 84 veterinarians with different levels of experience in laparoscopic surgery were included in different studies of this work. The training program consisted of four tasks performed on the CLS: coordination, peg transfer, cutting and suturing. To build the CLS various informatics programs were used, as well as images of computer tomography. As objective measures of evaluation, we used time, GOALS (Global Operative Assessment of Laparoscopic Skills) scale and task-specific checklist to evaluate laparoscopic training tasks. To study the ergonomics, muscular activity was analyzed by surface electromyography, and hand movements were recorded using a virtual glove. The CLS had a good preliminary acceptance in basic laparoscopic tasks. The results of the validation tests showed that the CLS is suitable for training and educating in laparoscopic basic tasks, and is able to distinguish the degree of laparoscopic experience among veterinarians. The tasks of cutting and suturing showed greater muscular activity. On the other hand, the axial handle showed better ergonomic positions compared with ring handle during the different tasks of the training program in the CLS. In conclusion, the CLS is a good tool for the veterinarians' training in laparoscopic surgery, although it has some limitations inherent to all simulators. In addition, the CLS has proven its content and constructive validity in its program of laparoscopic training for veterinarians. Finally, laparoscopic ergonomics in veterinary is affected by the type of task, as well as by the instrument used during training in the CLS.

L'anaplasmosi, la babesiosi i la besnoitiosi es troben entre les malalties bovines poc conegudes i estudiades a Catalunya. A dia d'avui, més enllà de descripcions i comunicacions puntuals no disposem de cap estudi epidemiològic que ens permeti conèixer el seu estat actual. Amb el propòsit d'iniciar aquests estudis es planteja el present treball de Tesi Doctoral, centrat en l'estudi d'Anaplasma spp., Babesia bigemina i Besnoitia besnoiti. La prevalença dels dos hemoparàsits es va determinar a través de l’anàlisi de sèrums de diferents poblacions bovines. La metodologia va consistir en tècniques d’ELISA. L’estudi estadístic dels resultats i de diferents factors de risc associats a l’animal, el maneig i localització de l’explotació es va realitzar amb un model lineal generalitzat. Les seroprevalences observades van ser aproximadament d’un 40 % per a l’anaplasmosi i un 54,4 % per a la babesiosi causada per B. bigemina. L’edat i la cria en extensiu es van establir com a factors determinants. L'estudi de B. besnoiti consta a la vegada de dues parts. En la primera part, es van analitzar sèrums de bovins procedents de les zones nord i sud de Catalunya. mitjançant una tècnica d’ELISA L’estudi estadístic de les dades es va basar en un model lineal generalitzat. Els resultats de seroprevalença obtinguts van ser d'un 64 %. En la segona part de l'estudi de B. besnoiti es van obtenir mostres de globus oculars i de sang de 206 animals sacrificats en dos escorxadors de la comarca de la Garrotxa. Es van observar els quists escleroconjuntivals en un 3,9 % dels animals estudiats, mentre que la seroprevalença en els mateixos animals va ser d'un 29,6 %. Les seroprevalences obtingudes per a les hemoparasitosis i la besnoitiosi bovina mostren que s’haurien d’incloure en el diagnòstic diferencial de les malalties bovines a la nostra zona. / Anaplasmosis, babesiosis and besnoitiosis are bovine diseases with limited information in Catalonia. Nowadays, except for brief descriptions, no epidemiological studies are available to know the current status. The main objective of this Doctoral Thesis is to initiate these studies focused on Anaplasma spp., Babesia bigemina and Besnoitia besnoiti. Hemoparasites seroprevalence were established by the analysis of samples from different cattle population. The methodology consisted in ELISA analysis of serum samples. The statistical study of the results and different risk factors from animals, management and geographic location were obtained using a generalized linear model. The overall seroprevalence to Anaplasma spp. was closely to 40 % and to B. bigemina was 54.4 %. Age and extensive management were determined as determinant factors. B. besnoiti study was divided in two parts. In the first one, serum samples from north and south areas from Catalonia were analysed by an ELISA technique. Data analysis was based on a generalized linear model. The seroprevalence was found to be 64 %. In the second part of B. besnoiti study, eyeball and blood samples were collected from 206 slaughtered cattle in two abattoirs from Garrotxa region. 3,9 % of studied animals showed sclero-conjunctival cysts, whereas the seroprevalence was 29,6 % in the same animals. The high seroprevalences detected for both hemoparasites and bovine besnoitia suggested they all should be included in differential diagnosis in bovine diseases in our area.

La patología articular en el caballo provoca, a corto o largo plazo, cojera en el caballo y es motivo de importantes pérdidas económicas en el mundo deportivo ecuestre. La fisiopatología articular en el caballo comporta una serie de procesos biopatológicos que, si no se detectan y tratan a tiempo, generan un ciclo catabólico autodestructivo que induce la degradación de los propios tejidos articulares. Estudios de medicina humana hace tiempo que han demostrado mediante la determinación de marcadores hemostáticos, y más recientemente, de la concentración de dímero-D sinovial, que existe una activación generalizada tanto de la fibrinolisis como de la cascada de la coagulación en la articulación artrítica que están relacionadas con la inflamación articular. Sin embargo, no hay nada descrito en caballos ni en el resto de especies animales sobre la determinación de la concentración de dímero-D en el líquido sinovial, y lo poco que hay descrito sobre los procesos fisiopatológicos relacionados con la coagulación intra-articular son extrapolaciones de medicina humana. El dímero-D es un producto específico de la fibrinolisis que resulta sólo de la degradación de la fibrina estable y su presencia es indicativa de la formación previa de un coágulo. Nuestros estudios, realizados con caballos con patologías articulares frecuentes como la OCD, la OA y la artritis séptica (AS), han permitido determinar y evidenciar por primera vez y mediante la determinación de la concentración de dímero-D sinovial, la activación de la fibrinolisis sinovial en respuesta a la activación de la cascada de la coagulación en las articulaciones afectadas del caballo, y que varía independientemente de la presencia de enfermedad sistémica en el caballo. Hemos podido comprobar que la concentración de dímero-D sinovial (activación fibrinolítica sinovial) aumenta considerablemente en los caballos con OCD y OA, sobretodo con OCD, y que en los casos con AS este aumento es muchísimo más destacado que en el resto de artritis. Esto demuestra que la actividad fibrinolítica sinovial aumenta de forma más o menos marcada en función de la inflamación articular. La determinación de la concentración de dímero-D sinovial ha demostrado ser un marcador más sensible que el análisis del recuento total de células blancas (RTCB) del líquido sinovial para detectar la presencia de patología articular no infecciosa. Estos hallazgos apuntan que la determinación de la concentración sinovial de dímero-D puede ser útil como marcador de patología articular. En un futuro, ampliando la población de estudio, es posible que se pueda determinar un valor de corte que permita diferenciar entre patología articular inflamatoria e infecciosa. En conclusión, la activación de la cascada de coagulación y de la fibrinolisis en el líquido sinovial desempeñan un papel en la fisiopatología articular de caballos con OCD, OA y AS. La determinación cuantitativa o semi-cuantitativa de dímero-D es un test rápido, económico y práctico, y su uso es factible a nivel clínico para determinar patología articular en el caballo. Finalmente, la investigación de métodos para reducir el depósito de fibrina y estimular la actividad fibrinolítica en las patologías articulares, especialmente las altamente inflamatorias e infecciosas, podría ofrecer una nueva alternativa terapéutica articular. / Equine joint pathology usually results in lameness which is one of the most important reasons for significant economic losses in the equestrian sport world. The biopathological events involved in joint disease generate a catabolic cycle which causes joint tissue degeneration if left uncontrolled. Human studies have demonstrated the relationship between joint inflammation and the hemostatic and the fibrinolytic pathway activation, and secondly that this can be measured by D-dimer concentration determination in synovial fluid. Neither the confirmation of the activation of these two pathways as part of the pathophysiology of joint disease, nor the measurement of D-dimer concentration in synovial fluid have been reported in other species, including equine, although extrapolations from human medicine have been made. D-dimers are specific fibrinolysis byproducts resulting from stable fibrin degradation only and their presence confirms previous clot formation. These studies, which include horses with different types of joint disease like OCD, OA and septic arthritis have confirmed that a fibrinolytic process occurs within the joint in response to the coagulation pathway activation in diseased joints, independently of the presence of systemic disease. We have documented a significant rise in synovial D-dimer concentration (synovial fibrinolytic activation) both in OCD and OA affected horses, and more so in horses with OCD, and furthermore, this rise has been observed as being markedly more prominent in septic arthritis patients. This shows that synovial fibrinolysis activity rises in function of the degree of inflammation. Synovial D-dimer concentration determination has proven to be a more sensitive marker than total nucleated cell count (TNCC) for the detection of non-infectious joint disease. However, further investigation and inclusion of a larger group of horses for study are necessary to be able to give a valid cutoff point useful to differentiate between septic and inflammatory joint disease. In conclusion, both the coagulation and the fibrinolytic pathways play a role in equine joint pathophysiology, in namely OCD, OA and septic arthritis patients. The quantitative or semi-quantitative D-dimer determination is a quick, practical and inexpensive test for the diagnosis of joint pathology in the horse. Finally, investigating ways in which to reduce fibrin deposition and stimulate fibrinolysis activity within diseased joints may offer a new therapeutic alternative especially in highly inflammatory and in septic joint conditions.

Antecedentes: En los seres humanos, el factor de crecimiento transformante beta peritoneal (TGF-β) se asocia con enfermedades peritoneales y la posterior formación de adherencias. No hay estudios sobre las concentraciones de TGF-β peritoneal en caballos con cólico plasma. Por otra parte, caballos con cólicos graves o con líquido peritoneal alterado al ingreso, así como los no sobrevivientes, tendrán mayores aumentos en el plasma y peritoneal de D- dímero. Objetivos: Los objetivos de esta tesis fueron: 1) Determinar las concentraciones en plasma y líquido peritoneal de TGF-β1 y TGF-β 3 en caballos con diferentes tipos de cólicos (no sometidas previamente a cirugía abdominal), 2) comparar estas concentraciones de acuerdo con el tipo de fluido peritoneal (trasudado, trasudado modificado y exudado), 3) comparar y correlacionar las concentraciones plasmáticas y peritoneales de TGF-β 1 y TGF-β3 y los tipos de líquido peritoneal según el grupo de los cólicos y la evolución clínica y 4) describir y evaluar la correlación entre TGF-β 1 y D- dímero. Métodos: Dos estudios clínicos se llevaron a cabo para el desarrollo de estos objetivos. Estudio 1: se obtuvo líquido peritoneal y plasma de 78 caballos con cólico y 8 caballos sanos. Los pacientes fueron clasificados de acuerdo al diagnóstico (obstrucciones, enteritis, trastornos isquémicos y peritonitis), el análisis del líquido peritoneal (trasudado, trasudado modificado y exudado), y el resultado (sobrevivientes y no sobrevivientes). Las concentraciones plasmáticas y peritoneales de TGF-β1 y TGF-β3 se determinaron por ELISA. Los datos se analizaron por pruebas paramétricas y no paramétricas. Un valor de P ≤ 0,05 fue considerado estadísticamente significativo. Resultados: Las concentraciones de líquido peritoneal de TGF-β1 fueron significativamente (P= 0,01) más altas en caballos con peritonitis en comparación con todos los otros grupos de cólico y controles. Los caballos con lesiones isquémicas tuvieron significativamente (P= 0,01) mayores concentraciones peritoneales de TGF-β1 en comparación con los controles y el grupo de caballos con obstrucciones. La concentración peritoneal de TGF-β1 también fue significativamente (P= 0,01) más alta en exudados en comparación con trasudados. Las concentraciones peritoneales de TGF -β1 y TGF-β3 y la concentración plasmática de TGF-β1 aumentaron significativamente en los caballos no sobrevivientes en comparación con los sobrevivientes (p= 0,001, P= 0,004 y P= 0,05, respectivamente). Estudio dos: se incluyeron 124 caballos con cólico y 12 caballos como grupo control. Los caballos con cólico fueron agrupados según el diagnóstico (obstrucciones, enteritis, problemas isquémicos, peritonitis y otros problemas mixtos), los resultados del análisis del líquido peritoneal (trasudado, trasudado modificado y exudado) y la evolución clínica (sobrevivientes y no sobrevivientes). Las concentraciones plasmáticas y peritoneales de D-dímero y las concentraciones peritoneales de TGF−β1 fueron significativamente mayores en los caballos con la enteritis, peritonitis y trastornos isquémicos en comparación con los caballos con obstrucciones intestinales. Las concentraciones peritoneales de dímero D y TGF-β1 fueron significativamente mayores en los caballos con líquido peritoneal alterado (trasudado modificado y exudado) en comparación con los caballos con el análisis normal de líquido peritoneal. La concentración de estas proteínas también fue significativamente mayor en el grupo con peritonitis y en caballos con líquido peritoneal alterado. Las concentraciones peritoneales y plasmáticas de dímero D en y TGF-β1 fueron mayores en los caballos no sobrevivientes. Se encontraron correlaciones significativas, entre débiles y fuertes, entre las proteínas evaluadas y el diagnóstico, la evolución clínica y el tipo de líquido peritoneal. Conclusiones: La concentración peritoneal de TGF-β1 y de dímero D fue mayor en los caballos con enfermedades gastrointestinales graves (lesiones isquémicas intestinales y peritonitis), en caballos con un fluido peritoneal alterado (exudado) y en los no sobrevivientes. La concentración peritoneal de TGF-β1 aumenta en caballos con enfermedad gastrointestinal grave como una respuesta anti-inflamatoria y podría estar correlacionado con alteraciones en el sistema fibrinolítico, manifestado principalmente por el aumento en las concentraciones plasmáticas y peritoneales de D-dímero. / Background: In humans, peritoneal transforming growth factor beta (TGF-β) is associated with peritoneal diseases and subsequent adhesion formation. No studies on plasma and peritoneal TGF-β concentrations in horses with colic are available. On the other hand horses with severe colic or with altered peritoneal fluid at admission, as well as non-survivors, will have greater increases in plasma and peritoneal D-dimer. Aims: The aims of this thesis were 1) To determine both plasma and peritoneal TGF-β1 and TGF-β3 concentrations in horses with different types of colic (not previously subjected to abdominal surgery), 2) to compare these concentrations according to the type of peritoneal fluid (transudate, modified transudate and exudate), 3) to compare and correlate plasma and peritoneal concentrations of TGF-β1 and TGF-β3 and the types of peritoneal fluid according to the colic group and outcome and 4) to describe and to assess the correlation between TGF-β1 and D-dimer. Methods: Two clinical studies were performed for developing these objectives. Study 1: Peritoneal fluid and plasma samples from 78 horses with colic and 8 healthy horses were obtained. Patients were classified according to diagnosis (obstructions, enteritis, ischemic disorders and peritonitis), peritoneal fluid analysis (transudate, modified transudate and exudate), and outcome (survivors and non-survivors). Plasma and peritoneal TGF-β1 and TGF-β3 concentrations were determined by ELISA. Data were analyzed by parametric a non parametric tests. A P≤0.05 was considered as statistical significant. Results: Concentrations of peritoneal fluid TGF-β1 were significantly (P=0.01) higher in horses with peritonitis in comparison with all other colic groups and controls. Horses with ischemic lesions had significantly (P=0.01) higher concentrations of peritoneal TGF-β1 in comparison with controls and the group of horses with obstructions. Peritoneal TGF-β1 concentration also was significantly (P=0.01) higher in exudates in comparison with transudates. Peritoneal TGF-β1 and TGF-β3 concentrations and plasma TGF-β1 concentration were significantly increased in non-survivors compared to survivors (P=0.001, P=0.004 and P=0.05, respectively). Study two: 124 horses with colic and 12 control horses were included. The horses with colic were grouped according to diagnosis (obstructions, enteritis, ischemic problems, peritonitis and other mixed problems), results of the peritoneal fluid analysis (transudate, modified transudate and exudate) and outcome (survivors and non-survivors). Plasma and peritoneal D-dimer concentrations and peritoneal TGF-β1 concentrations were significantly higher in horses with enteritis, peritonitis and ischemic disorders, when compared to horses with large intestinal obstructions. Peritoneal D-dimer and TGF-β1 concentrations were significantly higher in horses with altered peritoneal fluid (modified transudate and exudate) compared to horses with normal peritoneal fluid analysis. The concentration of these proteins was also significantly higher in the peritonitis group and in horses with altered peritoneal fluid. Peritoneal and plasma D-dimer concentrations and TGF-β1 were also significantly higher in non-survivors. There were significant correlations, from weak to strong, between the evaluated proteins and the diagnosis, the outcome and the type of peritoneal fluid. Conclusions: Peritoneal TGF-β1 and D-dimer concentration was higher in horses with severe gastrointestinal diseases (ischemic intestinal lesions and peritonitis), in horses with an altered peritoneal fluid (exudate), and in non-survivors. Peritoneal TGF-β1 concentration increases in horses with severe gastrointestinal disease as an anti-inflammatory response and could be correlated with alterations in the fibrinolytic system mainly manifested by increasing in the plasma and peritoneal D-dimer concentrations.

La producción animal en un país tropical como Colombia se ve limitada, entre otras cosas, por factores ambientales adversos, como temperatura, humedad relativa y radiación solar altas a lo largo del año. En los sistemas de producción bovina colombiana existen razas criollas, como la San Martinero, que ha demostrado los mejores índices reproductivos (fertilidad, natalidad, intervalo entre partos, etc.). Para esclarecer el porqué de la mayor fertilidad, la presente investigación se realiza con el propósito de estudiar proteínas del plasma seminal y su asociación con indicadores de calidad espermática pre- (volumen seminal, concentración, motilidad, viabilidad, morfología, índice de calidad espermática (ICE) y espermatozoides congelables) y post-descongelación (motilidad, viabilidad, morfología e ICE), fertilidad y producción in vitro de blastocistos de esta raza criolla en la época lluviosa comparada con la época seca y con la raza Cebú Brahman. Para la investigación se seleccionaron al azar 7 toros reproductores de la raza San Martinero (SM) y 7 de la raza Cebú Brahman. Los ejemplares se mantuvieron bajo pastoreo en Brachiaria decumbens en el Centro de Investigaciones la Libertad de Corpoica. La evaluación por época se realizó en SM tanto en período lluvioso como de sequía y la evaluación entre razas (SM y Cebú) únicamente se realizó en lluvias. Los muestreos y análisis seminales por toro en fresco se realizaron tres veces y post descongelación 5 veces para evaluación de calidad espermática, fecundación y producción in vitro de blastocistos. El análisis de la información se basó en Modelos mixtos con medidas repetidas en el tiempo y en ecuaciones de predicción y análisis de componentes principales. Los resultados del estudio permitieron la generación de los primeros mapas referenciales uni y bidimensionales de la raza San Martinero y de la Cebú Brahman caracterizados bajo las condiciones climáticas del trópico bajo colombiano. Los resultados obtenidos de los toros SM para la época de lluvias en términos de indicadores de calidad espermática, fecundación in vitro y efecto en el desarrollo embrionario vistos en forma integrada permiten predecir la fertilidad in vivo. Los valores de estos indicadores no generaron grandes cambios entre la época seca o lluviosa, pero sí superaron a los indicadores de eficiencia reproductiva de toros reproductores de la raza Cebú Brahman. Los cambios de las variables estudiadas que determinan la calidad espermática de los toros por efecto de las proteínas plasmáticas son respuesta de la participación en forma de clúster que integra, bajo un modelo de predicción, proteínas con y sin cambios significativos y no en forma independiente. En este estudio reconocimos algunos modelos cuya asociación explican en gran forma el comportamiento de las variables de calidad seminal (volumen seminal, concentración, motilidad, viabilidad y morfología espermáticas), del ICE y de la producción de espermatozoides congelables, en función de la raza, la época climática, o de acuerdo a si se trata de semen fresco o descongelado. La investigación realizada permitió identificar que el punto de proteína A2301, de de peso molecular 16.74 kDa y pI 4.78, se asocia con los toros seleccionados como de mayor fertilidad, mientras que los puntos A4113 y A4119, de pesos moleculares 15.37 y 15.49 kDa y pI de 5.38 y 5.15, respectivamente, se relacionaron con los toros de baja fertilidad. Los resultados encontrados de la evaluación de calidad espermática del toro criollo SM y de participación de las proteínas del plasma seminal estudiados entre época y comparado con la raza Cebú Brahman muestran la superioridad del bovino Criollo y señalan a la proteómica como una gran herramienta para la selección de toros. / Animal production in a tropical country like Colombia is constrained, among other things, by adverse environmental factors such as temperature, relative humidity and high solar radiation throughout the year. In cattle production systems Colombian landraces exists, such as San Martinero, which has shown the best reproductive rates (fertility, birth, calving interval, etc..). To clarify the reason for its increased fertility, this research was done with the purpose of studying seminal plasma proteins and their association with indicators of sperm quality pre- (volume, concentration, motility, viability, morphology, sperm quality index (ICE) and freezable sperm) and post-thaw (motility, viability, morphology and ICE), fertility and in vitro production of blastocysts in this race Creole during the rainy season compared to the dry season and to Zebu Brahman semen. Seven San Martinero (SM) bulls and 7 Zebu Brahman were randomly selected for the research. The specimens were kept under grazing with Brachiaria decumbens in the Research Center Corpoica “La Libertad”. The evaluation was conducted in SM both in the rainy and drought seasons and evaluation between races (SM and Zebu) only took place in the rainy season. Sampling and quality assessment for bull fresh semen were performed three times; for post-thaw sperm, fertilization and in vitro blastocyst production, the evaluations were 5 times repeated. The data analysis was based on mixed models with repeated measures over time and predictive equations and principal component analysis. The results of the study allowed the first generation and two-dimensional reference maps of seminal plasma proteins of San Martinero and Zebu Brahman races characterized under tropical climatic conditions in Colombia. The results of the SM bulls for the rainy season in terms of indicators of sperm quality, fertilization and in vitro embryo development, showed in an integrated way, let predict the in vivo fertility. The values of these indicators did not produce major changes between the dry and rainy season, but outscored the reproductive efficiency indicators of breeding bulls of Brahman Zebu. The changes of the studied variables that determine the sperm quality of the bulls by the effect of the plasma proteins are the response for their participation in a cluster manner and not in an independently manner, that integrates, under a prediction model, proteins with and without significant changes. In this study, some models were recognized whose association explains the behavior of variables that account for semen quality (seminal volume, concentration, motility, viability and sperm morphology), SQI and sperm production, depending on the race, the climatic season, or according to whether it was fresh or frozen-thawed sperm. The investigation identified the protein point A2301, with molecular weight of 16.74 kDa and pI 4.78, associated with bulls selected as those with higher fertility, while points A4113 and A4119, with molecular weight 15.49 15.37 kDa and pI 5.38 and 5.15, respectively, were associated with low fertility bulls. The results of the evaluation of native SM bull sperm quality and participation of seminal plasma proteins studied between seasons, and compared with Zebu Brahman cattle, show the superiority of San Martinero and point to proteomics as a great tool for selecting of bulls.

La Alta Presión Hidrostática (APH) es una tecnología no térmica capaz de extender la vida útil de los alimentos al mismo tiempo que mantiene sus características nutricionales y organolépticas. El queso fresco es una variedad no madurada, de coagulación enzimática o ácida, y que generalmente es consumido poco después de su elaboración. El queso fresco tradicional es obtenido por coagulación enzimática y es un medio ideal para el crecimiento bacteriano, ya que en su fabricación no se utilizan fermentos lácticos, posee una elevada actividad de agua y un alto contenido en proteína y grasa. El principal objetivo de esta tesis fue evaluar el efecto de la APH para extender la vida útil de un queso fresco tradicional obteniendo un producto de alta calidad. Para este propósito, se realizó un estudio preliminar con quesos comerciales de pequeño formato (80 g) a nivel de planta piloto con el fin de determinar la capacidad de la APH para inhibir el crecimiento de microorganismos causantes de deterioro. Los quesos fueron tratados a 300 y 400 MPa (5 min a 6°C) y se evaluaron diferentes parámetros microbiológicos, de de composición y físico-químicos durante su almacenamiento en frío. Los resultados mostraron que la APH no modificó la composición del queso fresco y produjo sólo pequeños cambios en el color (más amarillo) y la textura (más firme), cuando se comparó con un queso no tratado. Además, la aplicación de 300 y 400 MPa aumentó la vida útil de los quesos a 14 y 21 días, respectivamente. La siguiente fase fue determinar la vida útil de un queso comercial (250 g) tratado a 500 MPa (5 min a 18°C) bajo condiciones industriales siguiendo también su evolución microbiológica, de composición, físico-química y sensorial durante 21 días de almacenamiento en frío. En este caso, los quesos presurizados alcanzaron una vida útil de entre 19 y 21 días al compararlos con los quesos no tratados que fue de entre 7 y 8 días. Sin embargo, el tratamiento de 500 MPa afectó significativamente a las características de color, textura, microestructura y sensoriales del queso, pero no así su preferencia por parte de un panel de catadores. Es importante destacar que la APH fue capaz de mantener las características de aroma del queso a lo largo de su vida útil, retrasando la formación de compuestos volátiles responsables de sabores extraños. Adicionalmente, se realizó un ensayo de inoculación con Listeria spp. con el fin de evaluar la efectividad de la APH (300-600 MPa durante 5 min a 6°C) para asegurar la inocuidad alimentaria. Se seleccionaron tres cepas bacterianas (L. monocytogenes Scott A y CECT 4031, y su marcador, L. innocua CECT 910) para estudiar la inactivación y la generación de daño sub-letal después del tratamiento y su evolución durante 15 días de almacenamiento a 4°C. Con el tratamiento de 300 MPa no se consiguió inactivar ninguna de las cepas inoculadas. Sin embargo, tanto los tratamientos de 500 MPa y 600 MPa se lograron importantes reducciones de Listeria spp. Por otra parte, la presurización del queso fresco entre 300-600 MPa no produjo significativamente daño sub-letal, apreciándose diferencias en el comportamiento entre las cepas estudiadas. Así, se observó que L. monocytogenes CECT 4031 fue la más sensible a la APH y Scott A la más resistente. En los quesos tratados el crecimiento de esta bacteria durante el almacenamiento en frío no fue inhibido. Los recuentos en los quesos tratados a 300 MPa no fueron distintos a los del queso control para todas las cepas y nivel de inoculo utilizados. / High pressure processing (HPP) is a non-thermal technology able to extend the shelf-life of a number of food products while maintaining their sensory and nutritional quality. Fresh cheese is unripened rennet or acid-coagulated type and is usually consumed after manufacturing. Traditional fresh cheese is obtained by rennet coagulation and it may serve as an ideal medium for bacterial proliferation, since no starter culture is added, and considering its high water activity and its high protein and fat contents. The main objective of this thesis was to evaluate the effect of HPP technology for extending the shelf-life of a starter-free fresh cheese, and in order to obtain a high quality product. For this purpose, a preliminary study at pilot plant scale using small commercial cheeses (80 g) was carried out with the aim to determine the HPP capacity to inhibiting the outgrowing of spoilage microorganisms. In this sense, cheeses were treated at 300 and 400 MPa (5 min at 6ºC) and their microbiological, compositional and physico-chemical evolution during cold storage was evaluated. Results indicated that HPP did not affect cheese composition and provoked only little changes in colour (more yellow) and textural (firmer) properties of fresh cheese when compared with untreated cheese. Besides, 300 and 400 MPa were able to extend fresh cheese shelf-life to 14 and 21 days, respectively. The next step was to determine the shelf-life of commercial fresh cheeses (250 g) treated at 500 MPa (5 min at 18ºC) at industrial scale, by following their microbiological, compositional, physico-chemical and sensorial evolution during cold storage of 21 days. This time, pressurised cheeses achieved a shelf-life of about 19-21 days compared to 7-8 days of the untreated cheese. However, 500 MPa significantly affected colour, microstructural, textural and sensory characteristics, but the preference for the treated cheese was not affected. It is also worth noting that HPP was able to maintain the aroma characteristics of cheese throughout its shelf-life, leading to a delay in the formation of volatile compounds responsible for off-flavours. Additionally, an inoculation study with Listeria spp. was carried out in order to evaluate the effectiveness of the HPP (300-600 MPa for 5 min at 6°C) to assure food safety. Three bacterial strains (L. monocytogenes Scott A and CECT 4031, and its surrogate L. innocua CECT 910) were selected to study the initial inactivation achieved, the sublethal damage generated and microbial growth during 15 days of storage at 4°C. Treatment at 300 MPa did not inactivate any of the strains inoculated. Conversely, 500 and 600 MPa were effective to achieve significant reductions of pathogen counts in fresh cheese. On the other hand, treatment of fresh cheese within the range of 300-600 MPa did not produce significant sublethal injury. Regarding behaviour differences among Listeria strains, it was observed that L. monocytogenes CECT 4031 was the most sensitive and L. monocytogenes Scott A the most resistant to HPP. Finally, growth during cold storage was not prevented since viable cells remain after the treatment. Counts of cheeses treated at 300 MPa were not different from untreated cheese counts, for all strains and inocula level used. On the other hand, differences in rate of growth among strains were observed. Scott A strain showed the lowest rate for all conditions studied. These results confirm that the fresh cheese, due to their characteristics of pH and aw, is able to support growth of Listeria spp.

En el presente trabajo se plantea analizar en tumores mamarios de gata la expresión de marcadores establecidos en el cáncer de mama de la mujer y observar su relación con metástasis, clasificación molecular y modelos de oncogénesis. Se aplican técnicas inmunocitoquímicas sobre 160 muestras (21 adenomas, 66 carcinomas metastáticos y 73 no metastáticos). La expresión de diversos marcadores se asocia con la metástasis y podría relacionarse con los dos modelos de carcinogénesis propuestos, mientras que a pesar de que se consigue clasificar el total de carcinomas felinos del estudio según el modelo molecular, los subgrupos obtenidos no se relacionan con el curso de la neoplasia. En función de los resultados obtenidos, es posible considerar a la gata como un modelo animal espontáneo válido para el estudio del cáncer de mama en la mujer / The aims of the present study were to analyze the expression in feline mammary tumours of several markers of human breast cancer, and to observe their relation with the appearance of metastasis, the molecular classification, and the oncogenesis models. A total of 160 feline mammary neoplasia were used, from which 21 were adenomas, 66 simple non-metastasic carcinomas and 73 simple carcinomas with metastasis in a regional lymphatic node. A analysis was performed using immunocytochemical techniques for several markers such as luminal (CK8/18) and basal (CK5/6 and CK14) cytokeratins, vimentin, E-cadherin, β-catenin, N-cadherin, CD44, HER-2 and ER. The results show that enhanced expression of basal cytokeratins, low expression of CK8/18, loss of E-cadherin and β-catenin, expression of N-cadherin and CD44 expression are associated with metastasis. Furthermore, although all carcinomas in this study were classified according to the molecular model, the obtained subgroups do not correlate with the prognosis of the neoplasia. Keywords: Tumor, feline, mammary gland, immunocytochemistry

La Inspección Veterinaria en los mataderos es necesaria para el control de los peligros asociados al consumo de carnes y para la vigilancia epidemiológica de las enfermedades que afectan a los animales de una explotación o región. El objeto de este estudio fue estimar la prevalencia de los procesos patológicos que motivan la declaración de no aptitud para consumo de canales de ungulados domésticos de cebo procedentes del sureste de España y clasificarlos en base a la fiabilidad de su diagnóstico en matadero, determinando en que procesos las lesiones macroscópicas detectadas mediante la inspección post mórtem son suficientes para comunicar con garantía la detección de una enfermedad o si precisan de diagnósticos laboratoriales externos y en cuales el examen histopatológico sería el método de elección. Para ello se procedió a clasificar los procesos patológicos que motivaron el dictamen de no aptitud para consumo de 137 bovinos, 973 ovinos, 337 caprinos y 545 porcinos de los 123.627, 1.846.435, 250.718 y 484.016 animales de cebo de cada especie, respectivamente, sacrificados durante diez años en un matadero del sureste de España. Además de las inspecciones ante y post mórtem y exámenes suplementarios realizados in situ, se tomaron muestras de tejidos de 200 de estos animales para la realización de exámenes histopatológicos. Se consideraron procesos con un nivel máximo de fiabilidad de diagnóstico en matadero aquellos que se diagnosticaron sin necesidad de recurrir a exámenes laboratoriales externos o éstos confirmaron el diagnóstico macroscópico en el 100 % de los casos. Fueron la tuberculosis bovina generalizada, la forma cutánea de mal rojo y síndrome dermatitis-nefropatía porcinos, la forma crónica de pseudotuberculosis ovina y la aguda de pleuroneumonía porcina, la enteropatía proliferativa porcina, las distomatosis hepatobiliares, la leucosis, las úlceras gástricas, la melanosis, la miositis eosinofílica y la urolitiasis. La cisticercosis bovina sólo se consideró cuando se detectan cisticercos viables. Se determinó que el examen histopatológico sería el método laboratorial de elección en procesos de etiología incierta como las miositis y las degeneraciones musculares, en neoplasias como la leucosis y para establecer el diagnóstico diferencial entre procesos que cursan con inflamaciones granulomatosas. De no realizarse podrían declararse un 3,70 % de falsos positivos de formas localizadas de tuberculosis bovina. De los resultados obtenidos se deduce que la prevalencia de los procesos patológicos diagnosticados está condicionada por los factores ambientales y los hábitos de consumo de esta área geográfica. La mayor tasa de muertes previas al sacrificio correspondió al ganado caprino (11,41 ‰0), con un incremento significativo (p<0,01) de bajas durante el transporte en los meses de invierno. Esta misma especie fue en la que se obtuvo un porcentaje más alto de canales no aptas por desnutrición (41,54 %). La prevalencia en el bovino de cebo de la tuberculosis generalizada y de la miositis eosinofílica fue de 2,59 ‰0 y 0.40 ‰0 respectivamente. Se observó una mayor incidencia de casos de mal rojo porcino en los meses de octubre-noviembre y mayo-junio obteniéndose una correlación significativa (p<0,01) entre el número de casos y el aumento de pluviometría. No se detectaron casos de fascioliasis en animales nacidos y criados en esta región peninsular. La anemia pronunciada fue la alteración fisiopatológica con mayor porcentaje (8,44 %) de canales de porcino no aptas para consumo debido a las hemorragias por úlceras gastroesofágicas y enteropatías. Finalmente, se propone un sistema de clasificación de los procesos patológicos en tres niveles 0, 1 y 2 basados en la fiabilidad de su diagnóstico para facilitar la comunicación de las enfermedades animales detectadas en matadero. / Diagnosis of pathological processes in slaughter-domestic ungulates in South-East of Spain Abattoir Veterinary Inspection is necessary not only for the control of hazards associated with the consumption of meat but also by epidemiological surveillance of diseases affecting animals in a certain region. The purpose of this investigation was to estimate the prevalence of pathological processes which motivate the condemnation of carcasses from animals reared in farms being located in the South-East of Spain. These processes have also been classified concerning the reliability of post mortem diagnosis at abattoir level in order to decide in which cases the macroscopic lesions are specifically enough to guarantee the diagnostic of a disorder or if an external laboratory diagnosis is necessary and to see in which the histopathological examination would be the proper method of choice. A technical survey was conducted in a red meat abattoir located in the South-East of Spain over a period of ten years (from January 2002 to December 2011). Pathological processes led to the condemnation of 137 cattle, 973 lambs, 337 kids and 545 pigs carcasses out of 123,627, 1,846,435, 250,718 and 484,016 animals slaughtered of each respective species were classified. After ante and post mortem examination, if a specific pathological process was suspected, additional tests were performed on site and also tissue samples from 200 of these animals were collected for histopathological examination. The pathological processes diagnosed without resorting to external laboratory tests agree definetily to the macroscopic diagnosis in 100 % of cases (maximum level of diagnostic reliability in abattoir) that were: generalized bovine tuberculosis, skin lesions in swine erysipelas, porcine dermatitis-nephropathy syndrome, chronic pseudotuberculosis, acute porcine pleuropneumonia, porcine proliferative enteropathy, hepatobiliary distomatosis, leukosis, gastric ulcers, melanosis, eosinophilic myositis and urolithiasis. As a fact of bovine cysticercosis post-mortem inspection is enough only when viable cysticerci are detected. The histopathological examination would be the method of choice to establish the differential diagnosis of pathological processes showing granulomatous inflammations such as tuberculosis and granulomatous pneumonia in small ruminants, uncertain etiology processes such as myositis and muscle degeneration and neoplastic processes as leukosis. If the histopathological diagnosis was not performed a 3.70 % of false positives of bovine tuberculosis would be declared. The final results show that the climatic factors and social conditions in this geographic area are influencing the animal production systems, impacting on the prevalence of the diagnosed pathological processes. The higher rates of pre-slaughter deaths were observed in kids (11.41 ‰0) with a statistically significant (p<0.01) increase in transport during the winter months. In the same species the higher percentage of carcass condemnation was malnutrition (41.54 %). The prevalence in cattle of generalized tuberculosis and eosinophilic myositis was 2.59 ‰0 and 0.40 ‰0, respectively. A higher incidence of swine erysipelas in the months of October-November and May-June was observed with a statistically significant correlation (p<0.01) between the number cases and the increase of the pluviometry. No cases of fascioliasis were detected in the animals that were born on farms in this region. The most important pathophysiological alteration of carcasses swine was anemia (8.44 %) due to gastroesophageal ulcers and hemorraghic enteropathy. Finally, we put forward a classification system into three levels (0, 1 and 2) for the declaration of the pathological processes based on the reliability of diagnosis in abattoir, in order to facilitate the official communication of animal diseases detected by meat inspectors.