Orientador : Paulo Anna Bobbio / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-16T11:05:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Toledo_MariaCeciliadeFigueiredo_D.pdf: 3031022 bytes, checksum: 1d6368ef98c3b5d3996311c62bebbad0 (MD5) Previous issue date: 1979 / Resumo: A reação de Maillard foi estudada em sistemas-modelo contendo glicose (1,25 M) e aminoácido (0,66 M), a pH 6,2 e 3,0, a 50°C, na presença e na ausência e íons Cu . Foram também preparadas melanoidinas a partir dos mesmos sistemas modelo, a pH 6,2 e a 90°C. A reação foi acompanhada pela medida da absorbância a 450 nm e foi determinado o consumo de glicose e de nitrogênio amínico primário. A ordem decrescente de escurecimento a pH 6,2, com e sem íons 2+ Cu , em relação ao aminoácido presente, foi: lisina, acido glutâmico, glicina. A pH 3,0, na ausência de íons Cu2+, os sistemas-modelo com lisina escureceram mais que aqueles contendo glicina, sendo esta seqüência invertida na presença dos íons cúpricos. A absorbância dos sistemas estudados variou com o quadrado do tem pode reação, sendo a velocidade do escurecimento proporcional a acelerações características para cada aminoácido e para cada pH. Não foi encontrada uma relação direta entre intensidade de escurecimento e decréscimo de pH ou consumo de glicose e de aminoácido durante a reação de Maillard. Os íons Cu2+ diminuíram o tempo de indução (tempo necessário para o aparecimento da cor), especialmente a pH 3,0. Espectroscopia no infravermelho mostrou que as melanoidinas obti¬das por reação entre glicose e glicina, lisina ou ácido glutâmico apresentavam os mesmos grupos funcionais / Abstract: The MaiHard reaction was studied in model systems containing glucose (1.25 M) and amino acid (0.66 M), at pH 6.2 and 3.0 at 50°C, in the presence or absence of cupric ions. Melanoidins were pre¬pared from the same model systems, at pH 6.2 and 90°C. The reac¬tion was followed by measuring the absorbance at 450 nm, and the loss of glucose and primary amino nitrogen was determined. The intensity of browning at pH 6.2, with or without Cu2+ ions, was in decreasing order in relation to: lysine, glutamic acid glycine. At pH 3.0, in the absence of Cu2+ ions, the system with ly¬sine browned more than that containing glycine, this sequence being changed in the presence of the cupric ions. The absorbance of the model systems varied with the square of the reaction time, and the browning velocity was proportional to acelerations characteristics for each aminoacid and for each pH. No direct relationship was observed between intensity of browning and decreasing of pH or loss of glucose and aminoacid during the Maillard reaction. The induction period (time needed for the appearance of color) diminished in the presence of cupric ions, especially at pH 3.0. Infrared spectroscopy showed that the melanoidins obtained from the reaction between glucose and glycine, lysine or glutamic acid contained the same functional groups / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Yong Kun Park / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-16T20:34:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Zenin_CeliaTaeko_M.pdf: 1850173 bytes, checksum: d0a12c92198da3f4c96f812926d3ce69 (MD5) Previous issue date: 1978 / Resumo: De duzentos e quarenta e nove linhagens de microrganismos isolados do solo foi encontrado quatro linhagens produtoras de tirosinase, das quais escolheu-se a linhagem que produziu maior atividade de tirosinase. Esta, foi classificada como Bacillus subtilis e verificada que produz a enzima intracelularmente. Dentre vários meios de cultura testados, o microrganismo crescido no meio constituído de 1% de peptona, 1% de levedura e 2% de glicose, a pH 7,0 , apresentou melhor rendimento na produção de tirosinase. O estudo da produção de tirosinase por B.subtilis foi realizado no minifermentador da New Brunswick modelo M-1000, à 30°C e 1 vvm de aeração, com o meio de cultura acima descrito. No decurso da fermentação foi verificado que o valor de pH do meio de cultura cai durante a fase exponencial de crescimento, retornando ao nível ligeiramente acima do inicial no fim dessa fase. A produção da enzima foi verificada no fim da fase exponencial de crescimento, atingindo o máximo de produção ã 48 horas de incubação, com uma atividade 5,7 x 102 unidades de tirosinase por mililitro de suspensão celular. Algumas características enzimáticas da tirosinase intracelular e B.subtilis foram estudadas na forma semipurificada e na forma de enzima imobilizada natural (cell-bound enzyme).A enzima emipuríficada pelo fracionamento com sulfato de amônio apresentou pH ótimo 7,0 , temperatura ótima de 25°C e estabilidade em pH na faixa de 6,0 a 7,5. A sua atividade não foi alterada na presença de ions metálicos como Al2(SO4)3, MgSO4, MnSO4, CuSO4, BaSO4, CaCl4, CoCl2 e KCl, porém foi inibida na presença dos agentes quelantes KCN, tiouréia, dietilditiocarbamato de sódio e cisteina. A eletroforese da tirosinase semipurifiçada mostrou que a enzima move em direção ao cátodo à pH 4,0. O estudo cine tico da enzima apresentou respectivamente para os valores de Km e Vmax 7,5 x 10-4M de L-tirosina e 13,5 x 10-3 umoles de L-DOPA/min/mg de proteína. A tirosinase na forma de enzima imobilizada natural apresentou características semelhantes à tirosinase na forma semipurificada, exceto na cinética de enzima , sendo obtido os valores de 9,0 x 10-4 M de L-tirosina e 7,1 x 10-4 ?moles de L-DOPA/min/mg de massa celular, respectivamente para Km e Vmax. A conversão de L-tirosina ã L-DOPA pela tirosinase de B.subtilis foi realizada com suspensão de células intactas contendo 11 x 10-4 unidades de tirosinase por mililitro e substrato L-tirosina em três diferentes concentrações. Estes foram incubados ã 30 C, pH 7,0, por 40 horas, adicionando-se periodicamente ácido ascórbico para prevenir a oxidação do produto formado. O máximo de conversão de L-tirosina para L-DOPA foi obtido quando a concentração do substrato foi de 12mM / Abstract: Two hundred forty nine strains of microorganisms were isolated from soil, and four strains were to be producers of tyrosine. One o£ strains, wich is classified as Bacillus subtilis , was best producer of tyrosinase, and the enzyme was produced intracellulary. The best culture medium for the production of tyrosine by B. subtilis was found to be: 1% peptone, 1% yeast and 2% glucose, at pH 7,0. The study on the enzyme production by the strain was done with the culture medium, described above in a minifermentor (New Brunswick model M-1000) at 30°C with aeration (one volume / volume/minute). Time course of fermentation by B.subtilis demonstrated that the pH has fallen during exponential cell growth and elevated at the end of the phase.Enzyme production has begun at end of the exponential cell growth and achieved maximum enzyme production at 48 hours of incubation with an activity of 5,7 x 10 units of tyrosinase per milliliter of cell suspension. Characterization for both, cell bound and semipurified tyrosinase from B.subtilis were studied. The semipurified enzyme with ammonium sulfate fractionation showed as following. Optimum pH and temperature were around 7,0 and 25°C. The enzyme was stable at pH between 6,0 and 7,5. Metal ions such as Al2(SO4)3, MgSO4, MnSO4, CuSO4, BaSO4, CaCl4, CoCl2 and KCl not influenced on tyrosinase activity. KCN, thiourea, sodium diethildithiocarbamate and cysteine have inhibited the enzyme activity. Eletrophoretic behavior of tyrosinase showed that the enzyme moved forward cathod at pH 4,0. Kinetic study of the enzyme showed that values of both Km and Vmax were 7.5 x 10-4 M of L-tyrosine and 13.5 x 10-3 ?moles of L-DGPA/min/mg of protein, respectively Cell bound tyrosinase exhibited similar characteristics except enzyme kinetics and values for both Km and Vmax were 9.0 x 10-4 M of L-tyrosine and 7.1 x 10~4 ?moles of L-DOPA/min/mg of cell suspension. Conversion of L-tyrosine to L-DOPA by B.subtilis tyrosinase was performed by cell bound tyrosinase containing 11 x 10 * units of enzyme activity per ml and substrate (L-tyrosine) of three différents concentrations, at 30°C, pH 7,0 for 40 hours, and periodicaly ,ascorbic acid was added to reaction mixture to prevent further oxidation of the product.The maximum conversion of L-tyrosine to L-DOPA was obtained when the substrate concentration was 12 mM / Mestrado / Mestre em Ciência de Alimentos

Orientador : Oswaldo E. S. Godinho / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica / Made available in DSpace on 2018-07-18T06:10:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rodrigues_TerezaCristina_M.pdf: 1964202 bytes, checksum: 158243207e8eab3718a6c50d0a3e7312 (MD5) Previous issue date: 1993 / Mestrado

Orientador: Ladaslav Sodek / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-19T13:06:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vitoria_AngelaPierre_M.pdf: 3937638 bytes, checksum: b7de6cc8f7438dee3dbc531ecc102f3c (MD5) Previous issue date: 1994 / Resumo: O aminoácido asparagina (ASN) é um dos principais compostos nitrogenados transportado pelos vasos condutores das plantas, principalmente nas leguminosas. O nitrogênio (N) que constitui este aminoácido é reutilizado nos órgãos em formação da planta (órgãos dreno) para a síntese de proteínas e compostos nitrogenados em geral. No entanto, existe a necessidade de metabolização da ASN para que este N apresentese na forma livre e portanto possa ser reutilizado. São conhecidas duas enzimas capazes de metabolizar a ASN: Asparagina Transaminase e Asparaginase (ASNase). A presença da enzima ASNase é de extrema importância, pois apresenta um papel regulatório na metabolização da ASN, como por exemplo neste trabalho, em que se estudou sementes imaturas, onde este aminoácido é degradado no início do desenvolvimento, quando a necessidade de nutrientes é maior e a atividade desta enzima é alta. Existem duas formas de ASNase, uma dependente e outra independente do íon potássio (K+), porém as duas formas nunca foram encontradas juntas numa mesma espécie. Deste modo, investigou-se treze espécies do gênero Crotalaria, uma leguminosa tropical, para a determinação das formas enzimáticas de cada espécie. Com base nos estudos sobre as formas enzimáticas e observações morfológicas, sugerimos que exista uma relação entre a forma enzimática e a morfologia foliar para as espécies deste gênero, pois as cinco espécies que apresentaram ASNase dependente de K+ eram unifolioladas, e as independentes, sempre trifolioladas. A partir do anticorpo produzido para a enzima ASNase independente de K+ purificada de Lupinus polyphyllus pôde-se fazer um estudo imunoquímico para tentar estabelecer similaridades entre as moléculas das duas formas enzimáticas. Neste estudo constatamos que o reconhecimento por parte do anticorpo não se dá em função da dependência do cofator K+ pela enzima. Por isto sugerimos que a porção da molécula da enzima onde se liga o anticorpo não seja a mesma porção que determina a dependência ao K+. Foi determinado também quais compostos nitrogenados compunham a seiva xilemática destas plantas a partir de dois tratamentos que permitiam ou não a formação de nódulos. Para isto foram dosados ureídeos e aminoácidos, que são normalmente os principais compostos nitrogenados do exsudato do xilema de leguminosas. Pelos dados obtidos observamos que os ureídeos não são utilizados pelas espécies de Crolalaria como transp0rtadores de N mesmo nas plantas do tratamento com nodulação, onde esta classe de composto é mais frequentemente encontrada. Constatamos também que os aminoácidos são os compostos nitrogenados transportados preferencialmente na seiva das espécies estudadas de Croralarza. A ASN representou mais de 50% dos aminoácidos detectados na seiva, sendo o principal produto composto transportador de N nestas plantas. O ASP (ácido aspartico) foi o segundo aminoácido encontrado em maior quantidade. A partir desta afirmação ressaltamos a crucial importância da enzima ASNase na metabolização de ASN, uma vez que sua utilização é fundamental para o crescimento da planta / Abstract: The amino acids Asparagine (ASN) is one of the principal fonns of nitrogen found in the vascular transportsystem of plants, principally of legumes. The nitrogen (N) contained is this amino acids is reutilized in developing organs of the plant (sinks) for the synthesis of proteins and nitrogenous compounds in general. However, the liberation and consequent reutilization of this nitrogen depends upon the metabolism of ASN. Two enzymes capable of metabolizing ASN are known: Asparagine Transaminase and Asparaginase (ASNase). The presence of ASNase is of extreme importance, in view of its regulatory role in ASN metabolismo such as in this study with immature seeds where the amino acids is degraded in the early stages of development when the demand for nutrients is greater and ativity of the enzyme higher. Two forms of ASNase are know, one depedent and the other independent of potassium. However, the two forms have never been found together in the same tissue. Thirteen species of the genus Crolalaria, a tropical legume, were investigated to determine the form of ASNase present in each species. Based on this study coupled with morphological observations, we found a relationship between the enzyme form and leaf morphology, since the five species that contain the KT dependent ASNase were unifoliate and the remaing K+ independent species were all trifoliate. Using the antibory specific for the K+ independent ASNase of Lupinus pollyphylus, an immunochemical study was carried out in an attempt to establish homologies among the two enzyme forms. This study showed that the antibory reaction was not related to K+ dependence this leads us to suggest that the molecular-binding site for the antibory is not involved in the determination of potassium dependence. We also determined which nitrogenous compouds were present in the xylem juice of these plants, using two treatments that produced nodulated and non-nodulated plants. The levels of ureides and amino acids, nonnally the main fonns of nitrogen found in xylem exudates, were detennined here. The data show that only traces ofureides are found in the transport stream of Crotalaria species, even in nodulated plants where this class of compound is usually found. The data also show that ammo acids are the main forms of nitrogen transport in the Crotalaria species under study. ASN represented more than 50 % of the xylem amino acids. and therefore the main transport compound for nitrogen in these plants. ASP (aspanic acid) was the second most abundant amino acid. This finding reforces the importance of the enzyme ASNase in the metabolism of nitrogen in the developing seed. / Mestrado / Biologia Vegetal / Mestre em Ciências Biológicas

Busca encontrar las condiciones óptimas de cantidad de enzima, tiempo de digestión y cantidad de muestra para la determinación de triptófano en la harina de pescado. Evalúa su precisión a través de la repetibilidad, exactitud a través de los porcentajes de recuperación y límite de cuantificación. Busca una alternativa en la determinación de triptófano, ya que este aminoácido no puede ser tratado por hidrólisis ácida.

A Doença do Xarope do Bordo é uma alteração metabólica hereditária caracterizada bioquimicamente pelo acumulo dos aminoácidos de cadeia ramificada e seus respectivos aminoácidos no sangue e nos tecidos destes pacientes. Os mecanismos patogênicos das alterações neurológicas presentes nos pacientes ainda são pouco conhecidos. Há evidências de que o metabolismo energético esteja alterado no cérebro dos pacientes. A creatinaquinase, enzima chave no metabolismo energético, está envolvida transporte e manutenção da energia cerebral. Neste trabalho investigamos a inibição da creatinaquinase pelos aminoácidos de cadeia ramificada in vitro em cérebro de ratos em desenvolvimento, nas concentrações semelhantes as encontradas no plasma destes pacientes. O mesmo efeito não foi verificado com os cetoácidos de cadeia ramificada. Verificamos ainda que este efeito também ocorreu em ratos tratados com leucina de forma crônica do 60 ao 210 dia, e de forma aguda quando tratados por 12 horas com intervalos de três horas. Os parâmetros cinéticos estudados mostraram um Km baixo (0,8 – 1,4 mM) para a fosfocreatina como substrato, cuja variação no cérebro oscila entre 4 a 8 mM. Assim nas condições fisiopatológicas a enzima estaria saturada em ralação à fosfocreatina, sendo difícil a competição com os aminoácidos de cadeia ramificada, principalmente devido ao alto Ki encontrado (6 a 26 mM), exceto em situações de baixas concentrações deste substrato. Entretanto, o Km encontrado para o ADP como substrato (0,3 ± 0,1 mM) é semelhante à concentração do ADP do cérebro (0,2 – 0.4 mM). Como o Ki encontrado também é alto (14 – 30 mM), é possível que a competição entre o ADP como substrato e os aminoácidos de cadeia ramificada diminua a atividade da enzima alterando a homeostasia energética do cérebro, contribuindo para o dano neurológico encontrado nos pacientes com a Doença do Xarope de Bordo. Os dados deste trabalho propõem um novo mecanismo fisiopatológico para as alterações neurológicas encontradas na Doença do Xarope do Bordo. Os aminoácidos de cadeia ramificada, acumulados no cérebro destes pacientes, ocasionando a inibição da creatinaquinase estariam competindo com o ADP, produzindo deste modo um desequilíbrio energético e conseqüentemente o dano neurológico.

No ambiente estuarino, hábitat do caranguejo Neohelice granulata, a salinidade pode variar de 0,22‰ a 34‰, implicando em mudanças comportamentais e fisiológicas neste animal. Este estudo teve como objetivo verificar os efeitos do estresse hiper e hiposmótico sobre a via lipogênica a partir de glicina em diferentes tecidos de N. granulata, bem como a atividade da enzima fosfoenolpiruvato carboxiquinase (PEPCK). No presente trabalho, aumentos na incorporação de 14C-glicina em 14Clipídios totais foram constatados nas brânquias anteriores (estresse hiposmótico) e posteriores (hiperosmótico). Este aumento provavelmente ocorreria via gliceroneogênese, já que também foi constatado o incremento na atividade da enzima PEPCK. Nestes órgãos a atividade desta enzima ocorre tanto na fração citosólica como na mitocondrial, o que permitiria a conversão da glicina em glicerol, mantendo, assim, o ciclo triacilglicerol/ácido graxo nesses tecidos. Nas brânquias posteriores (no estresse hiposmótico), no músculo e no hepatopâncreas a síntese de lipídios através da formação de ácidos graxos a partir de 14C-glicina seria uma via de ajuste de concentração de aminoácidos livres intracelulares em resposta ao estresse osmótico. O presente estudo demonstra que a lipogênese a partir de 14C-glicina seria uma via metabólica que estaria envolvida no processo de aclimatação ao estresse osmótico em N. granulata.

Estágio realizado na Escola Superior Técnica de Engenharia Industrial de Barcelona - Universidade Politécnica de Barcelona / Tese de mestrado integrado. Engenharia Química. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto. 2008

No ambiente estuarino, hábitat do caranguejo Neohelice granulata, a salinidade pode variar de 0,22‰ a 34‰, implicando em mudanças comportamentais e fisiológicas neste animal. Este estudo teve como objetivo verificar os efeitos do estresse hiper e hiposmótico sobre a via lipogênica a partir de glicina em diferentes tecidos de N. granulata, bem como a atividade da enzima fosfoenolpiruvato carboxiquinase (PEPCK). No presente trabalho, aumentos na incorporação de 14C-glicina em 14Clipídios totais foram constatados nas brânquias anteriores (estresse hiposmótico) e posteriores (hiperosmótico). Este aumento provavelmente ocorreria via gliceroneogênese, já que também foi constatado o incremento na atividade da enzima PEPCK. Nestes órgãos a atividade desta enzima ocorre tanto na fração citosólica como na mitocondrial, o que permitiria a conversão da glicina em glicerol, mantendo, assim, o ciclo triacilglicerol/ácido graxo nesses tecidos. Nas brânquias posteriores (no estresse hiposmótico), no músculo e no hepatopâncreas a síntese de lipídios através da formação de ácidos graxos a partir de 14C-glicina seria uma via de ajuste de concentração de aminoácidos livres intracelulares em resposta ao estresse osmótico. O presente estudo demonstra que a lipogênese a partir de 14C-glicina seria uma via metabólica que estaria envolvida no processo de aclimatação ao estresse osmótico em N. granulata.

A Doença do Xarope do Bordo é uma alteração metabólica hereditária caracterizada bioquimicamente pelo acumulo dos aminoácidos de cadeia ramificada e seus respectivos aminoácidos no sangue e nos tecidos destes pacientes. Os mecanismos patogênicos das alterações neurológicas presentes nos pacientes ainda são pouco conhecidos. Há evidências de que o metabolismo energético esteja alterado no cérebro dos pacientes. A creatinaquinase, enzima chave no metabolismo energético, está envolvida transporte e manutenção da energia cerebral. Neste trabalho investigamos a inibição da creatinaquinase pelos aminoácidos de cadeia ramificada in vitro em cérebro de ratos em desenvolvimento, nas concentrações semelhantes as encontradas no plasma destes pacientes. O mesmo efeito não foi verificado com os cetoácidos de cadeia ramificada. Verificamos ainda que este efeito também ocorreu em ratos tratados com leucina de forma crônica do 60 ao 210 dia, e de forma aguda quando tratados por 12 horas com intervalos de três horas. Os parâmetros cinéticos estudados mostraram um Km baixo (0,8 – 1,4 mM) para a fosfocreatina como substrato, cuja variação no cérebro oscila entre 4 a 8 mM. Assim nas condições fisiopatológicas a enzima estaria saturada em ralação à fosfocreatina, sendo difícil a competição com os aminoácidos de cadeia ramificada, principalmente devido ao alto Ki encontrado (6 a 26 mM), exceto em situações de baixas concentrações deste substrato. Entretanto, o Km encontrado para o ADP como substrato (0,3 ± 0,1 mM) é semelhante à concentração do ADP do cérebro (0,2 – 0.4 mM). Como o Ki encontrado também é alto (14 – 30 mM), é possível que a competição entre o ADP como substrato e os aminoácidos de cadeia ramificada diminua a atividade da enzima alterando a homeostasia energética do cérebro, contribuindo para o dano neurológico encontrado nos pacientes com a Doença do Xarope de Bordo. Os dados deste trabalho propõem um novo mecanismo fisiopatológico para as alterações neurológicas encontradas na Doença do Xarope do Bordo. Os aminoácidos de cadeia ramificada, acumulados no cérebro destes pacientes, ocasionando a inibição da creatinaquinase estariam competindo com o ADP, produzindo deste modo um desequilíbrio energético e conseqüentemente o dano neurológico.