No description available.

Introdução: O Vírus da Hepatite B (HBV) é um vírus de DNA com tropismo por hepatócitos, que apresenta um genoma circular parcialmente dupla fita. Baseado na divergência de sequência do genoma completo, dez linhagens evolutivas, denominadas “genótipos” de HBV, foram descritas (A-J), sendo F e H considerados como “indígenas” da América. Os genótipos de HBV apresentam uma forte estruturação geográfica, o que pode refletir padrões das migrações humanas. Na América do Sul, áreas de alto endemismo incluem a região amazônica, e as maiores taxas de infecção têm sido observadas em populações Nativas Americanas. Embora a forte estruturação geográfica seja indicativa de uma origem antiga, a maioria das análises visando datar a origem dos genótipos “americanos” F e H resulta em datações extremamente recentes que não condizem com eventos históricos relacionados ao HBV. Objetivo: Os objetivos desse trabalho compreendem avaliar o impacto de diferentes taxas evolutivas e da seleção purificadora sobre as estimativas de datação molecular a fim de inferir quais taxas são mais condizentes com a origem do HBV na América; caracterizar o HBV circulante em uma amostra histórica de Nativos Americanos, e discutir os processos históricos que possam ser relevantes para entender os padrões observados. Material e Métodos: Nós realizamos análise Bayesiana utilizando sequências disponíveis dos genótipos F e H e diferentes taxas evolutivas previamente reportadas, e comparamos a ocorrência de mutações sinônimas e não-sinônimas em ramos da filogenia classificados como “antigos” ou “recentes” a fim de inferir a atuação da seleção purificadora ao longo do tempo. Para caracterização do HBV presente nas populações Nativas Americanas, detecção e amplificação do DNA viral foi obtida através de PCR seguido de sequenciamento e análise filogenética. Análise Bayesiana de Skyline Plot foi realizada para comparar a dinâmica populacional do subgenótipo A1 presente na amostra de Nativos Americanos e em outras cepas isoladas no Brasil. Resultados e conclusão: Nossos resultados mostram que as estimativas de datação molecular são fortemente influenciadas pelas taxas evolutivas utilizadas na análise. Além disso, foi observado excesso de mutações não-sinônimas nos ramos recentes da filogenia, o que é compatível com a ocorrência de seleção purificadora, e pode gerar um viés sobre as estimativas, produzindo datações recentes demais. Na amostra de Nativos Americanos, nós constatamos o predomínio do subgenótipo A1, relacionado com populações africanas. Análise de Skyline Plot mostrou que a expansão populacional nas cepas isoladas de Nativos Americanos é mais recente que aquela inferida para outras cepas brasileiras, sugerindo que os processos históricos que contribuíram para a formação do subgenótipo A1 dos Nativos Americanos são relacionados com ondas migratórias mais recentes em direção à região amazônica. / Introduction: Hepatitis B virus (HBV) is a hepatotropic DNA virus that presents a partially double-stranded circular genome. Based on sequence divergence of the complete genome, ten HBV evolutionary lineages, called “genotypes” have been described (A-J), with F and H being considered as indigenous from the Americas. HBV genotypes present a remarkable geographic structure which may reflect historic patterns of human migrations. In South America, areas of high endemism include the Amazon basin, and high prevalence rates have been observed in Native American populations. Although the strong geographical structure indicates an ancient origin, most analysis trying to date the origin of the “American” genotypes F and H result in extremely recent dates that disagree with historical events related with HBV. Objective: The aims of this study comprise evaluate the impact of different evolutionary rates and of the purifying selection on molecular dating estimates in order to infer which rates are in better agreement with the origin of HBV in the Americas; to characterize the HBV circulating in a historical sample of Native Americans, and discussing the historical processes that might be relevant to understand the observed patterns. Materials and Methods: We performed a Bayesian analysis using the available sequences of F and H genotypes and different evolutionary rates previously reported, and compared the occurrence of synonymous and non-synonymous mutations in branches of phylogeny classified as “old” or “young” in order to infer the effects of purifying selection over time. For the characterization of HBV from Native American populations, detection and amplification of viral DNA were obtained through PCR followed by sequencing and phylogenetic analysis. Bayesian Skyline Plot analysis was performed to compare the population dynamics of the A1 subgenotype present in the sample of Native American and in other strains isolated from Brazil. Results and Conclusion: Our results show that molecular dating estimates are strongly influenced by the evolutionary rate assumed in the analysis. In addition, we observed an excess of non-synonymous mutations in recent branches of phylogeny, which is compatible with the occurrence of purifying selection and may create a bias on the estimates, producing too recent datings. In the sample of Native Americans, we observed a predominance of the A1 subgenotype, related with African populations. Skyline Plot analysis showed that population expansion in strains isolated from Native Americans is more recent than that inferred from other Brazilian strains, suggesting that the historical processes that contributed to the presence of A1 subgenotype A1 Native Americans are related with more recent migratory waves towards the Amazon region.

Parasitos pertencentes ao gênero Echinococcus são platelmintos que necessitam de dois hospedeiros para completar o seu ciclo de vida. Durante a fase larval expressam abundantemente uma proteína chamada Antígeno B (AgB), que é uma lipoproteína oligomérica com massa molecular de aproximadamente 150 kDa formada por subunidades de 8 kDa. As subunidades do AgB são codificadas por pelo menos cinco genes (AgB1-5), com similaridade superior a 70%. A função da proteína nativa tem sido relacionada com a modulação da resposta imune do hospedeiro intermediário, ocasionando um viés para a resposta Th2 e com a detoxificação de metabólitos lipídicos no interior do cisto. Neste trabalho, foi avaliada a ocorrência de rearranjos entre os loci gênicos AgB1-5 durante a fase larval de E. granulosus sensu stricto e E. ortleppi através de Southern blot e de variação do número de cópias dentro de um mesmo cisto de E. granulosus sensu stricto por qPCR. Também foram determinadas a diversidade de seqüências destes cinco genes durante a fase adulta de E. granulosus sensu stricto através de clonagem e o seqüenciamento de produtos de PCR obtidos a partir de um único verme, bem como foram desenvolvidos anticorpos policlonais contra a proteína recombinante dos cinco genes descritos e contra um peptídeo sintético representante do gene AgB2. As diferenças na organização dos genes do AgB entre cistos foram analisadas em três isolados de E. granulosus sensu stricto e três isolados de E. ortleppi por Southern blot. O padrão de bandas de hibridização revelou que esta família gênica contém pelo menos nove genes em E. granulosus sensu stricto e dez em E. ortleppi. Foram observadas diferenças entre os cistos de E. ortleppi quanto ao padrão de bandas de AgB3, o que indicaria a ocorrência de rearranjos. A análise do número de cópias dos genes AgB1-5 em protoescóleces de um único cisto revelou uma grande heterogeneidade no número de cópias de todos os genes do AgB analisados, muitas vezes superiores a 10 vezes entre os protoescóleces. A grande divergência entre os protoescóleces sugere que o mecanismo responsável pela variação origine elementos de DNA instáveis. A diversidade de seqüências dos genes do AgB1-5 do verme adulto foi menor que a encontrada na fase larval. Interessantemente, o verme adulto analisado neste trabalho apresentava seqüências típicas de duas espécies, AgB2 e Mdh de E. ortleppi e AgB1, AgB3, AgB4 e AgB5 além do haplótipo mitocondrial de Cox1 de E. granulosus sensu stricto. Esta é a primeira vez que um verme adulto, possivelmente hibrido, de Echinococcus é encontrado, e indica que o intercruzamento entre E. granulosus sensu stricto e E. ortleppi pode gerar organismos viáveis. A síntese de anticorpos contra cada uma das cinco subunidades do AgB descritas foi obtida pela inoculação de proteína recombinante (recAgB1-5) em camundongos BALB/c. Embora todas as proteínas recombinantes tenham sido imunogênicas, observou-se reação cruzada entre elas, e apenas os anticorpos contra recAgB3 e recAgB4 foram mais reativos contra a proteína inoculada. Para melhorar a especificidade dos anticorpos, sintetizou-se oligopeptídeos de 12-15 aminoácidos representativos de cada subunidade acoplados a uma proteína carreadora (oliAgB1-5) e imunizaram-se camundongos BALB/c. A análise do soro obtido dos camundongos revelou que dos cinco peptídeos testados, apenas oliAgB2 foi imunogênico e apresentou uma resposta específica. / Parasites belonging to the genus Echinococcus are flatworms that require two hosts to complete their lifecycle. During their larval stage, Echinococcus abundantly expresses a protein called antigen B (AgB), which is a 150 kDa oligomeric lipoprotein composed by 8 kDa subunits. AgB is encoded by at least five genes (AgB1-5) with similarity above 70%. The function of native protein has been related to the modulation of host immune responses leading towards a Th2 cellular response bias. The protein is also involved with detoxification of lipid metabolites inside the cyst. In this study we evaluated the occurrence of rearrangements within AgB1-5 loci on metacestodes of E. granulosus sensu stricto and E. ortleppi using Southern blot and the variation at AgB number of copies within an E. granulosus sensu stricto cyst by qPCR. We also analyzed the sequence diversity of these five genes during the adult stage of E. granulosus sensu lato by cloning and sequencing PCR products obtained from a single adult worm. Finally, we have developed antibodies against AgB1- 5 recombinant proteins (recAgB1-5) and against a synthetic peptide representative of subunit AgB2. The differences in AgB gene organization among isolates were analyzed in three E. granulosus sensu stricto and three E. ortleppi cysts. The banding pattern revealed that this gene family contains at least nine genes in E. granulosus sensu stricto and ten in E. ortleppi. Differences in the AgB3 banding pattern were observed among the E. ortleppi cysts, which would indicate the occurrence of rearrangements. The AgB1-5 number of copies analysis in protoscoleces from a single cyst revealed a large heterogeneity of all AgB genes analyzed, often more than 10 times between protoscoleces. The large divergence among protoscoleces suggests that the mechanism responsible for copy number variation originates unstable DNA elements. The sequence diversity of AgB within an adult worm was lower than that found in the larval stage. Interestingly, the adult worms examined in this study showed typical sequences of two species: AgB1, AgB3, AgB4 and AgB5, as well as the Cox1 mitochondrial haplotype, are similar to E. granulosus sensu stricto sequences and Mdh and AgB2 were identical to those described for E. ortleppi. That is the first time that an adult worm of Echinococcus possibly hybrid is found, and it may indicate that the cross fertilization between E. granulosus sensu stricto and E. ortleppi generates viable organisms. Antibodies against each of the five subunits of AgB described were obtained by inoculating BALB/c mice with recombinant proteins recAgB1-5. Although every recombinant protein was immunogenic, we observed crossreaction between them, and only the response against recAgB3 and recAgB4 showed some specificity. To improve the antibody specificity, we synthesized oligopeptides of 12-15 amino acids representative of each AgB subunit (oliAgB1-5) coupled to a carrier protein and used these antigens to immunize BALB/c mice. Analysis of serum obtained from mice showed that only one of five oligopeptides tested (oliAgB2) was immunogenic, and it leads to a specific response.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2007. / Submitted by leandro spinola (l.spinolafla@gmail.com) on 2009-12-04T11:04:27Z No. of bitstreams: 1 2007_GilzaBastosdosSantosSanches.pdf: 2430133 bytes, checksum: 8aa73541c030c7f36e00771dcd41ea22 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2009-12-04T18:44:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_GilzaBastosdosSantosSanches.pdf: 2430133 bytes, checksum: 8aa73541c030c7f36e00771dcd41ea22 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-12-04T18:44:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_GilzaBastosdosSantosSanches.pdf: 2430133 bytes, checksum: 8aa73541c030c7f36e00771dcd41ea22 (MD5) Previous issue date: 2007 / A infecção pelo vírus da hepatite B é um dos maiores problemas de saúde pública no mundo, e a infecção viral mais importante entre profissionais de saúde. Diversas estratégias tem sido propotas paea controlar e prevenir esta infecção, mas para a adoção de medidas eficazes é necessário um amplo conhecimento sobre a epidemiologia da doença. Para estabelecer um panorama dessa infecção em nosso Estado, efetuou-se num estudo retrospectivo através da análise de exames executados pelo LACEN/FUNSAU/MS no període de 1997 a 2003, onde verificou-se que a ocorrência de 71,1% dos casos concentram-se nos municípios de Campo Grande, Dourados, Três Lagoas, Coronel Sapucaia, São Gabriel do Oeste, Naviraí, Ivinhema, Maracaju, Caaparó e Sonora. Através da análise da literatura disponível procurou-se a enfocar a transmissão da hepatite B como um risco ocupacional, em profissionais de saúde de diferentes categorias profissionais de saúe de diferentes categorias na rede pública de atenção primária. Participaram 332 profissionais de saúde que atuam nos municípios acima citados, com grande predominâcia do sexo feminino (86,7%) e idade média de 39 anos. Todos relataram já ter recebido pelo menos uma dose da vacina e 75%m apresentaram títulos de anti-HBsAg >10 UI/ml. Encontram-se marcadores sorológicos da infecção pelo HBV EM 11,1% das amostras analisadas com maior prevalência (51,3%) dos técnico/auxliares de enfermagem. A exposição à situação de risco para esta infecção foi identificada em 53,6% dos profissionais de saúde e o acidente ocupacional mais freqüente foi o ferimento por agulha. ______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Hepatits B virus infection is one of the major world problems in public health and the most important viral infection among healthcareworkers. Various strategies have been proposed to control and prevent the infection, but for the adoption of effective control measures, a thorough understanding of the disease epidemiology is necessary. To estabilish this pathology scenery in Mato Grosso do Sul sdtate, a retropective study was carried out by the analysis of all requisitions for hepatitis B serology diagnosed by Central Public Health Laboratory , LACEN/FUNSAU/MS, from 1997 through 2003, when was founded that 71,1% of all cases were concentred in the municipalities, of Campo Grande, Dourados, Três Lagoas, Coronel Sapucaia, São Gabriel do oeste, Naviraí, Ivinhema, Maracaju, Caarapó and Sonora. The available literature was analysed, focusing the hepatitis B transmission, as an occupational risk in health care works from different professional categories who works in a public primary care network. A total of 332 healthcare workers, from the municipalities mencioned above participated, with grate female predominance (86,7%) and mean age of 39 years All healthcare workees declared that they have receive at least one dose of vacine, and 75,3% showed titer of anti-HSbAg > 10 UI/ml. Serelogical markers of HBV infection were found in 11,1% of the samples. The highest positive rate (51,3%) was found in nurse technicians and auxiliaries. The exposure risks to this infection was identified by 53,6% of the participants and the most frequent occupational acident was a needle stick.

O antígeno B (AgB) de Echinococcus granulosus é um dos principais componentes do líquido hidático. O AgB é um proteína oligomérica de 120-160 kDa composta de subunidades de 8 kDa, que em SDS-PAGE dissocia-se em componentes de 8, 16, 24 e 32 kDa. Embora diferentes subunidades do AgB tenham sido isoladas, pouco se sabe sobre a estrutura da proteína e do seu mecanismo de oligomerização. Neste trabalho foi realizada a caracterização estrutural de homo-oligômeros de três subunidades recombinantes do AgB, AgB8/1, AgB8/2 e AgB8/3, expressadas a partir de seqüências previamente clonadas Essas subunidades associam-se em homo-oligômeros com características semelhantes às da proteína purificada de líquido hidático, como massa molecular, conteúdo de estrutura secundária, tendência agregativa e termoestabilidade, fazendo deles ferramentas importantes para o estudo da estrutura do AgB. Diferentes graus de estabilidade e compactação foram verificados entre os oligômeros recombinantes, com o oligômero de AgB8/3 apresentando-se mais estável e compacto. Através da modelagem molecular das subunidades do AgB, foi possível calcular a superfície de potencial eletrostático das moléculas e propor um mecanismo de oligomerização envolvendo interações eletrostáticas e hidrofóbicas. Foram também realizadas tentativas de cristalização de oligômeros de AgB8/3 para ensaios de difração de raios X, e cristais foram obtidos em três condições do screening inicial. Estes cristais difrataram à resoluções máximas de 8 Å, não permitindo a coleta de dados estruturais da proteína. Entretanto, estas condições podem ser refinadas para a obtenção de cristais com melhor qualidade. / Echinococcus granulosus antigen B is one of the major components of the hydatid fluid. AgB is a oligomeric protein of 120-160 kDa composed by 8 kDa subunits, that in SDS-PAGE dissociates in components of 8, 16 , 24 and 32 kDa. Although different AgB subunits have been isolated, little is known about AgB structure and its oligomerization mechanism. In this work we have performed the homo-oligomers structural characterization of three AgB recombinant subunits, AgB8/1, AgB8/2 and AgB8/3, expressed from previously cloned genes. These subunits self-assemble in homo-oligomers with similar characteristics to that of hydatid fluid purified protein, such as molecular mass, secondary structure content, aggregative tendency and thermostability, making them valuable tools for AgB structure study. Different degrees of stability and compactness were verified between the recombinant oligomers, with the AgB8/3 one showing a more stable and compact structure. Using molecular modelling it was possible to calculate the surface electrostatic potencial of AgB subunits and to propose a mechanism of oligomerization involving electrostatic and hydrophobic interactions. Also crystallization attempts had been carried through with AgB8/3 oligomer to X-ray diffraction, and crystals have been obtained in three conditions of initial screening. These crystals difracted to maximum resolutions of 8 Å, and it was not possible to collect protein structural data. However, these crystallization conditions can be refined in order to obtain crystals of better quality.

Introdução: O Vírus da Hepatite B (HBV) é um vírus de DNA com tropismo por hepatócitos, que apresenta um genoma circular parcialmente dupla fita. Baseado na divergência de sequência do genoma completo, dez linhagens evolutivas, denominadas “genótipos” de HBV, foram descritas (A-J), sendo F e H considerados como “indígenas” da América. Os genótipos de HBV apresentam uma forte estruturação geográfica, o que pode refletir padrões das migrações humanas. Na América do Sul, áreas de alto endemismo incluem a região amazônica, e as maiores taxas de infecção têm sido observadas em populações Nativas Americanas. Embora a forte estruturação geográfica seja indicativa de uma origem antiga, a maioria das análises visando datar a origem dos genótipos “americanos” F e H resulta em datações extremamente recentes que não condizem com eventos históricos relacionados ao HBV. Objetivo: Os objetivos desse trabalho compreendem avaliar o impacto de diferentes taxas evolutivas e da seleção purificadora sobre as estimativas de datação molecular a fim de inferir quais taxas são mais condizentes com a origem do HBV na América; caracterizar o HBV circulante em uma amostra histórica de Nativos Americanos, e discutir os processos históricos que possam ser relevantes para entender os padrões observados. Material e Métodos: Nós realizamos análise Bayesiana utilizando sequências disponíveis dos genótipos F e H e diferentes taxas evolutivas previamente reportadas, e comparamos a ocorrência de mutações sinônimas e não-sinônimas em ramos da filogenia classificados como “antigos” ou “recentes” a fim de inferir a atuação da seleção purificadora ao longo do tempo. Para caracterização do HBV presente nas populações Nativas Americanas, detecção e amplificação do DNA viral foi obtida através de PCR seguido de sequenciamento e análise filogenética. Análise Bayesiana de Skyline Plot foi realizada para comparar a dinâmica populacional do subgenótipo A1 presente na amostra de Nativos Americanos e em outras cepas isoladas no Brasil. Resultados e conclusão: Nossos resultados mostram que as estimativas de datação molecular são fortemente influenciadas pelas taxas evolutivas utilizadas na análise. Além disso, foi observado excesso de mutações não-sinônimas nos ramos recentes da filogenia, o que é compatível com a ocorrência de seleção purificadora, e pode gerar um viés sobre as estimativas, produzindo datações recentes demais. Na amostra de Nativos Americanos, nós constatamos o predomínio do subgenótipo A1, relacionado com populações africanas. Análise de Skyline Plot mostrou que a expansão populacional nas cepas isoladas de Nativos Americanos é mais recente que aquela inferida para outras cepas brasileiras, sugerindo que os processos históricos que contribuíram para a formação do subgenótipo A1 dos Nativos Americanos são relacionados com ondas migratórias mais recentes em direção à região amazônica. / Introduction: Hepatitis B virus (HBV) is a hepatotropic DNA virus that presents a partially double-stranded circular genome. Based on sequence divergence of the complete genome, ten HBV evolutionary lineages, called “genotypes” have been described (A-J), with F and H being considered as indigenous from the Americas. HBV genotypes present a remarkable geographic structure which may reflect historic patterns of human migrations. In South America, areas of high endemism include the Amazon basin, and high prevalence rates have been observed in Native American populations. Although the strong geographical structure indicates an ancient origin, most analysis trying to date the origin of the “American” genotypes F and H result in extremely recent dates that disagree with historical events related with HBV. Objective: The aims of this study comprise evaluate the impact of different evolutionary rates and of the purifying selection on molecular dating estimates in order to infer which rates are in better agreement with the origin of HBV in the Americas; to characterize the HBV circulating in a historical sample of Native Americans, and discussing the historical processes that might be relevant to understand the observed patterns. Materials and Methods: We performed a Bayesian analysis using the available sequences of F and H genotypes and different evolutionary rates previously reported, and compared the occurrence of synonymous and non-synonymous mutations in branches of phylogeny classified as “old” or “young” in order to infer the effects of purifying selection over time. For the characterization of HBV from Native American populations, detection and amplification of viral DNA were obtained through PCR followed by sequencing and phylogenetic analysis. Bayesian Skyline Plot analysis was performed to compare the population dynamics of the A1 subgenotype present in the sample of Native American and in other strains isolated from Brazil. Results and Conclusion: Our results show that molecular dating estimates are strongly influenced by the evolutionary rate assumed in the analysis. In addition, we observed an excess of non-synonymous mutations in recent branches of phylogeny, which is compatible with the occurrence of purifying selection and may create a bias on the estimates, producing too recent datings. In the sample of Native Americans, we observed a predominance of the A1 subgenotype, related with African populations. Skyline Plot analysis showed that population expansion in strains isolated from Native Americans is more recent than that inferred from other Brazilian strains, suggesting that the historical processes that contributed to the presence of A1 subgenotype A1 Native Americans are related with more recent migratory waves towards the Amazon region.

Orientador: Antonio Carlos Boschero / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-25T05:18:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bosqueiro_JoseRoberto_D.pdf: 3058404 bytes, checksum: 8c3a8b84e90f4ed4b5bce3915db95301 (MD5) Previous issue date: 1999 / Resumo: Foi realizado estudo do efeito da tetracaína sobre o efluxo de 45Ca, a concentração de Ca2+ citoplasmático, [Ca2+]i, e a secreção de insulina em ilhotas pancreáticas e células B isoladas. Na ausência de Ca2+ externo, tetracaína (0,12,0 mM) aumentou, de maneira dose-dependente, o efluxo de 45Ca de ilhotas isoladas. Tetracaína não afetou o aumento do efluxo de 45.ca causado por 50 mM de K+ ou pela associação de carbacol (Cch - 0,2 mM) e 50 mM de K+. Tetracaína aumentou permanentemente a [Ca2+]i em células B isoladas em meio livre de Ca2+ e acrescido de 2,8 mM de glicose e 25 µM D-600 (metoxiveparamil). Este efeito também foi observado na presença de 10 mM de cafeína ou 1 µM de tapsigargina. Em presença de 16,7 mM de glicose, tetracaína aumentou de maneira transitória a secreção de insulina das ilhotas perfundidas, tanto na ausência quanto na presença de Ca2+ externo. Estes dados indicam que tetracaína mobiliza Ca2+ de um estoque insensível à tapsigargina e estimula a secreção de insulina na ausência de Ca2+ extracelular. O aumento do efluxo de 45Ca causado pelas altas concentrações de K+ e pelo Cch indica que tetracaína não interfere nos estoques sensíveis a cátions ou ao IP3 / Abstract: The effect of tetracaine on 45Ca efflux, cytoplasmic Ca2+ concentration [Ca2+]i and insulin secretion in isolated pancreatic islets and B-cells was studied. In the absence of external Ca2+, tetracaine (0.1-2.0 mM) dose-dependently increased the 45Ca efflux from isolated islets. Tetracaine did not affect the increase in 45Ca efflux caused by 50 mM K+ or by the association of carbachol (Cch - 0.2 mM) and 50 mM K+. Tetracaine permanently increased the [Ca2+]i in isolated B-cells in Ca2+ -free medium enriched with 2.8 mM glucose and 25 µM D-600 (methoxiverapamil). This effect was also observed in the presence of 10 mM caffeine or 1 µM thapsigargin. In the presence of 16.7 mM glucose, tetracaine transiently increased the insulin secretion from islets perifused in the absence and presence of external Ca2+. These data indicate that tetracaine mobilises Ca2+ from a thapsigargin-insensitive store and stimulates insulin secretion in the absence of extracellular Ca2+. The increase in 45Ca efflux caused by high concentrations of K+ and by Cch indicates that tetracaine did not interfere with a cation or IP3-sensitive Ca2+ pool in B-cells / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Ciências

Policy-makers face an uncertain world. One way of getting a handle on decision-making in such an environment is to rely on evidence. Despite the recent increase in post-fact figures in politics, evidence-based policymaking takes centre stage in policy-setting institutions. Often, however, policy-makers face large volumes of evidence from different sources. Robustness analysis can, prima facie, handle this evidential diversity. Roughly, a hypothesis is supported by robust evidence if the different evidential sources (such as observations or model results) are in agreement. In this thesis, I strengthen the case for the use of robustness analysis in evidence-based policymaking by answering open research questions about this inference technique. First, I argue that existing taxonomies miss a fruitful category of robustness reasoning, that is predictive stability. Second, I claim that derivational robustness analysis – the investigation of whether the results of different models are in agreement – can yield interesting insights even if not the entire relevant model space is covered by available models or if the model results are only partially in agreement. Third, I claim that expert knowledge is necessary to address questions that arise when one applies measurement robustness analysis – the investigation into whether multiple means of measurement yield the same result. Finally, I argue that, in situations where evidence from different measurements is not in agreement, it can be advisable to no longer take all of the evidence into account. This can be done in a rationally defensible way by choosing the most adequate theory or model underlying parts of the evidence set. I discuss examples from climate, medical, and economic policy-making to establish my claims.

Turkish foreign policy has experienced a significant transformation since the AK Party came to power in 2002. The pro-status quo, passive and reactive foreign policy with a limited regional perspective transformed into an active foreign policy that aims to change international relations in the region as a whole. This change was analyzed in many different studies in recent years, and scholars from different fields of political science have tried to make sense of this major shift and understand its causes and outcomes. In this study, this foreign policy change will be explained as a gradual development that came as a result of the transformation of Turkey’s state identity. The process of change was started with the Neighboring Countries of Iraq Conference in 2003. The Conference was the first of such an attempt to engage the countries of the region in order to resolve problems in a neighboring nation. This study attempts to challenge this dominant discourse by providing a new narrative of Turkish politics and evolving foreign policy of Turkey. The study argues that the change in Turkish foreign policy was gradual and based on different dynamics that took place in the country over the last ten years. Although it is difficult to explain this change to the academic world, this challenge is due in part to the failure of classical theories of international relations, such as realism and liberalism, to explain the reasons for shifts in nations’ foreign policy. The structural explanation sometimes fails to explain transformations that took place in a more complicated mixed impact of domestic and external dynamics. However, another major approach in international relations, 2 constructivism, provides solutions for both of these challenges. It has an important strength in explaining foreign policy changes in countries, especially in Turkish foreign policy, which has important ramifications in regards to the impact of the shift on the state’s identity. The three cases under study demonstrate the changing identity of Turkish foreign policy, from a pro-Western, status quo-oriented and passive foreign policy towards a more independent, pro-active foreign policy.

This thesis explores the religious underpinnings of Kant’s thought through a consideration of the related topics of the problem of evil, the nature of religious faith, the possibility of practical knowledge, and the nature of philosophy, as well as his approach to various aspects of Christian theology, such as Scripture, eschatology, and Christology. Texts from both the pre-Critical and Critical period of Kant’s works are considered, building up a picture of Kant as a philosopher deeply concerned with the cultivation and maintenance of religious faith within the bounds of reason. The links between the philosophies of Kant, Leibniz and the Pietists are also considered in order to emphasise their shared commitments in using philosophy to complement moral faith. Further, it is argued that Kant is also concerned to combat superstition, enthusiasm and immorality in the Church, which are seen as barriers to ‘true’ faith. Through these considerations, we also discern an underlying realist religious framework to discussions on religious topics in Kant’s works, even in the Critical philosophy. It is argued that Kant’s philosophy of religion and ethical theory are intended to be not only compatible with but complementary to orthodox Christianity. As a result, a number of contemporary interpretive lines surrounding Kant’s philosophy of religion that intend to dilute the Christian commitments of the Critical system are rejected. These discussions are then employed to provide context for a reading of Religion within the Bounds of Mere Reason (1793) as lying within a realist religious framework. Current interpretive issues in the literature surrounding Religion are discussed in relation to this framework.